艾滋病筛查实验室全套SOP资料(电子版)

艾滋病筛查实验室全套SOP资料（电子版）

第一章、艾滋病筛查实验室的设置及人员情况

为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用，根据《全国艾滋病检测技术规范》对于艾滋病的检测要求，我院检验科设置了独立的艾滋病筛查实验室。为了使检测工作能够正常进行，保证艾滋病检测结果的正确性和准确性，我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改，而且建立了完整的实验室标准化操作规程，以确保艾滋病检测结果的准确有效。艾滋病检测实验室分为清洁区、半污染区和操作区，配备了专用的的生物安全柜、电脑、冰箱、酶标仪、离心机、高压消毒锅等设备和安全防护用品等。

根据艾滋病检测实验室工作的需要，我科配备从事艾滋病检测工作人员3名，全部都是临床检验中级，所有人员从业年限均在7年以上。并积极参加省级、省级举办的艾滋病检测技术培训，不断提高质量意识、技术水平和业务能力，保证艾滋病检测工作的质量。

艾滋病筛查实验室负责人： **

人员：****

第二章、艾滋病筛查实验室工作管理程序

一、目的

对艾滋病筛查实验室工作全过程进行质量保证，保证检验工作符合规定要求，提供可靠的检验数据和有效的检验报告。

二、范围

适用于本实验室开展的相关医学检验工作的各个环节。

三、职责

1、工作人员负责门诊检验样品的采集。

2、工作人员负责住院检验样品的接收。

3、实验室负责人负责组织协调完成检验任务，并对检验工作质量的监督。

4、工作人员负责执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据。

5、实验室报告审核人负责检验报告的签发、发放。

6、实验室负责人负责检验资料的归档保管(计算机)工作。

四、工作程序

(一)、检验工作分类

本实验室的检验工作，我院标本的来源为采样检验，工作性质为常规标本检验。

(二)、样本记录工作需按下列程序执行：

1、当面核对标本姓名、性别、年龄及标本质量等资料；

2、按要求进行检验；

3、如实的完善检验单，真实的填写检测结果

(三)、采样及样品管理

1.采样执行本科程序文件。

2.样品接收、分发和保管处理，样品一旦受理即给予受理唯一编号。

(四)、标本检验

检验执行本科程序文件和操作规范

(五)、检验依据

1、国家标准方法；

2、部颁标准方法和检验规范；

3、卫生技术部门推荐使用方法；

4、有关科技文献或杂志上发表的方法；

(六)、检验实施

检验人员按检验标准或作业指导书的要求按时完成检验任务，做好原始记录。

(七)、检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件严格执行。

(八)、检验方法控制

检验必须按国家规定的方法或标准检验方法进行，也可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行。其他检验方法不得采用。

第三章、艾滋病筛查实验室规章制度

一、实验室工作制度

1.实验室保持清洁整齐，仪器设备要摆放整齐，说明书手册要妥善保管，原始记录不得擅自修改和销毁。

2.进入实验室前要摘除首饰修剪指甲，以免划破手套。

3.严禁在艾滋病实验室进食，饮水，吸烟和化妆。

4.不要将与工作无关的物品带入实验室。

5.进入实验室要穿隔离衣，戴手套必要时戴双层手套和防护眼镜。

6.认真对待样品，严格遵守操作规程。

7.确实知道洗眼装置、安全冲洗设备，以及灭火器的位置。并懂得如何使用这些设备。

8.采血时一定要注意安全，使用一次性注射器，谨慎操作防止刺伤皮肤以免造成污染。

9.严格执行实验室工作人员年度采血和备案年度，工作人员从事工作必须进行艾滋病抗体和乙肝，丙肝等肝炎病毒标记物的检测，注射乙肝疫苗，每半年至一年进行一次抗体检测，并保留血清样品。

二、岗位责任制

1. 岗位责任制是保证工作质量和医疗安全，提高工作效率的重要环节。建立岗位责任制，要有艾滋病检测实践经验的技术人员负责。做到人人分工职责明确，立足本职，团结互助，相互协调，保证各项任务的顺利完成。

2. 牢固树立把质量放在第一位的思想，在工作中必须加强检查和复查制度，以保证血液质量及医疗安全。

3. 交接工作必须认真负责，须核对实物和记录，对工作一般情况、存在问题和注意事项应进行具体交待，否则，发生问题由交班人负责。

4. 在实验室主任领导下，负责实验室仪器、器械、药物试剂的安全管理，对本岗位的安全，负责实验室、器材库的安全防范工作，经常检查安全设施完好状况，防火、防盗、防水、防锈、防腐蚀，保持室内整洁卫生，安全无事故。

5. 负责保管、使用消防器材，保持完好状态，并会扑救初期火灾；一旦发生其他意外事故，必须采取果断措施予以抢救和处理，同时，及时向实验室负责人及主管领导报告；发生重大灾害事故时，可以直接报警。

6. 实验室人员临时因故离开工作岗位，必须将工作委托给能胜任该项工作的人员，否则，发生问题由原担任该项工作者负责。

7. 新参加工作的人员，在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位，在确能掌握经考核合格后方可。

8. 建立艾滋病筛查实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制，其他人不得任意使用。严格按照仪器操作规程操作，不可擅自乱改设置

9. 凡是一物多人使用的，除共同负责外，应指定一人为该岗位责任制负责人，负责指导正确操纵，定期安全检查，经常维护保养，保持正常运转，该负责人有权制止任何违章操作和有害设备安全的行为。

10. 人员职责分工：

行政班人员负责协助值班人员做好实验室的所有日常工作，并负责对检验工作质量的监督，检验报告的复核、发放，结果的解释，实验室室内消毒以及每日医疗废弃物的消毒处理。

每日值班人员负责样品的采集，接收，执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据，把检验资料的归档保管(计算机)工作。签发报告及实验室仪器设备的日常维护和保养。

三、实验室工作人员职责分工

随着我院检验科规模的不断壮大，传统的单一管理模式已经制约着我科室的发展，现根据《临床实验室管理办法》和《全国临床检验操作规程》标准，采用分学科管理模式，有利于培养各学科技术骨干，提高工作积极性，有效做好仪器的维护保养和检验质量控制工作，从而提高整体检验科的技术水平。

四、以上各组职责属监督管理作用，日常工作不按岗位上班。强调若仪器出现故障，应及时报告各组负责人和科主任。申请设立专项补贴，各组的质量控制和仪器维护情况与奖金和评优相挂钩。成立质量控制小组，各组负责人应及时反馈本组的质量问题给科主任，尽快解决问题，确保检验科结果的准确性。

四、交接班制度

1. 目的

本着为临床服务，让病人满意的宗旨。确保急诊检验工作正常、有序的进行。

2.范围

适用于常规工作时间以外的急诊值班人员的上下班、交接班。

3.值班任务

3.1值班人员必须坚守岗位，履行职责，确保临床诊疗工作不间断进行。主要医疗工作包括：生化类急诊项目、凝血四项、血、尿、便常规、急诊血型和交叉配血等，若遇临床须急查而自己又不熟悉的项目，应及时向科室领导(指定负责人)报告。

3.2值班人员要按规定检查仪器状况、试剂冰箱温度、科室安全状况等，根据值班情况准确填写值班记录并与接班人员交接清楚。

3.3急诊化验要立即进行，结果及时回报病房，接到非急诊标本要妥善处理，按要求保留标本。

3.4值班时遇有特殊情况，如大批病人或疑难检查应及时报告科室领导或上级人员协助解决。

3.5检查门、窗、水、电及贵重仪器安全，室内物品不得随便借出。

3.6值班者不得带客人或小孩到科室，以免影响工作或发生意外。

4.值班要求

4. 1值班安排：值班人员需提前10分钟接班。

4.2主班负责接班，副班到位后根据工作需要进行分工，确保急诊检验工作正常、有序的进行。

4.3交班应按时、清楚、明确，做到交不清不接，接不清不走。主、副班应

相互尊重、相互协作，在值班过程中，使用主班程序。

4.4 值班表由科室指定专人定期制定，休假、出差时跳

过顺延，产假按医院规定执行。

4.5 关于同事之间的换班、顶班，采取双方自愿的原则，

换班或顶班者即为值班人员。

4.6 夜班值班后补休半天，值班员可根据自身情况选择值班后补休或择日补休。

5.值班奖惩

5.1值班期间杜绝安全隐患，发现漏洞时，经科室党支部研究后给予重奖

5.2未按时填写交接班记录，扣20元。

5.3值班期间发生医疗差错、事故时，按医院规定执行。

5.4因交接班不清发生仪器、冰箱损坏和物品丢失时，责任由接班者承担。

5.5 违反值班安排时，一律按故意逃班处理，扣除当事人当月超劳补贴300元，情节严重的经科室党支部研究后给予重罚。

5.6因换班、顶班而发生脱班时，责任全在当天值班者，亦按故意逃班处理。

五、标本管理制度

(一)、样品的采集和处理

1.血液样本的采集和处理

1.1抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂 (EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠)的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀10-15 次，备用。

1.2末梢全血：消毒局部皮肤(成人和1 岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指，1岁以下儿童采用足跟部)。用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，备用。

血浆：根据检测需要，选择含适宜抗凝剂的采血管，按

照采1.3血管说明采集：

(1)静脉血，分离血浆；或将采集的抗凝全血1500~

3000r/min 离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。

(2)血清：根据检测需要，按照采血管说明采集静脉血，分离血清；或用不含抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂或含促凝剂的试管中放置1～2 小时，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。

(3)淋巴细胞富集液：将采集的抗凝全血1500~3000r/min离心 1 5 分钟，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于合适的容器中，备用。

(4)外周血单个核细胞 (PBMC):使用淋巴细胞分离液，进行密度梯度离心，吸出 PBMC 层，置于合适的容器中，备用。

1.4抗凝剂的选择：根据检测要求选用适当的抗凝剂，如 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞数测定可选用 EDTA 钾盐或钠盐、枸橼酸钠、肝素钠(如果血液不用于核酸检测);艾滋病-1 分离、核酸定性/定量检测可选用 EDTA 钾盐或钠盐或枸橼酸钠。

2、样本采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见相应检测项目要求。采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器内，妥善处理，防止发生职业暴露。

3、采集样品注意事项

(1)采集样品原则上应按临床采血技术规范操作。

(2)采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触艾滋病感染者/艾滋病 (AIDS) 病人血液/体液的操作，应戴双层手套。

(3)所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。

(4)应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。

(5)采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。

(6)离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。

(二)样品的保存

(1)用于抗体和抗原检测的血清或血浆样本，短期(1周) 内进行检测的可存放于2～8℃,一周以上应存放于-20℃以下。

(2)用于核酸检测的血浆和血细胞样本，4天内进行检测的可存放于2-8℃:3个月以内应存放于-20℃以下；3 个月以上应置于-70℃以下保存。

(3)用于 CD4+T 淋巴细胞检测的全血样本，室温保存，时间不超过48小时。如果用 CD45 设门，样本保存不超过72 小时。

(4)筛查结果为阳性的样本应及时进行补充试验；筛查结果为阴性的样本，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存1个月。艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样本，无论补充试验结果如何，均应保存剩余样本，保存时间根据需要确定，建议至少保存3年，特殊用途或专项项目的样本根据具体要求确定保存时间。补充试验结果为阳性的样本按照国家生物样本管理的有关规定执行。

(三)样品的运送

1、全血、血浆的运送应符合生物安全要求，参照《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》(卫生部第45号令，2006年2月1日执行)。

2、血液样本运送时应采用三层容器对样本进行包装，随样本应附有与样本唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样本种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。

(1)第一层容器：直接装样本，应防渗漏。样本应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样本的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。

(2)第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。

(3)第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压、禁止倒立”等字样，还应易于消毒。

3、用于抗体检测的血清和血浆样本应在冻存条件下运送。用于 CD4+和 CD8+T 淋巴细胞测定的样本应在室温下(18~

25℃)运送。用于病毒载量检测的样本应在-20℃以下运输。干血斑和尿液样本应在室温下(18～25℃)运送，可通过邮寄方式运送。血液制品样本的运送按照血液制品有关使用说明执行。

4、运送样本必须有记录。

(四)样本接收和拒收标准

1、含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。

2、核对样品与送检单，认真核对标本上病人姓名、年龄、性别、病区、床号、住院号是否与中请单符合。检查样品管有无破损和溢漏，如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。

3、检查样品的状况，观察标本的量、标本类型、是否抗凝或有小凝块样品，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，判断标本是否符合检验要求。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。

4、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。

5、因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。

6、接收样品时应规范填写样品接收单。

7、不符要求的标本，必须及时填写退回理由单，及时通知送样人，说明情况，重新留取。不符要求的标本与可疑含有感染性样品用后的包裹同检验后的标本一样进行消毒或无害化处理后废弃。

(五)标本检测

1、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。复核标本接收过程中的每一步骤，在检测过程中，应严格按照标准化操作规程。

2、在标本足够的情况下，不能浪费、随意丢弃或损坏标本。应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒

(六)、标本处理

检验标本先用含2-3g/L 有效氯消毒剂浸泡半小时，再用高压锅高压消毒。然后用双层专用黄色医用垃圾袋专人收集所有废弃医用垃圾。送专门存放医用垃圾处统一焚化处理。

六、试剂管理制度

(一)、采购与审批

科主任根据需要定期拟定采购计划，交由院领导审批，批核后由科主任交与器械科，有器械科与经销商联系

(二)、验收与登记

仓管负责人根据供应商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收，并将入库数据登记。

(三)、贮存

冷藏试剂统一存放在艾滋病实验室专用的冰箱内，冷箱保管及温度控制由艾滋病实验室负责人负责。艾滋病试剂一般应2～8℃避光保存，在有效期内使用。

(四)、出库管理

各室提出试剂申领，仓管人填写出库单据，院领导签字同意后，认领人签名后出库。

(五)、其它

1、试剂的保存应严格按照要求存放，以保证有效期内能有效地使用，杜绝浪费现象。

2、仓管人应对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。

3、易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。

4、剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存，放保险箱内，使用时应有两人在场，并做好登记。

七、污染区工作守则

做好污染区实验室废弃物的消毒处理，未经实验室管理人员许可不得进入污染区。

1.凡是被血液、体液污染的物品要先消毒灭菌后清洗。

2.严格操作程序，做好各种实验记录，实验阳性标本保存至5年，(经过免疫印记确诊的阴性标本也要保存),不得擅自处理。

3.禁止用口吸液体，必须使用移液器操作。

4.操作中有标本等外溅时，应及时消毒，对大量溅出的高浓度污染物在清洁前先用1%次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦洗。

5.每次实验后，要对工作台面消毒，用0.2%-1%次氯酸钠溶液喷洒和浸泡。

6.离开实验室前要脱去手套，隔离衣等防护物品，放入指定污桶，用肥皂和流水洗手。

八、清洁区工作守则

1.实验室是检验工作的场所，要保持清洁、安静、物品摆放要整齐。

2.清洁的防护服置于实验室清洁区内存放处。检验人员工作时应按要求穿工作服、工作衣、帽、专用鞋等。

3.禁止将与检验工作无关的物品带入检验室，禁止在检验室内会客、抽烟、吃东西。

4.注意安全，下班后、节假日必须切断水源、气源、电源，关好门窗。

5.严禁将污染区的物品带入清洁区。

6.妥善保管仪器、设备的说明书、操作规程、原始记录表、零(部)件、常用工具、电源线、连接线要排列整齐。

7.检验室须配置消防设备，并经常检查待用状态，任何人不得擅自挪用或挪动

九、环境消毒隔离制度

1、实验室应分为清洁区和操作区，清洁区要注意保护不受污染。操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等操作区的工作台及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染时随时消毒，每周大扫除一次。

2、采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次，采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一次，紫外线每日照射消毒二次，每月空气细菌培养一次，紫外线强度定期测定。

3、各种检验标本的收集，送检必须用相应指定的容器留取，不得外溢污染。

4、静脉及末稍采血，应严格执行消毒隔离措施，静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒，所用止血带及纸垫每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜绝交叉污染。

5、一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。

6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。

7、溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。

8、当针头和碎玻璃刺伤手时，用流水冲洗，挤出血水，应立即用碘酒消毒局部。

9、实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防止自身和实验室受污染。

10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠(2000mg/L) 中两小时后，标本倾弃，一次性容器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。

11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入。

十、实验台消毒措施

实验台消毒措施必须符合艾滋病实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。

1.仪器等表面消毒：工作结束后，用含有效氯1000mg /L 的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。

2.实验器材的分类消毒：将使用后的锐器方入防刺破、防渗漏的密闭专用锐器处置盒内，121℃高压消毒30分钟。其他器材方入有效氯为2000mg/L 的含氯消毒液内浸泡1小时以上。处理时应避免皮肤损伤

3.工作台等物体表面消毒：工作完毕，用含有效氯20 00mg/L 的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。

4、个人防护用品消毒：实验结束，将隔离衣、口罩、

帽子、手套、鞋套等121℃高压消毒30分钟。防护镜浸泡在 75%乙醇或有效氯为1000mg/L 的含氯消毒剂中，作用30-60 分钟。

5.手的消毒：用典伏或75%的乙醇擦拭，作用1-3分钟。

6.空气消毒：每次实验前后用紫外灯照射消毒，每次不少于1小时，每立方米空间安装紫外灯瓦数≥1.5W, 距紫外灯1米处照射强度≥70W/m²。

7、地面消毒：工作结束，应用含有有效2000mg/L 的消毒液喷洒拖地

8.各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理，所有废弃物应视为艾滋病污染物品，按照医院规定严格执行处理。

十一、废弃物处置和实验室消毒

1、废弃物处置

从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。

2、艾滋病常用的物理消毒方法

压力蒸汽消毒，121℃,保持15～20min;

干燥空气烘箱消毒(干烤消毒),140℃,保持2～3h。

3、艾滋病常用的化学消毒方法

艾滋病最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000～5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10~ 30min。

4、废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠。

5、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。

6 、溢出物：5000mg/L 次氯酸钠。

7、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒

十二、消毒液的配制及使用措施

1、艾滋病实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10～30 min。

2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行1:20~ 1:50稀释(2000-5000mg/L)或联昌84使用前进行1:10~ 1:25(2000-5000mg/L)稀释后，用于实验室内的消毒。

3、乙醇，俗称“酒精”,能够杀灭多种细菌，对艾滋病病毒有一定的杀灭作用，70～75%的效果最好。因此，使用前新鲜配置足量70～75%的乙醇，用于生物安全柜、工作台面和仪器表面的消毒，可以达到最佳的消毒效果。

4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置1～3%的过氧乙酸熏蒸，用于地面、墙壁、实验器材及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡1～20分钟，再用肥皂洗手。

5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒，医疗器械等。

6、艾滋病实验室常用化学消毒剂的配置，本着多用多配，少用少配，现用现配的原则，保证消毒剂使用时的浓度，保证消毒效果。

十三、检验科人员准入制度

( 一 )目的

禁止与实验室工作无关人员进入实验室，保证进入实验室的各类人员的安全，防止出现实验室感染和病原微生物扩散。

(二)适用范围检验科各实验室

(三)职责

检验科主任负责授权本科室人员进入实验室工作、监督检查本制度的执行情况及制度的修订；实验室组长负责本制度的执行和对本制度提出修订意见；实验室工作人员执行本制度和填写相关记录。

(四)具体要求

1.实验室门要保持关闭状态，二级实验室门口要有国际生物危险警告标志。

2.禁止16岁以下人员和禁止保洁工作人员进入实验室 (室内清洁工作由本室工作人员完成)。禁止在实验室接待各种来访人员。

3.进入病原微生物室从事实验活动人员要符合下列要求：

(1)经过健康体检，建立健康档案。

(2)不得戴隐型眼镜：手、脸部不能有较明显外伤。

(3)具有临床检验技术职称和两年以上临床检验工作经验。

4.经过实验室生物安全培训和微生物实验室操作技术培训与考核。了解微生物室的生物安全防护和所有项目与仪器的操作的SOP 文件及《实验室突发事件处理预案和程序》。

5.进入微生物室但不从事实验活动的人员要符合下列要求：

(1)实验室内设施维修人员，要在实验工作结束，并进行物体表面、地面和维修仪器消毒后，在实验室工作人员陪同下进入，同时采取必要的实验室生物安全防护措施并告知所从实验室生物安全工作的注意事项。

(2)外来合作者、进修和学习人员并经医院科教科批准和备案。在进入实验室之前，要了解实验室工作的潜在风险、学习生物安全防护和所要进行所有工作的 SOP 文件，其所有操作要有实验室正式工作人员在场陪同。

(3)检查、参观人员要有实验室工作人员在场陪同，采取必要的实验室生物安全防护措施。

6.所有进入实验室的人员，必须经科主任授权批准。

7.经过批准进入实验室从事实验活动人员必须承诺遵守本实验室各项规章制度和操作规程。

十四、消防安全制度

1、根据“谁主管、谁负责”的原则，实行科室负责制。

2、主管领导和保卫科对全体职工经常进行消防安全教育，提高思想认识，掌握消防知识和消防器材的使用。

3、严格禁止各种火种与易燃易爆物品，必须严格分区，保持一定的安全距离。实验室实施单向流向制度，通道不得乱堆放易燃爆物品和杂物。

4、严禁在实验室内吸烟。

5、电器的安装与拆除，必须由电工进行，严禁乱接电源，乱拉电线。

6、各种机电设备、高温电器设备、耐高压容器和设施，使用时必须有专人负责，随时检查，消除隐患，严防事故发生。

7、各防火区域设置的消防器材和设备，应定期进行检查，维修和更换，随时处于完好状态，并不得随便挪动。

8、任何人发现火、水灾等隐患者，必须及时向科领导报告。科主任及时向院领导报告，及时做好善事处理工作。

十五、生物安全防护制度

1、上岗工作人员应是经过岗前安全与技术培训，取得合格证，具有独立工作能力的人员。

2、进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时(如对筛查阳性标本进行复测或检测高危标本)要戴防护眼镜，防止污染暴露的皮肤和衣物。

3、严格按照操作规程操作。操作过程中，不得用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。

4、操作时可能发生的触电、失火、针头刺伤、烧伤、传染性标本的污染，有应急处理的方法，有关工作人员均应熟悉。

5、操作中手套破损，应立即丢弃，洗手后戴上新手套继续操作，不慎发生泻漏，应立即按照发生职业暴露后的处理措施，进行处理。

6、防止腐蚀、灼伤、中毒、火灾和爆炸等事件发生。

7、实验操作完毕后，应按照实验室清理与消毒程序，进行善后处理。同时记录相关资料与数据并存档。

8、工作结束后，应先洗戴手套的手，然后脱去手套丢弃，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手后离开实验室。

9、注意安全，随手关门，做好水，电，门的安全保卫工作，防火防盗防水。

十六、职业暴露的防护及处理措施

艾滋病检测实验室职业暴露是指检验工作人员

在从事检测工作过程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他利器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒感染的情况。

( 一)防护措施：

医务人员对所有病人的血液、体液及被血液、体液污染的物品均视为具有传染性的病源物质，医务人员接触这些物质时，必须采取防护措施

1.医务人员进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴手套，操作完毕，脱去手套后立即洗手，必要时进行手消毒。

2.在诊疗、护理操作过程中，有可能发生血液、体液飞溅到医务人员的面部时，医务人员应当戴手套、具有防渗透性能的口罩、防护眼镜；有可能发生血液、体液大面积飞溅或者有可能污染医务人员的身体时，还应当穿戴具有防渗透性能的隔离衣或者围裙。

3.医务人员手部皮肤发生破损，在进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴双层手套。

4.医务人员在进行侵袭性诊疗，护理操作过程中，要保证充足的光线，并特别注意防止被针头、缝合针、刀片等锐器刺伤或者划伤。

5.使用后的锐器应当直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，也可使用具有安全性能的注射器、输液器等医用锐器，以防刺伤。

6.禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。

(二)处理措施：

1.脱离污染环境，用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，用生理盐水冲洗粘膜。

2.如有伤口，应当在伤口旁端轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用肥皂液和流动水进行冲洗，禁止进行伤口的局部挤压。

3.受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒液，如75%的酒精或者0.5%的碘伏等进行消毒，并包扎伤口；被暴露的粘膜，应当反复用生理盐水冲洗干净。

4.在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六个月时抽血进行检测艾滋病病毒抗体。

5.预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在四小时内实施，最迟不得超过二十四小时；即使超过24小时，也应当实施预防性用药，连续使用28天。

6.发生艾滋病病毒职业暴露后立即通知院感科备案、评估。接受相关指导，必要时给予药物预防干预。在感染管理科的指导下，进行自我监测，并保持信息沟通，以便及时、积极处理可能出现的问题。

十七、保密程序制度

1.艾滋病检测实验室的所有工作人员要具有高度的保密意识。不得对无关人员透漏任何实验室内部的信息。

2.艾滋病检测实验室要有专人负责妥善保存与艾滋病 /AIDS 相关检测项目的所有资料(包括送检单、各种实验记录、感染者档案、报告单的发放),不得擅自修改和销毁。未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。严格遵守保密制度，杜绝泄密事件的发生。

3.我院艾滋病实验室属于筛查实验室，检测的结果也不是最终结果，检测到阳性结果应及时启动应急预案，根据WHO 提出的三级包装系统送到上级实验室作进一步确认。此时，不能出具艾滋病抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。

4.确认实验室确认阳性结果，以机密级向送检单位出具阳性报告；送检单位接到报告后，由专人负责接收，并应及时会同医院感染科上报县卫生防疫站和卫生局。在对阳性者告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。

5.经确认的阳性标本，包括在实验室留存的标本，应送省级艾滋病抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。标本保存时间至少5年。

6.当发生职业暴露事故后，无论职业暴露事故级别的大小，对涉及的职业暴露者，均应注意做好保密工作。任何一个得到信息的人都要做好保密工作。

保密守则：

(1)不该说的机密绝对不说；

(2)不该问的机密绝对不问；

(3)不该看的机密绝对不看；

(4)不该记录的机密绝对不记录；

(5)不在非保密本上记录机密；

(6)不在私人通信中涉及机密；

(7)不在公共场所和家属、子女、亲友面前谈论机密；

(8)不在不利于保密的地方存放机密文件资料；

(9)不在普通电话、明码电话、普通邮件传达机密事项；

(10)不携带机密材料游览、参观、探亲、访友和出入公共场所。

十八、仪器的使用维护

(一)、设立常用仪器的维护及校准制度，以保证正常运转。

1、酶标读数仪、洗板机

(1)每天：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。

(2)每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。

(3)每月：检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。

(4)每年：检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换。根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。

实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要的部件。

2、移液器

1年至少应该标定1次，发现异常情况应随时进行校准。标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校准法、同位

素计数法以及使用配套校准盒等。校准多道移液器时，必须保证每一个加样头都能够连续、准确地加样。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。

(二)、仪器使用环境

良好的工作环境不仅能确保艾滋病筛查实验室的酶标仪、洗板机等仪器的准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。

1、仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。

2、仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。

3、为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。

4、操作环境温度应在15°C-40°C 之间，环境湿度在 15%-85%之间。

5、操作时电压应保持稳定。

6、操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。

7、保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。

(三)、仪器操作注意事项

1、使用移液器加液，移液枪头不能混用

2、洗板要干净，避免交叉污染。

3、严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。

4、请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。

5、不要在测量过程中关闭电源。

6、对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。

7、使用后盖好防尘罩。出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪、洗板机等仪器。

第三章、仪器的标准操作程序

一、酶标仪的标准操作程序

1.开机

将酶标仪电源打开，仪器自检，随后显示当前的测量方法和方法及准备就绪

2.测量方法

在仪器所显示的测量方法中选择测量所需采用的测量方法，一般采用计算机控制

3.在计算机上打开酶标仪控制软件

4.在样本信息栏输入样本信息

5.设置好检验项目后，进行排版布局

6.点击控制页面的读板按钮，接受数据后经行计算和保存。

7.酶标仪的维护保养

(1)平常不用时，拔掉电源插头，盖好防尘罩。

(2)使用完毕，一定要拿下测试完的反应板，千万不要将控制板留在载物台上。

(3)若有液体溅到载物台或酶标仪外壁，应用湿抹布及时擦去。

(4)每次使用完毕用湿抹布擦拭酶标仪，以保持其洁净。

二、生物安全柜的标准操作程序

( 一 )目的

生物安全柜在制药、医疗生物以及工业实验室等领域起到非常重要的作用。使用生物安全柜的目的是使工作人员及其工作环境免受生物细菌的危害，因为在各种致病性微生物的环境下工作将会直接威胁到人的生命安全。

(二)适用范围

Ⅱ级生物安全柜主要用于临床、诊断、教学和群体中出现的与人类严重疾病有关的广谱内源性中度风险生物因子进行实验诊断时的操作的。

(三)操作人员

本实验室所有实验人员。

(四)操作步骤

1、打开风机5～10分钟，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。

2、安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。

3、操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能激出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。

4、柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA 滤器。

5、工作时尽量减少背后人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。

6、在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。

7、安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知相关人员。

8、工作完全后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10~ 15分钟，同时打开紫外灯，照射30分钟。

9、安全柜应定期进行清洁消毒，柜内台面污染物可在工作完成且紫外灯消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜体外表面则应每天用1%的84消毒液擦拭。

10、柜内使用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染环境。

(五)生物安全柜的维护保养程序

妥善进行生物安全柜的维护，可以为实验室提供有效的安全保障。具体方法如下：

1、日常维护可用70%的乙醇，或其他中性洗涤剂将生物安全柜的内、外部进行彻底的擦拭。清洗时先断电，防止消毒剂引起电器导电。

2、定期检查生物安全柜的硬件设备是否有损坏故障产生。

3、在生物安全柜工作时，通常打开前视窗检查其报警系统是否正常。正常情况下，这样做会引起报警系统报警。

4、不要用过强的清洁剂清洁柜体外部，强溶解性或强磨损性清洁剂可能会损坏生物安全柜外表面的粉体膜层。

5、不锈钢上顽固的污渍清除时，可以用 MEK (甲基-乙基-酮)。但是，必须在清除污渍后立即用清水和中性清洁剂进行清洗。不锈钢的定期清洗，可以保持和维护生物安全柜的优质表面。

6、检查日光灯和紫外线灯管，确定他们的正常工作。日光灯和紫外线灯管在长时间使用后，可以用酒精擦洗灯管表面的污溃，注意先断电，以防触电。紫外线灯应每年更换一次，以保持最佳的消毒灭菌效果。

7、定期检查生物安全柜的外壳是否有缝隙，发现缝隙可以用密封胶密封好。

三、离心机操作维护规程

( 一 )仪器分析原理和适用范围

1. 原理：

主要利用其高速旋转时产生的高离心力场的作用，可将不同大小或不同密度的颗粒分开。颗粒是指细胞、细胞器或病毒、大分子等。

2.适用范围：

血清、血浆或体液标本的离心处理。

( 二 ) 操作规程

1.样品准备：

未抗凝标本垂直放置30 - 60分钟后离心。

2.标本配平。

(1)标本放入离心机。

(2)盖上离心机盖，锁上安全锁。

(3)打开离心机电源，设定离心转速及离心时间。

(4) 一般检测项目的未抗凝血离心3000转 (rpm)7 分钟或 2 4 0 0 转 (rpm)15分钟。抗凝血或特殊检测项目的样本离心按作业指导书设定。

(5)待离心机转速停止后或离心转速降至0时，轻轻取出标本，关闭离心机电源。

(6)离心后立即将标本转移至干净不含抗凝剂或防腐剂的试管，同时此管应具有可识别标签。

3.维护保养项目：

每日用软布和中性洗涤剂清洁仪器内外表面，离心转筒每周及需要时消毒。

4.校准：

厂家校准。

5. 相关记录：

仪器使用记录、定期维护记录、期间核查记录、校准记录

第四章、标准操作规程

一、人类免疫缺陷病毒抗体检测(酶联免疫法)

( 一)科华生物

1.操作方法：

(1)将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。

(2)用去离子水和蒸馏水25倍稀释浓缩洗涤液。

(3)将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔每次实验需设外部对照阳性对照2孔、阴性对照1孔。

(4)在样品孔中加入100ul 待测样品，阴性、阳性对照及外部对照每孔加入100ul, 轻拍混匀。

(5)置37℃温育60分钟。

(6)置洗板机用洗涤液充分洗涤5遍，扣干。

(7)每孔加入100ul 酶标记物，轻拍混匀，置37℃温育 30分钟。

(8)重复步骤⑥。

(9)在所有孔内加显色A、显色 B 剂各50ul, 轻拍混匀，置37℃避光温育30分钟。

(10)每孔加入50ul 终止液终止显色反应，用酶标仪(双波长450nm/630nm) 测定各孔A值。

2.结果判定：

(1)临界值Cutoff=0.1+阴性对照的平均A 值 ( 阴性对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算),样品的A值≥Cutoff 值为艾滋病抗体阳性；样品的 A 值值为艾滋病抗体阴性。

(2)同时满足一下条件的实验是有效的。

①NC<0.080

②PCx>0.8, 抗-艾滋病-2阳性对照OD 值>0.3

③双波长读数，显色剂空白≤0.040,单波长读数，显色剂空白≤0.080.

④计算COV:COV=PCxX10%(若PCx>2.5 按2 .5计算) 初筛阳性者应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按照“全国艾滋病检测管理规范”送艾滋病确认实验室进行相关确认试验。

(二)万泰生物

1.操作方法：

(1)配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

(2)编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型，2型各1孔，空白对照1孔。(用双波长检测，可不设空白对照孔)。

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照100ul.

(4)温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

(5)洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

(6)加酶：每孔加入酶标试剂100ul,空白孔除外。

(7)温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育30±1分钟。

(8)洗板：操作同步骤5.

(9)显色：每孔加入显色剂 A,B液各50ul,轻轻振荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。

(10)测定：每孔加终止液50ul,轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处(建议用双波长 450nm/600-650nm), 用空白孔调零后测定各孔A 值。

2.结果判读：

(1)阴性对照孔A 值≤0.10,阳性对照孔A 值≥0.80,否则实验无效。

(2)若有1孔阴性对照A 值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A 值大于0.1,实验无效。

(3)阴性判定：样品A 值<临界值 (CUTOFF) 者为艾滋病抗体阴性。

(4)阳性判定：样品A 值≥临界值 (CUTFF) 者为艾滋病抗体阳性(注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者按《全国艾滋病检测技术规范》送艾滋病确证实验室进行确证实验。)

二、丙型肝炎病毒抗体检测(酶联免疫法)

1.操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔(空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂)其余各孔加入100UL 样本稀释液。

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。

(④)温育：用封版膜封版后，置37c温育60分钟。

(5)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

(6)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。

(7)温育：置37c温育30分钟。

(8)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干

(9)显色：每孔加入显色剂A,B 液各1滴(50微升),轻轻振荡匀，37℃避光显色30分钟。

(10)终止：每孔加终止液1滴(50微升),轻轻振荡混匀。

(11)测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450 nm 或双波长450 nm/600-650nm 测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。

2.结果判断

(1)临界值 (CUT/OFF) 计算：CUT/OFF= 阴性对照孔A 均值+0.12。 (不足0.02按0.02计算)

(2)阳性判定：样品A值≥临界值 (CUTOFF) 者判为抗HCV阳性。

(注意初试阳性应重新取样双孔复试)

(3)阴性判定：样品A 值<临界值 (CUTOFF)者判为抗HCV 阴性。

三、梅毒螺旋体抗体(酶联免疫法)

1.操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔(用双波长检测，可不设空白对照孔)

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照 100微升，轻轻振荡混匀。

(4)温育：用封版膜封版后，置37℃温育60分钟。

(5)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次

尽量扣干。

(6)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。

(7)温育：用封版膜封板后，置37c 温育30分钟。

(8)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干

(9)显色：每孔加入显色剂A,B 液各1滴(50微升), 轻轻振荡匀，37℃避光显色30分钟。

(10)终止：每孔加终止液1滴(50微升),轻轻振荡混匀。

(11)测定：10 分钟内测定结果，设定酶标仪波长于

450 nm (建议双波长450 nm/600-650nm 测定)用空白孔调零点后测定各孔A 值。

2.结果判断

(12)临界值 (CUT/OFF)计算：临界值=阴性对照孔 A 均值+0.18。

(13)阳性判定：样品A 值≥临界值 (CUTOFF)者判为 TP阳性。(注意：初试阳性应重新取样双孔复试)

(14)阴性判定：样品 A 值<临界值 (CUTOFF)者判为 TP 阴性。

四、乙肝五项操作规程

(一)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)

1.操作步骤：

(1)配液：配制工作浓度洗涤液(以纯化水做25倍稀释)

(2)编号：将样品对应微孔按序编号(共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔)

(3)加样：加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。

(④)温育：用封片纸覆盖反应板后，置37c 温育60分钟。

(5)加酶标抗体：取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴性、阳性对照孔中加入50 微升酶结合物。微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。

(6)温育：用封片纸覆盖反应板后，置37c 温育30分钟。

(7)洗涤：

①手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

②洗板机：将孔内液体甩干。选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。

③显色：每孔加入显色剂A,B 液各1滴(50微升),轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反应板后，将反应板放置37℃孵育30分钟。

(8)终止：每孔加终止液1滴(50微升),混匀。

(9)测定：用酶标仪读数，波长450nm。(建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm 或630相近的波长)若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD 值。

2.结果判断

(1)目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性；无色者为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性。

(2)酶标仪检测：

①临界值 (CUT/OFF) 计算：COV:Cut-off Value参考值 PC: 阳性对照OD 值

NCx: 阴性对照平均OD值。

NCx=(NC1+NC2+NC3)÷3

检测有效性： NCx≤0.1 、PC≥1.0,则检测结果有效。

COV=NCx+0.100

S:待测样品的OD 值，S/COV: 待测样本和 COV 的比值。

②阳性判定：样品OD 值 S/COV≥1.0者判为HBsAg阳性。

③阴性判定：样品OD 值 S/COV<1.0 者判为HBsAg阴性。

(二)乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)

1.、操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀(如有结晶析出应充分溶解),将浓缩洗涤液(20*)用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2 孔和空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50 微升及质控血清。

(④)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50 微升，轻轻振荡混匀。

(5)温育：置37c温育30分钟。

(6)洗涤：

①手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

②洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，

取各孔OD 值。

2.结果判断

(1)目测：

在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体(HBcAb) 阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体 (HBcAb) 阴性。

(2)酶标仪检测：

③ 临界值 (CUT/OFF)计算：

未稀释样品CUT/OFF= 阴性对照孔OD 均值N×0.3。

1:30稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N×0.5。

④阳性判定：样品OD 值小于COV, 说明该样品HBcAb 阳性。

⑤阴性判定：样品OD 值大于或等于 COV,说明该样品HBcAb 阴性。

(四)乙型肝炎e抗原(HBeAg)

1.操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀(如有结晶析出应充分溶解),将浓缩洗涤液(25*)用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2 孔和空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50 微升及质控血清。

(④)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50 微升，轻轻振荡混匀。

(5)温育：置37c温育30分钟。

(6)洗涤：

⑥手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置浸泡30-60 秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

⑦洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。

(7)显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升),轻轻振荡匀，37c 避光显色15分钟。

(8)终止：每孔加终止液1滴(50微升),混匀。

(9)测定：用用酶标仪读数，取波长450nm (建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm) 测定各孔OD 值先用空白孔校零，然后读取各孔OD 值。

2.结果判断

(1)目测：

在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎e 抗原(HBeAg)阳性；无色者为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性。

(2)酶标仪检测：

⑧临界值(CUT/OFF)计算：CUT/OFF=阴性对照孔OD均值 N× 2.1。(阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际 OD 值计算)

⑨阳性判定：样品OD 值大于或等于COV 值时，说明该样品HBeAg 阳性。

⑩ 阴性判定：样品OD 值小于 COV 值时，说明该样品HBeAg 阴性。

(五)乙型肝炎e 抗体(抗-HBe)

1.操作步骤：

(1)配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀(如有结晶析出应充分溶解),将浓缩洗涤液(25*)用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。

(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2 孔和空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)

(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50 微升及质控血清。

(④)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50 微升，轻轻振荡混匀。

(5)温育：置37c温育30分钟。

(6)洗涤：

11手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

12 洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。

(7)显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升),轻轻振荡匀，37c 避光显色15分钟。

(8)终止：每孔加终止液1滴(50微升),混匀。

(9)测定：用用酶标仪读数，取波长450nm (建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm) 测定各孔OD 值先用空白孔校零，然后读取各孔OD 值。

2.结果判断

(1)目测：

在白色背景下观察各孔显色情况，无色者为乙型肝炎 e 抗体 (HBeAb) 阳性；黄色者为乙型肝炎e 抗体 (HBeAb) 阴性。

(2)酶标仪检测：

13临界值 (CUT/OFF) 计算：

COV=(阴性对照平均OD 值+阳性对照平均OD 值)×0.5

14阳性判定：样品OD 值 S/CO≤1 者判为HBeAb 阳性。

15阴性判定：样品OD 值 S/CO>1者判为HBeAb 阴性。

第五章、实验室质量管理制度及结果判读

一、质量管理制度

1、根据省临检中心的有关规定，开展实验室室内的质量控制，绘制艾滋病实验室室内质量控制图，包括20次OD值、 S 、靶值、CV%值。对室内质控应每日有记录，有每月的 S、靶值、CV% 值。对失控情况有纠正方法，有预防性措施。

2、积极参加省临检中心组织的室间质控活动，对每次质控评价应有记录。

3、计量仪器应定期校正，每年一次。

4、精密分析仪器由专人负责，有使用记录和维修记录。

5、商品化的试剂盒的申购由专业组长负责申报，每月一次报科主任审批，不得使用过期，无批准文号的劣质试剂，进货统一由科室管理，自配试剂须严格校正后方可使用。

6、建立完整的艾滋病筛查实验室标准化操作程序，并应严格按程序执行。

7、当日发出的全部检验报告单须经当日科室总值班人员严格审核后方可发出。

8、科室在完成严格的室内、室间质量控制体系的同时，应逐步建立全面质量控制体系，对标本的采集，运送，保存等纳入严格的管理之中。

二、室内质控失控分析管理制度

室内质控出现失控时，应填写失控报告单，并上交专业主管，由专业主管做出是否发出与测定质控品相关的那批患者标本检验报告并分析及登记失控原因。

失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、质控限范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批患者标本报告可能作废。

此时，首先要尽量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例(例如5-10%)的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。当得到失控信号时，可以采用如下步骤去寻找原因：

(1)立即重测定同一质控品。此步是主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细操作，以查明质控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应控。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。

(2)新开一瓶质控品，重测失控项目。如果质控品结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。

(3)进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换，对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。

(4)重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。

(5)请实际工作经验丰富的工作人员或专家的帮助。

如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有向仪器或试剂厂家联系请求技术支援。

三、外部质控血清的制备和保存

1、质控血清的制备和保存(以ELISA 试验检测艾滋病抗体为例)

在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。

(1)、内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。

(2)、外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值 (Cut-off) 的 2 ～ 3 倍为宜。

2、外部对照质控血清的制备

艾滋病抗体阳性和阴性血清，56℃30min 灭活，3000r/min,离心15min 。弱阳性对照可以用艾滋病抗体阴性血清梯度稀释艾滋病抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制(可加入不影响检测结果的防腐剂)用0.2μm 滤膜过滤除菌。

3、外部对照质控血清的保存

(1)、按一周实验用量分装、分类、标记、封口、 -20℃ 冻存于非自动除霜冰箱中。

(2)、外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放2~8℃,供一周内使用。

4、外部对照质控血清的使用

每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。

5、外部对照质控物的质量要求

质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异 (CV<20%),并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA 反应的防腐剂。

四、室内质量控制程序

( 一 )目的：

保证 ELISA 检测结果准确可靠，充分发挥其方法学的优点。

( 二 ) 该SOP 变动程序：

本标准操作程序的变动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

(三)方法

1、分析前质控

(1)人员培训

①实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：

②检验项目的基本原理 (ELISA 原理);

③临床意义；

1)熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；

2)熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成);

3)熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

4) 某些特殊项目检测如抗HIV 等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

(2)室内质控血清的制备：

①质控血清每年列出计划报质控组采购，一般采用CutOff值附近的阳性

②质控血清-20℃冻存备用；

③使用前室温复融。

(3)试剂盒选择

卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。

(4)试剂盒评价：

①根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；

②通过询问试剂包被物的组成，如原料来源(基因工程或合成多肽),片段的组合(按比例混合或化学合成),片段的长短等判断试剂的优劣；

③参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。

④临床实验室根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

(5)仪器质控

为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序 (SOP), 所要控制的仪器包括移液器(加样枪), 水浴箱(温箱)和酶标仪。

①移液器：ELISA 加样量小(5-100ul), 其准确性直

接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；

②水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中 (或温箱内)实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；

③酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001, 准确性为±1%,重复性达0.5%。

④酶标仪校正程序：

a)滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用 UV-2201 型紫外-可见分光光度计(波长精度± 0.3nm) 于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。一般酶标仪无585nm 滤光片，可选用550nm 或630nm 滤光片。450nm滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为630nm)。

b)通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其 (内含200ul 甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右)置于8通道的相应位置，蒸溜水调零，于490nm处连续测三次，观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul 甲基橙溶液(吸光度调至0. 100A左右)先后置于同一通道，蒸溜水调零，于490nm 处检测，其误差大小用±1.96s衡量。

c)零点飘移(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8 个通道的相应位置，均加入200ul 蒸馏水并调零，于490nm处每隔30分钟测一次，观察各个通道4小时内吸光度的变化。

d) 精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul 高中低3种不同浓度的甲基橙溶解，蒸馏水调零，于490nm 作双份平行测定，每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度，日内批精密度，日间精密度和总精密度及相应的CV值。

e) 线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液，于490nm 平行测8次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差 s, 并用±1.96s 表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm), 先后于8个通道检测，每个通道测3次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。

(6)标本的采集和保存

①标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，以 HRP 为标记的 ELISA 测定中，溶血标本会增加非特异性显色造成假阳性。临床实验室

②长菌的标本同样的道理也易产生假阳性，因菌体中可能含有内源性 HRP 也会产生假阳性反应。临床实验室

③抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是不使用用肝素抗凝剂。

④标本在冰箱中保存时间过长易导致血清 IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5天内完成测试。如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。反复冻融会使抗体效价跌落，如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。

⑤ELISA的灵敏度>1ng/ml 水平上，标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本。

2、分析中质控

(1)临床实验室

(2)ELISA 实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥 ELISA的高灵敏，强特异的优点。因此，应建立实验项目的标准操作程序(SOP)

①加样应用微量移液器(加样枪)按规定的量加入微孔板底部，避免加在孔壁上部，不可溅出，不可产生气泡。

②每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染；干吸头预先在血清中抽吸三次。

③样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。

④如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。

(3)温育

①抗原抗体反应需要在一定温度下(37°C), 经过一定的时间才能达到反应的平衡点， ELISA 边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。水要浸至板条的1/3处。

②反应板不宜叠放，注意温育的温度和时间应按规定控制，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。

③洗涤

(1)手工洗涤一般采用浸泡方法：1)甩去孔内反应液；2) 用洗涤液过洗一遍(即注满孔后即甩去);3)微孔重新注满洗液后浸泡2-3分钟，间歇摇动；4)甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。重复以上操作至少5次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。

(2)洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，避免堵孔。临床实验室

④显色

(1)HRP 催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度，一定要按照说明书规定的时间温度(一般为37°C,10-15分钟)恒定反应后终止；

(2)或根据临界值质控血清吸光度值达0.2 左右使的时间而恒定反应时间。

3、酶标仪判读结果

a)显色反应终止后应立刻比色(30分钟内)。

b)常见的显色系统有OPD和TMB 二种，以后者最为常见，而 TMB 酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。 OPD 终止后显棕色，测定波长为490nm;TMB 终止后显黄色，测定波长为450nm,二种底物的校正波长均用630nm。c) 使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。 3.3分析后质控

4、报告方式

定性试验：国内外为便于统一计算，一律按 S/COV 方式报告，S 为标本A 值，COV 即 Cut Off 值 ( 或 COV)

(1)夹心法和间接法以 S/COV≥1 为阳性；竞争法与中和法以S/COV<1 为阳性

(2)COV 的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：

a)COV=2.1×N( 当N 不足0.05时按0.05计),此公式由 P/N>2.1 换算而来，常用于夹心法。

b)COV=0.5×N,从抑止率公式换算而来，常用于竞争，中和法。

c)COV=N+C(C为常数),用于间接法。

d)COV=C×P+N(C为常数),用于间接法。此公式最客观，但对厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。

定量分析：严禁用定性试剂盒做定量分析。

(1)用已知量的系列标准品，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。 ELISA 的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。

(2)现有的 ELISA定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。

(1)所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登记表应记录试剂来源、批号；质控血清的来源及测定值并注明是否在控；签上实验者姓名及审核者姓名。

(2)如试验结果对临床诊断有决定意义，其样本应保留，至少与病历保存期一致。

a)定性试验

ELISA 定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC 要保证试验的灵敏度和特异性。生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性。建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值、高值质控血清，正常人血清作为外对照，与标本同时检测，临界值 S/C.0≥1, 高值质控血清 S/C.0≥ 10,正常人血清 A 值在0.05-0.07之间。阳性质控血清失控 (临界值为灵敏度，高值为“HOOK”效应监控)应重做阴性标本；阴性对照失控应重做阳性标本。以表格式记录每块板的外对照实验结果，作为QC资料存档。

b)定量试验

ELISA 定量试验常见于肿瘤因子(如AFP,CEA,CA 系列),激素类，免疫球蛋白类，这些物质在体内有一定的量(正常范围),超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。定量试验的质控方法可参考生化方式。

c)“即刻性”质控

在开始进行质控时，只需要有3个质控血清测定值即可进行质控。当这组数据扩大到20次有效值时就可以计算RCV 的 X,s。方法：

(1)先将测定值从小到大排列， X1 最小，Xn 最大；

(2)计算X和 s;

(3)计算SI上限值和下限值。SI上= (X最小-X)/S, SI 下= (X 最大-X)/S

(4)对照SI表，检查是否出控， SI上、下限≤规定值，在控；SI 上或下限>规定值，失控。

五、室间质量控制程序

( 一 )目的

采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性。。

(二)基本概念

1.质量控制

是监视 ELISA操作全过程，排除误差，维持标准化操作的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的：

(1)确定控制的对象；

(2)规定控制对象的标准(预期值);

(3)制定或选择控制方法和手段；

(4)测量实际数据；

(5)比较或较对实际数据与预期值之间的差异，并说明原因。超出预定误差范围，报警系发出信号，反馈通道中断。

(6)采取行动，解决差异。恢复原状(原标准状态)的手段发挥作用。质量控制主要采用质控图进行。质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的"控制限"进行比较的图。这种性能数据是在按规程正常进行时，按时间顺序而抽选出来的，其目的是检测检验过程中变异的可追查性原因。可追逆性的误差原因，是指除去随机误差以外的其他原因。在 GLP 概念里QC 即指 IQC,其定义为：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本室工作的可靠性，旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高批内批间样本检验的一致性，以确定检验报告是否可靠或可否发出的一项工作。免疫测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式。

2.灰区概念

把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将COV 值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告+(阳性)。灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。灰区的设置有二种：

(1)COV×(1±CV), CV 为该试剂的批内 CV (一般在 15-20%间);

(2)COV±2s,s为实验室做室内质控ROC的 s。

3. 高值钩镰效应 (HD-HOOK)

在二位点夹心 ELISA 中，其剂量反应曲线的高剂量(HIGH DOSE,HD) 区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀 (HOOK),MILES(1974)根据此现象写实性地称之为"HD-HOOK"效应。产生该现象的分子机理有"分子变构说"和"浓度效应"等推论。一步法和二步法均存在"HD-HOOK"效应，只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。

4.质量控制血清

质控血清是已有靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。因此质控血清在质控工作中起重要作用。

卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清，可以在-20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化使用时，应先混匀，未用完部分可在4℃保存5 天。不宜反复冰融或自行分装。开展某项检验的室内质控工作需要的质控血清，一般按3-6 个月用量准备。自制的不定值质控血清，在一批质控血清将用完之前，需准备下一批质控血清。质控血清要求性能稳定，较长期内效价不变，其理化性质应与病人样本相近，这样才能有效地起到监测作用。

质控制血清分定值和未定值两种。如只用一份质控血清定值，一般定在正常值与异常值交界点上，定性测定时处于弱阳性水平，称为临界值。乙肝标志物临界值的制定，应按临床要求，为临床提供统一的判断弱阳性的标准。临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。

质控血清的制备，每个实验室可以根据自己的条件，选用临床中心提供的质控血清，或按以下方法自己制备本室使用的质控血清(以乙肝质控血清为例)。

(1)收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。

(2)56℃加热10 小时灭活。

(3)离心或过滤除去沉淀。

(4)用10%的小牛血清或正常人血清 (PBS缓冲液)将收集的血清稀释至所需的浓度。如能用正常的人血清稀释更好，因其成份更接近于检测标本。

(5)抽滤除菌。按一次使用的量分装小安瓿，封口，20℃ 保存备用。不可反复冻融。被检物要求检出的水平常被认为是质控血清应选择的水平。如果该试验还有其它要求，则应加所要求浓度的质控物。

(6)标定含量。20-30 次测定结果删除>±2SD 数据的均值作为靶值，并与已知定值血清对比测定。

(三)室间质评的方法

1.发质控物进行调查，这是目前国内外常见的形式，采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将结果报至组织者(部、省临检中心)。

组织者通过统计分析，再将评价结果寄回实验室，使其了解工作质量，发现问题，提高质量。其缺点为由于各实验室吃小灶或互相打电话修改结果而达不到真正评价作用。

这是国内外室间质评的常用形式。部临检中心对乙肝标志物ELISA检验的室间质评采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果报至部临检中心。部临检中心经统计分析，将评价结果寄回各实验室。

通过评价，各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不断提高检验质量。

这种评价方式有一定缺点，即各实验室常对质控物特殊对待，在检验时选用特殊试剂盒，选派特别的技术员进行检验，有的实验室互相和对结果并作修改。

这就使 EQA 的结果不能反映该实验室日常工作水平。

2.现场调查，事先不通知，临时派出人员到各实验室，规定采用常规方法，检测一组标本，进行评价。这种方法可以解决实际问题，进行现场指导，组织者常因人力、物力的原因而不能经常性进行。

派观察员到实验室进行试剂调查，这种调查事先不通知，临时派观察员到实验室，指定采用常规方法，检验规定的一组标本，进行评价。

(四)成绩计算方法

1.定性试验：检验结果与预期结果一致，得100 分，错误不得分，总计实验室的得分。从全部参评单位的得分中求出该批质控物平均分(X) 和标准差(s), 再通过公式计算出每一个实验室的得分比值(SI)SI=(实验室得分-平均分X)/平均标准差 (s),SI 在0.0-0.9间为良好，1.0-1.9 间为优秀，SI为负值时数值越大成绩越差。

2. 定量试验：SI=(实验室测定值一预期值X)/预期值的标准差s,SI越小，表明越靠近靶值，成绩越好。0-1.0 为优秀，1.1-2.0为良好，>2.0为差。SI无正负之分。

(五)质量改进 (QualityImprovement,QI) 质量改进的建议来源于三方面：

1.室内质控：提示实验的精密度差，应规范各项操作；

2. 室间质评：提示实验的准确性差，应改进设备的准备或更换试剂；

3.病人或医生的报怨：提示实验的偶然误差，应分析实验的质控过程是否达标。

六、检测结果报告规程

1、从事艾滋病检测工作的技术人员必须接受过上岗前的培训和定期复训。

2、艾滋病检测工作必须在独立的实验室内进行。

3、初筛检测试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、中国药品生物制品检定所批批检合格且在有效期内的

试剂。

4、按照《全国艾滋病检测技术规范》的要求建立健全质量管理制度、实验室安全标准操作规程、安全防护工作等。

5、检测结果报告前应填写好原始实验记录资料，包括试验日期，试验操作记录，检测样品及空白、阴、阳对照结果， S/CO 值、临界值、试剂厂家、批号、效期，检测人、复核人签名等。

6、将试验结果存档保存，处理试验废物，擦净实验台，做好实验室消毒卫生。

7、结果报告：对呈阴性反应的样品，可出具“艾滋病抗体筛查报告”(见附表1)阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。

8、复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告“艾滋病抗体筛查报告”(见附表1)阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，则应按照《全国艾滋病检测管理规范》的要求送艾滋病确认实验室进行确证试验。

七、检测结果的判定方法

1、艾滋病测定(胶体金法)结果的判定方法

(1)、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应。

(2)、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性。

(3)、无效：如无红线(或只有反应线)出现，表明实验无效，须重新检测。

2 、艾滋病测定 (ELISA 法)结果的判定方法

(1)、计算临界值CO(cut-off)值。

(2)、临界值=阴性对照A 均值+0.12

(3)、正常情况下，阴性对照孔的OD 值≤0 . 10(若1孔阴性对照的OD值>0. 1应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD 值>0.1,应重复实验。)。样品OD 值<临界值者为艾滋病抗体阴性。

(4)、正常情况下，阳性对照孔的OD 值≥0 .80(若1孔阳性对照的OD 值<0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD 值<0.8,应重复实验。样品OD 值≥临界值者为艾滋病抗体阳性。

八、检验结果的解释

艾滋病抗体检测的结果有三种，分别是阳性、阴性和不确定，绝大多数情况下都是阳性或阴性，出现不确定结果的情况很少。

(一)、阳性结果的解释

1、表明一个人感染了艾滋病，具有传播性当一个人艾滋病抗体检测结果为阳性，表明这个人已经感染了艾滋病，具有把艾滋病传播给别人的可能。

2、不能判断发病与否，不能判断疾病的进展。艾滋病抗体检测结果只能说明一个人是否感染了艾滋病，阳性结果并非就意味着一个人已经得了艾滋病，也不能说明患者处于疾病发展的哪个阶段。若要判断疾病的进展，则要做另外的实验检测 CD4 细胞记数和艾滋病病毒载量检查。

3、艾滋病-1 感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次艾滋病-1 核酸检测均为阳性即可作出诊断。 18 个月龄以上儿童诊断与成人相同。

(二)、阴性结果的解释

1、检测者处于窗口期

艾滋病从感染到能够检测出来有一段时期，这段时期称为窗口期，窗口期一般是2周到2个月。拿到一个阴性结果，首先要确定窗口期是否已过，如果确定最后-次危险行为距抽血作检测时已过窗口期，这时基本可以确定检测者未感染艾滋病。如果窗口期末过或者抽血化验之后又发生了危险行为(如又共用针具或未采取保护措施的性行为),同样也不能确定抽血者没有感染艾滋病。

2、检测者未感染艾滋病

如果检测结果阴性，最后-次危险行为又过了窗口期，那可以判定检测未感染艾滋病。

(三)、不确定结果

结果不能确定是指住进行艾滋病抗体检测的确认试验时，检测结果不是阴性，又够阳性标准，界乎于阳性与阴性之间的一种结果。出现不确定结果一般建议过三个月后再复查，

出现不确定结果一般有以下几种原因：

1、感染处于窗口期，从艾滋病进人体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应。

2、艾滋病进展到终末期，抗体水平下降。

3、有其它原因：如某些恶性疾病，怀孕，输血或器官移植等情况，身体会产生一些抗体，其反应与艾滋病的某些蛋白抗体所引起的反应相似。

九、检测数据的记录与保存

1、实验原始记录表

应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。

2、标本的登记

收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注(必要时记录通信地址 ) 等。

3、艾滋病阳性标本的保存记录

包括艾滋病阳性标本的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及标本保管人姓名。

4、文件存档

实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存15年以上。并同时使用计算机保存各种文件和记录。

十、呈阳性反应标本的处理程序

1、对艾滋病抗体初筛试验，呈阴性反应的样品可出具 “艾滋病抗体阴性”报告(可用附表1);对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告“艾滋病抗体筛查报告”(见附表1)阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，则应按照《全国艾滋病检测管理规范》的要求送艾滋病确认实验室进行确证试验。对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“艾滋病抗体待复查”报告(附表1)。

2、初筛试验呈阳性反应样品，需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“艾滋病抗体复测送检单”(附表2),经实验室负责人和1名专业检验人员审核签字。送县疾病控制中心艾滋病筛查中心实验室。

3、初筛试验呈阳性反应样品，进一步送检、本室冰冻保存后不在需要的样品的处置应符合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008)

4、从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。

5、所有废弃物应按照艾滋病污染物品处理。由专人按本实验室制定的程序和方法进行清洁和消毒。、

6、严格艾滋病实验室的废弃物的消毒处理制度，做好登记。

7、检验科主任定期负责检查，操作处理不当的按照科室有关规定处罚。

十一、感染追踪处理方案

(一)、追踪人群

1、有明确受血或血液制品史，并排除性传播、母婴传播、经国家确证实验室确认的艾滋病病毒抗体阳性者；

2、无偿献血工作中发现的艾滋病病毒抗体阳性献血人员。

(二)、工作步骤

1、对供血或受血的追访，须以健康跟踪服务或科研的名义进行，系统体检并采血预备有关的检验。