文档内容
专题九 生物技术与工程
【题型1 发酵工程】
【题型2 细胞工程】
【题型3 PCR技术与应用】
【题型4 基因工程】
【题型1 发酵工程】
【紧扣教材】
1.泡菜、果酒、果醋制作的比较
项目 泡菜 果酒 果醋
所用菌种 乳酸菌 酵母菌 醋酸菌
制作原理 C H O →2C HO （乳酸）+能 C H O →2C HOH＋2CO 糖源充足时：
6 12 6 3 6 3 6 12 6 2 5 2
量
C H O+2O →2CHCOOH
6 12 6 2 3
＋2CO＋2HO+能量
2 2
糖源不足时：
C HOH+O →CHCOOH＋
2 5 2 3
HO+能量
2
条 O 无氧 前期有氧，后期无氧 有氧
2
件
温度 室温 18—30℃ 30—35℃
控
制 时间 根据室温控制发酵时间，一般 10—12d 7—8d
15d左右
其 他 控制盐与水的比例 —— ——
条件
操作提示 泡菜坛的选择，腌制的条件 材料的选择与处理；防止发酵液被污染；控制好发酵条
件；正确使用发酵装置
2.微生物的纯培养与计数
微生物的纯培养 制备培养基→灭菌→接种→分离→培养
微生物的技 稀释涂布平板法 计数原理通过计数培养基上的菌落数来计算活菌数量，在操作上相对
术 （间接计数） 复杂，比实际值偏小
显微镜直接计数 计数原理利用血细胞计数板在显微镜下计算一定容积的样品中的微生
法（直接接计 物数量，这种方法计数既有活菌，又有死菌，比实际值偏大，但其操
数） 作简单，计算方便注意：发酵工程的题主要考查工艺流程，所以对发酵的步骤以及目的要熟悉。另外在微生物的纯培养上要
把握防止杂菌污染这个大的方向。
【题型突破】
【例1】阳江黑豆豉是以优质黑豆为原料而制作出的发酵食品。黑豆中的蛋白质、脂肪等经毛霉、曲霉发
酵分解到一定程度时，通过加盐、加酒、干燥等方法可制成豆豉。下列叙述错误的是（ ）
A．毛霉、曲霉中的蛋白酶可将黑豆中的蛋白质分解为小分子多肽和氨基酸
B．制作阳江黑豆豉的过程中需要进行严格的消毒、灭菌处理
C．加盐、加酒、干燥可抑制蛋白酶的活性，防止发酵过度
D．分析发酵过程中微生物的种类、数量变化有助于改良黑豆豉的风味
【变式1-1】啤酒发酵流程一般都包含发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒、终止等。下列有关
叙述错误的是（ ）
A．焙烤过程通过加热杀死种子的胚细胞，从而使淀粉酶失活
B．酵母菌繁殖及大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成
C．发酵的温度和发酵的时间随啤酒品种和口味的要求不同而有所差异
D．蒸煮过程中高温使淀粉酶失活，可以终止淀粉酶的进一步作用，并对糖浆灭菌
【变式1-2】微生物的发酵可以为人类提供丰富的食品和食品添加剂，促进了丰富多彩的饮食文化的形成。
下列相关叙述正确的是（ ）
A．从自然界中筛选、通过诱变育种等获得优良菌种是发酵工程的中心环节
B．发酵罐中微生物的生长繁殖速度、代谢物的形成速度都与搅拌速度有关
C．通过发酵工程生产的苏云金杆菌可以制成微生物农药，这属于化学防治手段
D．利用谷氨酸棒状杆菌生产味精时，需采用过滤等方法将菌体分离、干燥以获得产品
【变式1-3】柠檬酸具有令人愉悦的酸味，入口爽快，安全无毒，被广泛用于食品和饮料中。利用发酵工
程技术制备柠檬酸的流程如图所示，下列相关叙述正确的是（ ）
A．柠檬酸属于次生代谢物，过程①②的目的均为扩大培养
B．发酵罐内的发酵是工厂化生产柠檬酸的中心环节
C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌是发酵工程生产中一个很重要的环节D．发酵结束后，采取适当的过滤、沉淀措施可获得柠檬酸
【题型2 细胞工程】
【紧扣教材】
1.植物细胞工程相关技术比较
原理 特别注意
植物组织培养 植物细胞的全能性 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分
化的关键激素。它们的浓度、比例等都会影响植物细
胞的发育方向（高根低芽中愈伤）
植物体细胞杂交技术 细胞膜的流动性和植物 植物体细胞杂交中原生质体融合成功的标志是形成新
细胞的全能性 的细胞壁；杂交完成的标志是形成新的植株
快速繁殖 植物细胞的全能性 快速繁殖
作物脱毒 植物细胞的全能性 外植体选用的是植物顶端分生区附近
单倍体育种 染色体变异和植物细胞 单倍体育种可获得纯合子，后代不发生性状分离，能
的全能性 稳定遗传
突变体利用 基因突变和植物细胞的 需要在愈伤组织时进行处理
全能性
植物细胞培养 细胞增殖 需要获得次生代谢产物
2.植物体细胞杂交和动物细胞融合技术对比
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性
细胞融合成功的标志 再生出新的细胞壁 细胞核的融合
电融合法、PEG融合法、
电融合法、离心法、聚乙二醇融合法、
诱导方法
高Ca2+—高pH融合法
灭活病毒诱导法
结果 形成杂种植株 形成新的动物细胞
突破有性杂交的局限，使远缘
意义 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种
杂交成为可能
3.试管动物、转基因动物、克隆动物的比较
名称 不同点 相同点
生物技术 遗传物质 遗传性状 生殖方式
试管动物 体外受精 A、B 的核基 双亲性状 有性生殖 动物细胞培养
因，B 的质基 技术、胚胎移
因 植技术
转基因动物 DNA重组技术 目的基因、双 目的性状、双 有性生殖亲性状 亲性状
克隆动物 转移植技术 A 的核基因、 几乎完全表现 无性生殖
B的质基因 A的性状
4.胚胎移植的生理学基础
生理学基础 意义
同种动物的供、受体排卵后生殖器官的生理 为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境
变化是相同的
早期胚胎形成后,在一定时间内不会与供体 为胚胎的收集提供了可能
子宫建立组织上的联系,而是处于游离状态
受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免 为胚胎在受体内的存活提供了可能
疫排斥反应
供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组 为移植后胚胎继续发育提供了营养等方面
织联系,但其遗传特性不受任何影响 的保障,同时不影响其遗传特性
注意：
1. 植物细胞工程要熟记植物组织培养，这是植物细胞工程的基本技术，对其他的技术要能分清原理是什
么，以及具体的流程。
2. 动物细胞工程常考的为单克隆抗体，对动物细胞融合的相关知识点要牢记，特别是筛选单克隆抗体的
方法。
3. 胚胎工程特别注意胚胎移植，在此过程中对供体和受体的处理要区分清楚。
4. 早起胚胎发育的阶段及每个阶段的状态和特征要熟记。
【题型突破】
【例2】用SIX1基因缺陷的猪胎儿成纤维细胞和猪去核卵母细胞构建重构胚，敲除SALL1基因后形成早
期胚胎，其中一组注入人源干细胞，再植入代孕母猪，最后可得到肾脏缺陷或人源肾脏嵌合胚胎，操作过
程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．图中猪的去核卵细胞不能用去核体细胞替代B．人源肾脏嵌合胚胎中肾脏的遗传物质完全来自人源干细胞
C．SIX1基因和SALL1基因与肾脏的形成有关
D．该项研究有助于解决肾脏移植中的器官短缺及自身排斥反应问题
【变式2-1】科学家将人参和胡萝卜细胞的原生质体融合，经培养获得8个杂种愈伤组织，检测发现这8个
杂种愈伤组织均含有人参皂苷（一种次生代谢物），其中大多数人参皂苷含量明显高于人参愈伤组织。蛋
白质电泳检测中发现一条只在8个杂种愈伤组织中出现的特异条带。下列叙述正确的是（ ）
A．人参皂苷是杂种愈伤组织细胞分裂和分化所必需的重要物质
B．可使用PEG融合法和灭活病毒诱导法促进两种原生质体融合
C．愈伤组织形成杂种植株过程中需要调整相关激素的比例和浓度
D．特异蛋白质条带的出现说明在杂种愈伤组织中发生了基因突变
【变式2-2】北大医学团队通过单细胞基因组测序，在单个细胞的水平上检测细胞之间的异质性，大幅增
加了试管婴儿成功率。从刚刚受精的卵细胞周围抽取两个被废弃的极体，通过对两个极体进行基因组测序，
就能推算卵细胞是否异常。不考虑基因突变，下列叙述错误的是（ ）
A．卵细胞的基因组成与第一极体不同，与第二极体相同
B．第一极体含有46个核DNA，第二极体含有23个核DNA
C．相比抽取胚胎细胞进行测序，对极体测序能降低胚胎受损的风险
D．单细胞基因组测序还可用于了解细胞是否发生癌变
【变式2-3】一种能实现“线粒体置换”目的的技术原理如图所示，该技术可预防人类线粒体遗传病传给
子代。下列叙述错误的是（ ）
A．患者第一极体基本不携带线粒体遗传病的致病基因
B．重组次级卵母细胞膜外极体的遗传物质与患者相同
C．可将受精卵培养至囊胚期时移植到患者的子宫中
D．精子体外获能处理后才能与重组次级卵母细胞受精【题型3 PCR技术与应用】
【紧扣教材】
利用PCR(聚合酶链式反应)获取和扩增目的基因
1.原理:DNA半保留复制。
2.前提:要已知目的基因的一段核苷酸序列,以便根据这段序列合成引物。
3.基本条件
模板 DNA母链
原料 4种脱氧核苷酸
酶 耐高温的DNA聚合酶
引物 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸
注：
①引物的作用:使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸。
②真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活。因此,PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2+。
特别提醒 引物的设计
①如果目的基因两端没有需要的限制酶的切点,则需要在引物的5'端加上限制酶识别位点。
②引物设计时要避免两种引物碱基互补配对和自身折叠。
③引物设计时要避免特异性不强(即引物可与模板链多处进行碱基互补配对),引物越短,特异性越差。
4. 过程： 变性→复性→延伸
5. DNA片段的扩增及电泳鉴定
①实验原理
(1)DNA片段的扩增:PCR利用了DNA的热变性原理,通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。
(2)DNA片段的电泳鉴定
a①带电粒子:DNA分子具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团可以带上正电荷或负电荷。
b②迁移动力与方向:在电场的作用下,带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动,这个过程就是电泳。
c③迁移速率:在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。
d④检测:凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。
6.PCR中的数量关系汇总
复制次数 1 2 3 n
DNA分子数 2 4 8 2n
含引物的DNA分子数 2 4 8 2n
含某种特定引物的DNA分子数 1=21-1 3=22-1 7=23-1 2n-1
同时含两种引物的DNA分子数 0=21-2 2=22-2 6=23-2 2n-2
共消耗引物的对数 1=21-1 3=22-1 7=23-1 2n-1
脱氧核苷酸链等长的DNA分子数 0=21-2 0=22-4 2=23-6 2n-2n【题型突破】
【例3】PCR技术的每轮循环可以分为变性、复性、延伸三步。引物与其模板链形成的杂合分子的解链温
度称为引物的Tm值。下列叙述正确的是（ ）
A．引物与模板链的结合属于延伸过程
B．变性过程的温度一般要低于复性过程
C．复性过程的温度应设置为略低于Tm值
D．引物的 Tm 值越接近,引物之间越容易结合
【变式3-1】具核梭杆菌（Fn）侵入肠黏膜后可导致结直肠癌。图为荧光标记滚环扩增法检测Fn的 过 程
，nusG 基因为Fn 的特异性基因序列，只有当环境中存在该基因序列时，过程②中 锁式探针才能环化；
检测探针的荧光基团（FAM）距离淬灭基团（BHQ-1）比较近时，荧 光会被淬灭。图中④为滚环扩增技
术（RCA）， 此过程中以环化的锁式探针为模板，以nusG 基因单链为相关引物，通过类似于PCR 的过
程，获得了长重复单链DNA．下列叙述错误的是（ ）
A．与常规PCR相比RCA缺乏变性步骤，推测所用DNA聚合酶可能不具有耐高温的特性
B．由图推测，应根据nusG 基因的序列设计锁式探针两端的检测臂
C．若检测样品存在Fn， 检测探针的FAM与BHQ-1距离增大，荧光基团发出荧光
D．利用荧光标记滚环扩增法检测肠黏膜中的Fn时需获取大量样品
【变式3-2】某科研小组采用PCR 技术构建了红色荧光蛋白基因(dsred2)和α-淀粉酶基因(amy)的dsred2-
amy融合基因，其过程如图所示，其中引物②和引物③中部分序列(黑色区域)可互补配对。下列说法错误
的是（ ）A．利用PCR 技术扩增基因时不需要解旋酶来打开 DNA 双链
B．不能在同一反应体系中进行dsred2 基因和amy基因的扩增
C．dsred2基因和amy 基因混合后只能得到一种类型的杂交链
D．杂交链延伸得到 dsred2-amy融合基因的过程不需要加引物
【变式3-3】油菜的绿叶对黄化叶为显性。与绿叶基因相比，黄化叶基因有一个碱基对发生了改变，从而
出现一个限制酶B的酶切位点。为鉴定某绿叶油菜的基因型，提取其DNA进行了PCR和电泳。下列叙述
正确的是（ ）
A．需设计能与目的基因结合的双链DNA作为PCR引物
B．应在PCR扩增体系中添加Mg2＋，以激活DNA聚合酶
C．可适当降低复性的温度，以减少PCR中非特异性条带的产生
D．用酶B作用后进行电泳，若有2条电泳条带可判断为杂合子
【题型4 基因工程】
【紧扣教材】
1.目的基因的筛选与获取
(1)人工合成目的基因。
(2)利用PCR获取和扩增目的基因。
(3)通过构建基因文库来获取目的基因。
2.基因表达载体的构建—— 基因工程的核心
（1）目的
①使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且遗传给下一代。
②使目的基因能够表达和发挥作用。
（2）组成3.将目的基因导入受体细胞
种类项目
植物细胞 动物细胞 微生物细胞
常用方法 农杆菌转化法；花粉管通道法 显微注射法 Ca2＋处理法
受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞
目的基因表达载体提纯 Ca2＋处理细胞→感受态
目的基因插入 Ti 质粒的 T-
→取受精卵→显微注射 细胞→表达载体与感受
转化过程 DNA上→导入植物细胞→整合
→受精卵发育→获得具 态细胞混合→感受态细
到受体细胞DNA中→表达
有新性状的动物 胞吸DNA分子
4.将目的基因的检测与鉴定
①检测受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因。
②检测目的基因是否转录出了mRNA。
③抗原—抗体杂交技术:检测目的基因是否翻译成蛋白质。
④个体生物学水平的鉴定:抗虫、抗病接种实验等。
注意：基因工程最重要的是要学会基因表达载体的构建，如何选择合适的酶切位点是重点。学会用双酶切，
以及使用双酶切是为了防止自身环化和反相连。
【题型突破】
【例4】野生大豆的SAMS基因具有提高抗逆性的作用。水稻是一种盐敏感型作物，为提高水稻的抗盐碱
胁迫能力，研究者将野生大豆的SAMS基因转入水稻细胞内，从而培养出转基因水稻株系，具体过程如图。
下列说法错误的是（ ）A．图示过程中发生了两次转化
B．Ⅰ和Ⅲ都需使用固体培养基
C．Ⅰ中的筛选可使用PCR技术
D．获得的转基因水稻苗都具备抗盐碱能力
【变式4-1】将具有抗肿瘤作用的细胞因子IFNγ基因连接到Egr-1基因启动子上后，利用Egr-1基因启动子
的放射诱导性，在X射线等电离辐射诱导下，启动Egr-1基因启动子，进而诱导与其连接的IFNγ基因表达。
这样在肿瘤部位可以通过射线和IFNγ的双重作用杀伤肿瘤细胞。图示为重组质粒的构建过程，下列叙述
正确的是（ ）
A．重组质粒上的Egr-1基因启动子可以被肿瘤细胞核糖体识别
B．通过PCR扩增cDNA进行30轮时，共需要消耗的引物数量为230个
C．将外源IFNγ基因送入到肿瘤细胞的载体还可以是动物的病毒
D．T4DNA连接酶能连接质粒和IFNγ基因双链之间的氢键和磷酸二酯键
【变式4-2】实验结果产物能成功检出用阳性（+）表示，无法检出用阴性（一）表示。假阳性是指检查结
果是阳性，但实际是阴性；假阴性则与之相反。某流感患者进行甲型病毒检测，下列可导致假阳性结果的
是（ ）
A．抗原检测—单克隆抗体保存温度过高
B．抗体检测—患者半年内接种过甲流疫苗
C．核酸检测—PCR扩增时变性温度设置过低
D．核酸检测—病毒发生变异与RCR引物不匹配【变式4-3】科学家常利用λ-Red同源重组酶系统进行基因敲除。图为科学家运用A-Red同源重组酶系统到
大肠杆菌（E．coli）内进行靶基因敲除的过程，其中重组质粒pKD46在30℃时正常复制，而37℃时自动
丢失。下列说法正确的是（ ）
A．HA1和HA2分别添加在两种引物的5'和3'端
B．过程I和Ⅱ的培养温度分别是30℃、37℃
C．靶基因敲除过程，只发生磷酸二酯键的断裂及合成
D．若过程I是使用含青霉素的培养基成功筛选出含质粒pKD46的大肠杆菌，则说明该大肠杆菌自身含有
青霉素抗性基因
1．传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，最终陈酿
而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统的监测和
控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（ ）
A．醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸
B．与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵
C．醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵
D．在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味
2．蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬
菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧
菌。下列叙述错误的是（ ）
A．可用干热灭菌法对平板进行灭菌B．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌
C．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果
D．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源
3．酒酿是一种传统发酵食品，香甜醇美，其制作流程为：糯米洗净→蒸熟→冷却至30℃→与酒曲（含根
霉、酵母菌等微生物）混匀→24℃～28℃发酵2天（包括糖化和酒化）→保存。下列叙述错误的是（
）
A．混匀使微生物与糯米充分接触
B．糖化过程主要依赖于根霉分泌的酶
C．发酵时应加盖密封以利于酒化
D．常温保存使酒酿保持甜味浓郁
4．柑橘是江西省的重要经济水果，但在贮藏和运输过程中，由真菌引起的采后病害严重危害柑橘产业。
青绿霉病是最常见的病害，从柑橘果皮中筛选出拮抗细菌是有效的防治手段。拮抗细菌的筛选过程如下，
下列说法正确的是（ ）
A．样本采集时需对果皮表面进行消毒，然后将果皮样本加到清水中洗脱细菌
B．图示细菌分离使用的技术为稀释涂布平板法，该方法还可用于细菌计数但结果偏大
C．初步筛选时将细菌和青绿霉真菌共培养，测量真菌生长直径，图中a抑制效果更好
D．为进一步评估拮抗菌的效果，可以测定其培养滤液对真菌生长和繁殖的抑制效果
5．生物碱为铁皮石斛的次级代谢产物。下图是以铁皮石斛为材料，培养拟原球茎(简称PLBs, 类似愈伤组
织)生产生物碱的实验流程。下列说法正确的是（ ）
A．生物碱是铁皮石斛生长所必需的物质
B．图中过程①为脱分化形成PLBs, 过程②为再分化生产生物碱
C．培养高产细胞系应选择细胞数量/生物碱产量值大的PLBs
D．该过程运用了植物细胞培养技术，原理是植物细胞增殖
6．2024年2月25日，世界首例体细胞克隆顶级种用藏羊“青青”在青海省诞生。研究人员采集种羊耳缘组织培养成耳纤维细胞作为核供体细胞，通过体细胞核移植获得种羊克隆胚胎。下列相关叙述正确的是（
）
A．使用无菌的胰蛋白酶消化耳缘组织间的胶原纤维
B．培养耳纤维细胞时使用CO 培养箱维持中性偏酸环境
2
C．配制一系列不同成分的培养液进行全体外胚胎培养
D．重组细胞会依次经历囊胚、桑椹胚、原肠胚等发育阶段
7．动物基因转移技术中，通过向囊胚腔注射被外源基因转化了的胚胎干细胞，使得发育成的个体中含有
不同基因型的细胞，产生的个体叫嵌合体，其过程如图所示。下列分析正确的是（ ）
A．直接将特定蛋白导入细胞中不能诱导形成iPS细胞
B．采集的精子可在离心处理获能后与培养成熟的卵子受精
C．若需要鉴定囊胚的性染色体组成，常取样内细胞团细胞进行鉴定
D．进行胚胎移植前，需要对代孕母鼠注射免疫抑制剂
8．诱导多能干细胞（iPSC）可分化成类似间充质干细胞（iMSC）。iMSC能合成和分泌Ⅴ蛋白，用于治
疗骨关节炎等疾病。下列叙述错误的是（ ）
A．可用病毒作为载体将某些基因转入小鼠成纤维细胞以诱导产生iPSC
B．iPSC在适宜条件下培养，需添加特定的物质才能使其转化为iMSC
C．利用96孔板筛选转化成功的iMSC，需稀释至每孔至多1个细胞，并添加V蛋白
D．iMSC培养液需定期更换，并维持适宜温度、PH、渗透压和气体环境等条件
9．已知紫外线（UV）可诱导DNA单链上相邻的T之间相互结合形成嘧啶二聚体，阻碍碱基正常配对而
导致复制错误引起突变，DNA修复机制对维持遗传稳定性至关重要。研究人员发现某细菌中存在两种如图
所示修复机制：①光复活修复：光复活酶（PRE）在可见光下直接切割二聚体，恢复原结构；②暗修复：
无需光照，通过切除损伤单链并重新合成。下列说法正确的是（ ）A．PRE可将嘧啶二聚体的磷酸二酯键断开
B．暗修复过程中还需消耗原料、能量和引物
C．PRE基因发生碱基替换后，在光照下PRE的修复功能可能正常
D．UV诱导DNA形成嘧啶二聚体引起的变异不可遗传
10．由于花椰菜杂种优势在提高花椰菜产量方面发挥着巨大的作用，而利用细胞质雄性不育系生产杂交种
子，可以简化制种程序。利用原生质体非对称融合技术比较容易实现胞质雄性不育基因的转移，某研究利
用该技术成功获得了含有胞质雄性不育基因的花椰菜植株，制作流程如下，下列说法错误的是（
）
注：UV处理可以随机破坏染色体结构，使其发生断裂、丢失等，使细胞不再分裂
A．原生质体非对称融合技术使得杂种植株性状更接近于供体植株
B．②过程的原理是细胞膜具有一定的流动性，常用PEG融合法C．培养一段时间后可通过观察叶绿体初步判断是否为异源原生质体
D．为鉴定再生植株成功获得细胞质雄性不育基因，可利用PCR进行鉴定
11．科研人员利用TALEN基因编辑技术构建RPE65基因编辑的家犬，建立RPE65基因突变动物模型，
TALEN编辑体系主要由特异性的DNA识别域和非特异性的FokI内切核酸酶构成，DNA识别域由多个
TALE蛋白连接而成。该系统能对DNA靶序列进行剪切，造成DNA双链断裂，诱导DNA产生修复，从而
达到对基因序列进行改造的目的。下列说法错误的是（ ）
A．TALE能识别DNA特异位点，发挥靶向作用
B．FokI内切核酸酶作用于DNA的磷酸二酯键
C．可用显微注射的方式将目的基因导入家犬的受精卵
D．受精卵通过有丝分裂形成体积增大的桑葚胚
12．Hv-Lv肽链是抗体与抗原识别并结合的关键结构。为筛选特异性高、结合能力强的Hv-Lv肽链，将编
码Hv-Lv肽链的DNA片段与丝状噬菌体固有外壳蛋白pⅧ的基因连接并一起表达，最后用固定化抗原筛
选（过程如图）。
下列说法错误的是（ ）
A．Hv-LvDNA片段上游需要设计并连接启动子
B．Hv-LvDNA片段上无需连接标记基因
C．目标是获得能耐受多次冲洗的噬菌体
D．实验过程须严格遵循生物防护措施
13．为解决猪肉中多不饱和脂肪酸（PUFAs）含量不足的问题，研究人员获取了控制PUFAs合成的两个必
需酶基因fat2和fat1，并构建pCAG-fat1-fat2融合表达质粒（如图所示），该质粒全长15300 bp（碱基对），
CMV启动子启动EGFP基因表达绿色荧光蛋白，CAG启动子启动融合基因fatl-fat2的表达，AflⅡ和DraⅢ
为两种限制酶的酶切位点。科研人员将构建好的质粒导入猪胎儿成纤维细胞，并最终获得转fatl-fat2融合
基因的转基因猪。请回答下列问题：(1)启动子是 识别和结合的部位，其作用是 。图中的EGFP起到了 的作用，便于重组
DNA分子的筛选。
(2)用DraⅢ酶切如图所示质粒时，可断裂 个磷酸二酯键，且酶切产物是 bp和1700 bp两个片
段。
(3)科研人员通过 法将构建好的质粒导入猪胎儿成纤维细胞，可通过 等技术检测目的基因是否
进入受体细胞，该技术的原理是 。
(4)将含目的基因的猪胎儿成纤维细胞的细胞核移入 中，通过 法使两细胞融合形成重构胚，并
用特定方法激活重构胚，使其发育为转基因猪，该技术属于 （填“有性”或“无性”）繁殖技术。
14．我国科研人员利用多种现代生物技术，在猪的体内培育出了一个“人-猪嵌合中期肾”，且维持到胚胎
第28天（实验过程如图1所示），该研究实现了世界首例人源化肾脏异种再生的壮举。回答下列问题。
(1)据图1分析，在“人源化中肾”的培养过程中，运用了 等动物细胞工程的技术（答出3点即
可）。
(2)过程②常用的去核方法为 ，所谓的“核”实际上是 。过程③中，获得单细胞悬液时，猪
胚胎剪碎后需用 处理。
(3)过程④运用基因编辑技术（见图2，Cas9蛋白在向导RNA引导下，切割目标DNA双链）敲除成纤维细
胞中的猪肾发育的关键基因SIX1，可以为后续人iPS细胞的生长和分化提供更合适的生存环境。下列对于
该过程的分析，正确的有 。
A．Cas9蛋白由相关基因指导在核糖体上合成，向导RNA可在逆转录酶催化下合成
B．Cas9蛋白识别并切割SIX1基因特定位点的磷酸二酯键，其作用方式与限制酶相同
C．向导RNA的部分序列是根据SIX1基因设计的，其双链区遵循碱基互补配对原则
D．敲除SIX1基因的猪胚胎可避免猪细胞与人iPS细胞竞争肾脏发育的环境(4)过程⑧中，选用iPS细胞作为肾脏供体细胞的原因是 。在早期胚胎阶段，猪胚胎的细胞尚未完
全分化成各种类型的细胞和组织，细胞之间的连接较松散，这使得导入的人iPS细胞较容易在猪胚胎中整
合，胚胎的可塑性也较强，据此判断在构建嵌合胚胎过程中，可在猪胚胎发育至 （填“桑葚胚”
或“囊胚”）期注射人源供体细胞。合适的培养基是提高iPS细胞嵌合能力的关键，下列有关叙述错误的
是 。
A．培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等营养物质
B．为保证体外培养细胞处于无菌、无毒的环境，除无菌操作外，培养液还需定期更换
C．动物细胞应放入含5%CO 培养箱中培养，CO 的主要作用是刺激细胞呼吸
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D．维持动物细胞体外生存必须有适宜的温度、pH和渗透压等环境条件
略： 。
