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大题05 生物技术与工程
答案版
热点角度01 基因工程的操作流程与表达载体构建及筛选应用
析典例
·
建模型
【答案】(1) 基因数据库/序列数据库 Xho Ⅰ Xba Ⅰ DNA 连接酶
(2) 试剂 1 目的基因N 大小为2.3kb
(3)GCC
(4)香树脂醇
破类题
·
提能力
1．【答案】(1) 逆转录#反转录 PCR（多聚酶链式反应）
(2) XbaⅠ或PstⅠ 质粒上有2 个BamHⅠ酶切位点，其中一个位于终止子内部，切割后会破坏终止子，
丢失终止子片段 目的基因和质粒易发生自身环化，目的基因易反向连接，降低重组质粒的获得效率
(3) 卡那霉素 生长素和细胞分裂素
热点角度02 微生物工程与代谢调控及合成生物学应用
析典例
·
建模型
【答案】(1) 质粒和目的基因 DNA 连接 黏性 目的基因反向连接
(2)是否含有半乳糖
(3)能与胰岛素受体结合的目标蛋白（或有效的胰岛素受体激动剂或可表达有效的胰岛素受体激动剂的酵母
菌）
(4) 内质网和高尔基体（或复杂细胞器） 加工和修饰
1
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破类题
·
提能力
1．【答案】(1)摇床转速越高，提供的氧气越充足，酵母菌代谢旺盛，增殖快
(2) 乙 ①②③
(3) 灼烧冷却 5.5×107 菌落数在30-300 的平板
（建议用时：75 分钟）
刷模拟
1．【答案】(1) 逆转录 作为引物（使逆转录酶从引物的3'端连接脱氧核苷酸） 引物、脱氧
核苷酸
(2) 5′ BamHⅠ和SacⅠ 1 处
(3)细胞分裂素与生长素
(4)MdEXPA8 蛋白能使细胞壁变得松弛，过表达后使细胞壁过度松弛，从而便于病原菌的侵入和果实细胞
壁扩展，使植株更易患病害
2．【答案】(1) T-DNA 染色体DNA
(2) 限制性内切核酸酶（或限制酶）和DNA 连接酶 驱动GsERF6 基因转录 标记基因
便于重组DNA 的筛选
(3) 耐高温的DNA 聚合酶 含有 泳道1 与阳性对照（+）出现了相同大小的条带
3．【答案】(1) 使耐高温的DNA 聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 琼脂糖凝胶电泳
(2) 胰岛素基因（或pdx1 基因或胰高血糖素基因或胰岛细胞中特异性表达的基因） 斑马鱼胰岛
(3) 显微注射 受精卵
(4) 1 1
(5)36
(6)②①④③
4．【答案】(1) TaqDNA 聚合（耐高温的DNA 聚合） 互补 2
(2) RNA 聚合酶识别和结合的部位 复制原点 5 NcoⅠ DNA 连接酶
2
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(3)
(4) 卡那霉素 分别用转入融合蛋白基因的玉米叶片和等量的普通玉米叶片饲喂害虫,一段时间后,
比较饲喂后害虫的生长状况（死亡率）（将等量的转基因玉米和非转基因玉米分别饲喂害虫,检测害虫的存
活情况）
5．【答案】(1) 逆转录 使DNA 聚合酶从引物的3'端连接脱氧核苷酸
(2) 5′ BamHⅠ、SalⅠ 30 GGATCCTTTAAA
(3)ABC
(4) 显微注射法 未融合和同种融合的
(5)能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备
6．【答案】(1) 克隆化培养 HER2 与EGFR 融合细胞可以产生两种不同的轻重链，这些轻
重链可以随机组合
(2) 5′ 互补 8 有内质网和高尔基体，能正确加工真核蛋白，使其活性更高 提高翻
译速度和效率（目的蛋白质表达量相应提高）
(3) 细胞毒素 BsADC 的双靶点识别机制可同时靶向肿瘤细胞表面的两个抗原，提升药物的肿瘤
组织特异性（或“克服只使用一种单克隆抗体构建的ADC 交叉耐药问题”）。
7．【答案】(1)引物、dNTP
(2) F1 和R1 长于 DNA 片段长度
(3) 敏感型 敏感型pfcrt 基因的PCR 产物含有DraI 酶的识别序列(5’-AAATTT-3’)，而抗性型基因
突变导致该识别序列被破坏，无法被DraI 酶识别切割
(4)核酸染料
8．【答案】(1)引物、模板
(2)限制酶、DNA 连接酶
(3)ABC
(4)EcoR Ⅰ
(5)PCR 扩增可能会发生碱基对的错配（琼脂糖凝胶电泳技术仅能用于分析待检测DNA 分子的大小，无法
3
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确定待检测DNA 分子的碱基序列）
9．【答案】(1) 氨基酸序列 定点突变
(2) 乙、丙 30
(3) NdeI 和EcoRI MluI 和Eco52I
(4) 更容易从培养液中获取并提纯目标蛋白质 纯化
10．【答案】(1) SmaI 和BclI TetR和AmpR bar
(2) 耐高温的DNA 聚合酶（或Taq 酶） 含Mg2+的缓冲液 3 质粒 目的基因和质粒
避免（目的基因和线性质粒）反向连接和（目的基因、线性质粒）自身环化
(3)可一次性构建含多个目的基因的表达载体、不受限制酶切割位点（的数量、种类、位置等）的限制等
（合理即可）
11．【答案】(1) 模板、4 种脱氧核苷酸/dNTP 复性
(2) 非模板链 GGATCCATGTTC
(3) 潮霉素 绿色荧光 抗原-抗体杂交
(4)Y 蛋白通过与S 基因启动子结合促进S 基因表达，促进大豆类固醇化合物的合成，增强大豆对干旱和盐
胁迫的抗性
12．【答案】(1) 基因表达载体的构建 相同的限制（同尾） DNA 连接
(2) Cht 仅在害虫取食诱导茉莉酸产生时启动毒蛋白表达
(3)抗原-抗体杂交
(4)JAZ 基因是茉莉酸信号通路的抑制基因，CRISPR/Cas9 编辑后JAZ 基因功能丧失，茉莉酸信号通路不再
被抑制，其诱导Tox 基因表达的效率大幅提升，毒蛋白合成量增加，从而增强抗虫效果
(5)减少化学杀虫剂使用，降低环境污染及农产品农药残留
13．【答案】(1) 细胞毒性T 免疫排斥 碱基互补配对
(2)从基因文库中获取、PCR 技术扩增目的基因、化学方法直接人工合成
(3)敲除3KO 并插入7TG 会对异体细胞有更强的保护作用
(4)供体猪器官携带猪内源性逆转录病毒（PERV），PERV 接触并侵染人类细胞，在人体细胞内逆转录形成
DNA，整合到人类基因组中
(5)动物体细胞核移植、动物细胞培养
14．【答案】(1) 纤维素酶和果胶酶 酶解时间过长、酶浓度过高、渗透压不适宜等
(2) 聚乙二醇/PEG 六/6 新细胞壁的形成
(3) 杂种细胞分裂时来源于不同亲本的染色体随机丢失 天台鹅耳枥控制耐寒性状的基因未表达
（或基因的选择性表达，天台鹅耳枥的耐寒基因在杂种植株中未表达）
4
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15．【答案】(1)获得能产生特定抗体的B 淋巴细胞
(2) 受体 克隆化培养 抗体（阳性）检测
(3) 碱基互补配对 2 P1、P4
(4) 4 复性温度太高；引物设计不合理无法与目的基因结合
(5) EcoRI 酶切后形成的片段黏性末端相同，易自我环化；不能保证目标片段与载体定向连接
16．【答案】(1)
A
(2) 容易吸收外源DNA 氨苄青霉素
(3) 目标DNA 序列 sgRNA 支架 限制
(4)（基因）突变
17．【答案】(1)甜酒曲主要作用是分泌糖化酶，将糯米中淀粉分解为葡萄糖等可发酵性糖
(2) 接种 分离、提纯
(3)C
(4)氮源、维生素等
(5) 0.10%、8 天 接种量较大，酵母菌数量增长过快导致葡萄糖消耗过多，用于酵母菌无氧呼吸
产生酒精的葡萄糖减少或酵母菌大量快速繁殖后抑制甜酒曲糖化过程，使碳源少
18．【答案】(1) 逆转录 内含子、启动子和终止子等
(2) 5' Xho Ⅰ BamH Ⅰ 2n-2
(3) Ca2+ 处于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态 具有
(4)2
19．【答案】(1)PCR
(2) 3.5kb 和2.5kb（顺序可以互换） 终止子
(3)否，因为经Cre 酶切后5’-Otof 的片段与含3’-Otof 片段的黏性末端没有碱基互补配对，无法连接（能够
与含5’-Otof 片段黏性末端连接的不是含3’-Otof 的片段；能够与含3’-Otof 片段黏性末端连接的不是含5’-
Otof 的片段）
(4) 耳 弱
(5)听觉功能（听力）
20．【答案】(1) 3' F2 和R1 1 链和4 链 互为引物
(2) DNA 连接酶 氨苄青霉素
5
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(3) 37℃和 42℃ 37℃条件下未检测Cly-Noxa 融合蛋白，42℃能检测到（只有42℃能检测到Cly-
Noxa 融合蛋白）
(4)正常细胞凋亡（细菌在未到达肿瘤前就被免疫系统清除，降低疗效）
21．【答案】(1) 潮霉素 限制酶（或限制性内切核酸酶）
(2) 转基因水稻的染色体DNA T-DNA1 与T-DNA2 是否共同转化到了水稻细胞中 不同
(3) GH1-1 单 Gus+/hpt- P1
22．【答案】(1)通入无菌空气(或氧气)，将温度从18~30℃提高到30~35℃
(2) 发酵罐中发酵 前 菌种、培养基、发酵设备(答出两点即可)
(3) 刚果红 透明圈
(4) 稀释涂布平板 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的单个菌落来源于样品稀释液中的一
个活菌 皿底 防止因培养时间不足导致遗漏菌落数目
刷真题
1.【答案】（1） ①. 水解蛋白质，使得DNA 与蛋白质分离 ②. 溶解蛋白质等物质，析出不溶于
酒精的DNA
（2） ①. PCR 技术扩增 ②. 人工合成
（3） ①. RNA 聚合酶识别并结合的部位 ②. 同时实现两个目的基因的共同表达及调控，从而降低
基因工程的成本与复杂性
（4）HygBR （5） ① F3 ②. R2 （6）CD
2.【答案】（1）蛋白质 （2）③ （3）②
（4）标记基因 （5） ①. 筛选导入目的基因的大肠杆菌 ②. 5.7
（6）逆转录
3．【答案】(1) 捕食和种内竞争 物理信息、化学信息、行为信息 食物和空间、配偶等
(2)互利共生
(3) 上清液 溶解DNA 4 种脱氧核苷酸、耐高温的DNA 聚合酶
(4) 互补配对 丁 丙丁 叶绿体基因组其他DNA 片段
(5)ab
4．【答案】(1)绿色
(2) 替换 Ⅱ (G+h)/(△G+H) 该植株中基因H 上游缺失非编码序列G，导致基因H 不能
正常表达，表现为黄色豆荚 非编码序列G 缺失不影响基因H 表达
5．【答案】(1) 脱氧核苷酸 引物 复性 PCR 反应需要在高温条件下进行变性步骤（90
- 95℃使双链 DNA 解旋为单链） ，普通的 DNA 聚合酶在高温下会变性失活，而耐高温的 DNA 聚合酶能
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在高温环境中保持活性，保证 PCR 反应的正常进行。
(2) Sma Ⅰ 和 EcoR Ⅰ 磷酸二酯键
(3) 细胞表面发出黄色荧光 高
(4) 转基因衣藻表达的融合蛋白能结合镉离子，降低了镉离子对衣藻的毒害作用 镉离子浓度过
高，超出了融合蛋白的吸附能力，对衣藻产生了严重的毒害作用
(5) ① ③
6．【答案】(1)电子显微镜
(2)细胞骨架
(3)抑制宿主细胞的凋亡，为病毒的复制和繁殖提供更多的时间和场所
(4)大肠杆菌复制原点
(5)病毒基因组没有在哺乳动物细胞中表达的启动子
(6)蛋白镶嵌或贯穿于膜上，脂溶剂处理该病毒颗粒使得包膜溶解，包膜上的蛋白A 游离，蛋白A 与细胞膜
受体结合不能使病毒DNA 进入细胞内
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