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专题23 发酵工程
1．理清“3”种传统食品的制作技术
2．培养基制备与微生物纯化技术
特别提醒 (1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的
空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。
(2)观察菌落需用固体培养基，因此培养基要添加凝固剂，如琼脂。
(3)倒平板的温度一般在50 ℃左右较为适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
3．微生物分离与计数的实例
1
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难度：★★★☆☆ 建议用时： 30 分钟 正确率 ： /20
一、单选题
1．黄豆酱是人们喜爱的传统美食，早在春秋时期就有制作方法的相关记载。它以黄豆为主要原料，经米
曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵而成。劳动人民在制作过程中不断改进发酵技术，总结出
以下经验。下列叙述错误的是（ ）
①选用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆与米曲霉混合堆积
③将初步发酵后含米曲霉等微生物的曲料摊薄，并适当通风
④在装坛时，添加适量食盐
⑤发酵过程中，需保持发酵坛密封
⑥发酵过程中，需定期搅拌
A．①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高发酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于发酵坛上部而米曲霉集中于下部
【答案】D
【分析】米曲霉是真菌的一种，米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油
过程所需的酶类，这些酶（如蛋白酶和脂肪酶）中能将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独
特的成分。
【详解】A、米曲霉能够分泌蛋白酶能够将黄豆酱中的蛋白质分解，而食盐一方面可以抑制杂菌生长，一
方面可以调味，故①和④对黄豆酱风味的形成起重要作用，利于提升品质，A 正确；
B、米曲霉是好氧菌，且能够分泌蛋白酶将黄豆酱中的蛋白质分解，故②和⑥可以促使微生物和物料充分
混合，提高发酵效率，B 正确；
C、米曲霉是好氧菌，而酵母菌也可以进行有氧呼吸，故③有利于米曲霉和酵母菌进行有氧呼吸并快速大
量增殖，C 正确；
2
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D、乳酸菌属于厌氧菌，米曲霉是好氧菌，故⑤中米曲霉主要集中于发酵坛上部而乳酸菌集中于下部，D
错误。
故选D。
2．野生型大肠杆菌能在基础培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株由于无法合成某种氨基酸，只能在
完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、
C 表示操作步骤，D、E 为菌落。下列叙述正确的是（ ）
A．A 操作的目的是提高基因突变的概率，增加突变株的数量
B．B 的正确操作是用接种环蘸取菌液后在②表面涂布来接种菌种
C．图中①②③为完全培养基，培养基一般用湿热灭菌法进行灭菌
D．若要获得氨基酸营养缺陷型突变株，可从④中挑取 E 进行纯化培养
【答案】A
【分析】由图分析可知，图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用将菌种接种到两种培养基中，
分别是基本培养基、完全培养基；在基本培养基中，某氨基酸突变株不能生长，而在完全培养基中能够生
长，据此可以选择出氨基酸突变株。
【详解】A、紫外线操作可以提高突变的频率，A 操作即培养可以提高已突变菌株的浓度，即增加突变株
的数量，A 正确；
B、B 操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，B 错误；
C、结合题图信息分析可知，野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷型菌株由于
发生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，且③中只有部分菌落，故图中①②④为完全
培养基，③为基本培养基，C 错误；
D、④为完全培养基，③为基本培养基，若要获得氨基酸营养缺陷型突变株，可从④中挑取D 进行纯化培
养，D 错误。
故选A。
3．超市中酸奶的配料表显示其有乳杆菌、嗜热链球菌等乳酸菌。研究小组计划将酸奶中的不同乳酸菌进
行分离纯化，下列操作的顺序正确的是（ ）
①高压蒸汽灭菌、倒固体平板
②将酸奶进行系列稀释
③准备水、培养皿并配制培养基
④挑取单菌落接种到斜面培养基
⑤用涂布器涂布并进行37℃厌氧培养
A．①→②→③→④→⑤
B．③→①→②→⑤→④
3
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C．①→③→②→⑤→④
D．②→③→①→④→⑤
【答案】B
【分析】微生物常见的接种的方法:
1、平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种、划线，在恒温箱里培养。在线的开始部
分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
2、稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养血表面经培养后可形成单个菌落。
【详解】微生物的分离纯化的操作顺序为：
准备水、培养皿并配制培养基
高压蒸汽灭菌、到固体平板
将酸奶进行系列稀释
用涂布器涂布并进
行37℃厌氧培养
挑取单菌落接种到斜面培养基。
故顺序③→①→②→⑤→④，ACD 错误，B 正确。
故选B。
4．解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为
深蓝色。将等量的、不能直接吸收脂肪的甲、乙两种细菌分别接种在醇溶青琼脂平板上培养，均产生了菌
落，甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法正确的是（ ）
A．甲菌和乙菌都属于解脂菌
B．甲菌和乙菌均能在该平板上生长说明培养基中含有其他碳源
C．该平板不能用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
D．为更好地控制无关变量，应将两种菌分别接种在多个醇溶青平板上培养
【答案】B
【分析】培养基：（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基
质。（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、
特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养
基的pH 调至酸性，培养细菌时需将pH 调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】A、由题意分析，解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用，脂肪酸会
使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，这说明甲菌能分泌脂肪
酶，属于解脂菌，乙菌不能分泌脂肪酶，不属于解脂菌，A 错误；
B、乙菌不能产生分解脂肪的酶，但乙菌也能在该培养基上生长，说明培养基中含有其他碳源，B 正确；
C、根据题目“脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色”可知，颜色越深，解脂菌产脂肪酶的能力越强，
可依据固体培养基上深蓝色的深浅来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，C 错误；
D、为了更好地控制无关变量，可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，D 错误。
故选B。
5．某果汁加工厂在制造柑橘汁时，为提高柑橘的经济价值、减少原料的浪费，设计了如图所示的生产加
工方案。下列叙述错误的是（ ）
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A．过程①温度控制在18～30℃，过程②温度控制在30～35℃
B．若过程③为冷却过程，则目的是防止高温使酶变性失活
C．过程①与④提取的成分存在很大差异，主要是因为果肉与果皮的DNA 组成不同
D．果酒与果醋的制作都需要微生物的参与，两种制作过程的气体环境不同
【答案】C
【分析】果酒发酵，菌种为酵母菌，代谢类型为兼性厌氧型，温度控制在18～30℃；醋酸发酵，菌种为醋
酸菌，代谢类型为异养需氧型，温度控制在30～35。
【详解】A、过程①为果酒发酵，菌种为酵母菌，温度控制在18～30℃，过程②为醋酸发酵，菌种为醋酸
菌，温度控制在30～35℃，A 正确；
B、若过程③为冷却过程，则目的是防止高温破坏酶的空间结构，使酶变性失活，B 正确；
C、但果肉与果皮都是由同一受精卵发育而来，果肉与果皮的DNA 组成相同，过程①与④提取的成分存在
很大差异，主要是因为基因的选择性表达，C 错误；
D、果酒制作需要酵母菌，代谢类型为兼性厌氧型，果醋的制作需要醋酸菌，代谢类型为异养需氧型，因
此两种制作过程的气体环境不同，D 正确。
故选C。
6．L-天冬酰胺酶由细菌和真菌合成，可分解天冬酰胺释放出氨，然后与奈斯勒试剂反应呈棕色。为筛选
获得L-天冬酰胺酶高产菌株，设计了如下固体培养基。固体培养基：主要成分有牛肉膏、蛋白胨、水、
NaCl、琼脂、奈斯勒试剂。实验结果如下图。下列叙述错误的是（ ）
A．根据实验结果可知，接种时采用的是稀释涂布平板法
B．应选择菌落C 作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养
C．该培养基从功能来看属于选择培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏
D．无菌技术还可以避免操作者被有害微生物感染，实验结束后的培养基不能直接丢弃
【答案】C
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法，将已经灭菌的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划
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线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最
后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法，将待分离的菌液经过适合的稀释后，均匀涂布在培养皿表面，
经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、从接种结果来看，菌落分布较为均匀，应该采用的是稀释涂布平板法，A 正确；
B、菌落B 和菌落C 周围棕色圈的直径相同，但C 的菌落直径更小，因此菌落C 的单个细胞产生的L-天冬
酰胺酶更多，应选择菌落C 作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养，B 正确；
C、培养基中加入有奈斯勒试剂，若微生物能产生L-天冬酰胺酶则菌落周围会出现棕色圈，因此该培养基
从功能来看属于鉴别培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏和蛋白胨，C 错误；
D、无菌技术可用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，还可以避免操作者被有害微生物感染，
但实验结束后为避免环境污染，培养基在丢弃前要进行灭菌处理，D 正确。
故选C。
7．利用发酵工程生产蓝莓酒需经过“清洗破碎→酶解→过滤→调整成分→接种→主发酵→倒灌过滤→后
发酵→消毒→终止”等主要环节。下列叙述错误的是（ ）
A．酶解环节需要添加果胶酶和纤维素酶并控制酶解温度
B．调整成分时按比例添加蔗糖可以提高果酒的酒精含量
C．接种前需要对基因工程获得的高产菌株进行扩大培养
D．主发酵和后发酵均需要密闭，且保持温度在35℃左右
【答案】D
【分析】1.植物细胞细胞壁的主要成分是果胶和纤维素，在果浆中添加果胶酶和纤维素酶可以酶解细胞壁，
增加细胞内容物的释放。
2.生产果酒的主要环节是：“清洗破碎→酶解→过滤→调整成分→接种→主发酵→倒灌过滤→后发酵→消
毒→终止”等。
【详解】A、在果浆中添加果胶酶和纤维素酶可以酶解细胞壁，增加细胞内容物的释放，酶的活性受到温
度的影响，所以酶解环节需要控制酶解温度，A 正确；
B、微生物发酵过程中利用蔗糖产生酒精，所以调整成分时按比例添加蔗糖可以提高果酒的酒精含量，B
正确；
C、需要对基因工程获得的高产菌株进行扩大培养，增加基因工程高产菌株的数量，C 正确；
D、在生产过程中，一般利用酵母菌发酵产生酒精，主发酵前的阶段进行通气，使酵母菌进行有氧呼吸，
促进微生物大量繁殖，后发酵阶段需要密闭，促进酵母菌进行无氧呼吸产生酒精，酵母菌的适宜生长温度
是18~30℃，D 错误。
故选D。
8．结核病又叫“痨病”，是由结核杆菌引起的一种慢性传染病，临床上常采用利福平（一种抗生素）进
行治疗，随着药物利福平不断使用，使得结核病患者对利福平的耐药率不断上升给结核病的治疗带来较大
的困难。为了筛选新的抗结核药物，科研人员进行了下图所示的研究。已知罗氏固体培养基中有抑制杂菌
生长的物质，链霉素能作用于结核杆菌的核糖体，通过诱导遗传密码的错读来抑菌。下列说法错误的是
（ ）
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A．图中步骤①与步骤②目的不同，其中步骤①的目的是为了扩大培养结核杆菌
B．图中罗氏固体培养基属于鉴别培养基，可通过观察菌落的形态来初步鉴定目的菌株
C．不同抗生素选择的方向不同，多种抗生素同时联合用药能延缓耐药菌株的出现
D．链霉素可通过抑制结核杆菌翻译过程来抑制蛋白质的合成进而来抑制结核杆菌
【答案】B
【分析】图中①是将细菌接种在基本培养基上，目的是扩大培养目的菌，②是将扩繁后的菌种接种到选择
培养基上，筛选目的菌株，③是挑选菌落，④是对菌落进行观察鉴定。
【详解】A、图中①是将细菌接种在基本培养基上，目的是扩大培养目的菌，②是将扩繁后的菌种接种到
选择培养基上，筛选目的菌株，A 正确；
B、罗氏固体培养基中有抑制杂菌生长的物质，属于选择培养基，B 错误；
C、由于抗生素对细菌定向选择，长期使用单一抗生素会出现抗药性，不同抗生素的选择方向不同，因此
多种抗生素同时或先后联合用药能有效延缓耐药菌株的出现，C 正确；
D、链霉素能作用于结核杆菌的核糖体，诱导遗传密码的错读可导致翻译停止，从而抑制蛋白质的合成，
以达到抑菌的目的，D 正确。
故选B。
9．啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成，发酵工程的主要流程如图所示，其中糖化主要是将麦芽
中的淀粉等有机物水解为小分子。下列关于啤酒发酵的叙述正确的是（ ）
A．破碎有利于淀粉进入酵母菌，提升发酵速率
B．煮沸的目的是去除溶解氧和杀灭杂菌
C．优良菌种无需扩大培养可直接接种到发酵罐中
D．利用真空发酵技术，可提高发酵液中酒精浓度
【答案】B
【分析】啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都
是在主发酵阶段完成。主发酵又称“前发酵”，是啤酒发酵的主要过程，在这个过程中，酵母完成了增殖、
厌氧发酵及其沉淀回收等，消耗了大部分可发酵性糖等成分，排出的发酵代谢产物即啤酒的主要组分。主
发酵一般需要6-8 天，长的达8-10 天。下酒以后，由于嫩啤酒还含有少量的可发酵性糖类，在贮酒罐内会
再次出现一个较为旺盛的发酵过程，这个过程即称为“后发酵”。后发酵是传统发酵方式的一个必然过程，
需要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。
【详解】A、淀粉不能进入酵母菌细胞内，破碎有利于增加淀粉与酶的接触面积，促进糖化过程，A 错误；
B、糖化后期要煮沸冷却，主要是终止酶的进一步作用，同时起到去除溶解氧和杀灭杂菌的作用，B 正确；
7
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C、优良菌种需扩大培养后接种到发酵罐中，这样可以加速发酵过程，C 错误；
D、利用真空发酵技术，不利于提高发酵液中酒精浓度，因为发酵过程中还需要酵母菌进行有氧呼吸满足
增殖的需要，D 错误。
故选B。
10．下列关于生物学实验的叙述，正确的是（ ）
A．采用平板划线法纯化大肠杆菌菌种时，接种环的灼烧次数与划线的次数相等
B．绿叶中色素的提取与分离实验中，增加无水乙醇的用量会使滤纸条上色素带颜色加深
C．将扩增的DNA 片段进行琼脂糖凝胶电泳时，越靠近加样孔的DNA 片段相对分子量越大
D．探究土壤微生物的分解作用时，实验组土壤应进行湿热灭菌以排除微生物的作用
【答案】C
【分析】平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到
培养基表面，其操作步骤是：①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红；②在酒精灯火焰旁冷却接种环，
并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞；③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的；④将冷却的接
种环伸入到菌液中取出一环菌种；⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞；⑥将皿盖打开一条缝隙，把
接种环伸入平板内划3～5 条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基；⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末
端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线，注意不要将第五区的划线与第一
区划线相连；⑧将平板倒置放在培养箱中培养。
【详解】A、采用平板划线法纯化大肠杆菌菌种时，接种环在每次划线前灼烧，最后划线完成也灼烧，故
灼烧次数比划线的次数多一次，A 错误；
B、绿叶中色素的提取与分离实验中，增加无水乙醇的用量会使滤纸条上色素带颜色变浅，B 错误；
C、将扩增的DNA 片段进行琼脂糖凝胶电泳时，分子量小的运动速度快，越靠近加样孔的DNA 片段相对
分子量越大，C 正确。
D、实验组的土壤要进行处理，以尽可能排除土壤微生物的作用，同时要尽可能避免土壤理化性质的改变，
不能用湿热灭菌，可放在60 °C 恒温箱中处理 1 h，D 错误。
故选C。
11．无菌操作在微生物培养、植物组织培养和动物细胞培养中都至关重要。下列叙述正确的是（ ）
A．生物技术实验中所有器皿、培养基及生物材料均需进行灭菌处理
B．酒精能使细胞中的蛋白质变性失活，95%的酒精用来消毒效果最好
C．动物细胞培养基配置时，加入抗生素即可达到无菌培养的目的
D．易分解的活性物质过滤除菌后，在无菌条件下加入灭菌的培养基中
【答案】D
【分析】消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。使用强烈
的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌。常用的方法有灼烧灭菌、干热
灭菌和湿热灭菌。
【详解】A、要对所有培养基和培养皿消毒，但是生物材料要根据实际情况来，比如说植物组织培养，外
植体只能消毒，不能灭菌，不然高温下植物细胞会死亡，A 错误；
B、一般消毒用的是70%的酒精，B 错误；
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C、抗生素只能杀灭细菌和一部分真菌，不能达到无菌的效果，C 错误；
D、易分解的活性物质应该用过滤灭菌，无菌条件下加入无菌培养基，D 正确。
故选D。
12．为了处理污水中的一种有毒的、难以降解的有机化合物A，某研究团队利用化合物A、磷酸盐、镁盐
和微量元素等配制了培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A 的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下
图所示。下列相关叙述中，错误的是（ ）
A．振荡培养的目的是提高培养液的溶氧量，并使目的菌和培养液充分接触
B．若干天后应选择化合物A 含量最低的培养液再接种到新的培养液中连续培养
C．该实验可以选择平板划线法或稀释涂布平板法向固体培养基接种
D．重复多次上述实验后获得的目的菌可直接用于环境保护实践
【答案】D
【分析】题意分析，该实验的目的是筛选出高效降解化合物A 的细菌，在含化合物A 的培养基中，只有能
降解化合物A 的微生物才能以化合物A 为碳源和氮源生长繁殖，不能利用化合物A 的微生物因缺乏碳源和
氮源，无法生长繁殖。
【详解】A、振荡培养的目的是提高培养液的溶氧量及增加目的菌和培养液的充分接触，以达到增大目的
菌数量的目的，A 正确；
B、振荡培养后，应选择目的菌浓度最大，即化合物A 含量最少的锥形瓶进行选择接种，B 正确；
C、向固体培养基进行接种的方法有稀释涂布平板法和平板划线法等，其中稀释涂布平板法还可用于计数，
C 正确；
D、重复多次上述实验获得的目的菌用于环境保护实践之前，还要对目的菌进行研究，检测其是否会产生
对环境有害的代谢废物，大量使用目的菌时会不会使目的菌成为优势菌群，对其他微生物的生存构成威胁，
从而打破微生物菌群的平衡等，D 错误。
故选D。
13．在微生物培养过程中，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。平板划线法和稀释涂布平
板法是常用的获取纯培养物的方法。下列相关叙述错误的是（ ）
A．两种纯化方法的核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度
B．用稀释涂布平板法进行微生物计数时，所得数据往往比实际值偏小
C．获取纯培养物的过程中，应根据微生物的种类调节培养基的pH
D．对10mL 土样样液稀释106倍后，取0.1mL 稀释液涂布，测得的菌落数分别为400、500、600，则
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该10mL 土样中目的菌数为400×1010个
【答案】D
【分析】接种微生物常用的两种方法：（1）平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操
作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（2）稀释涂布平板法则是菌液进行一系列的梯度稀释，
然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
【详解】A、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，因此两种纯化方法的核心都是要防止杂菌污
染，保证培养物的纯度，A 正确；
B、由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用稀释涂布平板法进行微生
物的计数时，所得数据往往比实际数据偏小，B 正确；
C、因为不同的微生物所需的最适pH 条件不同，因此，在获取纯培养物的过程中，应根据微生物的种类调
整培养基的pH，C 正确；
D、用稀释涂布平板法统计微生物的数量时，一般选择菌落数在30~300 的平板进行计数，D 错误。
故选D。
14．野生型大肠杆菌菌株能在基础培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在
完全培养基上生长，如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、
C 表示操作步骤，D、E 为菌落。下列叙述正确的是（ ）
A．图中①②③为完全培养基，培养基一般用湿热灭菌法进行灭菌
B．A 操作的目的是提高大肠杆菌基因突变的概率，增加突变株的数量
C．B 的正确操作是用接种环蘸取菌液后在②表面涂布来接种菌种
D．在C 过程原位影印时，用同一块无菌绒布先影印④，再影印③号培养基，可从④中挑取 D 进行纯
化培养。
【答案】B
【分析】由图分析可知，图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用将菌种接种到两种培养基中，
分别是基本培养基、完全培养基；在基本培养基中，某氨基酸突变株不能生长，而在完全培养基中能够生
长，据此可以选择出氨基酸突变株。
【详解】A、结合题图信息分析可知，野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷型
菌株由于发生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，且③中只有部分菌落，故图中
①②④为完全培养基，③为基本培养基，A 错误；
B、紫外线可以提高突变的频率，而A 操作即培养的目的是提高已经突变菌株的浓度（A 操作不能提高突
变率），即增加突变株的数量，B 正确；
C、B 操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C 错误；
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D、由图观察可知，D 在基本培养基中无法生长，而在完全培养基上能够生长，据此推测D 是氨基酸营养
缺陷型菌株，若先影印④，由于④为完全培养基，会导致绒布上含有④的成分，用同一块无菌绒布无法起
到筛选作用，D 错误。
故选B。
15．关于实验室培养和纯化纤维素分解菌过程中的部分操作，下列说法正确的是（ ）
A．为了防止杂菌污染应将采集的土样进行高压蒸汽灭菌
B．倒平板时将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，防止杂菌污染
C．纯化培养时，对培养皿皿盖做标记，培养皿应正放于恒温培养箱内进行培养
D．获取纯培养物的过程中，应根据微生物的种类调整培养基的pH
【答案】B
【分析】倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手
拔出棉塞；右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝
隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；等待平板冷却凝固后，将平板倒
过来放置，使皿盖在下、皿底在上，这样可以防止皿盖上的水分滴到培养基上造成培养基的污染。
【详解】A、为了防止杂菌污染应将用于采集的器具进行灭菌，土样不能进行灭菌，灭菌后的土样中微生
物均被杀死，无法获得目的菌落，A 错误；
B、倒平板时需要将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，这样可防止杂菌污染，B 正确；
C、纯化培养时，培养皿是倒置培养的，所以对培养皿皿底做标记，C 错误；
D、培养细菌时需将pH 调至中性或微碱性，纤维素分解菌属于细菌，则在获取纯培养物时，需要将培养基
的pH 调至中性或微碱性，D 错误。
故选B。
二、多选题
16．某兴趣小组同学为检验猪肉是否感染金黄色葡萄球菌（SA，具有嗜盐性），进行了如下实验：称取
25 g 猪肉样品置于含一定量7.5%氯化钠的肉汤中，处理后转移到无菌均质器（能将样本与溶液或溶剂混
匀）内，用10 000 r/min 均质1~2m in，吸取25g 均质后的样品至盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形
瓶中，振荡培养后，取样接种到血琼脂平板上，过程如图所示。已知微生物实验室常用的生理盐水的浓度
为0.85%；金黄色葡萄球菌在血平板上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下列相关叙述错误
的是（ ）
A．振荡培养可提高培养液中的氧气含量，有利于菌体的繁殖
B．振荡培养时所用的 7.5%NaCl 肉汤培养基属于鉴别培养基
C．从图示来看，将样品接种到血琼脂平板上的方法是稀释涂布平板法
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D．若血平板中菌落周围出现透明的溶血圈，则可初步说明猪肉感染了 SA
【答案】BC
【分析】微生物常见的接种的方法
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开
始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个
菌落。
【详解】A、振荡培养可提高培养液中氧气的含量并使微生物与培养液充分接触，从而有利于菌体的繁殖，
A 正确；
B、质量分数为7.5%NaCl 肉汤可以筛选出耐盐的微生物，属于选择培养基，B 错误；
C、从图示来看，将样品接种到血琼脂平板上的方法是平板划线法，C 错误；
D、金黄色葡萄球菌可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，从而出现透明的溶血圈，D 正确。
故选BC。
17．下图是研究人员从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌（目的菌）流程图。下列叙述正确的是
（ ）
A．培养皿等用具在使用前后均需在160℃~170℃热空气中消毒
B．应选择②中培养瓶内“石油含量”显著降低的培养液继续③操作
C．④中可采用平板划线法对筛选得到的目的菌进行分离纯化
D．若要研究目的菌生长规律，可用培养液培养目的菌并用细菌计数板计数
【答案】BCD
【分析】为了从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌，在以石油为唯一碳源和氮源的培养基中，只
有能降解石油的目的菌才能生长繁殖，而其它不能利用石油为碳源和氮源的一般就不能生长和繁殖，因此
可以通过该种选择培养基筛选目的菌。
【详解】A、培养皿等用具在使用前后均需在160℃~170℃湿热灭菌箱中灭菌，A 错误；
B、培养瓶内“石油含量”显著降低说明培养液中的菌降解石油能力强，因此选择该培养瓶中的培养液继
续③操作，B 正确；
C、分离纯化目的菌的方法可以是平板划线法，也可以是稀释涂布平板法，C 正确；
D、用培养液培养目的菌并用细菌计数板计数可以研究目的菌生长规律，D 正确。
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故选BCD。
18．泡菜的出现可谓历史悠久，它在古代称为菹，据汉许慎《说文解字》解释“菹菜者，酸菜也”。下列
关于泡菜的叙述错误的是（ ）
A．制作泡菜应选用新鲜蔬菜的原因是其含亚硝酸盐含量低
B．发酵坛表面可能出现一层由乳酸菌繁殖形成的白膜
C．随着泡菜发酵的进行，泡菜中亚硝酸盐含量持续下降
D．若制作的泡菜“咸而不酸”，可能与发酵温度高有关
【答案】BCD
【分析】1.泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌，代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬
菜中的葡萄糖氧化为乳酸；
2.泡菜的制作流程是：选择原料、配置盐水、调味装坛、密封发酵。
【详解】A、由于新鲜蔬菜亚硝酸盐含量低，因此制作泡菜应选用新鲜蔬菜，A 正确；
B、在泡菜制作过程中，泡菜发酵液的营养丰富，其表面往往含有适量的氧气，适合酵母菌生长繁殖，产
膜酵母生长繁殖会在泡菜坛液面形成一层白膜，B 错误；
C、随着泡菜发酵的进行，泡菜中亚硝酸盐的含量先上升，后下降，C 错误；
D、若制作的泡菜“咸而不酸”，可能与食盐浓度过高、发酵温度过低有关，D 错误。
故选BCD。
19．2022 年3 月15 日晚，央视3·15 晚会曝光不良企业采购“土坑酸菜”冒充老坛酸菜，而且卫生质量低
劣，备受人们关注。其实泡菜的制作对工艺流程要求非常高，如图为某食品公司安检人员所记录的检测结
果，下列相关叙述正确的是（ ）
A．泡菜制作过程中，pH 呈下降趋势，是酵母菌无氧呼吸所致
B．据图可知食盐浓度和腌制时间均会影响亚硝酸盐的含量变化
C．亚硝酸盐的含量达到峰值后会逐渐降低，可能与乳酸菌产生的亚硝酸还原酶量增多有关
D．泡菜制作过程中泡菜坛内出现的白膜由乳酸菌大量繁殖形成
【答案】BC
【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌发酵产生乳酸，使得菜具有特殊的风味，乳酸菌是厌氧菌，分
解有机物是不需要氧气的，因此泡菜坛要加盖并用一圈水来封口，以避免外界空气的进入，否则如果有空
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气进入，就会抑制乳酸菌的活动，影响泡菜的质量。
【详解】A、泡菜制作的原理是乳酸菌的无氧呼吸，无氧呼吸过程中产生了乳酸(即发酵的第二阶段)，导致
pH 呈下降趋势，A 错误；
BC、据图可知，食盐浓度和腌制时间均会影响亚硝酸盐的含量变化，亚硝酸盐含量达到峰值后下降，是因
为缺氧和酸性环境抑制杂菌生长，使亚硝酸盐的产生量降低，同时乳酸菌产生亚硝酸还原酶会将亚硝酸盐
分解，BC 正确；
D、泡菜制作过程中泡菜坛内出现的白膜由酵母菌大量繁殖形成，D 错误。
故选BC。
20．为对某样品中噬菌体计数，工作人员将0．1mL 稀释106倍的噬菌体样品与敏感细菌混合后平铺在平板
上培养一段时间，长满细菌的平板因部分细菌被噬菌体裂解而形成圆形透明斑，即噬菌斑（1 个噬菌斑为1
个pfu），噬菌体效价可用每毫升样品中含有的pfu 数表示。下列叙述正确的是（ ）
A．透明的平板培养一段时间后变为不透明状态，是由细菌大量繁殖造成的
B．噬菌体样品应有足够的稀释度，以保证初期一个细菌最多被一个噬菌体吸附
C．若有少数活噬菌体未能侵染细菌，噬菌斑计数结果比样品中实际活噬菌体数偏低
D．若平均每个平板的噬菌斑数量为200，则该样品的噬菌体效价为2×108pfu/ml
【答案】ABC
【分析】病毒：个体微小、结构简单、由一种核酸(DNA 或RNA)和蛋白质组成，必须在活细胞内寄生并以
复制方式增殖的非细胞结构生物。噬菌体侵染细菌后，在细菌体内繁殖，最终造成细菌裂解，则在长满细
菌的平板上形成圆形透明斑。
【详解】A、噬菌体在细菌细胞中，没有裂解细菌，细菌繁殖导致透明的平板培养一段时间后变为不透明
状态，A 正确；
B、噬菌体样品应有足够的稀释度，以保证初期一个细菌最多被一个噬菌体吸附，如果稀释度不够，会出
现两个或多个噬菌体吸附同一个细菌，从而导致噬菌斑数量减少，噬菌斑计数结果比样品中实际活噬菌体
数偏低，B 正确；
C、若有少数活噬菌体未能侵染细菌，会导致形成噬菌斑数量减少，从而导致噬菌斑计数结果比样品中实
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际活噬菌体数偏低，C 正确；
D、若平均每个平板的噬菌斑数量为200，则该样品的噬菌体效价为：200÷0.1×106=2×109pfu/mL，D 错误。
故选ABC。
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