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专题 39 微生物的培养技术和应用
一、微生物的基本培养技术
1．培养基的配制
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，用以培养、分离、
鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
(2)种类(按物理性质分)
――→
(3)营养组成：各种培养基一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机
盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质(如维生素、氨基酸和碱基等)以及O 的
2
需求。
(4)培养基特殊需求
乳酸杆菌 在培养基中添加维生素
霉菌 一般在将培养基调至酸性
一般在将培养基调至中性或
细菌
弱碱性
厌氧微生物 需要提供无氧的条件
2．无菌技术
(1)目的：获得纯净的微生物培养物。
(2)关键：防止杂菌污染。
(3)技术
①消毒：使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部的一部分微生物。
②灭菌：使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
(4)将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来
3．微生物的纯培养
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是
概念
纯培养步骤 配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等
常用方法 平板划线法和稀释涂布平板法
4．酵母菌的纯培养
二、微生物的选择培养和计数
1．选择培养基
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑
制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基概念：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生
长的培养基。
2．稀释涂布平板法操作
(1)系列稀释操作
将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的
试管中，依次等比稀释。
(2)涂布平板操作
3．微生物的数量测定
(1)稀释涂布平板法
计数 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的
原理 一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
计数
为了保证结果准确，一般选择菌落数为 30 ～ 300 的平板进行计数
标准
计数 通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为 30 ～ 300 、适于计
方法 数的平板。在同一稀释度下，应至少对个平板进行重复计数，然后求出平均值
统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观
察到的只是一个菌落，而统计结果一般用菌落数表示
(2)显微镜直接计数法
①计数原理：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积
的样品中微生物的数量。②优点：是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。
③缺点：统计的结果一般是死菌数和活菌数的总和。
4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、单选题
1．下表是培养某种微生物的培养基配方，以下说法正确的是（ ）
成
NH NO KH PO CaCl FeSO 维生素 蒸馏水
分 4 3 2 4 2 4
含
0.5g 3.0g 0.5g 0.5g 少许 定容至1000ml
量
A．该培养基中含有碳源、氮源、水和无机盐四类物质
B．该培养基可用来培养硝化细菌，不能用来培养酵母菌
C．该培养基在培养硝化细菌时，需要密封
D．要用该培养基培养酵母菌，需要加入葡萄糖作为氮源
2．某化工厂为了处理排出污水中的一种有毒的、难以降解的有机化合物A，其研究团队利用化合物A、磷
酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主
要步骤如下图所示。下列相关叙述正确的是（ ）A．化合物A可以为目的菌提供碳源、氮源和能源
B．振荡培养可增加目的菌的数量，并可以在培养液中形成菌落
C．向固体培养基进行接种时，只能采用稀释涂布平板法
D．该实验使用的液体培养基和固体培养基都属于鉴定培养基
3．如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述错误的是（ ）
A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒处理
B．步骤①倒平板操作过程中，用食指和拇指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，防止周围环境中杂
菌的污染
C．步骤③应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤③划线结束后在培养皿盖上做好标注，培养皿需要倒置培养
4．灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（ ）
A．为了防止杂菌污染，应将配制好的选择培养基分装到培养皿中再进行高压蒸汽灭菌
B．配制培养基、倒平板、接种均需要在酒精灯火焰旁进行
C．为防止蛋白质变性，不能用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌D．可用干热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
5．当肠黏膜被破坏时，肠道内的粪肠球菌及其代谢产生的毒素可能进入人体内导致某些疾病的发生。科
研人员进行了青霉素和某种噬菌体对粪肠球菌杀灭效果的相关研究。下列叙述正确的是（ ）
A．科研人员的衣着和手都要进行消毒和灭菌，并保证无菌操作
B．实验需设置3组，培养对象分别是粪肠球菌、粪肠球菌加青霉素、粪肠球菌加噬菌体
C．实验采用平板划线法接种，在适宜条件下培养至菌落数量稳定后进行计数并比较
D．提倡用噬菌体治疗粪肠球菌导致的疾病，因为青霉素的使用会导致病菌产生耐药性
6．袋装酸奶的包装上通常都会注明“胀袋勿食”。某同学选择一过期的胀袋密封酸奶，按图中的操作流
程，研究其中的某微生物生长情况，有关叙述正确的是（ ）
A．酸奶胀袋是酸奶中的乳酸菌无氧呼吸产生了CO
2
B．使用巴氏消毒法可以杀死牛奶中的微生物和芽孢
C．图中过期酸奶中的菌种被稀释了10倍
D．推测图中用到的接种方法为平板划线法
7．利用工业废甲醇作为碳源可培养特定种类的酵母，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟
从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程。有关叙述正确的是（ ）
A．若需要调节培养基的pH，则应在培养基灭菌后进行
B．玻璃器皿、金属用具和培养基等选择干热灭菌法
C．步骤③、④过程中使用的培养基均以甲醇作为唯一的碳源D．步骤③中将温度下降至30℃左右的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后再倒置培养
8．微生物的纯化培养时需要为其提供充足的营养和适宜的环境条件。下列相关叙述正确的是（ ）
A．从土壤中分离硝化细菌时，培养基中可以不加碳源和氮源
B．牛肉膏蛋白胨培养基可直接用于细菌、病毒等微生物的纯培养
C．在培养霉菌时，需要将培养基调至酸性
D．在富含纤维素的培养基中加入刚果红可促进其被微生物水解利用
9．培养微生物需要提供适宜的培养基。下列关于培养微生物的培养基的叙述，错误的是（ ）
A．培养基为目标微生物提供适宜的生长环境
B．培养基的成分需根据微生物的代谢特点而定
C．培养基需满足各种微生物生长繁殖的需求
D．培养基通常需包含水、无机盐、碳源、氮源等营养物质
10．图甲为利用诱变方式选育可高产 胡萝卜素的布拉霉菌。未突变菌不能在含有 紫罗酮的培养基上
生长。随 胡萝卜素含量增加菌体颜色从黄色加深至橙红色。下列叙述正确的是（ ）
A．经①紫外线诱变后的布拉霉菌都能在含 紫罗酮培养基生长
B．能在含 紫罗酮的培养基上生长的细菌都能高产 胡萝卜素
C．用平板划线法进行②操作，培养后可能到图乙所示的结果
D．进行③操作时，应选择较大的橙红色菌落中的菌株继续接种培养
11．在微生物培养的过程中，需要通过选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种，下列与之相关的叙
述中不正确的是（ ）
A．纤维素分解菌能够将淀粉分解为葡萄糖
B．尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红
C．在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株D．在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”
12．白酒中含有适量的乳酸能够减轻酒体刺鼻的味道，增加甜度，使酒体协调醇厚。为获得产乳酸能力较
强的乳酸菌菌株，某科研工作者从鑫香型白酒发酵醅、窖泥中初步分离纯化出8株产酸菌株，如图所示。
下列相关叙述错误的是（ ）
A．筛选乳酸菌的培养基应具备选择性，且能鉴别出乳酸菌的产酸能力
B．接种后，应将接种平板倒置于无氧且温度适宜的环境中进行培养
C．由图示结果可知，不同乳酸菌产酸能力不同的根本原因是它们所含相关酶的活性不同
D．由图示结果可知，对筛选菌株进行产酸特性的研究时，应该选择菌种L1进行发酵培养菌种编号
13．黄曲霉菌是一种真菌，其产生的黄曲霉毒素是一种有致癌性且有剧烈毒性的化合物，该毒素非常耐热，
只有通过长时间高温（100-120℃）作用，如高压消毒和煅烧才能使其大部分失活。下列相关叙述错误的是
（ ）
A．利用巴氏消毒法可以使食物中的大部分黄曲霉毒素失活
B．黄曲霉菌的所有细胞器膜均参与构成其复杂的生物膜系统
C．黄曲霉菌的核基因转录和翻译的场所不同，与核膜阻隔有关
D．黄曲霉毒素属于化学致癌因子，可能引发某些基因突变
14．一次性手套的主要成分是聚乙烯，难以降解，丢弃后容易形成“白色垃圾”。如图为科研人员筛选聚
乙烯降解菌的流程。下列有关叙述错误的是（ ）
A．可将一次性手套埋在土壤里一段时间后再从土壤取样
B．两处培养基均以聚乙烯为唯一碳源，均属于选择培养基C．振荡培养的目的是增加聚乙烯降解菌的数量
D．平板划线法接种可用于分离纯化和计数聚乙烯降解菌
15．科学史资料：弗莱明发现金黄色葡萄球菌的培养基中长出了青霉菌落，青霉周围出现透明圈（如图），
最终发现青霉素。抗生素能够抑制细菌的生长与繁殖，因此在抗生素环境周围出现了透明的抑菌圈。下列
叙述错误的是（ ）
A．是否有抑菌圈可判断抗生素对细菌是否有抑制效果
B．抑菌圈直径与菌落直径比值的大小可判断抗生素对细菌抑制效果强弱
C．要选择能抗青霉素的细菌应从抑菌圈边缘获取目的菌
D．抑菌圈边缘存活的细菌一定产生了耐药性
16．微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受
或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选农田土壤能高效降解有机
磷农药——敌敌畏的微生物，并设计了如图所示实验流程。下列分析正确的是（ ）
A．驯化培养基 中加入的物质 是敌敌畏，其诱导微生物产生高耐受或能降解敌敌畏的变异，以达
到驯化目的
B．驯化后的微生物常利用接种环挑取菌液在培养基 上连续划线分离获得单菌落，划线接种过程中
需对接种环进行5次灼烧
C．可以通过检测以敌敌畏为唯一碳源的培养基 中敌敌畏的剩余量，筛选出分解敌敌畏能力较强的微生物再进行纯培养
D．用稀释涂布平板法来统计菌落数，能测得培养基 中活菌数的原因是平板上的一个菌落就是由一
个活菌繁殖形成
17．尿素是一种非蛋白氮饲料，常被用于反刍动物日粮配制，以降低日粮蛋白用量，节约饲养成本。反刍
动物的瘤胃中尿素被分解成氨，氨则被用于合成优质微生物蛋白。某兴趣小组尝试从奶牛的瘤胃中分离出
尿素分解菌。下列有关叙述正确的是（ ）
A．需配制以尿素为唯一碳源的培养基，还需要加牛肉膏等营养物质
B．用灭菌后的涂布器蘸取0.1mL菌液在酒精灯火焰旁将菌液涂布均匀
C．以未接种的培养基为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用
D．尿素分解成氨后，培养基中的pH升高，可用酚红指示剂进行鉴定
18．为了得到能高效降解聚乙烯[PE，（C H），]的细菌，以解决塑料污染问题，科学家将分离得到的两
2 4
种细菌YT1和YP1置于含PE的培养液中，并定期检测培养液中PE的剩余量百分比，检测结果如图所示。
下列说法错误的是（ ）
A．可将PE作为该培养液唯一的碳源
B．一般情况下，该培养液的pH应为中性或弱酸性
C．可用稀释涂布平板法或细菌计数板对细菌进行计数
D．第30天后两种菌的降解能力差异显著，YP1的降解能力较强
19．石油开采过程中易造成附近土壤污染，研究人员按照下图所示流程分离得到能高效降解石油的菌株。
培养基中的石油被菌株降解后会形成透明圈。下列叙述错误的是（ ）
A．被石油污染的土壤中更容易分离得到石油降解菌B．甲、乙均以石油作为唯一碳源，且都属于选择培养基
C．步骤②的目的是对可降解石油的菌株进行富集，便于后期筛选
D．培养基中菌落越大，菌落周围的透明圈越大，说明该菌株降解石油的能力越强
20．土壤中含有丰富的微生物资源，某科研工作小组采用稀释涂布平板法筛选土壤中分解能力强的纤维素
分解菌。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的
纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色
复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明
圈。下列相关实验操作正确的是（ ）
A．接种后立即将平板倒置培养，可避免冷凝水造成的污染
B．取适量自来水经高压蒸汽灭菌后，可获得本实验所需无菌水
C．若使用同一移液管吸取菌液用于涂布时，应按照菌液稀释度由小到大的顺序
D．为研究纤维素分解菌的分解能力，测量时可直接在培养皿的底部进行透明圈和菌落直径的测定
二、多选题
21．鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度酎盐，可引起人类肺炎等疾病。在血平板（培养基添加
适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，下图为检测鲜牛奶被金黄色葡萄球菌污染的
操作流程，下列叙述正确的是（ ）
A．使用后的液体培养基可以直接丢弃
B．肉汤培养基加入一定量NaCl的目的是维持微生物细胞的渗透压
C．振荡培养可以使微生物与营养物质充分接触，更有利于微生物的生长
D．血平板上的接种方法是平板划线法，血平板上出现周围透明的溶血圈
22．产脂肪酶细菌可用于含油废水的处理。科研人员采用射线照射从土壤中分离的菌株，反复筛选后获得
产脂肪酶能力较高的菌株，具体流程如图。下列相关叙述错误的是（ ）A．步骤①取土壤样品灭菌后溶于无菌水中制成菌悬液
B．步骤②的固体平板是以脂肪作为唯一碳源的培养基
C．步骤②射线照射可引起细菌基因突变或染色体变异
D．步骤③透明圈越大的菌落，其脂肪酶活性一定越高
23．下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（ ）
A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
24．甲拌磷（3911）是高毒类有机磷农药，在土壤中存留可达50天左右，我国已禁止在水果蔬菜上使用。
下图是从土壤中筛选甲拌磷降解菌XT 的过程，有关说法正确的是（ ）
2
A．图中的选择培养基需用干热灭菌法灭菌并以甲拌磷为唯一碳源进行细菌培养
B．在稀释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未接种的共同培养在恒温箱中。
C．该过程用到的接种方法为稀释涂布平板法
D．若用图中的接种方法进行计数，则计菌数的结果比实际值偏小
25．如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的过程示意图，有关叙述错误的是（ ）A．在配制步骤②、③的培养基时，都应添加琼脂
B．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
C．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
D．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，可通过比较溶液pH的变化大小来比较细菌分解尿素的能
力
26．为对某样品中噬菌体计数，工作人员将0．1mL稀释106倍的噬菌体样品与敏感细菌混合后平铺在平板
上培养一段时间，长满细菌的平板因部分细菌被噬菌体裂解而形成圆形透明斑，即噬菌斑（1个噬菌斑为1
个pfu），噬菌体效价可用每毫升样品中含有的pfu数表示。下列叙述正确的是（ ）
A．透明的平板培养一段时间后变为不透明状态，是由细菌大量繁殖造成的
B．噬菌体样品应有足够的稀释度，以保证初期一个细菌最多被一个噬菌体吸附
C．若有少数活噬菌体未能侵染细菌，噬菌斑计数结果比样品中实际活噬菌体数偏低
D．若平均每个平板的噬菌斑数量为200，则该样品的噬菌体效价为2×108pfu/ml
27．结核分枝杆菌可以引起结核病，主要感染肺部，其细胞壁厚、脂质含量高，能抵御不利自然环境。为探究不同抗生素对结核分枝杆菌的抑菌效果，将患者体内的病原菌进行分离培养，实验结果如图所示。培
养基成分主要含有天门冬氨酸、甘油、鸡蛋黄、 、 等。下列分析正确的是（ ）
A．结核分枝杆菌会引起人体发生体液免疫和细胞免疫
B．此培养基成分中提供氮源的是天门冬氨酸
C．接种过程所用实验器材有酒精灯、涂布器、微量移液器
D．图中D为含有无菌水的滤纸片作为对照
28．饮料中添加了抑菌物质，实验小组利用滤膜法检测饮料中微生物的数量，原理是将待测样品通过微孔
滤膜过滤富集后，再将滤膜置于培养基上培养，根据滤膜上的菌落数推算出样品中微生物的数量，其过程
如图所示。下列说法错误的是（ ）
A．用稀释涂布平板法统计饮料中微生物的数量时，测得的值会大于滤膜法的
B．抑菌物质能透过微孔滤膜被除去，滤膜法能消除样品中抑菌物质的干扰
C．与细菌相比，对饮料中的真菌进行计数时，所用滤膜微孔的直径更小
D．测定饮料中的微生物的量前，对滤杯、滤瓶和滤膜等都要进行灭菌处理
三、综合题
29．金属硫蛋白（Metallothionein，MT）是由动植物和微生物产生的一类低分子量、富含半胱氨酸、具有
金属结合能力的多肽，具有多种生物学功能。近年来，因其具有与Zn、Cu、Cd等重金属的较强结合能力，
而用于生态修复。科研人员成功地将人MT蛋白基因用农杆菌转化法转入番茄，成功培育转基因番茄。回答下列问题：
(1)感受态农杆菌的制备：取保存的根癌农杆菌菌落用 接种于相应的液体培养基中，并置于
中进行振荡培养，完成菌种的活化和扩大培养；取适量菌液置于低浓度、 的CaCl 溶液中处理，
2
制得感受态农杆菌。
(2)MT目的基因的获取和转化：取人肝脏细胞破碎后提取mRNA，在逆转录酶的作用下形成cDNA，经
PCR技术扩增后的产物分别与Ti质粒连接形成重组质粒（如图)，将其与制备好的感受态农杆菌混合，最
后进行短暂的 处理，使外源DNA转入细胞；经适宜条件培养一段时间，再加入适宜浓度的
筛选出转化的农杆菌。
(3)转化番茄：取番茄子叶进行 处理后切段，再与转化的农杆菌菌液进行共培养适宜时间，
取出子叶放在 上吸取多余菌液，再将子叶放在适宜的以 培养基为基础配制的培养基中
进行活化和除菌培养。
(4)育成转基因番茄：取上述处理的番茄子叶先经 过程形成愈伤组织，再经发芽和生根，最
后经过 过程，育成成熟的番茄植株。
(5)转基因番茄性状的检测和生产应用：为了检测番茄中是否成功导入目的基因，可依据 设计引物进行
PCR扩增，再用凝胶电泳技术进行检测，进行此实验的同时应以 作为阴性对照，以农杆菌Ti质粒
的番茄作为阳性对照；已知某转基因番茄植物能大量吸收Zn、Cd等元素，且主要富集在根，生产应用时
需对其定期拔除并实施无害处理，原因是 （答出2点即可）。
30．泡菜传统自然发酵方式的发酵周期相对较长，生产效率低。研究人员欲从泡菜中分离筛选出高产酸乳
酸菌，为泡菜工厂化生产提供依据。请分析并回答下列问题：
(1)配制CaCO —MRS培养基。成分：蛋白陈、牛肉膏、酵母粉、磷酸氢二钾、葡萄糖、琼脂粉、碳酸钙
3
等。
①根据物理性质分类，该培养基属于 培养基，为乳酸菌种提供氮源的成分是 ；
②培养过程中，乳酸菌产生乳酸溶解碳酸钙，形成溶钙圈，便于 。
(2)高产乳酸菌的培养与分离。其部分实验目的与具体操作如下所示，请完成下表。实验目
简要操作过程
的
梯度稀 在无菌条件下取样品中泡菜汁1mL，加入① 进行10倍梯度稀释，依次得到10-5、10-6、10-7
释 的稀释液。
接种培 取上述稀释液1mL分别加入无菌培养皿中，然后将CaCO —MRS培养基浇注混匀冷凝后，将培
3
养 养皿② ，并连续培养48h。
分离纯
挑取③ 进行平板划线培养。
化
长期保
将菌种加入30%的甘油中在-20℃保存
存
(3)高产酸乳酸菌的鉴定。提取筛选乳酸菌的DNA，通常采用16SrDNA（编码rRNA对应的DNA序列）的
通用引物进行PCR扩增并测序鉴定。以16SrDNA作为细菌分类依据的原因是不同菌属的16SrDNA具有
。
(4)高产酸乳酸菌发酵效果检测。研究人员研究了两种高产酸乳酸菌（乳酸菌A50f7和A50b9）在发酵泡菜
过程中pH的变化，结果如下图所示。据图分析，该研究实验的自变量是 ，可以看出，接种两种乳
酸菌效果相近，其相近之处表现为均能快速降低 ，且接种量越大作用效果越明显。
31．纤维素能够被土壤中某种微生物分解利用，对这种微生物进行研究和应用，可使人们能够利 用秸秆
生产酒精、生产醋等。某生物兴趣小组欲从土壤中筛选出能高效分解纤维素的纤维素分解菌，回答下列问
题：(1)图1、图2、图3中的培养基为 （填物理形态）培养基，培养基中的碳源为 。
(2)上图所示过程为对获取的菌株做进一步纯化，接种后培养的两个平板中菌落长出后分别如图1和图2，
出现图1的原因最可能是 ，出现图2的原因最可能是 ,图3是向培养基中加入刚果红染料，则
（填图3中罗马数字）处的微生物分解纤维素能力最强。
(3)甲、乙、丙三位同学用稀释涂布平板法测定1mL同一土壤样液中细菌数量，得到的统计 结果如表所示。
组
涂布液体体积 稀释倍数 培养基数 培养后培养基菌落数
别
甲 1 260
乙 0．1 mL 106 3 210、240、246
丙 3 21、212、256
三位同学中， 同学的统计结果是相对准确可信的。若按照该同学的结果，则每毫升细菌原液中的菌
体数是 。
(4)工业生产上可利用纤维素分解菌将纤维素分解，随后接种酵母菌或醋酸杆菌进行发酵生 产乙醇或醋酸。
若将产生酒精的发酵罐甲中的酒精全部转移到发酵罐乙中进行醋酸发酵，发酵罐甲中产生的CO 全部来自
2
无氧呼吸，则乙罐中CO 的产生量 。
2
A．是甲罐的两倍
B．与甲罐的相等
C．是甲罐的一半
D．几乎为零
32．孔雀石绿（简称MG）是广泛使用的有机染料，在自然环境中极难降解，容易引起土壤污染，进而危
害人体健康。因此从土壤中分离和筛选出高效的MG降解菌有非常重要的意义。已知MG在水中溶解度低，
含过量MG的固体培养基不透明。(1)培养基的配制：MG降解菌富集培养基需含有NaH PO 、KH PO 、NaCl、NH Cl、CaCl 、MgSO 、水等，
2 4 2 4 4 2 4
再加 作为唯一碳源。配制好的培养基，需用 法进行灭菌。
(2)MG高效降解菌株的分离和纯化：图中所示的分离纯化细菌的方法是 ，用该方法统计样品的菌落
数目比活菌的实际数目 （“少”或“多”），原因是 。实验室采用此方法，将1mL样品稀释
1000倍，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液；经正确操作培养后，3个平板上的菌落数分别为150、
158和160．据此可得出每升样品中的活菌数至少为 个。
(3)黑曲霉是一种丝状真菌，黑曲霉的PDA液体产酶培养基组成为：麸皮、豆粉饼、（NH ）SO 、
4 2 4
MgSO •7H O、KH PO ，培养时需要通气振荡。豆粉饼可提供黑曲霉生长所需的 ；若要分离黑曲霉菌
4 2 2 4
落，上述培养基中还需要添加 ，在培养基灭菌前需将pH调至 （填“酸性”“中性”或“碱
性”）。
(4)计数黑曲霉菌液孢子浓度的方法为：用多层纱布过滤黑曲霉培养液得到孢子悬浮液，取1mL悬浮液用
无菌水逐级稀释104倍，再取稀释液滴加至血细胞计数板（规格为1mm×1mm×0．1mm，由400个小格组
成）进行计数，统计得到计数的小格中平均孢子数2个，则黑曲霉培养液中孢子浓度为为 个mL-1
(5)以大豆为主要原料，利用黑曲霉产生的蛋白酶可将原料中的蛋白质水解成 ，然后经淋洗、调制可
得到酱油。
33．生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功
筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：KH PO 1.4g
2 4
NaHPO 2.1g
2 4
MgSO ·7H O 0.2g
4 2
葡萄糖 10g
尿素 1g
琼脂 15g
溶解后蒸馏水定容到1000mL
(1)本实验所使用的培养基按功能来分应为 培养基。原理是 。
(2)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH PO 和NaHPO ，其作用有 。
2 4 2 4
(3)实验是否需要振荡培养来提高溶氧量： （填“是”或“否”），原因是 。转为固
体培养时，常采用 法接种，获得单菌落后继续筛选。
(4)若在稀释倍数为105的三个培养基中，菌落数分别是156、174、183，则每克内容物中尿素分解菌的数
目为 个。
(5)分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50
个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有 （填序号）。
①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照
(6)如果想要进一步鉴定筛选出来的细菌是尿素分解菌，还应该设置 组对照实验，最后用
指示剂对该微生物的菌落进行鉴定，看指示剂是否变 。
(7)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24-48h，
观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中合理的稀释倍数为 。稀释倍
103 104 105 106 107
数
菌落数 >500 367 248 36 18
34．下表是某微生物培养基的配方。请分析回答下列问题：
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 （NH ）SO 葡萄糖 FeSO CaCl HO
4 2 4 4 2 2
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
(1)培养基的配方是要根据微生物的营养需求而设定的，从培养基的营养成分看，此培养基可用来培养的微
生物同化作用类型是 （填“自养”或“异养”）。利用该培养基培养微生物时，微生物所需要
的碳源来自 。为防止杂菌污染，常用 的方法对培养基灭菌。
(2)若要观察微生物的菌落的特点，培养基中还应添加的成分是 。鉴定菌种时，可根据菌落的
（至少答两点）等方面的特征进行鉴定。
(3)如果将上面配方中的葡萄糖替换为一定量的纤维素，就可以富集培养 微生物， 在筛选该菌种
的过程中，通常用 染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对该菌种进行筛选。
(4)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释， 然后将不同稀释度的水样用涂布器分别
涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为 。如图所示的四种菌落
分布图中，不可能是用该方法得到的是 。
(5)如分别取 0.1mL 已稀释 104倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到
大肠杆菌的菌落数分别为 55、56、57，则每10mL 原水样中大肠杆菌数为 个。此方法对活菌计
数时，其结果往往比实际值偏低，原因是 。
