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专题17 发酵工程
一、单选题
1、（2024·天津北辰·三模）以野生型大肠杆菌为材料，诱变选育赖氨酸缺陷型大肠杆菌
（失去产生赖氨酸能力，在基本培养基上不能生长）的过程如下图所示，数字代表培养基，
字母表示操作步骤。有关说法错误的是（ ）
A．紫外线属于物理诱变因素，可诱导大肠杆菌发生基因突变
B．将①中的菌液接种到②上的方法为稀释涂布平板法
C．①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能添加赖氨酸
D．从④培养基中挑取乙菌落进行纯化培养即可获得所需突变株
【答案】D
【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基
质，是进行微生物培养的物质基础。培养基种类：培养基按照物理性质可分为液体培养基
半固体培养基和固体培养基。微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。①平板
划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散
到培养基表面。②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的
菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
【详解】A、紫外线照射菌液，使大肠杆菌产生基因突变，便于筛选赖氨酸营养缺陷突变
株，A 正确；
B、观察培养皿中的菌落分布情况可知，将①中的菌液接种到②上的方法为稀释涂布平板
法，B 正确；
C、①中添加赖氨酸来增大该突变株浓度，以便进行稀释涂布操作，②④中添加赖氨酸目
的是使赖氨酸营养缺陷突变株能够在该培养基上生长，③不添加赖氨酸，赖氨酸营养缺陷
突变株不能在其上繁殖形成菌落，通过③④对比，选择能在④中生长但是不能在③中生长
的菌落即为赖氨酸营养缺陷突变株，故①②④培养基中需添加赖氨酸，而③培养基中不能
添加赖氨酸，C 正确；
D、③中未添加赖氨酸，④中添加赖氨酸，经③④对比，④上的甲菌落为赖氨酸营养缺陷
突变株形成的菌落，因此从④培养基中挑取甲菌落进行纯化培养即可获得所需突变株，D
错误。
故选D。
2、（2024·河北承德·三模）（2024·河南·三模）我国酿酒技术历史悠久，《唐书》记载
“葡萄酒，西域有之……及破高昌……京中始识其味”。下列叙述正确的是（ ）
1
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A．酵母菌是真核、兼性厌氧型生物，而醋酸菌是原核、厌氧型生物
B．酿酒发酵初期通入氧气可促进酵母菌进行有氧呼吸，大量增殖
C．在利用葡萄汁制作葡萄酒的过程中，发酵液的pH 逐渐增大
D．当糖源充足时，醋酸菌即将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸
【答案】B
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。在有氧的
情况下酵母菌生长繁殖速度快，把糖分解成二氧化碳和水。在无氧的环境中酵母菌把糖分
解成酒精和二氧化碳。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。
果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖
源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、酵母菌属于真核、兼性厌氧型生物，醋酸菌属于原核、需氧型生物，A 错误；
B、酿酒发酵初期通入氧气可促进酵母菌进行有氧呼吸，有利于酵母菌大量增殖，B 正确；
C、在利用葡萄汁制作葡萄酒的过程中，发酵液中的二氧化碳越来越多，二氧化碳溶于水
呈酸性，故发酵液的pH 变化是先减小后稳定，C 错误；
D、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌
可将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，D 错误。
故选B。
3、（2024·河北秦皇岛·三模）堆肥指利用自然界广泛存在的微生物，有控制地促进固体废
物中可降解有机物转化为稳定的腐殖质的生物化学过程。下图为堆肥处理时材料内部温度
的变化曲线。若要从堆肥材料中筛选出能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，
下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高
B．与a 点相比b 点时微生物的数量较多，与c 点相比b 点时微生物种类较多
C．c 点时，可对堆肥取样并用角蛋白为唯一氮源的培养基对微生物群进行培养和筛选
D．若采用平板划线法分离微生物，需对取样获得的原液进行适当稀释后再划线
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生
物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单
个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。（2）
稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼
脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分
2
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散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
【详解】A、在堆肥过程中，微生物呼吸作用产生的热量积累，会导致其堆肥内部逐渐升
高，A 正确；
B、a 点温度较低且微生物的分解作用刚刚开始，此时堆肥材料中的微生物的数量相对较少，
b 点时经过一段时间的代谢和增殖，b 点处微生物的数量比a 点多，b 点到c 点过程中，堆
肥温度逐渐升高，并达到80℃左右，该温度条件下不耐热的微生物大量死亡，所以c 点时
微生物的种类数少于b 点，B 正确；
C、筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此既要耐高温，又要能够
高效降解角蛋白，所以在c 点取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养，C 正确；
D、采用平板划线法分离微生物，不需要对取样原液进行适当稀释，通过连续多次划线即
可达到分离微生物的目的，D 错误。
故选D。
4、（2024·河北邯郸·三模）微生物在生物技术中被广泛应用，下列有关说法正确的是（
）
A．天然微生物能用于传统发酵但不能用于发酵工程
B．灭菌能杀死微生物的芽孢，而消毒不能杀死芽孢
C．有的微生物灭活后能使细胞膜上的物质重新排布
D．微生物能为重组DNA 技术提供两种“分子工具”
【答案】C
【分析】在微生物的实验室培养中获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技
术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面：①对实验操作的空间、操作
者的衣着和手进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的培养器皿、接种用具和培养基等进
行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验
操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
【详解】A、传统发酵直接利用原材料中天然存在的微生物或发酵物中的微生物，发酵工
程也可以从天然微生物中筛选菌种，A 错误；
B、灭菌能杀死所有的微生物，包括芽孢和孢子，消毒能杀死部分微生物，煮沸消毒法能
杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，B 错误；
C、灭活后的病毒能通过与细胞膜上的糖蛋白结合，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质
分子和磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，C 正确；
D、微生物能为重组DNA 技术提供限制酶、DNA 连接酶和载体三种“分子工具”，D 错
误。
故选C。
5、（2024·河北沧州·三模）在利用泡菜坛为容器制作泡菜时，泡菜坛盖盖好后，需向坛盖
边沿的水槽中注满水。下列相关叙述正确的是（ ）
A．泡菜发酵初期，乳酸菌进行有氧呼吸大量增殖
B．泡菜发酵过程中泡菜坛制造无菌环境且利于排气
C．可从泡菜汁中筛选耐高盐、耐强碱的优良乳酸菌
D．工业化生产泡菜时发酵设备需严格灭菌后再接种
3
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【答案】D
【分析】泡菜发酵的实验原理：乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。因乳酸菌是厌氧
微生物，故发酵时需创造无氧条件。
【详解】A、乳酸菌是厌氧菌，只能进行无氧呼吸，A 错误；
B、乳酸菌是厌氧微生物，故发酵时需创造无氧条件，B 错误；
C、乳酸菌产物乳酸呈酸性，可从泡菜汁中筛选耐高盐、耐酸的优良乳酸菌，C 错误；
D、工业化生产泡菜时发酵设备需严格灭菌后再接种，D 正确。
故选D。
6、（辽宁省部分学校2024 年高三临考押题考试（三模））某生物活动小组分别用3 种不
同浓度的食盐制作泡菜，该活动小组记录的亚硝酸盐含量与发酵天数的关系如图所示。下
列说法正确的是（ ）
A．该实验自变量只有发酵时间，因变量是亚硝酸盐含量
B．检测亚硝酸盐含量的目的是了解乳酸菌的生长状况
C．泡菜腌制过程中，腌制时间过短和食盐用量过少都可能导致亚硝酸盐含量增加
D．泡菜制作时，发酵液表面可能会产生一层白膜，该膜是由乳酸菌繁殖形成的
【答案】C
【分析】乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下能将葡萄糖分解成乳酸，可用于乳制品的发
酵、泡菜的腌制等。在制作泡菜的过程中，要注意控制温度、时间和食盐的用量。温度过
高、食盐用量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。
【详解】A、该实验的自变量有发酵时间、食盐溶液的浓度，因变量是亚硝酸盐含量，A
错误；
B、泡菜在腌制过程中会有亚硝酸盐产生，膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但
如果人体摄入过量，会发生中毒，甚至死亡，所以检测亚硝酸盐含量的目的是使亚硝酸盐
含量在安全范围，保证食品安全，B 错误；
C、根据图可知，随着腌制时间的延长，亚硝酸盐含量的变化趋势是先增加后减少，且在
本实验中5%的食盐溶液处理效果比3%的食盐溶液处理效果好，所以腌制时间过短和食盐
用量过少都可能导致亚硝酸盐含量增加，C 正确；
D、泡菜制作时，发酵液表面可能会产生一层白膜，该膜是由酵母菌繁殖形成的，D 错误。
故选C。
7、（2024·辽宁沈阳·三模）辽宁盛产南国梨，以南果梨为主要原料制酒，开创了世界“果
4
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粮混合固态发酵酒”之先河，该酒以果香为体、粮香为魂。下列叙述错误的是（ ）
A．“果粮混合固态发酵酒”的发酵全过程均需严格的灭菌操作
B．制作该酒所需的酵母菌的代谢类型为异养兼性厌氧型
C．将南国梨先用清水冲洗再去除果柄，沥干后用于发酵
D．南国梨和粮食中的多种糖类作为发酵的物质和能量来源
【答案】A
【分析】果酒制备的菌种是酵母菌，属于兼性厌氧型真菌，发酵前期酵母菌先进性有氧呼
吸，促进酵母菌的繁殖，后期进行无氧呼吸产生酒精。果酒制作的原理是酵母菌在无氧的
条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。
【详解】A、酵全过程如果经过严格的灭菌操作，会将菌种杀死，A 错误；
B、制作该酒所需的酵母菌的代谢类型为异养兼性厌氧型，发酵前期酵母菌先进性有氧呼
吸，促进酵母菌的繁殖，后期进行无氧呼吸产生酒精，B 正确；
C、将南国梨用清水将梨冲洗干净去除果柄（可防止因去除果柄而导致梨果皮的破损而导
致材料污染），沥干水分后用于发酵，C 正确；
D、南国梨和粮食中富含多种糖类，可以作为酵母菌发酵所需的物质和能量的来源，D 正
确。
故选A。
8、（2024·辽宁沈阳·三模）下列操作方法与使用目的不一致的是（ ）
A．干热灭菌法——耐高温和需保持干燥物品的灭菌
B．巴氏消毒法——牛奶等不耐高温液体的消毒
C．平板划线法——分离并统计培养基上的活菌数目
D．过滤、沉淀的方法——发酵产品中菌体的分离
【答案】C
【分析】实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针
或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在
接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。②干热灭
菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可
以采用这种方法灭菌。③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅
内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30
min。
【详解】A、对于耐高温和需保持干燥物品的灭菌，需要用干热灭菌法对其进行灭菌，A
正确；
B、牛奶等不耐高温液体的消毒需要用巴氏消毒法，该方法能在消毒的同时保证营养成分
不被破坏，B 正确；
C、分离并统计培养基上的活菌数目需要用稀释涂布平板法，平板划线法不能用于计数，C
错误；
D、发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢产物，另一类是菌体本身，产品不同，分离
提纯的方法一般不同：发酵产品中菌体的分离可用过滤、沉淀的方法进行，D 正确。
故选C。
9、（2024 届辽宁省高三联考三模）人类有意无意地利用微生物发酵制作果酒或其他食品，
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已经有几千年的历史。下列关于传统发酵技术的叙述正确的是（ ）
A．制作泡菜时加入的“老汤”中含有纯度较高的酵母菌时加速发酵进程
B．酵母菌和醋酸杆菌均以无丝分裂的方式进行增殖
C．酿制果酒和果醋的发酵过程中控制的通气情况相同
D．以果酒制作果醋时，发酵液产生的气泡量明显少于制作果酒时产生的气泡量
【答案】D
【分析】果酒制作的原理是酵母菌在无氧的条件下进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。参
与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气
糖原都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。
【详解】A、泡菜利用的是乳酸菌，制作泡菜时加入的“老汤”中含有纯度较高的乳酸菌
可加速发酵进程，A 错误；
B、酵母菌一般以出芽的方式繁殖，醋酸杆菌（原核生物）以二分裂的方式进行增殖，而
且无丝分裂是真核生物特有的增殖方式，B 错误；
C、酿制果酒所用的菌种是酵母菌，酵母菌发酵过程中先通气使其大量繁殖，再密闭进行
酒精发酵；酿制果醋所用的菌种是醋酸菌，醋酸菌为好氧菌，需持续通气，C 错误；
D、以酒精为底物进行醋酸发酵，酒精与氧气发生反应产生醋酸和水，几乎没有气泡产生，
发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵时，D 正确。
故选D。
10、（2024 届辽宁省高三·三模）蛋白S 为菌株C（一种细菌）的分泌产物，可被广泛应用
于医药、食品和化工工业。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和蛋白S 产量的影响，
结果如表所示。下列说法正确的是（ ）
碳源
细胞干
重/（g·L-1）
蛋白S 产
量/（g·L-1）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0
制糖废液
2.30
0.18
A．菌株C 的培养基的pH 一般要调节至酸性
B．培养基中碳源物质浓度越高，菌株合成蛋白S 越多
C．适合菌体生长和生产蛋白S 的碳源均为葡萄糖
D．菌株C 可能因不能合成淀粉酶而无法利用淀粉
【答案】D
【分析】虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）
氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以
及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养
基的pH 调至酸性，培养细菌时需将pH 调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供
无氧的条件。
6
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【详解】A、细菌的培养基的pH 一般要调节至中性或弱碱性，A 错误；
B、培养基中碳源物质浓度过高，可能会使菌株失水死亡，B 错误；
C、分析题表可知，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C 生长的最适碳源是葡萄
糖；以制糖废液为碳源时，S 产量最高，故用菌株C 生产S 的最适碳源是制糖废液，C 错
误；
D、分析实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，说明其不能分解利用淀粉，故其
不能生长的原因是缺少淀粉酶，D 正确。
故选D。
11、（2024·辽宁抚顺·三模）实验小组用抗生素对大肠杆菌进行筛选，如图所示。挑取抑
菌圈边缘的菌落进行扩增培养，然后重复图示实验进行筛选，最后定量分析连续传代细菌
群体中抑菌圈的半径变化，结果如表所示。下列有关叙述错误的是（ ）
抗生素
抑菌圈半径平均值/cm
抑菌圈缩小百分比
第一代筛选
第二代筛选
0
0
0
青霉素
0．95
0．74
22%
四环素
1．31
0．70
47%
阿奇霉
素
0．19
0
100%
A．用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种在筛选培养基上
B．抑菌圈边缘生长的菌落可能对抗生素不敏感
C．用抗生素多代培养对大肠杆菌有定向选择作用
D．第二代培养后，阿奇霉素能完全抑制大肠杆菌的繁殖
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成
平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着
线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液
经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
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【详解】A、微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板，可用稀释涂布平板法将大
肠杆菌接种在筛选培养基上，A 正确；
B、抗生素能够杀死细菌，在抑菌圈边缘抗生素浓度较低，可能存在具有耐药性（对抗生
素不敏感）的细菌，因此要从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌，B 正确；
C、抑菌圈的直径大小表明该种抗生素的杀菌能力抑制圈的直径越大，说明抗生素杀菌能
力越强，在连续培养几代后，抑菌圈的直径会变小，说明用抗生素多代培养对大肠杆菌有
定向选择作用，C 正确；
D、连续多代培养后，耐药菌所占比例逐步增加，细菌种群中耐药性增强，抑菌圈直径逐
渐变小。阿奇霉素组抑菌圈缩小至0，因此大肠杆菌对阿奇霉素的抗性最强，D 错误。
故选D。
12、（2024·吉林·三模）大酱是东北的传统美食，可以生食、或做烹饪的调料。在附唐时
期就有记载，制作流程如下： 黄豆煮熟→搅碎→做酱块→酱块晚上放到荫凉的地方， 白
天放到阳光下面晒→盐水煮开凉透→酱块弄碎装入酱缸→用细纱布盖上放在阳光下发酵→
每天用酱粑子打粑， 每天早晚各一次，直到酱发透。以下叙述不正确的是（ ）
A．家庭制作大酱需要接种特定微生物才能进行发酵
B．制作过程中加盐不仅能调味， 还能杀灭杂菌
C．黄豆富含蛋白质，制酱时分解成小分子的肽和氨基酸，可以平衡饮食结构
D．对大酱中某微生物进行纯培养，可用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种
【答案】A
【分析】发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，发酵工程应用无菌技术
获得纯净的微生物，利用单一菌种；传统发酵技术利用天然的混合菌种。
【详解】A、家庭制作大酱利用的主要是空气中的毛霉孢子形成的毛霉，没有接种特定微
生物，A 错误；
B、制作过程中加盐不仅能调味，还能使菌体失水从而起到杀灭杂菌的作用，B 正确；
C、黄豆富含蛋白质，制酱时可被毛霉分泌的蛋白酶分解成小分子的肽和氨基酸，可以平
衡饮食结构，C 正确；
D、用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种都能获得单一菌体形成的菌落，都可用于微
生物的纯化，D 正确。
故选A。
13、（2024·黑龙江大庆·三模）研究者从某种海洋微生物中分离出一种新的抗真菌药物，
为治疗真菌感染提供新思路。下列有关药物研制或生产的叙述错误的是（ ）
A．按海水的成分和浓度添加相应的无机盐配置的培养基具有选择作用
B．用接种环在固体培养基表面对样品连续划线、逐步稀释分散，可获得纯培养物
C．用固体培养基培养微生物获得大量次生代谢产物，可用于抗真菌活性检测
D．获得目的菌株后，可进一步利用基因工程的方法调节代谢途径进而提高药物产量
【答案】C
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养
基质；培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。
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2、微生物常见的接种的方法：平板划线法、稀释涂布平板法。
【详解】A、按海水的成分和浓度添加相应的无机盐配置的培养基具有选择作用，目的是
选择海洋微生物，A 正确；
B、分离和纯化最常用固体培养基，固体培养基上接种的方法通常是平板划线法和稀释涂
布平板法，即用接种环在培养基表面对样品连续划线、逐步稀释，可得到海洋微生物的单
菌落，B 正确；
C、获得代谢产物需要借助液体培养基，即用液体培养基培养微生物可从培养液获得次级
代谢产物，用于抗真菌活性检测，C 错误；
D、利用基因工程的手段可以定向改造生物获得符合人类需要的产品，获得目的微生物后，
可进一步利用基因工程方法调节代谢途径提高生产量，D 正确。
故选C。
14、（2024·黑龙江双鸭山·三模）为纯化菌种，在鉴别培养基上接种尿素分解菌，培养结
果如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
A．用平板划线法接种可获得图示培养结果，接种过程中接种环需要灼烧3 次
B．用高压蒸汽灭菌法灭菌结束后，待培养基冷却至50℃左右开始倒平板操作
C．可在该培养基上生存并使酚红指示剂变红的菌落可能是固氮菌形成的
D．用液体培养基能提高目的菌对营养物质的利用效率以及分离的成功率
【答案】B
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成
平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着
线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液
经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、据图可知，要获得图示培养结果，需要用平板划线法进行接种，划线区域有
三个，因此接种过程中接种环需要灼烧4 次，A 错误；
B、用高压蒸汽灭菌法灭菌结束后，待培养基冷却至50℃左右开始倒平板操作，B 正确；
C、固氮菌可在以尿素为唯一氮源的培养基上生存，但不能分解尿素生成碱性物质，因此
也不能使酚红指示剂变红，C 错误；
D、用液体培养基能提高目的菌对营养物质的利用效率，但不能分离出目的菌，D 错误。
故选B。
15、（2024·黑龙江双鸭山·三模）家常酱菜采用了乳酸自然发酵的传统工艺，无添加剂，
但生产周期长。下列有关叙述正确的是（ ）
A．酱菜制作初期通入无菌空气，后期密封，有利于乳酸菌繁殖和发酵
B．酱菜制作前要对发酵用的器皿及蔬菜进行严格灭菌以避免杂菌污染
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C．乳酸自然发酵属于多菌种发酵，生产周期较长
D．酱菜发酵过程中加入抗生素可以抑制杂菌生长
【答案】C
【分析】酱菜制作所需的菌种是乳酸菌，乳酸菌属于厌氧生物，在有氧条件下发酵会受抑
制。
【详解】AC、依题意可知，制作酱菜采用的是乳酸自然发酵，菌种较多，不唯一，发酵的
主要菌种乳酸菌是厌氧菌，发酵过程应全程保持无氧环境，A 错误、C 正确；
B、发酵前，对于方便灭菌的器皿可以进行灭菌处理，不方便灭菌处理的可进行消毒处理，
发酵用的蔬菜不需要灭菌，清洗干净即可，发酵用的菌种主要来自蔬菜自身携带的菌种，
B 错误；
D、抗生素能够抑制乳酸菌的生长，不利于发酵，所以不能加入抗生素，D 错误。
故选C。
16、（2024·江苏南通·三模）发酵乳中含有丰富的乳酸菌。科研人员利用CaCO3-MRS 培养
基（蛋白胨10g、牛肉膏粉5g、酵母膏粉 4g、葡萄糖 20g、磷酸氢二钾 2g、乙酸钠5g、
柠檬酸三铵2g、硫酸镁 0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂15g、碳酸钙25g）从发酵乳中分离纯化
乳酸菌，相关叙述正确的是（ ）
A．能为乳酸菌提供碳源的有蛋白胨、牛肉膏粉、酵母膏粉、葡萄糖、琼脂
B．接种前应将发酵乳置于121℃、100 kPa 条件下处理15~30 min
C．涂布接种后应在培养皿盖上标记接种日期和接种者，并倒置培养
D．挑取溶钙圈直径与菌落直径比值较大的菌落进一步划线纯化
【答案】D
【分析】微生物接种到固体培养基常用的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释
涂布平板法接种可以形成单菌落，所以常用来进行微生物的计数。乳酸菌属于厌氧菌，培
养过程中需要创造无氧环境。
【详解】A、能为乳酸菌提供碳源的有葡萄糖，A 错误；
B、接种前应将发酵乳于100 摄氏度、100kpa 条件下处理15-30min，B 错误；
C、涂布接种后应在培养皿底部标记接种日期和接种者，并倒置培养，C 错误；
D、挑取溶钙圈直径与菌落直径比值较大的菌落进一步划线纯化，D 正确。
故选D。
17、（2024·江苏南通·三模）南通某兴趣小组按下图流程制作苹果醋。相关叙述正确的是
（ ）
A．菌种甲、乙都具有线粒体，都能进行有氧呼吸
B．加糖的目的是直接为菌种甲、乙提供碳源和能源
C．菌种甲、乙发酵过程中，发酵液pH 下降、温度上升
D．发酵结束后取苹果醋加酸性重铬酸钾检测发酵效果
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【答案】C
【分析】由题意可知，菌种甲是酵母菌，菌种乙是醋酸菌。
【详解】A、菌种乙是醋酸菌，醋酸菌为好氧细菌，为原核生物，没有线粒体，A 错误；
B、加糖不能直接为菌种乙醋酸菌提供碳源和能源，糖应先经过菌种甲生成苹果酒，菌种
乙再以苹果酒为碳源和能源，B 错误；
C、菌种甲、乙发酵过程中，发酵液pH 下降，果酒发酵产生二氧化碳，溶于水，果醋发酵
产生醋酸，两种菌代谢过程会释放热能，使温度上升，C 正确；
D、酸性重铬酸钾是检测酒精的，D 错误。
故选C。
18、（2024·安徽·三模）生活废纸的主要成分是木质纤维，也可用于生产乙醇。下图是工
业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工艺流程，下列叙述正确的是（ ）
A．环节①需要的微生物可用纤维素为唯一氮源的选择培养基从土壤中分离获得
B．环节④常用的菌种是酵母菌，其代谢类型是异养需氧型
C．环节⑤所得发酵产物需经过滤、沉淀等措施，才能获得纯化的乙醇
D．利用秸秆来生产乙醇，可以提高能量利用率
【答案】D
【分析】据图分析：①表示纤维素分解菌的筛选，②表示纤维素酶的活性鉴定，③表示纤
维素发酵，④表示接种酵母菌，⑤表示乙醇发酵。
【详解】A、环节①表示纤维素分解菌的筛选，可用纤维素为唯一碳源的选择培养基从土
壤中分离获得，A 错误；
B、环节④接种微生物，其目的是利用该微生物进行乙醇发酵，以便获得乙醇，因此常用
的菌种是酵母菌，酵母菌的代谢类型是异养兼性厌氧型，B 错误；
C、环节⑤所得的发酵产物是乙醇，乙醇属于代谢物，不能采用过滤、沉淀等措施进行分
离纯化，C 错误；
D、利用秸秆来生产乙醇，使秸秆中的能量得到了利用，可以提高能量利用率，D 正确。
故选D。
19、（2024·安徽·三模）除了少数人工培育的蘑菇外，很多野生蘑菇味道更加鲜美醇厚。
可以通过微生物培养技术来纯化可食用野生蘑菇菌种，大致步骤如下：培养基配制→培养
基灭菌→子实体分离或孢子分离等→培养→转管纯化培养→母种→扩大培养。下列相关叙
述正确的是（ ）
A．纯化野生蘑菇菌种的过程都要用选择培养基
B．一般都是采用干热灭菌法对培养基进行灭菌
C．用稀释涂布平板法接种菌种后培养皿要倒置
D．培养基灭菌后调到弱酸性利于蘑菇菌种生长
【答案】C
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【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物
生长的培养基，称为选择培养基。实验室中微生物的筛选，应用了同样的原理，即人为提
供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH 等），同时抑制或阻止其他微生物的
生长。
【详解】A、 微生物菌种纯化未必都需要使用选择培养基，采用平板划线法或稀释涂布平
板法获得单菌落的过程即为纯培养，A 错误；
B、一般都是采用湿热灭菌法对培养基进行灭菌，如高压蒸汽灭菌法，B 错误；
C、接种前、接种后平板都要倒置，既可防止培养基水分散失过快，又能防止冷凝形成的
水珠倒流污染培养基，C 正确；
D、培养基灭菌之前就要调好pH，灭菌后就要严格进行无菌操作，D 错误。
故选C。
20、（2024·安徽马鞍山·三模）青霉素的发现和产业化生产推动了发酵工程在医药领域的
应用和发展。下列有关青霉素发酵工程的叙述正确的是（ ）
A．发酵过程中，pH 会改变，进而影响菌种的生长繁殖
B．发酵完成后，需对菌体进行破碎，才能分离得到青霉素相关产物
C．产青霉素的菌种代谢类型为异养厌氧型，发酵过程中需隔绝氧气
D．产青霉素的菌种为原核生物，发酵液的pH 应调成中性偏碱
【答案】A
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有
用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩
大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来
说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因
而可以得到较为专一的产物。
【详解】A、微生物的生长繁殖需要适宜的温度、pH 和溶解氧等培养条件，发酵过程中，
环境条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢过程，A 正确；
B、青霉素是分泌到细胞外的产物，不需要对菌体进行破碎，B 错误；
C、产青霉素的菌种代谢类型为异养需氧型，发酵过程中需通入氧气，C 错误；
D、产青霉素的菌种为真核生物，发酵液的pH 应调成中性偏酸，D 错误。
故选A。
21、（2024·安徽马鞍山·三模）我国卫生部门规定饮用水标准，1ml 自来水检出的菌落总数
不可以超过100 个，不得检出总大肠菌群。为检验某品牌冰激凌中大肠杆菌含量是否超标，
研究小组利用配制的伊红-亚甲基蓝琼脂培养基进行检测。下列有关叙述正确的是（ ）
A．检测中用到的接种方法为平板划线法
B．检测中冰激凌原液应进行适当的梯度稀释
C．检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平板作为阳性对
照
D．检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成红色且有金属光泽的菌
落
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【答案】C
【分析】1、微生物常见的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用
于微生物计数。2、稀释涂布平板法统计菌落数的原理：当样品的稀释倍数足够高时，培养
基表面生长的一个菌落来自于样品稀释液中的一个活菌，可通过统计平板上的菌落数来推
测样品中的活菌数。
【详解】A、平板划线法不能用来计数，检测中用到的接种方法为稀释涂布平板法，A 错
误；
B、冰激凌中大肠杆菌含量本来就少，因此检测中冰激凌原液不需要进行适当的梯度稀释，
B 错误；
C、检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平板作为阳性对照，
以此来对比反映冰激凌中大肠杆菌及其数量，C 正确；
D、检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成深紫色且有金属光泽的菌
落，D 错误。
故选C。
22、（2024·福建宁德·三模）微生物与人类生产生活密切联系，下列关于微生物的叙述正
确的是（ ）
A．培养霉菌时一般需要将培养基调至中性或弱碱性
B．醋酸菌在有氧条件下发酵产生乙酸
C．肺炎链球菌、酵母菌和支原体都有细胞壁
D．颤蓝细菌的叶绿体中含有与光合作用有关的酶和色素
【答案】B
【分析】不同的微生物适宜的pH 值不同，菌生长繁殖所需要的pH 是中性或弱碱性，霉菌
适宜的pH 是酸性。
【详解】A、培养霉菌时一般需要将培养基调至酸性，A 错误；
B、醋酸菌在有氧条件下可以利用葡萄糖或者酒精发酵产生乙酸，B 正确；
C、支原体无细胞壁，C 错误；
D、颤蓝细菌属于原核生物，无叶绿体，D 错误。
故选B。
23、（2024·福建宁德·三模）某兴趣小组欲从土壤中筛选出分解尿素的细菌，下列相关实
验操作正确的是（ ）
A．所用培养基及接种工具分别用巴氏灭菌和灼烧灭菌
B．采集的土壤样本需经多次稀释后才能划线接种
C．培养该细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基
D．根据菌落的颜色、形状和大小等进行初步判断
【答案】D
【分析】选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原
理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的
功能。
鉴别培养基是 指加入某种试剂或化学药品，依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特
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定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计的用于鉴别和区分菌落相似的微生物
如伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌。
【详解】A、筛选分解尿素的细菌所用的培养基及接种工具分别用湿热灭菌法和灼烧灭菌
进行灭菌，A 错误；
B、为了获得单菌落，采集的土壤样本需经多次稀释后才能进行涂布接种，B 错误；
C、筛选尿素分解菌应该用以尿素为唯一氮源的培养基，而牛肉膏、蛋白胨都含有氮源，
因此不能用牛肉膏蛋白胨培养基筛选分解尿素的细菌，C 错误；
D、相同的条件下，不同细菌在固体培养基上长出的菌落具有种的特异性，因此，可根据
菌落的颜色、形状和大小等进行初步判断，D 正确。
故选D。
24、（2024·福建·三模）分离、纯化细菌的实验中，平板划线法接种（甲）及培养结果
（乙）如图所示，a、b、c、d 是划线的四个区域。下列叙述正确的是（ ）
A．实验所用培养基一般用干热灭菌法进行灭菌
B．图中d 区域的划线操作是从c 区域划线的末端开始的
C．为了防止杂菌污染，接种环灼烧后立即蘸取菌液进行划线
D．图示划线接种过程中至少需要对接种环灼烧5 次
【答案】D
【分析】图示过程为平板划线法，平板划线法可对微生物进行纯化，只有第一次划线蘸取
菌液，其余每次划线的菌落来自于上一次划线的末端。
【详解】A、实验所用培养基一般用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌）进行灭菌，A 错误；
B、图中a 对应的区域出现了单菌落，d 区域菌落最多，因此a 区域应该为划线的最终区域，
d 区域为划线的起始区域，即图中c 区域的划线操作是从d 区域划线的末端开始的，B 错误；
C、接种环灼烧后需适当冷却再蘸取菌液进行划线，避免将菌种烫死，C 错误；
D、蘸取菌液前需要灼烧一次接种环，之后在c、b、a 区域划线前都要灼烧接种环，以保证
菌种来自上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止接种环上的菌种污染环境
感染接种者,因此接种过程中至少需要对接种环灼烧5 次，D 正确。
故选D。
25、（2024·福建漳州·三模）福建红曲酒闻名于世，红曲酒是用红曲霉菌发酵制成，生产
流程如图。有关说法错误的是（ ）
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A．糖化是指淀粉水解，为红曲霉菌提供发酵的底物
B．开耙有助于控制发酵温度和及时通气
C．煎酒会使酶失活，终止发酵活动，不利于红曲酒的储存
D．工业化生产红酒过程中要随时监测发酵液中的微生物数量和产物浓度
【答案】C
【分析】1、发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为
人类所需要的产物的过程。
2、直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一 次发酵保存下来的面团、卤汁等发
酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术一般称为传统发酵技术。
【详解】A、米的主要成分是淀粉，糖化发酵过程是红曲霉菌分泌淀粉酶，使淀粉水解成
葡萄糖的过程。糖化过程产生的葡萄糖为红曲霉菌提供发酵的底物，A 正确；
B、据图可知，开耙是指米饭搅拌，搅拌时可以散热，可使米饭充分接触气体，也可以使
菌种与米饭充分接触，有助于控制发酵温度和及时通气，使发酵充分进行，B 正确 ；
C、煎酒所使用的温度为85℃，该温度下酶会失活，发酵活动终止，有利于红曲酒的储存，
C 错误；
D、工业化生产红酒过程中要随时监测发酵液中的微生物数量和产物浓度，以判断发酵进
程，D 正确。
故选C。
26、（2024·福建泉州·三模）下列关于利用微生物制作传统发酵食品的叙述，正确的是（
）
A．制作泡菜时，用水密封泡菜坛的目的是促进酵母菌的无氧呼吸
B．制作果酒时，定时松瓶盖的目的是适当促进酵母菌的有氧呼吸
C．制作果醋时，可以往果酒中加入醋酸杆菌将乙醇转化为乙酸
D．利用传统发酵技术制作食品时，都需要对菌种进行纯化培养
【答案】C
【分析】1、泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖
分解成乳酸。
2、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧
呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故
果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。
3、果醋制作的原理是在氧气充足的条件下，醋酸菌将葡萄糖或酒精转化成醋酸，醋酸菌是
好氧菌，最适宜生长的温度范围是30～35℃。
【详解】A、制作泡菜时，用水密封泡菜坛的目的是促进乳酸菌的无氧呼吸，A 错误；
B、制作果酒时，定时松瓶盖的目的是排出瓶中的气体，防止发酵液溢出，B 错误；
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C、制作果醋时，可以往果酒中加入醋酸杆菌将乙醇转化为乙酸 ，在氧气充足，糖源不足
的条件下，醋酸杆菌可以将乙醇转化为乙醛再转化为乙酸，C 正确；
D、传统发酵技术是利用天然菌种，不需要对菌种纯化，D 错误。
故选C。
27、（2024·福建泉州·三模）兴趣小组对枯草芽孢杆菌进行纯培养，结果如图。下列叙述
正确的是（ ）
A．实验采用稀释涂布平板法进行接种
B．接种时，顺序应为①→②→③→④
C．培养时，应将接种后的平板倒置
D．获得单菌落的理想区域是②区域
【答案】C
【分析】常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于菌落的计数。
【详解】A、图示接种方法为平板划线法，A 错误；
B、根据图中细菌数目的多少，①中出现单菌落，所以划线顺序是④→③→②→①，B 错误；
C、接种后，应该将平板导致，防止冷凝水进入培养基，C 正确；
D、获得单菌落的理想区域是①区域 ，得到单独菌落，D 错误。
故选C。
28、（2024·江西南昌·三模）红曲霉作为发酵食品常用菌种在我国具有悠久的历史，接种
在一定量大米上通过发酵可得到红曲，红曲可用于酿酒、制醋、做豆腐乳的着色剂和调味
剂等。红曲霉耐酸，古人接种时及培养过程中，会加入醋酸或明矾水调节酸度。下列说法
正确的是（ ）
A．蒸煮过的大米可为红曲霉的生长提供碳源和氮源
B．红曲霉接种到刚蒸煮好的热米饭上有利于提高酶的活性和发酵菌的代谢
C．接种时及培养过程中加入醋酸或明矾水调节酸度可抑制所有杂菌生长
D．接种的大米发酵时红曲霉种群数量呈现“J”形增长
【答案】A
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【分析】传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的。
利用传统发酵技术制作的食品还有酒、酱、酱油、醋、泡菜和豆或等。
【详解】A、蒸煮过的大米含有含碳有机物和含氮的有机物，可为红曲霉的生长提供碳源
和氮源，A 正确；
B、刚蒸煮好的热米饭需冷却后在接种红曲霉，防止菌种被烫死，B 错误；
C、红曲霉耐酸，接种时及培养过程中加入醋酸或明矾水调节酸度可抑制大多数杂菌生长，
C 错误；
D、由于发酵液中营养物质是一定的，因此接种的大米发酵时红曲霉种群数量不会呈现“J”
形增长，D 错误。
故选A。
29、（2024·江西南昌·三模）产志贺毒素大肠杆菌（STEC）是一种通过产生志贺毒素引起
人畜共患病的肠道致病菌。大多食品材料中携带STEC，因此食品加工中面临如何减少该
病原体和降低毒性的问题。毒素对细胞的损害程度是细菌产毒能力的指标，下图为对三种
STEC （ST462、ST378、D3146） 产毒能力的研究结果。下列分析错误的是（ ）
A．该实验目的为探究盐浓度和温度对三种STEC 产毒能力的影响
B．在检测三种STEC 产毒能力时，应保持各种菌的数量相同
C．无法判断25℃和37℃哪种温度更适合ST378 生长繁殖
D．根据实验结果分析，在食品加工中应适当提高盐浓度和温度
【答案】D
【分析】分析题意，实验对的自变量是NaCl 浓度及温度，因变量是细胞存活率，据此分析
作答。
【详解】A、由横坐标及图示可知，该实验自变量是NaCl 浓度及温度，故实验目的为探究
盐浓度和温度对三种STEC 产毒能力的影响，A 正确；
B、在检测三种STEC 产毒能力时，应保持各种菌的数量相同，无关变量相同且适宜，B 正
确；
C、图示结果显示，ST378 在细菌25℃时产毒能力较高，但无法判断25℃和37℃哪种温度
更适合ST378 生长繁殖，C 正确；
D、根据实验结果分析，高盐浓度和降低温度条件下三种STEC 的细胞存活率相对较低，
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故在食品加工中应适当提高盐浓度和降低温度，D 错误。
故选D。
30、（2024·江西九江·三模）阅读下列材料，完成下面小题
某同学在进行动物细胞培养实验中遇到困惑：第一天将恶性的肿瘤细胞转入培养瓶中培养，
第二天在换液时发现约有近三分之一的细胞死亡，第三天发现死亡细胞的比例增多，第四
天发现培养的细胞基本死亡。该同学严格按照无菌操作要求，在培养过程中也未出现杂菌
污染。关于细胞的死因成为了该同学的困惑。
23．为保障动物细胞培养的无菌环境，下列叙述错误的是（ ）
A．操作者的双手在实验前需要用医用酒精消毒，以杀死所有的杂菌
B．需要对操作器皿及培养基进行灭菌处理，例如进行高压蒸汽灭菌
C．可选择在酒精灯附近进行相关的实验操作
D．在培养液中可添加少量抗生素，以防止杂菌污染
24．有关细胞死亡的原因推测不合理的是（ ）
A．在培养细胞时，操作不当，造成细胞损伤
B．在配置培养基时，未加入血清，造成细胞所需营养不足
C．细胞分裂能力有限，大量细胞出现衰老和凋亡
D．细胞的培养环境不适宜，引起细胞大量死亡
【答案】23．A 24．C
【分析】1、无菌技术的主要内容：
（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2、实验室常用的消毒方法：煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。
23．A、只有通过灭菌，才可以将所有的杂菌、孢子和芽孢等都杀死，A 错误；
B、对微生物培养的器皿可采用干热灭菌法灭菌，接种用具可用灼烧灭菌法灭菌，培养基
可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B 正确；
C、接种时应在酒精灯附近进行，其目的是避免周围环境中微生物的污染，C 正确；
D、在动物细胞培养过程中，为防止杂菌污染，可在培养液中添加抗生素，D 正确。
故选A。
24．A、在培养细胞时，若操作不当，会造成细胞损伤导致细胞死亡，A 正确；
B、血清、血浆中含有细胞生长所必需的物质，若培养基中未加入血清，会造成细胞营养
不足而死亡，B 正确；
C、肿瘤细胞可以无限增殖，细胞培养随时有大量细胞衰老、死亡，同时又有大量新增殖
的细胞代替它们，C 错误；
D、细胞需要在特定的环境下才能生长，包括无菌、合适的温度、适宜的渗透压、气体环
境与pH 等，培养环境不适宜，会导致细胞死亡，D 正确。
故选C。
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31、（2024·山东潍坊·三模）传统发酵技术是人类在生活过程中，对微生物的运用。下列
叙述错误的是（ ）
A．米酒制作：发酵液中的气泡来源于酵母菌的无氧呼吸
B．果醋制作：醋酸菌在有氧条件下将糖或酒精转化为乙酸
C．腐乳制作：发酵温度为15～18℃，可抑制细菌、酵母菌和曲霉的生长
D．酸奶制作：乳酸菌厌氧发酵产生乳酸，使奶具有特别风味
【答案】A
【分析】1、醇母菌是一类单细胞真菌，能以多种糖类作为营养物质和能量的来源，因此在
一些含糖量较高的水果、蔬菜表面经常可以发现酵母菌的存在。酵母菌是兼性厌氧微生物
在无氧条件下能进行酒精发酵，可用于酿酒、制作馒头和面包等。温度是影响酵母菌生长
的重要因素，酿酒酵母的最适生长温度约为28℃。
2、醋酸菌是好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当
氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在
30℃～35℃。
3、泡菜的制作原理：起作用的乳酸菌，其代谢类型为异养厌氧型。
4、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将
脂肪分解成甘油和脂肪酸。腐乳的前期制作温度控制在15℃～18℃环境条件下，因为毛霉
属需氧型微生物，因而放置在空气中即可；豆腐乳的后期制作温度控制在30℃条件下，且
要放入坛中密封坛口。
【详解】A、米酒制作原理是酵母菌的无氧呼吸产生酒精，酵母菌属于兼性厌氧生物，开
始在有氧条件下大量繁殖，有氧呼吸产生二氧化碳和水，后期进行无氧呼吸产生酒精和二
氧化碳，因此发酵液中的气泡来源于酵母菌的有氧呼吸和无氧呼吸，A 错误；
B、醋酸菌是好氧细菌，当氧气和糖源都充足时能将糖分解成醋酸；当氧气充足但是缺少
糖源时则将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为醋酸，B 正确；
C、多种微生物参与了腐乳的制作，如酵母菌、毛霉、曲霉等，其中起主要作用的是毛霉，
腐乳的前期制作温度控制在15℃～18℃环境条件下，因此发酵温度为15～18℃，可抑制细
菌、酵母菌和曲霉的生长，C 正确；
D、制作泡菜利用的乳酸菌是一种厌氧微生物，可以通过无氧呼吸产生乳酸，使奶具有特
别风味，D 正确。
故选A。
32、（2024·山东潍坊·三模）青霉素是产黄青霉菌在有氧条件下利用发酵工程生产的一种
非常重要的抗菌药物，下列叙述错误的是（ ）
A．用稀释涂布平板法可以对产黄青霉菌菌种进行选育并计数
B．判别产黄青霉菌是否混入乳酸菌，应在无氧环境中培养稀释涂布的平板
C．发酵罐内的发酵液不仅要保持一定的溶氧量，还需pH 小于7
D．发酵结束后，采用过滤与沉淀的方法获得青霉素
【答案】D
【分析】1、培养基的概念及营养构成
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（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生
长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生
素，培养霉菌时需将培养基的pH 调至酸性，培养细菌时需将pH 调至中性或微碱性，培养
厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
2、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后
可形成单个菌落。稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的
数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的
一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结
果准确，一般选择菌落数为30~300 的平板进行计数。值得注意的是，统计的菌落数往往比
活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌
落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
【详解】A、分离微生物可以采用稀释涂布平板法和平板划线法，但是稀释涂布平板法还
可以用来计数，因为该接种方法中当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落
来源于样品稀释液中的一个活菌，因此可根据菌落数确定菌体的数目，A 正确；
B、由于乳酸菌属于厌氧菌，而产黄青霉菌是需氧型微生物，因此判别产黄青霉菌是否混
入乳酸菌，应在无氧环境中培养稀释涂布的平板，观察培养基上有无菌落产生，B 正确；
C、因为产黄青霉菌是需氧型微生物，且适宜在酸性条件下生存，因此发酵罐内的发酵液
不仅要保持一定的溶氧量，还需pH 小于7，C 正确；
D、发酵结束后，发酵产生的青霉素属于微生物代谢产物，可以根据产物的性质采取适当
的提取、分离和纯化措施，如果发酵产品是微生物细胞本身，可采用过滤与沉淀的方法获
得，D 错误。
故选D。
33、（2024 山东省齐鲁名校第三次联合检测）野樱莓酒由野樱莓经破碎压榨、过滤、发酵
等多道工序酿造而成。下列关于野樱莓酒传统发酵流程的说法中，正确的是（ ）
A．野樱莓酒主要是酵母菌在 35℃、无氧条件下进行酒精发酵的结果
B．野樱莓酒发酵前，发酵瓶和榨汁机等需用体积分数为 70%的酒精灭菌
C．发酵过程中需定期打开瓶盖，目的是及时排出酵母菌细胞呼吸释放的 CO2
D．长时间开封的野樱莓酒产生酸味主要是醋酸菌将乙醇转化为乙酸导致的
【答案】D
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。在有氧的
情况下酵母菌生长繁殖速度快，把糖分解成二氧化碳和水。在无氧的环境中酵母菌把糖分
解成酒精和二氧化碳。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。
果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖
源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、酵母菌的发酵温度为18~30℃， 其在无氧条件下进行酒精发酵，A 错误；
B、野樱莓酒发酵前，需将发酵瓶和榨汁机等用体积分数为 70%的酒精消毒，B 错误；
C、发酵过程中需要定期拧松（而非打开）瓶盖，目的是及时排出酵母菌细胞呼吸释放 的
CO2，C 正确；
D、长时间开封的野樱莓酒能够接触空气，利于需氧菌的繁殖，产生酸味主要是醋酸菌将
乙醇转化乙酸导致的，D 正确。
故选D。
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34、（2024 山东省齐鲁名校第三次联合检测）研究人员用刚果红培养基从蔗渣堆肥中筛选、
分离出 4 株具有降解纤维素能力的真菌（图示①~④）。下列说法正确的是（ ）
A．图中培养基应在灭菌后调节pH
B．④号真菌降解纤维素的能力最强
C．实验中应将接种后的平板直接静置培养
D．可使用平板划线法对 4 种菌株进行培养和计数
【答案】B
【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平
板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线
的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经
过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、配制图中培养基时，应在灭菌前调节pH，A 错误；
B、在相同时间内，④号真菌形成的透 明圈与菌落的比值最大，说明其降解纤维素 的能
力最强，B 正确；
C、实验中，需待涂布的菌液被培养基吸收后倒置于恒温培养箱中培养，C 错误；
D、平板划线法不能用于微生物计数，D 错误。
故选B。
35、（2024·湖北·三模）油炸臭豆腐闻着臭吃着香，是有名的风味小吃。臭豆腐制作时需
要将豆腐浸入含乳酸菌、毛霉菌等微生物的卤汁中发酵。下列叙述正确的是（ ）
A．制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基
B．乳酸菌发酵产生了乳酸和二氧化碳，需定期排气
C．豆腐发酵时需要密封处理，有利于毛霉菌的生长
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D．豆腐发酵时不会有杂菌的繁殖，故无需严格灭菌
【答案】A
【分析】传统的腐乳制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子；而现代的
腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以避免其他菌
种的污染，保证产品的质量。
【详解】A、制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基，豆腐中的蛋白质被分解为
小分子肽和氨基酸，易于消化吸收，A 正确；
B、乳酸菌通过乳酸发酵可以产生乳酸，不产生CO2，B 错误；
C、毛霉的代谢类型为异养需氧型，故豆腐发酵时不应密封处理，C 错误；
D、家庭制作腐乳生产条件不易控制，容易受杂菌污染，豆腐在卤汁中发酵的过程中有杂
菌繁殖，D 错误。
故选A。
36、（2024·湖北襄阳·三模）科学家按照如图所示的流程分离牛瘤胃中的纤维素分解菌，
并在刚果红培养基平板上筛选到有透明降解圈的菌落。下列叙述正确的是（ ）
A．微生物的纯培养物是指不含有任何代谢废物的微生物培养物
B．空白平板使用前已进行灭菌，接种后未长出菌落的平板可以直接丢弃
C．过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法，统计结果往往比实际值偏低
D．培养基表面均加入一层无菌的石蜡主要是为了防止杂菌的污染
【答案】C
【分析】刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但与纤维二糖和葡萄糖
无法发生这种反应。在含有纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红与纤维素形成红色复合
物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中就会出现以这些菌为中
心的透明圈。
【详解】A、由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，指的是没有被杂菌污染
的微生物，而不是不含有代谢废物的微生物培养物，A 错误；
B、接种后未长出菌落的培养基，也可能有少量微生物，为避免污染环境，不能直接丢弃，
B 错误；
C、由图可知，过程②所使用的接种方法是稀释涂布平板法，如果使用稀释涂布平板法统
计纤维素分解菌的种群密度，由于两个或多个酵母菌可能长成一个菌落，所得结果往往比
实际值偏低，C 正确；
D、反刍动物的瘤胃中不含氧气，其中存在的纤维素分解菌适宜在无氧条件下生存和繁殖，
因此培养基表面均加入一层无菌的石蜡主要是为了保证培养的无氧环境，D 错误。
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故选C。
37、（2024·湖北襄阳·三模）某垃圾处理厂发现一种有害的、难以降解的化合物X，科学
家用化合物X、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，成功地筛选出能高效降解化合
物X 的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示，下列叙述错误的是（ ）
A．在培养基中加入化合物X 的目的是筛选出能降解化合物X 的细菌
B．培养若干天后，应选择培养瓶中化合物X 含量低的培养液，接入新的培养液中连
续培养，使目的菌的数量增多
C．若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用平板划线方法
进行计数
D．将目的菌用于环境保护实践时，还要对目的菌进行研究，检测其是否会产生对环境
有害的代谢物
【答案】C
【分析】题干信息，该实验的目的是筛选出高效降解化合物X 的细菌，在以化合物X 为唯
一碳源的培养基中只有能降解化合物X 的微生物才能以化合物X 为碳源和氮源生长繁殖，
不能利用化合物X 的微生物因缺乏碳源和氮源，无法生长繁殖。在微生物学中，将允许特
定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】A、本实验是分离出降解的有机化合物X 的菌种，所以培养基中加入化合物X 的
目的是筛选降解X 的的微生物（菌种），A 正确；
B、 由于“目的菌”有降解的有机化合物X 的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中
化合物X 含量显著降低的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一
步增加（扩增），B 正确；
C、平板划线方法不能对微生物进行计数，可以选用 稀释涂布平板法进行计数，C 错误；
D、将目的菌用于环境保护实践时，要考虑目的菌本身对环境的影响，检测其是否会产生
对环境有害的代谢物，D 正确。
故选C。
38、（2024·湖南衡阳市祁东县·三模）牛奶中富含多种营养物质，但牛奶也是多种病原体
的传播载体，比如牛奶中可能存在金黄色葡萄球菌，该菌是一种高度耐盐的兼性厌氧微生
物，可引起人类肺炎和肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）
上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡
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萄球菌，操作流程如图所示。下列说法错误的是（ ）
A．配制好的肉汤培养基应采用湿热灭菌法进行灭菌
B．振荡培养有利于微生物的生长繁殖
C．在血平板上的接种方法是稀释涂布平板法
D．用7.5%NaCl 肉汤培养基进行培养可增加金黄色葡萄球菌的数量
【答案】C
【分析】培养基的主要成分：①主要成分：水、碳源、氮源、无机盐。②其他成分：还需
要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
【详解】A、对培养基进行灭菌常用湿热灭菌法，即配制好的肉汤培养基应采用湿热灭菌
法进行灭菌，A 正确；
B、振荡培养是在一定转速下的摇床上进行培养，振荡培养可使微生物与营养物质充分接
触并提高培养液中的氧气含量，有利于微生物的生长繁殖，B 正确；
C、据图中平板中的线条可知，接种至血平板所用方法为平板划线法，该接种方法在每次
划线前后接种环均需灼烧灭菌，C 错误；
D、分析题意可知，葡萄球菌是一种高度耐盐的兼性厌氧微生物，可以生存在高浓度的盐
溶液中，7.5%NaCl 进行选择培养，高浓度的盐溶液可以抑制其他细菌的繁殖，提高金黄色
葡萄球菌的数量，D 正确。
故选C。
39、（2024·广东茂名·三模）某科研小组欲分离及培养若干种微生物用来处理剩菜剩饭、
骨头、菜根菜叶等湿垃圾。从土壤中筛选淀粉分解菌时，向培养基加碘液染色后，培养基
上出现了A、B、C 三种菌落，结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．可选择菌落B 中的微生物用来处理菜根菜叶等湿垃圾
B．实验结束后，合适的菌株被保存下来，其余的可以直接丢弃
C．菌落A 的出现说明培养基中混入了淀粉以外的其他碳源
D．该实验用到的接种工具为涂布器，接种前应将其没在盛有酒精的烧杯中
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【答案】D
【分析】选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他
不需要的种类在这种培养基上是不能生存的。
【详解】A、淀粉分解菌能将淀粉分解，在培养基上形成透明圈，透明圈直径和菌落直径
的比值越大，说明淀粉分解菌分解淀粉的能力越强，因此可选择菌落C 中的微生物用来处
理菜根菜叶等湿垃圾，A 错误；
B、实验结束后，合适的菌株被保存下来，其余的应经过灭菌处理后再丢弃，防止污染环
境，B 错误；
C、菌落A 的出现说明培养基中混入以空气的碳为碳源的微生物，C 错误；
A、该实验用到的接种工具为涂布器，接种前应将其没在盛有酒精的烧杯中，涂布接种时，
涂布器应从盛酒精的烧杯中取出，并将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃冷却后再使用
D 正确。
故选D。
40、（2024·广东·三模）有些单细胞藻类、酵母菌和细菌等微生物菌体干重中的蛋白质含
量可达到40%~80%，这些通过发酵获得的大量微生物菌体，即是单细胞蛋白，将其添加到
饲料中可提高饲料的蛋白质含量。下列叙述正确的是（ ）
A．在发酵之前需要对菌种进行扩大培养
B．培养基必须经过严格的灭菌，发酵设备则只需要消毒处理
C．发酵生产的废弃液可直接排放到外界环境中
D．发酵结束之后，采取适当的提取、分离、纯化等方法获得单细胞蛋白
【答案】A
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产
有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种
选育、培养基的配制、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分
离工程）等方面。
【详解】A、接入发酵罐中的菌种总体积需要几立方米到几十立方米，因此，在发酵之前
还需要对菌种进行扩大培养，A 正确；
B、发酵工程中一旦有杂菌污染，可能导致产量大大下降，因此，培养基和发酵设备都必
须经过严格的灭菌，B 错误；
C、发酵液经过分离，在获得菌体的同时还会有废弃物，可作为肥料利用，不能随便排放
到环境中，以防止污染环境，C 错误；
D、发酵结束后，采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥，得到产品，D 错误。
故选A。
41、（2024·广东·三模）荧光假单胞菌野生型菌落为平滑型（SM），突变后可产生皱缩型
（WS）和模糊型（FS）菌落。科研人员在液体培养基中静置培养野生型，其种群增长曲
线如图1 所示；在液体培养基中振荡培养野生型，其种群增长曲线如图2 所示。下列叙述
正确的是（ ）
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A．静置培养时，增大荧光假单胞菌的接种数量会增大SM 的K 值
B．静置培养后期，SM 种群数量下降的原因可能与细胞密度过大有关
C．振荡培养时，WS 第4 天后在竞争中占有优势并会保持S 形增长
D．SM 在振荡培养时的突变和适应不利于物种生存
【答案】B
【分析】分析图1：图1 中静置培养，只有SM 型荧光假单胞菌；分析图2：图2 中振荡培
养，培养初期，SM 型荧光假单胞菌增长迅速，第2 天后，WS 型、FS 型荧光假单胞菌增长
迅速，后期由于营养不足和代谢废物积累，导致三种荧光假单胞菌数量下降。
【详解】A、静置培养时，增大荧光假单胞菌的接种数量不会增大SM 的K 值，但会使达
到K 值的时间提前，A 错误；
B、静置培养后期，因细胞密度过大、营养物质消耗、代谢产物积累等因素导致SM 种群数
量下降，B 正确；
C、WS 第4 天后在竞争中占有优势，但第7 天后种群数量下降，并不会保持S 形增长，C
错误；
D、SM 在振荡培养时的突变和适应利于物种生存，D 错误。
故选B。
42、（2024·重庆九龙坡·三模）某校生物兴趣小组主要利用乳酸菌制作泡菜，在发酵的初
期，他们发现水槽内经常有气泡产生，请帮他们分析这些气泡产生的主要原因及成分分别
是（ ）
A．因腌制过程中的盐进入蔬菜使蔬菜体积缩小，气体被排出；气体为空气
B．发酵初期活动强烈的是酵母菌，其消耗O2，产生CO2；气体为CO2
C．乳酸菌在发酵过程中产生热量，使坛内温度升高，空气受热膨胀排出；气体为空气
D．乳酸菌是兼性厌氧型微生物，初期进行有氧呼吸产生CO2；气体为CO2
【答案】B
【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜具有特殊的风味，乳酸
菌是厌氧菌，分解有机物是不需要氧气的，因此泡菜坛要加盖并用一圈水来封口，以避免
外界空气的进入，否则如果有空气进入，就会抑制乳酸菌的活动，影响泡菜的质量。
【详解】A、腌制过程蔬菜体积变小的原因是细胞失水，而不是气体被排出，A 错误；
B、在发酵初期，水槽内经常有气泡产生，这是由于发酵初期活动强烈的是酵母菌，其利
用氧产生 CO2，B 正确；
C、乳酸菌在发酵过程中只产生了少量的热量，不会使空气受热膨胀排出，C 错误；
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D、乳酸菌是厌氧菌，不能进行有氧呼吸，D 错误。
故选B。
43、（2024·广西玉林·三模）若棒状杆菌中缺乏将鸟氨酸转化为精氨酸的酶，不能在缺少
精氨酸的培养基上正常生长，则称之为精氨酸依赖型菌。野生型棒状杆菌经诱变、筛选获
得精氨酸依赖型菌的过程如图所示，过程①将紫外线照射处理过的菌液接种在甲培养基上，
待培养至菌落不再增加时，将甲培养基中的菌落转移到乙培养基中继续培养得到如图所示
的结果。下列相关叙述正确的是（ ）
A．实验过程中用到的培养基和培养皿必须采用高压蒸汽灭菌法灭菌
B．培养基乙中缺乏精氨酸，是一种选择培养基
C．下一步应从培养基乙中选出A 菌株作为所需菌种
D．紫外线照射还可以导致谷氨酸棒状杆菌发生染色体结构变异
【答案】B
【分析】图中①表示将紫外线照射处理的菌液接种在含精氨酸的培养基上，②表示继续培
养在缺乏精氨酸的培养基上，甲中有A、B 两种菌落，乙中只有A 菌落，精氨酸依赖型菌
不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长,因此，甲中A 表示野生型菌株，B 为精氨酸依赖型
菌株。
【详解】A、实验过程中用到培养皿可以使用干热灭菌，A 错误；
B、甲中有A、B 两种菌落，乙中只有A 菌落，精氨酸依赖型菌不能在缺少精氨酸的培养
基上正常生长,所以甲中A 表示野生型菌株，B 为精氨酸依赖型菌株，培养基甲是完全培养
基，培养基乙中缺乏精氨酸，B 不能生长，培养基乙是选择培养基，B 正确；
C、甲中有A、B 两种菌落，乙中只有A 菌落，精氨酸依赖型菌不能在缺少精氨酸的培养
基上正常生长,所以甲中A 表示野生型菌株，B 为精氨酸依赖型菌株，下一步应从培养基甲
中选出B 菌株作为所需菌种，C 错误；
D、谷氨酸棒状杆菌是原核生物，无染色体，不能发生染色体变异，D 错误。
故选B。
44、（2024·广西柳州·三模）我国古代劳动人民利用发酵技术生产了许多传统食品，如腐
乳、果酒、果醋、泡菜等，下列有关分析，错误的是（ ）
选项
发酵食
品
发酵所需的主要菌种
该菌种分类地位
A
腐乳
毛霉
细菌
B
果酒
酵母菌
真菌
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C
果醋
醋酸菌
细菌
D
泡菜
乳酸菌
细菌
A．A
B．B
C．C
D．D
【答案】A
【分析】果酒制作的原理：在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。方程式：
C₆H₁₂O₆→2C₂H₅OH+2CO₂；
果醋制作的原理：当氧气、糖源充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源
时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。方程式：C₂H₅OH+O₂→CH₃COOH+ H₂O
果酒在发酵过程中产生CO₂，所以发酵后，PH 会变小。果醋在发酵过程中生成醋酸，所以
发酵后，pH 会变小。
腐乳是好氧发酵，主要用的是毛霉，是霉菌。它是利用毛霉产生的蛋白酶分解豆制品中的
蛋白质，使用不易消化吸收的大分子蛋白质分解为易于吸收的多肽，并产生多种风味物质。
泡菜是厌氧发酵，主要用的是乳酸菌，是细菌。它是利用乳酸菌在厌氧条件下产生乳酸，
使蔬菜产生酸味，同时产生多种风味物质。
【详解】A．制腐乳利用的微生物是毛霉，其为真核生物，A 错误；
B．果酒制作是在无氧条件下，利用酵母菌的无氧呼吸实现的，酵母菌是真菌，为真核生
物，B 正确；
C．制作果醋利用的微生物是醋酸菌，其为原核生物，属于细菌，C 正确；
D．制泡菜利用的微生物是乳酸菌，其为原核生物，属于细菌，D 正确。
故选A。
45、（2024·贵州·三模）酱油是以大豆、小麦或麦麸为原料，依靠微生物发酵而生产的一
种液态调味品。如图展示了某企业通过发酵制作酱油的过程，下列叙述错误的是（ ）
A．米曲霉发酵过程需要通入空气并搅拌，可判断米曲霉属于异养好氧微生物
B．在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于真核生物
C．添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是酒精和二氧化碳
D．发酵池中加入的食盐可以抑制杂菌的生长和繁殖
【答案】B
【分析】发酵，是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为
人类所需要的产物的过程。传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，通常是家
庭式或作坊式的。利用传统发酵技术制作的食品还有酱、酱油、醋、泡菜和豆豉等，它们
是我国传统饮食文化的重要组成部分
【详解】A、米曲霉发酵过程需要通入空气并搅拌并直接利用现有有机物，可判断米曲霉
属于异养好氧微生物，A 正确；
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B、乳酸菌属于原核生物，B 错误；
C、酵母菌既可以有氧呼吸也可以无氧呼吸（乙醇发酵类型），添加的酵母菌在无氧条件
下分解葡萄糖的产物是酒精和二氧化碳，C 正确；
D、食盐具有杀菌作用，发酵池中加入的食盐可以抑制杂菌的生长和繁殖，D 正确。
故选B。
46、（2024·甘肃白银·三模）甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，其风味既受蚕豆蛋白分解产生
的氨基酸的影响，也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物的影响，其生产工艺如图所
示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．蚕豆中富含蛋白质，经曲霉发酵后，更易于消化吸收
B．制曲的过程有利于曲霉产生蛋白酶
C．蚕豆和面粉可以为微生物的发酵提供碳源和氮源
D．获得豆瓣曲后要进行灭菌处理以抑制杂菌的生长
【答案】D
【分析】传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，通常是家庭式或作坊式的。
利用传统发酵技术制作的食品还有酱、酱油、醋、泡菜和豆豉等。如以大豆为主要原料,利
用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后
经淋洗、调制成的酱油产品
【详解】A、蚕豆中富含蛋白质，经曲霉发酵后，蛋白质被蛋白酶分解为氨基酸和小分子
肽，更易于消化吸收，A 正确；
B、制曲的过程有利于曲霉发酵，产生蛋白酶，B 正确；
C、蚕豆和面粉含有丰富的营养，如糖类、蛋白质和脂质等，因此可以为微生物的发酵提
供碳源和氮源，C 正确；
D、豆瓣曲中含有曲霉菌和蛋白酶，不能进行灭菌处理，D 错误。
故选D。
二、多选题
1、（2024·河北承德·三模）瘤胃微生物移植是将符合要求的供体瘤胃微生物移植到受体动
物的胃中，从而重塑其瘤胃菌群结构，提高反刍动物生产性能或治疗动物疾病。瘤胃微生
物移植包括反刍动物的选择、瘤胃液的采集、瘤胃微生物冻干粉的制备等过程，如图所示。
下列叙述正确的是（ ）
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A．将供体反刍动物按照试验要求进行预饲，以富集瘤胃微生物
B．供体预饲期间以及受体在微生物移植前，不能使用抗生素
C．瘤胃微生物培养基配制完成后需煮沸去除氧气，通入二氧化碳
D．冻干粉溶解并梯度稀释后，平板划线接种于厌氧培养基上可进行计数
【答案】ABC
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已灭菌的培养基倒入培养皿制成平
板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线
的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经
过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、由题干信息可知，需要将供体瘤胃微生物移植到受体动物的胃中，所以先将
供体反刍动物按照试验要求进行预饲，以富集瘤胃微生物，A 正确；
B、抗生素具有杀菌的作用，所以在供体预饲期间以及受体在微生物移植前，不能使用抗
生素，B 正确；
C、瘤胃中生活的微生物主要是厌氧型的微生物，瘤胃微生物培养基配制完成后需煮沸去
除氧气，通入二氧化碳的目的是调节培养基的pH，C 正确；
D、冻干粉溶解并梯度稀释后，稀释涂布平板法接种于厌氧培养基上可进行计数，平板划
线法不可用于计数，D 错误。
故选ABC。
2、（2024·河北秦皇岛·三模）土壤中95%以上的磷为植物很难利用的无效磷。解磷菌能够
将磷矿粉等无效磷转化为植物易利用的速效磷。为研究解磷菌的解磷机理，科研人员将磷
矿粉制成培养液，培养从土壤中分离出的2 种解磷菌（M-3-01、B3-5-6），测定培养液的
上清液pH 及其中的速效磷含量，结果如图，下列叙述正确的是（ ）
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A．2 种解磷菌是用只含磷矿粉的培养基分离出来的
B．由图可知，168h 以内M-3-01 解磷能力较强
C．B3-5-6 转化无效磷的能力与培养溶液pH 显著相关
D．据图推测B3-5-6 可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉
【答案】BCD
【分析】1、培养基的主要成分是水、碳源、氮源、无机盐。
2、据图可知，自变量为培养时间及不同的解磷菌，因变量为速效磷和pH。
【详解】A、培养基的主要成分是水、碳源、氮源、无机盐，只含磷矿粉的培养基无法满
足解磷菌对全部营养物质的需求，2 种解磷菌是用只含磷矿粉为唯一磷源的培养基分离出
来的，A 错误；
B、据图可知，168h 以内M-3-01 解磷菌的速效磷含量高于B3-5-6 解磷菌，说明168h 以内
M-3-01 解磷能力较强，B 正确；
C、在培养72h 以后B3-5-6 解磷菌中的pH 下降，速效磷含量也迅速上升，则说明B3-5-6
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转化无效磷的能力与培养溶液pH 显著相关，C 正确；
D、当pH 下降时B3-5-6 培养液上清液中速效磷含量也迅速上升，当pH 上升到7.0 以上时，
速效磷的含量不再上升，推测B3-5-6 可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉，D 正确。
故选BCD。
3、（辽宁省部分学校2024 年高三临考押题考试（三模））油菜籽中有一种有机化合物
L-5-乙基噁唑烷-硫酮（VOT），可诱发甲状腺疾病。研究发现反刍动物瘤胃中的部分细菌
可以分解VOT，如图是研究人员从瘤胃提取物中分离VOT 分解菌的流程。下列叙述正确
的是（ ）
A．①为了分离得到单菌落，只能使用稀释涂布平板法接种，而不能用平板划线法
B．甲培养基中通常含有碳源、氮源、水和无机盐、琼脂等成分
C．要得到高效分解 VOT 的菌种，需要以 VOT 为唯一的碳源
D．若接种稀释倍数为105的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数平均
值为50 个，则1 mL 原菌液样品中细菌数为5.0×107个
【答案】CD
【分析】培养基：（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长
繁殖的营养基质。（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外
还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在
培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH 调至酸性，培养细菌时需将pH 调至中
性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】A、①为了分离得到单菌落，可以使用稀释涂布平板发或平板划线法，A 错误；
B、甲培养基是液体培养基，目的是扩大培养，从而获得更多目的菌，不含琼脂，B 错误；
C、要得到高效分解 VOT 的菌种，乙为选择培养基，该培养基的目的是选择能够得到分解
VOT 的分解菌，以VOT 作为唯一碳源，C 正确；
D、若接种稀释倍数为105 的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数平均值为
50 个，则1 mL 原菌液样品中细菌数=50÷0.1×105=5.0×107 个，D 正确。
故选CD。
4、（2024 届辽宁省高三联考三模）由谷氨酸棒状杆菌（好氧细菌）发酵可以得到谷氨酸。
在发酵的过程中，需要不停地进行搅拌，并严格控制发酵条件，以提高谷氨酸的产量和品
质。下列叙述正确的是（ ）
A．发酵过程中添加新的营养液会改变培养条件，不利于增产
B．发酵过程中不停地搅拌可满足菌体对氧气需求和提高原料的利用率
C．发酵过程中应控制pH，中性和弱碱性条件下有利于谷氨酸的生产和积累
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D．利用液体培养基生产谷氨酸，通过平板划线法对谷氨酸棒状杆菌进行计数
【答案】BC
【分析】生产味精常用的菌种是谷氨酸棒状杆菌，在一定条件下，利用淀粉、谷氨酸棒状
杆菌以及发酵罐，可以生产味精。谷氨酸棒状杆菌的代谢类型是异养需氧型。
【详解】A、发酵过程中添加新的营养液利于持续高效地获得发酵产品，A 错误；
B、发酵过程中的搅拌会使营养物质和菌种充分接触且能增加溶解氧的量，故可满足菌体
对氧气和养分的需求，提高原料的利用率，B 正确；
C、中性和弱碱性条件下利于谷氨酸的生产和积累，C 正确；
D、平板划线法不能用于计数，D 错误。
故选BC。
三、非选择题
1、（2024 届河北省保定市十校高三下学期三模）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，
可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为营养进行培养，这样既可减少
污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图
所示为操作流程，请回答下列问题：
(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，并进行 灭菌，
待培养基冷却至约50 ℃时，在酒精灯火焰附近进行 ，待培养基凝固后倒置。
(2)图中③通过观察菌落特征获得各类酵母菌菌落，④用于进一步筛选和纯化的培养基从功
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能上分析，特点是 。挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述
合理的有 。
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.图中接种环蘸取一次菌液后划5 次线，灭5 次菌
(3)步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和 供应。假设实
验中初步估测图中锥形瓶中酵母菌细胞数为2×107个/mL，若要在每个平板上涂布100μL 稀
释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200 个，则至少应将锥形瓶中的菌液
继续稀释 倍。
【答案】(1) 高压蒸汽（湿热） 倒平板
(2) 以甲醇为唯一碳源（的选择培养基） a、b、d
(3) 氧气 104
【分析】由图分析可知，①表示称量土样，土样中含有需要分离的酵母菌；②表示梯度稀
释，目的是尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在；③表示涂布分离；
④表示平板划线法纯化，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；⑤表示
扩大培养，获得更多的酵母菌。
【详解】（1）培养基常用高压蒸汽（湿热）灭菌法进行灭菌。灭菌后待培养基冷却至约
50℃时，在酒精灯火焰附近进行倒平板，待培养基凝固后倒置。
（2）④的目的是筛选能利用工业废甲醇作为营养的酵母，因此④的培养基应以甲醇为唯一
碳源。
a、为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a 正确；
b、划线时应避免划破培养基表面，若划破培养基表面，会导致酵母菌大量聚集繁殖，从而
不能形成正常菌落，b 正确；
c、挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定培养液中甲醇的含量，c 错误；
d、据图可知，图中画线区域有5 个，说明接种环蘸取一次菌液后依次在5 个区域进行了划
线，每次接种结束都要进行灭菌，因此需要灭5 次菌，d 正确。
故选abd。
（3）酵母菌在有氧条件下可快速繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充
足的营养和氧气供应。1ml=1000μl，假设稀释的倍数为a，则200÷100×103×a=2×107，
a=104，即至少应将锥形瓶中的菌液继续稀释104 倍。
2、（2024 届河北省部分高中三模）厨余垃圾常见处理方式为微生物高温堆肥处理和干法
厌氧发酵技术。图1 为高温堆肥时翻堆频率对厨余垃圾重量影响的相关曲线，图2 为干法
厌氧发酵技术流程。回答下列问题：
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(1)由图1 可推测高温堆肥时所用主要菌种的代谢类型为 ，翻堆的意义在于
、 。
(2)干法厌氧发酵过程中发酵罐需 ，以保证微生物能充分将厨余垃圾中的有机
物分解成CH4和CO2，该过程产生的沼气可作为能源物质，沼渣可肥田，从能量流动的角
度分析，其意义是 。
(3)与高温堆肥相比，干法厌氧发酵技术中所用的菌种单一、性状优良，这些菌种可以从自
然界中筛选，也可以通过 育种获得。分析从垃圾处理站能筛选出所需目的菌的
理由是 。获得的目的菌可用平板划线法纯化，操作划线时要注意不要将最后一
次的划线 。
(4)为检测筛选出的目的菌的发酵效果，还需对沼渣接种目的菌后进行C/N（碳/氮）比的检
测，理论上，与发酵前相比，发酵后的C/N 比值 ，原因是
。
【答案】(1) 异养需氧型 增加氧气浓度，促进微生物的有氧呼吸 降低温度
（散热），使微生物呼吸作用产生的热能及时散失
(2) 密闭 实现了对能量的多级利用，从而大大提高了能量的利用率
(3) 诱变（基因工程） 该处有适合厨余垃圾分解菌生长繁殖的适宜环境 与
第一次的划线相连
(4) 降低 微生物发酵会将有机物分解为二氧化碳释放到大气中
【分析】平板划线法操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一
次的末端开始划线。这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个
菌落。
【详解】（1）根据图1 可知，从第2 天后，24h 翻堆一次的组厨余垃圾重量下降最快，说
明翻堆带来的溶氧量增加促进了微生物的分解作用，因此可推测高温堆肥时所用主要菌种
的代谢类型为异养需氧型，翻堆不仅可增加氧气浓度，促进微生物的有氧呼吸，还可降低
温度（散热），使微生物呼吸作用产生的热能及时散失。
（2）干法厌氧发酵过程中需要保持发酵罐内处于无氧环境，即发酵罐需要密闭，以利于厌
氧菌的增殖和分解作用。沼气可作为能源物质，沼渣可肥田，这样即实现了对能量的多级
利用，从而大大提高了能量的利用率，使能量更多的被人类利用。
（3）干法厌氧发酵技术中所用的菌种单一、性状优良，获得这些优良菌种的方法有：从自
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然界中筛选，或通过诱变育种或基因工程育种的方法获得。生物对环境具有适应性，由于
垃圾处理站有适合厨余垃圾分解菌生长繁殖的适宜环境，因此从垃圾处理站能筛选出所需
目的菌。获得的目的菌可用平板划线法纯化，操作划线时要注意不要将最后一次的划线与
第一次的划线相连，以免使最后划线上的菌体增多，不能得到单个菌落。
（4）由于微生物发酵会将有机物分解为二氧化碳释放到大气中，因此理论上，与发酵前相
比，发酵后的C/N 比值会降低。
3、（2024·安徽·三模）利用金属硫蛋白启动子（PCUP1）和绿色荧光蛋白（CFP）基因等
构建重组质粒PCUP9K-CFP，并通过氯化锂法转化毕赤酵母，获得工程菌株，工程菌细胞
及其发酵液中可检出绿色荧光蛋白。发酵液中分别加入不同浓度的铜离子处理2h 后，结果
如图1；分别加入10μmmVL 的铜、铬、镉和砷离子处理2h 后，结果如图2（CK 为对照
组）。请回答下列问题：
(1)根据图1 结果可知，GFP 基因表达可以被一定浓度的铜离子促进，说明PCUPI 属于
启动子，构建基因表达载体需要的工具酶有 ，重组质粒pCUP9K-GFP 上不需
要携带特殊抗性基因等充当标记基因，理由是 。
(2)培养工程菌的过程中，在接种环节要严格遵从无菌操作，如何确定接种操作达到无菌要
求? 。
(3)含pCUP9K-GFP 的毕赤酵母菌可以指示水体中铜离子的污染程度，理由是 。
用铬、镉和砷离子处理该工程菌的目的是 。
【答案】(1) 诱导型 限制酶、DNA 连接酶 （利用标记基因可以初步确定受
体菌中是否含有目的基因，而）GFP 基因表达出的绿色荧光蛋白可用于确定受体菌中是否
含有目的基因
(2)用符合要求的培养基在相同接种环境中，加入无菌水模拟接种操作，将这些培养基和接
种菌种的培养基一起置于恒温培养箱中培养，看是否有菌落长出（答“将未接种的培养基
与接种的培养基置于相同条件下培养，看是否长出菌落”不给分）
(3) 一定范围内，含pCUP9K-GFP 的毕赤酵母菌发酵液中相对荧光量随铜离子浓度的
增加而增加 排除铬、镉和砷等离子也能促进工程菌中的GFP 基因表达的可能性（或
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检测含pCUP9K-GFP 的毕赤酵母菌对重金属离子污染的指示是否具有专一性等）
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、
终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导
入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞
最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA 是否
插入目的基因−−DNA 分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA−−分子杂交技
术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴
定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】（1）导入金属硫蛋白启动子（PCUPI）之后，GFP 基因表达可以被一定浓度的铜
离子促进，说明该启动子是诱导型启动子。构建基因表达载体需要的工具酶有限制酶和
DNA 连接酶；标记基因一般是用于初步筛选含有目的基因的受体细胞，GFP 基因表达出的
绿色荧光蛋白可用于确定受体菌中是否含有目的基因，因而不需要其他标记基因。
（2）确定接种操作过程是否符合无菌要求的方法一般是在接种过程中用一些灭菌合格的培
养基平板，用等量无菌水代替菌种来模拟接种操作，观察这些培养基在培养的过程中是否
会长出菌落。
（3）一定范围内，含pCUP9K-GFP 的毕赤酵母菌发酵液中相对荧光量随铜离子浓度的增
加而增加，可以用于指示水体中铜离子的污染程度。用铬、镉和砷离子处理这一工程菌，
结果和对照组相似，可以排除环境中铬、镉和砷离子等对该工程菌产生绿色荧光蛋白的影
响。
4、（2024·湖南衡阳·三模）白色污染是人们对难降解的塑料垃圾（多指塑料袋）污染环境
现象的一种形象称谓。它是指各类生活塑料制品使用后被弃置成为固体废物，由于随意乱
丢乱扔，难于降解处理，以致破坏环境，严重污染的现象。研究人员从土壤中筛选出能降
解塑料的细菌（目的菌）的流程如图1 所示。回答下列问题。
(1)配制用于目的菌富集的培养基其成分特点是 ，该培养基属于 培养基。
(2)培养过程中需要无菌操作，为避免被杂菌污染，需要注意的事项有 （答出2 点即
可）。
(3)若培养后的平板上菌落过于密集，则应该进一步 ，以便于菌落计数与分离。
(4)将筛选到的菌株用于治理“白色污染”时，有可能造成其他的环境污染问题，原因可能
是 （答出一点即可）。
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(5)为了筛选出高效降解塑料的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小。实验结果如图2
显示的A~E 五种菌株中， 是最理想菌株。
(6)研究人员欲获取上述目的菌相应基因进行后续研究，该过程中需要用到RT-PCR（反转
录PCR）技术，即以已转录的mRNA 为模板，来获取大量目的基因，一般要加入4 种脱氧
核糖核苷三磷酸（dNTP）而不是脱氧核苷酸的原因是 。研究人员为什么不用普通的
PCR 技术而是选择RT-PCR 来获取相关基因，原因是 。
【答案】(1) 以塑料为唯一碳源 选择
(2)在超净台完成、在火焰旁完成、培养基用高压蒸汽灭菌等(答出两点即可)
(3)稀释
(4)菌株大量繁殖是否会产生对环境有害的代谢产物、是否会产生二次污染
(5)E
(6) dNTP 能为子链延伸过程提供能量 RT-PCR 是以已转录的mRNA 为模板，避
免扩增出不表达的基因
【分析】选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他
种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都
含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要
满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
【详解】（1）要筛选出目的菌，培养基的配制需要以塑料作为唯一碳源；将允许特定种类
的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基，按用途
划分，其属于选择培养基。
（2）在整个微生物的实验室培养过程中，需要进行无菌操作，防止杂菌污染，如在酒精灯
火焰附近进行接种、接种环 要进行灼烧、在超净工作台上进行实验、培养基采用高压蒸汽
灭菌等。
（3）若培养后的平板上菌落过于密集，不易计数和分离，则应该进一步稀释，以便于菌落
计数与分离。
（4）筛选到的菌株对塑料有降解能力，在降解塑料的同时该菌株也会大量繁殖，所以用它
来治理废弃塑料造成的污 染问题时，要考虑菌株大量繁殖是否会产生对环境有害的代谢产
物、是否会对环境产生二次污染等问题。
（5） 为了筛选出高效降解塑料的目的菌，可比较单菌落周围透明圈的大小：实验结果显
示的A~E 五种菌株中， E 菌落周围的透明圈最大，说明E 菌株降解塑料的能力最强，因
此是最理想菌株。
（6）一般要加入4 种脱氧核糖核苷三磷酸 (dNTP)而不是脱氧核苷酸的原因是dNTP 能为
子链延伸过程提供能量的同时还能提供原料；RT-PCR 技术即以已转录的mRNA 为模板，
不含内含子等非编码序列，避免扩增出不表达的基因，故研究人员为什么不用普通的PCR
技术而是选择RT-PCR 来获取相关基因。
5、（2024·重庆渝中·三模）某化工厂的污水池中有一种有害的难以降解的有机化合物X，
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研究人员用化合物X、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制培养基，成功筛选得到能高效降
解X 的细菌（目的菌），实验的主要步骤如图所示（含化合物X 的培养基不透明）。回答
问题：
(1)培养基中加入化合物X 作为唯一碳源的目的是 。实验过程中进行振荡培养
的作用是 。
(2)实验过程中获得纯净“目的菌”的关键是 。实验人员应该挑取图2 乙中
菌落重复图1 所示实验过程，将固体培养基得到的目的菌重复多次上述图1 过程的目的是
。
(3)图2 甲所示接种方法是平板划线法，1 是起始区，在图中 （填图中序号）
区域更易获得单菌落；运用该方法接种得到单菌落需要注意的事项有： （答
两点）。
(4)实验人员将一段人工合成的
转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解化合物X 的酶
（酶Y），为了比较酶Y 与天然酶（酶W）降解X 能力的差异，利用含有一定浓度化合物
X 的固体培养基进行实验，请写出简要实验思路： 。
【答案】(1) 筛选目的菌 菌体与营养物充分接触、增加溶氧量
(2) 防止杂菌污染 透明带直径大（有透明带） 纯化目的菌株
(3) 5 每次划线前都要对接种环进行灼烧灭菌、接种环灼烧后要冷却、每次划线
均要从上一次划线的末端开始、划线的次数要足够、最后一次划线与第一次划线不相连
(4)在含有一定浓度X 的培养基上，A 处滴加含酶Y 的缓冲液，B 处滴加等量的相同浓度的
天然酶（酶W）的缓冲液。一段时间后测定透明圈的直径。
【分析】分析题干信息：该实验的目的是筛选出高效降解化合物X 的细菌，在以化合物X
为唯一碳源的培养基中只有能降解化合物X 的微生物才能以化合物X 为碳源生长繁殖，不
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能利用化合物X 的微生物因缺乏碳源，无法生长繁殖。
【详解】（1）本实验的目的是“筛选到能高效降解化合物X 的细菌”，因此培养基中加
入化合物X 作为唯一碳源，目的是为了筛选目的菌。实验培养过程中进行振荡培养，可使
目的菌和培养液充分接触，促进目的菌繁殖，增加目的菌的浓度。
（2）获得纯净“目的菌”的关键是无菌技术，防止外来杂菌入侵。含化合物X 的培养基
不透明，当化合物X 被分解后，会出现透明圈，因此应该挑取图2 乙中透明带直径大的菌
落重复图1 所示实验过程，将固体培养基得到的目的菌重复多次上述实验的目的是对菌种
进行纯化。
（3）图2 甲所示接种方法是平板划线法，1 是起始区，在划线的末端5 处更容易获得单菌
落。使用平板划线法将菌种逐步稀释分散到培养基的表面，每次划线前都要对接种环进行
灼烧灭菌、接种环灼烧后要冷却、每次划线均要从上一次划线的末端开始、划线的次数要
足够、最后一次划线与第一次划线不相连。
（4）为了比较酶Y 与天然酶（酶W）降解X 能力的差异，该实验的自变量为酶的种类，
因变量为降解X 能力，可用透明圈的直径来表示，其他为无关变量，应保持相同且一致，
故实验步骤为：在含有一定浓度X 的培养基上，A 处滴加含酶Y 的缓冲液，B 处滴加等量
的相同浓度的天然酶（酶W）的缓冲液。一段时间后测定透明圈的直径。
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