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专题 41 动物细胞工程
一、动物细胞工程
(一)动物细胞培养
1．动物细胞培养的条件
①无机物：无机盐等
营养
②有机物：糖类、氨基酸、维生素、血清等
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
无菌、无
②在无菌环境下进行操作
毒环境
③定期更换培养液，以便清除代谢物
温度、pH ①温度：哺乳动物细胞多以36.5±0.5_℃为宜
和渗透压 ②pH：多数动物细胞生存的适宜pH为 7.2 ～ 7.4
气体环境
2.动物细胞培养的过程
3．动物细胞培养过程中细胞生长特点
(1)细胞贴壁：将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养，悬液中分散的细胞很快就贴
附在培养瓶的瓶壁上，称为细胞贴壁。
(2)接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。
4．原代培养和传代培养
原代培养 通常指分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养
传代培养 指分瓶后的细胞培养
5.干细胞培养及其应用
种类 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 早期胚胎 成体组织或器官内 体细胞(如成纤维细胞等)
特点 能分化成任何一种 只能分化成特定的细胞或 能诱导分化成类似胚胎干细胞、组织或器
组织 细胞的细胞
官，甚至成为个体
造血干细胞用于治疗白血
分化成心肌细胞、
病，神经干细胞用于治疗 治疗镰状细胞贫血、阿尔
应用 神经元和造血干细
帕金森病、阿尔茨海默病 茨海默病、心血管疾病等
胞等
等
(二)动物细胞融合技术与单克隆抗体
1．动物细胞融合技术
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术，融合后形成的杂交细胞具有原来
概念
两个或多个细胞的遗传信息
方法 PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法
原理 细胞膜的流动性
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。已成为研究细胞遗传、细胞免疫、
意义
肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，为制备单克隆抗体开辟了新途径
2.单克隆抗体及其应用
(1)制备原理：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖；骨髓瘤细
胞能在体外大量增殖；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生抗体。
(2)制备过程
(3)优点：特异性强、灵敏度高，可大量制备。
(4)用途：作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。
(三)动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物细胞核移植技术的概念和类型
供体 动物一个细胞的细胞核
受体 去掉细胞核的卵母细胞
结果 重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体类型 胚胎细胞核移植和体细胞核移植
2.体细胞核移植的过程
3．应用前景和存在的问题
畜牧业：加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育
生物多样性保护：保护濒危物种
前 ①作为生物反应器生产医用蛋白；
景 医药 ②转基因克隆动物的细胞、组织或器官可作为异种移植的供体；
卫生 ③人核移植胚胎干细胞经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或
器官，将它们移植给患者可避免免疫排斥反应
问 ①克隆动物成功率非常低；②克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理
题 缺陷
一、单选题
1．下列有关动物细胞工程的叙述，错误的是（ ）
A．体外培养哺乳动物细胞时，培养温度大多需要保持在36.5℃左右
B．动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等是动物细胞工程常用的技术
C．动物细胞培养时，培养基中需要含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质
D．PEG诱导动物细胞融合形成的杂种细胞，经动物细胞培养能得到优良动物个体
2．下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是（ ）
A．培养至细胞发生接触抑制时，瓶壁上的细胞呈单层分布
B．癌细胞在培养瓶中不会出现接触抑制现象
C．传代培养时需要用胃蛋白酶处理贴壁生长的细胞
D．在细胞培养过程中，有部分细胞的基因型会发生改变
3．研究小组发现，将四个特定基因通过一定方法导入处于分化终端的体细胞（如成纤维细胞等）中，可
诱导其形成具有胚胎干细胞样分化潜能的诱导性多能干细胞（iPS细胞），再诱导可分化出人体特定细胞
和组织。下列叙述错误的是（ ）A．iPS细胞培养时培养液中通常需要添加血清等物质
B．体细胞与iPS细胞的功能有差异，形态没有差异
C．将特定基因导入体细胞中可能会中断原有基因的表达
D．iPS细胞分化为人体特定细胞的过程遗传信息基本不变
4．动物细胞培养是动物细胞工程的基础，科研人员将数量相等的动物肝脏肿瘤细胞和肝脏正常细胞分别
置于相同培养液中培养。下列叙述正确的是（ ）
A．动物组织经处理后的初次培养称原代培养，细胞只分裂一次
B．细胞培养液中通常含有维生素、激素、糖等多种能源物质
C．定期更换培养液可以防止代谢产物的积累对细胞造成危害
D．培养过程中两种细胞都会出现接触抑制现象
5．动物细胞体外培养需要满足一定的条件，下列说法错误的是（ ）
A．可用机械的方法处理动物组织，使其分散成单个细胞
B．动物细胞培养应置于含95%O 和5%CO 的培养箱中进行
2 2
C．使用合成培养基时，通常要加入血清等一些天然的成分
D．多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4，适宜温度为36.5±0.5℃
6．诱导多能干细胞（iPS细胞）在形态、基因表达、分裂能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似，这
为某些疾病的基础研究及其临床应用提供了一种新的途径。下列说法正确的是（ ）
A．iPS细胞与胚胎干细胞都必须从胚胎中获取
B．iPS细胞的制备必须通过激素诱导细胞实现
C．来自同一机体的造血干细胞与胚胎干细胞遗传物质相同
D．可利用镰状细胞贫血患者自身体细胞培养的iPS细胞治疗自身该疾病
7．将人细胞与小鼠细胞融合得到的人—鼠杂种细胞进行长期培养，杂种细胞随机丢失一部分人的染色体
后，染色体数目会保持稳定，常用于染色体上基因的定位。选取I~III三种杂种细胞，并检测四种酶的活性，
只有II具有芳烃羟化酶（AHH）活性，只有III具有胸苷激酶（TK）活性，只有I、III有磷酸甘油酸激酶
（PGK）活性， I、II、III均有乳酸脱氢酶（LD）活性。下列分析错误的是（ ）A．细胞膜的组成成分相似是细胞融合的结构基础之一
B．细胞培养液需要定期更换，以便清除代谢产物
C．AHH基因位于X染色体上，PGK基因位于2号染色体上
D．TK基因位于17号染色体上，LD基因位于11号染色体上
8．《细胞—干细胞》杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院诱导人成纤维细胞重编程为肝细胞
（hihep细胞）的成果。hihep细胞具有肝细胞的许多功能，包括分泌血清白蛋白、积累糖原、代谢药物、
药物转运等。下列相关叙述正确的是（ ）
A．人成纤维细胞与hihep细胞的DNA和RNA相同
B．hihep细胞通过主动运输方式将血清白蛋白运出细胞
C．人成纤维细胞重编程为hihep细胞的过程属于细胞分裂
D．hihep细胞的诱导成功为人类重症肝病的治疗提供了可能性
9．细胞毒素类药物能有效杀伤肿瘤细胞，但也会对健康细胞造成伤害，科学家将细胞毒素与单克隆抗体
结合制成抗体药物偶联物（ADC），ADC又被称作“生物导弹”，通常由抗体、接头和药物三部分组成，
如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．杂交瘤细胞释放单克隆抗体，体现了细胞膜具有一定的流动性
B．ADC中的抗体能特异性识别并杀伤肿瘤细胞
C．接头既要在内环境中保持稳定，又要能在细胞内被断开D．利用放射性同位素或荧光标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
10．科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（ ）
A．利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒
B．体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体
C．将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞
D．将纯化的核衣壳反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体
11．CD47是一种在多种细胞中广泛表达的跨膜糖蛋白，能够与巨噬细胞膜上的受体结合，并抑制其吞噬
作用。 结肠癌等多种癌细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6~5倍。科研大员制备抗CD47的单克隆抗
体，以探究其对巨噬细胞吞噬作用的影响。过程如下图所示，下列说法正确的是（ ）
A．可用灭活病毒诱导②过程的融合，该方法也适用于植物体细胞的杂交
B．过程③利用选择培养基进行筛选，可淘汰未融合的和融合的具有同种核的细胞
C．抗CD47单克隆抗体与肿瘤细胞结合，增强了巨噬细胞的吞噬作用
D．对照组的设置应为肿瘤细胞+单克隆抗体培养体系
12．细胞融合技术有着广泛应用，如图为细胞融合的简略过程。据图分析，下列有关叙述错误的是（ ）
A．甲形成过程中，a和b需要通过细胞膜接触完成识别和融合
B．乙形成过程中培养液渗透压等于或略大于细胞质，防止细胞因去壁后，原生质体吸水涨破
C．借助单克隆抗体的导向作用能将药物定向带到癌细胞所在位置
D．若a和b分别是基因型为AaBB、aaBb植株的花粉细胞，则去壁后两两融合可得到4种基因型细胞
13．新冠病毒抗原检测试剂盒可以作为核酸检测的补充手段，常被用于自测。它的外观如A图所示，只需
要将采集制备的样液滴在点样口(S)处，15分钟后，若T线和C线处同时显示横杠即阳性，要即时隔离、核查就医；若仅C线处显示一条横杠即阴性；若无横杠则说明操作有误，结果无效。它的内部结构如B所
示(胶体金法)，结合垫，T线和C线处分布有不同种类抗体，其中 抗体1、3均能与待测抗原结合，抗体2
能与抗体4结合，如果有被聚集沉淀的胶体金则会显色，出现横杠。下列关于该抗原检测试剂盒的推测，
不正确的是（ ）
A．使用单克隆抗体可以保障检测的特异性与灵敏性
B．抗体1和抗体3与待测抗原的结合部位是相同的
C．点样后，结合垫的抗体1和2能随样液向右扩散
D．没有抗原时，抗体1与抗体3不能结合
14．新冠病毒通过表面的S蛋白与靶细胞膜上的血管紧张素转化酶2（ACE2）结合实现入侵。2022年3月，
国家卫健委印发《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》，增加抗原检测作为核酸检测的补充手段。抗原检
测采用双抗体夹心法，其原理如下图。结合垫处含有足量的、可移动的、与胶体金结合的抗体1，T处固
定有抗体2，抗体1和抗体2与新冠病毒表面同一抗原N蛋白的不同位点发生特异性结合，呈红色。C处
固定有抗体1的抗体，与抗体1结合也呈红色。下列叙述正确的是（ ）
A．若检测结果为阳性，检测过程中抗原-抗体的特异性结合发生4次
B．若待测样本中不含新冠病毒，显色结果为C处和T处均出现红色
C．用单克隆抗体制备技术制备抗体1，先给小鼠注射纯化的S蛋白
D．灭活病毒疫苗制备前期，需要用具有ACE2的细胞培养新冠病毒
15．如图为某同学构建的细胞工程知识框架。以下相关说法错误的是（ ）A．图中①指植物体细胞杂交技术，图中②指动物细胞核移植技术
B．动物细胞培养时的气体环境为95%的空气和5%的CO
2
C．愈伤组织是一种不定形的薄壁组织团块，诱导产生愈伤组织时每日给予适时光照
D．由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥作用
16．在医药领域，单克隆抗体药物占有非常重要的地位。2015年，全球销售额排名前十的药物中，单克隆
抗体药物就有5种。下图是“早早孕诊断试剂盒”抗绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体制备流程示意
图，下列说法正确的是（ ）
A．给小鼠注射HCG的目的是让小鼠产生HCG抗体及相应的记忆细胞
B．图中乙选择培养到的丙都能迅速大量增殖，并产生HCG抗体
C．丁经体外细胞培养后可从细胞培养液中分离到HCG单克隆抗体
D．图示过程应用的原理包括动物细胞膜的流动性和动物细胞核的全能性
17．下列有关细胞工程技术的原理及目的的叙述，错误的是（ ）
选项 技术名称 原理 目的
A 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性及植物细胞的全能 获得杂种植物性
B 植物组织培养 植物细胞的全能性 获得植物个体
C 动物细胞培养 细胞增殖 获得动物个体或细胞产品
D 动物细胞核移植 动物细胞细胞核的全能性 获得克隆动物
A．A B．B C．C D．D
18．请据图判断，下列说法不正确的是（ ）
A．若a、b分别对应骨髓瘤细胞和B淋巴细胞，则d能产生单克隆抗体是b的遗传物质选择性表达的
结果
B．若d形成有性杂交后代，则a和b融合形成d的过程叫受精作用
C．若d形成无性杂种植株，则采用了细胞工程中的动物细胞核移植技术
D．若d形成无性杂种植株，由于杂种细胞具有双亲叶绿体，则可能培育出比有性杂交品种光合作用性
能更好的植株
19．我国科学家培育出轰动世界的体细胞克隆猴“中中”和“华华”，下图为其培育流程。下列叙述正确
的是（ ）
A．过程①是将成纤维细胞注射到去核的卵母细胞中
B．过程②通常需用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离
C．过程③中需要给代孕母猴饲喂一定量的促性腺激素
D．图中过程需用到体外受精、细胞培养、胚胎移植等技术
20．下列关于动物细胞工程的说法，错误的是（ ）
A．胚胎细胞核移植的成功率远高于体细胞核移植B．抗体——药物偶联物是通过抗体特异性杀死肿瘤细胞
C．克隆动物的性状与提供细胞核动物不完全相同
D．动物细胞培养所需的气体环境是95％空气和5％CO
2
21．我国科研人员利用大鼠、小鼠两个远亲物种创造出世界首例异源二倍体胚胎干细胞（AdESCs），具
体流程如下图。下列有关叙述正确的是（ ）
A．该项技术说明大鼠和小鼠之间不存在生殖隔离
B．AdESCs的获得涉及动物细胞融合技术和早期胚胎培养技术等
C．AdESCs的染色体数目与大鼠一小鼠体细胞融合的杂种细胞相同
D．利用AdESCs进行动物细胞核移植技术可培育出可育的二倍体雄鼠
二、多选题
22．如图为诺贝尔奖获得者山中伸弥团队制备iPS细胞（诱导多能干细胞）的过程示意图：①小鼠胚胎成
纤维细胞培养→②用分别含有Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因的四种慢病毒载体感染小鼠胚胎成纤维细胞
→③置于含有饲养层细胞的胚胎干细胞培养基中培养→④鼠胚胎成纤维细胞脱分化，形成iPS细胞。相关
叙述正确的是（ ）
A．步骤①应在含5%CO 的恒温培养箱中进行，CO 的作用是维持培养液的pH
2 2
B．步骤②由于慢病毒载体会受到免疫细胞的攻击，可能导致感染效率的降低
C．步骤③培养基中的饲养层细胞可为成纤维细胞提供所必需的生长因子
D．步骤④形成iPS细胞的实质是基因的选择性表达，使其功能趋向于专门化23．真核细胞中的WDR26蛋白与调控细胞增殖的某信号途径密切相关。为探究 WDR26蛋白对细胞增殖
的影响，某实验小组以肝癌细胞为材料进行研究，对照组肝癌细胞WDR26蛋白基因正常表达，实验组肝
癌细胞WDR26蛋白基因过量表达，结果如图所示。下列相关说法错误的是（ ）
A．原代培养的肝癌细胞出现接触抑制时，要进行分瓶培养
B．促进肝癌细胞WDR26蛋白基因的表达，有利于治疗肝癌
C．图2中，M点对应的肝癌细胞处于有丝分裂的中期或后期
D．若抑制DNA合成，则图2中N点对应的细胞数量会减少
24．为解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B淋巴细胞的染色体丢失问题，研究者将抗原刺激后的B淋
巴细胞，用EBV（一种病毒颗粒）感染，获得“染色体核型稳定”的EBV转化细胞。EBV转化细胞能够
在HAT培养基中存活，但对Oua敏感。骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能存活，但对Oua不敏感。下图表
示操作过程。下列分析正确的是（ ）
A．B淋巴细胞可从多次间歇注射某种抗原的动物脾脏中获得
B．HAT培养基和Oua筛选去除的是未融合的EBV转化细胞
C．杂交瘤细胞染色体丢失可能会导致抗体的产生能力下降
D．图中获得的杂交瘤细胞需经抗体检测筛选后才可用于生产
25．目前，检测新冠病毒感染的方法有三种，包括核酸检测、抗原检测和抗体检测。已经报道的两种新冠
病毒快速检测试纸，利用了胶体金免疫层析技术。一种是检测新型冠状病毒的抗原-双抗体夹心法，另一种
是检测患者血液里特异性针对新型冠状病毒的抗体捕捉法。胶体金试纸表面有2条线，如图一条为检测线
T，另一条为质控线C，如果两条线均显色，代表阳性；只有质控线显色，则代表阴性；除此之外均无效。
将咽拭子所取样本溶解稀释后，滴加样品垫，结合垫中含有用胶体金（红色）标记的新冠病毒抗体。下列叙述正确的是（ ）
A．样本中的抗原与胶体金标记的新冠病毒抗体结合并移动
B．T线处可包埋抗新冠病毒的抗体，若有抗原显示红色
C．C线处的抗体为动物细胞融合技术和单克隆抗体的应用
D．若捕捉血液的抗体，胶体金也可标记新冠病毒抗原的抗体
26．我国科学家成功地用iPS细胞克隆出了活体小鼠，部分流程如下图所示，其中Kdm4d为组蛋白去甲基
化酶，TSA为组蛋白脱乙酰酶抑制剂。下列说法正确的是（ ）
A．组蛋白乙酰化和去甲基化可以使生物的表型发生可遗传变化
B．①过程的小分子化合物诱导小鼠成纤维细胞突变为iPS细胞
C．②过程中去核前应保证卵母细胞培养至减数第二次分裂中期
D．③过程中可以使用有活性的病毒处理，目的是诱导细胞融合
27．体细胞核移植胚胎组的蛋白甲基化可导致克隆效率降低，毛壳素是组蛋白H3K9甲基化转移酶
SUV39H1/2的特异性化学抑制剂，使用毛壳素处理供体细胞，可降低SUV39H1/2在供体细胞和核移植胚
胎中的表达水平，提高猪胚胎的发育率，如图是利用不同浓度毛壳素处理对猪胚胎细胞核移植技术成功率
的实验流程示意图，下列叙述正确的是（ ）A．克隆猪的遗传物质来自供体细胞和代孕母猪
B．过程①使用的培养液需添加动物血清或血浆
C．过程④采用灭活的病毒处理以促进精卵结合
D．过程⑤成功与否与代孕母猪的生理状态有关
三、综合题
28．抗体药物偶联物（ADC）是一类通过连接头将细胞毒性药物连接到单克隆抗体的靶向生物药剂，能对
靶向细胞进行选择性杀伤。第三代ADC具有更低的偶联脱落速度，更高的药物活性以及低抗原水平下的
高细胞活性。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。
(1)ADC药物所需抗体分子的基本要求是优先结合靶细胞上的抗原，从而将细胞毒药物浓缩在肿瘤部位，
即单克隆抗体要具有 的特点。药物在靶细胞内释放并起作用，同时诱导 破裂，加速了癌细胞
的凋亡。
(2)我国科兴及北京生物两款新冠灭活疫苗均使用Vero细胞（非洲绿猴肾细胞的传代细胞系）进行病毒扩
增培养（见图）。①动物细胞工程常用的技术手段有多种，其中 是其他动物细胞工程技术的基础。Vero细胞的培养应
在培养箱中进行，箱内的气体环境条件为 。
②Vero细胞的传代培养过程中需要使用 酶使细胞分散，并在合成培养基中加入 等天然成分。
此外，在培养过程中，应定期更换培养液，目的是 。
③将已对新冠病毒发生免疫的B淋巴细胞和Vero细胞系获得杂交细胞，再经过 筛选、克隆化培养和
检测，获得产生特定抗体的 ，用以生产单克隆抗体。
29．新型冠状病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人
体，引起肺炎。图1为病毒侵入后，人体内发生的部分免疫反应示意图。单克隆抗体可阻断病毒的黏附或
入侵，故抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点之一。图2为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的
示意图。请据图回答下列问题：
(1)图1中人体内抗原递呈细胞吞噬病毒，并将病毒的抗原暴露在细胞表面，被 细胞表面的受
体识别后激活该细胞。
(2)B细胞识别入侵的病毒后，在细胞因子作用下，经过细胞的 ，形成
细胞。(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原学检查，检测病毒的
；采集血液样本主要用于血清学检查，检测 。
(4)据图2所示，研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射 免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞，再
提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选获得 细胞。
30．新型冠状病毒可通过表面的棘突蛋白（ 蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的 受体结合，侵入人体，
引起肺炎。2021年12月8日，我国首个抗新冠病毒特效药——安巴韦单抗/罗米司韦单抗联合疗法获得中
国药监局的上市批准，安巴韦单抗和罗米司韦单抗均为抗新型冠状病毒的中和抗体，可靶向结合新型冠状
病毒棘突蛋白（ 蛋白）。这标志着中国拥有的首个全自主研发并证明有效的抗新冠病毒抗体特效药正式
问世。据图回答下列问题：
(1)图甲所示制备抗新冠病毒单克隆抗体时，向小鼠注射 最为有效，从小鼠脾脏内获得
免疫过的 淋巴细胞（细胞①）与骨髓瘤细胞（细胞②）置于培养液中培养时，需在培养液中添加等天然成分。
(2)与植物体细胞杂交相比细胞①②特有的促融方法是 ， 筛选后的杂交瘤细胞还
需经过 才能筛选出足够数量能分泌所需抗体的杂交瘤细胞进行④体外
培养或注射到小鼠腹腔内，以获得抗新冠病毒单克隆抗体。
(3)临床试验发现，以上方法获得的抗体进入人体后会使人体产生特异性免疫，导致抗体失效，结合图乙分
析，为解决抗体失效问题，可从杂交瘤细胞中提取编码鼠源单克隆抗体 （填“5区”或“6区”）
序列的基因，与从人体中获得的编码抗体 （填“5区”或“6区”）的基因进行拼接，然后导入骨
髓瘤细胞中，进行培养获得新的抗体。
(4)利用以上方法获得的抗新冠病毒的单克隆抗体能准确诊断出某人是否感染新冠病毒，从单克隆抗体特点
的角度分析原因是 。
31．为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物
（ADC），过程如下图1所示。
(1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自 。
(2)步骤①常用方法包括 融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
(3)步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和 才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞可
采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。体外培养时，首先应保证其处于
的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是 与5％二氧化碳的混合气体，
二氧化碳的主要作用是 。在使用合成培养基时通常需加入血清，血清的作用是 。
(4)单克隆抗体的优点是 。单克隆抗体是ADC中的 （填“a”或“b”）部分。
(5)研究发现，ADC在患者体内的作用如下图2所示。①单克隆抗体除了运载药物外，还有作为诊断试剂、治疗疾病等作用。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致 。
③ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于
原理。
32．人心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和
肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗
体，科研人员完成了以下过程。请回答相关问题：
(1)动物细胞培养时，可以用 酶处理动物组织，得到分散的组织细胞，培养基除了添加葡萄糖、氨
基酸、生长因子等必要的营养成分外，往往还需加入一定量的 ，以满足动物细胞培养的营养需
要。在培养瓶中动物细胞培养一段时间后停止增殖的原因是 （至少回答两
点）。
(2)为了刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞，每隔2周用 作为抗原注射小鼠1次，共注射
3次。最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导
剂是 。为了获得杂交瘤细胞，应将甲放在 培养基上进行培养。②过程表示将乙
细胞接种到多孔培养板上，进行 检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的
是筛选获得抗cTnI抗体产量大、纯度高的杂交瘤细胞丙。与传统方法生成的抗体相比，杂交瘤细胞丙产生
的单克隆抗体最主要的优点是 。
(3)酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如图示：
据图分析，固相抗体和酶标抗体均能与同一抗原结合，这是由于不同抗体能与同一抗原表面的不同部位结
合。该检测方法中，酶标抗体的作用是 。
33．动物器官的体外培养技术对研究器官的生理、病理过程及其机制的意义重大。下图是一个新生小鼠的
肝脏小块培养装置示意图，请回答下列问题。(1)体外培养肝脏小块要满足的条件：适宜的温度、pH、渗透压、气体环境、营养和 。
(2)气室中充入5%CO 的主要作用是 。
2
(3)有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。利用如图所示装置和下列提供的材料用具，探究肝脏小块对有机
物X是否具有解毒作用。
材料用具：肝脏小块、外周血淋巴细胞、淋巴细胞培养液、植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂)； 显微镜、载
玻片、盖玻片、玻璃皿、滴管；吉姆萨染液(使染色体着色)、有机物 X 溶液等。 实验过程：
①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取4等份，备用。
②利用甲、乙、丙、丁4组装置(与上图相同)，按下表所示步骤操作(“ √ ”表示已完成步骤)
操作步骤 甲 乙 丙 丁
步骤一：加入肝脏培养液 √ √ √ √
步骤二：加入有机物 X 溶液 √ √
步骤三：放置肝脏小块 √
表中还需进行的操作是 。
③培养一段时间后，取4组装置中的等量培养液，分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中并 继续培养淋
巴细胞。
④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察 ，并对比分析。
若只有丙组淋巴细胞出现异常，甲组的淋巴细胞正常，则说明 。
