文档内容
第 16 讲 发酵工程
目录
01 题型突破练
【题型一】果酒果醋的制作
【题型二】微生物的培养及计数
【题型三】发酵工程及应用
02 重难创新练
03 真题实战练
题型一 果酒果醋的制作
1．[新考法]面包发酵中使用的“啤酒花种”，其适宜的酸碱度在pH3.8～4.0，温度为27～28℃。下列说
法错误的是（ ）
A．酵母菌的大量繁殖，须渗透压、酸碱度、温度等培养条件适宜
B．单细胞生物直接从环境中获取所需的养料和O，排出代谢废物
2
C．面包发酵过程中，如果加盐不足，会导酵母菌吸水涨破而死亡
D．不同层次生命系统的代谢活动都需要类似于内环境稳态的特性
【答案】C
【解析】渗透压、酸碱度、温度等培养条件适宜，酵母菌才能大量繁殖，A正确；单细胞生物没有内环境，
直接从环境中获取所需的养料和O，排出代谢废物，B正确；酵母菌具有细胞壁，不会吸水涨破而死亡，C
2
错误；内环境稳态是机体进行正常生命活动的必要条件，不同层次生命系统的代谢活动都需要类似于内环
境稳态的特性，D正确。
2．[改编题]在小镇集市上，摆满了各种传统发酵食品。色泽诱人的果酒散发着醉人的香气，果醋透着淡淡
的果香与醋酸味。还有腐乳散发着独特的酱香，泡菜则有着清爽的酸辣口感。这些都是传统发酵技术的成
果，下列叙述正确的是（ ）
A．制作腐乳时，让豆腐长“毛”，这些毛状的原核生物主要是毛霉
B．泡菜腌制过程中，随着发酵时间的延长，亚硝酸盐含量越来越高
C．传统发酵以混合菌种的液体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的
D．家庭制作的果酒、果醋、泡菜三种产物发酵后期均为酸性环境【答案】D
【解析】毛霉是真核生物，A错误；泡菜腌制过程中，随着发酵时间的延长，亚硝酸盐含量先升高后降低，
B错误；传统发酵以混合菌种的固体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的，C错误；果酒发酵会产生二氧化
碳，二氧化碳溶于水形成碳酸，果醋发酵产物是醋酸，泡菜发酵产生乳酸，因此家庭制作的果酒、果醋、
泡菜三种产物发酵后期均为酸性环境，D正确。
3．[经典题]制作腐乳、泡菜、米酒、果醋的过程都离不开微生物发酵。下列叙述正确的是（ ）
A．腐乳制作所需要的适宜温度最高
B．泡菜制作过程中，酵母菌可将葡萄糖分解成醋酸
C．米酒制作过程中，将容器密封可促进酵母菌增殖
D．在缺少糖源时，乙醇可作为醋酸发酵的底物
【答案】D
【解析】腐乳制作温度15~18℃，泡菜制作温度30℃左右，米酒制作温度18~30℃，果醋制作温度
30~35℃，果醋制作所需要的适宜温度最高，A错误；泡菜制作过程中，主要是乳酸菌将葡萄糖分解形成乳
酸，B错误；
酵母菌在有氧条件下可以大量繁殖，在密封条件即无氧条件下产生酒精，C错误；在氧气充足、缺少糖源
时，乙醇可作为醋酸发酵的底物，醋酸菌能将乙醇转化为乙醛再转化为乙酸，D正确。
4．[新情境]古坛发酵技术是把水混合在传统古坛原料中发酵，使其发酵产生醇香可口的生酒，传统的中国
古坛发酵技术已经有千年历史。其步骤是：先将糯米折软（煮熟），经冷却后，把米投入桶中，加水混合，
然后将混合好的配制物导入上面置有圆形簸箕的古坛中，坛内围绕配制物做出圆形土包，使发酵物均匀混
合，加入酒曲，然后分别盖上木板和草毯，以保持温度，经过一段时间，发酵物在古坛中就会发酵成酒。
下列关于古坛发酵技术，说法不正确的是（ ）
A．该过程中使用的糯米中含有淀粉，可以为发酵微生物提供碳源和能源
B．酒曲中含有酿酒所需要的酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生CO
2
C．盖上木板和草毯要保持无氧状态，无氧时间越长，酒精产量越高
D．将糯米折软（煮熟），经冷却后再使用，是为了避免杀死酿酒微生物
【答案】C
【解析】古坛发酵技术使用的糯米中含有淀粉，糖类可以为发酵微生物提供碳源，其分解可释放能量，可
作为能源物质，A正确；酒曲中含有酿酒所需要的酵母菌，酵母菌无氧呼吸产生酒精和CO，B正确；
2
盖上木板和草毯是要保持无氧状态，酒精产量随发酵时间延长，先增加随后不变，C错误；将糯米折软
（煮熟），经冷却后再使用，是为了避免高温杀死酿酒微生物，D正确。
5．[新情境]我国利用不同微生物的发酵作用制作食品，历史悠久，在多种文献中均有记载：①《齐民要术》中记载：“做盐水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。”②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，
竹叶五片，隔水煮开，乘热灌封坛口。”③《齐民要术》中记载了二十三种利用谷物酿制食醋的工艺。其
经历的主要发酵过程为：糖化→酒化→醋化。④《本草纲目拾遗》中记载：“豆腐又名菽乳，豆腐腌过酒
糟或酱制者，味咸甘心。”下列叙述错误的是（ ）
A．①中描述的是有关泡菜制作的内容，所用微生物是乳酸菌
B．②中描述的是储存酒的方法，其中所用灭菌方法是高压蒸汽灭菌法
C．③中的“酒化”需要密封且间隔排气，“醋化”需要通气且适宜温度高于“酒化”
D．④中描述的是有关腐乳制作的内容，腐乳制作需要多种微生物参与
【答案】B
【解析】根据①中的描述有“盐水、洗菜”等信息可知，所描述的是有关泡菜制作的内容，制作泡菜所用
的菌种是乳酸菌，A正确；根据②中的描述有“隔水煮开”可知，该方法属于煮沸消毒法，而不是高压蒸
汽灭菌法，B错误；③中的“酒化”即酒精发酵，酒精发酵需要密封且间隔排气，“醋化”即醋酸发酵，
醋酸发酵所需的菌种是好氧醋酸菌，所以醋酸发酵要通气，醋酸发酵的适宜温度高于酒精发酵的适宜温度，
C正确；④中描述的是有关腐乳制作的内容，制作腐乳需要多种微生物参与，其中主要的菌种是毛霉，D正
确。
题型二 微生物的培养及计数
6．[新情境]甲拌磷(3911)是高毒类有机磷农药，在土壤 中存活可达50天左右，我国已禁止在水果蔬菜上
使用。如图是从土壤中筛选甲拌磷降解 菌XT 的过程，有关说法错误的是（ ）
₂
A．图中的选择培养基灭菌方法应为湿热灭菌法
B．在稀释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未接种的培养基共同培养在恒温箱中，12 h 和24
h 后分别进行观察
C．最终筛选出的 XT 菌若要长期保存，可以接种在固体斜面培养基上4℃保藏
₂
D．若用图中的接种方法进行计数，则计菌数的结果比实际值偏小
【答案】C
【解析】培养基灭菌应为高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法），A正确；为检验培养基灭菌是否合格，可在稀
释样品接种的培养基培养的同时，需和一个未接种的共同培养在恒温箱中，12h和24h后分别进行观察，B正确；若需将获得的菌种长期保存，可与甘油充分混匀后，放在-20℃的冰箱中保存，C错误；图示接种方
法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个菌体连在一起形成一个菌落时，会计数成一个菌体，所以该种方
法统计的菌体数量比实际值偏小，D正确。
7．如图表示从土壤中分离出分解石油微生物的实验操作过程：在某地土壤取样后，经过多次稀释，将稀
释液接种到培养基上，并将其置于一定条件下培养，培养结果如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．图中的土壤样本应选自常被石油污染的土壤
B．该实验所用的培养基应以石油为唯一碳源
C．每克土壤中大约含有8.0×109个尿素分解菌
D．锥形瓶中应加入90mL无菌水，5支试管中均加入9mL无菌水
【答案】C
【解析】要筛选出分解石油的微生物，所选土壤应来自常被石油污染的土壤，A正确；要筛选出分解石油
的微生物，所用的培养基应以石油为唯一碳源，该培养基为选择培养基，B正确；图中共稀释106倍，所以
每克土壤中大约含（80+75+85）÷3÷0.1×106=8.0×108个石油分解菌，C错误；由于稀释梯度为10倍，
所以锥形瓶中应加入10g土样和90ml无菌水，试管中加入1ml土样稀释溶液和9ml无菌水，D正确。
8．[经典题]某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗药性形成与环境的关系，先将原始菌种接种到1号
培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使绒布上的菌落按照原
位接种到2号和3号培养基上。待3号上长出菌落后，在2号上找到对应的菌落，然后接种到不含链霉素
的4号培养液中，培养后再接种到5号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所示。下列相关叙述错
误的是（ ）A．从2号培养基中挑选菌落进行培养，其子代仍具有链霉素抗性，说明该抗性的产生是发生在与链霉
素接触之前
B．在操作规范的情况下，5号培养基中观察到的菌落数可能小于涂布时从4号试管中吸取的菌液中的
活菌数量
C．上述操作中重复实验的目的是进一步纯化大肠杆菌抗链霉素菌株及增大目的菌株的浓度
D．该实验最关键的设计思路是进行了对照实验设计，最终得到抗链霉素菌株是因为接触了链霉素
【答案】D
【解析】大肠杆菌抗链霉素的性状是由基因突变引起的，该突变发生在与链霉素接触之前，链霉素是对其
起选择作用，因此从2号培养基中挑选菌落进行培养，其子代仍具有链霉素抗性，说明该抗性的产生是发
生在与链霉素接触之前，A正确；采用稀释涂布平板法将菌种接种在5号培养基上，由于两个或多个细菌
可能会形成一个菌落，在操作规范的情况下，5中观察到的菌落数可能小于涂布时从4号试管中吸取的菌
液中的活菌数量，B正确；上述操作中重复实验的目的是进一步纯化大肠杆菌抗链霉素菌株及增大目的菌
株的浓度，C正确；该实验最关键的设计思路是进行了对照实验设计，无链霉素的培养基为对照组。抗链
霉素菌株的产生是发生在与链霉素接触之前，链霉素只是对其起选择作用，D错误。
9．[新情境]植物饲料中含有难溶的植酸钙（植物有机酸与钙结合形成的化合物，可用（ 表
示）等物质，这些物质很难被动物吸收利用。从作物根部土壤中分离出的产植酸酶菌株能够分解植酸钙，
从而生成动物可吸收利用的磷酸盐，进而提高营养物质的利用效率。下列叙述错误的是（ ）
A．根据细菌的分布情况，取样时一般应去除作物根部表层土壤
B．进行选择性培养时所用的培养基应以植酸钙为唯一碳源
C．一般采用平板划线法对产植酸酶菌株进行计数
D．适于计数的平板菌落数一般为30～300
【答案】C【解析】作物根部表层土壤细菌种类繁多，可能干扰产植酸酶菌株的分离，根据细菌分布情况，取样时去
除作物根部表层土壤，有利于获取目标菌株，A正确；进行选择性培养，目的是筛选出能分解植酸钙的产
植酸酶菌株，以植酸钙为唯一碳源，只有能分解植酸钙获取碳源的菌株才能生存，可达到筛选目的，B正
确；平板划线法不能用于准确计数，一般用于分离纯化菌种，对产植酸酶菌株进行计数通常采用稀释涂布
平板法，C错误；在稀释涂布平板法中，适于计数的平板菌落数一般为30 - 300，这样能保证计数相对准
确，D正确。
10．[新情境]虾酱是一种传统的发酵食品，其味美鲜香，富含多种营养成分。制作虾酱时需将虾打成虾浆，
向虾浆中加入米曲霉（多细胞真菌，可合成蛋白酶）、活性干酵母等混合菌种发酵制成。下列叙述错误的
是（ ）
A．可采用血细胞计数板测定发酵液中米曲霉的数量
B．米曲霉纯培养时，配置好的培养基可用高压蒸汽灭菌的方法灭菌
C．酵母菌纯培养时，待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板
D．混合菌种分泌的蛋白酶能水解虾浆中的蛋白质，使虾酱味道鲜美且易消化吸收
【答案】A
【解析】血细胞计数板比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数，米曲霉属于
多细胞真菌，不适合用血细胞计数板计数，A错误；米曲霉纯培养时，配置好的培养基可用湿热灭菌，其
中高压蒸汽灭菌的效果最好，B正确；纯培养时，待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，
C正确；原料中的蛋白质会被混合菌种分泌的蛋白酶水解成小分子的肽和氨基酸，使虾酱味道鲜美且易消
化吸收，D正确。
题型三 发酵工程及应用
11．[新情境]圆红冬孢酵母是酵母菌的一种，在适当条件下可积累超过菌体干重70%的脂肪。下列叙述正确
的是（ ）
A．圆红冬孢酵母属于原核生物，细胞内没有染色体和核膜包被的细胞核
B．检测酵母菌的呼吸产物酒精时，溴麝香草酚蓝溶液会由蓝变绿再变黄
C．可以通过发酵工程获得大量的圆红冬孢酵母，从而大规模生产脂肪
D．脂肪是由三分子脂肪酸与一分子甘油发生反应形成的生物大分子
【答案】C
【解析】圆红冬孢酵母是酵母菌的一种，属于真核生物，细胞内有染色体和核膜包被的细胞核，A错误；
酵母菌无氧呼吸产生的酒精可用重铬酸钾鉴定，由橙色变成灰绿色，CO 可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿
2
再变黄，B错误；圆红冬孢酵母在适当条件下可积累超过菌体干重70%的脂肪，通过发酵工程可获得大量的圆红冬孢酵母，从而大规模生产脂肪，C正确；脂肪又称甘油三酯，是由一分子甘油与三分子脂肪酸发生
反应而形成的酯，不属于生物大分子，D错误。
12．从传统的发酵技术生产食品，到现代工业化生产药物等，大多数利用了微生物发酵的原理。下列关于
发酵工程的相关叙述，错误的是（ ）
A．发酵的产品是微生物的代谢产物或者是微生物细胞本身
B．青贮饲料中添加乳酸菌可以使饲料保鲜并提高动物的免疫力
C．利用微生物发酵产物可以增加食品营养，还可以作为防腐剂延长食品保质期
D．在工业化生产青霉素时，需要将培养基调至中性或者弱碱性，并采用深层通气技术
【答案】D
【解析】发酵是指在适宜条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程，这里人类所
需要的产物包括微生物的代谢产物或者是微生物细胞本身，A正确；青贮饲料中添加乳酸菌，通过乳酸菌
的发酵过程可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力，B正确；利用微生物发酵产
物可以增加食品营养，如可以作为增色剂，还可以作为防腐剂延长食品保质期，C正确；在工业化生产青
霉素时，需要将培养基调至酸性，由于青霉菌为好氧微生物，因而需要采用深层通气技术，D错误。
13．发酵工程在农牧业、食品工业等方面均有广泛的应用。下列关于发酵工程的叙述，错误的是（ ）
A．发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单一
B．可采用过滤、沉淀的方法将酵母菌从培养液中分离出来
C．检测啤酒酿造过程中活体酵母菌的密度时，可采用稀释涂布平板法
D．向发酵液中加入一定量的酸性重铬酸钾溶液可以检测是否产生酒精
【答案】D
【解析】发酵工程一般是利用单一菌种进行发酵，传统发酵技术利用的微生物往往不是单一菌种，比如酿
酒过程中除了酵母菌，可能还有其他微生物参与，所以发酵工程与传统发酵技术的主要区别是菌种是否单
一，A正确；酵母菌是单细胞微生物，可采用过滤、沉淀等方法将酵母菌从培养液中分离出来，B正确；
检测啤酒酿造过程中活体酵母菌的密度常用的是稀释涂布平板法或血细胞计数板计数法等，C正确；酸性
重铬酸钾溶液对发酵液有影响，检测酒精应从产物中进行检测，而不是将酸性重铬酸钾溶液加入发酵液中，
D错误。
14．[改编题]啤酒主要以麦芽、水、啤酒花为原料，经酵母菌酒精发酵而来，具体生产流程如图。下列叙
述错误的是（ ）A．啤酒发酵过程中大部分糖的分解和代谢物的生成都在后发酵阶段完成
B．“精酿”啤酒发酵时间长，没有进行过滤和消毒处理，因此保质期较短
C．糖化主要是将麦芽中的淀粉分解，碾磨有利于淀粉酶与淀粉充分接触
D．为防止接种时酵母菌被杀死，应在麦汁冷却后再加入啤酒酵母发酵
【答案】A
【解析】在啤酒发酵过程中，大部分糖的分解和代谢物的生成主要是在主发酵阶段完成的，而不是后发酵
阶段。主发酵阶段，酵母菌在有氧条件下大量繁殖，然后在无氧条件下将糖类转化为酒精和二氧化碳等代
谢产物；后发酵阶段主要是使啤酒的风味成熟、澄清度提高等，进一步完成残糖的发酵等过程，A错误；
“精酿”啤酒发酵时间长，并且没有进行过滤和消毒处理，这使得其中可能含有一些微生物等物质，容易
导致啤酒变质，所以保质期较短，B正确；糖化的主要目的是将麦芽中的淀粉分解为可发酵性糖等物质。
碾磨可以使麦芽颗粒变小，增大淀粉与淀粉酶的接触面积，有利于淀粉酶与淀粉充分接触，从而提高糖化
效率，C正确；酵母菌在高温下可能会被杀死，麦汁在蒸煮后温度较高，直接接种酵母菌会导致酵母菌死
亡，所以应在麦汁冷却后再加入啤酒酵母进行发酵，D正确。
15．发酵工程广泛应用于农牧业，图为通过发酵工程培养放线菌生产井冈霉素作为微生物农药的流程图。
下列相关叙述错误的是（ ）
A．①可通过基因工程育种和诱变育种选育高产放线菌菌种
B．③可以用干热灭菌箱对培养基进行灭菌处理防止杂菌污染
C．④主要用提取、分离和纯化等方法将井冈霉素分离和干燥
D．可用高通量筛选技术对诱变处理的放线菌菌种进行筛选
【答案】B
【解析】在发酵工程中，为了提高产物的产量，常常需要对菌种进行改良。基因工程育种和诱变育种是两种常用的育种方法。基因工程育种可以通过定向改造菌种的遗传物质，使其具有高产、抗逆等优良性状。
诱变育种则是利用物理、化学等因素诱导菌种发生基因突变，从中筛选出高产突变体，A正确；常用湿热
灭菌法（高压蒸汽灭菌锅）对培养基进行灭菌，B错误；井冈霉素为代谢产物，主要通过提取、分离、纯
化等方法获得，C正确；高通量筛选技术是一种高效的筛选方法，可以在短时间内对大量的样品进行筛选。
在发酵工程中，高通量筛选技术可以用于对诱变处理的放线菌菌种进行筛选，从中快速筛选出高产井冈霉
素的突变体，D正确。
1．（2025·全国·一模）在造纸工业中，传统的化学制浆方法会产生大量含有木质素的废水，并且化学
处理过程对环境有一定的污染。漆酶能够选择性地降解木质素，也能催化水溶蓝（一种有机物，溶于水后
溶液呈现蓝色）分解成HO和CO。科研人员为了分离出高效降解木质素的菌株（含有漆酶），先后使用两
2 2
种培养基，即以木质素为唯一碳源的培养基（甲）、在培养基甲的基础上添加水溶蓝的培养基（乙），使
用的接种工具为接种环。下列相关叙述错误的是（ ）
A．在造纸工业中，引入漆酶可以降低化学药剂的使用量
B．在培养基乙上生长的单菌落周围会出现大小不等的蓝色环带
C．进行接种操作时，接种工具使用前后都要进行灼烧灭菌
D．若不使用培养基甲，则获得的目的菌不一定能产生漆酶
【答案】B
【解析】在造纸工业中，传统的化学制浆方法会产生大量含有木质素的废水，并且化学处理过程会使用大
量化学药剂，引入漆酶可以选择性地降解木质素，从而降低化学药剂的使用量，A正确；高效降解木质素
的菌株(含有漆酶)能催化水溶蓝降解，因此在培养基乙上生长的单菌落周围会出现大小不等的无色透明圈，
B错误；实验过程中，接种环使用前后都要进行灼烧灭菌，C正确；由于水溶蓝是含碳有机物，培养基乙中
木质素不是唯一碳源，因此获得的目的菌不一定能产生漆酶，D正确。
2．（2025·浙江·二模）为了筛选能平衡肠道菌群和降解胆固醇的乳酸菌，下列叙述正确的是（
）
A．可从酸奶和泡菜中采样分离乳酸菌
B．以胆固醇为唯一N 源的培养基进行筛选
C．平板倒置培养创造无氧环境D．无需检测目的菌株的抗生素敏感性
【答案】A
【解析】筛选目的菌时应从富含目的菌的环境中去取样，酸奶和泡菜中富含乳酸菌，可以从中采样进行分
离纯化，A正确；胆固醇不含N，不能提供氮源，B错误；平板倒置培养是为了防止培养皿皿盖上的水珠落
入培养基造成污染，不是创造无氧环境，C错误；筛选目的菌株的时候一般需要用到抗生素，且筛选的乳
酸菌是用于平衡肠道菌群和降解胆固醇，需要了解其对抗生素的敏感性，D错误。
3．（2025·安徽马鞍山·一模）科研人员利用微生物发酵技术来生产γ-CGT酶。将发酵液的相对溶氧量
（DO）控制在恒定的20%、40%、60%，每隔一段时间检测菌体干重和γ-CGT酶产量，结果如下图所示。下
列叙述正确的是（ ）
A．在实验前常采用干热灭菌法对操作器具和培养基进行灭菌
B．欲提高γ-CGT酶产量，相对溶氧量应控制在恒定的60%
C．DO值控制在恒定的20%、40%时，该微生物在一定时间内种群数量呈“S”形增长
D．实验中种群数量达K值后，限制种群数量不再增加的主要是非密度制约因素
【答案】C
【解析】干热灭菌法适用于耐高温且不易变质的物品（如玻璃器皿），但培养基通常采用高压蒸汽灭菌法
（湿热灭菌法），A错误；根据实验结果图，γ-CGT酶产量在相对溶氧量为40%时达到最高，而不是60%。
因此，60%并不是最佳溶氧量，B错误；根据实验结果图，菌体干重（反映种群数量）在20%和40%的溶氧
量下随时间增长呈现“S”形曲线，C正确；种群数量达到K值（环境容纳量）后，限制种群数量增加的主
要是密度制约因素（如营养竞争、代谢废物积累等)，D错误。
4．（2025·云南昆明·一模）某除草剂（含氮有机物）不易被降解，且长期使用会导致土壤污染。为修
复被该除草剂污染的土壤，科研人员按照下图程序选育能降解该除草剂的细菌，已知含该除草剂的培养基
不透明。下列叙述错误的是（ ）A．从长期施用该除草剂的农田中获取土壤样品有利于获得目的菌
B．完成Ⅰ的操作，接种环至少需进行6次灼烧灭菌
C．Ⅱ过程的培养基上生长的微生物都是以该除草剂作为氮源的微生物
D．Ⅱ中透明圈直径/菌落直径的比值越大，菌落中菌株降解除草剂的能力越强
【答案】C
【解析】实验目的是选育能降解该除草剂的细菌，长期施用该除草剂的农田土壤中含有更多能降解该除草
剂的细菌，A正确；结合图示可知，操作Ⅰ共划线五次，第一次划线前灼烧灭菌一次，每一次划线后灼烧
灭菌一次，因此共灼烧灭菌6次，B正确；某除草剂为含氮有机物，为筛选能降解该除草剂的微生物，培
养基中应该以该除草剂为唯一的氮源，能降解除草剂的微生物形成的菌落会有透明圈，故Ⅱ过程的培养基
上生长的微生物并非都是以该除草剂作为氮源的微生物，C错误；能降解除草剂的微生物形成的菌落会有
透明圈，透明圈直径/菌落直径的比值越大，菌落中菌株降解除草剂的能力越强，D正确。
5．（2025·江苏·一模）如图是老陈醋的生产流程，下列相关叙述正确的是（ ）
A．蒸熟的高粱米应先加入大曲再冷却
B．“糖化”是将高粱中的淀粉等大分子氧化分解为小分子，为酒精发酵提供原料
C．“醋醅”中含有的醋酸菌，是一种异养的单细胞真核生物
D．“醋酸发酵”步骤中每天翻料两次，可为醋酸菌提供更多氧气
【答案】D
【解析】高粱蒸熟后温度较高，不冷却直接投入发酵菌种会造成菌种大量死亡，影响发酵效率，应先冷却
再加入大曲，A错误；糖化是将淀粉等大分子物质通过水解酶的作用转化为可发酵的小分子糖（如葡萄
糖），而不是氧化分解，B错误；醋酸菌是细菌，是一种异养的单细胞原核生物，C错误；醋酸发酵需要氧
气，所以每天翻料两次，可为醋酸菌提供更多氧气，D正确。
6．（2025·陕西渭南·一模）与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列叙述正确的是（ ）
A．果酒和果醋制作过程中应将温度分别控制在18-30℃、30-35℃
B．配制好的培养基转移到锥形瓶中，再放入干热灭菌箱中进行灭菌
C．为防止倒平板时培养基溅到培养皿盖上，须将培养皿盖完全打开
D．若产品是谷氨酸，发酵过程中应控制pH值为酸性
【答案】A
【解析】酵母菌生长繁殖的最适温度为18-30℃，因此果酒发酵的温度宜控制在18-30℃。制作果醋利用的
菌种是醋酸菌，多数醋酸菌生长的最适温度为30-35℃，A正确；培养基不宜采用干热灭菌法灭菌。应当将
配置好的培养基转移到锥形瓶中，再放入高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌，B错误；倒平板时，将培养皿打
开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿，C错误；若产品是谷氨酸，发酵过程中应控制pH值为中
性和弱碱性条件，酸性条件容易形成N-乙酰谷氨酰胺，D错误。
7．（2025·新疆·一模）刚果红可与纤维素形成红色复合物，某同学以纤维素为唯一碳源制作的培养基
中添加了刚果红，然后用如右图的方法进行接种纤维素分解菌，下列说法正确的是（ ）
A．该接种方法既能分离提纯微生物，还能对微生物进行计数
B．从用途的角度分，该培养基既是选择培养基，又是鉴别培养基
C．该过程中需对接种环进行灼烧灭菌，且灭菌次数为4次
D．划线区域形成的菌落周围显红色，且红色区域直径越大，说明纤维素分解菌的分解能力越强
【答案】B
【解析】该接种方法为平板划线法，不能对微生物进行计数，A 错误；从用途的角度分，该培养基既是选
择培养基，可以起到选择作用，又因为加入了刚果红试剂，又是鉴别培养基，B 正确；该过程中需对接种
环进行灼烧灭菌，但灭菌次数为 5 次，C错误；纤维素分解菌将纤维素分解掉了，该区域刚果红不能与纤
维素形成红色复合物，故划线区域形成的菌落周围显白色，不是红色，D 错误。
8．（2025·辽宁沈阳·一模）白果具有抗肿瘤功效，但所含某种物质易诱发呕吐。酿造白果醋的过程中
添加米曲霉可降解该物质，实现白果资源的高效利用，工艺流程如下图。下列叙述错误的是（ ）A．冷却的目的是防止高温杀死米曲霉
B．菌种a、b分别为酵母菌、醋酸菌
C．上述过程中持续通气有利于发酵生产
D．接种菌种b后，应适当升高发酵温度
【答案】C
【解析】蒸煮的目的有利于灭菌和糖化，冷却的目的是防止高温杀死米曲霉，A正确；菌种a用于制备果
酒，是酵母菌，菌种b用于制备果醋，是醋酸菌，B正确；制备果酒过程中应先通气后密闭，通气有利于
酵母菌增殖，密闭有利于酵母菌酒精发酵，C错误；酒精发酵的最佳温度是在18℃~25℃，醋酸菌生长的最
佳温度是在30℃~35℃，因此接种菌种b后，应适当升高发酵温度，D正确。
9．（2025·辽宁沈阳·一模）为探究青霉素对某种细菌的选择作用，将菌液涂布在培养基平板上，①放
置不含青霉素的滤纸片，②③④放置含等量青霉素的滤纸片，培养结果如图。下列叙述错误的是（
）
A．可从图中b处挑取细菌重复上述操作
B．重复操作几次后，抑菌圈的直径逐渐减小
C．培养过程中细菌可能会出现多种变异
D．在青霉素的作用下，细菌耐药基因频率会发生定向改变
【答案】A
【解析】抑菌圈边缘上的细菌可能产生了抗药性，实验中需要从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌，接种到已
经灭菌的培养基上继续培养，重复实验中青霉素的选择作用步骤，记录每一代抑菌圈的直径，A错误；青
霉素对细菌起选择作用，随着培养次数增多，耐药菌的比例增大，因此在连续培养几代后，抑菌圈的平均
直径变小，B正确；变异具有随机性，所以培养过程中细菌可能会出现多种变异，C正确；细菌对青霉素具
有抗药性是因为青霉素对细菌的抗药性变异起了定向选择作用，细菌耐药基因频率会发生定向改变，D正
确。
10．（2025·江西·一模）微生物絮凝剂（MBF）是一类由微生物产生的代谢产物，可以使固体悬浮物聚
集凝固且下沉，从而达到除浊的效果。常规情况下，微生物产生的絮凝剂主要是粘多糖，可利用发酵工程
大量生产，下列有关说法错误的是（ ）A．将菌种接入发酵罐之前，需要对菌种进行扩大培养
B．发酵过程是发酵工程的中心环节，须严格控制发酵条件
C．发酵结束之后，采取适当的过滤、沉淀措施获得粘多糖
D．发酵工程还可用于生产微生物农药，主要是利用微生物或其代谢物来防治病虫害
【答案】C
【解析】将菌种接入发酵罐之前，需要对菌种进行扩大培养，以获得足够数量的微生物，从而可以加快后
续的发酵速度，A正确；发酵过程是发酵工程的中心环节，须严格控制发酵条件，发酵条件的改变会影响
发酵产物的含量甚至种类，B正确；发酵结束之后，对于菌体，可采取适当的过滤、沉淀措施获得。粘多
糖是一种代谢产物，应根据产物的性质采取适当的提纯、分离和纯化措施来获得产品，C错误；发酵工程
可用于生产微生物农药，与传统的化学农药不同，微生物农药利用微生物或其代谢物来防治病虫害，D正
确。
11．（2025·河北邯郸·一模）农杆菌是植物基因工程中常用到的一种细菌，下表为用来培养农杆菌的LB
培养基配方，下图是对培养的农杆菌进行菌落计数的过程。下列叙述错误的是（ ）
蛋白胨 10.0g
酵母浸粉 5.0g
NaCl 10.0g
蒸馏水 1L
配制完成后，将pH调至7.0
注：酵母浸粉以酵母为原料，经自溶、酶解、浓缩、干燥等工艺制成。
A．上述LB培养基为液体培养基，一般对细菌无选择作用
B．图中所用接种方法为稀释涂布平板法
C．蛋白胨和酵母浸粉可以给农杆菌提供碳源和氮源D．若b、c、d中菌落数分别为48、57、60，则a中农杆菌约为5.5×107个
【答案】D
【解析】培养基配方中无琼脂，为液体培养基，含蛋白胨和酵母浸粉等成分，故不是选择培养基，一般对
细菌无选择作用，A正确；图示菌落计数接种所用方法为稀释涂布平板法，B正确；蛋白胨和酵母浸粉可以
给农杆菌提供碳源和氮源，C正确；根据计算公式N=C/V×M，a中农杆菌密度约为55/1×106=5.5×107
个/mL，a中液体体积为100mL，a中农杆菌总数约为5.5×109个，D错误。
12．（2025·河南·一模）孝感米酒、山西陈醋、桂林腐乳、延边泡菜等都是运用我国传统发酵技术做出
的美味佳肴。下列叙述错误的是（ ）
A．制作孝感米酒时，需将煮熟的糯米冷却后再加酒曲
B．山西陈醋制作的全过程需要在严格密封的条件下完成
C．制作桂林腐乳的过程利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶
D．制作延边泡菜时，加入的陈泡菜水不需要进行煮沸灭菌
【答案】B
【解析】制作孝感米酒时，需将煮熟的糯米冷却后再加酒曲，可避免将菌种烫死，同时有利于防止杂菌污
染，A正确；制作山西陈醋，使用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧菌，在氧气充足的条件下才能进
行旺盛的生命活动，因此全过程需要在有氧的条件下完成，B错误；制作桂林腐乳，多种微生物参与了豆
腐的发酵，如毛霉、酵母、曲霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的
蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，味道鲜美，C正确；制作延边泡菜时，利用乳酸菌在无氧条件下将糖
分解为乳酸的原理，加入的陈泡菜水中含有乳酸菌，不需要进行煮沸灭菌，D正确。
1．（2025·浙江·高考真题）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是
（ ）
A．泡菜的风味由乳酸菌的种类决定
B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌
C．家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸
D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵【答案】A
【解析】泡菜的风味由原料、发酵菌种类、发酵环境等因素共同决定的，A错误；用果酒发酵制作果醋的
主要菌种是醋酸菌，醋酸菌是好氧型微生物，B正确；家庭酿制米酒主要用的是酵母菌，在酿制米酒的过
程中，首先让酵母菌在有氧的环境进行增殖，然后在无氧的环境中进行发酵，C正确；传统发酵食品所用
的是自然菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，D正确。
2．（2024·天津·高考真题）实验中常根据菌落外表特征鉴别微生物，进而对实验结果做出判断，下列
实验不是根据菌落外表特征做出判断的是（ ）
A．艾弗里证明肺炎链球菌的转化因子是DNA
B．判断分离酵母菌的固体培养基是否被毛霉污染
C．利用浸有抗生素的滤纸片筛选大肠杆菌中耐药性强的菌株
D．判断在尿素为唯一氮源的培养基上生长的尿素降解菌是否有不同种类
【答案】C
【解析】艾弗里将S型细菌的DNA、蛋白质、糖类等物质分离开，单独的、直接的观察它们各自的作用进
行对比，R型肺炎双球菌没有荚膜（菌落表面粗糙），S型肺炎双球菌有荚膜（菌落表面光滑），该实验是
通过观察培养基上形成的不同菌落特征，来判断转化是否成功的，A不符合题意;毛霉属于多细胞的真菌，
由细胞形成菌丝，可根据毛霉的形态判定固体培养基是否是被毛霉污染了，B不符合题意;抗生素可消灭细
菌，利用浸有抗生素的滤纸片筛选大肠杆菌中耐药性强的菌株是从抑菌圈边缘菌落挑取大肠杆菌来获得目
的菌株，没有依靠菌落外表形态特征做出判断，C符合题意;不同尿素降解菌降解尿素的能力不同，因此在
分离出的以尿素为唯一氮源的尿素降解菌后，若要验证其中是否有不同种类降解菌，可在以尿素为唯一氮
源的培养基中加入酚红指示剂，接种并培养初步筛选的菌种，若根据菌落周围出现红色环带的大小判定其
种类，D不符合题意。
3．（2024·天津·高考真题）胰岛素的研发走过了：动物提取—化学合成—重组胰岛素—生产胰岛素类
似物生产等历程。有关叙述错误的是（ ）
A．动物体内胰岛素由胰岛B细胞合成并胞吐出细胞
B．氨基酸是化学合成胰岛素的原料
C．用大肠杆菌和乳腺生物反应器生产胰岛素需相同的启动子
D．利用蛋白质工程可生产速效胰岛素等胰岛素类似物
【答案】C
【解析】胰岛素在动物体内由胰岛B细胞合成后，经过胞吐作用释放出细胞，A正确；胰岛素属于蛋白质
激素，所以化学合成胰岛素的原料是氨基酸，B正确；用大肠杆菌和乳腺生物反应器生产胰岛素不需要使用相同的启动子，因为两者属于不同的表达系统，大肠杆菌是原核生物表达系统，而乳腺生物反应器属于
真核生物表达系统，启动子要求不同，C错误；利用蛋白质工程技术可以对胰岛素进行改造，生成具有不
同作用特性的胰岛素类似物，包括速效胰岛素，D正确。
4．（2024·福建·高考真题）虾酱是以虾为原料的传统发酵食品。在乳酸菌、芽孢杆菌等多种微生物共
同作用下，原料中的蛋白质和脂肪发生水解，形成虾酱的特有风味。下列叙述错误的是（ ）
A．虾酱特有风味的形成受发酵时间的影响
B．传统虾酱的制作过程需要严格执行无菌操作
C．原料中的蛋白质会被水解成小分子的肽和氨基酸
D．虾酱发酵过程微生物种类和数量的分析有助于改良风味
【答案】B
【解析】虾酱是由微生物发酵形成的，虾酱特有风味的形成受发酵条件、发酵温度、发酵时间的影响，A
正确；传统虾酱的制作过程利用原料中带有的微生物进行发酵，不需要经过严格无菌操作，B错误；原料
中的蛋白质会被蛋白酶水解成小分子的肽和氨基酸，C正确；虾酱发酵由乳酸菌、芽孢杆菌等多种微生物
共同参与，虾酱发酵过程微生物种类和数量的分析有助于改良风味，D正确。
5．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和
时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别 培养条件 实验结果
① 基础培养基 无法生长
② 基础培养基+甲、乙、丙3种氨基酸 正常生长
③ 基础培养基+甲、乙2种氨基酸 无法生长
④ 基础培养基+甲、丙2种氨基酸 正常生长
⑤ 基础培养基+乙、丙2种氨基酸 正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
【答案】D
【解析】由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤
的对照组，A正确；由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，
说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有
该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙
种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，
说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。
6．（2024·江苏·高考真题）关于“利用乳酸菌发酵制作酸奶或泡菜”的实验，下列叙述正确的是（
）
A．制作泡菜的菜料不宜完全淹没在煮沸后冷却的盐水中
B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌
C．发酵装置需加满菜料或牛奶并封装，以抑制乳酸菌的无氧呼吸
D．控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质
【答案】D
【解析】制作泡菜是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，所以为制造无氧环境，制作泡菜的菜料要完全淹没在
煮沸后冷却的盐水，A错误；制作酸奶时，将牛奶倒入灭菌后的奶瓶中，倒入的奶液量不要超过奶瓶容积
的2/3，再将牛奶加热至90 ℃，保温5 min，或将牛奶置于80 ℃恒温水浴箱中 15 min。如果采用市售未
开封的鲜奶,可直接使用，不需要灭菌，B错误；发酵时菜料装至八成满，然后加盐水，以利于乳酸菌的无
氧呼吸，C错误；制作酸奶或泡菜时，控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质，D
正确。
7．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（
）
A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌
B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO 培养箱中进行培养
2
C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数
D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
【答案】C
【解析】酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A错误；将含有酵母菌的培养基放置在28℃恒温培
养箱中进行培养，B错误；稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培
养基表面生长的个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品
中大约含有多少活菌，由此可知，可用稀释涂布平板法对酵母菌计数，C正确；酵母菌是真核细胞，具有
高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D错误。
8．（2024·重庆·高考真题）养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH 产生的微生物。兴趣小组按
3 3
图进行实验获得目的菌株，正确的是（ ）
A．①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落
B．②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验
C．③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙
D．粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH 的减少
3
【答案】C
【解析】平板划线法无需稀释，A错误；由图可知，②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛
肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验，B错误；所筛选出的菌株之所以不能利用尿素，可能是
由于不产生脲酶或分泌脲酶抑制剂，所以③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙，C正确；由图
可知，甲不产生脲酶而乙可以产生脲酶，且乙同时分泌脲酶抑制剂，粪便中可能还含有其他能产生脲酶的
菌株使甲能够产生NH，所以粪便中添加菌株乙比甲更有利于NH 的减少，D错误。
3 3
9．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井
冈变种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列
关于JGs发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
B．JGs接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化
【答案】D
【解析】基因表达的产物是蛋白质，而井冈霉素是JGs发酵生产的一种氨基寡糖类抗生素，A错误；JGs接
入发酵罐前需要扩大培养，该过程会影响JGs的数量，进而影响井冈霉素的产量，B错误；在一定范围内
提高JGs发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量，但若浓度过大，反而会降低井冈霉素的
产量，C错误；JGs是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分，因此稀释涂布平板法不宜用于
监控JGs发酵过程中活细胞数量的变化，D正确。10．（2024·上海·高考真题）香蕉枯萎病的微生物防治：香蕉枯萎病对香蕉种植业极具破坏性，由土壤
中的尖孢镰刀菌感染香蕉植株所导致。现有菌株S可抑制尖孢镰刀菌，某研究小组拟利用微生物协同作用，
优化枯萎病生物防治方案，部分过程如下：
(1)【阶段一】将菌株S施于香蕉种植园的土壤中，并分析土壤微生物数量变化情况。若要筛选出土壤中与
菌株S有协同作用的有益菌，应选择施加菌株S后数量变化趋势是 （下降/上升/不变）的有益菌。
(2)【阶段二】筛选与菌株S有协同作用的有益菌。过程如图，其接菌液并培养后如表。
菌落编号 ① ② ③ ④
清晰区直径（cm） 0.8 0.5 1.2 0
Ⅰ~Ⅳ环节中，需无菌操作的是 ；在第 环节分离土壤中的各种菌；环节Ⅳ中需先涂布的菌株X
是 。
(3)为达到阶段二的目的，据表应优先选择的是菌落 。
【阶段三】利用筛选到的有益菌P，分析菌株之间的相互关系，形成表中所列方案。
点接菌液
预先涂布菌
培养基
株 实验组 实验组 实验组
1 2 3
固体培养
菌株X ？ ？ ？
基
(4)各实验组上接的菌液中应含有的菌株分别是：实验组1 ，实验组2 ，实验组3 ，其
中能说明菌株P对菌株S的作用的实验组是 。
【答案】(1)上升
(2) Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ Ⅱ、Ⅲ 尖孢镰刀菌
(3)③
(4) 菌株P 菌株S 菌株P和菌株S 实验组2和实验组3
【分析】分析题图，图中I是将土壤样品加入无菌水，制成稀释液，进行扩大培养，Ⅱ是将菌液接种于平
板，Ⅲ是选择优良菌种进行纯化，IV是进行鉴定选择菌株。
【解析】（1）如果该菌和菌株S有协同作用，则施加菌株S后，该菌数量会上升。故若要筛选出土壤中与菌株S存在协同作用的有益菌，应选择施加菌株S后数量上升的有益菌。
（2）实验室中培养微生物的关键是防止杂菌污染，获得纯净的培养物，故图中过程Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均在
实验室完成，均需要无菌操作，在点燃的酒精灯附近，避免杂菌污染；在环节Ⅱ、III中，将菌液涂布在
固体培养基表面即可分离到土壤中的各种菌；该实验的目的是选择出与菌株S有协同作用的有益菌，而菌
株S能抑制尖孢镰刀菌生长，所以为筛选出有益菌，则预先涂布的菌株X是尖孢镰刀菌。
（3）为达到阶段二的目的，据表应优先选择清晰区直径较大，对应③。
（4）为进一步分析菌株S和菌株P之间的相互关系，对照组只接种尖孢镰刀菌，实验组1只接种菌株P，
实验组2只接种菌株S，实验组3接种菌株P和菌株S，实验组1和实验组3均起到对照组的作用，其中能
说明菌株P对菌株S的作用的两个实验组是实验组2(只接种菌株S) 和实验组3(接种菌株P和菌株S)，通
过对比这两组平板上菌落周围的清晰区直径即可判断菌株P对菌株S的作用。
11．（2024·江西·高考真题）聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）是一种聚酯塑料，会造成环境污染。磷脂
酶可催化PET降解。为获得高产磷脂酶的微生物，研究人员试验了2种方法。回答下列问题：
(1)方法1从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯（一种磷脂类物质）为唯一碳源
制备 培养基，可提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有 、 、
等营养物质。
(2)方法2采用 技术定向改造现有微生物，以获得高产磷脂酶的微生物。除了编码磷脂酶的基因外，
该技术还需要 、 、 等“分子工具”。
(3)除了上述2种方法之外，还可以通过 技术非定向改造现有微生物，筛选获得能够高产磷脂酶的微
生物。
(4)将以上获得的微生物接种到鉴别培养基（在牛肉膏蛋白胨液体培养基中添加2%的琼脂粉和适量的卵黄
磷脂）平板上培养，可以通过观察卵黄磷脂水解圈的大小，初步判断微生物产磷脂酶的能力，但不能以水
解圈大小作为判断微生物产磷脂酶能力的唯一依据。从平板制作的角度分析，其原因可能是 。
【答案】(1) 选择 水 无机盐 氮源
(2) 基因工程（或转基因） 限制酶 DNA连接酶 载体（或质粒）
(3)诱变育种
(4)不同平板中培养基量的差异以及平板内和平板间培养基厚度不均匀
【分析】1、培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；
2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品
活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
【解析】（1）方法1从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯为唯一碳源制备选择培养基，在该培养基中只有能利用磷脂酰乙醇酯的微生物能生长，其他微生物的生长被抑制，进而获得筛
选出所需要的微生物，为了提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有水分、无机盐和
氮源等营养物质，同时还需要提供微生物生长所需要的外界环境条件。
（2）方法2采用基因工程技术定向改造现有微生物，以获得高产磷脂酶的微生物。除了编码磷脂酶的基因，
即目的基因外，该技术还需要限制酶、DNA连接酶和载体（或质粒）等“分子工具”，进而可以实现目的
基因表达载体的构建。
（3）除了上述2种方法之外，还可以通过诱变育种技术非定向改造现有微生物，筛选获得能够高产磷脂酶
的微生物，该该技术的原理是基因突变，由于基因突变具有不定向性，因而该技术具有盲目性。
（4）将以上获得的微生物接种到鉴别培养基（在牛肉膏蛋白胨液体培养基中添加2%的琼脂粉和适量的卵
黄磷脂）平板上培养，可以通过观察卵黄磷脂水解圈的大小，初步判断微生物产磷脂酶的能力，但不能以
水解圈大小作为判断微生物产磷脂酶能力的唯一依据。从平板制作的角度分析，即倒平板过程中没有经过
定量检测，且平板倒置的实际可能也会影响平板中培养基厚度的不同，因此不同平板中培养基量的差异以
及平板内培养基厚度不均匀以及平板间厚度不均匀都会影响实验结果的判断，因此可采用降解圈的直径和
菌落直径的比值作为判断依据。
12．（2024·北京·高考真题）啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用
于再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵
母菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。
(1)酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生 和CO。有氧培养时，酵母菌增殖速度
2
明显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量 。
(2)本实验中，采集是指取样并培养4天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图
甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是 。
(3)根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O 浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌
2
接触O 的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（HO）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知HO 能扩散进出
2 2 2 2 2
细胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度HO 的培养基上，无氧培养后
2 2得到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由 。
(4)上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A组菌液直接滴加到HO 溶液中，
2 2
无气泡产生；B组菌液有氧培养4天后，取与A组活菌数相同的菌液，滴加到HO 溶液中，出现明显气泡。
2 2
结果说明，酵母菌可通过产生 以抵抗HO 的伤害。
2 2
【答案】(1) 酒精/CHOH ATP
2 5
(2)无氧取样，无氧培养
(3)不能，因为没有“接触 O 后，酵母菌内源 HO 浓度上升”的证据
2 2 2
(4)过氧化氢酶/HO 酶
2 2
【解析】（1）酵母菌在密闭发酵罐中进行无氧呼吸，会产生酒精（CHOH）和CO。有氧培养时，酵母菌
2 5 2
进行有氧呼吸，有机物被彻底氧化分解，产生大量能量，而无氧呼吸中有机物不能彻底分解，只产生少量
能量，故有氧培养时酵母菌增殖速度明显快于无氧培养。
（2）由图甲结果可知，无氧/无氧条件下，菌落数最多，因此有利于保留占比很低菌种的采集条件是无
氧/无氧。
（3）依据图乙结果可知，随着HO 浓度的持续上升，酵母菌存活率下降（酵母菌受损程度加深），但不能
2 2
证明酵母菌接触O 的最初阶段，细胞产生的HO 浓度会持续上升，因为没有“接触 O 后，酵母菌内源
2 2 2 2
HO 浓度上升”的证据。
2 2
（4）过氧化氢酶能催化HO 分解出现明显气泡，因此实验结果说明，酵母菌可通过产生过氧化氢酶以抵抗
2 2
HO 的伤害。
2 2
