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专题19 生物技术与工程
班级：___________姓名：____________
（共25 题，限时40 分钟）
1．（2024·安徽·高考真题）植物细胞悬浮培养技术在生产中已得到应用。某兴趣小组尝试利用该技术培养
胡萝卜细胞并获取番茄红素，设计了以下实验流程和培养装置（如图），请同学们进行评议。下列评议不
合理的是（ ）
A．实验流程中应该用果胶酶等处理愈伤组织，制备悬浮细胞
B．装置中的充气管应置于液面上方，该管可同时作为排气管
C．装置充气口需要增设无菌滤器，用于防止杂菌污染培养液
D．细胞培养需要适宜的温度，装置需增设温度监测和控制设备
【答案】B
【分析】植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。
【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，欲利用愈伤组织制备悬浮细胞，可用纤维素酶和果
胶酶进行处理愈伤组织，A 正确；
B、装置中的充气管应置于液面下方，以利于培养液中的溶氧量的增加，该管不能同时作为排气管，B 错
误；
C、为了防止杂菌污染培养液，装置充气口需要增设无菌滤器，C 正确；
D、细胞培养时需要保证适宜的温度，因此装置需增设温度监测和控制设备，D 正确。
故选B。
2．（2024·山东·高考真题）在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由菌体
数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对
其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是（ ）
1
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A．相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢
B．发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量
C．发酵过程中pH 下降可抑制大部分细菌的生长
D．发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品
【答案】D
【分析】发酵工程：（1）定义：利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品；主要为微生
物细胞本身或者其代谢产物。（2）分离、提纯产物：产品若是微生物细胞，在发酵结束后，采用过滤、沉淀等方法将菌体
分离和干燥；产品若是微生物代谢物，则根据产物的性质采取 适当的提取、分离和纯化措施。
【详解】A、黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧，相同菌体密度下，菌球体越大越不利于菌体与氧气接触，柠
檬酸产生速率越慢，A 正确；
B、菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对其合成途径的反馈抑制，发酵中期添加一定量的硫酸铵，提高铵离子浓度，
菌体内可提高柠檬酸产量，B 正确；
C、发酵过程中pH 下降导致细菌生命活动所必须的酶失活，可抑制大部分细菌的生长，C 正确；
D、发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行分离、纯化、浓缩、干燥等一系列操作后才能获得柠檬酸产品，D 错误。
故选D。
3．（2024·山东·高考真题）关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是（ ）
A．整个提取过程中可以不使用离心机
B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中
C．鉴定过程中DNA 双螺旋结构不发生改变
D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰
【答案】A
【分析】DNA 的粗提取与鉴定的实验原理是： ①DNA 的溶解性，DNA 和蛋白质等其他成分在不同 浓度
的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可 以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA 溶解或析出， 从
而达到分离的目的;
DNA
②
不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将
蛋白质和DNA 进一步分离; ③在沸水浴的条件下DNA 遇二苯胺会呈现蓝色。
【详解】A、在DNA 的粗提取与鉴定实验中，可将获得的研磨液用纱布过滤后，在4℃的冰箱中放置几分
钟，再取上清液，也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液，A 正确；
B、研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，DNA 在上清液中，应取上清液倒入烧杯中，B 错误；
C、鉴定过程中用沸水浴加热，DNA 双螺旋结构会发生改变，C 错误；
D、加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5 分钟以上，且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察
到较为明显的显色反应，仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰，D 错误。
2
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故选A。
4．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3 种酶X、Y 和Z，trpX、trpY 和trpZ 分别为相应
酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3 种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积
累到一定程度时可分泌到胞外。将这3 种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如
图。据图分析，3 种酶在该合成途径中的作用顺序为（ ）
A．X→Y→Z
B．Z→Y→X
C．Y→X→Z
D．Z→X→Y
【答案】A
【分析】由图可知，接种时，相当于在培养基表面划了一个三角形的三条边。左边那条边
线是用trpY 突变型菌液划线接种的，右边那个边是用trpX 突变型菌液接种的，最下面
那个边是用trpZ 突变型菌液划线接种的。最终结果是，trpY 那条接种线左下方出现了
又黑又粗的明显的菌落，trpX 那条接种线两头出现了明显的菌落，而trpZ 那条接种线，
没有长出明显的菌落，。
【详解】ABCD、添加少量色氨酸，突变体菌株可以生长，色氨酸合成途径的中间产物积累后可排出
胞外，进入培养基后，通过扩散，从而给其他突变型提供代谢原料，帮助其长出明显
的菌落。trpX、trpY 和trpZ 分别为相应酶的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体，据图可知，trpX 不能
为trpY 和trpZ 提供原料，trpY 不能为trpZ 提供原料，trpZ 可以为trpX、trpY 的生长提供原料，推测3 种酶
在该合成途径中的作用顺序为X→Y→Z。
故选A。
5．（2024·山东·高考真题）制备荧光标记的DNA 探针时，需要模板、引物、DNA 聚合酶等。在只含大肠
3
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杆菌DNA 聚合酶、扩增缓冲液、H2O 和4 种脱氧核苷酸（dCTP、dTTP、dGTP 和碱基被荧光标记的
dATP）的反应管①~④中，分别加入如表所示的适量单链DNA。已知形成的双链DNA 区遵循碱基互补配
对原则，且在本实验的温度条件下不能产生小于9 个连续碱基对的双链DNA 区。能得到带有荧光标记的
DNA 探针的反应管有（ ）
反应管
加入的单链DNA
①
5'-GCCGATCTTTATA-3'
3'-GACCGGCTAGAAA-5'
②
5'-AGAGCCAATTGGC-3'
③
5'-ATTTCCCGATCCG-3'
3'-AGGGCTAGGCATA-5'
④
5'-TTCACTGGCCAGT-3'
A．①②
B．②③
C．①④
D．③④
【答案】D
【分析】子链的延伸方向为5'→3'，由题意可知，在本实验的温度条件下不能产生小于9 个连续碱基对的
双链DNA 区，要能得到带有荧光标记的DNA 探针，需要能根据所提供的模板进行扩增，且扩增子链种含
有A。
【详解】分析反应管①～④中分别加入的适量单链DNA 可知，①中两条单链DNA 分子之间具有互补的序列，
但双链DNA 区之外的3'端无模板，因此无法进行DNA 合成，不能得到带有荧光标记的DNA 探针；②中单链
DNA 分子内具有自身互补的序列，由于在本实验的温度条件下不能产生小于9 个连续碱基对的双链DNA 区，
故一条单链DNA 分子不发生自身环化，但两条链可以形成双链DNA 区，由于DNA 合成的链中不含碱基A，不
能得到带有荧光标记的DNA 探针；③中两条单链DNA 分子之间具有互补的序列，且双链DNA 区之外的3'端有
模板和碱基T，因此进行DNA 合成能得到带有荧光标记的DNA 探针；④中单链DNA 分子内具有自身互补的序
列，一条单链DNA 分子不发生自身环化，两条链可以形成双链DNA 区，且双链DNA 区之外的3'端有模板和碱
基T，因此进行DNA 合成能得到带有荧光标记的DNA 探针。
综上，能得到带有荧光标记的DNA 探针的反应管有③④。
故选D。
6．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变
种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于
JGs 发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs 可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
4
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B．JGs 接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs 发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs 发酵过程中活细胞数量的变化
【答案】D
【分析】1、发酵工程生产的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。
2、 产品不同，分离提纯的方法般不同。（1）如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法将菌体从培养
液中分离出来；（2） 如果产品是代谢产物，可用萃取、蒸馏、离子交换等方法进行提取。
3、 发酵过程中要严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。
4、 发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，
因而可以得到较为专的产物。
【详解】A、基因表达的产物是蛋白质，而井冈霉素是JGs 发酵生产的一种氨基寡糖类抗生素，A 错误；
B、JGs 接入发酵罐前需要扩大培养，该过程会影响JGs 的数量，进而影响井冈霉素的产量，B 错误；
C、在一定范围内提高JGs 发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量，但若浓度过大，反而
会降低井冈霉素的产量，C 错误；
D、JGs 是一种放线菌，菌体呈丝状生长，形成的菌落难以区分，因此稀释涂布平板法不宜用于监控JGs 发
酵过程中活细胞数量的变化，D 正确。
故选D。
7．（2024·北京·高考真题）五彩缤纷的月季装点着美丽的京城，其中变色月季“光谱”备受青睐。“光
谱”月季变色的主要原因是光照引起花瓣细胞液泡中花青素的变化。下列利用“光谱”月季进行的实验，
难以达成目的的是（ ）
A．用花瓣细胞观察质壁分离现象
B．用花瓣大量提取叶绿素
C．探索生长素促进其插条生根的最适浓度
D．利用幼嫩茎段进行植物组织培养
【答案】B
【分析】当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入到外界溶液中，由于原生质层比细胞
壁的伸缩性大，当细胞不断失水时，液泡逐渐缩小，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开来，即发生了质壁分离。
【详解】A、花瓣细胞含有中央大液泡，液泡中含有花青素，因此可用花瓣细胞观察质壁分离现象，A 不符合题意；
B、花 瓣含花青素，而不含叶绿素，因此不能用花瓣提取叶绿素， B 符合题意；
C、生长素能促进月季的茎段生根，可利用月季的茎段为材料来探索生长素促进其插条生根的最适浓度，C 不符合题意；
D、月季的幼嫩茎段能分裂，能利用幼嫩茎段的外植体进行植物组织培养，D 不符合题意。
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故选B。
8．（2024·重庆·高考真题）自然条件下，甲、乙两种鱼均通过体外受精繁殖后代，甲属于国家保护的稀有
物种，乙的种群数量多且繁殖速度较甲快。我国科学家通过下图所示流程进行相关研究，以期用于濒危鱼
类的保护。下列叙述正确的是（ ）
A．诱导后的iPGCs 具有胚胎干细胞的特性
B．移植的iPGCs 最终产生的配子具有相同的遗传信息
C．该实验中，子一代的遗传物质来源于物种甲
D．通过该实验可以获得甲的克隆
【答案】C
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理。②配种或人工授精。③对胚胎的收
集、检查、培养或保存。④对胚胎进行移植。⑤移植后的检查。
体外受精主要包括：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精。
【详解】A、胚胎干细胞具有发育的全能性，iPGCs 是诱导型原始生殖细胞，具有成为卵原细胞或精原细
胞的潜能，诱导后的iPGCs 不具有胚胎干细胞的特性，A 错误；
B、移植的iPGCs 分化形成卵原细胞或精原细胞后，通过减数分裂形成配子，在减数分裂过程中基因会发
生重组，最终产生的配子的遗传信息不一定相同，B 错误；
C、由图可知，将物种甲的囊胚期的iPGCs 移植到阻止PGCs 形成的乙鱼的胚胎中，培育出的乙鱼的生殖腺
中的细胞由甲鱼的iPGCs 增值分化而来，该乙鱼再与物种甲杂交，配子均是由物种甲的生殖腺细胞产生，
故子一代的遗传物质来源于物种甲，C 正确；
D、克隆属于无性繁殖，该实验过程中涉及到有性生殖，D 错误。
故选C。
9．（2024·湖南·高考真题）某同学将质粒DNA 进行限制酶酶切时，发现DNA 完全没有被酶切，分析可能
的原因并提出解决方法。下列叙述错误的是（ ）
A．限制酶失活，更换新的限制酶
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B．酶切条件不合适，调整反应条件如温度和酶的用量等
C．质粒DNA 突变导致酶识别位点缺失，更换正常质粒DNA
D．酶切位点被甲基化修饰，换用对DNA 甲基化不敏感的限制酶
【答案】B
【分析】酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，大多数是蛋白质，少部分是RNA，酶具
有特异性、高效性、易受环境因素影响等特点。限制酶特异性识别并切割DNA 上的特定位点。
【详解】A、限制酶失活会使DNA 完全不被酶切，此时应更换新的限制酶，A 正确；
B、酶切条件不合适通常会使切割效果下降，调整反应条件如温度和PH 等，调整酶的用量没
有作用，B 错误；
C、质粒DNA 突变会导致限制酶识别位点缺失，进而造成限制酶无法进行切割，此时应更换
为正常质粒，C 正确；
D、质粒DNA 上酶切位点被甲基化修饰，会导致对DNA 甲基化敏感的限制酶无法进行酶切，
此时应换用对DNA 甲基化不敏感的限制酶，D 正确。
故选B。
10．（不定项）（2024·山东·高考真题）下列关于植物愈伤组织的说法正确的是（ ）
A．用果胶酶和胶原蛋白酶去除愈伤组织的细胞壁获得原生质体
B．融合的原生质体需再生出细胞壁后才能形成愈伤组织
C．体细胞杂交获得的杂种植株细胞中具有来自亲本的2 个细胞核
D．通过愈伤组织再生出多个完整植株的过程属于无性繁殖
【答案】BD
【分析】植物体细胞杂交过程：将植物细胞A 与植物细胞B 用纤维素酶和果胶酶处理，得到不含细胞壁的
原生质体A 和原生质体B，运用物理方法或化学方法诱导融合，形成杂种细胞，再利用植物组织培养技术
将杂种细胞培养成杂种植株。
【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，故用果胶酶和纤维素酶去除愈伤组织的细胞壁获得
原生质体，A 错误；
B、用纤维素酶和果胶酶分别处理不同的植物细胞，得到原生质体，运用物理方法或化学方法诱导融合，
形成杂种细胞，再利用植物组织培养技术将杂种细胞培养成杂种植株，故融合的原生质体需再生出细胞壁
后才能形成愈伤组织，B 正确；
C、体细胞杂交获得的杂种植株细胞中具有来自亲本的的遗传物质，只有1 个细胞核，C 错误；
D、通过愈伤组织再生出多个完整植株的过程属于植物的组织培养，从繁殖看属于无性繁殖，D 正确。
故选BD。
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11．（不定项）（2024·江苏·高考真题）图示普通韭菜（2n=16）的花药结构。为了快速获得普通韭菜的纯
系，科研人员利用其花药进行单倍体育种。下列相关叙述正确的有（ ）
A．花粉细胞和花药壁细胞均具有全能性
B．培养基中生长素与细胞分裂素的比例影响愈伤组织再分化
C．镜检根尖分生区细胞的染色体，可鉴定出单倍体幼苗
D．秋水仙素处理单倍体幼苗，所得植株的细胞中染色体数都是16
【答案】ABC
【分析】生长素与细胞分裂素的用量比值高，有利于根的分化，抑制芽的形成；用量比值低，有利于芽的
分化，抑制根的形成；用量比值适中，促进愈伤组织的形成。
【详解】A、花粉细胞含有一个完整的染色体组，花药壁细胞含有2 个染色体组，都含有该生物生长发育
繁殖的全部遗传信息，均具有全能性，A 正确；
B、愈伤组织再分化过程中，如果细胞分裂素和生长素同时使用，且生长素用量较高，有利于根的分化、
抑制芽的形成，如果同时使用，且细胞分裂素用量较高，有利于芽的分化、抑制根的形成，所以培养基中
生长素和细胞分裂素的比例将影响愈伤组织分化的方向，B 正确；
C、单倍体幼苗细胞含有的染色体数目减半，因此可镜检根尖分生区细胞的染色体，鉴定出单倍体幼苗，C
正确；
D、秋水仙素处理单倍体幼苗，可能有些细胞染色体数目没有加倍，只含有8 条，D 错误。
故选ABC。
12．（不定项）（2024·江苏·高考真题）从牛卵巢采集卵母细胞进行体外成熟培养，探究高温对卵母细胞
成熟的影响，结果如图所示。下列相关叙述错误的有（ ）
A．选取发育状态一致的卵母细胞进行培养
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B．体外培养卵母细胞时通常加入湿热灭菌后的血清
C．对采集的卵母细胞传代培养以产生大量卵细胞
D．体外培养时高温提高了卵母细胞发育的成熟率
【答案】BCD
【分析】在探究高温对卵母细胞成熟的影响实验中，需要控制变量，选取发育状态一致的卵母细胞进行培
养，以确保实验结果的准确性。血清可以为卵母细胞的培养提供营养物质。
【详解】A、选取发育状态一致的卵母细胞进行培养，这样可以排除其他因素的干扰，保证实验结果是由
温度这一变量引起的，A 正确；
B、体外培养卵母细胞时通常加入血清，但是动物血清并不能进行湿热灭菌，否则会使其中部分有效成分
失活，B 错误；
C、卵母细胞不能进行传代培养，因为卵母细胞是生殖细胞，不具有连续分裂的能力，C 错误；
D、由图可知，高温降低了卵母细胞发育的成熟率，而不是提高，D 错误。
故选BCD。
13．（不定项）（2024·江西·高考真题）某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S（含有多个不同的
抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体）。为了建立一种灵敏、高效检测S 蛋白的方
法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S 单克隆抗体（如图）。下列说法正确的是（ ）
A．利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞
B．制备的单克隆抗体A 和单克隆抗体B 是相同的单克隆抗体
C．用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存
D．单克隆抗体A 和单克隆抗体B 都能够特异性识别S 蛋白
【答案】AD
【分析】单克隆抗体的制备：用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B
淋巴细胞，将多种B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，利用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，
未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对上述经选择
9
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培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。从细胞培养液或小
鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。
【详解】A、胶原蛋白酶可以催化分解细胞外的胶原蛋白，因此利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的
骨髓瘤细胞，A 正确；
B、由于蛋白S 含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体，单克隆抗体
A 和单克隆抗体B 来自不同的杂交瘤细胞，因此制备的单克隆抗体A 和单克隆抗体B 不是相同的单克隆抗
体，B 错误；
C、用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，也可以冷冻保存，C 错误；
D、单克隆抗体A 和单克隆抗体B 都来自筛选出的杂交瘤细胞，因此都能够特异性识别S 蛋白上的抗原决
定簇，D 正确。
故选AD。
14．（2024·山东·高考真题）研究发现基因L 能够通过脱落酸信号途径调控大豆的逆境响应。利用基因工
程技术编辑基因L，可培育耐盐碱大豆品系。在载体上的限制酶BsaI 切点处插入大豆基因L 的向导DNA
序列，将载体导入大豆细胞后，其转录产物可引导核酸酶特异性结合基因组上的目标序列并发挥作用。载
体信息、目标基因L 部分序列及相关结果等如图所示。
(1)用PCR 技术从大豆基因组DNA 中扩增目标基因L 时，所用的引物越短，引物特异性越 （填
10
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“高”或“低”）。限制酶在切开DNA 双链时，形成的单链突出末端为黏性末端，若用BsaI 酶切大豆基
因组DNA，理论上可产生的黏性末端最多有 种。载体信息如图甲所示，经BsaI 酶切后，载体上保
留的黏性末端序列应为5'- -3'和5'- -3'。
(2)重组载体通过农杆菌导入大豆细胞，使用抗生素 筛选到具有该抗生素抗性的植株①∶④。为了鉴
定基因编辑是否成功，以上述抗性植株的DNA 为模板，通过PCR 扩增目标基因L，部分序列信息及可选
用的酶切位点如图乙所示，PCR 产物完全酶切后的电泳结果如图丙所示。据图可判断选用的限制酶是
，其中纯合的突变植株是 （填序号）。
(3)实验中获得1 株基因L 成功突变的纯合植株，该植株具有抗生素抗性，检测发现其体细胞中只有1 条染
色体有T-DNA 插入。用抗生素筛选这个植株的自交子代，其中突变位点纯合且对抗生素敏感的植株所占
比例为 ，筛选出的敏感植株可用于后续的品种选育。
【答案】(1) 低 256 5'-CAAT-3' 5'-GTTT-3'
(2) 卡那霉素 Sac Ⅰ ④
(3)1/4
【分析】1、基因工程的基本操作程序包括目的基因的筛选与获取，基因表达载体的构建，将目的基因导
入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。
2、PCR 是一项根据DNA 半保留复制的原理，在体外提供参与DNA 复制的各种组分与反应条件，对目的
基因的核苷酸序列进行大量复制的技术，利用PCR 可以快速的获取和扩增目的基因。
【详解】（1）引物是一小段能与DNA 母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，用于PCR 的引物长度
通常为20~30 个核苷酸。由此可知，在利用PCR 技术从大豆基因组DNA 中扩增目的基因时，所用的引物
越短，则引物的特异性就越低。根据题意可知，限制酶在切开DNA 双链时，形成的单链突出末端为黏性
末端，若用BsaI 酶切大豆基因组DNA，图中给出的只是载体信息，大豆基因组无法从图中看出。只能根
据理论来推测，BsaI 切割产生的黏性末端是NNNN，四个碱基最多可能有256 种排列顺序，故答案应为
256。根据图甲所示的载体信息，经BsaI 酶切后，载体上保留的黏性末端序列应为5'-ATTG3'和5'-
AAAC-3'。
（2）根据图示信息可知，重组载体通过农杆菌导入大豆细胞当中的片段包含了卡那霉素抗性基因，因此
可以通过使用卡那霉素筛选到具有该抗生素抗性的植株。根据图甲可知，目标基因L 的目标序列跟突变序
列之间的差异只有在Sac Ⅰ酶切位点上存在差异，BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ这两个酶切位点完全相同，根据图丙及
题意可知，所展示的电泳结果可知，要以上述抗性植株的DNA 为模板，通过PCR 扩增目标基因L，并对
PCR 产物完全酶切后进行电泳从而判断植株含有的是目标序列还是突变序列，因此只能选用限制酶Sac Ⅰ，
限制酶Sac Ⅰ在突变序列存在酶切位点，但是目标序列没有，因此经过该酶酶切后突变序列的电泳条带会
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出现两条，目标序列是一条带，根据图丙结果可知，只有④为纯和突变的植株。
（3）根据题意可知，在实验当中获得了一株基因l 成功突变的纯合之中，已知该植株具有抗生素抗性，经
过检测发现其体细胞中只有一条染色体含有T-DNA 插入。根据图示可知，抗生素抗性基因在T-DNA 片段
上，因此如果用抗生素来筛选该植株进行自交，可知其配子中含有抗生素抗性基因的比例为1/2，不含T-
DNA（对抗生素敏感）的配子比例为1/2，因此突变位点纯合且对抗生素敏感的植株所占比例应该为
1/2×1/2=1/4，纯突变位点纯合且具有抗生素抗性的植株所占比例应该为3/4，可以筛选出的敏感植株可用
于后续的品种选育。
15．（2024·广东惠州·二模）中国科学家采集了某海域1146 米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到
新的微生物菌株X，并进一步研究了其生物学特性，结果如图。下列说法错误的是（ ）
A．制备富集培养基可采用高压蒸汽灭菌法灭菌、冷却后再接入样品
B．为了分离和鉴定微生物菌株X，只能用稀释涂布平板法在培养基上进行接种
C．若要快速大量繁殖菌株X，培养基应以纤维素作为首选碳源、并制成液体培养基
D．脱离了深海冷泉的特殊环境后，样品中可能仍有很多微生物不能被分离筛选出来
【答案】B
【分析】1、进行微生物纯培养时，人们需要按照微生物对营养物质的不同需求配制培养基，满足微生物
对水、无机盐、碳源、氮源以及pH、O2、特殊营养物质（如维生素）的需求。
2、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术主要包括消毒和灭菌。消毒较为温和，仅杀
死物体表面或内部的部分微生物；灭菌较为强烈，要杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
3、微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。操作方法各不相同，但是核心都是要防
止杂菌的污染，保证培养物的纯度。
【详解】A、培养基配制后通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。冷却后再接种，A 正确；
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B、接种时，可以采用稀释涂布平板法或平板划线法，将菌种分散在固体培养基上，经过培养得到单菌落，
从而获得纯净培养物，B 错误；
C、分析图中曲线可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素
为碳源时生长状况最好，所以若要快速大量繁殖菌株X，培养基应以纤维素作为首选碳源、并制成液体培
养基，C 正确；
D、根据题意，深海冷泉中存在的某些微生物，只有利用冷泉中的特有物质才能生存，或着只能在深海冷
泉的特定环境中才能存活，故在缺少深海冷泉特有物质或缺少特定环境的情况下，将采集的样品置于各种
培养基中培养，仍可能有很多微生物不能被分离筛选出来，D 正确。
故选B。
16．（2024·广西百色·一模）谷氨酸是生产谷氨酸钠（味精）的原料，运用发酵工程生产谷氨酸需要用到
谷氨酸棒状杆菌，下图1 是利用玉米淀粉作为材料制备谷氨酸的流程图。图2 是细菌的增长曲线图，其中
阶段3 表示稳定期，是代谢产物（如谷氨酸）大量积累的时期。下列叙述错误的是（ ）
A．谷氨酸棒状杆菌与醋酸菌的代谢类型相同
B．培养谷氨酸棒状杆菌和其他所有微生物时均需要添加维生素B
C．发酵工程的中心环节是接种菌种之后的发酵过程
D．在稳定期添加营养物质、流出发酵液有助于提高谷氨酸产量
【答案】B
【分析】培养基中一般含有水、碳源、氮源、无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还
需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
【详解】A、谷氨酸棒状杆菌与醋酸菌的代谢类型相同都是异养需氧型细菌，A 正确；
B、能合成维生素B 的微生物，其培养基中不需要添加维生素B，B 错误；
C、发酵工程的中心环节是接种菌种之后在发酵罐中的发酵过程，C 正确；
D、在稳定期，菌体的生长速度与死亡速度达到平衡，此时及时补充营养物质可以保证菌体的持续生长和
代谢，流出发酵液可排出代谢废弃物，从而提高谷氨酸的产量，D 正确。
故选B。
17．（24-25 高三上·河北邢台·阶段练习）卡其霉素是一种细胞毒素，对肿瘤细胞和正常细胞均具有杀伤力。
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抗体—药物偶联物（ADC）通过细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，其作用机
制如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．制备单克隆抗体时要向实验动物注射卡其霉素
B．ADC 中抗体的作用是特异性识别杀伤肿瘤细胞
C．用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞不能传代培养
D．ADC 能实现精准识别，减少对正常细胞的损伤
【答案】D
【分析】据图分析：抗体与靶细胞膜上的特异性受体结合通过胞吞的方式把药物（细胞毒素）一并带进靶
细胞，引起靶细胞溶酶体膜的破裂，最后导致细胞凋亡，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。
【详解】A、制备单克隆抗体时不需要向实验动物注射细胞毒素，而是注射目标抗原，以刺激动物体内产
生特异性抗体，A 错误；
B、在ADC 中，抗体的主要作用是特异性识别和结合肿瘤细胞，而不是杀伤细胞，B 错误；
C、杂交瘤细胞可以进行传代培养，是产生单克隆抗体的关键，C 错误；
D、抗体-药物偶联物（ADC）通过抗体的特异性识别功能，可以精确地靶向结合肿瘤细胞，从而减少对正
常细胞的损伤，D 正确。
故选D。
18．（2024·云南保山·三模）作为野生植物的后代，许多栽培植物与它们的祖先产生了生殖隔离。野生型
油菜抗病能力强，但出油率低，栽培油菜品种出油率高，但抗病能力低。科学家利用植物体细胞杂交技术
培育具有较强抗病能力的油菜新品种，培育过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．进行①处理时能用纤维素酶和果胶酶
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B．需要在低渗溶液环境下进行①处理
C．②过程中经PEG 处理可诱导原生质体融合
D．细胞融合后，显微镜观察选用体积大、含叶绿体的细胞用于继续培养
【答案】B
【分析】据图分析可知，图示为采用植物体细胞杂交技术和植物组织培养技术获得具有较强抗病能力油菜
新品种的流程图，图中①表示采用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁的过程；②表示诱导原生质体
融合的过程。原生质体融合后利用植物组织培养技术得到杂种植株。
【详解】A、进行①处理时能用纤维素酶和果胶酶，制备原生质体，A 正确：
B、需要在等渗（或稍微高渗）溶液环境下进行①处理，低渗溶液环境下可能会导致原生质体吸水破裂，B
错误；
C、PEG 能够诱导原生质体融合，C 正确：
D、细胞融合后，显微镜观察选用体积大、含叶绿体的细胞用于继续培养，D 正确。
故选B。
19．（2024·云南保山·三模）α−AAT 是一种具有较高应用价值的医药蛋白。科学家利用基因工程和胚胎工
程等技术培育出可生产α−AAT 的绵羊，培育过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．采集的卵母细胞需要在体外培养到M Ⅱ期
B．图中去核其实是去除纺锤体—染色体复合物
C．可使用电刺激、Ca2+ 载体等物理方法激活重构胚
D．胚胎移植时受体一般不会对早期胚胎发生免疫排斥
【答案】C
【分析】动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞
发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移槙和体细胞核移植。
由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，
因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。
【详解】A、采集的卵母细胞作为受体细胞，卵母细胞需要在体外培养到M Ⅱ期，A 正确；
B、卵母细胞培养到减数第二次分裂的中期，此时细胞内具有促进全能性表达的物质，在尽可能短的时间
内去除纺锤体一染色体复合物，即除去受体细胞的遗传物质，再注入体细胞，形成融合细胞，B 正确；
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C、Ca2+载体激活重构胚属于化学方法，C 错误；
D、胚胎移植时，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供
了可能，D 正确。
故选C。
20．（2024·天津·模拟预测）免疫PCR 是对微量抗原的一种检测方法。下图是利用该技术检测牛乳中微量
抗生素的流程图：首先将抗体1 固定在微板上，冲洗后加入待检的牛乳，再加入DNA 标记的抗体2，进行
PCR 扩增，最后进行电泳检测。下列相关叙述错误的是（ ）
A．PCR 扩增获得产物的量越多，电泳后距离点样孔越近
B．图示过程所需抗体无需对高温有较强的耐受性
C．图示过程中三次冲洗的目的均不同
D．图示抗原检测过程发生两次抗原与抗体的结合
【答案】A
【分析】免疫PCR 是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA 片段标记到抗体2 上，通过抗原抗体的
特异性识别并结合，抗体2 会和固定抗体1、抗生素形成复合物“固定抗体1—抗生素—抗体2”，再用
PCR 方法将这段DNA 进行扩增，通过检测PCR 产物的量，即可推知固定抗体1 上吸附的抗生素的量。
【详解】A、PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，在凝胶中DNA 分子的迁移速率与凝胶的浓度、
DNA 分子的大小和构象等有关。在带电量相同的情况下，相对分子质量比较大的DNA 片段迁移速度慢，
因而距离加样孔越近，但与产物的量无关，A 错误；
B、该免疫PCR 检测的原理是将一段已知序列的DNA 片段标记到抗体2 上，通过抗原抗体的特异性识别
并结合，抗体2 会与固定抗体1、抗生素形成复合物“固定抗体1—抗生素—抗体2”，再用PCR 方法将这
段DNA 进行扩增，通过检测PCR 产物的量（DNA 片段的量），即可推知固定抗体1 上吸附的抗生素的量，
与抗体是否耐高温没有多大关系，因此图示过程所需抗体无需对高温有较强的耐受性，B 正确；
C、图示过程，第一次冲洗是为了去除未结合的抗体1，第二次冲洗是为了去除未结合的抗生素和牛奶成分，
第三次冲洗是为了去除未结合的抗体2，三次冲洗的目的均不同，C 正确；
D、据图可知，图示抗原检测过程分别与抗体1 和抗体2 结合了一次，共发生两次抗原与抗体的结合，D
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正确。
故选A。
21．（24-25 高三上·湖北宜昌·开学考试）图1 是某单基因遗传病的遗传系谱图，该病在人群中的发病率为
1/8100。科研人员提取了四名女性的DNA，用PCR 扩增了与此病相关的基因片段，并对产物酶切后进行
电泳(正常基因含有一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点)，结果如图2。相关叙述正确的是（
）
A．该病的遗传方式可能为伴X 染色体隐性遗传
B．Ⅱ-1 与Ⅱ-2 婚配生一个患病男孩的概率为1/182
C．该突变基因新增的酶切位点位于310bp 或217bp 中
D．扩增Ⅱ-2 与此病相关的基因片段，酶切后电泳将产生4 种条带
【答案】B
【分析】分析图1，Ⅰ-1 和Ⅰ-2 表现正常，但生下了Ⅱ-2 的患病女性，所以该病是常染色体隐性遗传病，
用A/a 表示控制该病的基因，所以，Ⅰ-1 和Ⅰ-2 基因型是Aa。从图2 中可以看出，Ⅱ-3、Ⅱ-4 和Ⅰ-2 电泳
图相同，所以基因型都是Aa，Ⅱ-5 与他们不同，但表现正常，基因型是AA。
【详解】A、Ⅰ-1 和Ⅰ-2 表现正常，但生下了Ⅱ-2 的患病女性，所以该病是常染色体隐性遗传病，A 错误；
B、该病在人群中的患病率为1/8100，则致病基因频率为1/90，正常基因频率为89/90，根据基因平衡定律，
Ⅱ-1 表现正常，基因型为Aa 的概率=Aa/AA+Aa=(2×A 基因频率×a 基因频率)/(A 基因频率×A 基因频率
+2×A 基因频率×a 基因频率)=(2×1/90×89/90)/（1/90×1/90+2×1/90×89/90）=2/91，其与Ⅱ-2Aa 婚配生一个患
病男孩的概率为2/91×1/4=1/182，B 正确；
C、结合图2 可知，正常基因酶切后可形成长度为310bp 和118bp 的两种DNA 片段，而基因突变酶切后可
形成长度为217bp、93bp 和118bp 的三种DNA 片段，这说明突变基因新增的酶切位点位于长度为310bp
（217+93）的DNA 片段中，C 错误；
D、基因突变酶切后可形成长度为217bp、93bp 和118bp 的三种DNA 片段，Ⅱ-2 基因型是aa，只含有突变
基因，所以酶切后电泳将产生三种条带，D 错误。
故选B。
22．（2024·湖北襄阳·一模）噬菌体展示技术是将外源蛋白基因插入到噬菌体外壳蛋白基因的适当位置，
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使外源基因随外壳蛋白基因的表达而表达，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术
（如图所示）。下列叙述错误的是（ ）
A．噬菌体抗体展示过程，抗体的合成场所一定是受体细胞的核糖体
B．噬菌体展示库的构建需将特定的基因片段拼接重组在噬菌体载体上并转染受体细胞
C．建立噬菌体展示库需要的工具酶有限制酶、DNA 聚合酶和RNA 聚合酶
D．通过图中诱变处理及筛选，最终可能筛选出与某种抗原亲和力更强的抗体及其基因
【答案】C
【分析】噬菌体属于DNA 病毒，是由蛋白质外壳和内部遗传物质构成。题中技术的原理是将目标基因与噬菌体DNA 重组，
并使目标蛋白表达于外壳上，进行筛选和鉴定。
【详解】A、噬菌体作为病毒不具有独立的代谢功能，为专性寄生物，因此，噬菌体抗体展示过程中抗体作为蛋白质，其合
成场所一定是受体细胞的核糖体，A 正确；
B、噬菌体展示库的构建需将特定的基因片段拼接重组在噬菌体载体上并转染到受体细胞中，随着受体细胞DNA 复制而复
制，B 正确；
C、建立噬菌体展示库需要切割目的基因和病毒载体，然后将二者连接起来，需限制酶和DNA 连接酶等，该过程中不需要
RNA 聚合酶，C 错误；
D、诱变的原理是基因突变，具有不定向性，所以通过图中诱变处理及筛选最终可获得与抗原亲和力更强的抗体及其基因，
D 正确。
故选C。
23．（2024·浙江·模拟预测）马克·波斯特被誉为“细胞培养肉”之父，他从牛的身上提取出一种被称为
“肌卫星细胞”的干细胞，将其置于培养基中，让其自行繁殖、生长，直至形成一条细薄的粉红色肌肉条。
下列叙述正确的是（ ）
A．肌卫星细胞是高度分化的细胞，培养时需用胰蛋白酶进行脱分化处理
B．培养过程需定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞造成危害
C．培养过程需在无菌无毒环境，添加5%的CO2目的是为了刺激细胞呼吸
D．若用人的肌细胞培育人造肉可能会带来伦理问题，该技术需严格禁止
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【答案】B
【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶
或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用
胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。定期更换培养液的目的是清除代谢废物﹐防止
细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。将细胞置于95%空气和5%CO2的混合气体环境培养既满足细胞呼
吸对氧气的需求，又能维持培养液pH。
【详解】A、肌卫星细胞是高度分化的细胞，培养时需用胰蛋白酶使其分散成单个细胞，A 错误；
B、为防止细胞代谢产物积累对细胞造成危害，培养过程需定期更换培养液，B 正确；
C、培养过程需在无菌无毒环境，添加5%的CO2目的是维持培养液的pH，C 错误；
D、用人的肌细胞培育人造肉不会带来伦理问题，D 错误。
故选B。
24．（2024·辽宁沈阳·三模）腓骨肌萎缩症（CMT）是一种常见的遗传性疾病，患者常出现神经元肿胀、
轴突变性及肌肉萎缩等症状。为探究突变的NEFH 基因与CMT 的关系，某科研团队利用生物工程技术，
构建出多只含有突变的NEFH 基因的转基因模型鼠。据图回答下列问题：
(1)图1 中基因的编码区是指基因中能够转录mRNA 的区域，其上游、下游存在能调控转录过程的非编码区。
该基因的启动子位于图1 中 区段（填“非编码区1”、“编码区”或“非编码区2”）。
(2)构建基因表达载体前，需对该基因进行PCR 扩增。PCR 的原理是 。在不影响该基因编码功
能前提下，应选图2 中限制酶 对该基因进行切割，载体也需用相同的限制酶进行切割的原因是
。
(3)构建基因表达载体后导入小鼠体细胞，再结合生物工程中的 技术制备出转基因模型鼠（如
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图3）。4 号鼠遗传物质与2 号鼠 （填“完全”或“不完全”）相同，原因是 。若
4 号鼠表现为 ，说明突变的NEFH 基因与CMT 的发生有关，此项研究为CMT 的靶向治疗提供
了理论基础。
【答案】(1)非编码区1
(2) DNA 半保留复制 XhoI、XbaI 产生相同的末端，以便能用DNA 连接酶将载体和目的基
因连接
(3) 细胞核移植、早期胚胎的培育、胚胎移植 不完全 4 号鼠的遗传物质还有来自1 号鼠的细
胞质基因，以及人为导入的“突变的 NEFH 基因” 腓骨肌萎缩
【分析】1、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将
目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。
2、基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中
特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA 连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯
键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体、动植物病毒。
【详解】（1）在真核细胞的基因结构中，包括编码区和非编码区，其中编码区又分为外显子和内含子，
基因的非编码区存在启动子和终止子，启动子和终止子都是一段特殊的DNA 序列，属于基因的非编码区，
分别位于编码区的上游和下游，所以该基因的启动子应该位于图1 的非编码区1。
（2）PCR 的原理是DNA 半保留复制。加入限制酶后要不影响该基因编码功能，则酶切处理后的片段连接
到运载体之后不影响编码区的序列。BamH I、Pst I 的酶切位点都处于编码区中间，经酶切处理后的片段连
接至运载体后序列发生了变化。XhoI、XbaI 的酶切位点也在编码区，但与相同切口的运载体连接后，编码
序列未发生变化，因此在不影响该基因编码功能的前提下，应选择的限制酶是XhoI、XbaI。载体也需用相
同的限制酶进行切割的原因是使其产生相同的末端，以便能用DNA 连接酶将载体和目的基因连接。
（3）根据图3 可以看出，培育出转基因模型鼠除了基因工程技术，还有细胞核移植、早期胚胎的培育、胚
胎移植等技术。4 号鼠遗传物质与2 号鼠不完全，原因是4 号鼠的遗传物质还有来自1 号鼠的细胞质基因，
以及人为导入的突变的 NEFH 基因。若4 号鼠表现为腓骨肌萎缩(症)(或CMT、神经元肿胀、轴突变性、
肌肉萎缩均可)，说明突变的NEFH 基因与CMT 的发生有关，此项研究为CMT 的靶向治疗提供了理论基
础。
25．（24-25 高三上·湖北宜昌·开学考试）番茄不耐寒，冬季容易冻坏，难以储藏。我国科研人员从某植物
中提取了一种抗冻基因AtCOR15a，经过一系列过程获得转基因抗冻的番茄新品种，操作流程如图。回答
下列问题：
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(1)用PCR 技术扩增AtCOR15a 基因时需要添加引物，引物的作用是 。
(2)如果要将 AtCOR15a 基因与质粒构建重组DNA 分子，一般采用双酶切法，据图分析选用的两种限制酶
组合是 。
(3)图中是采用 法将目的基因转移到番茄细胞中，并将其整合到该细胞的 上。
(4)为了提高 AtCOR15a 基因的表达能力，可将 AtCOR15a 基因与外源强启动子连接，如下图所示。
利用PCR 检测上述连接是否正确，可选择的引物组合是 (填字母)，该PCR 反应体系中需加入
酶。
A．①+② B．①+③ C．②+③ D．③+④
(5)为了进一步提高番茄的储藏时间，可从该植物体内提取 ErsI 基因(乙烯受体基因)，按照下图流程将
ErsI 基因重新导回该植物，致使该植物原有 ErsI 基因翻译受抑制。已知限制酶EcoRI 和 XhoI、BamHI
切割后露出的黏性末端碱基序列不同，据图分析，提取的目的基因A、B 两端需分别添加 的识别
序列。推测该方法提高番茄储藏时间的机理是 。
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【答案】(1)使DNA 聚合酶能够从引物的3’端开始复制
(2)Hind Ⅲ和BamH Ⅰ
(3) 农杆菌转化法 染色体DNA
(4) B TaqDNA 聚合（耐高温DNA 聚合）
(5) XhoI 和EcoRI 抑制乙烯受体基因的表达，从而无法正常识别乙烯信号，进而延缓成熟
【分析】基因工程的基本操作程序：第一步：目的基因的获取；第二步：基因表达载体的构建（核心）；
第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持
稳定和表达的过程；第四步：目的基因的检测和表达。
【详解】（1）用PCR 技术扩增AtCOR15a 基因时需要添加引物，引物是已知一段目的基因的核苷酸序列，
其作用是使DNA 聚合酶能够从引物的3’端开始复制。
（2）为了能筛选重组DNA 分子，必须保留抗生素抗性基因，不能选择SmaⅠ，若选择EcoRⅠ，则目的基因
两端具有相同的黏性末端，目的基因会自身环化，综上分析，采用双酶切法，据图分析选用的两种限制酶
组合是Hind Ⅲ和BamHⅠ。
（3）将目的基因转移到植物细胞常使用农杆菌转化法，所以当②侵染番茄细胞后，利用农杆菌转化法将
目的基因转移到番茄细胞中，并且将其整合到该细胞的染色体DNA 上。
（4）利用PCR 检测连接是否成功，应当将强启动子和AtCOR15a 基因都扩增出来，所以可选择的引物组
合是①+③。
故选B。
该PCR 反应体系中需加入TaqDNA 聚合（耐高温DNA 聚合）酶，以此来扩增DNA。
（5）利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，能进入细胞的是携带目的基因的T-DNA 片段，LB、
RB 分别是T-DNA 的左边界和右边界，因此ErsI 基因(乙烯受体基因)应反向插入LB 和RB 之间，故提取的
目的基因A、B 两端需分别添加XhoI 和EcoRI。推测该方法提高番茄储藏时间的机理是抑制乙烯受体基因
的表达，从而无法正常识别乙烯信号，进而延缓成熟。
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