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解密22 发酵工程
1．（2023·黑龙江大庆·统考一模）某同学将自然发酵的甘蔗汁加入体积分数为3%的无水乙醇中，利用高
产菌株酿制甘蔗醋。下列分析错误的是（ ）
A．醋酸菌可将甘蔗汁中的糖类和乙醇转化为醋酸
B．添加高产菌株到发酵液后，应高温处理杀灭杂菌
C．发酵过程需要保持通气，温度控制在30~35℃
D．培养液中的醋酸浓度不再上升时即可停止发酵
【答案】B
【分析】1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝
氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18～25℃，pH 最好是弱酸性。
2、醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充
足时，醋酸菌将葡萄汁中的葡萄糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30～35℃。
【详解】A、糖原充足时醋酸菌可将糖类转化为醋酸，当缺少糖源时，醋酸菌可将乙醇变为乙醛，再将乙
醛变为醋酸，A 正确；
B、高温会将醋酸菌杀死，所以添加高产菌株到发酵液后，不能用高温处理，B 错误；
C、醋酸菌是好氧菌，需要保持通气，醋酸菌的最适生长温度约为33℃，因此果醋发酵温度要控制在30～
35℃，C 正确；
D、持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中乙醇含量达到最低时，发酵结束，D 正确。
故选B。
2．（2023·广东深圳·一模）泡菜在我国“食材谱系”中已有数千年历史，其中广东泡菜以爽脆出名，而且
口味酸甜。各种应季的蔬菜，如白萝卜、红萝卜、小黄瓜、高丽菜等均可作为泡菜的原料，经发酵后，在
口感上比新鲜蔬菜更爽脆，既好吃，又助消化。下列关于泡菜制作的叙述，错误的是（ ）
A．热水短时处理原料可抑制果胶酶活性，使成品泡菜口感较脆
B．腌制方法、时间长短和温度高低均影响泡菜中亚硝酸盐含量
C．利用水密封泡菜坛的目的是给泡菜坛内创造无氧环境，
A 组 基础练
1
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D．坛盖边沿的水槽“泡”中的气体是乳酸菌经细胞呼吸产生的
【答案】D
【分析】泡菜的制作依靠的是乳酸菌的无氧呼吸，制作时要防止污染，以防泡菜腐败变质；清水与盐的质
量比应为10: 1；若食盐量不足，也易造成杂菌大量繁殖。
【详解】A、果胶酶可以水解果胶，进而使原料柔软，因此利用热水短时间处理原料，可通过抑制果胶酶
活性使成品泡菜口感较脆，A 正确；
B、腌制方法、时间长短和温度高低均影响泡菜中亚硝酸盐含量，腌制时必须无氧环境，腌制时间太短，
产亚硝酸盐的菌数量较多，所以亚硝酸盐含量较高，B 正确；
C、乳酸菌属于厌氧生物，利用水密封泡菜坛的目的是为泡菜坛内创造无氧环境，C 正确；
D、乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，没有气体产生，坛盖边沿的水槽“泡”中的气体是发酵初期酵母菌、大肠
杆菌等经细胞呼吸产生的，D 错误。
故选D。
3．（2023·福建漳州·统考二模）袋装酸奶的包装上通常都会注明“胀袋勿食”。某同学选择—过期的胀袋
密封酸奶，按图中的操作流程，研究其中的某微生物生长情况，有关叙述正确的是（ ）
A．使用巴氏消毒法可以杀死牛奶中的微生物和芽孢，但不破坏其营养成分
B．酸奶胀袋是由于其中的乳酸菌有氧呼吸产生了CO2
C．利用图示方法向培养基接种前和接种后都要对接种环进行灼烧灭菌
D．若3 个平板的平均菌落数是180 个，则1mL 酸奶中该微生物个数为9×106个
【答案】D
【分析】1、酸奶制作的原理是乳酸菌发酵，乳酸菌属于原核生物，其新陈代谢类型是异养厌氧型。
2、乳酸菌的无氧呼吸可将葡萄糖分解形成乳酸，并释放少量的能量。
【详解】A、无菌技术包括消毒和灭菌两个方面，其中消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体
表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），A 错误；
B、乳酸菌属于厌氧菌，不进行有氧呼吸，B 错误：
C、利用图示实验方法应该使用涂布器进行接种，C 错误；
D、利用公式C÷V×M，可以计算1mL，酸奶中该微生物数量为180÷0.2×104=9×106，D 正确。
2
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故选D。
4．（2023·黑龙江大庆·统考一模）下列有关培养基和菌种鉴定的叙述，错误的是（ ）
A．在微生物的实验室培养中，培养皿可用体积分数为70%的酒精擦拭灭菌
B．微生物的生长除受营养因素的影响外，还受 pH、渗透压等的影响
C．配制培养细菌的培养基时要将 pH 调至中性或弱碱性
D．菌落的形状、大小、颜色等特征都可作为菌种鉴定的依据
【答案】A
【分析】培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的
营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培
养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
【详解】A、在微生物的实验室培养中，培养皿可用体积分数为70%的酒精擦拭消毒，A 错误；
B、微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、渗透压等的影响，如细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸，
“细菌喜荤，霉菌喜素”等，B 正确；
C、不同的微生物培养需要的pH 是不同的，如培养细菌时需将培养基的pH 调至中性或微碱性，C 正确；
D、不同微生物的菌落的形状、大小、颜色、和隆起程度不同，可作为菌种鉴定的依据，D 正确。
故选A。
5．（2023·山东·日照一中校考模拟预测）DMF（一种含碳有机物）是一种优良的工业溶剂和有机合成材料，
它广泛应用于制革、化工、医药、农药等各个生产行业。含DMF 的废水毒性大，对环境造成严重的危害，
某实验小组筛选分离得到能够高效降解DMF 的菌株，用于DMF 的降解，下列有关叙述错误的是（
）
A．可从某化工厂排污口附近的污水中取样来筛选DMF 降解菌
B．不能利用平板划线法对DMF 降解菌进行计数
C．筛选DMF 降解菌的过程中需要在培养基中添加葡萄糖
D．可根据平板上菌落的形状、大小、颜色等特征来区分微生物的类型
【答案】C
【分析】 分析题意可知，富含DMF 的环境中DMF 降解菌较多，筛选DMF 降解菌时用DMF 作为唯一碳
源的选择培养基中，DMF 降解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
【详解】A、筛选DMF 降解菌应该到富含DMF 的制革、化工、医药、农药等各个生产厂家的排污口附近
取样，A 正确；
B、稀释涂布平板法可用于微生物计数，而平板划线法不能用于计数，B 正确；
C、筛选DMF 降解菌时要以DMF 为唯一碳源，故不应在培养基中添加葡萄糖，C 错误；
3
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D、不同菌体形成的菌落特征不同，因此可根据菌落的形状、大小、颜色等特征初步判断微生物类型，D
正确。
故选C。
6．（2023·北京海淀·一模）我国是啤酒产生和消费大国，啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成，其
工业化生产流程图如下图所示，下列有关叙述错误的是（ ）
A．啤酒发酵产品是微生物本身，发酵结束后，可通过⑧过程得到产品
B．发酵过程中酵母菌的繁殖，大部分糖的分解和代谢产物的生成都在主发酵阶段完成
C．⑦过程是发酵工程的中心环节，需要严格控制温度、PH 和溶解氧等条件
D．发酵过程中需要随时检测培养液中的微生物的数量、产物浓度等
【答案】A
【分析】主发酵又称“前发酵”，是啤酒发酵的主要过程，在这个过程中，酵母完成了增殖、厌氧发酵及
其沉淀回收等，消耗了大部分可发酵性糖等成分，排出的发酵代谢产物即啤酒的主要组分。主发酵一般需
要6-8 天，长的达8-10 天。下酒以后，由于嫩啤酒还含有少量的可发酵性糖类，在贮酒罐内会再次出现一
个较为旺盛的发酵过程，这个过程即称为“后发酵”。后发酵是传统发酵方式的一个必然过程，依靠这个
后发酵过程，可以完成驱除生酒味、溶解与饱和二氧化碳的作用，同时可以形成适量的酯，并有益于酵母、
蛋白质凝固物的沉降，达到啤酒成熟的目的。
【详解】A、啤酒发酵产品是微生物的代谢产物（不是微生物本身），发酵结束后，可通过⑧啤酒过滤过
程得到产品，A 错误；
B、结合分析可知，在主发酵阶段，发酵过程中酵母菌的繁殖，大部分糖的分解和代谢产物的生成都在主
发酵阶段完成，B 正确；
C、发酵是发酵工程的中心环节，即⑦过程是发酵工程的中心环节，为了获得合格的啤酒，需要严格控制
温度、pH 和溶解氧等条件，C 正确；
D、发酵过程中需要随时检测培养液中的微生物的数量、产物浓度等，以了解发酵进程，D 正确。
故选A。
7．（2021·上海虹口·统考一模）在抗生素抑菌实验过程中，规格相同的无菌滤纸片a、b、c 分别浸有浓度
相同的不同抗生素溶液，同规格无菌滤纸片d 浸有无菌水，然后放在涂布有大肠杆菌的培养基上，培养数
4
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天后结果如图所示。下列说法正确的是（ ）
A．a 处抑菌效果小于b 处
B．b 滤纸片没有沥干
C．c 处的抑菌效果最明显
D．d 处没有大肠杆菌生长
【答案】B
【分析】本实验是利用抗生素抑制细菌的生长来检测细菌对各种抗生素的药敏程度，实验结果可通过抑菌
圈的大小来确定抗生素的杀菌能力，抑菌圈越大表示杀菌能力越强。d 浸有无菌水，是对照组。
【详解】A、对比a 与b 可知两处的抑菌圈的大小差不多大，说明两处的抑菌效果相似，A 错误；
B、b 处抑菌圈应成圆形，左侧漫延开来了，说明滤纸片没有沥干，B 正确；
C、c 处与d 处结果相似，没有抑均圈，说明c 处抗生素无效，C 错误；
D、d 处滤纸片浸的是无菌水，没有使用抗生素，有大肠杆菌生长，D 错误。
故选B。
8．（2022·河北邯郸·统考一模）黄酒是中国特产，为世界三大古酒之一。关于黄酒的酿造方法，古遗六法
中描述道：曲蘖必时，湛炽必洁，水泉必香，陶器必良，火齐必得（注：曲蘖主要指酒曲，湛炽是指浸泡
和蒸煮）。下列叙述错误的是（ ）
A．黄酒中的酒精是酵母菌利用“林稻”在无氧条件下的代谢产物
B．曲蘖必时，可能是受酵母菌的生长繁殖需要适宜的温度等的影响
C．湛炽必洁，起到消毒的作用，一定程度上可避免杂菌对发酵的影响
D．黄酒酿造过程中发酵液出现的气体都是在酵母菌细胞质基质中产生的
【答案】D
【分析】酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，
产生二氧化碳和水；在无氧条件下酵母菌也能进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。在缺氧呈酸性的发酵液
中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。在利用酵母菌发酵
时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳
温度是在18℃～25℃，pH 最好是弱酸性。
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【详解】A、在无氧条件下酵母菌也能进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，所以黄酒中的酒精是酵母菌利
用“林稻”在无氧条件下的代谢产物，A 正确；
B、曲蘖主要指酒曲，其中含有酵母菌，20℃左右最适合酵母菌繁殖，所以曲蘖必时，可能是受酵母菌的
生长繁殖需要适宜的温度等的影响，B 正确；
C、湛炽是指浸泡和蒸煮，经过高温，起到消毒的作用，一定程度上可避免杂菌对发酵的影响，C 正确；
D、参与黄酒酿造的酵母菌是兼性厌氧型真核生物，有氧呼吸产生CO2的场所是线粒体基质，而无氧呼吸
产生CO2的场所是细胞质基质，D 错误。
故选D。
【点睛】本题以黄酒的酿造古遗六法为情景，考查酒的制作相关知识。考生要识记和掌握果酒制作的原理，
结合古遗六法中描述，提取有效信息，将果酒制作迁移到黄酒的制作，然后根据各选项的描述进行推理，
作出准确的判断。
9．（2022·河南洛阳·统考三模）作为全国农产品地理标志之一的偃师葡萄，果肉松脆、多汁爽口。不仅可
以直接投放市场，当地政府还开发了果汁、果酒、果醋等一系列产品。请回答下列相关问题：
(1)制作葡萄汁时，可用果胶酶来提高______。果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、
______等（答出2 种）。
(2)制作葡萄酒时，为了提高酒的品质，选用优质酵母菌进行固定化处理。操作时，所用的包埋剂海藻酸钠
最好采用______的方法促使其完全溶解在蒸馏水中；对制备好的凝胶珠需要检验质量，常采用摔打的方法，
如果出现______，则说明凝胶珠是合格的。
(3)制作葡萄醋时，当______充足，醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸。自然界中醋酸菌常与乳酸菌共同
生长，若要筛选出醋酸菌，则培养基中应以______作为唯一碳源。获得纯净醋酸菌的关键是防止外来杂菌
的污染，应采取的措施有______（至少答两点）。
【答案】(1) 水果的出汁率和果汁的澄清度 果胶酯酶﹑果胶分解酶
(2) 小火间断加热 凝胶珠很容易弹起
(3) 氧气﹑糖源 乙醇 所用实验器具进行灭菌、在超净工作台进行操作、在酒精灯附
近进行操作﹑对实验操作的空间﹑操作者的衣着和手进行消毒
【分析】1、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，
才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖
分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30-
35℃。
2、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁
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殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧
呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃。
(1)果胶酶包括半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等，能分解果胶和瓦解植物细胞壁及胞间层，制作葡
萄汁时，可用果胶酶来提高水果的出汁率和果汁的澄清度。
(2)制作葡萄酒时，为了提高酒的品质，选用优质酵母菌进行固定化处理。操作时，所用的包埋剂海藻酸钠
最好采用小火间断加热的方法促使其完全溶解在蒸馏水中；对制备好的凝胶珠需要检验质量，常采用摔打
的方法，如果出现凝胶珠很容易弹起，则说明凝胶珠是合格的。
(3)果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋
酸，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。若要筛选出醋酸菌，则培养基中应以乙
醇作为唯一碳源。获得纯净醋酸菌的关键是防止外来杂菌的污染，应采取的措施有所用实验器具进行灭菌、
在超净工作台进行操作、在酒精灯附近进行操作﹑对实验操作的空间﹑操作者的衣着和手进行消毒。
【点睛】本题考查果酒和果醋的制作、果胶酶的相关知识，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如
实验的原理、实验条件等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。
10．（2022·辽宁·统考一模）我国是世界上啤酒的生产大国，为了生产出品质更好的啤酒，科学家将大麦
细胞的LTP1 基因植入啤酒酵母菌中，获得的啤酒酵母菌种可产生LTP1 蛋白，再酿出泡沫丰富的品质啤酒，
基本操作过程如图所示，请回答下列问题：
(1)图中A 过程需要使用_____酶获得LTP1 基因，C 的组成除了含有LTP1 基因外，还有_____等。
(2)检测酵母菌细胞是否含有LTP1 基因，可以用分别含有青霉素、四环素的_____培养基进行筛选；除了看
啤酒泡沫丰富与否外，还可以检测转基因啤酒酵母菌_____。
(3)图中D、E 过程需重复几次，目的是进一步筛选纯化_____，在液态培养基中对酵母菌进行富集培养的过
程中，每隔4h 要摇动一次，每次1-2min，其目的是增大溶氧量，使酵母菌营养物质混合均匀或使酵母菌
充分利用营养物质，以促进酵母菌的_____。
(4)生产啤酒用的发酵罐和原料都需要经过_____，啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段，酵母菌的
繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在_____阶段完成。
【答案】(1) 限制 启动子、终止子、标记基因
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(2) 选择 能否产生LTP1 蛋白
(3) 转基因酵母菌 有氧呼吸和增殖
(4) 灭菌消毒 主发酵
【分析】分析题图：图示表示将使啤酒产生丰富泡沫的LTP1 基因植入啤酒酵母菌中，使其产生LTP1 蛋白，
酿出泡沫丰富的啤酒的过程。图中A 表示获取目的基因，B 表示质粒，C 表示重组质粒。
【详解】（1）获取目的基因用限制酶，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等。
（2）添加抗生素的培养基为选择培养基，目的是为了筛选含目的基因的工程菌。据题意分析，除了看啤
酒泡沫丰富与否外，还可以检测转基因啤酒酵母菌能否产生LTP1 蛋白。
（3）将转基因酵母菌进行接种处理，经过图中D、E 过程重复几次，目的是进一步筛选纯化转基因酵母菌，
酵母菌是兼性厌氧型的真菌，有氧呼吸利于它的增殖，在液态培养基中对酵母菌进行富集培养的过程中每
隔4h 要摇动一次，每次1-2min，其目的是增大溶氧量，使酵母菌营养物质混合均匀或使酵母菌充分利用
营养物质，以促进酵母菌的有氧呼吸和增殖。
（4）发酵过程中最重要的是严格消毒灭菌，所以生产啤酒用的发酵罐和原料都需要经过灭菌消毒，防止
杂菌出现，产生其他代谢产物，影响啤酒品质。啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段，酵母菌的繁
殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成。
【点睛】本题结合图解，考查基因工程和果酒的制作相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具
及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题。
11．（2022·四川攀枝花·统考一模）纤维素是地球上最大的可再生资源，地球每年光合作用合成的物质中，
纤维素约占 6 ，纤维素分解菌的研究也成了相关科学家关注的课题。
(1)纤维素分解菌将纤维素最终分解为_______。科学家在野外寻找纤维素分解菌的时候，往往选择富含落
叶的土壤，这说明，在寻找目的菌株时，要根据它___________。
(2)筛选纤维素分解菌可以用刚果红染色法，具有________的菌落即为纤维素分解菌形成的菌落。如果培养
基上菌落数很少，推测可能的原因是________。
(3)测定土壤样品液中细菌数量的实验操作如下图。图中过程①②③所示接种微生物的方法为_____。与血
细胞计数板计数的方法相比，此计数方法测得的细菌数较________( “多”或“少”)，原因是_______。
【答案】(1) 葡萄糖 对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找（到适宜纤维素分解菌（或目
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的菌）生存的环境中去寻找）
(2) 透明圈 土壤中纤维素分解菌较少，稀释的倍数太大
(3) 稀释涂布平板法 少 血细胞计数板计数统计的是所有细胞，稀释涂布平板法只计
数的活细胞，而且有的菌落可能由两个或多个细胞形成
【分析】1、纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。
2、纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，能够产生透明圈的菌落就是纤维素分解菌。
（1）纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，其中C1酶、CX酶使得纤维素分解成纤维二
糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖，故纤维素分解菌将纤维素最终分解为葡萄糖。
科学家在野外寻找纤维素分解菌的时候，往往选择富含落叶的土壤，这说明，在寻找目的菌株时，要根据
它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
（2）筛选纤维素分解菌可以用刚果红染色法，具有透明圈的菌落即为纤维素分解菌形成的菌落。培养基
上的 一个菌落是由一个活细胞繁殖而来，如果培养基上菌落数很少，说明土壤中纤维素分解菌较少，或
者菌液稀释的倍数太大。
（3）图中过程①②表示稀释，③表示接种，所以是稀释涂布平板法。与血细胞计数板计数的方法相比，
此计数方法测得的细菌数较少，因为血细胞计数板计数统计的是所有细胞，稀释涂布平板法只计数的活细
胞，而且有的菌落可能由两个或多个细胞形成。
12．（2023·重庆·重庆市凤鸣山中学校考模拟预测）以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，
通过发醛能获得单细胞蛋白。单细胞蛋白含有丰富的蛋白质、糖类、脂质和维生素等物质，可以用作食品
添加剂。某兴趣小组通过实验分离出能分解纤维素的微生物。回答下列相关问题：
(1)实验小组尝试从收割后的小麦田里分离出分解纤维素的微生物，应该配制以_____为唯一碳源的培养基。
配制的培养基用_____法灭菌，灭菌的作用是_____。
(2)灭菌的培养基需要倒平板操作，冷凝后平板需倒置的目的是_____。
(3)若要对培养的细菌计数，则需要用_____法进行接种，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的是
单菌落，运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小，理由是_____。
(4)能够分解纤维素的微生物体内能够合成纤维素酶，纤维素酶将纤维素水解为_____，若需要检测分离的
微生物中是否含有目的菌株，应在培养基中加入_____染料。
【答案】(1) 纤维素 高压蒸汽灭菌 杀死培养基中的所有微生物，包括芽孢和孢子
(2)防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成培养基污染、避免培养基中的水分过快蒸发
(3) 稀释涂布平板 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
(4) 纤维二糖、葡萄糖 刚果红
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【分析】分离微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选分离牛
的瘤胃能够分解纤维素的微生物需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基并保证在缺氧条件下培养。
【详解】（1）在以纤维素为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生
长；常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌处理，灭菌的作用是杀死培养基中的所有微生物，包括芽孢和
孢子。
（2）平板倒置的目的是防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成培养基污染、避免培养基中的水分过快蒸发。
（3）用稀释涂布平板法对接种的细菌进行计数；运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小，原因是当
两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（4）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx 酶和葡萄糖苷酶，纤维素酶将
纤维素水解为纤维二糖、葡萄糖；刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分
解后，刚果红-纤维素的复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
1．（2022·河北唐山·开滦第二中学统考模拟预测）乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种多肽，对许多革兰
氏阳性菌，尤其是对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。为了
解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）还是非溶菌性杀死
细菌，科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发醝时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数，
实验结果如下图所示。已知加入乳链菌肽前后，除去菌体的上清液中核酸含量未变。下列叙述正确的是（
）
A．革兰氏阳性菌活菌的计数方法为平板划线法或稀释涂布平板法
B 组 提升练
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B．除去菌体的上清液中核酸含量没有明显变化，说明是抑制细菌生长
C．若直接服用该防腐剂，则一定改变肠道中的正常菌群
D．乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为非溶菌性杀死细菌差
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划
线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后
可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培
养后可形成单个菌落。
【详解】A、平板划线法只能用于接种微生物，不能用于计数，A 错误；
BD、对照组曲线1 活菌数的变化呈S 型，曲线2 在加入乳链菌肽后活菌数降为零，且加入乳链菌肽前后，
除去菌体的上清液中核酸含量未变，由此推测不是抑制细菌生长，应是乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方
式为非溶菌性杀死细菌，B 错误，D 正确；
C、分析题意可知，乳链菌肽是一种高效无毒的天然食品防腐剂，是由乳酸乳球菌分泌的一种多肽，若口
服会被分解而失去作用，不一定会改变肠道中的正常菌群，C 错误。
故选D。
2．（2022·辽宁朝阳·建平县实验中学校考模拟预测）为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，
某同学进行了相关实验。实验中将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50cm 处，
然后对着培养基讲话1min 或咳嗽2 次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是（ ）
A．实验中培养基为固体培养基并需要进行严格的灭菌
B．实验者对培养基进行处理后，放入10℃恒温培养箱中培养1-2 天
C．实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照
D．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征确定微生物的种类
【答案】B
【分析】人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质一培养基， 用以培养、
分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
【详解】A、实验中要观察微生物，因此配制的牛肉膏蛋白胨培养基应为固体培养基，并进行严格灭菌处
理，以防止杂菌污染，A 正确；
B、本实验是为了确定正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，而人体的温度约为37°C，因此应设置
与人体相同的温度，即在37°C 恒温培养箱中培养1~2 天，B 错误；
C、本实验的实验组为佩戴口罩对着培养基讲话1min 或咳嗽2 次，实验中还应该设置“不戴口罩直接说话
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或咳嗽’进行对照实验，保证实验结果的准确性，C 正确；
D、不同微生物的菌落具有特殊的特征，在实验培养结束后，可根据菌落的形状、大小、颜色、隆起程度
等特征确定微生物种类，D 正确。
故选B。
3．（2022·福建漳州·统考一模）土壤中的解磷细菌能分泌磷酸酶或有机酸，溶解并吸收利用磷酸钙，某企
业从土壤中分离纯化并发酵生产解磷细菌菌肥，发酵液中解磷细菌浓度达到2×108个/mL 时发酵结束，分
装入库。投放市场前应抽检活菌浓度，下列叙述正确的是（ ）
A．从土壤中分离解磷细菌的培养基以磷酸钙为唯一的磷源
B．可挑取发酵液中单菌落进行进一步纯化培养
C．解磷菌菌肥发酵生产的中心环节是接种及分离提纯产物
D．抽检活菌浓度时，取0．1mL 发酵液稀释104倍后用涂布平板法计数
【答案】A
【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，
在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能
形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后
可形成单个菌落。
【详解】A、解磷细菌能分泌磷酸酶或有机酸，溶解并吸收利用磷酸钙，故可在培养基加入磷酸钙为唯一
磷源，以达到从土壤中分离出解磷细菌的目的，A 正确；
B、单菌落是由单个细胞在固休培养基上形成的菌落，液体培养基上无法形成菌落，B 错误；
C、发酵生产包含菌种的选育、扩大培养，培养基的配制，灭菌，接种，发醇，产品的分离、提纯等环节。
其中中心环节是发酵，C 错误；
D、投放市场前需抽检发酵液中活菌浓度、而发酵结束时，发酶液中解磷细菌浓度达到2×108个 / m L，若
取0.1mL 发醇液稀释104倍，则稀释液中解磷细菌的浓度为0.2×104个/ m L，用涂布平板法汁数时会由于稀
释倍数不够、导致解磷菌不够分散、影响菌落数的统汁，D 错误。
故选A。
4．（2023·辽宁·辽宁实验中学校联考模拟预测）豆豉是一种古老的传统发酵豆制品，古称“幽菽”或
“嗜”。早在公元前二世纪，我国就能生产豆豉，西汉初年，其生产、消费已初具规模。北魏贾思勰在
《齐民要术·作豉》中也有相关记录。下面是豆豉制作的流程图，装坛放在室外日晒，每天搅拌两次。下列
说法正确的是（ ）
选料→浸泡
蒸煮
前期发酵
调味
装坛（后期发酵）
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A．前期发酵的目的是让霉菌产生相应的酶，营养更丰富
B．传统方法制作豆豉，以混合菌种的液体发酵为主
C．调味过程中添加盐可抑制杂菌生长，白酒和风味料只是调节口味
D．装坛后日晒可为微生物提供能量，搅拌可为微生物提供氧气
【答案】A
【分析】参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微
生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。
【详解】A、前期发酵的目的是让霉菌产生相应的酶，如蛋白酶可以将蛋白质分解为氨基酸，使豆豉营养
更丰富，A 正确；
B、传统发酵是以混合菌种的固体或半固体发酵为主，B 错误；
C、调味过程中添加盐、白酒和调味料均可起到抑制杂菌生长的目的，C 错误；
D、该发酵过程中的微生物不能利用光能，D 错误。
故选A。
5．（2023·广东深圳·统考二模）金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物。哥伦比亚血平板是含
无菌脱纤维羊血等成分的固体培养基，生长在该培养基上的金黄色葡萄球菌菌落能破坏其周围的红细胞，
产生透明的溶血圈。如图为检测某种饮料是否被金黄色葡萄球菌污染的操作流程，据此分析不正确的是（
）
A．7．5%的NaCl 肉汤培养基从功能角度划分属于选择培养基
B．振荡培养后培养基变浑浊是耐高盐的微生物数量增多所致
C．若最终长出的菌落周围出现透明的溶血圈，则说明饮料被金黄色葡萄球菌污染
D．若取菌种后的接种方法为稀释涂布平板法，则可对待测饮料中金黄色葡萄球菌计数
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开
始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个
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菌落。
【详解】A、金黄色葡萄球菌是一种耐高盐的食源性致病微生物，因此7．5%的NaCl 肉汤培养基从功能角
度划分属于选择培养基，A 正确；
B、7．5%的NaCl 肉汤培养基震荡培养后培养基变浑浊是由于耐高盐的微生物数量增多所致，B 正确；
C、金黄色葡萄球菌可破坏菌落周围的红细胞，产生透明的溶血圈，若最终长出的菌落周围出现透明的溶
血圈，则说明饮料被金黄色葡萄球菌污染，C 正确；
D、因为接种的菌种是经7．5%的NaCl 肉汤培养基培养过，因此用稀释涂布平板法也不能对待测饮料中金
黄色葡萄球菌计数，D 错误。
故选D。
6．（2023·广东深圳·一模）愈伤组织形成过程中，生长素和细胞分裂素信号通路相关基因存在DNA 和组
蛋白去甲基化现象。研究者利用桃叶片诱导愈伤组织，在培养基中添加DNA 甲基转移酶抑制剂 Aza 或组
蛋白去甲基化酶抑制剂GSK，检测形成愈伤组织的面积，结果如图。据此分析正确的是（ ）
A．实验器材、培养基和桃叶片等需经高压蒸汽灭菌处理后使用
B．具有特定形态、排列疏松、有大液泡的结构即为桃愈伤组织
C．DNA 去甲基化和组蛋白甲基化分别抑制、促进愈伤组织形成
D．推测表观遗传影响激素的信号转导过程进而影响脱分化过程
【答案】D
【分析】表观遗传是指DNA 序列不发生变化，但基因的表达却发生了可遗传的改变，即基因型未发生变
化而表现型却发生了改变，如DNA 的甲基化，甲基化的基因不能与RNA 聚合酶结合，故无法进行转录产
生mRNA，也就无法进行翻译，最终无法合成相应蛋白，从而抑制了基因的表达。
【详解】A、桃叶片属于外植体，不能用高压蒸汽灭菌处理，A 错误；
B、愈伤组织细胞是由一小团无定形状态的薄壁细胞组成的，即没有特定形态，B 错误；
C、与对照组相比，在培养基中添加DNA 甲基转移酶抑制剂Aza 会使愈伤组织面积增加，说明DNA 甲基
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转移酶抑制剂Aza 会促进愈伤组织的形成，而DNA 甲基转移酶抑制剂Aza 可抑制甲基化的形成，因此
DNA 去甲基化可促进愈伤组织的形成，同理，与对照组相比，在培养基中添加组蛋白去甲基化酶抑制剂
GSK 会使愈伤组织面积减小，说明组蛋白甲基化可抑制愈伤组织形成，C 错误；
D、图示加入DNA 甲基转移酶抑制剂Aza 或组蛋白去甲基化酶抑制剂GSK 会影响愈伤组织的形成，而愈
伤组织的形成是脱分化的结果，因此可推测表观遗传影响激素的信号转导过程进而影响脱分化过程，D 正
确。
故选D。
7．（2023·广东深圳·一模）《诗经》中有“中田有庐，疆场有瓜，是剥是范，献之皇祖”的诗句。“剥”
和“范”是腌渍加工的意思。许慎《说文解字》解释“范菜者，酸菜也”。下列关于酸菜制作的叙述正确
的是（ ）
A．为了降低杂菌污染的风险，发酵前需要对器具进行灭菌处理
B．保证泡菜坛内的无氧环境，腌制时应将泡菜坛装满
C．泡菜坛内液体表面可能出现一层由酵母菌繁殖形成的白膜
D．腌制过程中乳酸和亚硝酸盐的含量会先增加后减少再趋于稳定
【答案】C
【分析】制作泡菜时要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发酵产生乳酸，使得
菜呈现一种特殊的风味，还不改变菜的品质。因此泡菜制作的原理是需利用乳酸菌在无氧条件下发酵形成
乳酸，然后制作成泡菜。
【详解】A、为了降低杂菌污染的风险，发酵前需要对器具进行消毒处理，A 错误；
B、制作泡菜所需要的微生物为乳酸菌，为厌氧菌，为保证泡菜发酵过程中的无氧环境，在装坛发酵前后
需要检泡菜坛有无裂纹和砂眼，并对泡菜坛进行用水密封坛口处理，B 错误；
C、在泡菜制作过程中，泡菜发酵液的营养丰富，其表面往往含有适量的氧气，适合酵母菌生长繁殖，酵
母菌生长繁殖会在泡菜坛液面的形成一层白膜，C 正确；
D、在泡菜腌制过程中亚硝酸盐的含量会先增加后减少再趋于稳定，乳酸菌的含量先增加，后由于营养物
质缺乏，pH 下降而减少；乳酸的含量会一直增加，后稳定，D 错误。
故选C。
8．（2023·北京海淀·一模）《诗经》中“十月获稻，为此春酒，以介眉寿”记录了古人用新鲜稻米酿酒，
以求延年益寿的习俗。米酒酿造主要包括蒸米、拌酒曲、发酵三步，酒曲中的微生物主要是霉菌和酵母菌，
霉菌主要起到糖化的作用（把米中的淀粉转化成葡萄糖）。下列说法错误的是（ ）
A．酿造米酒的过程中，酵母菌可进行有氧呼吸和无氧呼吸
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B．蒸米后通常需要进行冷却，再加入酒曲，其目的是防止温度过高杀死酒曲中的微生物
C．米酒发酵初期，霉菌可以通过糖化作用，为酵母菌的呼吸作用提供底物
D．腐乳发酵过程中，也是利用了毛霉等微生物的糖化作用
【答案】D
【分析】葡萄酒制作过程中，将装配好的发酵瓶进行发酵，当发酵瓶中停止出现气泡，表示发酵完毕。若
发酵过程温度高于30℃，则需及时采取降温措施，主要为了防止影响酒的风味。
【详解】A、参与果酒制作的微生物主要是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型，所以米酒发酵过
程中，酵母菌进行细胞呼吸的类型是有氧呼吸和无氧呼吸，A 正确；
B、蒸米后，温度较高，通常需要进行冷却，再加入酒曲，其目的是防止温度过高杀死酒曲中的微生物，B
正确；
C、酒曲中的微生物主要是霉菌和酵母菌，霉菌主要起到糖化的作用，能把米中的淀粉转化成葡萄糖，葡
萄糖能为醇母菌的呼吸作用提供底物，C 正确；
D、腐乳发酵过程中，起到主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成
小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸，毛霉不能起糖化作用，D 错误。
故选D。
9．（2023·陕西榆林·一模）中国对杏树的栽培已有两千年以上的历史，但对杏果的利用一直停留在鲜食果
肉或杏仁上。研究人员不断创新开发，成功酿制出杏果酒，其艳泽淡黄、果香浓郁、营养丰富；检测发现
果酒中黄酮达20%，是目前天然可食植物制品黄酮含量最高的饮品，有抗癌防衰老的性能，突出的功能型
饮品。回答下列问题。
(1)杏果酒酿制利用的微生物是___________。发酵生产果酒的过程中，每隔一段时间要进行放气操作，其
主要目的是__________。在制作杏果酒中绝大多数其他微生物生长受到抑制的原因是__________。
(2)酿制杏果酒时，需要将温度控制在18~25℃，温度过高和氧气逸入会导致杏果酒容易变酸，原因是
__________。
(3)在葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。为了解皮渣中微生物的数量，取10g 皮渣加入
90ml 无菌水，混匀，用__________（填一种实验仪器）将0.1mL 稀释液均匀接种于培养基表面。104倍稀
释对应的三个平板中菌落数量分别为66、75 和72，则每克皮渣中微生物数量为__________个。
(4)某同学在制作杏醋时，加入醋酸菌液过程中有可能混入乳酸菌（不考虑其他杂菌）。从培养条件的角度
分析，请用稀释涂布平板法设计实验，检测是否混入了乳酸菌（注：乳酸菌和醋酸菌的菌落形态相似）。
写出大体实验思路并预测实验结果：____________________。
【答案】(1) 酵母菌 排出发酵过程中产生的二氧化碳 在缺氧、呈酸性的发酵液中，
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绝大多数其他微生物都无法适应这一环境而受到抑制
(2)较高温度的有氧环境有利于产酸的杂菌生长
(3) 涂布器 7.1×106
(4)用稀释涂布平板法制备该醋酸菌液的若干平板，将平板置于无氧环境下继续培养，观察平板上的菌落情
况，若平板上有菌落形成则说明混入乳酸菌；反之，则没有混入乳酸菌
【分析】1、酒精发酵是指酵母菌在适宜温度和无氧条件下，将葡萄糖分解成酒精的过程。
2、统计菌落数目的理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释
液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀
释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30-300 的平板进行计数。
【详解】（1）酵母菌无氧呼吸产生酒精，所以杏果酒酿制利用的微生物是酵母菌。放气操作是为了排出
发酵过程中产生的二氧化碳。在缺氧、呈酸性的发酵液中，绝大多数其他微生物都无法适应这一环境而受
到抑制，所以在制作杏果酒中绝大多数其他微生物生长受到抑制。
（2）较高温度的有氧环境有利于产酸的杂菌生长，所以酿制杏果酒时，需要将温度控制在18~25℃，无氧
环境。
（3）稀释涂布平板法需要用涂布器接种微生物。10⁴ 倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为66、75 和
72，则三个平板中平均菌落数为（66+75+72）÷3=71，每克皮渣中微生物数量为71÷0.1×10⁴=7.1×106个。
（4）由于乳酸菌是厌氧菌，醋酸菌是好氧菌，所以检测是否混入了乳酸菌的实验思路为：用稀释涂布平
板法制备该醋酸菌液的若干平板，将平板置于无氧环境下继续培养，观察平板上的菌落情况，若平板上有
菌落形成则说明混入乳酸菌；反之，则没有混入乳酸菌。
10．（2023·江西·校联考模拟预测）DDT 的化学式为C14H9Cl5，因其在防治农业病虫害，减轻疟疾伤寒等
蚊蝇传播的疾病等方面起到了不小的作用，因此该农药在20 世纪上半叶，曾在世界范围内被广泛的使用。
但由于其对环境污染过于严重，现已被很多国家或地区禁止使用多年，但土壤中仍有DDT 残留。研究发
现，DDT 能被土壤中的某些微生物降解。分离降解DDT 的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙
所示。回答下列问题：
(1)欲选育出能降解DDT 的细菌，需配制选用DDT 作为___________的培养基，其原因是___________。按
用途，这种培养基属于___________培养基，在接种前需进行___________灭菌处理。
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(2)在一定的培养条件下，单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落特征来初步区分不同种
的微生物，原因是___________。
(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。在作第二次以及其后的划线操作时，要求要从上一
次划线的末端开始划线，其原因是___________。
(4)为探究DDT 的降解机制，有人又做了如图乙所示实验，即将该菌种的培养液过滤离心，取上清液并加
入某种酶溶液，最后测定DDT 的降解率。请推测，该实验的假设是___________。事实上，该实验设计并
不严谨，理由是___________。
【答案】(1) 唯一碳源 只有能利用DDT 的微生物能正常生长和繁殖（合理即可） 选
择 高压蒸汽
(2)不同种微生物会表现出各自稳定的菌落特征（如形状、大小、颜色等）
(3) 接种环 确保最终得到的菌落是由单个细菌繁殖而来（或划线后，线条末端细菌的数目比线
条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得
到由单个细菌繁殖而来的菌落）
(4) 目的菌株能分泌降解DDT 的物质（酶） 缺少空白对照
【分析】微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐四类。
培养基灭菌用的方法是高压蒸汽灭菌。
根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物。
用接种环划线时，要求在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，并且在灼烧接种环之后，还要
等其冷却后再进行划线。由于划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，因此每次划线要从上一次划
线的末端开始，这样就能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的
菌落。
【详解】（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐四类。根据题意，该实
验的目的是要从土壤中筛选出有降解DDT 能力的某些微生物，而DDT 的分子式是C14H9Cl5，含有碳、氢、
氯三种元素，因此，应配制DDT 作为唯一碳源的选择培养基，以排除其他碳源的干扰。培养基灭菌用的
方法是高压蒸汽灭菌。
（2）研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是在一定的
培养条件下，不同种微生物在菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面均会表现出各自稳定的菌落特征。
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环。用接种环划线时，要求在操作的第一步以及每次划线
之前都要灼烧接种环，并且在灼烧接种环之后，还要等其冷却后再进行划线。由于划线后线条末端细菌的
数目比线条起始处要少，因此每次划线要从上一次划线的末端开始，这样就能使细菌的数目随着划线次数
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的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（4）根据图乙所示实验中的上清液加入了“某种酶溶液”推测，其实验目的是探究目的菌株是否能够分
泌降解DDT 的物质（如酶等）。实验设计不合理之处是缺少了不加“某种酶溶液”、其他条件同图乙的
空白对照组。
11．（2022·河南商丘·商丘市回民中学校考模拟预测）蓝莓含有丰富的维生素、多酚等天然活性成分，被
赞为浆果之王，猕猴桃含大量挥发性香气成分。研究小组成员以蓝莓和猕猴桃为原料，尝试酸制出蓝莓一
猕猴桃复合型果酒、果醋。酿制流程如图1 所示。回答下列问题：
(1)将蓝莓（包括果皮）和猕猴桃组织按一定比例混合，破碎后加入适量的水，再加入果胶酶进行酶解5 小
时，果胶酶处理的目的是______。
(2)接种1 是指接种酵母菌的过程，分离酵母菌应使用___培养基。果汁为酵母菌的生长和繁殖提供的营养
成分有_______。
(3)蓝莓一猕猴桃复合型果酒与单一果酒在___等方面可能不同，酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中酒
味会逐渐消失而出现酸味，其原因是___。
(4)果酒转果醋的发酵除了要进行接种2 的步骤，还需要控制的条件有___。果酸制成功后，某同学用稀释
涂布平板法测定果醋中某菌种的数量时，在同一稀释倍数下涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是36、
187 和195，这三个数据的平均值并不适宜作为该菌种数量，理由是___。
(5)不同的初始糖浓度对蓝莓一猕猴桃复合型果酒的酒精度和感官评分的影响如图2 所示。综合来看初始糖
浓度为 时，果酒品质最好。
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【答案】(1)瓦解细胞壁，更易获得果汁
(2) 选择（或固体） 碳源、氮源、水、无机盐和特殊营养物质
(3) 营养成分、香味 醋酸菌在有氧条件下，产生大量醋酸
(4) 将发酵温度提高至30-35℃，通入无菌空气 此同学的结果中，一个平板的计数结果与另两
个相差悬殊．结果的重复性差，若计算平均值会导致结果可信度低
(5)20%
【分析】1、虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提
供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
2、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，
在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能
形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后
可形成单个菌落。
【详解】（1）植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，根据酶的专一性可知，将蓝莓（包括果皮）和猕
猴桃组织按一定比例混合后加入果胶酶处理的目的是瓦解蓝莓和猕猴桃的细胞壁，更易获得果汁。
（2）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称
为选择培养基，分离酵母菌应使用选择（或固体）培养基；果汁中含有糖类、含氮物质等，能为酵母菌的
生长和繁殖提供的营养成分有碳源、氮源、水、无机盐和特殊营养物质。
（3）由于复合型果酒含有两种水果，故与单一果酒相比，在营养成分、香味等方面可能存在不同；酿制
成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中酒味会逐渐消失而出现酸味，其原因是醋酸菌在有氧条件下，产生大量
醋酸。
（4）果酒发酵的温度比果醋发酵要低，且果醋发酵需要氧气，故要进行果醋发酵，除了要接种醋酸菌外，
还要将发酵温度提高至30-35℃，通入无菌空气；该同学涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是36、187 和
195，其中1 个平板的计数结果与另2 个相差悬殊，结果的重复性差，若计算平均值会导致结果可信度低。
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（5）从图2 曲线可看出，当初始糖浓度为20%时，酒精度及果酒感官评分均最高，故此时果酒品质最好。
12．（2022·四川·统考模拟预测）贝莱斯芽孢杆菌可通过分泌多种酶(如淀粉酶、蛋白酶等)对尖孢镰刀菌
(一种可引发多种作物发生枯萎病的真菌)的生长繁殖起到较强的抑制作用。某兴趣小组将筛选获得的贝莱
斯芽孢杆菌接种到培养基上进行摇瓶培养，取发醒液离心，留上清液，加入氯伤，充分混匀后静置，收集
溶液，用旋转蒸发仪浓缩，最终获得了含多种酶的分泌物提取液。回答下列问题:
(1)与尖孢镰刀菌比较。贝莱斯芽孢杆菌在结构上的主要区别是_______；实验室获得纯净贝莱斯芽孢杆菌
的关键是___________________。
(2)从物理状态来看，对贝莱斯芽孢杆菌进行选择培养使用的培养基属于_______；用氯仿可提取获得含多
种酶的分泌物提取液。依据的原理是__________________。
(3)兴趣小组采用凝胶色谱法对分泌物提取液中的多种酶进行分离，该方法是根据______分离蛋白质的有效
方法。
(4)为进步确定贝莱斯芽孢杆菌的分泌物中是否合有淀粉酶，该兴趣小组将贝莱斯芽孢杆菌分别接种到3 个
淀粉培养基(可溶性淀粉10．0g/L、牛肉膏3．0g/L,蛋白胨100g/L、NaC15．0g/L、琼脂200g/L， pH=7．
2、 115℃灭菌20min)中，并置于适宜的条件下进行实验。兴趣小组可通过观察培养基上的菌落周围
____________作出判断。
(5)为了解贝莱斯芽孢杆菌对尖孢镰刀菌的防治效果。请帮助兴趣小组设计实验探究贝菜斯芽孢杆菌分泌物
提取液对尖孢镰刀菌起抑制作用的最低使用浓度(简要写出实验思路即可)。
______________________________________________________________。
【答案】(1) 没有以核膜为界限的细胞核 防止外来杂菌的入侵
(2) 液体培养基 贝莱斯芽孢杆菌抑菌物质易溶于氯仿中
(3)相对分子质量的大小
(4)是否出现透明圈
(5)配置不同浓度的贝莱斯芽孢杆菌分泌物提取液，分别加入到灭菌后的培养基中（设置加入无菌水的培养
基作为空白对照），接种尖孢镰刀菌，观察菌种生长情况，以不长菌的最低浓度为最低抑菌浓度
【分析】凝胶色谱法（分配色谱法）的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样
中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率.
(1)尖孢镰刀菌是真菌，是真核生物，而贝莱斯芽孢杆菌是原核生物，没有以核膜为界限的细胞核。
实验室获得纯净微生物的关键是防止外来杂菌的入侵。
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(2)根据题干信息，所使用的培养基没有加入凝固剂，所以是液体培养基。由于贝莱斯芽孢杆菌抑菌物质易
溶于氯仿中，所以可以通氯仿提取获得含多种酶的分泌物提取液。
(3)凝胶色谱法分离蛋白质的原理是根据蛋白质的相对分子质量的大小进行的，分子量大的蛋白质经过的路
程短，所需时间长。
(4)为进步确定贝莱斯芽孢杆菌的分泌物中是否合有淀粉酶，所以培养基中加入淀粉，如果产生了淀粉酶，
则淀粉会被分解，形成透明圈，因此可以通过培养基上的菌落周围是否出现透明圈作出判断。
(5)探究贝菜斯芽孢杆菌分泌物提取液对尖孢镰刀菌起抑制作用的最低使用浓度，自变量是分泌物提取液的
浓度，所以实验思路是配置不同浓度的贝莱斯芽孢杆菌分泌物提取液，分别加入到灭菌后的培养基中（设
置加入无菌水的培养基作为空白对照），接种尖孢镰刀菌，观察菌种生长情况，以不长菌的最低浓度为最
低抑菌浓度。
【点睛】本题考查微生物的分离的知识，要求考生识记相关知识，意在考查学生识记所学知识要点，把握
知识间的内在联系，形成知识网络的能力，同时获取题干信息准确答题。
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