文档内容
解密19 基因工程（分层训练）
A组 基础练
第I卷（选择题）
一、单选题
1．（2022秋·广东·高三校联考阶段练习）通过咽拭子取样进行RT-PCR技术检测是目前临床上诊断新型
冠状病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸检测的RT-PCR试剂盒的部分工作原理简图如下。下列说法
正确的是（ ）
A．将新冠病毒在琼脂培养基上进行培养，然后通过灭活和纯化，制成灭活疫苗
B．用于新冠病毒的PCR技术，与扩增Bt毒蛋白基因的过程完全相同
C．PCR技术扩增获得的产物，可采用抗原——抗体杂交的方法进行鉴定
D．RT-PCR是指以病毒的RNA为模板合成cDNA，并对cDNA进行PCR扩增的过程
2．（2022秋·广东·高三校联考阶段练习）大肠杆菌乳糖操纵子包括lacZ、lacY、lacA三个结构基因（编
码参与乳糖代谢的酶，其中酶a能够水解乳糖），以及操纵基因、启动子和调节基因。培养基中无乳糖存
在时，调节基因表达的阻遏蛋白和操纵基因结合，导致RNA聚合酶不能与启动子结合，使结构基因无法
转录；乳糖存在时，结构基因才能正常表达，调节过程如下图所示。下列说法错误的是（ ）
A．结构基因转录时，只能以β链为模板，表达出来的酶a会使结构基因的表达受到抑制
B．过程①的碱基配对方式与②过程不完全相同，参与②过程的氨基酸都可被多种tRNA转运
C．若调节基因的碱基被甲基化修饰，可能导致结构基因持续表达，造成大肠杆菌物质和能量的浪费D．据图可知，乳糖能够调节大肠杆菌中基因的选择性表达，没有发生细胞的分化
3．（2019秋·天津宁河·高三天津市宁河区芦台第一中学校考阶段练习）以下为形成cDNA过程和PCR扩
增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是（ ）
A．催化①过程的酶是RNA聚合酶
B．④过程发生的变化是引物与单链DNA结合
C．催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能催化形成氢键
D．从骨骼肌细胞提取的RNA构建的cDNA经PCR过程可以获得胰岛素基因
4．（2021春·河北唐山·高二开滦第二中学校考阶段练习）草甘膦是一种低毒性的广谱除草剂，能非特异
性侵入并杀死所有的植物，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。科学家从
一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因（控制EPSPS合成酶合成的基因）转入小麦，以提
高其对草甘膦的耐受性。下列有关叙述正确的是（ ）
A．必须将EPSPS基因转入小麦的受精卵，以便获得对草甘膦耐受性高的小麦
B．可用抗原-抗体杂交的方法检测细胞中是否有EPSPS基因的表达产物
C．要筛选出含EPSPS基因的突变菌株，应在培养基中加入EPSPS酶
D．EPSPS基因导入小麦叶肉细胞的叶绿体后，该性状可随传粉过程遗传
5．（2021春·河北唐山·高二开滦第二中学校考阶段练习）某研究所的研究人员将生长激素基因通过质粒
介导进入大肠杆菌细胞内，来表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B
是抗氨苄青霉素基因，且目的基因要插入到基因B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。下列叙述正确
的是（ ）
A．导入大肠杆菌的质粒一定为重组质粒
B．研究过程需要使用限制酶、DNA连接酶和运载体这些专门的工具酶
C．可用含氨苄青霉素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
D．在含链霉素培养基中能生长的可能是符合生产要求的大肠杆菌
2
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！6．（2023秋·北京东城·高三统考期末）人凝血酶Ⅲ是一种分泌蛋白，可预防和治疗急慢性血栓。重组人
凝血酶Ⅲ是世界上首个上市的动物乳腺生物反应器生产的重组蛋白药物。下列相关叙述错误的是（ ）
A．可从人细胞中提取RNA后利用逆转录PCR技术获取目的基因
B．目的基因的上游需连接在乳腺细胞中特异表达基因的启动子
C．用显微注射技术将表达载体导入乳腺细胞来获得转基因动物
D．若用大肠杆菌作为受体细胞难以获得活性高的人凝血酶Ⅲ
7．（2022秋·福建厦门·高三厦门一中校考阶段练习）研究人员用EcoRI和Smal两种限制酶处理某DNA
分子，图1为EcoRI切割该DNA分子后的结果；图2是酶切后的凝胶电泳图谱，其中1号泳道是DNA
Marker，2号、3号、4号分别是EcoRI单独处理、Smal单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果。下列
相关叙述错误的是（ ）A．据图1可知EcoRI的识别序列为—GAATTC—，切割位点在G和A之间
B．据图2可知琼脂糖凝胶的加样孔在B端，且连着电泳槽的负极
C．据图2可知该DNA分子最可能是含1000个碱基对的环状DNA
D．据图2可知该DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
8．（2022·浙江·模拟预测）如图是培育抗除草剂玉米的技术路线图，含有内含子的报告基因只能在真核
生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致
未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。下列相关叙述正确的是（ ）
A．过程①中除草剂抗性基因插入T－DNA中，导致T－DNA片段失活
B．过程②用Ca2＋处理使农杆菌细胞壁的通透性改变，成为感受态细胞
C．检测是否转化成功，过程③应在培养基中加入除草剂和物质K
4
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！D．转化过程中未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长是因为基因漂移
9．（2023秋·天津·高三天津市咸水沽第一中学校考期末）下列关于变异与育种的叙述，正确的是
（ ）
A．基因工程育种能够产生新的基因，定向改造生物的性状
B．与正常植株相比，单倍体植株常常表现为茎杆弱小，果实和种子等也都比较小
C．杂交育种的目的不一定是获得具有优良性状的纯合子
D．以种子为繁殖对象的植物，诱变处理后必须经多次自交、选择才能用于生产
10．（2021·天津宁河·天津市宁河区芦台第一中学校考一模）下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，正
确的是（ ）
A．DNA连接酶将目的基因的黏性末端与载体的黏性末端之间的碱基黏合
B．用限制性核酸内切酶从质粒上切下一个目的基因需破坏4个磷酸二酯键
C．Taq酶是PCR仪扩增DNA分子时常用的一种耐高温的DNA连接酶
D．在解离根尖分生区细胞时加入纤维素酶有利于提高解离的效果
11．（2023·浙江·统考一模）PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一
个融合基因，如图甲所示，下列相关叙述正确的是（ ）
A．其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA
序列出现了错误
B．据图甲分析其中翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P可能
不同
C．运用限制性核酸内切酶EcoRⅠ切割启动子可以识别P基因的序列
D．通过PCR技术一定程度上可以解决融合基因出现排斥的反应
12．（2023·浙江·统考一模）生长激素是医学实验及生物实验中常用的重要物质，最初生长激素是从牛和
猪脑垂体中提取出来的，但副作用过多。而化学合成的方法效率较低，没有实用价值，因此，采用基因
工程方法大规模生产人生长激素是满足临床大量需求的重要手段。该过程所用的质粒A与含生长激素基
因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示，下列相关叙述错误的是（ ）（限制性核酸内切酶BamHl、BclI、Sau3AI、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为
G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT）
A．图1的质粒与目的基因结合后不可直接导入受体细胞
B．BamHI酶和BclI酶切的DNA末端连接，连接部位用酶Sau3AI一定能用切开
C．用Sau3AI切图1所示的质粒A得到DNA片段对RNA聚合酶有一定的亲和力
D．生长激素基因也可以嵌入羊基因组的任何位置，以得到转基因羊并对生长激素进行大规模生产
13．（2022春·广东潮州·高二饶平县第二中学校考期中）生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点，
下列叙述错误的是（ ）
A．种植抗虫棉可减少农药的使用量，不存在安全性问题
B．外源基因插入宿主基因组的部位往往是随机的，有可能会出现意想不到的后果
C．克隆技术还不成熟，与社会伦理有严重冲突，应研究治疗性克隆而禁止生殖性克隆人
D．若有人以病毒作为生物武器，带来的危害将难以预估
14．（2018春·湖南邵阳·高一统考期末）下列有关转基因食品的说法，正确的是（ ）
A．转基因食品绝对安全，可放心食用
B．转基因食品绝对不安全，应该全面禁止
C．转基因食品可以治疗各种疾病
D．转基因食品进入市场必须经过相关部门检测和批准
15．（2022春·重庆·高二校联考期末）生物技术的进步在给人类带来福祉的同时，也引起了人们对它的安
全性的关注，以及伦理道德的碰撞，带来新的困惑和挑战。下列符合我国政策的是（ ）
A．鼓励发展利用基因编辑技术设计试管婴儿用以解决不孕夫妇的生殖问题
6
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！B．不接受任何生殖性克隆人实验，但鼓励用于医学研究和治疗的治疗性克隆，可放宽监控和审查
C．如果转基因农作物的外源基因来自于自然界原来已经存在的生物体内，则进行销售时无需直接标注
“转基因××”
D．在任何情况下均不发展、不生产、不储存生物武器，反对对生物武器和设备的扩散，应全面禁止和彻
底销毁生物武器
二、多选题
16．（2022秋·江苏镇江·高三江苏省镇江第一中学校联考阶段练习）如图为DNasel（一种消化DNA的内
切核酸酶）足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正
确的是（ ）
A．DNasel作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B．加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNasel攻击
C．图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D．该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基
17．（2021秋·山东青岛·高二青岛二中校考期末）下图是利用基因工程培有抗虫植物的示意图。下列相关
叙述，正确的是（ ）A．切割T质粒的限制酶均特异性地识别6个或4个核苷酸序列
B．③侵染植物细胞后，T-DNA整合到④的染色体DNA上
C．获得基因表达载体的过程中，至少需要限制酶断开6个、DNA连接酶连接4个磷酸二酯键
D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了定向的可遗传变异
18．（2022春·河北沧州·高二任丘市第一中学校考期末）CRISPR/Cas9是一种生物学工具，能够通过“剪
切和粘贴”脱氧核糖核酸（DNA）序列的机制来编辑基因组。这套系统源自细菌的防御机制，是一种对
任何生物基因组均有效的基因编辑工具。CRISPR−Cas9基因组编辑系统由向导RNA（也叫sgRNA）和
Cas9蛋白组成，向导RNA识别并结合靶基因 DNA，Cas9蛋白切断双链DNA形成两个末端。这两个末
端通过“断裂修复”重新连接时通常会有个别碱基对的插入或缺失，从而实现基因敲除，如图所示。
CRISPR−Cas9基因组编辑技术有时存在编辑出错而造成脱靶。下列叙述错误的是（ ）
A．Cas9蛋白相当于限制酶，能作用于脱氧核糖和碱基之间的化学键
B．对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和不同的sgRNA进行基因编辑
C．CRISPR−Cas9基因组编辑系统使细菌获得抵抗溶菌酶或抗生素的能力
D．其他DNA序列含有与sgRNA互补配对的序列，造成sgRNA错误结合而脱靶
19．（2022秋·江苏南京·高三校考期中）重组腺病毒载体疫苗是通过将腺病毒中与复制相关的基因剔除，
替换为目标病毒的抗原蛋白基因而研发的疫苗。图为其结构示意图。下列叙述正确的是（ ）
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原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！A．腺病毒载体疫苗构建过程中利用了限制酶和DNA连接酶
B．抗原蛋白基因不属于抗原，不能直接引起机体免疫反应
C．注射疫苗后，机体可产生与纤突蛋白特异性结合的抗体
D．需要采用完全培养基培养重组后的病毒以大规模生产疫苗
20．（2022·浙江杭州·浙江省杭州第二中学校联考模拟预测）治疗性克隆的做法是先从需要救治的患者身
上提取细胞，然后将该细胞的遗传物质植入一个去除了细胞核的卵细胞中，该卵细胞开始自行分裂，直
至形成一个早期胚胎，从早期胚胎中提取胚胎干细胞后将其培养成人们所需要的各种人体器官。下列有
关说法正确的是（ ）
A．可采用开放式培养的方式，置于CO 培养箱中培养胚胎干细胞
2
B．该早期胚胎发育始于受精卵，胚胎是由囊胚内部的细胞团不断增殖分化而来
C．治疗性克隆中运用胚胎移植技术，一般不选择原肠胚进行胚胎移植
D．我国不赞成、不允许、不支持、不接受任何克隆性实验
第II卷（非选择题）
三、综合题
21．（2022秋·湖南株洲·高三校联考阶段练习）磷脂酰丝氨酸（PS）是一种广泛应用于治疗脑萎缩、老
年痴呆症等疾病的磷脂。自然界中PS的含量极少，生物体内的PS可在磷脂酶D（PLD）的催化下生成，
但PLD活性较低。如图所示，研究人员将改造后的PLD基因导入大肠杆菌细胞中，成功生产出高活性的
PLD。其中EcoRV、BamHI、SmaI、NindII均为限制酶。回答下列问题。(1)为了获得高活性PLD，需要先设计预期的____________，推测其应有的____________序列，再通过改
造或合成新的PLD基因，最终才能获得所需要的PLD。
(2)构建基因表达载体时，需要用到的两种限制酶是____________，不选择另外两种限制酶的原因是
____________。为了检测是否表达出高活性PLD，应从成功导入PLD基因的菌株中提取蛋白质，用
____________方法检测。
(3)研究人员发现，将PLD的第209号氨基酸改为色氨酸，或将第224号氨基酸改为苯丙氨酸，或同时改
变这2个氨基酸，PLD的活性会大大提高。若要改变氨基酸，需要先用基因的定点突变技术对PLD基因
进行____________。
(4)该科研小组成功生产出三种高活性PLD:已知PLD可催化磷脂酰胆碱和L-丝氨酸反应生成PS。请设计
实验比较三种高活性PLD的活性高低，简要写出实验思路________________________。
22．（2023年1月浙江省普通高校招生选考科目考试生物试题）甲植物细胞核基因具有耐盐碱效应，乙
植物细胞质基因具有高产效应。某研究小组用甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交相关研究，基本过程
包括获取原生质体、诱导原生质体融合、筛选融合细胞、杂种植株再生和鉴定，最终获得高产耐盐碱再
生植株。回答下列问题：
(1)根据研究目标，在甲、乙两种植物细胞进行体细胞杂交前，应检验两种植物的原生质体是否具备
__________的能力。为了便于观察细胞融合的状况，通常用不同颜色的原生质体进行融合，若甲植物原
10
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！生质体采用幼苗的根为外植体，则乙植物可用幼苗的__________为外植体。
(2)植物细胞壁的主要成分为__________和果胶，在获取原生质体时，常采用相应的酶进行去壁处理。在
原生质体融合前，需对原生质体进行处理，分别使甲原生质体和乙原生质体的__________失活。对处理
后的原生质体在显微镜下用__________计数，确定原生质体密度。两种原生质体1∶1混合后，通过添加适
宜浓度的PEG进行融合；一定时间后，加入过量的培养基进行稀释，稀释的目的是__________。
(3)将融合原生质体悬浮液和液态的琼脂糖混合，在凝固前倒入培养皿，融合原生质体分散固定在平板中，
并独立生长、分裂形成愈伤组织。同一块愈伤组织所有细胞源于__________。下列各项中能说明这些愈
伤组织只能来自于杂种细胞的理由是哪几项？__________
A ．甲、乙原生质体经处理后失活，无法正常生长、分裂
B．同种融合的原生质体因甲或乙原生质体失活而不能生长、分裂
C．培养基含有抑制物质，只有杂种细胞才能正常生长、分裂
D．杂种细胞由于结构和功能完整可以生长、分裂
(4)愈伤组织经__________可形成胚状体或芽。胚状体能长出__________，直接发育形成再生植株。
(5)用PCR技术鉴定再生植株。已知甲植物细胞核具有特异性DNA序列a，乙植物细胞质具有特异性
DNA序列b；M、M 为序列a的特异性引物，N、N 为序列b的特异性引物。完善实验思路：
1 2 1 2
Ⅰ．提取纯化再生植株的总DNA，作为PCR扩增的__________。
Ⅱ．将DNA提取物加入PCR反应体系，__________为特异性引物，扩增序列a；用同样的方法扩增序列
b。
Ⅲ．得到的2个PCR扩增产物经__________后，若每个PCR扩增产物在凝胶中均出现了预期的
__________个条带，则可初步确定再生植株来自于杂种细胞。
23．（2022秋·江苏徐州·高三统考期末）某品系棉花的光籽(无绒)和毛籽(有绒)是一对相对性状，其长
(zhǎng) 绒 机理如下图(基因 A 、B 、D 位于三对同源染色体上)，研究人员利用光籽棉的不同突 变体
与野生型毛籽棉进行杂交， F 自交， F 结果如下表。请回答问题：
1 2
组
亲本 F 表现型 F 表现型及比例
别 1 2
① 突变体甲×毛籽棉 毛籽 光籽：毛籽=7 ：9
② 突变体乙×毛籽棉 光籽 光籽：毛籽=13 ：3③ 突变体丙×毛籽棉 光籽 光籽： 毛籽=3 ：1
(1)野生型毛籽棉的基因型是 _______，光籽棉的基因型有_______ 种。
(2)①组中，突变体甲的基因型是_______ ，F 毛籽棉中与 F 毛籽棉基因型相同的概率是 _______。
2 1
(3)②组中，突变体乙的基因型可能有_______种，F 光籽棉中与 F 光籽棉基因型相同的概率是_______ 。
2 1
(4)③组中，突变体丙的基因型是_______ 。①组 F 光籽棉中与③组 F 光籽棉基因型相同 的概率是
2 2
_______ 。进一步研究发现， 8号染色体的~880kb 至~903kb 区间与突变体丙的光籽表型相关。根据野
生型毛籽棉的该区间设计引物，提取突变体丙和野生型的DNA进行PCR，产物扩增结果如下图。据图分
析突变体丙出现光籽的根本原因是_______ 。
24．（2022秋·北京大兴·高三统考期末）蚊虫分布范围广，生物量大，其中的雌蚊会叮咬人类，可传播多
种传染病，须采取防控措施防止传病蚊种泛滥。研究者利用CRISPR/Cas9基因编辑系统和同源重组修复
技术提高蚊虫群体中雄蚊比例。
(1)CRISPR/Cas9系统可以实现对双链DNA的精确切割，由三部分组成：crRNA、tracrRNA及Cas9蛋白，
如图1。crRNA会与tracrRNA结合形成sgRNA，sgRNA通过__________与目标DNA结合，引导Cas9蛋
白对DNA进行切割，导致其断裂。
(2)同源重组修复是一种高保真的DNA双链断裂、修复技术，原理如图2，其过程为CRISPR/Cas9基因编
辑系统切割使DNA断裂后，启动同源修复，使得染色体DNA上的靶向序列被替换成所需序列。
12
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！①现需构建基因表达载体，请结合图2选出目的基因中必要的结构或基因__________。
A．限定在体细胞内表达的启动子
B．限定在生殖细胞内表达的启动子
C．限定在受精卵内表达的启动子
D．I-Ppol基因（能够切割X染色体DNA的核酸酶基因）
E.氨苄青霉素抗性基因
②通过____________技术将基因表达载体导入受精卵，该受精卵发育成_____________性蚊虫。Cas9蛋白
将对应的靶向序列进行切割，以基因表达载体中同源序列间的DNA为模板进行修复，最终实现子代都继
承相应基因，使群体中雄蚊比例升高。
(3)除利用转基因灭蚊之外，还存在寄生菌灭蚊技术，当雄蚊被沃尔巴克菌感染后，精子会被细菌产生的
毒素污染。健康雌蚊的卵细胞与这些“毒精子”相遇后，产生细胞质不相容效应，导致后代无法正常发
育。相对于寄生菌灭蚊，利用转基因灭蚊的优势有_____________（答出两点）。
(4)目前我国尚不允许释放转基因蚊虫，请解释原因___________。
25．（2022春·吉林·高二校考期中）生物工程技术在农牧业生产、医药卫生等领域有广泛的用途。请回答
相关问题。
(1)我国体细胞克隆猴“中中”和“华华”的诞生再次说明了_____具有全能性。植物组织培养的全过程，
证明了植物体细胞具有全能性。所谓全能性是指细胞经分裂和分化后，仍具有产生___或分化成其他各种
细胞的_____。
(2)利用植物组织培养技术制造的人工种子具有天然种子不可比拟的特点，人工种子具有的优点：能保持
优良品种的_____，生产上不受季节、气候和地域限制，方便_____等。
(3)动物细胞融合和植物原生质体融合的原理都是_____，不同的是诱导动物细胞融合时常用的方法是用
_____诱导。
(4)许多重要的生物制品，如病毒疫苗、单克隆抗体等，都可以借助动物细胞培养技术来大规模生产。
当细胞分裂生长到表面相互接触会发生接触抑制，此时需要用_____处理分散成单个细胞，分瓶继续培养。
细胞培养液应定期更换，以防止_____对细胞自身造成危害。
(5)生物技术革命为人类带来了巨大的社会效益和经济效益，在某些方面对人们传统的观念也造成了巨大
的冲击。以下做法中明显违背我国相应法律法规或伦理道德的有_____。
①转基因农产品的直接加工品，在产品外包装中标注“加工原料为转基因”标识再上市
②为了避免妊娠过程给自身带来影响，选择用“试管婴儿”技术，并找人代孕以得到孩子
③在实验室中进行冠状病毒基因改造研究，以备在发生战争时用于投放他国
④养牛场中运用胚胎性别鉴定技术，筛选雌性胚胎进行胚胎移植以扩大高产奶牛数量解密19 基因工程（分层训练）
B组 提高练
第I卷（选择题）
一、单选题
1．（2022秋·福建厦门·高三厦门一中校考阶段练习）酒精是生物学实验中常用的试剂，下列关于酒精的
使用方法不恰当的是（ ）
A．脂肪鉴定实验中，染色后滴加1-2滴50%的酒精洗去浮色
B．光合色素提取和分离实验中，用95%的酒精加入适量无水碳酸钠提取绿叶中的色素
C．植物组织培养实验中，用75%的酒精对外植体和操作者双手进行消毒
D．DNA 的粗提取与鉴定实验中，用95%的冷酒精溶液溶解DNA
2．（2022秋·广东江门·高三统考阶段练习）视网膜神经节细胞（RGC）可将视觉信号从眼睛传向大脑。
随着年龄增长，在DNA甲基转移酶的作用下，DNA甲基化水平升高，使RGC受损后不可恢复，视力下
降。科学家把OCT、SOX和KLF三个基因导入成年小鼠的RGC，使受损后的RGC能长出新轴突。下列
分析正确的是（ ）
A．DNA甲基化通过改变DNA碱基序列影响RGC中基因的表达，从而使视力下降
B．导入基因前要用限制酶、DNA连接酶和耐高温的DNA聚合酶构建基因表达载体
C．OCT、SOX和KLF基因的表达产物可能提高了DNA甲基转移酶的活性
D．导入OCT、SOX和KLF基因有可能治疗因RGC受损而导致的视力下降
3．（2022秋·浙江·高三校联考期中）下图表示某转基因动物的构建流程图，下列叙述正确的是（ ）
A．若扩增DNA的引物序列太短，则扩增出非目的基因片段的概率将增大
B．若将重组DNA分子导入到大肠杆菌细胞中，一般能直接获得具有活性的目的基因表达产物
C．若胚胎培养到囊胚阶段，进行胚胎分割时可用胰蛋白酶进行处理
D．胚胎移植时需对受体进行注射促排卵剂处理，有利于提高胚胎移植成功率
4．（2022秋·江苏淮安·高三校联考期中）在基因工程中，常采用花粉管通道法和土壤农杆菌转化法将目
的基因导入植物细胞。下图为花粉管通道法的一般原理示意图。相关叙述正确的是（ ）
14
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！A．外源DNA进入胚囊最终获得的种子均含有目的基因
B．植物生长各个时期均可通过花粉管通道导入外源DNA
C．花粉管通道法最大的优点是无需植物组培，技术简单
D．含外源DNA的种子发育成植株后均具有相应性状
5．（2022·浙江·模拟预测）DNA半不连续复制假说是指DNA复制时，一条子链连续形成，另一条子链
先形成短片段后再进行连接（如图1）。为验证假说，某小组进行如下实验：培养T4噬菌体→于不同时
刻分离噬菌体DNA→加热→离心→检测相应位置DNA单链片段含量，结果如图2。下列相关叙述错误的
是（ ）
A．加热的目的是使DNA解旋，从而获取不同时刻形成的长短不同的DNA单链片段
B．与60秒相比，120秒结果中短链片段减少的原因是短链片段连接形成长片段
C．若以DNA连接缺陷的噬菌体为材料，则图2中的曲线峰值将右移
D．DNA复制过程中需要用到解旋酶、DNA聚合酶和DNA连接酶
6．（2022·浙江·模拟预测）蛋白质工程是当前的新兴分子生物学技术，通过改造或合成基因，来改造现
有的蛋白质或制造新的蛋白质，以满足人类生产、生活的需求。下列关于蛋白质工程的说法错误的是（
）
A．蛋白质工程技术会改变组成蛋白质的氨基酸的种类、数目和排列顺序B．蛋白质工程获得的蛋白质都是自然界已存在的蛋白质（天然蛋白质）
C．蛋白质工程不直接改造蛋白质的原因是改造基因易于操作且改造后可遗传
D．蛋白质工程生产出来的蛋白质的活性与天然蛋白质相似，而且稳定性更高
7．（2022秋·吉林长春·高三长春市第六中学校考阶段练习）下列有关基因工程的叙述正确的是（ ）
A．限制酶只存在于原核生物中，只能识别DNA分子的特定核苷酸序列
B．只有同种限制酶切割的末端才能连接，不同限制酶切割的末端不能连接
C．基因工程中，只能利用天然质粒，质粒上的标记基因用于重组DNA的筛选
D．质粒是独立于拟核DNA和真核细胞核之外的环状双链DNA
8．（2022·浙江绍兴·统考一模）限制性内切核酸酶 SalI和 Xho I 识别序列与切割位点如下图1。用 Sal I
切割目的基因两侧，用XhoⅠ切割载体质粒，再用连接酶处理可形成重组质粒。实验者用2种酶单独切割
或同时切割普通质粒和重组重粒，再将产物电泳分离，其结果如下图2。下列叙述正确的是（ ）
A．SalI切割产生的黏性末端与XhoI切割产生的黏性末端不同
B．根据重组质粒的酶切结果可知有2个目的基因插入重组质粒中
C．重组质粒上有1个限制酶SalI和1个限制酶XhoI的识别序列
D．2种酶切后产生的2kb产物可作为探针筛选含目的基因的受体细胞
9．（2021秋·山东青岛·高三青岛二中校考期末）实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是
目前检测微小残留病变的常用方法。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，
不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的
荧光可被检测到在特定光激发下发出荧光（如图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通
过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。下列相关叙述正
确的是（ ）
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原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！A．每个模板DNA分子含有4个游离的磷酸基团
B．在反应过程中，需要ATP为新链的合成提供能量
C．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针
D．荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明含有的病变的概率越小
10．（2022秋·山东济南·高三统考期中）科学家利用PCR技术搭建了世界上第一个古DNA研究的超净室，
利用现代人的DNA列设计并合成了一种类似磁铁的“引子”，成功将极其微量的古人类DNA从土壤沉
积物的多种生物的DNA中识别并分离出来，完成一种古人类——尼安德特人的全基因组测序。下列有关
说法正确的是（ ）
A．设计“引子”的DNA序列信息只能来自现代人的核DNA
B．尼安德特人的双链DNA可直接与“引子”结合从而被识别
C．PCR检测古人类DNA时需“引子”，解旋酶和耐高温的DNA聚合酶
D．设计“引子”前不需要知道尼安德特人的DNA序列
11．（2022·河北·一模）某国外科研小组把人的诱导多能干细胞注入猪的早期胚胎中，成功培育出人猪嵌
合体胚胎，并在猪体内发育了3～4周后才终止妊娠。下列有关叙述错误的是（ ）
A．实验过程需利用体外受精、胚胎移植等胚胎工程的相关技术
B．诱导多能干细胞可以由成体的成纤维细胞、B细胞转化而来
C．若成功培育出“人猪嵌合体”将会面临巨大的伦理道德挑战
D．该研究为在动物体内培育出可供移植的人类器官提供了可能
12．（2022秋·湖北·高三湖北省天门中学校联考开学考试）很多生物技术的应用已经与我们的日常生活密
切相关。下列有关生物技术的说法或做法正确的是（ ）
A．在我国，通过生殖性克隆有可能解决一些夫妇不孕不育的问题
B．科学家将小鼠抗体上结合抗原的区域“嫁接”到人的抗体上，经过这样改造的抗体诱发免疫反应强度
就会增大很多
C．单克隆抗体被广泛用作诊断试剂，还可以运载药物，也能直接用于治疗疾病D．胚胎移植时为避免受体对来自供体的胚胎发生免疫排斥，往往需要对受体注射免疫抑制剂
13．（2022·湖北武汉·高三武汉市第一中学校考阶段练习）所谓“设计试管婴儿”，是指将体外受精形成
的胚胎（几个细胞期）在植入母体孕育前，将一个细胞取出进行某些基因检测，当检测结果符合人们需
要时，再把胚胎植入母体孕育。下列有关叙述正确的是（ ）
A．“设计试管婴儿”应用了细胞核移植、早期胚胎培养、胚胎移植等技术
B．与“设计试管婴儿”相比，“试管婴儿”需要经过遗传学诊断
C．“设计试管婴儿”和“试管婴儿”都是有性生殖
D．对于“设计试管婴儿”技术，我们应该强行禁止、反对争论
14．（2022秋·浙江宁波·高三统考阶段练习）生物安全是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健
康以及生态环境所产生的危害或潜在风险。下列相关叙述错误的是（ ）
A．消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面
B．由于技术问题，生殖性克隆可能孕育出有严重生理缺陷的克隆动物
C．为避免可能产生的基因歧视，基因检测机构不能随意泄露基因检测的结果
D．从外来入侵害虫的原产地引入天敌进行治理，不会对入侵地造成生态影响
15．（2022·山东·烟台二中统考模拟预测）生物技术的进步在给人类带来福祉的同时，也引起了人们对它
的安全性的关注，以及伦理道德的碰撞，带来新的困惑和挑战。下列关于生物技术的安全性和伦理问题
的说法，错误的是（ ）
A．抗虫棉的抗虫基因不会随着人们食用棉籽油进入人的细胞内
B．我国坚决反对治疗性克隆，不允许进行任何生殖性克隆人实验
C．通过转基因技术获得了高产、无农药残留的农副产品，可造福人类
D．生物武器具有致病性强、攻击范围广等特点，世界各国都应抵制
二、多选题
16．（2022秋·江苏盐城·高三盐城市伍佑中学校考阶段练习）下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙
述，错误的是（ ）
A．酵母和菜花均可作为提取DNA的材料
B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水
C．向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物
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原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！D．DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变紫
17．（2022秋·山东济宁·高三邹城市第二中学校考阶段练习）双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)与脱氧核苷三磷
酸(dNTP)的结构如下图所示。已知 ddNTP 按碱基互补配对的方式加到正在复制的子链中后，子链的延
伸立即终止。某同学要通过 PCR 技术获得被 32P 标记且以碱基“C”为末端的、不同长度的子链 DNA
片段。在反应管中已经有单链模板、引物、DNA 聚合酶和相应的缓冲液等，还需要加入下列原料中的
（ ）
A．dGTP，dATP，dTTP，dCTP B．dGTP，dATP，dTTP
C．α位 32P 标记的 ddCTP D．γ位 32P 标记的 ddCTP
18．（2022秋·河北保定·高三河北省唐县第一中学校考阶段练习）下图是将人的生长激素基因导入细菌B
细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说
法正确的是（ ）
A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法
B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的包括导入了重组质粒的细菌和
导入了质粒A的细菌
C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长
19．（2022秋·山东临沂·高三校考开学考试）胰岛素用于治疗糖尿病，但胰岛素注射后易在皮下堆积，需
较长时间才能进入血液，进入血液后又易被分解，因此治疗效果受到影响。下图是新的速效胰岛素的生产过程，有关叙述错误的是（ ）
A．新的胰岛素的产生是依据基因工程原理完成的
B．新的胰岛素生产过程中不涉及中心法则
C．新的胰岛素产生过程中最困难的一步是由胰岛素分子结构推测氨基酸序列
D．若用大肠杆菌生产新的胰岛素，常用Ca2＋处理大肠杆菌
20．（2022秋·江苏无锡·高三统考期末）医学领域中试管婴儿卵浆置换技术已经有了多种突破。该技术首
先取得女性的卵细胞核，并将其移植入优质的去核卵细胞内，使两者重组成活力较强的卵细胞，经体外
受精形成胚胎后移植入母体子宫。下列相关叙述正确的是（ ）
A．该技术主要适用于卵子质量不佳的女性
B．该技术可以解决男性精子质量不佳的问题
C．该技术能显著提高大龄女性的受孕几率
D．该技术会导致伦理道德方面的质疑和争议
第II卷（非选择题）
三、综合题
21．（2022秋·江苏南通·高三济南市历城第二中学统考阶段练习）干燥综合征（SS）是临床常见的一种
自身免疫病，其血清中存在多种抗体，其中以SSB抗体异性最强，影响最显著。科研人员为建立抗SSB
抗体全自动定量检测的磁微粒化学发光试剂，利用基因工程技术获得重组SSB蛋白，流程如下，请分析
回答：
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原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！(1)利用RNA通过①过程获得cDNA需要____________酶。通过PCR技术扩增SSB基因的前提是要测定
该基因两端部分核苷酸序列，目的是____________。
(2)为确保与PET41a质粒定向连接，获得的SSB基因两端要含有____________酶切位点。在PCR过程中，
第____________轮循环产物中出现含所需限制酶的片段A。
(3)获得含SSB基因的重组质粒后，进行如下实验切割原质粒和重组质粒，获得片段大小如右表
（1kb=1000碱基对）（注意：DNA片段大小与图中所画比例一致）。SSB基因的长度为____________。
限制酶 EcoRI BamHI和XhoI
原质粒 8.1kb 2.7kb、5.4kb
重组质
3.4kb、5.0kb 未做该处理
粒
(4)③过程目的是将重组质粒转染到大肠杆菌内，并接种于添加____________的培养基上，收集菌落进行
鉴定，将阳性菌落进一步纯化后将菌体破碎处理，筛选得到重组SSB蛋白。
(5)为检测重组质粒表达情况及重组蛋白与抗体结合能力，科研人员通过注射含纯化的重组SSB蛋白的弗
氏佐剂进行如下实验，请完成下表：
实验步
实验操作
骤
分组 取健康、生理状态相同的小鼠随机均分成两组。
实验处
实验组注射含纯化的重组SSB蛋白的弗氏佐剂，对照组①____________，连续三次。
理
饲养 在相同且适宜环境中饲养。
②___ 第三次免疫后第七天取小鼠血清并提取抗体进行检测。
结果分 与对照组相比，若抗体检测呈③____________，则表明重组SSB蛋白具有与相应抗体高度结析 合的能力。
22．（2022秋·浙江·高三校联考阶段练习）草甘膦是一种非选择性除草剂，杀死杂草的同时也杀死农作物。
它与植物体内的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）结构相似，可与PEP竞争结合EPSP合酶，阻止PEP转化，影
响植物细胞正常代谢。我国科学家从草甘膦施用土壤中的某微生物体内获取GR79基因（草甘膦抗性基
因），并将其导入植物体细胞中获得抗草甘膦的转基因植物。据图回答下列问题：
(1)GR79基因发挥抗草甘膦作用的机理可能是______。从分离得到的某土壤微生物体内获取含有GR79基
因的质粒，并将其保存在某细菌群体（受体菌）中，各个受体菌分别含有该微生物的不同的基因，这些
受体菌群中该微生物的所有DNA序列克隆的汇总，称为______。
(2)据图推测，利用PCR技术扩增GR79基因时，需设计能与该基因两条模板链3’端______的引物；同时
为构建该基因表达载体，需在引物1和引物2的______端加上限制酶______的识别序列。
(3)实验中常采用______法将GR79基因表达载体导入植物受体细胞；为避免该基因在近缘农作物中传播，
可将其导入植物受体细胞的______；除温度、酸碱度等环境因素外，影响该基因导入植物受体细胞成功
率的因素有______。
(4)为检测GR79基因是否导入植物体细胞，可在培养基中添加______筛选含该基因的受体细胞；也可利
用______技术更加精准地进行检测，若待检DNA中含有该基因，则会发现硝酸纤维素膜上会出现______。
(5)经检测，科研人员发现部分获得GR79基因的植物幼苗不具有抗草甘膦的能力，原因可能是______。
23．（2022秋·湖北·高三校联考阶段练习）遗传印记是因亲本来源不同而导致等位基因表达差异的一种遗
传现象，DNA 甲基化(DNA的部分碱基上结合甲基)是遗传印记重要的方式之一。来自亲本的甲基化印记
在子一代体细胞的有丝分裂中保持终生，但在子一代形成配子时，亲本的甲基化印记被去除，遗传印记
会重新设定。鼠的灰色(A)对褐色(a)是一对相对性状，下图为遗传印记对小鼠等位基因表达和传递影响的
示意图，甲基化的基因不能表达。回答下列问题：
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原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！(1)图中雌鼠的表现型为_______________，图中雄鼠的A基因来自于____________(填“父方”、“母
方”)，理由是______________________________。
(2)图中雌鼠与雄鼠杂交，子代小鼠的表现型及比例为__________________________________________。
(3)为进一步追踪遗传印记的遗传方式，科研人员将绿色荧光蛋白(GFP)基因通过基因工程技术整合到小鼠
的染色体上，下图为所用载体图谱示意图和限制酶的识别序列及切割位点。为使GFP基因(该基因序列不
含图中限制酶的识别序列)与载体正确连接，在扩增的GFP基因两端分别引入_______________和
__________________两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的GFP基因和载体进行连接时，可
选用____________(填“E. coli DNA 连接酶”或“T4 DNA连接酶”)。(4)假如GFP基因插入到A基因的染色体上，并随A基因的表达而表达，A基因不表达则该基因也不表达。
若(2)中子代小鼠中的灰色个体自由交配，则后代发绿色荧光的个体所占比例是__________________。
24．（2022秋·福建厦门·高三厦门一中校考阶段练习）与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化
较慢，可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通
过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段
和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：
24
原创精品资源学科网独家享有版权，侵权必究！(1)强启动子能驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用___酶组合，将
DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
(2)外植体经______形成的玉米愈伤组织放入农杆菌液浸泡后进行植物组织培养，培养基中需加入_______
进行筛选，最终获得多个玉米株系a、a、a、a。通过对a、a、a、 a，四株甜玉米株系的蛋白质表达
1 2 3 4 1 2 3 4
量进行测定结果如图2，______（填“能”或“不能”）说明a 株系未导入重组质粒，原因是________。
4
(3)真核基因的编码区含有内含子和外显子，下图3为淀粉酶合成基因片段，其转录后形成的前体RNA需
通过剪接（切去内含子对应序列）和加工后方能用于翻译。
科研人员通过降低调控淀粉酶合成基因的表达实现提高甜玉米中可溶性糖的含量。吗啉反义寡核苷是
RNA剪接抑制剂，注入植物细胞内会使基因表达受阻。为验证吗啉反义寡核苷能阻止前体RNA上内含子
1的对应序列被剪切，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导入玉米的受精卵作为实验组，设计相关实验，请完
成下列表格：
操作流程 操作方法或操作要点
获取cDNA 从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取总RNA，①__形成cDNA。
扩增cDNA 以获得的cDNA为模板进行PCR时需加入引物②_____。
产物鉴定 用琼脂糖凝胶电泳技术鉴定PCR扩增后获得的产物
分析结果，得出结论 实验组有目的条带，对照组无目的条带，说明③______。
某次实验结果电泳发现：实验组和对照组都没有任何条带，从PCR操作过程角度解释可能的原因有
______（至少答出两点）。25．（2022秋·北京·高三北京十五中校考阶段练习）生态文明建设已成为我国的基本国策。水中雌激素类
物质（E物质）污染会导致鱼类雌性化等异常，并通过食物链影响人体健康和生态安全。原产南亚的斑马
鱼，其肌细胞、生殖细胞等存在E物质受体，且幼体透明。科学家将绿色荧光蛋白（GFP）等基因转入斑
马鱼，建立了一种经济且快速的水体E物质监测方法。
(1)将表达载体导入斑马鱼受精卵的最佳方式是_______。
(2)为监测E物质，研究者设计了下图所示的两种方案制备转基因斑马鱼，其中ERE和酵母来源的UAS是
两种诱导型启动子，分别被E物质-受体复合物和酵母来源的Gal4蛋白特异性激活，启动下游基因表达。
与方案1相比，方案2的主要优势是_______，因而被用于制备监测鱼（MO）。
(3)现拟制备一种不育的监测鱼SM，用于实际监测。SM需经MO和另一亲本（X）杂交获得。欲获得
X，需从以下选项中选择启动子和基因，构建表达载体并转入野生型斑马鱼受精卵，经培育后进行筛选。
请将选项的序号填入相应的方框中。
Ⅰ.启动子：____。
①ERE②UAS③使基因仅在生殖细胞表达的启动子（P生）④使基因仅在肌细胞表达的启动子（P肌）
Ⅱ.基因：______
A．GFP B．Gal4 C．雌激素受体基因（ER） D．仅导致生殖细胞凋亡的基因（dg）
(4)SM不育的原因是：成体SM自身产生雌激素，与受体结合后_______造成不育。
(5)使拟用于实际监测的SM不育的目的是_______。
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