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发酵工程
考点1
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专题08 生物技术与工程
3 大考点概览
考点1 发酵工程
考点2 细胞工程
考点3 基因工程
1．（2026·湖南常德·二模）下列关于传统发酵技术及发酵工程的叙述，正确的是（ ）
A．啤酒生产中，焙烤的目的是杀死种子胚并进行灭菌
B．在O2和糖源都充足时，醋酸菌能将糖分解成乙酸
C．谷氨酸发酵过程中，创设酸性条件有利于谷氨酸积累
D．利用某些嗜热菌可有效提高热敏性发酵产品的产量
2．（2026·湖南怀化·二模）烟栖火叶菌是一种栖息在深海热液喷口附近的微生物，能耐受113℃的高温，
其最低生长温度为90℃，最适生长温度约为105℃，可利用硫化物等无机物氧化释放的能量合成有机物。
下列关于培养烟栖火叶菌的方法和应用，错误的是（ ）
A．烟栖火叶菌可能是厌氧型菌、化能自养菌
B．在液体培养基中培养时，温度应控制在105℃左右
C．培养基中只需加入氮源和碳源两类营养物质
D．烟栖火叶菌含有的耐高温酶可应用于需要高温反应条件的工业生产中
3．（2026·湖南常德·二模）通过在平板的不同区域添加不同营养物质的结晶或粉末可以选择出某种营养
缺陷型菌株。营养缺陷型菌株在基本培养基上不能正常生长，只能在完全培养基上正常生长。为分离诱
变菌液中氨基酸缺陷型菌株，现将诱变处理后的菌液稀释后接种于某培养基上培养，用灭菌牙签逐个挑
取待测菌，先后点接于A、B 培养基上，前后位置及号码相对应，培养后菌落生长情况如下图，下列操作
与判断正确的是（ ）
A．实验过程中需在培养皿的皿底划分区域并做好标记
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B．过程①的接种方法为平板划线法，接种环需灼烧灭菌
C．确定氨基酸缺陷型时，应挑取A 中的目标菌落进行后续实验
D．后续实验中在不同区域添加氨基酸结晶或粉末的培养基为鉴别培养基
4．（2026·湖南永州·二模）某科研小组从土壤中分离出一种解脂菌，它能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解
成甘油和脂肪酸。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，而脂肪不能。下列叙述正确的是（
）
A．配制好固体培养基后依次进行灭菌、调节pH 和倒平板等操作
B．可采用平板划线法对土壤中的解脂菌进行分离与计数
C．微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
D．醇溶青琼脂平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
5．（2026·湖南邵阳·二模）我国是世界上最大的柠檬酸生产国。下图是利用黑曲霉通过深层通气液体发
酵技术生产柠檬酸的流程图，相关叙述错误的是（ ）
A．柠檬酸生产和果醋生产所选用的菌种呼吸类型相同
B．配制扩大培养的培养基时，应该加入质量分数为1.5%～2%的琼脂
C．培养皿采用的灭菌方法比培养基采用的灭菌方法温度低、时间短
D．选育菌种时，培养基灭菌后应该调节pH 至酸性后再培养
6．（2026·湖南衡阳·二模）某科研小组计划在实验室分离纯化能高效降解聚苯乙烯的细菌（目标菌），
然后获取相关酶，以期实现塑料的生物酶降解，其基本思路如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．解剖并取肠道内容物是为了采集含目标菌的样品
B．富集培养时的培养基应以聚苯乙烯为唯一碳源
C．利用培养基Ⅱ分离目标菌的接种方法是稀释涂布平板法
D．观察菌落大小、颜色等可进一步鉴定某菌株是否为目标菌
7．（2026·湖南张家界·二模）下列关于传统发酵技术的叙述，正确的是（ ）
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细胞工程
考点2
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A．制作泡菜时，泡菜坛坛口加水密封的目的是为了抑制乳酸菌的繁殖
B．制作果酒时，发酵液中酒精浓度升高会抑制酵母菌的发酵
C．制作腐乳时，毛霉产生的蛋白酶只能将豆腐中的蛋白质分解为氨基酸
D．制作果醋时，醋酸菌在无氧条件下将酒精转化为醋酸
8．（2026·湖南岳阳·二模）尿素需要土壤中尿素分解菌将其分解后才能被农作物吸收，某科研小组欲对
某地土壤中尿素分解菌进行培养和研究。下列叙述正确的是（ ）
A．若要分离培养尿素分解菌，需要以尿素为唯一氮源的培养基进行培养，且培养基在灭菌后需要先
调整pH 再倒平板
B．若要获得能高效分解尿素的菌种，从富含哺乳动物尿液且植物生长茂盛的地方取样，获得目的菌
种的概率更高
C．土壤中尿素分解菌数量的统计可以通过稀释涂布平板法接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，其
上长出的菌落均来源于一个尿素分解菌
D．研究过程中所有用到的培养器具和使用后的培养基在丢弃前一定要进行消毒处理
1．（2026·湖南怀化·二模）牛羊等反刍动物的育种技术是保障全球肉奶供应、提升畜牧业效益的关键。
我国科学家利用单倍体干细胞技术成功培育出世界首例基因编辑牛羊。该技术体系包括：①研发新型培
养液，建立牛羊孤雄单倍体干细胞系；②通过瞬时表达鱼精蛋白，将干细胞核“压缩”成类精子结构；
③利用非整合引导编辑技术一次性实现MSTN 基因100%敲除；④将修饰后的干细胞注入去核卵母细胞，
以获得健康活体牛羊。下列相关叙述错误的是（ ）
A．孤雄单倍体干细胞只有一套染色体，便于进行精准的基因编辑
B．对卵母细胞去核操作可以在减数分裂Ⅱ期进行
C．受体通常不会对移植的胚胎发生免疫排斥，这是胚胎移植的基础
D．获得的基因编辑牛羊的遗传信息全部来自单倍体干细胞
2．（2026·湖南湘一名校联盟·二模）直肠癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均较
高。为研究直肠癌细胞通过其微环境诱导肝星状细胞分化进而促进肿瘤生长和转移的机制，研究人员进
行了相关实验（实验细胞均贴壁生长，所用培养基中添加500μL 的青链霉素）。下列说法错误的是（
）
A．培养基中添加青链霉素的目的是抑制细菌增殖
B．对直肠癌细胞进行传代培养时，可直接用离心法收集细胞
C．直肠癌细胞应置于含95%空气和5%CO2混合气体、37℃的恒温培养箱中培养
D．收集直肠癌细胞培养上清液，与肝星状细胞共培养，可判断其是否有诱导作用
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3．（2026·湖南湘一名校联盟·二模）百香果含有132 种以上的芳香物质，是世界上已知最芳香的水果之
一，有“果汁之王”的美誉，但百香果多采用嫁接、扦插等方式进行无性繁殖，易携带母株病毒，导致
果实品质下降、产量降低，生产中可采用脱毒处理加以解决。下列说法错误的是（ ）
A．离体的百香果组织必须经过消毒后才能接种到培养基上
B．植物茎尖几乎不含病毒，分裂旺盛的茎尖是合适的脱毒材料
C．可在培养基中添加2．0mg·L⁻¹ 的BA 和0．15mg·L⁻¹ 的NAA 诱导生芽
D．经植物组织培养获得的脱毒百香果幼苗不需要进行病毒检测即可扩大繁殖
4．（2026·湖南衡阳·二模）草莓的营养繁殖易将所感染的病毒传给后代，导致产量降低、品质变差。
利用MS 培养基运用植物组织培养技术可以培育出无病毒植株。科研人员研究了草莓茎尖长度对分化苗的
形成及脱毒效果的影响，结果如下表。下列叙述正确的是（ ）
处理
外植体
数
分化苗数
脱毒苗数
小于0.3mm
20
1
1
0.3～0.5mm
20
10
7
大于0.6mm
20
13
4
A．草莓茎尖培养脱毒的关键原因是茎尖病毒含量极低甚至无病毒
B．据表分析，选取0.3～0.5mm 的茎尖有利于培养脱毒草莓苗
C．提高MS 培养基中细胞分裂素和生长素的比例有利于诱导生根
D．优化培养基成分和严格控制无菌培养环境，都能提高茎尖培养脱毒效果
5．(2026・湖南长郡二十校联盟・二模)某农业科技公司为抢救濒危药用植物“红豆杉”，启动了组织培
养快速繁殖项目。在实验中，技术人员发现：当外植体取自树皮部位时，脱毒效果差；而取自茎尖分生
组织时，可获得高纯度脱毒苗。同时，为研究生殖细胞全能性，团队还进行了花粉离体培养实验。下列
关于该过程的叙述，错误的是（ ）
A．外植体脱分化过程中，细胞逐渐失去原有形态和功能特异性，形成不定形的薄壁组织团块
B．再分化阶段，若培养基中细胞分裂素与生长素比例较高，则有利于芽的形成，但会抑制根的发育
C．单倍体植株幼苗经秋水仙素处理后恢复可育性，体现了植物生殖细胞的全能性
D．选择茎尖分生组织作为外植体获得脱毒苗，是因为该区域的病毒极少，甚至无病毒
6．(2026・湖南长郡二十校联盟・二模)为研发针对某病毒变异株的中和抗体，某生物制药企业采用杂交
瘤技术进行单克隆抗体制备。在实验过程中，技术人员需通过两次关键筛选获得目标杂交瘤细胞。下列
关于该过程的叙述，正确的是（ ）
A．第一次筛选的目的是直接获得能分泌所需要的特异性抗体的杂交瘤细胞
B．第二次筛选前需对杂交瘤细胞进行克隆化培养，再利用抗原—抗体杂交技术鉴定目标细胞株
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基因工程
考点3
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C．将新冠病毒S 蛋白注射到小鼠体内后，应从小鼠骨髓中分离经免疫的B 淋巴细胞用于融合
D．杂交瘤细胞体外培养时，需通入95%的纯氧和5%的二氧化碳，以满足高耗氧细胞的呼吸需求
7．（2026·百师联盟·二模）人参果（2n=24）因低糖、低脂、高蛋白深受人们喜爱，但人参果种植过
程中容易遭受病毒侵害，产量低。苦参（2n=18）产生的苦参碱、氧化苦参碱能干扰病毒RNA 的合成，
对烟草花叶病毒（TMV）等多种病毒有效。科研人员利用人参果和苦参进行植物体细胞杂交，培育抗病
毒的人参果—苦参杂种植株。下列叙述正确的是（ ）
A．苦参分生组织细胞培育出不定根的过程体现了植物细胞的全能性
B．将人参果细胞和苦参细胞进行融合时，可采用灭活病毒进行诱导
C．得到杂种细胞后继续培养，常用生长素、细胞分裂素诱导愈伤组织的形成和分化
D．与紫草宁一样，苦参碱属于初生代谢物，可采用植物细胞培养技术大量获得
8．（2026·湖南邵阳·二模）下列关于细胞工程相关的叙述正确的是（ ）
A．诱导愈伤组织分化时，调节培养基中激素浓度和比例，使其先生根后生芽
B．利用花药离体培养获得玉米幼苗后，直接筛选出具有优良性状的个体
C．选择发育良好的桑葚胚进行胚胎分割时，要注意将内细胞团均等分割
D．PEG 融合法和电融合法均可用于动物细胞融合以及植物原生质体的融合
9．（2026·湖南永州·二模）细胞工程在社会生产中的应用日益广泛。下列叙述正确的是（ ）
A．原生质体需在低渗溶液中长期保存，以防止过度失水而死亡
B．胚状体是愈伤组织再分化的结果，受基因选择性表达的调控
C．动物细胞通常置于含有95%O2和5%CO2的培养箱中培养
D．动物克隆过程中，核移植的受体细胞通常是去核的卵原细胞
1．（2026·湖南张家界·二模）CRISPR/Cas9 基因编辑技术可对目标基因进行定点编辑，下列相关叙述
错误的是（ ）
A．Cas9 蛋白的作用是切割DNA 分子，属于限制性内切核酸酶
B．该技术需要根据目标基因的序列设计向导RNA
C．基因编辑过程中，细胞可通过DNA 修复机制修复断裂的DNA
D．该技术可用于治疗人类的单基因遗传病，不会产生任何安全风险
2．(2026・湖南长郡二十校联盟・二模）重组人胰岛素是首个通过基因工程实现产业化的医用蛋白，科
研人员以人胰岛素基因为目的基因，利用大肠杆菌BL21（DE3）菌株构建工程菌生产重组胰岛素，其部
分过程如下图。回答下列问题：
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限制酶
酶切序列5′→3′
BamHⅠ
G↓GATCC
BglⅡ
A↓GATCT
NheⅠ
G↓CTAGC
SmaⅠ
CCC↓GGG
XmaⅠ
C↓CCGGG
(1)图中过程①中需要从_____细胞中提取RNA，得到的人胰岛素基因中_____（填“含有”或“不含
有”）启动子；过程②需要的酶有_____。
(2)已知胰岛素基因的A 链为编码链，其部分碱基序列为5′-CAGCTT……AAGATCTT……TACGCT-3′。为
了使目的基因与载体正确连接，应该选择限制酶_____切割质粒，扩增目的基因时的PCR 引物是_____。
A．5′-GGCCCGGGCAGCTT-3′ B．5′-GGAGATCT CAGCTT-3′
C．5′-GGGGATCCCAGCTT-3′ D．5′-GGGCTAGCAGCGTA-3′
(3)将质粒导入大肠杆菌后，还需要进行筛选。需要先将大肠杆菌置于含_____的A 培养基中培养，再从A
培养基中选取菌落接种于含_____的B 培养基，能够_____的菌落即为成功导入胰岛素基因的大肠杆菌。
(4)为鉴定导入的人胰岛素基因是否成功表达，可以用_____技术进行检测。
3．（2026·百师联盟·二模）新疆省是我国核心棉花种植区，转Bt 基因抗虫棉的推广大幅降低了棉铃虫
危害与化学农药使用量，但棉铃虫对Bt 蛋白的抗性进化是制约抗虫棉长效应用的关键问题。科研团队以
新疆主栽棉花品种为材料，结合组织特异性启动子实现Bt 毒蛋白基因（抗虫基因）的精准表达，相关操
作如图，请回答下列问题：
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(1)构建重组Ti 质粒时，为保证目的基因完整且定向插入T—DNA 区域，应选用的限制酶是______。
(2)目的基因表达过程中，棉铃组织特异性启动子的作用是______；Ti 质粒中能介导目的基因整合到棉花
细胞染色体DNA 上的核心序列是______。
(3)将含目的基因的棉花愈伤组织培育为完整抗虫棉植株，利用的核心生物技术是______，该技术的理论
基础是______。
(4)为筛选转化成功的棉花细胞，进行愈伤组织培养的培养基中需加入______进行初步筛选。在进行抗虫
活性检测时，科研人员将获得的某株转基因棉花进行自交，统计其子代中抗虫与不抗虫的比例为15∶1，
出现该比例的原因是______。为延缓棉铃虫对Bt 蛋白的抗性进化，可在行间种植一些______棉花等其他
农作物，供棉铃虫取食。
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