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考点12 细胞工程与胚胎工程
考点一 植物细胞工程
(一)植物细胞工程的基本技术
(二)植物细胞工程的应用
考点二 动物细胞工程
(一)动物细胞培养
(二)动物细胞融合技术与单克隆抗体
(三)动物体细胞核移植技术和克隆动物
考点三 胚胎工程
(一)胚胎工程的理论基础
(二)胚胎工程技术及其应用
考点一植物细胞工程
1.1 植物组织培养
1.理论基础
植物细胞的全能性。
2.植物组织培养的概念
在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜
的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。
3.操作流程
――→――→
(1)脱分化:让已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞,进而形
成愈伤组织的过程。
(2)再分化:愈伤组织在一定的培养条件下,分化出幼根和芽,进而形成完整小植株的过程。
4.植物激素在植物组织培养中的作用
生长素/细胞分裂素的比值
作用效果
比值高时
促进根分化,抑制芽形成
比值低时
促进芽分化,抑制根形成
比值适中
促进愈伤组织形成
1.2 植物体细胞杂交的过程
1
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①过程是原生质体的获取。常用方法是酶解法去除细胞壁,所用到的酶是纤维素酶和果胶酶。这样可
以获得具有活力的原生质体。
②过程是原生质体间的融合。该过程必须要借助一定的技术手段进行人工诱导。人工诱导的方法基本
分为两大类——物理法和化学法。物理法包括离心、振动、电激等,化学法一般用聚乙二醇(PEG)作为诱
导剂来诱导细胞融合。
③过程是杂种细胞形成。杂种细胞形成的标志是杂种细胞再生出细胞壁。在此过程中活跃的细胞器是
高尔基体。
④⑤过程是杂种植株的产生。通过植物组织培养的方法将杂种细胞培育成杂种植株。
2.植物体细胞杂交过程中的注意事项
(1)植物体细胞杂交的培养基中要添加蔗糖且浓度略大于植物细胞质浓度,目的是蔗糖不仅为原生质体
提供营养,而且还能维持一定的渗透压,使原生质体保持正常的形态。
(2)体细胞融合成功后培养基中共有5 种细胞类型(A、B、AA、BB、AB),其中融合细胞类型有3 种
(AA、BB、AB),而真正符合要求的是AB,因此要对融合细胞进行筛选。
(3)体细胞杂交过程中涉及的遗传知识:
①从生殖类型上看,植物体细胞杂交技术没有生殖细胞的形成和结合,应属于无性生殖,变异类型应
是染色体数目的变异,但由于含有两个亲本的遗传物质,因此具有两个亲本的遗传性状。
②体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞,不管染色体、基因组还是染色体组都采用直接相加的方法。
若一植物细胞含有2x 条染色体,2 个染色体组,基因型为Aabb,另一植物细胞含有2y 条染色体,2 个染
色体组,基因型为ccDd,则新植株应为异源四倍体,其体细胞中染色体为(2x+2y)条,4 个染色体组,基
因型为AabbccDd。
③培育新品种的过程中,遗传物质的传递不遵循孟德尔的遗传定律,只有在有性生殖进行减数分裂过
程中才符合遗传定律,而体细胞杂交没有此过程。
考点二动物细胞工程
2.1 动物细胞培养
1.动物细胞培养过程分析
(1)过程:
(2)贴壁生长现象及接触抑制现象:
2
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①贴壁生长:动物细胞在液体培养基中悬浮生长一段时间之后,大部分细胞会贴附在培养瓶壁上生长。
②接触抑制:细胞进行有丝分裂,数目增加到表面相互接触时,停止分裂增殖,出现接触抑制现象。
(3)原代培养和传代培养:
①原代培养:动物组织消化后的初次培养。
②传代培养:原代培养过程中,贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶培养,让细胞
继续增殖。
(4)细胞株和细胞系:
①细胞株:传代培养的细胞能传到10~50 代,这样的传代细胞称为细胞株。
②细胞系:传代培养的细胞在传到50 代后,有部分细胞的遗传物质发生了改变,获得不死性,这种具
有癌变特点的细胞称为细胞系。
2.动物细胞培养与植物组织培养的比较
项目
植物组织培养
动物细胞培养
生物学原理
细胞全能性
细胞增殖
培养基性质
固体
液体
培养基成分
蔗糖、氨基酸、水、矿物质、生长
素、细胞分裂素、琼脂等
葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无
机盐、水、血清、血浆等
培养结果
新的植株或组织
细胞株或细胞系
应用
①快速繁殖
②培育无病毒植株
③细胞产物的工厂化生产
④制作人工种子
①生产病毒疫苗、干扰素、单克隆
抗体等
②检测有毒物质
③生理、病理、药理研究
培养条件
无菌、适宜的温度和pH
取材
植物器官、组织或细胞
动物早期胚胎、幼龄动物器官或组
织
培养对象
植物器官、组织或细胞
分散的单个细胞
过程
脱分化、再分化
原代培养、传代培养
细胞分裂、
生长、分化
特点
①分裂:形成愈伤组织
②分化:形成根、芽
①只分裂不分化
②贴壁生长
③接触抑制
2.2 动物体细胞核移植技术
1.核移植过程分析
3
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(1)为了确保核移植形成的克隆动物的遗传物质全部来自于有优良性状的动物提供的体细胞,在供体
细胞的细胞核移植到受体细胞内之前,必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏掉。
(2)细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性。而克隆动物的形成则利用了动物细胞核的全能性。
(3)细胞融合后构建重组胚胎,并移植到代孕母体内获得克隆动物,需要胚胎工程技术的支持。
2.克隆动物的遗传特点
(1)克隆动物的性状与细胞核供体生物的性状基本相同,但不完全相同,因为:
①克隆动物的细胞质遗传物质来自于受体卵母细胞的细胞质。
②生物的性状不仅与遗传物质有关,还受环境的影响。
(2)核移植过程中细胞核只来自于一个个体,因此核遗传物质与供体的相同,属于无性繁殖,不会改
变生物体的基因型。
2.3 动物细胞融合与单克隆抗体
1.细胞融合的过程分析
细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合,其中细胞膜融合是细胞融合的先导,在
细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动性。
2.单克隆抗体的制备过程
(1)
(2)解决思路:将B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞。
(3)制备过程:
4
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(4)单克隆抗体的特点:特异性强、灵敏度高,并可大量制备。
(5)单克隆抗体的应用:
①作为诊断试剂,具有准确、高效、简易、快速的优点。
②用于治疗疾病和运载药物。
3.血清抗体与单克隆抗体的比较
项目
产生
特点
血清抗体
由B 淋巴细胞分泌
一般从血清中分离,产量低、纯度低、特异性差
单克隆抗体
由杂交瘤细胞分泌
特异性强、灵敏度高,能大量制备
4.制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同
(1)第一次筛选是将未融合的B 淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及B—B 融合、瘤—瘤融合的细胞通过选择培
养基淘汰,筛选出杂交瘤细胞。
(2)第二次筛选是将产生特定抗体的B—瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从
体内取免疫过的B 淋巴细胞时会取出很多种,形成的杂交瘤细胞有很多种,所以需筛选出产生特定抗体的
杂交瘤细胞。
考点三 胚胎工程
3.1 早期胚胎培养
1.哺乳动物胚胎的培养液成分
无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分,以及血清等物质。
2.胚胎早期培养的目的
(1)精子和卵细胞在体外受精后,应将受精卵移入发育培养液中继续培养,以检查受精状况和受精卵的
发育能力。
(2)当胚胎发育到适宜的阶段时,进行受体移植或冷冻保存。
3.2 早期胚胎移植
1.胚胎移植成功的保障
第一,供、受体生殖器官的生理变化是相同的。
第二,哺乳动物的早期胚胎形成后,在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系,而是处于游离
状态,这就为胚胎的收集提供了可能。
第三,受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为胚胎在受体内的存活提供了可能。
第四,供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但移入受体的供体胚胎的遗传特性,在孕
育过程中不受任何影响。
3.3.胚胎移植的基本程序
1、
5
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↓
↓
↓
↓
↓
↓
↓
2.胚胎移植的意义
(1)加速育种工作和品种改良。
(2)大量节省购买种畜的费用。
(3)一胎多产。
(4)保存优良品种资源和濒危物种。
(5)可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。
3. 胚胎分割
(1)过程:
↓
在显微镜下切割胚胎或采用酶处理桑椹胚的细胞
↓
↓
(2)注意事项:
①对囊胚阶段胚胎进行分割时一定要均分内细胞团,若分割不均,会出现含内细胞团多的部分正常发
育的能力强,少的部分发育受阻或发育不良,甚至不能发育等问题。
②分割的份数越多,每一份的细胞数会越少,不但难以做到均等分割,而且作为囊胚期的胚胎内细胞
团的细胞所受的影响会越大。因此,分割的份数越多,技术难度会越大,移植后的恢复和发育的难度会越
大,移植成功率自然会降低。
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考点一 植物细胞工程
1.下图所示为利用玉米(2n=20)的幼苗芽尖细胞(基因型AaBb)进行实验的流程示意图。下列分析错误
的是( )
A.在正常情况下,植株甲的基因型是AaBb
B.植株丙是由花粉发育而来的单倍体,基因型可能有4 种
C.获得幼苗1 和2 的过程可体现出体细胞和生殖细胞的全能性
D.秋水仙素能抑制纺锤体的形成,则植株乙的体细胞可能都含有四个染色体组
【答案】D
【解析】
A、①过程为植物组织培养,基因型未发生改变,植株A 的基因型是AaBb,A 正确;
B、植株丙是由花粉发育而来的单倍体,基因型可能有AB、Ab、aB、ab,4 种,B 正确;
C、获得幼苗1 和2 的过程都需要进行植物组织培养,因而可体现出体细胞和生殖细胞的全能性,C 正确;
D、秋水仙素抑制纺锤体的形成,使植株乙含两个染色体组,D 错误;
2.下列关于生物变异的叙述,正确的是( )
A.基因型为Aa 的个体自交,因基因重组而导致子代性状分离
B.基因突变使DNA 序列发生的变化,都能引起生物性状变异
C.弱小且高度不育的单倍体植株,进行加倍处理后可用于育种
D.用普通小麦(六倍体)的花药离体培养获得的植株有三个染色体组,为三倍体植株
【答案】C
【解析】
A、基因型为Aa 的个体自交,因等位基因分离而导致子代性状分离,A 错误;
B、基因突变会导致DNA 的碱基序列发生改变,但由于密码子的简并性等原因,基因突变不一定会导致生
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物体性状发生改变,B 错误;
C、 弱小且高度不育的单倍体植株,用秋水仙素进行加倍处理后,使其染色体数目加倍,可用于育种,C
正确;
D、用普通小麦(六倍体)的花药离体培养获得的植株有三个染色体组,为单倍体植株 ,D 错误。
3.大麻(2n=20)为雌雄异株,性别决定为XY 型。待雄性植株长成后,用其花药进行离体培养,再用秋水
仙素处理幼苗得到了新的植株。下列有关新植株的叙述正确的一组是( )
①是单倍体 ②体细胞有2 个染色体组 ③不能形成可育的配子 ④能形成可育的配子 ⑤染色体组成为
18+XX 或18+XY ⑥染色体组成为18+XX 或18+YY ⑦一定是纯合子 ⑧可能是纯合子也有可能是杂合子
A.④⑤⑦⑧
B.②④⑥⑦
C.②③⑥⑧
D.①④⑤⑦
【答案】B
【解析】
①花药离体培养得到的新的植株是单倍体,再用秋水仙素处理幼苗得到了新的植株是二倍体,①错误;
②新的植株是二倍体,体细胞有2 个染色体组,②正确;
③④新的植株是二倍体,含有2 个染色体组,能形成可育的配子,③错误,④正确;
⑤⑥大麻(2n=20)为雌雄异株,雄株的染色体组成为18+XY,花药进行离体培养得到的单倍体为9+X 或者
9+Y,再用秋水仙素处理幼苗得到了新的植株,新植株的染色体组成为18+XX 或者18+YY,⑤错误,⑥正确;
⑦⑧大麻是二倍体,经花药进行离体培养,再用秋水仙素处理得到的新的植株一定是纯合子,⑦正确,⑧
错误。
综上所述,②④⑥⑦正确,B 正确,ACD 错误。
4.成功培养原生质体是植物体细胞杂交技术的基础。下列关于原生质体的叙述,错误的是( )
A.理论上原生质体具有全能性
B.原生质体的融合依赖于细胞膜的流动性
C.原生质体在适宜条件下能再生出细胞壁
D.原生质体包括细胞膜、液泡膜及这两层膜之间的细胞质
【答案】D
【解析】
A、原生质体是植物细胞去除细胞壁以后剩余的结构,含有本物种生长发育所需的全套遗传信息,理论上
原生质体具有全能性,A 正确;
B、原生质体的融合首先是细胞膜的融合,此过程依赖于细胞膜的流动性,B 正确;
C、原生质体在适宜条件下能再生出细胞壁,C 正确;
D、原生质层包括细胞膜、液泡膜及两者之间的物质,原生质体是植物细胞去除细胞壁以后剩余的结构,D
错误。
5. “白菜-甘蓝”的培养过程如图所示,下列有关说法错误的是( )
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A.杂种细胞与愈伤组织细胞中遗传物质相同
B.诱导原生质体的融合可用PEG 或灭活的病毒
C.获取原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理体细胞
D.愈伤组织形成白菜-甘蓝幼苗需添加一定量的植物激素
【答案】B
【解析】
A、愈伤组织细胞由杂种细胞脱分化而来,遗传物质未发生变化,A 正确;
B、诱导植物原生质体融合不能用灭活的病毒,B 错误;
C、原生质体是植物细胞去除细胞壁之后的结构,植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶,故可用纤维素
酶和果胶酶对白菜和甘蓝的体细胞进行去壁处理,C 正确;
D、再分化培养基需要加入一定量的生长素和细胞分裂素,D 正确。
6.如图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径,下列有关叙述,错误的是( )
A.需在无菌和人工控制的条件下进行
B.经过程①细胞的形态和结构发生了变化
C.该途径依据的原理是植物细胞具有全能性
D.紫杉醇是紫杉植物体内的一种次级代谢物
【答案】C
【解析】
A、该过程需要培养植物细胞和植物组织,需要在无菌和人工控制的条件下进行,A 正确;
B、①是由外植体脱分化得到愈伤组织的过程,细胞的形态和结构发生了变化,B 正确;
C、全能性是指细胞发育成个体的潜能,该过程中没有发育成个体,因此没有体现全能性,C 错误;
D、紫杉醇是紫杉植物体内的一种次级代谢物,是发育到一定阶段合成的,对其植物自身无明显功能,D 正
确。
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7.下图表示玉米(2n=20)的花药离体培养及单倍体育种的大致过程。下列叙述错误的是( )
A.过程①是脱分化,形成的愈伤组织细胞处于未分化状态
B.过程②进行的是有丝分裂,植株A 是从试管苗中筛选出的可育二倍体
C.过程①和②均要使用生长素和细胞分裂素,但两种激素的比例不同
D.可用体积分数为70%的酒精对花药进行消毒处理
【答案】B
【解析】
A、过程①是脱分化过程,脱分化后的细胞的结构和功能都发生了明显改变,变为未分化状态,A 正确;
B、过程②是愈伤组织进行再分化的过程,植株A 是由花药离体培养而得的单倍体,B 错误;
C、决定植物①脱分化和②再分化的关键因素是植物激素的种类和比例,特别是生长素和细胞分裂素的协
同作用在组织培养过程中非常重要,但加入的比例不同,C 正确;
D、操作前需将离体的花药用体积分数为70%的酒精消毒6~7s,D 正确。
8.品种青花菜具有由核基因控制的多种优良性状,另一远缘植物乙的细胞质中存在抗除草剂基因,欲将
乙细胞质中的抗性基因引入甲中。相关叙述错误的是( )
A.过程A 中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗
B.过程B 中常用PEG 诱导原生质体融合
C.过程C 中只有融合细胞具有完整的细胞结构,可以正常生长
D.杂种植株的抗除草剂基因遵循孟德尔遗传定律
【答案】D
【解析】
A、顶端分生组织几乎不带毒,因此,过程A 中取顶芽细胞进行体细胞杂交有利于获得脱毒苗,A 正确;
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B、流程中A 处理可使用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体,B 处理可使用聚乙二醇促融,B 正
确;
C、过程C 中只有融合细胞活性部位互补,具有完整的细胞结构,才正常生长,然后将获得的杂种细胞进
行组织培养获得杂种植株,C 正确;
D、抗除草剂基因不一定插入到细胞核内的染色体上,所以杂种植株的抗除草剂基因不一定遵循孟德尔遗
传定律,D 错误。
9.某科研小组拟采用“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”的方法繁殖一种名贵花卉。下列
有关叙述错误的是( )
A.该技术具有快速繁殖并保持亲本遗传特性的优点
B.在愈伤组织培养过程中加入细胞融合的诱导剂,可获得染色体加倍的细胞
C.出芽是外植体经细胞脱分化后再分化的结果,该过程有基因的选择性表达
D.诱导分化生根时,培养基中生长素与细胞分裂素用量的比值较高
【答案】B
A、该技术属于无性繁殖技术,具有快速繁殖并保持亲本遗传特性的优点,A 正确;
B、愈伤组织细胞具有细胞壁,直接加入细胞融合的诱导剂,不能获得染色体加倍的细胞,B 错误;
C、出芽是外植体经细胞脱分化后形成愈伤组织,由愈伤组织再分化的结果,该过程有基因的选择性表达,
C 正确;
D、诱导分化生根时,培养基中生长素与细胞分裂素用量的比值较高,生长素与细胞分裂素用量的比值较
低利于生芽,D 正确。
10.猕猴桃是原产我国的野生藤本果树,营养价值较高,我国现有54 个种,几十个变种,丰富的种质资源
为猕猴桃遗传育种提供了方便。毛花猕猴桃为二倍体,果实大,维生素C 含量高;软枣猕猴桃为四倍体。
极耐寒,在-40℃下可安全越冬。某农科所利用这两种猕猴桃体细胞,通过细胞工程的方法培育出了猕猴桃
新品种,培育过程如下图所示。下列说法错误的是( )
A.过程①需将体细胞用含纤维素酶和果胶酶的等渗溶液处理
B.灭活的仙台病毒不能用于过程②中a 和b 的诱导融合
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C.愈伤组织形成试管苗须经脱分化和再分化两个过程
D.融合后的杂种植株是六倍体植株
【答案】C
A、过程①为利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁获得原生质体的过程,该过程需要在等渗溶液中进行,以
维持原生质体的形态和功能,A 正确;
B、②过程为植物原生质体的融合过程,其诱导方法有PEG 处理、离心、振动、电激等,灭活的仙台病毒
是诱导动物细胞融合的手段,不能用于植物原生质体的融合,B 正确;
C、愈伤组织形成试管苗属于再分化过程,C 错误;
D、毛花猕猴桃为二倍体,软枣猕猴桃为四倍体,将二者进行植物体细胞杂交得到的杂种植株为六倍体,D
正确。
11.植物细胞工程已经普遍应用于社会生产的方方面面。请回答下列问题:
(1)植物微型繁殖是植物繁殖的一种新途径。与常规的种子繁殖方法相比,这种微型繁殖技术的特点有
________________________(答出两点即可)。利用植物组织培养技术可以获得脱毒苗,选材时一般切取
茎尖进行组织培养,原因是______________________。
(2)利用植物组织培养技术可以制造出神奇的人工种子,所谓人工种子,就是以植物组织培养得到的
____________等为材料,经过人工薄膜包裹得到的种子。人工种皮具备透气性的作用是______________。
(3)利用植物组织培养技术可以将杂种细胞培育成杂种植株,在进行植物体细胞杂交之前,必须先利用
_________酶去除细胞壁,获得具有活力的原生质体。人工诱导原生质体融合的方法有_______法和
___________法两大类。
【答案】 能保持植物原有的遗传特性、繁殖速度快 茎尖病毒少或无病毒,获得的脱毒
苗不会或极少感染病毒 胚状体、不定芽、顶芽和腋芽 有利于胚状体进行呼吸作
用 纤维素酶和果胶 物理 化学
【解析】
(1)植物组织培养技术在微型繁殖、制造人工种子、作物脱毒等方面具有广泛的应用。微型繁殖属于无
性生殖的范畴,能够保持亲本的优良特性,实现种苗的快速大量繁殖。以无病毒或病毒极少的茎尖为材料
进行组织培养可获得高产优质的无病毒植株。
(2)人工种子是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料,经过人工薄膜包装得到
的种子,其中的人工胚乳可为“种子”的萌发提供所需的营养物质。人工种皮具备透气性的作用是有利于
胚状体进行呼吸作用。
(3)植物细胞壁的成分是纤维素和果胶,故除去细胞壁就需要使用纤维素酶和果胶酶,才能获得具有活
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力的原生质体。人工诱导原生质体融合的方法有物理法(离心、振动、电激等)和化学法(聚乙二醇)。
12.花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病,野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑
芥原生质体可使其部分染色体片段化,并丧失再生能力。再利用此原生质体作为供体与完整的花椰菜原生
质体融合,以获得抗黑腐病杂种植株,流程图如图所示。请回答下列问题:
(1)花椰菜与野生黑芥之间存在___________。上述操作中融合的原生质体可能有___________种(只考
虑两两融合)。所得的杂种植株不完全具有花椰菜与野生黑芥的全部遗传基因,原因可能是在细胞分裂时
___________________________________________________________________________。
(2)植物体细胞杂交技术的原理是_________________________________________________________。人
工诱导细胞融合的物理方法包括______________等。过程②后,在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的
___________存在,这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)④过程中通过调节____________的比例对组织培养进行调控,从而诱导形成完整植株,整个过程是
在___________条件下完成的。对杂种植株进行_______接种的实验,可筛选出具有高抗性的杂种植株。
【答案】 生殖隔离(杂交不亲和) 3 部分染色体片段不能复制,因而不能传递给子
细胞 细胞膜一定的流动性和细胞的全能性 离心、振动、电激 叶绿
体 生长素和细胞分裂素 无菌和人工控制 黑腐病菌
【解析】
(1)花椰菜与野生黑芥是不同的物种,它们之间存在生殖隔离(杂交不亲和),不能进行有性杂交。融
合的原生质体可能有3 种,分别是花椰菜与花椰菜的原生质体融合,野生黑芥与野生黑芥的原生质体融合
以及花椰菜与野生黑芥的原生质体融合。由于在细胞分裂中,部分染色体片段不能复制,不能传递给子细
胞,所以所得的杂种植株不完全具有花椰菜与野生黑芥的全部遗传基因。
(2)植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜一定的流动性和细胞的全能性。人工诱导细胞融合的物理方法
包括离心、振动、电激等。用于融合的两个细胞,一个是黑芥苗的叶肉细胞,一个是花椰菜的根部细胞,
其中供体细胞特有的结构是叶绿体,因此可通过用光学显微镜观察叶绿体的有无,作为初步筛选杂种细胞
的标志。
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(3)④过程中通过调节生长素和细胞分裂素的比例对组织培养进行调控,从而诱导形成完整植株,整个
过程是在无菌和人工控制条件下完成的。对杂种植株进行黑腐病菌接种的实验,可筛选出具有高抗性的杂
种植株。
考点二 动物细胞工程
1.单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B 淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在
这种培养基上不能存活增殖的细胞是( )
①B 淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B 淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A.①②③④
B.①③⑤
C.②④
D.②③
【答案】A
【解析】
特定培养基培养细胞的目的是筛选出既能大量增殖、又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,因此除了⑤杂交
瘤细胞,其他的细胞都不能在此培养基上生存。所以在这种培养基上不能存活和增殖的细胞有:①B 淋巴
细胞, ②小鼠骨髓瘤细胞 ,③B 淋巴细胞自身融合细胞,④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞;A 符合题意;
B、C、D 不符合题意。
2.利用杂交瘤技术制备针对特定抗原的单克隆抗体的过程如图所示。下列叙述正确的是( )
A.用于融合的B 淋巴细胞应从未受外界抗原刺激的动物中提取
B.筛选1 过程通过鉴别培养基能够分离出杂交瘤细胞
C.筛选2 过程通过抗体检验以获得所需的特定杂交瘤细胞
D.选出的杂交瘤细胞只能通过体外培养获得大量单克隆抗体
【答案】C
【解析】
A、用于融合的B 淋巴细胞应从受特定抗原刺激的动物中提取,A 错误;
B、要分离出杂交瘤细胞,应该用选择培养基进行筛选,B 错误;
C、为获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞,可以通过抗体检验进行筛选,C 正确;
D、选出的杂交瘤细胞可通过植入小鼠腹腔中增殖或体外培养获得大量单克隆抗体,D 错误。
3.科研工作者利用禽流感病毒蛋白制备单克隆抗体,下列步骤中叙述不正确的是( )
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A.用适宜浓度相同抗原多次免疫小鼠,以获得更多的浆细胞
B.用培养液培养禽流感病毒,通过离心获得抗原蛋白
C.可以用电融合法或PEG 融合法诱导浆细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞
D.单克隆抗体相比血清抗体特异性更强,并且可以大量制备
【答案】B
【解析】
A、多次给小鼠注射适宜浓度的抗原,引起小鼠发生体液免疫,可以获得更多的浆细胞,A 正确;
B、禽流感病毒没有细胞结构,不能在培养液中独立生存,B 错误;
C、用灭活的病毒可诱导浆细胞与骨髓瘤细胞发生融合形成杂交瘤细胞,除外还可以用聚乙二醇诱导融合,
C 正确;
D、杂交瘤细胞既具有浆细胞能合成抗体的特点,也具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特点,骨髓瘤细胞既能无
限增殖,又能产生特异性抗体,因此单克隆抗体相比血清抗体特异性更强,并且可以大量制备,D 正确。
4.下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,描述正确的是( )
A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法也完全相同
B.只有植物体细胞杂交可跨越种属间的生殖隔离,突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能
C.利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为生产单克隆抗体开辟了新途径
D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物,
并使它们的性状全部得以体现
【答案】C
【解析】
A、动物细胞融合与植物原生质体融合的诱导融合的方法不完全相同,动物细胞融合还可以灭毒的生物病
毒来诱导,A 错误;
B、植物体细胞杂交技术的意义使远缘杂交成为可能,打破了生殖隔离,但方法不唯一,B 错误;
C、利用动物细胞融合而实现了杂交瘤技术,为大量生产单克隆抗体提供了条件,C 正确;
D、目前科学家使两个植物物种间的体细胞杂交,成为了可能,但还不成熟,并且两个物种遗传物质并不
能使它们的性状全部得以体现,D 错误。
5.CD47 是一种跨膜糖蛋白。它可与巨噬细胞表面的信号调节蛋白结合,从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。肺
癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47 含量比正常细胞高1.6~5 倍,导致巨噬细胞对肿瘤细胞的清除效
果减弱。为证明抗CD47 的单克隆抗体可以解除CD47 对巨噬细胞的抑制作用,科学家按照如下流程进行了
实验,下列叙述不正确的是( )
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A.①注射 CD47 以诱导特异性B 淋巴细胞的增殖
B.从脾脏中取得的B 细胞有多种,③中要经过克隆化培养和抗体检测才能获得产生抗CD47 的单克隆抗体
C.实验组中巨噬细胞和肿瘤细胞的共培养体系需放入CO2培养箱
D.对照组中吞噬细胞的吞噬指数显著高于实验组可验证上述推测
【答案】D
【解析】
A、 CD47 是一种抗原,注射CD47 能诱导特异性B 淋巴细胞的增殖分化成浆细胞和记忆细胞,A 正确;
B、从脾脏中取得的B 细胞有多种,③中要经过克隆化培养和抗体检测才能获得产生抗CD47 的单克隆抗体,
抗体检测的目的就是筛选出既能产生抗CD47 抗体又能大量增殖的细胞,B 正确;
C、动物细胞培养应放在二氧化碳培养箱, C 正确;
D、据单一变量原则可知应设置不加单克隆抗体的巨噬细胞+肿瘤细胞的共培养体系为对照,抗CD47 的单
克隆抗体可以解除CD47 对巨噬细胞的抑制作用,没有抗体抑制,CD47 对巨噬细胞有抑制作用,对照组中
吞噬细胞的吞噬指数显著低于实验组可验证上述推测,D 错误。
6.新冠疫情发生后,重庆医科大学免疫研究中心科研团队仅用10 天时间,快速成功地研发了新冠病毒
(COVID-19)一系列抗体快速筛选技术,并成功获得新冠病毒全人源单克隆抗体。
(1)动物细胞体外培养需要无菌、无毒的环境。保证培养的细胞处于无菌、无毒环境的具体措施有:
___________。(至少写出两点)。
(2)单克隆抗体制备过程中,运用了动物细胞融合技术,动物细胞融合是指___________。细胞融合是随
机的,经选择性培养的目的是___________。还需进行___________,才能获得能分泌所需抗体的杂交瘤细
胞。
(3)单克隆抗体的优点是___________。
(4)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG),该基因能激发动物细胞
分裂,这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体技术外,请从不同角度、
再简要写出两种制备单克隆抗体的思路:
①________________。
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②________________。
【答案】 对培养液和所有培养用具进行无菌处理;在细胞培养液中添加一定量的抗生素;定期
更换培养液 两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 筛选出杂交瘤细胞
克隆化培养和抗体检测 特异性强、灵敏度高、可大量制备 通过基因工程向浆细胞中导
入prG 利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的能无限增殖细胞中
【解析】
(1)细胞培养过程需要在无菌、无毒的环境中进行。为了创造上述条件,通常需要对培养液和所有培养
用具进行无菌处理;并在细胞培养液中添加一定量的抗生素;还要做到定期更换培养液等。
(2)动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个单核细胞的过程。细胞融合是随机的过程,因
此需要筛选,第一次筛选是在特定的选择性培养基中进行培养,目的是获得杂交瘤细胞。第二次筛选是抗
体检测和克隆化培养,获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
(3)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、并可大量制备等优点。
(4)据题意,可以通过基因工程向浆细胞细胞核染色体DNA 中导入prG 或提取该浆细胞细胞核,和去核
的无限增殖细胞融合为重组细胞,进行细胞培养产生单克隆抗体。
7.下图1、2 分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图,请据图回答下列问题:
(1)图1 和图2 所示的过程中,都必须用到的动物细胞工程技术手段是______________________。
(2)图1 中①步骤引发了小鼠的__________________免疫反应,从而可获得产生特异性抗体的B 淋巴细胞,
但B 细胞分裂能力差;获取小鼠新鲜的骨髓瘤组织,在37℃下用__________________消化30~40 分钟形成
离散细胞,在_____________培养箱中培养,该物质的作用是_________________,培养基是模拟了小鼠的
________________成分配制的,在培养基中加入一定量的抗生素,其目的是______________________。
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(3)图1 中②过程常在_______________诱导下完成,两两融合形成的细胞共有_______种,所以需要利用
_____________培养基筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的________________细胞。单克隆抗体与常规的血
清抗体相比,最大的优越性是_______________________________________________。
(4)图2 克隆羊“多莉”是_____________(填序号)羊的克隆,从理论上证明了
_________________________;可以是雄性的羊是____________(填序号),若不考虑环境因素影响,亲代
和其克隆子代性状_________(填“是”或“不是”)完全相同的,原因是________________________。
(5)图2 过程的技术具有多种用途,其中正确的是_____________(多项选择)。
A.有选择地繁殖某一性别的家畜 B.繁殖家畜中的优良个体
C.用于保存物种 D.改变动物的染色体数目
【答案】 动物细胞培养技术 体液 胰蛋白酶 5%
调节pH 内
环境 防止杂菌污染 PEG 或病毒 3 选择 杂交瘤 特异性强,
灵敏度高 ② 动物体细胞核具有全能性 ②④ 不是 细胞质
基因的影响 ABC
【解析】
(1)图1 为单克隆抗体制备过程,使用的技术手段有动物细胞融合与动物细胞培养,图2 为克隆羊培育过
程,使用的技术手段有动物细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植。图1 和图2 所示的过程中,都必须用
到的动物细胞工程技术手段是动物细胞培养技术。
(2)图1 中①步骤引发了小鼠的体液免疫反应,从而可获得产生特异性抗体的B 淋巴细胞,获取小鼠新鲜
的骨髓瘤组织,用胰蛋白酶消化30~40 分钟形成离散细胞。将B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细
胞,杂交瘤细胞需要在37℃,5%
培养箱中培养,5%
的作用是调节pH。培养基是模拟了小鼠的内
环境成分配制的,在培养基中加入一定量的抗生素,其目的是防止杂菌污染。
(3)图1 中②过程为细胞融合,诱导动物细胞融合最常用的方法是利用灭活的病毒诱导或PEG 诱导融合;
两两融合形成的细胞共有3 种,所以需要利用选择培养基筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的杂交瘤细胞。
单克隆抗体与常规的血清抗体相比,最大的优越性是特异性强,灵敏度高。
(4)图2 克隆羊“多莉”是②白绵羊的克隆,从理论上证明了动物体细胞核具有全能性;图中雄性的羊可
以②白绵羊和④克隆羊,代孕母体必须是雌羊。在不考虑环境因素影响的情况下,由于克隆羊的细胞核中
的遗传物质来自白面绵羊,而细胞质中少量的遗传物质来自提供去核卵细胞的黑面绵羊。亲代和其克隆子
代性状不完全相同。
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(5)动物体细胞核移植技术的应用:①加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育;②保护濒危物种,增
大存活数量;③生产珍贵的医用蛋白;④作为异种移植的供体;⑤用于组织器官的移植等。故选ABC。
考点三 胚胎工程
1.下图表示研究人员利用胚胎工程培育优质奶牛的过程,下列相关说法正确的是( )
A.在胚胎发育过程中,受精卵通过有丝分裂不断增加体细胞数目
B.在进行步骤③时,应选择发育良好的原肠胚来操作
C.在胚胎发育中,卵裂期细胞数量不断增多,胚胎体积不断增大
D.步骤①代表奶牛的体外受精,属于无性繁殖的方式
【答案】A
【解析】
A、在胚胎发育过程中,受精卵通过有丝分裂不断增加体细胞数目,A 正确;
B、进行胚胎分割时,应选择发育良好、形态正常的囊胚,因囊胚期的内细胞团未分化,而原肠胚已经分
化,不能用于胚胎分割移植,B 错误;
C、在胚胎发育中,卵裂期细胞数量不断增多,但胚胎体积基本不变,甚至略微减小,C 错误;
D、体外受精属于胚胎工程工程,生殖方式属于有性生殖,D 错误。
2.下列关于哺乳动物胚胎工程和细胞工程的叙述错误的是( )
A.动物细胞和胚胎培养液中加入的血清具有营养功能
B.体外培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体时离不开胰蛋白酶的使用
C.早期胚胎可以通过体外受精、细胞核移植等技术获得
D.早期胚胎必须移植到经同期发情处理的同种雌性动物子宫内
【答案】B
【解析】
A、早期胚胎培养与动物细胞培养的培养液通常都需加入血清,为细胞提供相应的营养,A 正确;
B、胰蛋白酶可将组织分散成单个的细胞,而体外培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体时无需分散,故不适用
胰蛋白酶,B 错误;
C、体外受精获得受精卵,经培养可以得到早期胚胎。细胞核移植可以得到重组细胞,经培养也可以得到
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早期胚胎,C 正确;
D、同期发情处理后,供体与受体能产生相同的生理变化,为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境,
D 正确。
3.从黑色、白色、黄色鼠的卵裂期胚胎中分别提取部分细胞,制成一个“嵌合胚胎”,再经过早期胚胎培
养和胚胎移植后,培育出三色皮毛的嵌合鼠,培育流程如图所示。下列说法正确的是( )
A.嵌合鼠培育依据的原理是基因重组和细胞全能性
B.过程①中需利用相关技术去除早期胚胎外的滋养层
C.过程②中可利用灭活病毒诱导卵裂球细胞发生融合
D.过程③操作前需要对代孕母鼠进行同期发情处理
【答案】D
A、嵌合鼠的培育依据的原理是细胞全能性,这里没有涉及基因重组,A 错误;
B、卵裂球外还没有形成滋养层,因此过程①中需利用相关技术去除早期胚胎外的透明层,B 错误;
C、动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞。过程②中是将黑鼠、白鼠和黄鼠的卵裂球
嵌合形成“嵌合胚胎”的过程,不需要诱导细胞融合,因此不需要用灭活病毒处理,C 错误;
D、过程③为胚胎移植,该过程操作前需对代孕母鼠进行同期发情处理,使胚胎移植入相同的生理环境,D
正确。
4.随着生物科学技术的发展,生产动物新个体的方式变得越来越多样化。如图表示胚胎工程技术研究及应
用的相关情况,供体1 是良种荷斯坦高产奶牛,供体2 是健康的黄牛,下列相关叙述错误的是( )
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A.应用1 中获得的良种小牛为雌性,是无性生殖的产物
B.应用2、3、4 所用的受精卵可以不通过人工授精获得
C.应用3 过程中对桑葚胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割
D.应用4 中的组织和器官是通过对胚胎干细胞进行定向诱导分化得到的
【答案】C
【解析】
A、应用1 中获得的小牛为克隆牛,其细胞核遗传物质来源于供体1(荷斯坦高产奶牛),所以良种小牛是
雌性,A 正确;
B、应用2、3、4 所用的受精卵不一定来源于体外受精,也可以来自体内受精,B 错误;
C、对囊胚阶段的胚胎进行分割时需要将内细胞团进行均等分割,否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步
发育,C 错误;
D、应用4 中细胞为胚胎干细胞,进行定向诱导,可分化形成各种组织和器官,用于器官移植研究,D 正确。
5.下列关于胚胎工程的叙述,错误的是 ( )
A.胚胎工程技术离不开动物细胞培养技术
B.胚胎工程中的胚胎可来自自然受精或人工授精等方式获得的胚胎
C.胚胎工程的许多技术实际上是在体外完成的
D.动物细胞培养技术属于胚胎工程技术
【答案】D
【解析】
A、胚胎工程技术中需要细胞培养技术为基础,胚胎工程技术离不开动物细胞培养技术,A 正确;
B、胚胎工程的操作对象为受精卵或早期胚胎细胞,早期胚胎可来自自然受精或人工授精产生的早期胚胎,
B 正确;
C、胚胎工程中的体外受精、胚胎分割等技术是在体外完成的,C 正确;
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D、动物细胞培养技术属于动物细胞工程技术,D 错误。
6.2020 年12 月,青岛农业大学生命科学学院培育的克隆猫诞生,实验流程如图所示。下列叙述错误的是(
)
A.过程①采用了细胞工程中的细胞核移植技术
B.过程②采用了胚胎工程中的早期胚胎培养技术
C.通常将重组细胞置于含95%O2~5%CO2的培养箱中进行培养
D.胚胎的受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应
【答案】C
A、动物细胞核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中,使其形成重组细
胞,过程①采用了细胞工程中的细胞核移植技术,A 正确;
B、过程②采用了胚胎工程中的早期胚胎培养技术,B 正确;
C、通常将重组细胞置于含95%空气+5%CO2 的培养箱中进行培养,C 错误;
D、胚胎的受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为胚胎在受体内存活提供了可能,D
正确。
故选C。
7.诱导性多能干细胞(iPS 细胞)最初是日本科学家山中伸弥(Shinya Yamanaka)于2006 年利用病毒载体
将四个转录因子(Oct4,Sox2,Klf4 和c—Myc)的组合转入分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚
胎干细胞和胚胎APSC 多能细胞的一种细胞类型。2007 年11 月,由中国科学家俞君英领衔的Thompson 实
验室和山中伸弥实验室几乎同时报道,利用iPS 技术同样可以诱导人皮肤纤维母细胞成为几乎与胚胎干细
胞完全一样的多能干细胞。下图1 表示的是我国科学家获得iPS 细胞,再将iPS 细胞转入小鼠乙体内培养的
过程,图⒉表示研究人员利用小鼠(2N=40)获取单倍体胚胎干细胞的一种方法,请回答下列问题:
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(1)图1 过程中,成纤维细胞转变为iPS 细胞,类似于植物组织培养中的_______________过程。
(2)研究人员将iPS 细胞团注射人缺乏T 细胞的小鼠体内,细胞团能继续生长,由此可推测图1 中iPS 细胞团
逐渐退化的原因可能是_______________。
(3)图2 中,研究人员给小鼠丙注射促性腺激素,目的是_______________,再利用SrCl2溶液处理后体外培
养至_______________(填序号及名称),再筛选出_______________。
(4)研究发现,单倍体胚胎于细胞有发育全能性,该技术培育的单倍体动物可成为研究_______________
(填“显性基因”或“隐性基因”)功能的理想细胞模型。为提高胚胎的利用率,可以采用胚胎分割技术,
应该选用发育良好、形态正常的_______________胚进行分割。
(5)胚胎工程最后一道工序的实质是______________________。
【答案】(1)脱分化
(2)小鼠乙发生免疫排斥反应,使得iPS 细胞团失去生命力
(3) 使其超数排卵(或是雌性小鼠超数排卵) ④囊胚期 单倍体胚胎干细胞
(4) 隐性基因 桑椹胚或囊
(5)早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
【解析】
【分析】
据图1 分析,小鼠甲提取出成纤维细胞与特异性基因结合,形成iPS 细胞,导入小鼠乙。据图2 分析,对小
鼠丙处理,从而获得更多的卵母细胞,再利用SrCl2溶液处理、激活卵母细胞,并在体外培养至囊胚,进而
培育成单倍体。
(1)
图1 过程中,成纤维细胞转变为iPS 细胞,即从高度分化的细胞形成分化程度低的细胞,过程类似于植物
组织培养中的脱分化过程。
(2)
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将iPS 细胞团注射入缺乏T 细胞的小鼠体内,细胞团能继续生长,由此可推测图1 中iPS 细胞团逐渐退化的
原因是小鼠乙(受体)发生免疫排斥反应,使得iPS 细胞团失去生命力导致的。
(3)
图2 中,对实验小鼠丙注射促性腺激素的目的是使其超数排卵,从而获得更多的卵母细胞,再利用SrCl2溶
液处理、激活卵母细胞,并在体外培养至④囊胚期,再利用流式细胞仪筛选出单倍体胚胎干细胞。
(4)
单倍体胚胎干细胞也能分化,形成不同功能的细胞、组织和器官,该技术培育的单倍体动物可成为研究隐
性基因功能的理想细胞模型,因为显性基因在正常的生物体内也能表达。为提高胚胎的利用率,可以采用
胚胎分割技术,应该选用发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚进行分割。
(5)
胚胎工程最后一道工序是胚胎移植,胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。
8.科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育,可以对此转
基因奶牛进行克隆(如图所示)。请结合图示回答下列相关问题:
(1)在进行细胞培养之前,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分离,形成单个细胞,这个过程中需要
利用_________________酶处理。
(2)用于核移植的供体细胞,一般选用传代10 代以内的细胞,原因是
_____________________________________________。
(3)在进行原代培养时,细胞增殖的方式是____________,此外,细胞增殖还表现出_____________和接
触抑制等特点。
(4)将进行培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞的细胞核的目的是
_____________________________________。
(5)将重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛后,该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质相
同的犊牛,但也不是100%的复制,原因最可能是_______________________________________。
【答案】 胰蛋白(或胶原蛋白) 该种细胞代谢旺盛、分裂能力强,且遗传物质没有发
生改变 有丝分裂 贴壁生长 使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细
胞 生物的性状受细胞核基因和细胞质基因共同控制; 生物的性状还受环境因素的影响
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【解析】
【分析】
分析题图:图示为转基因奶牛克隆的过程。首先采用基因工程技术将人的生长激素基因导入奶牛的体细胞;
然后采用体细胞核移植技术将细胞核移入去核卵母细胞形成重组细胞;再进行早期胚胎培养和胚胎移植得
到转基因克隆牛。
【详解】
(1)在进行细胞培养时,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理,形成单个细胞,这个过程中需
要利用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理。
(2)传代10 代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型(或代谢旺盛、分裂能力强,且遗传物质没有发生
改变),因此,常用传代10 代以内的细胞作为核移植的供体细胞。
(3)进行原代培养时,细胞增殖的方式是有丝分裂;此外,培养过程中还会出现贴壁生长和接触抑制的
现象。
(4)将培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中,用去核卵母细胞作受体细胞的原因是:①细胞体积大,
易于操作;②卵母细胞质中还含有能够促进细胞核全能性表达的物质和营养条件。去除卵母细胞的细胞核
的目的是使克隆出的动物个体的遗传物质几乎全部来自供体细胞。
(5)生物性状通常主要由细胞核中基因控制,细胞质中基因也能控制少部分性状,且表现型是基因型与
环境因素共同作用的结果,所以克隆奶牛的性状与供核奶牛的性状不完全相同。
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