文档内容
重难点 17 微生物的培养与计数
知识点一： 选择培养基与鉴别培养基的比较
项目 选择培养基 鉴别培养基
制备方法 培养基中加入某些化学物质 培养基中加入某种指示剂或化学药品
依据某些微生物对某些物质或环境条
原理 产生特定的颜色或其他变化
件的嗜好或抗性而设计
用途 从众多微生物中分离出所需的微生物 鉴别不同种类的微生物
知识点二：消毒和灭菌的辨析
项目 条件 结果 常用方法 应用范围
煮沸消毒法 日常用品
仅杀死物体表面或
较为温和 巴氏消毒法 不耐高温的液体
内部的部分微生物
消毒 的物理或 用酒精擦拭双
(不包括芽孢和孢
化学方法 化学药剂消毒法 手、用氯气消毒
子)
水源
灼烧灭菌法 接种工具
杀死物体内外所有 玻璃器皿、金属
强烈的理 干热灭菌法
灭菌 的微生物，包括芽 用具
化因素
孢和孢子 培养基及容器的
高压蒸汽灭菌法
灭菌
知识点三：两种纯化方法的比较
项目 平板划线法 稀释涂布平板法
分离结果
关键操作 接种环在固体培养基表面连续划线 ①一系列的梯度稀释②涂布平板操作
接种用具 接种环 涂布器
(1)接种环的灼烧：①第一次划线前， (1)在进行稀释操作时，每支试管及
避免接种环上可能存在的微生物污染 其中的9 mL水、移液管均需灭菌；
培养基；②再次划线前，杀死上次划 操作时，试管口和移液管应在离酒精
线结束后接种环上残留的菌种，使每 灯火焰1～2 cm处。
注意事项
次划线的菌种直接来源于上次划线的 (2)涂布平板时：①涂布器用体积分
末端；③划线结束后，杀死接种环上 数为70%的酒精消毒，取出时要让多
残留的菌种，避免细菌污染环境和感 余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少
染操作者。 量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引(2)接种环灼烧后，要冷却后才能接触 燃；②不要将过热的涂布器放在盛放
菌液，以免温度太高杀死菌种。 酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒
(3)划线时用力要大小适当，防止用力 精；③酒精灯与培养皿距离要合适，
过大将培养基划破 移液管头不要接触任何其他物体
可以观察菌落特征，对混合菌进行分
优点 可以计数，可以观察菌落特征
离
操作较麻烦，平板不干燥效果不好，
缺点 不能计数
容易蔓延
都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌
共同点
落；都可用于观察菌落特征
知识点四：两种微生物计数方法的比较
间接计数法 直接计数法
项目
(稀释涂布平板法) (显微镜计数法)
当样品的稀释度足够高时，培养
基表面生长的一个菌落，来源于 利用特定细菌计数板或血细胞计数
原理 样品稀释液中的一个活菌，通过 板，在显微镜下计算一定容积的样品
统计平板上的菌落数，就能推测 中微生物的数量
出样品中大约含有多少活菌
每毫升原液所含细菌数：每小格内平
公式 每克样品中的菌落数＝×M
均细菌数×400×104×稀释倍数
当两个或多个菌体连在一起时，
缺点 不能区分细胞死活
平板上观察到的只是一个菌落
结果 比实际值偏小 比实际值偏大
注：细菌的数目还可以通过滤膜法来测定。
知识点五：微生物的筛选与鉴别方法
(1)微生物的筛选方法
单菌落 利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物
挑取法 菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物
选择培
利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物
养法
鉴定培
利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物
养法
(2)微生物的鉴别方法
根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、
菌落特征鉴别法
隆起程度和颜色等特征进行鉴别
如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基
指示剂鉴别法
变红说明该种微生物能够分解尿素
染色鉴别法 如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来鉴别分解纤维素的微生物
知识点六：微生物的分离与计数实验中对照组和重复组的设置及作用
(1)两种对照组的设置及作用
①判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。
②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，
观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。
(2)重复组的设置及作用：为排除偶然因素对实验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置至少
3个平板作重复组，选择菌落数均在30～300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”
代入计数公式予以计算菌落数。
以微生物为背景，主要考查微生物的分离筛选、灭菌和计数等知识，微生物的分离与纯
化过程以及相关注意点，掌握微生物纯化的方法，需要学生加强理解，同时熟悉课本。微
生物这章节会有一定的计算量，对学生的理解能力要求较高。
（建议用时：30分钟）
一、单选题
1．某兴趣小组对培养液中酵母菌种群数量变化进行研究，结果如下图。有关叙述错误的是
（ ）
A．实验需要对实验器皿、培养液进行灭菌处理，并在酒精灯火焰附近接种
B．该实验中摇床的转速、温度、培养液的体积是无关变量，时间是唯一的自变量C．该实验需每隔2小时记数一次或每隔2小时接种一支试管最后一起计数
D．用台盼蓝染色后对酵母菌计数，只计呈无色的个体，超过母体一半大的芽体也计数
【答案】B
【解析】
【分析】
探究酵母菌种群数量的变化实验中，实验流程为：（1）酵母菌培养（液体培养基，无菌条
件）→（2）振荡培养基（酵母菌均匀分布于培养基中）→（3）观察并计数→重复（2）、
（3）步骤（每天计数酵母菌数量的时间要固定）→绘图分析。
【详解】
A、为保证不被杂菌污染，实验需要对实验器皿、培养液进行灭菌处理，并且酒精灯火焰
附近可形成一个无菌区，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近
接种，A正确；
B、该实验中摇床的转速、温度、培养液的体积是无关变量，时间不是唯一的自变量，还
有氧气的有无等，B错误；
C、为使实验的准确，该实验需每隔2小时记数一次或每隔2小时接种一支试管最后一起计
数绘图分析，C正确；
D、台盼蓝能将死细胞染成蓝色，活细胞不会被染上颜色，用台盼蓝染色后对酵母菌计数，
只计呈无色的个体，超过母体一半大的芽体也计数，D正确。
故选B。
2．下列有关实验的叙述，错误的是（ ）
A．用花生子叶通过切片法做脂肪的鉴定，需用显微镜才能看到红色的脂肪滴
B．用萃取法提取胡萝卜素时，应该避免明火加热，采用水浴加热
C．将正常奶粉样液2mL注入试管，再加入一定量的蛋白酶，再加入双缩脲试剂，不会产
生紫色反应
D．平板划线操作中，灼烧接种环的次数多于在培养基上划线区域数
【答案】C
【解析】
【分析】
脂肪可用苏丹Ⅲ染液鉴定，呈橘黄色；萃取剂属于易燃易爆物质，用萃取法提取胡萝卜素
时，应该避免明火加热，采用水浴加热；平板划线法接种时第一次划线前与每次划线后都
需要灼烧灭菌。
【详解】
A、用花生子叶做脂肪的鉴定，由于脂肪滴存在于细胞内，所以需用显微镜才能看到被染
成橘黄色或者红色的脂肪滴，A正确；
B、萃取剂属于易燃易爆物质，用萃取法提取胡萝卜素时，应该避免明火加热，采用水浴
加热，B正确；
C、蛋白酶的本质也是蛋白质，可以与双缩脲试剂发生紫色反应，C错误；D、平板划线法接种时第一次划线前与每次划线后都需要灼烧灭菌，故，灼烧接种环的次
数多于在培养基上划线区域数，D正确。
故选C。
3、已知固体培养基会因碳酸钙的存在而呈乳白色，且乳酸能分解培养基中碳酸钙。某同学
用新鲜的泡菜滤液为材料进行了分离纯化乳酸菌的实验，下列叙述错误的是（ ）
A．分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是鉴别乳酸菌
B．分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行灭菌处理
C．分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释
D．分离纯化乳酸菌时，应挑选出不具有透明圈的菌落作为候选菌
【答案】D
【解析】
【分析】
培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生
物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加
维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，
培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】
A、在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有：中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸
和利于乳酸菌的鉴别和分离，A正确；
B、微生物培养时，为避免杂菌污染，分离纯化所用的培养基加入锥形瓶后一般还要进行
灭菌处理，B正确；
C、分离纯化乳酸菌时，需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样做的目的是使聚集
在一起的乳酸菌分散成单个细胞，有利于在培养基表面形成单个菌落，C正确；
D、分离纯化时应挑选出具有透明圈的菌落作为候选菌，D错误。
故选D。
4、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨
基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，
①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是
（ ）
A．图中①②④为完全培养基，③为基本培养基
B．A操作的目的是提高突变率，增加突变株的数量C．B的正确操作是用涂布器蘸取菌液后均匀地涂布在②表面
D．经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
【答案】C
【解析】
【分析】
分析题图可知：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种
到两种培养基中，分别是基本培养基、完全培养基；在基本培养基中，某氨基酸突变株不
能生长，而在完全培养基中能够生长，据此可以选择出氨基酸突变株。
【详解】
A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种
氨基酸，只能在完全培养基上生长，根据题干信息和图形分析，图中①②④为完全培养基，
③为基本培养基，A正确；
B、紫外线可以提高突变的频率，A操作的目的是提高突变菌株的浓渡，B正确；
C、B操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C错误；
D、从图中可看出，D在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可生长，说明D是氨基
酸缺陷型菌落，故经C过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D菌落进行纯化培养，D
正确。
故选C。
5、为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在
37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如下表所示。下列分析正确的是（ ）
菌
秸秆总重(g) 秸秆残重(g) 秸秆失重(%) 纤维素降解率(%)
株
A 2．00 1．51 24．50 16．14
B 2．00 1．53 23．50 14．92
C 2．00 1．42 29．00 23．32
A．从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基中的唯一氮源是纤维素
B．如果将上述实验中的温度条件调整至25℃，效果会更明显
C．实验中需要设置一个不接种纤维素分解菌的空白对照实验
D．纤维素酶活力最高的是菌株C，需用选择培养基扩大培养
【答案】C
【解析】
【分析】
分析图表可知：在相同条件下，C组纤维素降解率最高，秸秆失重最多，说明其被分解的
最多，即C组纤维素分解菌纤维素酶的活力最高。【详解】
A、纤维素不含氮，可为纤维素分解菌提供碳源，因此从土壤中筛选纤维素分解菌的培养
基中的唯一碳源是纤维素，A错误；
B、本实验不能确定最适温度，因此将上述实验中的温度条件调整至25℃，效果不一定会
更明显，B错误；
C、实验中需要设置一个不接种纤维素分解菌的空白对照实验，以检验培养基灭菌是否彻
底，C正确；
D、根据分析可知，纤维素酶活力最高的是菌株C，需用液体培养基扩大培养，D错误。
故选C。
6、为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述
正确的是（ ）
A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．每次划线前都需要蘸取菌液
【答案】B
【解析】
【分析】
平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形
成单个菌落。
【详解】
A、由于倒平板的时候是液体，具有流动性，所以倒平板后不需间歇晃动，A错误；
B、图中Ⅰ、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，所以应该从Ⅲ区挑取单菌落，B正
确；
C、培养基中已经出现单菌落，说明达到了菌种纯化的目的，C错误；
D、为了保证得到单菌落，不需要每次划线前都蘸取菌液，只需要每次从上次划线的最末
端开始即可，D错误。
故选B。
7、下列关于筛选分解尿素的微生物的培养基的叙述，错误的是（ ）
A．可以将尿素作为培养基的唯一氮源B．脲酶可以将尿素分解为NH ，然后直接被植物吸收利用
3
C．培养基中含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质
D．用酚红鉴定尿素分解菌的原理是pH升高酚红试剂会变红
【答案】B
【解析】
【分析】
1.选择分解尿素的微生物的培养基制备，培养基需要以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶
的微生物才能分解尿素并在该培养基上生长，据此就能够选择出分解尿素的微生物。
2.分解尿素的细菌的鉴定：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细
菌能够分解尿素。
【详解】
A、用以尿素作为唯一氮源制成培养基作为选择培养基，将分解尿素的微生物选择出来，A
正确；
B、脲酶可以将尿素分解为NH 和二氧化碳，NH 溶于水后以离子的形式被吸收，B错误；
3 3
C、培养基中基本营养成分包括水、碳源、氮源和无机盐等，C正确；
D、要鉴定分解尿素的细菌，可以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细
菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，D正确。
故选B。
8、下图为利用玉米秸秆制备绿色能源——乙醇的工艺流程图，相关叙述错误的是（ ）
A．对玉米秸秆进行预处理的酶也可从腐木上的霉菌中提取
B．图中培养产酶微生物的培养基中的碳源一般为葡萄糖
C．在糖液发酵过程中，发酵装置一般应严格密封处理
D．发酵产生的酒精可与酸性重铬酸钾溶液反应变成灰绿色
【答案】B
【解析】
【分析】
纤维素分解菌体内含有纤维素分解酶，能够将纤维素分解成葡萄糖，再用酵母菌进行无氧
发酵葡萄糖即可制成燃料乙醇。
【详解】
A、生长在腐木上的霉菌能够分解利用腐木中的纤维素，可以产生纤维素酶，玉米秸秆中
富含纤维素，因此对玉米秸秆进行预处理的酶也可从腐木上的霉菌中提取，A正确；
B、图中培养产酶微生物主要作用是处理玉米秸秆，因此应以纤维素为碳源，B错误；C、酒精发酵属于无氧呼吸，因此需要在无氧环境（密封）的条件下进行，C正确；
D、酒精可以与酸性的重铬酸钾溶液发生反应，由橙色变为灰绿色，D正确。
故选B。
9、下列关于探究抗生素对细菌选择作用的相关描述，正确的是（ ）
A．平板培养基划了4个区域，1个区域为对照组，另外3个均为实验组
B．对照组不放置无菌纸片，实验组放置含抗生素的无菌纸片
C．接种涂布后的培养皿正向放置于37℃的恒温箱中培养12~16h
D．抑菌圈越大细菌耐药性越强，应从远离抑菌圈的菌落挑取细菌继续培养
【答案】A
【解析】
【分析】
抗生素能够抑制细菌的繁殖，有些抗生素通过抑制细菌细胞壁的形成来抑制细胞增殖。从
图中可知，该培养基分为四个区域，1区域无抑菌圈，2、3、4三组有抑菌圈。
【详解】
A、1个区域为对照组，只放置了不含抗生素的纸片，排除纸片对实验干扰，另外3个均为
实验组，因为另外3组有抑菌圈，A正确；
B、对照组需放置无菌纸片，排除无菌纸片对实验干扰，B错误；
C、接种涂布后的培养皿要倒置培养，防止培养基中水分蒸发过快，C错误；
D、抑菌圈越大细菌耐药性越弱，应从靠近抑菌圈的菌落挑取细菌继续培养，该区域菌种
对抗生素耐药性强，D错误。
故选A。
10、下图表示研究人员在实验室中使用的分批培养细菌的方法，下列叙述错误的是（
）
A．尿素分解菌可利用培养基中的尿素是因为能合成脲酶
B．短期保存的菌种，可将菌液加入甘油后放在冷冻箱中冷藏
C．液体选择培养基通常可用于选择培养，增加目标菌种的浓度D．将三角瓶放在摇床上振荡培养能提高溶氧量和养料的利用率
【答案】B
【解析】
【分析】
1、若要长期保存菌种，菌液中常需要加入一定量的甘油，且要放置在-20℃的冷冻箱中；
若要短期保存菌种，可将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，菌落长成后，将试管放置
在4℃的冰箱中保藏。2、液体选择培养基通常可用于选择培养，增加目标菌种的浓度。将
锥形瓶放在摇床上振荡培养能提高溶氧量和养料的利用率。
【详解】
A、尿素分解菌可利用培养基中的尿素是因为能合成脲酶，而其他微生物不能合成脲酶故
不能分解尿素，A正确；
B、短期保存的菌种，可将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，菌落长成后，将试管放
置在4℃的冰箱中保藏，B错误；
C、液体选择培养基通常可用于选择培养，增加目标菌种的浓度，C正确；
D、将三角瓶放在摇床上振荡培养既能提高溶氧量，提高有氧呼吸的速率，又能提高养料
的利用率，D正确。
故选B。
11、大肠杆菌的体积大小通常在0.5~3 μm，下图为分离培养获得大肠杆菌噬菌体的实验操
作过程。相关叙述正确的是（ ）
A．使用污水是因为其中含有大量大肠杆菌，能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体
B．步骤A的目的是让大肠杆菌噬菌体利用培养基中的蛋白质等成分迅速增殖
C．步骤B的目的是促进噬菌体与大肠杆菌分离，从而获得更纯的大肠杆菌
D．检测滤液中是否有大肠杆菌噬菌体，应该用含有大肠杆菌的液体培养基
【答案】A
【解析】
【分析】
1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、
特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮
源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
2、实验中污水可以提供噬菌体，然后用培养基共同培养大肠杆菌和噬菌体，图中步骤A
表示噬菌体在大肠杆菌内繁殖；步骤B表示高速离心，从而将大肠杆菌和噬菌体分离；步
骤C利用过滤的方法分离噬菌体。
【详解】
A、污水中含多种有机污染物，可为大肠杆菌提供C源等营养，选择污水是因为污水中含有大量的大肠杆菌，能从中分离获得大肠杆菌噬菌体，A正确；
B、步骤A中，大肠杆菌噬菌体是病毒只能寄生在活细胞中，不能利用培养基中的蛋白质
等成分迅速增殖，B错误；
C、步骤B离心的目的是为了促进噬菌体和大肠细菌的分离，从而获得被感染的大肠杆菌，
C错误；
D、检测滤液中是否有大肠杆菌噬菌体，应该用含有大肠杆菌的固体培养基，D错误。
故选A。
12、酵母中的蛋白含量高，可用作饲料蛋白，且有些酵母能利用工业废甲醇作为碳源进行
繁殖。研究人员拟从土壤中分离该类酵母并大量培养，操作流程如下图。下列相关叙述正
确的是（ ）
A．土样、培养基、培养器皿和接种工具等都必须严格灭菌
B．只有③过程中使用的培养基需以甲醇作为唯一的碳源
C．⑤过程扩大培养时需要保证充足的营养并营造无氧环境
D．通过逐步提高培养基中甲醇的浓度可获得甲醇高耐受菌株
【答案】D
【解析】
【分析】
分离某种微生物的原理：选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养，酸碱度，温度和
氧等要求或加入某种抑制造成只剩于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而
淘汰一些不需要的微生物。本题要分离能利用工业废甲醇的酵母，要以甲醇作为唯一的碳
源的培养基进行培养。
【详解】
A、土样中含有要分离的酵母，如果对其灭菌会杀死酵母，无法得到该类酵母，因此不能
对其灭菌，A错误；
B、扩大培养时也需要以甲醇作为唯一的碳源，不是只有③过程，B错误；
C、酵母是兼性厌氧型真菌，在有氧条件下可大量繁殖，酵母扩大培养时，需保证充足的
营养和氧气等条件，C错误；
D、逐步提高培养基中甲醇的浓度，能筛选出其中的耐受菌，获得甲醇高耐受菌株，D正
确。
故选D。
二、非选择题13． 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关
研究。请回答下列问题：
(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是___________________（填编号）。
编号 ① ② ③ ④
物品 培养基 接种环 培养皿 涂布器
灭菌方法 高压蒸汽 火焰灼烧 干热 臭氧
(2)称取1．0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细
胞密度不同的菌悬液。分别取0．1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬
液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌
___________________个。
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行
___________________育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以___________________为唯一
碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径
___________________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株
的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株___________________进
行后续相关研究，理由是_________________________________________________________。
【答案】(1)4
(2)4．6×105
(3) 诱变 脂肪（或油脂） 大
(4) B 菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果更好
【解析】
【分析】1、灭菌指用强烈的物理或化学方法杀灭所有微生物，包括致病的和非致病的，以及细菌的
芽胞．常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。高压蒸汽灭菌适用于对一
般培养基和玻璃器皿的灭菌，干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，微生物接种时的金属接
种工具和试管口可以用灼烧灭菌。
2、稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖
而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。将菌液进行一系列的梯
度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，使其均匀分布于平板
中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样
品中的含菌数。
(1)
培养基一般进行高压蒸汽灭菌，接种环可用火焰灼烧灭菌，培养皿一般通过干热灭菌，涂
布器应该用酒精引燃灭菌；故①②③正确，错误的是④。
(2)
稀释涂布平板法是将样品进行一系列梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液，然后涂布
到平板上。根据题意，1.0g土壤样品转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经系列梯度稀
释后，分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，则稀释的倍数为1000倍，其中10倍稀
释的菌悬液培养后长出了46个酵母菌落，则总的稀释倍数为10000倍，故每克土壤中含酵
母菌数为46×10000=4.6×105个。
(3)
根据题意，欲提高酵母菌产酶能力，可对分离得到的产脂肪酶酵母菌菌株进行射线辐射，
该育种方式为诱变育种。为了能筛选出符合要求的产脂肪酶酵母菌突变株，可配制以脂肪
为唯一碳源的培养基，将辐射处理的酵母菌涂布在该固体培养基上，形成单菌落；产脂肪
酶能力越强的酵母菌，分解利用脂肪的能力越强，菌落生长越好，一段时间后，按照菌落
直径大小进行初筛，选取直径较大的菌落即可。
(4)
据题图分析可知，相同时间内，菌株B的细胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低
于菌株A的脂肪剩余量，故进行相关研究可选择菌株B，原因是菌株B增殖速度快，单细
胞蛋白的产量也高，同时降解脂肪的能力强，净化效果更好。
【点睛】
本题以微生物为背景，主要考查微生物的分离筛选、灭菌和计数等知识，意在强化考生对
相关内容的识记与理解能力，重在考查基本原理等基础知识，难度不大。
14、解磷菌是一种能将土壤中植物不能利用的磷转化为植物可以利用磷的功能微生物（主
要为细菌），在提高土壤中有效磷含量、促进磷循环方面发挥着重要作用。解磷菌能分解
含磷化合物使得菌落周围会出现透明圈。如图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的
部分流程示意图，据图回答下列问题。(1)为筛选解磷菌，A培养基的碳源最合适的是_______。
A．葡萄糖 B．难溶性磷酸盐 C．二氧化碳 D．碳酸盐
(2)为避免杂菌影响，需要对操作Ⅱ所需仪器进行灭菌的是_______。
A．B培养基 B．滴管 C．接种环 D．玻璃刮铲
(3)若筛选更高效解磷菌，应挑选C中________（①/②/③/④）号菌落。
分离出的解磷菌，需通过分子鉴定以确定种属关系。常用的方法是对细菌的核糖体RNA
（16S-rRNA）所对应的16SrDNA进行序列分析。
(4)根据16S-rRNA合成16SrDNA的过程，所需要的条件或物质有_______。
①DNA ②脱氧核苷酸 ③逆转录酶 ④核糖核苷酸 ⑤蛋白质
(5)判断解磷菌的种属，可以通过16SrDNA序列分析和菌落的特性两种方法进行，比较这
两种方法的优劣___________________。
【答案】(1)A
(2)D
(3)②
(4)②③
(5)16SrDNA序列分析是对细菌拟核外的DNA片段进行分析，从遗传进化的角度和分子水
平进行细菌分类鉴定，从而使细菌分类更科学、更精确；但该技术操作复杂，成本高。
根据菌落的特性判断解磷菌的种属操作简便，成本低；但只适于菌落特征差别较大的菌种
判断，对于菌落特征相似的，容易判断错误，不精确。
【解析】
【分析】
实验室中微生物筛选的原理是人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH
等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培
养基，称为选择培养基。
微生物培养中无菌技术非常重要，对培养基灭菌常采用的方法是髙压蒸汽灭菌法，对培养
皿进行灭菌采用的方法是干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法。微生物培养常用的接种方法有稀
释涂布平板法和平板划线法。
(1)
分析题图可知，A培养基是选择培养基，可增加解磷菌的数量，而解磷菌是异养菌，故其
碳源最好用葡萄糖。
(2)操作Ⅱ过程为接种过程，其采用的方法是平板划线法，为防止杂菌污染，需要对玻璃刮铲
进行灭菌。
(3)
由题意可知，解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周围会出现透明圈，透明圈越大，说明其
分解磷的能力越强，C培养基中②的透明圈最大，该菌分解磷的能力最强。
(4)
由题意可知，由16S-rRNA合成16SrDNA的过程为逆转录过程，其条件为逆转录酶、四种
游离的脱氧核苷酸、模板16S-rRNA等，故选②③。
(5)
16SrDNA序列分析是利用分子技术进行判断，而利用菌落的特性判断，则是通过观察法进
行判断。因此，二者相比，16SrDNA序列分析是对细菌拟核外的DNA片段进行分析，从
遗传进化的角度和分子水平进行细菌分类鉴定，从而使细菌分类更科学、更精确；但该技
术操作复杂，成本高。根据菌落的特性判断解磷菌的种属操作简便，成本低；但只适于菌
落特征差别较大的菌种判断，对于菌落特征相似的，容易判断错误，不精确。
【点睛】
本题主要考査微生物的纯化，要求学生熟记基础知识，通过分析综合能确定关键信息，并
能将信息与知识点对应起来，结合题意正确解答。
