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微专题9 限时训练 微生物培养技术
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
.微生物的基本培养技术（提供营养，确保无其他杂菌）
（一）培养基的配制
1.培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.种类
a.按物理性质分
固体培养基（加琼脂）：用于实验室菌种的分离.鉴定.计数等
液体培养基（不含凝固剂）：用于工业生产（扩大培养）
b.按用途分
选择培养基：从众多微生物中分离所需要的微生物
鉴别培养基：鉴别不同种类的微生物
c.按成分分
天然培养基（有些成分未知）：用于工业生产
合成培养基（各成分已知并按一定比例配制的）：用于实验室分离.鉴定.计数
比较
概念
举例
选择培
养基
培养基中加入某种化学物质以促
进所需要的微生物生长，抑制不
需要的微生物生长
1. 培养基中加入青霉素：培养酵母菌和霉菌，抑
制细菌生长
2. 加入高浓度食盐，培养耐盐菌，如金黄色葡萄
球菌
鉴别培
养基
根据微生物的代谢特点在培养基
中加入某种指示剂或化学药品
在培养基中加入伊红-亚甲蓝：鉴别饮用水中是否
含有大肠杆菌（菌落呈深紫色，并带有金属光
泽）
3.培养基的成分
a.1000ml 牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
组分
含量
提供的主要营养
牛肉膏
5g
碳源.磷酸盐和维生素等
蛋白胨
10g
氮源和维生素等
NaCl
5g
无机盐
H2O
定容至1000ml
水
b.营养成分：虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水.碳源.氮源.无机盐等营养物质
此外，培养基还需满足微生物生长对PH.特殊营养物质以及O2的需求
例如培养 乳酸杆菌—维生素；细菌—培养基调至中性或弱碱
霉菌—培养基调至酸性；厌氧微生物—提供无氧条件
碳源 无机碳：CO2，NaHCO3—培养自养生物
有机碳：葡萄糖，脂肪酸，花生粉，饼，石油等—提供异养生物
氮源 无机氮：N2,NH3,铵盐，硝酸盐
有机氮：蛋白胨，尿素等
（二）无菌技术
1
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1.获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵
消毒：是指使用较为温和的物理.化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物
灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢（抗逆性休眠体）和
孢子（无性生殖细胞）
a. 对于操作的空间.操作者的衣着和手进行清洁和消毒
b. 用于微生物培养的器皿.接种用具和培养基等进行灭菌
c. 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行
d. 应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
2.常用方法
消毒
a. 煮沸消毒：100℃煮沸5~6min
b. 巴氏消毒：不耐高温的液体，如牛奶 在62-65℃消毒30min 或80-90℃处理30s-1min 可杀
死牛奶中绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分
c. 化学药剂消毒：酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等
d. 紫外线消毒：接种室，接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min 在照射前，适
量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液
e. 生物消毒法：利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物
灭菌
a. 湿热灭菌：用沸水.流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌效果最好。压
力100kpa，温度121℃，维持15-30min（培养基灭菌）
b. 干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的，如玻璃器皿（吸管，培养皿和金属用具等）。
温度160-170℃的热空气中维持2-3h。
c. 灼烧灭菌：接种工具如涂布器.接种环.接种针或其他金属用具.直接在酒精灯火焰的充分燃
烧层灼烧，试管口.瓶口也可以灼烧灭菌。
（三）微生物的纯培养
1.相关概念：
培养物：将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体
纯培养物：由一个单体繁殖所获得的微生物群体
纯培养：获得纯培养物的过程
2.常用接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法
平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作
目的是：将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由
一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
稀释涂布平板法：则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到
琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的
微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
3.实践：酵母菌的纯培养 P12
（1）原理：微生物群分散成单个细胞在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见
的，有一定形态结构的子细胞群体，这就是群落。
（2）方法：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培
养得到的单一菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
（3）步骤
2
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1)
制备培养基
配制培养基：马铃薯切块+水 软烂 滤液+葡萄糖+琼脂
灭菌 培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌），压力100kpa，温度121℃
培养皿：干热灭菌，温度160-170℃灭菌2h
倒平板：50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板
2)
接种和分离酵母菌：用平板划线法接种，未接种的平板倒置
3)
培养酵母菌
待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h
（4）实验结果的分析
a.培养未接种的培养基的目的：是检测培养基是否被杂菌污染（或检测培养基制备是否合
格）未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应重新制备；若无菌落生长，
则说明未被污染
b.在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色.形状和大小上相似，酵母
菌落一般表面光滑，多呈乳白色
c.若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操
作过程中被杂菌污染
附：平板划线法操作步骤
1）取菌液:灼烧接种环 冷却并拔棉塞 试管口通过火焰 蘸取一环菌液 瓶口通过火焰并
塞上棉塞
2）第一次划线：用接种环在培养基表面划三至五条平行线
3）重复划线
简答：
1.平板冷却后为什么要将平板倒置？
可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
2.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线结束时，仍然需要灼烧
接种环？为什么？
灼烧时期
目的
取菌种前
杀死接种环上原有微生物
每次划线前
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线
的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
接种结束后
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
3.若要按照如图
d 进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？
图中共划了5 个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6
次。
4.在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是？
划线后，线条末端酵母菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使酵
母菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。
二.微生物的选择培养与计数
1.选择培养基
3
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取菌液：取0.1ml 菌液 滴加到培养基上
涂布器消毒：涂布器浸在酒精中
涂布器灭菌：灼烧涂布器，待酒精燃尽，冷却再涂
布
涂布平板
（1）自然界中目的菌的筛选
a.实例：聚合酶链式反应（PCR）中用到的耐高温的DNA 聚合酶，就是从热泉中筛选出来的
水生栖热菌中提取出来的。
b.依据：水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生产，而绝大多数微生物在此条件下不能生存
（生物与环境相适应）
（2）实验室中目的菌的筛选
a.原理：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养.温度和PH 等）同时抑制或阻止其他微
生物的生长。
b.方法：利用选择培养基分离
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
2.微生物的选择培养
（1）方法：对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上
（2）稀释涂布平板法的操作过程
1）铲去土样 2）等比稀释（梯度稀释） 3）涂布平板
（3）培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入恒温箱中培养1~2d
3.微生物的数量测定
（1）稀释涂布平板法—活菌计数法（结果偏小：是菌落数而不是活菌数）
a.原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的
一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
b.计数原则
1）为保证结果准确，一般选择菌落数为30-300 的平板进行计数
2）在设计试验时，在同一稀释度下，应至少对3 个平板进行重复计数，然后求出平均值
3）统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上
观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
（2）显微镜直接计数法（结果偏大：活菌+死菌）
一种常用的，快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计
数板（比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞，霉菌孢子等的计数 P18）
（3）计算公式
每克样品中的菌株数=稀释的倍数·某一稀释度下平板上生长的平均菌落数/涂布平板时所用的稀释液的
体积（ml）
即=C 平M 倍/V 涂 一般V 涂=0.1ml
简答：用平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？
不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环时，
也会杀死一部分菌类。
实践（一）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.实验目的:（1）从土壤中分离出能分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟有多少这
样的细菌
2.背景：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶
CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3
4
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（即加入刚果红的培养基）
NH3会使培养基的碱性增强.PH 升高.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某
种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变红，我们就可以准确地鉴定该菌种能够分解尿素
3.筛选菌株：配制以尿素为唯一氮源的选择培养基
4.设置对照：目的是排出非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
如 a.培养物中是否含有杂菌污染—可设置未涂布的平板做空白对照（或接种无菌水）
b.选择培养基是否筛选出菌落—可用牛肉膏蛋白胨培养基做对照
如果牛肉膏蛋白胨培养基上菌落数目明显大于选择培养基数目，说明选择培养基已筛选出一
些菌落。
5.实验流程
土壤取样 梯度稀释 涂布平板 微生物的培养与观察
注：
a. 土壤取样时，一般要铲去表层土，因为细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝
大多数分布在距地表3~8cm 的土壤层
b. 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品进行培养，细菌一般选104.105.106的稀释液
进行平板培养，目的是以保证获得菌落数在30-300 之间，适于计数的平板
c. 细菌一般在30-37℃温度下培养1~2d，每隔24h 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时
的记录作为结果，原因是这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
d. 菌落特征包括：菌落的形状.大小.隆起度和颜色等
简答：利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物都是能分解尿素的微生物吗？
不一定，因为有些微生物可以利用尿素分解菌的代谢产物进行生长繁殖。
（二）分解纤维素的微生物的分离
一.基础知识
（1）纤维素和纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分，即C1酶.CX酶.葡萄糖苷酶。
纤维素 纤维二糖 葡萄糖
（2）纤维素分解菌的筛选—刚果红染色法
原理：刚果红染料能与纤维素这样的多糖形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红
色就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样，我们就可以通过
是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
二.实验流程
土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈
的菌落
注：选择培养基是—纤维素为唯一碳源（液体培养基）
选择培养基的目的是：增加目的菌（纤维素分解菌）的浓度（浓缩培养）
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1.高考常考的结论语句
①培养基及无菌技术
(1)微生物培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源及生长因子等。
(2)制备固体培养基的步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等。
(3)消毒指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢
子)。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
②微生物的分离与培养
(1)纯化微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法和稀释涂布平板
法都能获得单细胞菌落。平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。
(2)平板划线操作的三个易错点：灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种，以免温度太高杀死
菌种；划线时最后一区域不要与第一区域相连；划线时用力要大小适当，防止用力过大将培
养基划破。
③微生物的应用
(1)纤维素酶是一种复合酶，它至少包括C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶。前两种酶使纤维素分解
成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
(2)尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都需使用选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一
的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。
(3)鉴定尿素分解菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，鉴定纤维素分
解菌的方法为刚果红染色法。
2.比较平板划线法和稀释涂布平板法的区别
3.比较两种微生物计数方法
比较项目
间接计数法(稀释涂布平板法)
直接计数法(显微计数法)
原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生
长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一
利用特定细菌计数板或血细
胞计数板，在显微镜下计算
6
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个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能
推测出样品中大约含有多少活菌
一定容积的样品中微生物的
数量
公式
每克样品中的菌落数＝C/V×M。C：某稀释
度下平板上生长的平均菌落数，V：涂布平
板时所用的稀释液的体积(mL)，M：稀释倍
数
每毫升原液所含细菌数：每
小格内平均细菌数
×400×104×稀释倍数
缺点
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观
察到的只是一个菌落
不能区分细胞死活
结果
比实际值偏小
比实际值偏大
一、单选题
1．胶质芽孢杆菌可以分解含钾矿物硅酸盐并释放出钾离子供植物利用，它还可产生多种生物活性物质，
促进植物生长。某实验室在土壤中分离到了胶质芽孢杆菌NS05。有关NS05 的分离、纯化和计数的叙述，
正确的是（ ）
A．培养基中的氮源仅能提供 N 元素
B．培养基 pH 的调节在灭菌前后进行都可以
C．可采用平板划线法对胶质芽孢杆菌进行分离和计数
D．分离纯化 NS05 时可使用矿物质硅酸盐作为唯一钾源的培养基
2．图甲、图乙是用培养基当纸，接种环当笔，以各种形态颜色的细菌和真菌当颜料画出的别具风格的作
品。下列说法错误的是（ ）
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A．图甲和图乙均为固体培养基，均采用了平板划线法进行接种
B．制备培养基时要经过计算→称量→溶化→灭菌→调pH→倒平板等步骤
C．使用接种环接种时，取菌种前和接种完成后都需将接种环进行灼烧灭菌
D．培养成型的作品应低温保存，以免菌株疯长影响整体效果
3．生物培养过程中，要十分重视无菌操作，下列有关叙述正确的有（ ）
① 干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢
② 家庭制作泡菜过程中产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长
③ 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
④ 涂布平板时所用的涂布器需酒精浸泡后灼烧灭菌
⑤ 培养基、锥形瓶都要进行干热灭菌
⑥ 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌
⑦ 带菌培养基必须经灭菌后才能倒掉
A．一项
B．二项
C．三项
D．四项
4．下列关于微生物纯培养的相关叙述中，正确的是（ ）
A．配制培养基、倒平板需在酒精灯火焰旁进行
B．为防止培养基脱落需将接种后的平板正置培养
C．用平板划线法能在固体培养基的表面形成单菌落
D．菌落的形状、颜色、数目都可作为菌种鉴定的依据
5．微生物的接种方法有很多种，穿刺接种是指用接种针挑取少量的菌，自培养基的中心垂直地刺入半固
体培养基中，然后沿原穿刺线将针拔出的接种法。下列有关叙述正确的是（ ）
A．该接种方法可用于厌氧菌种的接种
B．灭菌后待培养基冷却到室温时，在酒精灯火焰附近将其倒入培养装置
C．在火焰上灼烧接种针后要立即接种，防止空气中杂菌污染接种针
D．培养基的配制、分装及微生物的接种过程都需要进行无菌操作
6．图为筛选产脲酶细菌的过程，下列说法错误的是（ ）
A．利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数
B．选择培养基中应以尿素为唯一氮源
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C．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理
D．鉴别培养基中可加入酚红指示剂
7．我国科考船采集了深海冷泉附近的沉积物样品，从中分离出微生物，并进一步研究了其生物学特性，
以便更好地利用深海微生物，具体过程如图所示，图中Ⅰ～Ⅴ表示操作步骤。下列相关叙述错误的是（
）
A．培养基①是液体培养基，培养基②是固体培养基
B．用平板划线法纯化菌种时，接种环的灼烧次数比划线次数多一次
C．若在培养过程中向培养基①内充满N₂，则此时的培养基①是鉴别培养基
D．V 过程用稀释涂布平板法对微生物进行计数，结果会小于实际微生物数
8．野生型细菌X 合成的tcel 蛋白和tcil 蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel 蛋白是一种有毒
性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X 及其不同突变体进行了实验：在固体培养基表面放置一张能隔
离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），
共同培养后，对上、下层菌计数得到如图结果。下列分析正确的是（ ）
A．培养皿、固体培养基和滤膜均需进行消毒处理
B．对上、下层活菌计数时应采用显微镜直接计数
C．由甲、乙、丙三组结果可推测tcil 蛋白能够中和tcel 蛋白的毒性
D．野生型细菌X 在与tcel-tcil 双突变体和tcel 突变体的竞争中均占优势
9
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9．幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜
样本中分离幽门螺杆菌，相关实验步骤和方法不合理的是（ ）
A．配置培养基时应以尿素为唯一碳源
B．可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
C．应设置未接种的培养基，做为对照组
D．采用稀释涂布平板法进行活菌计数，其结果可能会偏小
10．下列有关大肠杆菌的分离与培养的叙述，正确的是（ ）
A．在大肠杆菌培养基中，由牛肉膏提供维生素，由蛋白胨提供磷酸盐，而琼脂起凝固作用
B．平板划线法是通过连续划线的方法将聚集的菌种分散并计数
C．平板划线法接种时，在接种之前及每次划线操作之前都要对接种环进行灭菌
D．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养
二、非选择题
11．为保障公共健康，需要定期对公共饮用水进行卫生检测。居于大肠中的各种细菌统称为大肠菌群。一
般用大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌，饮用水的卫生标准是100mL 不得检出大肠菌群（或者
1000mL 饮用水中不超过3 个大肠杆菌）。若要确定饮用水是否合格，可采用膜过滤法检测饮用水中的大
肠菌群，过程如下图所示：
(1)大肠杆菌在人体肠道内生存时，可发酵多种糖类产酸、产气，随粪便排出后在水体中存活时间比其他病
原微生物略长，摇床振荡培养更利于其快速繁殖。据此推断，大肠杆菌代谢类型为________。
A．自养需氧型
B．异养厌氧型
C．异养兼性厌氧型
D．自养厌氧型
(2)检测前需要进行灭菌处理的材料用具有 （选择字母代号填写）；它们均可以采用 法灭
菌。
a．水样收集瓶b．滤膜c．培养基d．镊子e．水样
(3)完成过滤后需将滤膜的 （A 面/B 面）接触配置好的培养基，此过程在微生物实验操作中称为
。
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(4)不用稀释涂布平板法检测饮用水中的大肠菌群的原因是 ；用上图方法观察样本菌落时是否需要
设置对照组？ 。为什么？ 。
(5)KONFIRM 培养基可以检测大肠杆菌的存在。KONFIRM 中含有ONPG 和MUG 可作碳源，色氨酸可作
为氮源。在检测大肠菌群时，检测指标如下表所示。
菌群
检测项目及原理
大肠菌群（有β-半乳糖苷酶）
ONPG 检测：β-半乳糖苷酶水解无色的ONPG 为黄色物质
肠杆菌群（降解色氨酸为吲
哚）
吲哚检测：吲哚可与特定显影剂显为绿色
大肠杆菌（有β－葡糖醛酸酶）
MUG 检测：β－葡糖醛酸酶降解
MUG 为具有荧光的物质
（注：出现上述颜色变化为阳性，未现上述颜色变化为阴性）
结合表中内容分析，若上述检测结果为 （选择字母代号填写），则可以确定待测菌为大肠杆菌。
a．ONPG 检测和吲哚检测为阳性，MUG 检测为阴性 b．吲哚检测为阳性，ONPG 检测和MUG 检测为阴
性c．ONPG 检测、MUG 检测、吲哚检测均为阴性 d．ONPG 检测、MUG 检测、吲哚检测均为阳性
12．抗生素是防治家禽大肠杆菌病的常见饲料添加剂，虽能改善动物健康，但长期使用会导致大肠杆菌产
生耐药性。植物精油替代抗生素能有效解决这一矛盾。研究人员以患大肠杆菌病的肉鸭为实验材料，研究
了丁香精油、抗生素对肉鸭日均增重量、免疫球蛋白总量的影响，结果如图。请回答下列问题。
（1）用 法分离相对分子质量不同的免疫球蛋白，从层析柱中后洗脱出来的蛋白质相对分
子质量较 。在装填凝胶柱时不能有气泡存在，原因是 。
（2）测定大肠杆菌对不同抗生素的耐药性实验中，培养基和培养皿分别用 方法灭菌，培
养基需倒置培养，原因是 （答2 点）。用 法纯化并对菌
种进行计数，以抑菌圈直径作为检测指标，直径较大则说明大肠杆菌对该抗生素耐药性较 （填
“强”或“弱”）。
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（3）从实验结果分析，丁香精油能增强肉鸭的免疫力，依据是 ；丁香精油比抗生素更适
合作饲料添加剂，理由是 。
13．下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答：
(1)过程②中使用到的微生物是 ，该微生物的代谢类型是 。该微生物可以从食醋中分离纯化获
得，方法是：
第一步：（配制培养基）该培养基必须含有微生物生长所需的 、 、 、 等基本营
养成分。
第二步：对培养基用 方法进行灭菌。
第三步：接种
第四步：（培养）温度控制在 。
第五步：挑选符合要求的菌落。
(2)在苹果醋的制作过程中为防止杂菌污染所用发酵瓶要进行 ，后期发酵时通气口的阀门要及时
（开或关）。
14．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氨菌拌种后播种，可显著提高
产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流
程如下图。请回答：
(1)步骤①土样应取自当地 （填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要
目的是 。
(2)步骤③将土壤悬浮液稀释了 倍，步骤④所用的接种工具是 。
(3)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的 培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、
倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是 。
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Ashby 培养基：甘露醇（C6H14O6）10g，KH2PO40．2g，MgSO4·7H2O0．2g，NaCl0．2g，K2SO40．3g，
CaCO35g，蒸馏水1000mL。
LB 培养基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7．0-7．2
(4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48 小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进
行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12 为进一步鉴定其固氮，科研人员选用发芽一致的玉
米种子进行3 组盆栽实验，30d 后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。
CK：对照处理组
N：尿素处理组（每盆土壤中50mL 有全营养液：成份为在1000mL 无氮植物营养液中加入0．12g 尿素）
CM12：自生固氮菌CM12 处理组（每盆土壤浇50mL 接种自身固氮菌的无氮植物营养液）
①对照组（CK）的处理为 。
②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12 处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处
理组相比，CM12 处理组土壤微生物有机氮含量增加了约 %。
③自生固氨菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是 。
15．土壤对磷有强烈的吸附固定作用，导致土壤中施入的磷肥都变成难溶的无效磷沉积在土壤中，解磷菌
能将土壤中的难溶态磷转化为植物可以利用的状态，对于提高土壤磷元素的有效利用具有促进作用。某研
究小组对某地区土壤微生物的筛选，欲获得具有稳定解磷能力的解磷菌并大量培养，其部分流程如下。
回答下列问题：
(1)耕地长期大量使用磷肥，除造成土壤板结影响作物产量外，对生态环境还可能具有的不良影响是
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。
(2)为防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，需将配置好的解磷菌固体培养基进行灭菌，灭菌常采用的方法是
，待灭菌后的培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯旁倒平板，平板冷凝后，将平板倒置的目的是
。
(3)研究人员利用 法纯化解磷菌种，使得生长出单个菌落，从中获得了3 株具有稳定解磷
能力的解磷菌种P1、P2 和P3，分辨三种菌落特征包括观察菌落的形态和 等（至少写出两
种）。
(4)下图为研究小组采用水解圈法对分离出的三种解磷菌的解磷能力进行检测，以解磷圈大小（D）与菌圈
大小（d）的比值确定解磷菌的解磷效果，其结果如图所示。
三种菌的解磷效果关系为 ，使用单一菌种进行扩大培养，应选用 菌种，
理由是 。
(5)不同菌种之间存在拮抗作用，为探究最佳解磷效果，研究小组研究了不同pH 及不同菌种复合使用条件
下解磷菌的解磷效果，实验结果如图所示。
不同pH 条件下3 种解磷菌的解磷效果 不同菌种混合后的解磷效果
请从pH 影响解磷效果角度分析P1和P3复合使用效果优于P1和P2复合使用效果的依据是 。
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