1．概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的。2.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。3.阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。4.活动：DNA的粗提取与鉴定。5.活动：利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定或运用软件进行虚拟PCR实验。

考点一　重组DNA技术的基本工具

1．基因工程的概念

2．基因工程的基本工具

(1)限制性内切核酸酶（限制酶）

①限制酶的识别序列一般由6个核苷酸组成，少数由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。

②限制酶作用的化学键只能是磷酸二酯键。

③在切割含目的基因的DNA分子时，需用限制酶切割两次此DNA分子，产生4个末端。只有这样才能使目的基因的两端都有可连接的黏性末端或平末端。

(2)DNA连接酶

①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。

②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。

(3)载体

(1)通过基因工程技术能够定向改造生物的遗传性状。(√)

(2)E.coli DNA连接酶只能连接黏性末端。(×)

(3)DNA连接酶具有特异性，只能连接同一种限制性内切核酸酶切割形成的黏性末端。(×)

(4)若两种限制酶的识别序列相同，则形成的末端一定能通过DNA连接酶相互连接。(×)

(5)限制性内切核酸酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大。(√)

(6)载体质粒上常有特殊的标记基因，以便于重组DNA分子的筛选。(√)

(7)载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因。(×)

(8)（选择性必修3 P72正文）天然的DNA分子不能直接用作基因工程载体的原因有哪些？

提示：天然的DNA分子一般不完全具备作为载体的全部条件，需要进行人工改造后才能用于基因工程操作。

考向　围绕重组DNA技术的基本工具考查科学,思维))

1．（2025·福建厦门模拟）BamH Ⅰ、MboⅠ、SmaⅠ三种限制酶的识别序列和切割位点依次为5′－G↓GATCC－3′、5′－↓GATC－3′、5′－CCC↓GGG－3′。如图表示某DNA片段的部分碱基序列，已知其余序列不含这三种限制酶的识别序列。下列叙述正确的是(　C　)

A．若用SmaⅠ完全切割该DNA，则其产物的长度为634 bp、896 bp、758 bp

B．若虚线方框内的碱基对被T—A替换，则用SmaⅠ完全切割该DNA可产生3种片段

C．若用MboⅠ和BamH Ⅰ切割该DNA，可形成相同的黏性末端

D．用SmaⅠ切割该DNA产生的片段，用E.coli DNA连接酶重新将其连接效率较高

解析：SmaⅠ的识别序列为5′­CCC↓GGG­3′，则用SmaⅠ完全切割该DNA会产生三个片段，即637 bp、890 bp、761 bp，A错误；若虚线方框内的碱基对被T—A替换，则用

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