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!"!# ”»H…
刷考点
!!""【解析】用谷氨酸棒状杆菌发酵生产味精，用醋酸菌发酵生产
醋，谷氨酸棒状杆菌和醋酸菌均为原核生物，，正确；酱油和腐
乳的发酵过程，都利用了霉菌产生的蛋白酶将蛋白质分解成小
分子的肽和氨基酸，0正确；白酒的制作过程中，需要先在有氧环
境中让酵母菌大量繁殖，然后在无氧环境中，让酵母菌通过无氧
呼吸产生酒精，&错误；溶菌酶能通过破坏细菌的细胞壁，使细菌
失去保护而死亡，因此延长食品的保存期可以添加适量的溶菌
酶作为防腐剂，1正确。
#!."【解析】发酵过程实是醋酸菌利用酒精生产醋酸的过程，需
要泌 但不产生&泌，，错误；酒精发酵过程中酵母菌无氧呼吸会
（ （
产生&泌，使发酵液R’降低，醋酸发酵过程中产生的醋酸会使
（
发酵液的R’再度降低，0错误；酒精发酵的适宜温度为 4细G
J使 度，醋酸发酵的适宜温度为J使GJ: 度，因此发酵过程(（酒精
发酵）的温度比发酵过程实（醋酸发酵）的低，&错误；发酵过程
(、实是此生产过程的中心环节，1正确。
%!$"【解析】制作果醋利用的是醋酸菌，制作腐乳利用的主要是
毛霉，它们的代谢类型均为异养需氧型，，正确；果醋发酵利用
的醋酸菌为好氧菌，故果醋发酵过程中需要一直通气，0错误；牛
!
奶不宜用高压蒸汽灭菌，高温会破坏牛奶的营养成分，&错误；葡
!!!!!!!!
"" ¿(cid:192)`MI´ˆ˜)(cid:137)(cid:138)ˆ˜
萄酒制作完成后可打开瓶盖并盖上一层纱布，同时需上调发酵
温度，进行葡萄醋的发酵，1错误。
&!""【解析】大豆中含有丰富的蛋白质，可为微生物的生长繁殖提
供氮源，小麦中的淀粉可以为微生物的生长繁殖提供碳源，，正
确；米曲霉发酵时需提供营养物质并通入空气搅拌，因此米曲霉
!!!!
属于异养需氧型真核生物，0正确；乳酸菌属于厌氧菌，无氧条件
!!!!!!!!!
"" ¯˘ab˙E78
下，乳酸菌发酵可产生乳酸，但不能产生&泌，&错误；抑制杂菌污
（
染和繁殖是酱油质量的重要保障，在发酵池中酵母菌产生的酒精
能抑制杂菌生长，乳酸菌产生的乳酸使发酵液呈酸性，也能抑制杂
菌生长，向发酵池中添加的食盐同样能抑制杂菌生长，1正确。
’!."【解析】用赤霉素处理大麦，可以使大麦种子无须发芽就能产生
淀粉酶，，正确；焙烤的温度一般不会使淀粉酶失活，碾磨能促使淀
粉与淀粉酶充分接触，从而利于糖化，0正确；煮沸时加入啤酒花能
增加啤酒的苦味等风味，蒸煮后温度高，需冷却才能接种，否则会使
菌种失活，&正确；后发酵阶段应在低温、密闭环境中进行，1错误。
”!$"【解析】由题意可知，玉米秸秆中含有丰富的粗纤维、粗蛋
白等营养成分，将玉米秸秆资源化，利用绿色木霉生产单细胞蛋白饲料，所以绿色木霉应该有能分泌纤维素酶和蛋白
酶，不产生有毒物质等优点，，错误；玉米秸秆中含有丰富的
粗纤维、粗蛋白等营养成分，可以为绿色木霉生长提供所需
的碳源和氮源，0正确；蒸料可对原料进行消毒，同时使蛋白
质变性，有利于后续发酵过程中微生物利用原料中的蛋白
质，&正确；为了解发酵进程，可随时检测绿色木霉的数量及
原料中粗纤维、粗蛋白的含量，当原料中粗纤维、粗蛋白的含
量极低时，说明发酵基本完成，1正确。
)!."
题表分析
【解析】培养基灭菌应采用高压蒸汽灭菌法，而培养皿灭菌需用
干热灭菌法，，错误；制备培养基的正确流程为配制培养基"灭
菌"倒平板，若先倒平板再灭菌，高温会破坏凝固的培养基结
构，0错误。
+!."【解析】抑菌圈越大，说明该种抗生素对该种病原微生物抑
制作用越强，即该病原微生物对该种抗生素敏感性越大，，正
确；题图4抑菌圈0中出现了部分菌落，可能是该病原微生物发
生了基因突变，产生了耐药性，0正确；进行药敏试验，需利用稀
释涂布平板法将平板上布满测试菌，使用的工具是涂布器，&正
确；接种后的平板应倒置培养，如题图（中"所示，倒置培养能
防止冷凝形成的水珠滴入培养基，1错误。
。!""【解析】烟草中有果胶、纤维素、淀粉、木聚糖等多种多糖，
筛选获得+4G+:微生物菌株时不应以淀粉为唯一碳源，，错
误；平板划线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操
作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，不需对培
养液进行稀释，0错误；据题图分析可知，+4 微生物的多种多
糖酶活力都较强，故用+4单菌落培养获得的纯培养物对烟叶
进行醇化效果最好，&正确；通常低温下酶的活性低，酶催化
化学反应需要适宜的温度，故烟叶醇化发酵应在适宜的温度
下进行，1错误。
!-!*"."【解析】纤维素是生物大分子，菌@不能将其直接吸收，
菌@能够分泌纤维素酶将纤维素最终分解为葡萄糖，，错误；
稀释涂布平板法和平板划线法都是酵母菌纯培养时常用的接
种方法，0正确；淋洗液可用湿热灭菌法进行灭菌，培养瓶可用
干热灭菌法进行灭菌，&正确；题述实验利用的发酵底物主要
是秸秆分解产生的葡萄糖，以粮食为原料发酵生产乙醇，其发酵底物主要是粮食中的淀粉分解产生的葡萄糖，二者所利用的
发酵底物均主要为葡萄糖，1正确。
!!!""【解析】乙醇梭菌为厌氧菌，其生长代谢需在无氧条件下进
行，否则无法正常生产乙醇，，正确。 由题表可知，实验中甲组
未添加中间产物，乙、丙组分别添加中间产物4和（，自变量为
中间产物的有无及类型，0正确。 丙组添加中间产物（后能产
乙醇，说明，酶功能正常；乙组添加中间产物4仍无法产乙醇，
表明中间产物4到中间产物（的转化受阻，即&酶缺陷，因此
突变株最可能为&酶缺陷型菌株，&错误。 乙醇梭菌以环境中
提供的&泌 作为碳源，故基础培养基中无需额外添加碳源，但
（
需添加氮源、水、无机盐等，1正确。
!#!$"【解析】分析题图可知，2计数方法为稀释涂布平板法，只
能统计活菌数，且当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察
到的只是一个菌落，此时统计的菌落数比活菌的实际数目少，
而细菌计数板计数法无论活菌还是死菌都统计在内，因此用稀
释涂布平板法统计得到的细菌数与用细菌计数板计数法统计
得到的细菌数相比较少，，错误；从物理性质分析质和有所用
培养基类型，质是液体培养基，没有添加琼脂，有是固体培养
基，加有琼脂，0正确；该实验是为了分离得到纤维素分解菌，
质培养液中以纤维素作为唯一碳源时，只有能利用纤维素的微
生物才能生长繁殖，从而筛选出纤维素分解菌，此外还需满足
微生物生长对R’、特殊营养物质等的需求，&正确；当纤维素被
纤维素分解菌分解后，刚果红与纤维素的红色复合物就无法形
成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过
是否产生透明圈来鉴别纤维素分解菌，即可以在培养基中加入
刚果红来鉴别纤维素分解菌，1正确。
。012!。# ‰9.ci
!!."【解析】在探究“培养液中酵母菌种群数量的变化”的实验中，先
放置盖玻片，将培养液滴于盖玻片边缘，然后让培养液从盖玻片边
缘处自行渗入计数室，，错误；滴加培养液后要等细胞沉降到计
数室底部再开始计数，0错误；计数同一样品时，应统计计数室中
!!!!!!
的:个中方格内的菌体数，再取平均值，&错误；题图中一个中方
!!!!!!!!!
"" 方(cid:143)(cid:144)¨¨(cid:201)3!"(cid:144)Æ˚¸(cid:204)?（:[4将˝
格中活的酵母菌有B个，等体积染色相当于稀释两倍，则4 加O该
!!
样品中酵母菌约为Bd4将[6使使[4使6[（使使Z6!:[4使细（个） ，1正确。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
""" 。˛yˇ—?#9(cid:209)(cid:209)˘ÆZ。(cid:146)r_(cid:204)#9(cid:210)
W(cid:209)(cid:209)˘Æ[6使使[4使6[(cid:211)z(cid:230)Æ
#!*"."【解析】题图甲所用培养基以**为唯一碳源，属于选择培
养基；在题图乙所用培养基中加入能与 **结合而显色的染色
剂，属于鉴别培养基，二者都是以**作为唯一碳源，，正确。 题
图甲、乙所用接种方法都是稀释涂布平板法，0错误；为了计数结
果准确，一般选择菌落数在J使GJ使使的平板进行计数，因此4$土
壤样品中含有**分解菌的估算数目是（:细脂LJ脂BL）dJd使!4[4使细ZL!将[4使4使，由于两个或多个细胞连在一起时，在平板上只观
察到一个菌落，因此此数值较活菌的实际数目一般偏小，&错误；
V与1的比值越小，表示降解 **的能力越强，所以可以选择 V
与1的比值小的**分解菌作为目的菌种推广使用，1错误。
方法总结 稀释涂布平板法计数
（4）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个
单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 通过统计平板上
的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
（（）操作："设置重复组，增强实验的说服力与准确性；
体为了保证结果准确，一般选择菌落数在 J使GJ使使 的平板
进行计数。
（J）计算公式：每克（或毫升）样品中的菌株数ZId数[于，
其中I代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，数代
表涂布平板时所用的稀释液的体积（加O），于代表稀释
倍数。
%!（4）高压蒸汽灭菌法（或湿热灭菌法）"选择
（（）4!（细[4使L 个\加O"偏大
【解析】（4）对培养基灭菌一般使用高压蒸汽灭菌法（或湿热灭
菌法），使用J号培养基的目的是筛选出具有链霉素抗性的大肠
杆菌，所以J号培养基属于选择培养基。
（（）菌落平均值为（4（:脂4（将脂4JJ）dJZ4（细，6号培养液中大肠杆
菌密度约为4（细[4使6d使!4Z4!（细[4使L（个\加O）；使用细菌计数板
直接计数会把死菌也计入，所以计数结果偏大。
。"## &’H…
刷考点
!!*"【解析】外植体消毒时先用体积分数为L使9的酒精处理J使·，
然后立即用无菌水清洗（GJ次，再用质量分数为:9左右的次氯
酸钠溶液处理J使 加=胞后，立即用无菌水清洗（GJ次，，正确；外
植体插入培养基时需形态学上端朝上，0错误；在诱导外植体形
成愈伤组织的过程中一般不需要给予光照，&正确；将幼苗先移植
到消过毒的珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土，1正确。
方法总结 外植体消毒过程：用酒精擦拭双手和超净工作台
台面"外植体（幼嫩的茎段）流水冲洗"酒精消毒"无菌水清
洗"次氯酸钠溶液处理"无菌水清洗。
#!."
题图分析 题图中"是接种外植体的过程，体是脱分化过程，
#和质分别是诱导生芽和诱导生根的过程，有是幼苗形成新
的植株的过程。
【解析】由题图分析可知，"过程是接种外植体，该过程需要消毒
以实现无菌操作，，错误；体是脱分化过程，脱分化过程中也有基因的选择性表达，0错误；由题图分析可知，#是诱导生芽，
质是诱导生根，两个过程所用植物激素的比例不同，&错误；有是
幼苗形成新的植株的过程，该过程中存在细胞的分裂、生长、分
化和凋亡，1正确。
%!*"【解析】植物体细胞杂交技术打破了不同物种间的生殖隔离，
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
能实现远缘杂交育种，，正确；植物体细胞杂交技术的关键环节
!!!!!!!
"" W(cid:218)(cid:212)(cid:213)@—8V!"(cid:214)[@08!"(cid:215)+F(cid:216)
(cid:217)¨(cid:218)(cid:219)¡(cid:220)(cid:214)[¢(cid:221)29(cid:222)(cid:223)Q«$%RSC
g)(cid:128)(cid:224)986.9W(cid:218)[/>Æ(cid:137)(cid:138)
是原生质体间的融合，0错误；矮牵牛—粉蓝烟草植株的培育依
据了植物细胞全能性和细胞膜具有流动性等原理，&正确；矮牵
牛和粉蓝烟草原来都是可育的，都具有同源染色体，故获得的矮
牵牛—粉蓝烟草杂种植株在理论上也是可育的，1正确。
&!"
题图分析
’!""【解析】题述化学重编程技术通过化学因子诱导皮肤细胞
基因表达模式改变，使其转化为多能干细胞，但未改变细胞
的遗传信息，，错误；从题干可知，该过程没有涉及核移植技
术，而运用了动物细胞培养等技术，0错误；细胞的全能性是
指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体或分化成其他
各种细胞的潜能，该过程只是将皮肤细胞诱导形成多能干细
胞，再分化成自然杀伤细胞，没有体现动物细胞的全能性，&
正确；自然杀伤细胞（),细胞）与细胞毒性 @细胞是不同的
免疫细胞，),细胞不需要抗原刺激，而细胞毒性 @细胞需要
抗原刺激，1错误。
”!$"."【解析】动物细胞培养时通常先将组织块剪碎，再用胰蛋
白酶或胶原蛋白酶等处理将其分散成单个细胞，，正确；原代培
养过程中，细胞有丝分裂时可能会因复制出现差错而发生基因
突变，也会存在部分细胞死亡，0错误；传代培养的细胞遗传物质
可能发生改变，使其具有类似癌细胞的特点而获得无限增殖的
!!!!!!!!!!!!!!!!
能力，&正确；从题图中可以看出，随着细胞传代次数增加，传代
!!
" 代(cid:128)Hg(cid:226)!"B
的间隔时间基本相等，1正确。)!$"【解析】从小鼠脾中获取的能产生抗体的0淋巴细胞不能大
量增殖，，错误；题图中过程#采用克隆化培养和抗体检测筛选
出能产生特定抗体的杂交瘤细胞，0正确；题图中过程体筛选得
到的细胞为杂交瘤细胞，但该杂交瘤细胞未必能产生所需抗体，
&正确；单克隆抗体制备过程涉及的细胞工程技术有动物细胞培
养、动物细胞融合等，1正确。
+!$"【解析】对于悬浮培养的细胞，由于细胞悬浮在培养液中，
直接用离心法即可使细胞沉淀下来，从而收集细胞，若骨髓
瘤细胞为悬浮培养细胞，可以直接用离心法收集细胞，，正
确；杂交瘤细胞分泌的抗体由 0淋巴细胞决定，针对的是初
始免疫的抗原，而非 M0）（M0）用于转化已免疫的 0淋巴细
胞使其染色体稳定），0错误；灭活病毒（如仙台病毒）的作用
是促进细胞膜融合，细胞核融合是自发过程，病毒不直接参
与，&错误；M0）转化细胞能在’，@培养基中存活，骨髓瘤细
胞在’，@培养基中不能存活，故 ’，@培养基去除的是未融
合的骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的同种核细胞，M0）
转化细胞对泌转故敏感，骨髓瘤细胞对 泌转故不敏感，故 泌转故可
去除未融合的M0）转化细胞和 M0）转化细胞自身融合的同
种核细胞，1错误。
。!（4）逆转录"质粒
（（）二次免疫后，能产生特定抗体的0淋巴细胞更多
（J）维持培养液的R’
（6）单克隆抗体，；能特异性识别M）L4并检测出感染M）L4的
细胞，且中和效果好
（:）快速检测是否感染，以便有效治疗患者
【解析】（4）以；)，为模板构建W1)，需要经过逆转录过程。 质
粒是基因工程最常用的载体，除此之外，还可以用噬菌体、动植
物病毒等作为载体，因此将目的基因导入大肠杆菌时需要构建
表达载体，常用的表达载体是质粒。
（（）在小鼠腹腔内注射）*4蛋白进行免疫J:天，在获取0淋巴
细胞前J天再次注射）*4蛋白，可以通过二次免疫产生更多的
能产生特定抗体的0淋巴细胞。
（J）在杂交瘤细胞筛选培养过程中需在培养基中添加胎牛血清，
并置于JL 度的&泌 培养箱中培养，培养箱中&泌 的主要作用是
（ （
维持培养液的R’。
（6）由题图（可以看出，使用单克隆抗体，与单克隆抗体0均能
特异性识别M）L4并检测出感染M）L4的细胞，但单克隆抗体，
的中和效果好。
（:）该单克隆抗体具有很高的特异性，能够快速检测是否感染，
以便有效治疗患者。
!-!."【解析】在核移植技术中，常将采集到的卵母细胞培养至#实
期，采用显微操作法去除卵母细胞的细胞核，再用物理或化学
方法激活重新组合的细胞，使其完成细胞分裂和发育进程，，、&正确；体细胞核移植技术在畜牧业生产方面主要可以加速家畜
遗传改良进程、促进优良畜群繁育，0正确；核移植时，提供卵
母细胞的动物为雌性，提供细胞核的动物可以不是雌性，1
错误。
!!!."【解析】题图中过程"用含血清的液体培养基，置于含B:9
空气和:9&泌 的培养箱中培养，，正确；由于人们对动物细胞
（
培养所需的营养物质尚未研究清楚，所以在培养时，通常在培
养基中添加天然营养物质，如血清等，0正确；体细胞克隆猴的
培育过程中，体现了动物体细胞核的全能性，&正确；去核卵母
细胞含有细胞质基因，也会遗传给子代食蟹猴，因此代孕母猴
分娩的食蟹猴性状表现和提供卵母细胞的雌性食蟹猴有关，1
错误。
!#!*"【解析】由题图可知，甲组的；)，加将，修饰水平高于乙组，
这表明分化程度越高的细胞中；)，加将，修饰水平越低，，错
误；观察题图中数据，在卵裂期和囊胚期，甲组作为核供体时重
构胚的发育效率均高于乙组，由此可以推出，核供体细胞的分
化程度越低，核移植重构胚的发育效率越高，0正确；题干及题
图中仅展示了不同分化程度细胞的；)，加将，修饰水平以及对
应的重构胚发育效率情况，并没有关于抑制重构胚的；)，加将，
修饰水平对早期胚胎发育效率影响的相关信息，所以无法得出
抑制重构胚的；)，加将，修饰水平可提高早期胚胎发育效率的
结论，&错误；该研究只是比较了不同细胞的；)，加将，修饰水
平和作为核供体时重构胚的发育效率，未提及胚胎移植操作技
术，1错误。
!%!""【解析】胚胎移植是胚胎工程的最后一道环节，，错误；用外
源促性腺激素对供体母羊进行超数排卵处理，0错误；胚胎移
植时，要对受体母羊与供体母羊进行同期发情处理，为移入受
体的胚胎提供适宜的生理环境，&正确；应选择发育良好、形态
正常的桑葚胚或囊胚进行移植，1错误。
!&!*"【解析】题图过程"中受体细胞培养到#实期后，常用显微
操作法完成去核操作，，正确；精子获能后才具备与卵细胞受
精的能力，因此题图过程体单精子注射前，解冻的精子需要先
进行获能处理，0错误；受精作用中，防止多精入卵的两道屏障
为透明带反应和卵细胞膜反应，因此与正常受精过程相比，单
精子注射的优点为卵子的透明带和卵细胞膜无需发生生理反
应，即可防止多精入卵，&正确；由题干信息可知，将体细胞核
移植（+&)@）胚胎的内细胞团（了&#），注入去除 了&#的胚胎
（了&+了胚胎，由单精子注入卵细胞形成）囊胚腔中，实现滋养层
细胞替代，成功克隆出一只健康的雄性恒河猴，由于重组胚胎
完成了滋养层细胞替代，不能用滋养层细胞的 1)，进行恒河
猴遗传病筛查，1正确。
刷热点
!!$"."【解析】抗体—药物偶联物（，1&）通常由抗体、接头和药物构成，@）中的抗体能特异性识别肿瘤细胞表面的组织因子
（@.），将，1&靶向运输到肿瘤细胞，药物是微管破坏剂，起到杀
伤作用，，正确；题图中"为@.，其基因的表达具有组织特异性，
并不是在所有细胞中均表达，0错误；@）进入靶细胞后，蛋白酶
连接剂被水解而释放微管破坏剂，进而杀死癌细胞，&正确；@）
具有特异性识别作用，可专门进入癌细胞内起作用，一般不会损
伤正常细胞，1正确。
#!（4）获得能产生特定（与乳腺癌细胞表面抗原特异性结合的）抗
体的0淋巴细胞
（（）动物细胞融合"一定的流动性
（J）筛选杂交瘤细胞"既能大量增殖，又能产生特定抗体
（6）单克隆抗体能使药物精准地作用于乳腺癌（靶）细胞，避免其
他细胞受损
（:）由单一0淋巴（或杂交瘤）细胞克隆产生的、只识别某一特
定抗原的特异性抗体（或由一种0淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合
得到的单一杂交瘤细胞产生的特异性抗体）
【解析】（4）向小鼠注射的特定抗原应取自人的乳腺癌细胞，目的
是从小鼠体内获得能产生特定（与乳腺癌细胞表面抗原特异性
结合的）抗体的0淋巴细胞。
（（）题图中步骤"是指动物细胞融合，实现该过程依赖于细胞膜
具有一定的流动性的结构特点。
（J）题图中步骤体是指筛选杂交瘤细胞，经步骤#筛选得到
的杂交瘤细胞具有的特点是既能大量增殖，又能产生特定
抗体。
（6），1&中的单克隆抗体能使药物精准地作用于乳腺癌
（靶）细胞，避免其他细胞受损，故能降低乳腺癌治疗药物的
副作用。
（:）单克隆抗体是指由单一 0淋巴（或杂交瘤）细胞克隆产
生的、只识别某一特定抗原的特异性抗体（或由一种 0淋巴
细胞与骨髓瘤细胞融合得到的单一杂交瘤细胞产生的特异
性抗体）。
%!$."【解析】灭活的病毒或*M激诱导可以促进细胞融合成双杂
交瘤细胞，，正确；杂交瘤细胞由已免疫的0细胞和骨髓瘤细胞
融合形成，无需接触抗原就能产生抗体，0错误；双杂交瘤细胞能
够悬浮在培养基中生长繁殖，若要传代培养，细胞培养液直接离
心，去除上清液培养基，加入新鲜培养基即可，不需要用胰蛋白酶
处理，&错误；体外培养动物细胞需要一定的气体环境，常将其置
于含B:9空气和:9&泌的混合气体的&泌培养箱中培养，1正确。
!!! （ （
"""" 。>?B:99泌Q泌 V(cid:155)ªX¿(cid:228)˙!"
（ （
97(cid:229)(cid:134)0
&!（4）动物细胞融合、动物细胞培养
（（）*+#，、&1（细"灭活病毒诱导"抗原与抗体特异性结合
（J）多种"双特异性抗体*+#，K&1（细既能结合*+#，，又能结
合&1（细，使&1（细在癌细胞与@细胞结合部位聚集，从而有效激活@细胞杀伤癌细胞
【解析】（4）制备双特异性单克隆抗体的过程中用到的动物细胞
工程技术有动物细胞融合（诱导0细胞和骨髓瘤细胞融合）和动
物细胞培养技术（培养0细胞等）等。
（（）制备双特异性抗体 *+#，K&1（细 时，*+#，、&1（细 相当于抗
原，需要先将*+#，、&1（细分别注射到小鼠体内刺激小鼠产生能
分泌相应抗体的0淋巴细胞，再分离出0淋巴细胞；灭活病毒诱
导法是动物细胞融合特有的诱导方法；抗原与抗体的结合具有
特异性，故利用抗原与抗体特异性结合的原理可筛选出能分泌
所需抗体的杂交瘤细胞。
（J）融合细胞会表达出两种 O链和两种 ’链，而 O链和 ’链
又是随机组合的，所以杂交瘤细胞 ，K0会产生多种抗体；双
特异性抗体*+#，K&1（细协助杀伤癌细胞的机理是双特异性
抗体*+#，K&1（细既能结合 *+#，，又能结合 &1（细，使 &1（细
在癌细胞与@细胞结合部位聚集，从而有效激活 @细胞杀伤
癌细胞。
。"%# =uH…
刷考点
!!""【解析】限制酶可以切割磷酸二酯键，不能切割氢键，可以产
生平末端也可以产生黏性末端，，错误；酶的专一性是指每种酶
只能催化一种或一类化学反应，故@61)，连接酶具有专一性，0
错误；将目的基因导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法和
花粉管通道法，&正确；检测目的基因是否翻译应使用抗原—抗
体杂交技术，1错误。
#!."【解析】题图中有启动子和终止子等，完整质粒还需具备的
结构有限制酶的切割位点、标记基因、复制原点等，，正确；启
动子是；)，聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出
加；)，，0正确；引物.与； 或.与； 结合的部位包含一段
（ 4 4 （
U基因的碱基序列和一段不属于U基因的碱基序列，因此若用
*&；检测U基因是否连接到质粒中且方向正确，选用的一对引
物可以是.和；，&正确；若U基因的模板链在、链上，根据启
4 （
动子和终止子的位置可知，、链从左到右为Jb端":b端，又因为
1)，复制的方向是子链的:b端"Jb端，即从引物Jb端开始连接脱
氧核苷酸，由题图可知，引物.结合在目的基因左侧，所以其应与
4
、链相应部分序列互补，与故链相应部分序列相同，1错误。
解题关键 基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，基因
表达载体主要由启动子、目的基因、标记基因、终止子和复制
原点等组成，其中标记基因可用于筛选重组1)，分子，可以
是四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等，也可以是荧光蛋
白基因或使产物能显色的基因。
%!*"【解析】农杆菌可将@=质粒上的@K1)，整合到水稻细胞的
染色体1)，上，，正确；转录的方向为启动子到终止子，结合题图甲可知，新霉素抗性基因和V>。、19基因的转录方向不同，故
二者的编码链在1)，的不同链上，0错误；题图乙的实验目的是
对转化的植物细胞进行目的基因检测，阴性对照通常选用非转
基因水稻1)，，阳性对照可选用R&J:+DK激·M；.将，&正确；根据
阳性对照组电泳结果可知，目的基因的长度大约为4 使使使 、R，4
的电泳结果与阳性对照组相似，说明转基因水稻1)，经*&；扩
增出的1)，分子长度与目的基因的基本一致，但要确定其是不
是目的基因，还需要进行测序，1正确。
&!."
题图分析
’!（4）&"0"防止目的基因自身环化，使目的基因定向连接到质
粒上，以增大目的基因正向（正确）连接的概率
（（）依次使用含卡那霉素的培养基和含潮霉素的培养基筛选，能
够在含卡那霉素的培养基中生长，而不能在含潮霉素的培养基
中生长的大肠杆菌即为导入重组质粒的大肠杆菌
（J））/@RO，基因过表达导致 F0I: 基因表达的 加；)，去甲基
化，进而导致F0I:基因过表达而引起胃癌细胞迁移
【解析】（4）据题图4分析，利用*&；扩增目的基因F0I:时，在
1)，复制过程中，子链的延伸方向是从:b端到Jb端，且F0I:基
因的】链为转录的模板链，则该基因转录的方向为从右向左，故
需要在引物&的:b端添加R$-’(识别序列和强启动子序列，在
引物0的:b端添加F$&(识别序列。 目的基因两端用不同限制
酶切割的原因是防止目的基因自身环化，使目的基因定向连接
到质粒上，以增大目的基因正向（正确）连接的概率。
（（）题图4显示，目的基因F0I:的两侧有R$-’(、F$&(的识别
位点，且二种酶不会把强启动子切割掉，因此为确保目的基因正
确插入质粒，需要选择限制酶R$-’(、F$&(切割质粒。 将重组
质粒导入大肠杆菌时，可利用潮霉素和卡那霉素筛选出导入重
组质粒的大肠杆菌。 由于限制酶R$-’(和F$&(切割后破坏了
潮霉素抗性基因，故可依次使用含卡那霉素的培养基和含潮霉素的
培养基筛选，能够在含卡那霉素的培养基中生长，而不能在含潮霉素
的培养基中生长的大肠杆菌即为导入重组质粒的大肠杆菌。（J）根据题图J结果可知，）/@RO，基因沉默会减少癌细胞迁移
量，F0I:基因过表达可在一定程度上恢复）/@RO，基因沉默减
少的癌细胞迁移量。 因此推测）/@RO，基因过表达会导致F0I:
基因表达的加；)，去甲基化，进而导致F0I:基因过表达而引起
胃癌细胞迁移。
”!（4）使1)，聚合酶能够从引物的Jb端开始连接脱氧核苷酸
（（）O7*V,和R$-’(
（J）农杆菌转化"染色体1)，
（6）0"0$L1)，聚合（耐高温的1)，聚合）
（:）2JC(和。&C；("抑制乙烯受体基因的表达，从而无法正常
识别乙烯信号，进而延缓成熟
【解析】（4）用*&；技术扩增）!I=、3，$基因时需要添加引物，引
物的作用是使1)，聚合酶能够从引物的Jb端开始连接脱氧核
苷酸。
（（）为了便于筛选重组1)，分子需要保留抗生素抗性基因，故
不能选择F-$(；综合质粒和目的基因两侧的酶切位点采用双
酶切法时，选用的两种限制酶组合是O7*V,和R$-’(。
（J）当农杆菌侵染番茄细胞后，能将插入了目的基因的@=质粒中的
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
@K1)，转移到番茄细胞中，并且将其整合到受体细胞的染色体
!!!!!!!!!
"" 体(cid:132)9W(cid:218)(cid:231)<—8!"Ł«MØŒ˘’()
1)，上。
（6）利用*&；检测题图（的连接是否正确，应当将强启动子和
）!I=、3，$基因都扩增出来，所以可选择的引物组合是"脂#，故
选0。 该 *&；反应体系中需加入 0$L1)，聚合酶，以此来扩
增1)，。
（:）利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，能进入受体细
胞的是携带目的基因的@K1)，片段，O0、；0分别是@K1)，的左
边界、右边界，且需使该植物原有的。B>3基因翻译受抑制，因此
。B>3基因（乙烯受体基因）应反向插入O0和；0之间，提取的目
的基因，、0两端需分别添加2JC(和。&C；(的识别序列。 推测
该方法提高番茄储藏时间的机理是抑制乙烯受体基因的表达，
从而无法正常识别乙烯信号，进而延缓成熟。
)!（4）引物和脱氧核苷酸"2-$(和R&E(
（（）使甲烷氧化菌处于一种能吸收周围环境中1)，分子的生理
状态"提供碳源且诱导>导E。基因表达"能在含氨苄青霉素的培
养基生长且不发出绿色荧光
（J），
【解析】（4）利用*&；技术扩增>导E。基因时，体系中因参与反应
不断消耗而浓度下降的组分有引物和脱氧核苷酸。 为了使目的
基因和质粒能正确连接，需要双酶切，根据题图可知，在构建重
组质粒时，需要获得具有相同黏性末端的目的基因和质粒，为保
证目的基因的完整性，再结合题图中目的基因的转录方向以及
质粒的转录方向分析，目的基因应选择2-$(和R$-’(进行酶切；R$-’(和R&E(酶切所产生的黏性末端相同，并且2-$(和
F-$(的识别序列相同但切割位点不同，故质粒应选用限制酶
2-$(、R&E(进行酶切处理。
（（）将重组质粒导入甲烷氧化菌前一般先用&故（脂处理，目的是使
处理后的甲烷氧化菌处于一种能吸收周围环境中 1)，分子的
生理状态。 转化后再放入含甲烷的培养基中培养，其中甲烷可
提供碳源且诱导>导E。基因表达（因为@启动子是一种甲烷诱导
型启动子），筛选能在含氨苄青霉素的培养基生长且不发出绿色
荧光的菌落作为目的菌株。 因为构建的重组质粒中含有氨苄青
霉素抗性基因，且由于重组质粒上绿色荧光蛋白基因被破坏，因
此成功导入重组质粒的甲烷氧化菌形成的菌落不能发绿色
荧光。
（J）@启动子是一种甲烷诱导型启动子，因此甲烷除了提供碳源
外，还可诱导目的基因的表达，为确定目的基因是否与@启动子
正确连接，根据题图V引物的位置可知，选择引物"#可扩增出
目的基因和@启动子结合的序列，且不浪费资源（若选择"质，
即使没有实现目的基因和 @启动子的重组，也有 *&；扩增产
物），，正确。
+!."【解析】蛋白质工程操作的对象是基因，需对基因进行改造
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
或合成，是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程，，
!!
"" ，(cid:151)<(cid:212)(cid:213)¢?M(cid:253)º(cid:236)，(cid:151)<
正确；蛋白质工程可通过改造或合成基因，对现有蛋白质进行改
造，或制造一种新的蛋白质，0正确；题图中"为转录，体为翻译，
大肠杆菌是原核生物，转录和翻译可同时进行，&正确；物质故为
加；)，，加；)，序列改变，由于密码子具有简并性，最终编码的多
肽链、可能不变，1错误。
刷热点
!!""【解析】&故·B蛋白相当于限制酶，能作用于脱氧核糖和磷酸之
间的磷酸二酯键，，错误；若要将目标基因从目标1)，上切除，一
般需要设计（种不同的·$；)，，分别结合在目标基因两侧，0错
误；为了降低免疫排斥反应，研究者借助&；了+*；\&故·B技术敲除
了移植猪肾脏的的KV$E基因，故推测的KV$E基因编码的蛋白质可
能是猪的主要组织相容性抗原，&正确；由于】链与·$；)，上相
应识别序列的互补序列互补，故相应的·$；)，上的识别序列为
…D&&，&，，D&…，1错误。
#!（4）体
（（）（"限制酶"两个5Q^*序列方向相反
（J）上游"表达
（6）农杆菌转化"敲除
（:）"限制酶和1)，连接"V1""体&于/酶能（特异性识别并）
切割5Q^*序列，使V1"基因得以表达"延长热处理时间
【解析】（4）"和#的碱基序列相同，即"和#两条链之间不具有
方向性，体中的序列具有方向，因此决定方向的是序列体。（（）&于/酶识别1)，分子上同向排列的两个相同的 5Q^*序列，
并在特定位点进行切除，题图（中片段4自身环化且带有待敲除
基因，因此应保留片段（来实现目标基因敲除。 &于/酶的功能类
似于基因工程中的限制酶。 如果位于同一条1)，上的两个5Q^*
序列方向相反，&于/酶作用后可能会使两个5Q^*间的序列反转。
（J）&于/\5Q^*重组酶系统调控基因的表达，在目的基因上游插入
两端带有5Q^*位点的编码终止密码子的序列，&于/酶存在时会对
5Q^*位点进行切割，使新插入的终止密码子不发挥作用，因此目
的基因可以表达。
（6）将目的基因导入植物细胞通常采用农杆菌转化法，转入后将
标记基因敲除，以免其继续留在烟草体内并将该标记基因转移
到杂草中，造成基因污染。
（:）"构建基因表达载体时，可用限制酶和1)，连接酶处理将
5Q^*序列、VXF基因及V1"基因连接，接上J:+启动子之后可在
组织中检测出蓝色区而无绿色荧光区，是因为V1"基因自身无
启动子而不能表达。 体IBY基因经过热处理后可被激活表达，
&于/酶能切割5Q^*序列，使V1"基因得以表达，最终出现绿色荧
光区，延长热处理的时间使IBY基因充分表达，可以扩大绿色荧
光区的面积。
%!（4）引物4和J"仅能检测 1)，分子的大小，无法确定其碱基
序列
（（）启动子"都有规则的双螺旋结构"病毒只能寄生在活细
胞中
（J），1
（6）悬浮"昆虫细胞属于真核细胞表达系统，能对肽链进行正确
的加工（盘曲折叠、组装、修饰），保证了表达蛋白的活力（答案合
理即可）
【解析】（4）*&；技术要求引物与模板链的 Jb端互补配对，且
1)，聚合酶从引物的Jb端开始连接脱氧核苷酸。 启动子是一段
位于基因上游的1)，序列，转录时；)，聚合酶识别并结合启动
子后，沿基因的模板链从Jb":b方向转录出加；)，。 由题图（可
知，Z83基因模板链的Jb端在右侧，因此Z83基因旋转4细使k后才
能与融合基因的启动子准确连接，同时Z83基因和O7>基因的模
板链需位于融合基因的一条链上，如下图。 要判定 Z83 基因与
O7>基因连接成的融合基因已准确连接，需要选择能扩增出融合
基因的引物组合。 因此，引物4和引物J可以分别与融合基因中
Z83基因下链的Jb端和O7>基因上链的Jb端互补配对，从而扩增
出准确连接的融合基因。琼脂糖凝胶电泳技术仅能检测1)，分子的大小，无法确定其碱
基序列，故*&；扩增产物还需进行序列测定。
（（）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等。
启动子位于目的基因的上游，终止子位于目的基因的下游，昆虫
’.细胞能高效表达外源基因与载体上的启动子有关；外源基因
和病毒1)，都具有规则的双螺旋结构，可以拼接；病毒只能寄
生在活细胞中，因此构建重组杆状病毒要在昆虫细胞系中共
转染。
（J）结合题图分析，在昆虫+.B细胞中，发生了同源重组，最终使
乙、Z83、O/gK（及杆状病毒基因组连接到一起。 +.B细胞中能合
成重组杆状病毒而不能合成野生型杆状病毒，说明野生型杆状
病毒具备的是3泌；.，在进行共转染同源重组时，0，&线性1)，
上的甲替换了重组转移载体质粒上的乙，使重组杆状病毒能在
昆虫细胞中复制，说明乙为泌；.，因此+.B细胞中只能合成重组
杆状病毒而不能合成野生型杆状病毒，，符合题意；0，&线性
1)，通过同源重组形成环状重组杆状病毒，故 0，&线性 1)，
为线状而非环状不是+.B细胞中只产生重组杆状病毒的必要条
件，0不符合题意；抗生素抗性基因作为标记基因，用于筛选重组
载体，与重组杆状病毒的产生无关，&不符合题意；0，&线性
1)，含杆状病毒基因组，才能提供病毒复制所需的遗传物质，从
而使得+.B细胞中能产生重组杆状病毒，1符合题意。
（6）为扩大疫苗产量，昆虫’.细胞应选择悬浮生长型细胞，原因
是悬浮生长型的细胞可以与营养物质、氧气等更好地接触，有利
于细胞的增殖以及目的基因快速高效表达。 大肠杆菌缺乏真核
细胞的修饰加工系统，可能导致蛋白质错误折叠或抗原性丧失。
与大肠杆菌为受体细胞相比，昆虫细胞属于真核细胞表达系统，
能对肽链进行正确加工（盘曲折叠、组装、修饰），保证了表达蛋
白的活性，因此用昆虫细胞作为受体细胞生产）O*可更好地保
留iR4蛋白的抗原性。
。012#-# (cid:190)(cid:133)Q(¿(cid:192)
!!""【解析】基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，不是通过
*&；扩增获取目的基因，，错误；由于载体M只有产生黏性末端
的酶切位点，要使用中间载体*将目的基因接入载体M，同时为
防止载体自身环化，需要用两种限制酶分别切割载体M和中间
载体*，据题图可知，中间载体*和载体M均含有限制酶2JC(
和">!(的切割位点，故可选用2JC(和">!(对载体 *进行酶
切，0错误；由题图可知，载体*是中间载体，不含有表达该目的
基因的启动子与终止子，&正确；受体细胞表现出抗性基因的相
应性状，可能是导入了重组质粒，也可能是只导入了空质粒（不
含目的基因的质粒），1错误。#!$"
题图分析
%!$"【解析】依据题干信息，选用限制酶甲对R#14细K@载体进行
酶切，使用末端转移酶处理，在切口处加入一个碱基@，结合题图
可知，限制酶甲切割后产生的末端是平末端，应为。&C；4，乙酶
能将F@的D基因与载体连接起来，说明乙酶为1)，连接酶，，正
确；据题图可知，质粒和F@的D基因产生的末端不同，所以不易导
致F@的D基因或载体发生自身环化，0错误；由题图可知，重组质
粒的/$&KN基因被破坏，重组质粒不会编码相应的酶分解者K激故5
进而产生蓝色物质，所以在含氨苄青霉素和者K激故5的培养基上
培养受体菌，含重组质粒的菌落呈现的是白色，&错误；由于
。&C；4产生的末端为平末端，缺乏定向性，所以若不进行末端修
饰，正确连接的重组质粒可被限制酶甲酶切，而反向连接的重组
质粒也可被限制酶甲酶切，1错误。
&!."【解析】引物是根据目的基因两侧的碱基序列制备的，需要
与目的基因两端互补，故若通过*&；技术大量扩增该目的基因，
应该选用引物甲和引物丙，，正确；题图甲中R$-’(会破坏两
种标记基因，不能选用，由题图乙可知，目的基因左侧只能选用
R&E(切割，而质粒上没有F$导J，(的酶切位点，但质粒和目的基
因两侧都有O7*V ,的酶切位点，因此应选用R&E(和O7*V ,切
割质粒和目的基因，0正确；将基因表达载体导入受体细胞，需用
&故（脂处理受体细胞，使其处于一种能吸收周围环境中1)，分子
的生理状态，&正确；构建基因表达载体时氨苄青霉素抗性基因
被破坏，故在受体细胞中，其不能和目的基因同时表达，1错误。
’!（4）:b端"，激，@&@"R$-’(、。&C；(
（（）栽培马铃薯愈伤组织细胞的染色体1)，上"（
【解析】（4）为了使目的基因能够正确连入载体，扩增目的基因
时，需要在引物的:b端添加限制酶的识别序列，结合题图、表分
析，为了不破坏+基因，且避免载体、目的基因发生自身环化和
目的基因与载体反向连接，需要用R$-’(、。&C；(切割载体，用
R$-’(的同尾酶R酶E实及。&C、(切割+基因，故*&；扩增+基因时需在上游引物:b端添加的碱基序列是:bK，激，@&@KJb。
（（）@K1)，属于可转移的1)，，用携带+基因的农杆菌侵染栽
培马铃薯愈伤组织时，基因表达载体中@K1)，进入愈伤组织细
胞，将+基因整合到栽培马铃薯愈伤组织细胞的染色体1)，上，
抗性基因4位于@K1)，外部，不能用于筛选含有重组载体的愈
伤组织，而抗性基因（位于@K1)，内部，可用于筛选成功转化
的愈伤组织。 该愈伤组织经再分化形成芽、根，继续培育可获得
抗寒能力显著增强的马铃薯植株。
。012#!# *&；`´(ˆfi(cid:154)(cid:143)\
!!$"【解析】巢式*&；使用两对引物进行两轮扩增，其中第二轮
扩增的引物是根据第一轮扩增的中间产物设计的，因此具有更
高的特异性，这种特异性使得巢式*&；能够更准确地扩增目标
1)，片段，降低了扩增多个靶位点的可能性，，正确。 根据题图
和巢式*&；的原理可知，第一次*&；扩增应该使用引物"和引
物质，它们分别与目标1)，片段的两端互补，从而能够扩增出
包含整个目标片段的中间产物，引物体和引物#则是用于第二
轮扩增的引物，它们与中间产物的两端序列互补，0错误。 巢式
*&；的两个阶段不在同一体系中进行，因为第二阶段需要去除
第一阶段的引物等，以免干扰第二阶段的特异性扩增，&错误。
*&；扩增1)，分子的过程分为变性、复性、延伸三步，变性时温
度在B使度以上，双链1)，解旋为单链；复性时温度下降到:使度
左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链 1)，结合；延伸
时温度上升到L（ 度左右，溶液中的6种脱氧核苷酸在耐高温的
1)，聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的 1)，
链，1错误。
#!""【解析】利用*&；技术扩增基因时，高温变性使1)，双链解
旋，不需要解旋酶来打开1)，双链，，正确；引物体和引物#中
部分序列可互补配对，引物之间的结合会干扰引物和模板链的
结合，因此不能在同一个反应体系中进行进>BY进:基因和$-】基
因的扩增，0正确；进>BY进:基因和$-】基因混合后可以得到两种
类型的杂交链，&错误；杂交链延伸得到进>BY进:得$-】融合基因的
过程中，不需要加入引物，两条母链位于杂交带处的Jb端的碱基
序列可作为子链合成的引物，1正确。
解题关键 进>BY进:基因和$-】基因混合后除得到题图中杂交
链的类型外，还有两基因各自的另外一条链之间在:b端互补
配对形成的杂交链，这种类型的杂交链不会延伸。
%!."【解析】引物需根据目的基因的碱基序列进行设计，本研究
中8P&B!基因为目的基因，，正确；#$（脂可激活0$L1)，聚合酶，
故*&；反应体系中需加入#$（脂，0正确；疟原虫8P&B!基因编码
的蛋白，在第L将位发生了赖氨酸到苏氨酸的改变，实质是 8P&B!
基因发生了基因突变，即碱基对，—@被替换为&—激，&正确；根
据题图（结果可知，.4K；4引物只扩增出一个条带，说明能够用于特异性扩增目的基因片段，.4K；（引物扩增条带有三条，说明
其不能用于特异性扩增目的基因片段，.（K；4无法扩增出目的
基因条带，说明.（为无效引物，无法使用，.4K；4引物只扩增出
一个目的基因条带，.4K；（引物扩增出三条目的基因条带，说明
；（引物无法特异性扩增目的基因条带，1错误。
&!""【解析】*&；扩增时需要根据目的基因两侧的碱基序列来设
计引物，因此限制性引物和非限制性引物均需要依据模板1)，
的碱基序列来设计，，正确；当限制性引物基本耗尽，双链 1)，
的合成速率显著下降，此时非限制性引物会继续引导单链 1)，
的合成，非限制性引物是与乙链结合的，故反应的最后阶段只产
生初始 1)，中一条链的拷贝（非限制性引物引导合成的单链），
最后大量获得的··1)，与题图中甲链的碱基序列一致，0正确；
扩增时耐高温的1)，聚合酶将6种脱氧核苷酸连接至引物的Jb
端，即题述过程中子链延伸均是沿限制性引物和非限制性引物
的Jb端进行的，&错误；因为双链1)，和单链1)，的分子量大
小不同，可通过电泳方法将其分离，1正确。
4
’!（4） 1)，的半保留复制"
细
（（）模板链"碱基互补配对
（J）乙、丙"目的基因反向连接
【解析】（4）*&；技术的原理是1)，的半保留复制。 利用 *&；
技术扩增目的基因时，由于1)，聚合酶只能从引物的Jb端延伸
1)，链，因此要用两种引物才能确保1)，两条链同时被扩增，
故一个1)，分子经6轮循环以后，不同时含有两种引物的1)，
（ 4
分子占 Z 。
4将 细
（（）引物长度一般在4:GJ使 、R，如果引物过短则特异性差，易与
模板链随机互补结合从而发生错配；如果引物过长则自身容易
发生碱基互补配对而形成稳定的双链结构，不能发挥引物的
作用。
（J）分析题图可知，理论上可以选择的引物组合有甲和丙、乙和
丙两种。 如果选择甲和丙这对引物，则无论目的基因是否正确
插入，扩增的片段都是:使脂J使使脂4使使Z6:使（、R），不符合要求；如
果选择乙和丙这对引物，正向连接和反向连接后所得结果不同，
所以应选择乙和丙这对引物进行*&；鉴定。 如果质粒和目的基
因反向连接，则引物乙会出现在题图示重组质粒的外侧，此时若
加入引物甲和乙，则可以扩增出J使使脂4使使Z6使使（、R）的片段。
”!（4）蛋白质"脱氧核苷酸序列
（（）@—，或&—激"@
（J）引物（和引物J中存在互补配对片段，置于同一反应体系时
它们会发生结合而失去作用
（6）用限制酶,8*(分别处理天然水蛭素基因和上述过程获得
的突变后的基因，然后对二者进行琼脂糖凝胶电泳，观察电泳结
果（合理即可）"上述过程获得的突变后的基因的电泳条带只有一条且大于天然水蛭素基因的电泳条带（合理即可）
【解析】（4）改造水蛭素基因时，要建立功能与结构的联系，需要
运用蛋白质工程对水蛭素分子进行改造，具体过程为从预期的
水蛭素功能出发，设计水蛭素的蛋白质结构，推测出相应的氨基
酸序列，再依据中心法则推测出对应的脱氧核苷酸序列，进而运
用重叠延伸*&；技术改造基因。
（（）由题干可知，天然水蛭素第6L位天冬酰胺密码子为，，&、
，，D，则其对应基因模板链中的碱基为@@激、@@，，而赖氨酸的密
码子为，，，、，，激，其对应基因模板链中的碱基为@@@、@@&，故
若拟突变位点的碱基对为 ，—@，则需要让其突变为 @—，或
&—激才能达到目的。 引物为短单链核酸，引物（与J存在互补
配对的片段，故若引物（的突变位点设计为，，则引物J的突变
位点应设计为@。
（J）过程体和#不能在同一反应容器内同时进行，是因为引物（
和引物J中存在互补配对片段，置于同一反应体系时它们会发
生结合而失去作用。
（6）已知天然水蛭素基因可被限制酶,8*(识别并切割，特定位
点突变后的基因不能被,8*(识别，想要鉴定上述过程获得的突
变后的基因是否为定点突变基因，可以用限制酶,8*(分别处理
天然水蛭素基因和上述过程获得的突变后的基因，然后对二者
进行琼脂糖凝胶电泳，观察电泳结果。 若上述过程获得的突变
后的基因的电泳条带只有一条且大于天然水蛭素基因的电泳条
带，则上述过程获得的突变后的基因是定点突变基因。
。JKL
!!*"【解析】无氧条件下，乳酸菌能将葡萄糖分解成乳酸，不会
产生&泌，，错误；毛霉等多种微生物参与了腐乳的制作，0
（
正确；米饭蒸熟后温度过高，立即接种会导致酒曲粉中的微
生物死亡，影响发酵效果，&错误；与酒精发酵相比，醋酸发酵
需要在较高的温度条件下进行，1错误。
#!""【解析】提高生长素和细胞分裂素的比值可促进愈伤组织形
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
成根而不是芽，，错误；用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁获得原
!!!!!
"" 'X!"n(cid:237)(cid:153)9…‰r(cid:238)b7(cid:239)
生质体，0错误；胚胎移植前，可采集部分滋养层细胞进行遗传学
检测，&正确；动物细胞在进行传代培养时需要营造无菌、无毒以
及B:9空气脂:9&泌 的气体环境，1错误。
（
%!."【解析】紫草宁的获得不需要完整的个体，因此可通过植物
细胞培养获得紫草宁，，错误；生产紫草宁不需要培养获得紫草
植株，其原理并非植物细胞的全能性，0错误；紫草宁的细胞工厂
化生产主要是通过提高细胞数量来提高紫草宁产量的，&错误；
紫草宁是一类小分子有机化合物，不是紫草细胞生长和繁殖所
必需的，属于次生代谢物，1正确。
&!$*"【解析】果糖的组成元素中不含氮元素，因此无法为微生物
生长提供氮源，，错误；题述生产单细胞蛋白的过程中，需要酿酒酵母大量繁殖，整个生产过程不需要先有氧后无氧的操作，0
错误；使用连续搅拌反应器能够使营养物质在反应器中均匀分
布，有助于营养物质和微生物充分混合，保证微生物对营养物质
的充分摄取，&正确；可采取过滤、沉淀等方法将单细胞蛋白从培
养液中分离出来，1正确。
’!."【解析】因为接种环每一次划线之前需灭菌，最后一次划线
后也需灭菌，由题图可知，平板故中共划线了6次，故接种环至少
需要灼烧:次，，错误；过程体应取平板故中的单菌落置于培养
基、中，其主要目的是扩大培养，0错误；培养基 、 是液体培养
基，不应加入琼脂，&错误；若仅乙、丙组出现抑菌圈，则推测该抑
菌物质可能不抑制大肠杆菌的生长，1正确。
”!."【解析】该过程属于蛋白质工程，蛋白质工程的核心是通过
基因改造来改变蛋白质的结构和功能，从而获得具有特定功能
的蛋白质，，正确；常规胰岛素是通过天然的基因表达合成的，
而速效胰岛素是通过蛋白质工程，对基因进行改造后表达得到
的，二者的合成过程不完全相同，0正确；蛋白质工程是从预期的
蛋白质功能出发"设计预期的蛋白质结构"推测应有的氨基酸
序列"找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的
基因"获得所需要的蛋白质，&正确；酵母菌是真核生物，其细胞
内有内质网、高尔基体等细胞器，可对合成的蛋白质进行加工，
而大肠杆菌是原核生物，没有这些细胞器，其生产过程与酵母菌
生产速效胰岛素的过程不完全相同，1错误。
)!""【解析】目的基因整合到受体细胞基因组中属于基因重组，，
正确；用&故（脂处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中
1)，分子的生理状态，更容易将基因表达载体导入其中，0正
确；用限制酶2JC(和2($(切割质粒时氯霉素抗性基因会被切
割掉，但保留了潮霉素抗性基因，因此，可以先用含有潮霉素的
培养基，筛选出导入空白质粒和重组质粒的大肠杆菌，再采用
同位影印法接种到含有氯霉素的培养基0中，此时含有重组质
粒的大肠杆菌不能在含有氯霉素的培养基0上生长，与培养基，
相比，培养基0上消失的菌落就是符合要求的大肠杆菌菌落，结合
题图可知，符合要求的大肠杆菌在菌落J和:中，&错误，1正确。
方法总结 质粒上的双标记基因在用限制酶切割时，通常保
留其中一个。 用重组质粒上保留的标记基因筛选出含有质粒
的菌株，再通过同位影印接种法排除含空白质粒的菌株，从而
筛选出成功导入重组质粒的菌株。
+!$"【解析】1)，子链合成的方向为:b端到Jb端，因此通过已知
序列设计引物对未知序列进行扩增应选择引物4和引物6，，正
确；激&碱基含量越高，碱基对间氢键的含量越多，复性的温度越
高，0错误；反向*&；的扩增产物是包含未知序列和已知序列的
链状1)，分子，&错误；整个过程需用到限制酶、1)，连接酶和
耐高温的1)，聚合酶，不需要逆转录酶，1错误。解题关键 *&；只能扩增两端序列已知的基因片段，反向
*&；可扩增一段已知序列两端的未知序列，也就是说这一反
应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成1)，。
。!*"."【解析】过程体为富集培养，目的是增加菌体数量，使用培
养基为液体培养基，培养过程轻微振荡有利于菌体与培养基的
充分接触，乳酸菌为厌氧菌，不需要氧气，，错误；过程#平板倾
注分离时，应将已降至适宜温度的培养基倒入培养皿并轻轻混
匀，凝固后需要倒置培养，以避免皿盖上水滴滴落对菌落生长产
生影响，0正确；过程质所用培养基为固体培养基，因此需添加凝
固剂琼脂，已知乳酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，故培
养基上还需要添加碳酸钙，&正确；乳酸菌发酵产生的乳酸能溶
解碳酸钙，导致菌落周围出现透明圈，故透明圈直径与菌落直径
1
的比值可代表微生物溶解碳酸钙的能力，因此可根据 的值筛
V
选出降解碳酸钙能力强的菌种以进行后续研究，1正确。
!-!*."【解析】由题图可知，者、a分别结合01和，1，若者与a
存在相互作用则可激活下游报告基因表达，若 a定位于细胞
膜，则者、a蛋白附近没有报告基因，就算其存在相互结合，也无
法激活报告基因的表达，，错误；组氨酸合成缺陷型酵母菌在
组氨酸缺乏的者K激故5培养基上生长出蓝色菌落，说明O中F.基
因和/$&N基因均表达，验证了者、a存在相互作用，0正确；培
养基中添加的者K01、aK，1复合物（蛋白质）无法进入细胞，不
能观察其相互作用，&错误；组氨酸合成缺陷型酵母菌细胞中
报告基因自发激活的转录因子会导致O中F.基因和/$&N基因表
达，会在组氨酸缺乏的者K激故5培养基上生长出蓝色菌落，造成
假阳性反应，1正确。
!!!（4）可以避免原生质体在去除细胞壁后因吸水过多而涨破"离
心法、电融合法、*M激融合法、高&故（脂—高R’融合法等
（（）使中间偃麦草的染色体断裂
（J）植物激素（或生长素和细胞分裂素）"提供营养物质和调
节渗透压
（6）4、（、6
【解析】（4）过程"是使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁制备
原生质体的过程，将细胞放在微高渗的溶液中，使其在轻微质
壁分离的状态下进行，是因为这样可以避免原生质体在去除细
胞壁后因吸水过多而涨破。 过程#促进原生质体融合的方法
有物理法和化学法，包括离心法、电融合法、*M激融合法、高
&故（脂—高R’融合法等。
（（）不同剂量的紫外线照射可导致细胞中染色体发生不同
程度的变异，过程体紫外线的作用是使中间偃麦草的染色
体断裂。
（J）过程质是植物组织培养技术，培养基中需要添加植物激
素（或生长素和细胞分裂素）、无机盐、蔗糖等物质才能诱导愈伤组织形成，其中蔗糖的作用是提供营养物质和调节渗
透压。
（6）据题图（分析可知，在电泳结果图中，4、（、6号都同时含有
普通小麦和中间偃麦草的1)，片段，所以再生植株4G6中一
定是杂种植株的是4、（、6。
!#!（4）浆"体液
（（）既能产生特定的抗体，又能无限增殖
（J）接触抑制"动物血清"保证细胞能够进行有氧呼吸
（6）筛选出杂交瘤细胞"使每个孔内尽量只接种一个杂交瘤
细胞
【解析】（4）能够产生抗体的细胞是浆细胞，通过浆细胞分泌抗
体的免疫过程属于体液免疫。
（（）杂交瘤细胞的主要特点是既具有产生特定抗体的能力，又
能像骨髓瘤细胞那样无限增殖。
（J）在进行细胞培养时，一般会出现贴壁生长和接触抑制现象；
其培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因
子等营养物质，此外还要加入动物血清，以保证细胞能正常生
长；动物细胞培养时要将培养液置于含有B:9空气和:9&泌
（
的混合气体的&泌 培养箱中，其中空气中的泌 是细胞代谢所
（ （
必需的，保证细胞能够进行有氧呼吸。
（6）在’，@培养基中培养，未融合的细胞和同种核融合的细胞
都会死亡，能筛选出杂交瘤细胞。 将从’，@培养基上筛选出的
杂交瘤细胞稀释到LG4使个细胞\加O，每孔滴入使!4 加O细胞稀
释液，使每个孔内尽量只接种一个细胞，以达到单克隆培养的
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
目的，选育出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞。
!!
" 。&|æ5(cid:214)[(cid:242)!"ˇ—~§(cid:243)(cid:244)V9(cid:221)(cid:155)
!%!（4）"逆转录"1)，聚合"体:b端"#磷酸二酯键
（（）"&故（脂"体与酵母菌相比，大肠杆菌没有内质网和高尔
基体，因此无法加工形成具有特定空间结构的活性较高的
人干扰素
（J）温度、R’、溶解氧
【解析】（4）"以 加；)，为模板合成 1)，的过程为逆转录过
程，该过程需要逆转录酶催化；单链 1)，合成双链 1)，需要
1)，聚合酶催化。 体由于耐高温的1)，聚合酶从引物的Jb端
开始延伸子链，所以若后续要将扩增产物插入载体，需在引物
:b端引入限制酶的识别序列。 #1)，连接酶催化形成的化学
键是磷酸二酯键，从而将酶切后的目的基因与载体连接形成重
组1)，分子。
（（）"将基因表达载体导入大肠杆菌时，需先用 &故（脂处理大
肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收外源1)，的生理状态，即
感受态。 体因为人干扰素需在细胞内加工形成特定的空间
结构才具有较高的活性，而大肠杆菌是原核生物，没有内质
网和高尔基体等细胞器，无法加工形成具有特定空间结构的活性较高的人干扰素，所以大肠杆菌分泌的人干扰素活
性较低。
（J）在发酵过程中，要及时添加必需的营养组分，还要严格
控制温度、R’、溶解氧等发酵条件，这些条件会影响发酵
过程。
!&!（4）1)，的半保留复制"变性"引物6和引物:
（（）两"（J）无色物质,
（6）OF）基因在转基因植物细胞中不一定转录（或OF）基因在
转基因植物细胞中不一定翻译）
（:）抗人血清白蛋白的抗体
（将）植物细胞的全能性"脱分化和再分化"生长素和细胞分
裂素
【解析】（4）*&；是一项体外扩增1)，的技术，其原理是1)，的
半保留复制；每个循环都包括变性（B使度以上）、复性（:使度左右）
和延伸（L（ 度左右）三步，其中温度最高的步骤为变性。 引物
需要与模板链的Jb端结合，据题图4分析，若要扩增出只含有
内含子（和外显子J的1)，片段，应选择的引物是引物6和引
物:。
（（）为避免质粒与目的基因的反向连接和二者的自身环化，需
要用两种限制酶对目的基因和@=质粒进行切割。
（J）分析题意可知，报告基因表达的产物能催化无色物质,反
应生成蓝色物质，由题图（可知，报告基因位于@K1)，上，可
以整合到植物细胞的染色体1)，上，故过程"除尽农杆菌后，
需将植物细胞转接到含无色物质,的培养基上筛选出转化成
功的细胞。
（6）转基因生物是否培育成功首先应检测目的基因是否成功导
入受体细胞，其次应检测目的基因是否成功转录出 加；)，，还
需要检测目的基因是否翻译出了相应蛋白质，最后还需要进行
个体生物学水平的鉴定。
（:）抗原与抗体的结合具有特异性，为检测OF）基因的表达情
况，可提取受体细胞中的蛋白质，与抗人血清白蛋白的抗体进
行抗原—抗体杂交实验。
（将）过程体是植物组织培养，理论基础是植物细胞的全能性，该
过程主要包括脱分化和再分化两个阶段。 植物组织培养过程
中培养基中需主要添加的两种激素是生长素和细胞分裂素。
