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专题06 生物技术与工程相关实验
实验一 制作传统发酵食品
核心知识回顾
一、制作果酒和果醋
1．制作原理：许多新鲜水果(如葡萄)的果皮表面附着有大量的不同种类的野生酵母菌。在它们的作用下，
水果可以发酵成果酒。在有氧条件下，果酒经醋酸菌的作用还可以进一步发酵成果醋。
2．方法步骤
器具消毒—将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精清洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用。止
污染发酵液
冲洗葡萄—取新鲜葡萄，用清水冲洗1~2 次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
防止冲洗掉葡萄皮上野生的酵母菌；防止污染发酵液
榨汁——用榨汁机榨取葡萄汁，并装入发酵瓶中，留有大约1/3 的空间，盖好瓶盖
防止发酵液溢出，并且酵母菌可以进行有氧呼吸大量繁殖
酒精发酵—发酵温度控制在18~30℃,时间控制在10~12d,每隔12 h 左右将瓶盖拧松一次
创造无氧环境进行酒精发酵，并可以防止好氧型微生物污染发酵液
醋酸发酵—葡萄酒制作完成后，打开瓶盖，盖上一层纱布，发酵温度为30~35 ℃,时间为7~8 d
创造有氧环境进行醋酸发酵
3.发酵反应式
果酒制作
果醋制作
4．结果分析与评价
(1)在制作果酒和果醋的过程中，发酵液分别有哪些变化？
项目
酒精发酵
醋酸发酵
气味和味道
酒味
酸味
气泡和泡沫
有
无
发酵液颜色
颜色加深变成深红色(以紫葡萄作原料)
浑浊，液面形成白色菌膜
(2)如何防止其他微生物对果酒发酵的影响：在制作果酒的过程中，除了酵母菌，果酒中还有乳酸菌、醋
酸菌等微生物。乳酸菌可能分解果酒中的糖等，从而使果酒变质。可以通过改变发酵的温度、果酒的
pH
等
实验概览
目录索引
实验一：制作传统发酵食品
实验二：酵母菌的纯培养
实验三：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
实验四：菊花的组织培养
实验五：DNA 的粗提取与鉴定
实验六：DNA 片段的扩增及电泳鉴定
核心知识回顾
核心知识辨析
深化拓展提能
题组专项训练（高考真题感知+针对训
练）
1
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控制乳酸菌的含量。醋酸菌可以将糖或乙醇转化为乙酸，由于醋酸菌在有氧的条件下才能进行旺盛的代谢
活动，因此在制作果酒的过程中尽量减少氧气含量，可以抑制醋酸菌的生长繁殖。此外，通过改变发酵的
温度、果酒的
pH
等同样可以控制醋酸菌的含量。
5．请分析果酒、果醋制作中发酵装置图中各结构的作用。
装置图
结构
作用
充气口
①乙酸发酵时连接充气泵，输入无菌空
气；
②制果酒时关闭充气口
排气口
用来排出CO2
长而弯曲的胶管
防止空气中微生物的污染
出料口
便于取料，及时监测发酵进行的情况
二、制作泡菜
1．制作原理
利用植物体表面天然的乳酸菌进行发酵。发酵期间，乳酸不断积累。当乳酸的质量分数为0.4%～0.8%时，
泡菜品质、口味最佳。
2．方法步骤
配制盐水
↓
原料加工
↓
装坛
↓
封坛发酵
↓
成品
【核心归纳】
(1)配制盐水时以下物质或操作的作用或目的：
①盐的作用：调味、抑制微生物生长，所以盐含量过低会造成细菌污染。
②煮沸的目的：杀菌
( 杀灭水中的微生物及除去水中氧气
) 。
③冷却的目的：为了不影响乳酸菌等微生物的生命活动。
（2）泡菜发酵过程中乳酸菌数量、乳酸含量和亚硝酸盐含量的变化情况
发酵
时期
乳酸菌数量
乳酸含量
亚硝酸盐含量
初期
少(O2抑制乳酸菌活动)
少
增加(硝酸盐还原菌的作用)
中期
最多(乳酸抑制其他微生
物活动)
增多
开始下降(硝酸盐还原菌受抑
制，部分亚硝酸盐被分解)
后期
减少(乳酸积累，pH 下
继续增多，最后保
继续下降，最后相对稳定(硝酸
2
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降，抑制乳酸菌活动)
持稳定
盐还原菌被完全抑制)
曲线
3．制作泡菜的注意事项
(1)用于制作泡菜的蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中的亚硝酸盐含量相对较高。
(2)用清水和食盐配制质量分数为5%～20%的盐水。食盐的用量过高，乳酸发酵受抑制，泡菜风味差；用
量过低，杂菌易繁殖，导致泡菜变质。盐水要煮沸后冷却，煮沸的作用：一是除去水中的氧气，二是杀灭
盐水中的其他微生物。
(3)控制严格的厌氧条件的措施
①选择合适的发酵容器，如泡菜坛，这是一种既科学又简单的厌氧发酵容器。
②盐水煮沸后冷却待用。
③装坛时压实，使盐水没过全部菜料。
④泡菜坛用水封口不让空气进入，创造一个封闭无氧的环境，发酵期间不宜开盖，并注意在发酵过程中经
常向水槽中补充水。
(4)控制适宜的发酵温度：温度过高易导致杂菌滋生；温度过低不利于乳酸发酵，会使发酵时间延长。
(5)控制发酵时间：一般在腌制10 天后，亚硝酸盐含量开始下降。但泡菜发酵时间并不是越长越好，一方
面，发酵时间过长，可能会产生其他有害物质；另一方面，发酵时间过长，乳酸含量过高，口味不佳。
核心知识辨析
1．果酒及果醋的制作均可通过气泡的产生情况判断发酵进展程度( )
2．果醋制作时，需用温水对醋酸菌进行活化处理( )
3．酿酒过程中密封的时间越长，酵母菌产生的酒精量就越多( )
4．果酒发酵过程中，每隔12 h 左右将瓶盖打开一次进行排气。（选择性必修3 P7）( )
5．制作果酒、果醋时，取新鲜葡萄，应先去除枝梗，再用清水冲洗1～2 次。（选择性必修3 P7）( )
6．多种微生物参与了豆腐的发酵，如酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是曲霉。( )
7．在制作葡萄酒的过程中，应先去除葡萄的枝梗，再进行反复冲洗，这样才可以洗得彻底( )
高考真题剖析
（2023·浙江·统考高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要
有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌
在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。
3
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1．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确
的是（ ）
A．有氧呼吸产生的[H]与O2结合，无氧呼吸产生的[H]不与O2结合
B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行
C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放
D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化
2．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（ ）
A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖
B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测
C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严
D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．泡菜制作的步骤主要包括①沸盐水冷却后倒入坛中，浸没全部菜料，装至八成满；②盖好坛盖后，向
坛盖边沿的水槽中注满水；③在发酵过程中注意经常向水槽中补充水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。相
关叙述正确的是（ ）
A．①过程中装入的蔬菜需要经过灭菌处理
B．②过程是为了让坛内形成绝对无氧的环境
C．各地都能制作泡菜，温度对发酵时间没有影响
D．④的结果通常是亚硝酸盐含量先升高后降低
2．绍兴是黄酒之乡，“麦曲酶长，酵米复芳；白梅酒娘，伴淋寒香；压滤琼浆，煎煮陈藏”是对绍兴黄
酒精致复杂酿造工艺的描述。在黄酒的主发酵过程中，“开耙”（搅拌）是极为关键的一步。下列相关叙
述错误的是（ ）
A．陈藏需要在低温、密闭环境中进行，形成更芳香的酒
B．接种麦曲有利于淀粉的糖化，有利于“酒娘”菌种发酵
C．发酵过程中“开耙”可适当提供O2，增加酵母菌数量，活化酵母
D．煎煮的目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
3．酸笋是螺蛳粉的灵魂，腌酸笋季节在春季。当竹子出笋后，长出约30cm 高时便可砍下，剥去笋壳，切
成块或是切成笋丝、笋片，放于陶罐中，清水过面，撒上适量食盐，置于阴凉处一个月左右，酸味即出，
便可随食随取。下列相关叙述错误的是（ ）
A．制作酸笋所需菌种的代谢类型为异养厌氧型
B．为保证发酵成功，需将鲜笋和陶罐用沸水泡烫片刻
C．“清水过面”是为了创造无氧环境，减少杂菌污染
D．在制作酸笋时若加入“陈酸笋水”可加速发酵进程
4．酱油起源于我国，迄今已有3000 多年的历史。 由于风味独特、营养价值丰富，酱油已成为我国饮食中
不可或缺的调味品。制作时用大豆、小麦或麸皮为原料，利用多种微生物发酵而成。酱油发酵的大致过程
如下图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
4
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A．接种冷冻保存的酵母菌前要对其进行扩大培养
B．发酵产生的多种代谢产物构成酱油独特的风味
C．在加入酵母菌或乳酸菌前，需要对第一阶段的发酵产物进行灭菌处理
D．酵母菌、乳酸菌的发酵产物以及食盐均能起到抑制杂菌、终止发酵的作用
5．葡萄酒开启后，敞口时间稍长或将余酒倒回酒瓶中，贮存温度在30℃左右，葡萄酒会缓慢“变成”葡
萄醋。下列相关叙述错误的是（ ）
A．酿造葡萄酒和葡萄醋所利用微生物的主要区别是有无以核膜为界限的细胞核
B．酿造葡萄酒和葡萄醋所利用的微生物都能通过线粒体进行需/有氧呼吸
C．把葡萄酒缓慢“变成”葡萄醋的微生物可能来自空气
D．葡萄酒变成了葡萄醋是因为乙醇通过醋酸菌的有氧呼吸作用下生成了醋酸
6．下列关于传统发酵技术的说法，正确的是（ ）
A．制作腐乳过程中主要利用毛霉将蛋白质分解成肽和氨基酸
B．制作泡菜过程中先将蔬菜装至八成满，然后迅速倒入煮沸冷却的盐水
C．当缺少糖源时醋酸菌进行无氧呼吸将乙醇转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸
D．制作果酒过程中应先将去除枝梗的葡萄用清水冲洗1～2 次，然后晾干备用
B 组(选择题为不定项)
1．山西老陈醋含有多种营养成分，具有调节血脂、保护肝脏等功效，其制作工艺如下图。下列叙述正确
的是（ ）
高粱→蒸煮→拌大曲→酒精发酵→醋酸发酵→熏醅→淋醋→陈酿
注：以大麦、豌豆等原料制成的大曲，含有多种与发酵有关的微生物。
A．蒸煮可杀死高粱中的微生物，再通过拌大曲加入发酵所需菌种
B．酒精发酵起主要作用的是酵母菌，通常前期通气后期密封发酵
C．醋酸发酵起主要作用的是醋酸菌，较前一阶段需适当降低温度
D．醋酸发酵过程发生的主要反应为乙醇先转化为乙醛再生成乙酸
2．红酸汤颜色鲜红、气味清香、味道酸爽，利于人体肠道益生菌生长。制作时选用西红柿洗净晒干搅成
茸泥，加入剁碎的仔姜、大蒜和辣椒，一定量的食盐、糯米和白酒，混合拌匀装坛后密封发酵。下列相关
叙述正确的有（ ）
A．食盐、大蒜和辣椒等既可调味又可抑制杂菌生长
B．发酵时常加入成品红酸汤，可增加醋酸菌含量，缩短制作时间
5
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C．装坛时必须装满并在盖上坛盖后水封，以实现密封发酵
D．出坛后的酸汤若不及时食用，会因酵母菌繁殖长出一层白膜
3．利用卷心菜发酵制作泡菜的过程中，乳酸菌、酵母菌细胞数量和pH 的变化如图所示。下列叙述正确的
是（ ）
A．酵母菌和乳酸菌均有由核膜包被的细胞核B．发酵初期乳酸菌建立了明显的菌种优势
C．前6 天pH 下降主要由乳酸菌代谢引起D．发酵中期酵母菌通过无氧呼吸获取能量
4．甜酒，又称江米酒，主要原料是糯米，其口味香甜醇美，乙醇含量极少，因此深受人们喜爱。发酵菌
主要是根霉菌和酵母菌，其中根霉菌能将糯米中的淀粉转化为麦芽糖和葡萄糖，酵母菌能将葡萄糖转化为
酒精。下列相关叙述正确的是（ ）
A．根霉菌能将淀粉转化成麦芽糖和葡萄糖，原因是其能产生淀粉酶
B．酵母菌通过无氧呼吸将葡萄糖转化成酒精和二氧化碳，酿酒酵母最适生长温度约为28℃
C．可用斐林试剂和酸性重铬酸钾溶液检验甜酒是否制作成功
D．制作甜酒的过程中，发酵早期无CO2产生，发酵后期有CO2产生
5．某醋厂和啤酒厂的工艺流程如图所示。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀
粉水解过程。下列相关叙述正确的有（ ）
A．糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的是利于糖化和灭菌
B．发酵原理是利用真菌的无氧呼吸与细菌的有氧呼吸
C．醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，可控制发酵温度和改善通气状况
D．啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间
6．2022 年3 月15 日晚，央视3·15 晚会曝光不良企业采购“土坑酸菜”冒充老坛酸菜，而且卫生质量低劣，
备受人们关注。其实泡菜的制作对工艺流程要求非常高，如图为某食品公司安检人员所记录的检测结果，
下列相关叙述正确的是（ ）
6
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A．泡菜制作过程中，pH 呈下降趋势，是酵母菌无氧呼吸所致
B．据图可知食盐浓度和腌制时间均会影响亚硝酸盐的含量变化
C．亚硝酸盐的含量达到峰值后会逐渐降低，可能与乳酸菌产生的亚硝酸还原酶量增多有关
D．泡菜制作过程中泡菜坛内出现的白膜由乳酸菌大量繁殖形成
7．鱼茶味酸而微咸，甘香可口，是海南黎族的一种传统发酵食品。鱼茶富含多种人体所需的氨基酸和蛋
白质，具有润肺清肠、促进消化、养颜美肤和缓解血管硬化等作用。其制作方法是：将生鱼开膛洗净，去
头去尾，加盐、姜、蒜等处理后，拌入煮熟的米饭，在特定条件下发酵一段时间后，开坛即可食用，并且
发酵后的鱼肉蛋白质更容易消化、吸收。已知鱼茶的发酵菌群主要是乳酸菌。回答下列有关问题：
(1)写出乳酸菌分解葡萄糖产生乳酸的反应简式： 。根据乳酸菌的代谢特点，制作鱼茶时发酵装置的充
气口应 （填“打开”或“关闭”）。
(2)不能将煮熟的米饭立即与处理后的生鱼混合并搅拌，原因是 。
(3)下图1 是某生物科研小组绘制的鱼茶发酵过程中各菌种数量及发酵液 pH 的变化曲线。
①鱼茶发酵初期，各菌种的种间关系主要是 ，发酵6 天后醋酸菌消失的主要原因可能是 ，8 天后
酵母菌消失的主要原因可能是
②用稀释涂布平板法统计菌种数量时，统计的菌落数往往 （填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌
数，原因是 。若其中 个平板的菌落分布如图2 所示，推测该同学接种时可能的操作失误是 。
实验二 酵母菌的纯培养
核心知识回顾
7
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(一)原理：微生物群分散或稀释成单个细胞，单个细胞繁殖成单个菌落。
菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞
群体，这就是菌落。
(二)方法：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌
落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
(三)步骤
(1)制备培养基
配制培养基―→灭菌―→倒平板。
倒平板注意事项：①温度：50 ℃左右；②操作：在酒精灯火焰附近；③冷凝后平板倒置。
(2)接种和分离酵母菌
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线
后培养，可以分离得到单菌落。
(3)培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28 ℃左右的恒
温培养箱中培养24～48 h。
【核心归纳】
1．配制培养基的注意事项
(1)如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后，灭菌之前进行操作。
(2)培养基灭菌后要冷却到50 ℃左右时开始倒平板。其原因是琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44
℃以下凝固，倒平板时温度高于50 ℃会烫手，低于50 ℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。
(3)倒平板时，要使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
(4)平板冷却凝固后，要将平板倒置。
(5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微
生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
2．平板划线法接种菌种时，可防止杂菌污染的操作
(1)接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。
(2)划线操作在酒精灯火焰旁进行。
(3)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰。
(4)划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划线，划线后及时盖上皿盖。
3．实验结果的分析
(1)培养未接种的培养基的目的是检测培养基是否被杂菌污染(或检查培养基制备是否合格)。未接种的培
养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若无菌落生长，则说明未被污染。
(2)在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小上相似，酵母菌菌落一
般表面光滑，多呈乳白色。
(3)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被
杂菌污染。
4.灼烧接种环的目的
灼烧时期
目的
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取菌种前
杀死接种环上原有的微生物
每次划线前
杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上次划线
的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
接种结束后
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
核心知识辨析
1．配制培养基时应先灭菌再调pH。 ( )
2．平板划线法中每一次划线前要将接种环灼烧。 ( )
3．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。 ( )
4．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料（如培养基、接种环等）都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭
菌。( )
5．划线结束时即可看到划线末端出现不连续单菌落( )
6．用平板划线法进行酵母菌的分离时，必须一次连续划线完成接种操作( )
高考真题剖析
1．（2023·浙江·统考高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，
划线接种于一定NaCl 浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ）
A．培养基pH 需偏碱性
B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种
C．需在无氧条件下培养
D．分离得到的微生物均为乳酸菌
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。 如图为某同学接种后培养得到的结果，
推测该同学的接种方法及操作失误是（ ）
A．稀释涂布平板法，菌液浓度过高
B．平板划线法，接种环未灼烧灭菌
C．稀释涂布平板法，菌液未涂布均匀
D．平板划线法，菌液未涂布均匀
2．高浓度的铵盐对海水养殖中的对虾有一定的毒害作用，是制约其大规模养殖的环境因素之一，具有高
降解能力的硝化细菌可有效净化水体中铵盐，降低对虾的死亡率。科研人员从当地对虾养殖池塘中筛选出
对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，将等量的三种候选菌甲、乙、丙分别接入等浓度的含铵盐培养液
中，在适宜条件下培养一段时间后检测培养液中的铵盐浓度，操作流程如图1 所示，结果如图2 所示。下
列叙述正确的是（ ）
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A．图1 中M 培养基上进行的是利用平板划线法纯化菌种，该过程中接种环需要灼烧5 次
B．图1 中将候选菌接入含铵盐培养液的目的是对硝化细菌扩大化培养，需要不断振荡
C．据图2 分析，应选择候选菌甲作为菌种进行后续培养
D．当配制选择培养基时，需要以铵盐为唯一氮源从而筛选出硝化细菌
3．科研人员将生活在滨海盐渍土的野生大豆的根瘤研磨，将研磨液置于酵母甘露醇肉汤（YMB）培养液
中培养，获得耐盐固氮菌株。取普通大豆幼苗若干，甲组用菌株悬液接种，乙组不接种，用150mmol/
LNaC1 处理两组幼苗，观察比较两组大豆生长状况。相关叙述错误的是（ ）
培养基
成分及含量（g/L）
pH
酵母甘露醇肉汤
（YMB）
酵母提取物20.0、甘露醇5.0、K2HPO45.0，MgSO40.5、NaCl0.186、
CaCO31.2
6.8-7.2
A．YMB 培养基高压蒸汽灭菌完成后需要调节pH
B．YMB 培养基的作用是筛选和富集耐盐固氮菌
C．本实验目的是研究耐盐固氮菌能否改善盐胁迫下普通大豆的生长状况
D．若甲组大豆生长状况明显优于乙组，则耐盐固氮菌可用于提高盐碱地的利用率
4．超市中酸奶的配料表显示其有乳杆菌、嗜热链球菌等乳酸菌。研究小组计划将酸奶中的不同乳酸菌进
行分离纯化，下列操作的顺序正确的是（ ）
①高压蒸汽灭菌、倒固体平板
②将酸奶进行系列稀释
③准备水、培养皿并配制培养基
④挑取单菌落接种到斜面培养基
⑤用涂布器涂布并进行37℃厌氧培养
A．①→②→③→④→⑤
B．③→①→②→⑤→④
C．①→③→②→⑤→④
D．②→③→①→④→⑤
5．L-天冬酰胺酶由细菌和真菌合成，可分解天冬酰胺释放出氨，然后与奈斯勒试剂反应呈棕色。为筛选
获得L-天冬酰胺酶高产菌株，设计了如下固体培养基。固体培养基：主要成分有牛肉膏、蛋白胨、水、
NaCl、琼脂、奈斯勒试剂。实验结果如下图。下列叙述错误的是（ ）
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A．根据实验结果可知，接种时采用的是稀释涂布平板法
B．应选择菌落C 作为高产L-天冬酰胺酶菌株进行大量培养
C．该培养基从功能来看属于选择培养基，其中充当氮源的成分是牛肉膏
D．无菌技术还可以避免操作者被有害微生物感染，实验结束后的培养基不能直接丢弃
6．在器械灭菌时，通常会在高压蒸汽灭菌锅中放置生物指示剂来检验灭菌效果，自含型生物指示剂如图
所示。为检验生物指示剂是否出现阳性变化，需用工具在塑料瓶外挤破安瓿瓶，使菌片浸没在培养液内。
最终根据灭菌与未灭菌的生物指示剂的阳性变化情况，判断器械灭菌效果。下列叙述错误的是（ ）
A．安瓿瓶中培养液的作用是使芽孢复苏
B．菌片中芽孢的耐热性大于器械上的可能污染菌
C．挤破安瓿瓶后，需培养一段时间再观察是否出现阳性变化
D．若灭菌与未灭菌的生物指示剂均不出现阳性变化，则说明灭菌效果良好
B 组(选择题为不定项)
1．某地土壤有机物X 污染严重，为改善土壤环境，研究人员从土壤中分离出可高效降解有机物X 的细菌
菌株。以下是研究人员分离细菌菌株的示意图。下列说法错误的是（ ）
A．制备降解X 的细菌初筛平板时，调节pH、湿热灭菌后分装到培养皿
B．实验结果显示E 是降解X 较理想的菌株，可将其进一步划线纯化
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．纯化培养时应用涂布器从盛有菌液的试管中蘸取菌液均匀涂布于平板上
2．某同学在实验室进行了酵母菌的纯培养实验，酵母菌培养基的配方如下表所示。下列有关该实验的叙
述正确的是（ ）
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组分
马铃薯滤
液
葡萄糖
琼脂
加水定容至
含量
200g
20g
15g
1000mL
A．该培养基是选择培养基，葡萄糖不是酵母菌生长繁殖的唯一碳源
B．含培养基的锥形瓶、培养皿用牛皮纸包扎后进行干热灭菌法灭菌
C．若以平板划线法纯化酵母菌菌种，接种环的灼烧次数与划线次数相同
D．倒平板冷却后的培养皿和接种酵母菌的平板都要倒置在恒温培养箱中
3．营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。下图是科研
人员利用影印法（用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培
养基上）初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。相关说法正确的是（ ）
A．①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿不能立即进行倒置培养
B．紫外线处理的目的是提高菌种突变率且一定能产生目标菌
C．进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至完全培养基上，再“复印”至基本培养基上
D．完全培养基上的菌落A 在基本培养基对应位置不存在，说明其为氨基酸缺陷型菌落
4．生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组
把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板上划
分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示，下列说法正确的是
（ ）
A．倒成平板后直接培养可判断有无污染
B．制备平板时，培养基需先灭菌再倒平板
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C．生长图形法还可用于某些菌种的筛选
D．图示结果表明该菌需要生长因子乙或丙
5．将酵母菌接种在装有10mL 培养液的试管中，放在适宜条件下连续培养七天，每天定时取样，稀释100
倍，用25（中方格）×16 的血细胞计数板对酵母菌计数，最终构建酵母菌种群数量变化曲线模型。下列说
法正确的是（ ）
A．估算酵母菌的数量可以采用抽样检测法和稀释涂布平板法
B．试管中酵母菌种群数量达到K 值前，密度对其增长的制约逐渐减弱
C．给营养充足的培养液中通入氧气不会影响酵母菌种群的K 值
D．若每个中方格中酵母菌平均数量为30 个，则10mL 培养液中的酵母菌数量为7．5×109个
6．鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度酎盐，可引起人类肺炎等疾病。在血平板（培养基添加
适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色，下图为检测鲜牛奶被金黄色葡萄球菌污染的
操作流程，下列叙述正确的是（ ）
A．使用后的液体培养基可以直接丢弃
B．肉汤培养基加入一定量NaCl 的目的是维持微生物细胞的渗透压
C．振荡培养可以使微生物与营养物质充分接触，更有利于微生物的生长
D．血平板上的接种方法是平板划线法，血平板上出现周围透明的溶血圈
7．自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构
使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供
和维生素等。
(2)A 菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A 菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成
薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，
依次分别涂布于不同的浑浊薄层上，涂布过程中，涂布器用 的方法灭菌。培养一段时间后，
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能溶解A 菌的菌落周围会出现 。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P 菌。
(4)为探究P 菌溶解破坏A 菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材
料和设备：P 菌、A 菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。
实验三 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
核心知识回顾
1．实验设计
(1)土壤取样
①土壤要求：酸碱度接近中性且潮湿。
②取样部位：距地表约3 ～
8 cm
的土壤层。
(2)样品的稀释
测定土壤中细菌的数量，一般选用1×10
4 、
1×10
5 和
1×10
6 倍稀释的稀释液进行平板培养，当第一次做这
个实验时可以将稀释的范围放宽一点。
(3)微生物的培养与观察
①培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度和培养时间。细菌一般在30
～
37
℃的温度下培养1
～
2 d。
②观察
a．观察方法：每隔24 h 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
b．记录菌落的特征：包括菌落的形状、大小和颜色等。
2．操作提示
(1)无菌操作
①取土样的用具在使用前都需要灭菌。
②实验操作均应在酒精灯火焰旁进行。
(2)做好标记：本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养
皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
(3)制定计划：对于耗时较长的生物实验，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。
3.计数公式：C÷V×M。C:平均菌落数；V：稀释液体积；M：稀释倍数。
【核心归纳】
1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作中需注意的问题
(1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。
(2)恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。
(3)为增强实验说服力与准确性，设计实验时，需要涂布至少三个平板作为重复组，目的是排除实验中偶然
因素对实验结果的影响。
(4)分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。
(5)为防止培养时间不足导致菌落遗漏，在菌落计数时，每隔24 h 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定
时的记录作为结果。
(6)统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少。
核心知识辨析
1．用来分离产脲酶的细菌的平板上，能产生脲酶的菌体呈红色( )
2．筛选分解尿素的细菌时，培养基中唯一的营养物质是尿素( )
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3．分离以尿素为氮源的微生物实验中所需的土样可以从有鸟类排泄物的地方获取( )
4．分泌脲酶的微生物是将脲酶分泌到细胞外，所以脲酶是胞外酶，需要内质网、高尔基体对其进行加工(
)
5．在分离以尿素为氮源的微生物实验中，碳源是培养基中琼脂糖( )
6．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同( )
7．当牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显小于选择培养基上的菌落数目时，说明选择培养基已筛选出
一些细菌菌落( )
高考真题剖析
1．（2022·江苏·统考高考真题）下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（ ）
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．在鉴别培养基中添加适量的溴甲酚紫可用于分离和筛选产生代谢酸（有机酸）的微生物。如果培养基
的颜色由紫色变成了黄色则说明其中的微生物能产生代谢酸。下列相关分析与实际相符的是（ ）
A．将泡菜水加入含溴甲酚紫的鉴别培养基后在恒温有氧的条件下培养48h 后会出现紫色→黄色的颜色
变化
B．将醋酸菌接种在含溴甲酚紫的鉴别培养基后在恒温有氧的条件下培养 48 h 后会出现紫色→黄色的
颜色变化
C．将土壤中的尿素分解菌接种在含溴甲酚紫的鉴别培养基后在恒温且严格无氧的条件下培养 48 h 后
会出现紫色→黄色的颜色变化
D．将酵母菌接种在含溴甲酚紫的鉴别培养基后在有氧或无氧条件下培养 48 h 都会出现紫色→黄色的
颜色变化
2．如下图为研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的意图，有关叙述不正确的是（ ）
A．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，以获得单细胞形成的菌落
B．配制步骤②、③的培养基都要进行严格灭菌
C．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
D．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
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3．幽门螺杆菌（Hp）生存于人体胃的幽门部位，能够引起慢性胃炎等胃部疾病。尿素在酶的作用下分解
产生NH3和CO2。体检时常用
14C 呼气试验来诊断测试者是否感染Hp，测试者口服含
14C 标记的尿素胶囊，
一段时间后通过测定呼出的气体是否含有
14CO2来诊断是否感染Hp。医务工作者也可以采集胃病患者样本
进行微生物的纯化操作，判断是否感染Hp。下列相关分析错误的是（ ）
A．呼气试验的前提是Hp 能合成和分泌脲酶，从而催化尿素分解.
B．对样本进行微生物的纯化操作时，一般采用固体培养基
C．筛选Hp 的培养基应以尿素为唯一氮源，能抑制杂菌生长
D．在培养基中可加入醋酸洋红液来鉴定是否分离得到了Hp
4．尿素分解菌体内的脲酶能够把尿素（CH4N2O）分解为氨（NH3）和CO2，进而利用氨合成一些所需的
物质。尿素分解菌的分离与纯化的培养基通常只需要将细菌的完全培养基中的氮源作一些调整。下列有关
叙述正确的是（ ）
A．尿素分解菌为自养生物，属于生产者
B．尿素能为尿素分解菌提供碳源和氮源
C．尿素分解菌的分离纯化需以尿素为唯一氮源
D．其他杂菌无法在分离纯化残留的培养基上生长
5．长期放置的酒表面会出现一层膜，这层膜是醋酸菌在液体表面繁殖形成的( )
6．下列与某实验小组分离产脲酶菌的实验设计相关的说法，不合理的是（ ）
A．可选择富含尿素的土壤作为样品来分离目的菌株
B．能分解酚红指示剂使其褪色的是产脲酶菌株
C．富集培养的目的是增加目的菌的浓度
D．在选择培养基中添加尿素作为唯一氮源
7．下列有关土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验描述错误的是（ ）
A．土壤中的细菌，绝大多数分布在距离地表约3～8cm 的土壤中，取样时一般铲去表层土
B．测定土壤中细菌的数量，一般选用102、103、104倍数的稀释液进行平板培养
C．取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌
D．在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作
B 组(选择题为不定项)
1．下列有关“探究1g 土壤中有多少能分解尿素的细菌的实验”叙述正确的是（ ）
A．一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养，初次做实验范围可放宽
B．证明选择培养基起到了选择作用，则需要接种了的牛肉膏蛋白胨培养基做对照
C．证明选择培养基未被污染，则需要设置空白培养基做对照
D．通过选择培养基筛选出来的细菌都能分解尿素
2．下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释过程示意图。请据图分析，下列说法
正确的是（ ）
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A．用涂布平板法不仅可以对微生物进行计数，也可以用于接种微生物
B．用⑤号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落，涂布平板所用的培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养
基
C．⑤号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为1.7×109个
D．还可以用血细胞计数板统计细菌数目，此方法统计结果往往偏小
3．如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的过程示意图，有关叙述错误的是（ ）
A．在配制步骤②、③的培养基时，都应添加琼脂
B．步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
C．步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
D．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，可通过比较溶液pH 的变化大小来比较细菌分解尿素的能
力
4．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法，错误的是（ ）
A．每个稀释度下做一个菌落数目在30～300 的平板，则说明稀释操作比较成功
B．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基起到了选择作用
C．每个稀释度下要做一个空白平板，且可以在下次实验时重复使用，以节省成本
D．有时不用改变培养基的成分，也能筛选出所需的微生物
5．金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，在血平板（完全培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌
落周围的红细胞，使其褪色。某研究小组利用微生物选择培养技术，测定了某处土壤中金黄色葡萄球菌数
量。下列说法正确的是（ ）
A．从功能上分类，血平板属于选择培养基
B．倒平板前待培养基冷却至室温后加入血液，以免高温破坏血细胞
C．待涂布的菌液被培养基吸收后应倒置培养，防止水分过度蒸发
D．应将菌液稀释合适的倍数以获得菌落数在30-300 的平板进行计数
6．亚磷酸盐是一种特殊的磷源，下图是研究人员筛选、检测并保存高效利用亚磷酸盐细菌的过程。相关
叙述正确的是（ ）
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A．图中所用的培养基都应以亚磷酸盐为唯一磷源，并加入琼脂
B．步骤①的目的是便于精确计算土壤中能利用亚磷酸盐的微生物数量
C．步骤②采用涂布平板法接种，根据菌落的形态、大小、颜色等对菌种做初步鉴定
D．步骤③检测细菌利用亚磷酸盐的能力，步骤④将优良菌种保存于斜面培养基上
7．I 某学校生物兴趣小组验证牛的成熟红细胞吸收葡萄糖的方式为协助扩散，而非主动运输。现提供如下
材料：牛的成熟红细胞若干、培养瓶、葡萄糖浓度测试仪、蒸馏水、5%的葡萄糖溶液、5mL 葡萄糖载体抑
制剂和5mL 呼吸抑制剂等，请完善如下实验过程。
实验原理：主动运输需要载体和消耗能量，协助扩散需要载体和具有浓度差。
(1)实验步骤：
①取三个培养瓶，编号A、B、C，向三个培养瓶中分别加入等量的牛的成熟红细胞和5%的葡萄糖溶液。
② 。③ 。
(2)请写出预期结果和实验结论。
结果
实验结论
II 某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了随机取样、系列梯度稀释、涂布
平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如下：
请分析并回答下列问题：
(3)该实验中含有琼脂的培养基从物理性质来说，属于 培养基，培养基中只选择了 作为唯一氮源。
(4)分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为 。
(5)在采用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，需要进行梯度稀释的原因是 。
(6)实验结果：6 号试管涂布的三个平板的菌落数为550、501、688，7 号试管涂布的三个平板的菌落数为
58、73、97，8 号试管涂布的三个平板的菌落数为8、15、28．该10 g 土壤样品中含有分解尿素的细菌的
估算数目是 个。
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实验四 菊花的组织培养
核心知识回顾
1．植物组织培养的理论基础：植物细胞的全能性。
2．植物组织培养的条件：(1)离体；(2)无菌；(3)培养基；(4)适宜的培养条件。
3.体现细胞全能性的条件
材料
离体的细胞、组织或器官
培养基
种类齐全、比例合适的营养物质及一定比例的植物激素
外界条件
(1)无菌操作；
(2)光照：诱导愈伤组织时一般不需要光照，再分化时需要光照
4.实验步骤
5.生长素和细胞分裂素用量的比例对植物细胞发育方向的影响
生长素用量与细胞分裂
素用量的比值
结果
比值高
有利于根的分化，抑制芽的形成
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比值低
有利于芽的分化，抑制根的形成
比值适中
促进愈伤组织的形成
核心知识辨析
1．试管苗在移栽时不需要在培养间进一步培养( )
2．菊花组织培养过程中从外植体的分割到炼苗都需要在无菌条件下进行( )
3．培养基质中的蛭石和珍珠岩要用高压蒸汽灭菌锅灭菌，冷却待用( )
4．脱分化需要适宜光照，再分化不需要光照( )
5．对外植体进行消毒时，消毒剂的选择以及处理时间应以“能杀死外植体表面的微生物，且对植物细胞
的伤害尽量小”为原则( )
6．植物组织培养的脱分化和再分化过程一般需要调控植物激素的种类( )
7．植物的每个细胞在植物体内和体外都能表现出全能性( )
高考真题剖析
1．（2022·浙江·高考真题）下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（ ）
A．用自然生长的茎进行组培须用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠的混合液消毒
B．培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换
C．组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质的原因是蛭石带菌量低且营养丰富
D．不带叶片的菊花幼茎切段可以通过器官发生的途径形成完整的菊花植株
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．铁皮石斛是非常好的药材，但因为铁皮石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，再加上人们掠夺式采挖，资
源已接近枯竭，植物组织培养技术为铁皮石斛的繁殖提供了新思路。下列相关叙述正确的是（ ）
A．利用铁皮石斛的体细胞进行组织培养的过程中发生了染色体数目的变异
B．诱导愈伤组织形成和后续培养过程中，每日需要给予适当时间和适当强度的光照
C．为获得无菌培养物，除了要无菌操作外，还需要对铁皮石斛的外植体进行严格灭菌
D．植物组织培养过程中用适当诱变因素处理，可能筛选到高产的突变体进而培养成新品种
2．植物组织培养技术常用于商业化生产，其过程一般为：建立无菌培养物→培养物增殖→生根培养→试
管苗移栽及鉴定。下列相关叙述错误的是（ ）
A．建立无菌培养物时需分别用酒精和次氯酸钠溶液对叶片、茎尖、花药等进行消毒处理
B．外植体需置于脱分化培养基中，诱导形成不定形的愈伤组织，此组织细胞全能性较高
C．生根培养基中细胞分裂素与生长素的含量比值应大于1，生根培养需给予适当时间的光照
D．若培育的是耐盐植株，则可将获得的试管苗移栽于含高盐土壤中进行筛选后，再推广栽培
3．浠水县清泉镇金宝山村通过植物组织培养复壮中药材白芨种苗，带动周边400 多名农民增收致富。下
列有关植物组织培养的说法正确的是（ ）
A．植物组织培养时，对外植体可用75%的酒精进行灭菌
B．取白芨茎尖进行植物组织培养，可获得不带病毒的抗病毒苗
C．植物组织培养一般先诱导生芽后诱导生根
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D．诱导愈伤组织形成时需要每日给予适当时间的光照
4．某种名贵植物通常用无性繁殖的方式进行繁殖，但容易将感染的病毒传给后代。某技术中心计划获取
该种植物的脱毒苗，技术路线如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．由愈伤组织到脱毒苗需要经过脱分化、再分化等过程
B．外植体可以选择该种植物的茎尖分生组织
C．制备培养基时需要在培养基中添加琼脂等成分
D．生长素/细胞分裂素的值较高时有利于根的分化
5．为实现多肉植物的规模化生产，科研人员开展了如下研究。相关叙述错误的是（ ）
A．过程①宜选择幼嫩的叶片，分别用次氯酸钠和70%的酒精消毒处理
B．过程②应避光培养，防止愈伤组织分化成筛管、维管等
C．过程③应配制2 种培养基，其主要目的是满足不同阶段试管苗对特定激素的需求
D．过程④应在珍珠岩基质中添加适量蔗糖，为幼苗生长提供碳源
6．理论上来说，正常的植物细胞都具有全能性。下列有关植物细胞全能性的叙述，错误的是（ ）
A．植物细胞具有全能性的原因是细胞中含有与发育成完整个体的全部信息
B．一粒玉米种子发育成完整植株的过程体现了植物细胞全能性
C．一般来说，植物体内分化程度越高的体细胞，其全能性越低
D．花药在体外被诱导成完整的单倍体植株不能体现体细胞全能性
B 组(选择题为不定项)
1．铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。下图表示利用铁皮石斛新生营养芽诱导培育出
的拟原球茎(简称PLBs，类似愈伤组织)，在不同条件下生产生物碱的实验结果。下列叙述不正确的是（
）
A．实验前需对实验中使用的培养基和外植体新生营养芽进行消毒处理
B．选用新生营养芽的原因是其分裂能力强、全能性高且几乎不含病毒
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C．新生营养芽再分化培育出的PLBs 具有高度液泡化、呈无定形状态的特点
D．由图中曲线分析可知，光照条件下PLBs 的重量与生物碱的含量成正相关
2．下列与下图有关的说法，正确的是（ ）
A．①→③过程为有丝分裂，细胞数目增加
B．③→⑤细胞数目没有变化，但细胞体积增大，该过程表示细胞分化
C．①→②和①→④，细胞形态改变，相同形态的细胞形成了组织，所以该过程表示细胞分化
D．⑥⑦⑧表示从②中取出的一个细胞经过植物组织培养，获得了完整的植株，体现了植物细胞的全
能性
3．愈伤组织形成过程中，生长素和细胞分裂素信号通路相关基因存在DNA 和组蛋白去甲基化现象。研究
者利用桃叶片诱导愈伤组织，在培养基中添加DNA 甲基转移酶抑制剂Aza 或组蛋白去甲基化酶抑制剂
GSK，检测形成愈伤组织的面积，结果如图。据此分析不正确的是（ ）
A．实验器材、培养基和桃叶片等需经高压蒸汽灭菌处理后使用
B．具有特定形态、排列疏松、有大液泡的结构即为桃的愈伤组织
C．DNA 去甲基化和组蛋白甲基化分别促进、抑制愈伤组织形成
D．推测表观遗传影响激素的信号转导过程进而影响脱分化过程
4．藿香是一种名贵中药，但存在种质退化、易感染病虫害等问题，研究者对组织培养不同阶段的藿香辐
射处理，以期获得性状优良的突变株。据下图分析错误的是（ ）
A．②过程应持续给予光照以促进光合作用色素合成
B．②③过程都需营养物质和激素，无需更换培养基
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C．外植体经③过程诱导生芽体现植物细胞的全能性
D．辐射处理可以诱导所培养的材料发生不定向突变
5．组培苗的移栽驯化是植物组织培养成功的关键，其主要过程为：炼苗→基质灭菌→育苗盘准备→试管
苗脱瓶→移栽。下列关于该过程中注意事项的叙述，正确的是（ ）
A．炼苗：正午强光和南方光照较强地区需采取阴蓬或温室以避免灼伤小苗
B．基质灭菌：将蛭石、珍珠岩、草木灰混匀，经干热灭菌后取出立即移栽组培苗
C．试管苗脱瓶：组培苗从液体培养基中取出，使根部带上较多培养液，有利于幼苗生长
D．移栽：移栽前需喷雾洒水保持一定的湿度，之后需要逐渐降低湿度和增强光照
6．下图是某个生物技术的基本流程，下列相关叙述中，错误的是（ ）
A．该生物技术是植物细胞工程的基本技术手段，⑥中的试管苗不容易感染病毒
B．该生物技术需要在无菌条件下操作，整个过程中使用的所有培养基应保证营养物质种类齐全、比
例合适，同时在整个培养过程中都需要提供适宜的温度、光照和氧气等外界条件
C．在培养过程中，②中的细胞失去了其特有的结构和功能
D．④和⑤的培养基完全相同
7．下图为植物体细胞杂交过程示意图，请分析回答：
(1)植物原生质体融合的理论基础是 。
(2)①过程中，目前最常用的方法是 ，即在0.5～0.6mol/L 的甘露醇溶液提供的较 渗透压条件下用
水解植物的细胞壁。
(3)②过程可以用 等物理方法或用 作诱导剂的化学方法，获得的C 称为 。
(4)④和⑤过程可称为 和 。
(5)在得到融合的原生质体后，利用植物组织培养技术获得新植株。通过植物体细胞杂交和植物组织培养技
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术能使 同时在新的植物体上有所表现。
(6)若远缘杂交亲本A 和B 都是二倍体，则理论上杂种植株为 倍体。从理论上讲，这类杂种植株是
（填“可育”或“不育”）的。
(7)若运用传统的有性杂交方法则 （填“能”或“不能”）实现上述结果，其原因是 。因此这项研究
对于培育作物新品种方面的重大意义在于 。
(8)利用植物体细胞杂交的方法培育新品种的过程中，基因的传递 （填“遵循”或“不遵循”）孟德尔
的遗传定律，其原因是 。
实验五 DNA 的粗提取与鉴定
核心知识回顾
一、实验原理
1．提取DNA 的原理
利用DNA 与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA 在酒精溶液中的溶解性：DNA 不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA 在NaCl 溶液中的溶解性：DNA 在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L
的NaCl
溶液。
2．鉴定DNA 的原理
在一定温度下，DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤
1．称取约30 g 洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL 研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质
方案一
在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分
钟后，再取上清液
方案二
直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min 的转速下离心5 min，
再取上清液
3．DNA 的析出
方案一
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～
3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向
搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方案二
将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min 的转速下离心5 min，弃上清
液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
4.DNA 的鉴定
取两支20 mL 的试管，各加入2 mol/L 的NaCl 溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl 溶
液中，再向两支试管中各加入4 mL 的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷
却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示
1．以血液为实验材料时，每100 mL 血液中需要加入3 g 柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA
分子的断裂
，导致DNA 分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨
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1．利用动物细胞提取DNA 时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
3．提纯DNA 时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。
核心知识辨析
1．在一定温度下，DNA 遇二苯胺试剂会呈现紫色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA 的试剂。（选择性
必修3 P74）( )
2．DNA 不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。( )
3．在溶有DNA 的NaCl 溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色。( )
高考真题剖析
1．（2023·广东·统考高考真题）“DNA 粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。
下列叙述错误的是（ ）
A．裂解：使细胞破裂释放出DNA 等物质
B．分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等
C．沉淀：可反复多次以提高DNA 的纯度
D．鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．血浆中含有大量蛋白质和少量脂质等，血浆cfDNA 与蛋白质紧密粘附结合，提取血浆cfDNA 的步骤主
要有：配制洗涤液→样本裂解→DNA 析出→DNA 吸附→杂质洗涤→DNA 洗脱与收集。下列说法错误的是
（ ）
A．样本裂解的目的是裂解血细胞，使其含有的DNA 释放
B．可以通过加入体积分数95%的预冷乙醇，轻轻颠倒混匀的方式析出DNA
C．洗涤液的作用是高效去除血浆中的蛋白质和脂质等
D．洗脱DNA 的洗脱液中含有一定浓度的NaCI
2．下图表示“DNA 粗提取与鉴定”实验的基本流程，下列叙述错误的是（ ）
①取材→②破碎细胞→③获得滤液→④去除杂质→⑤进一步提纯→⑥DNA 鉴定
A．本实验使用的酒精的浓度与“低温诱导植物细胞染色体数目的变化”实验中的相同
B．步骤①中可以使用猪的肝细胞作为实验材料
C．步骤①中可以使用纱布对研磨液进行过滤，并获取上清液
D．步骤⑥向试管中加入二苯胺试剂后静置5min 后即可呈现蓝色
3．如图为鸡血细胞中DNA 的粗提取和鉴定实验过程中的部分操作示意图，请据图分析，下列相关叙述中，
正确的是（ ）
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A．该实验的正确操作顺序是③→①→②→④→⑤
B．用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA 量相近
C．⑤表示要鉴定步骤①中所得到的白色丝状物主要成分为DNA，可使用二苯胺试剂来鉴定，沸水浴
冷却后，出现蓝色的试管组别是对照组
D．步骤①的目的是初步分离DNA 与蛋白质，析出并获得DNA；步骤④中在2mol/L 的NaCl 溶液中，
DNA 的溶解度较大
4．不同生物的DNA 的提取方法有所不同，DNA 提取的原理和实验流程大致相同（如图所示）。下列说法
错误的是（ ）
A．破碎细胞在冷冻下进行，可将组织材料冻裂和降低DNA 酶的活性
B．溶于酒精中的可能有某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质
C．DNA 粗提取时离心需使用塑料离心管，用二苯胺试剂对离心结果进行鉴定
D．鉴定絮状物中DNA 时，需用2mol·L-¹NaCl 溶液溶解DNA 后加入二苯胺试剂直接观察
B 组(选择题为不定项)
1．下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ）
A．羊的成熟红细胞可作为提取DNA 的材料
B．提取植物细胞的DNA 时，需要加入一定量的研磨液
C．预冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA 水解
D．在沸水浴条件下，DNA 与二苯胺试剂反应呈现蓝色
2．图1、2 分别为“DNA 的粗提取与鉴定”实验中部分操作示意图，下列叙述正确的是（ ）
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A．提取材料不能用猪血替换鸡血
B．图1、2 中完成过滤后均要保留滤液
C．图1、2 中搅拌的操作要求不同
D．图1、2 中加入蒸馏水的目的相同
3．棉叶总DNA 的提取较为困难，若采集的鲜叶样品保存不当，将严重影响其DNA 的提取率及纯度。科
研人员以棉花新鲜嫩叶为对照，比较了不同贮藏条件（4℃冷鲜保存3d、-20℃冷冻保存3d 和7d）对棉叶
DNA 提取率及纯度的影响，结果如下图。相关叙述正确的是（ ）
A．利用不同浓度的NaCl 溶液可初步去除部分杂质
B．鲜叶提取的DNA 与二苯胺试剂反应呈现的蓝色最深
C．冷冻保存7d 后提取的DNA 中有些蛋白质或氨基酸未除尽
D．冷冻保存3d 组的DNA 提取效果优于冷鲜保存3d 组
4．下列有关“DNA 粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水涨破，释放DNA
B．在新鲜猪血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心取血细胞液
C．在含有DNA 的2 mol/L 的氯化钠溶液中加入蒸馏水，搅拌出现丝状物后停止加水
D．鉴定DNA 时，将丝状物溶解于2mol/L 的氯化钠溶液中，再加入二苯胺试剂进行沸水浴
5．“CTAB 法”和“SDS 法”是提取DNA 的常用方法，CTAB 提取液含有CTAB、EDTA 等成分，SDS 提
取液含SDS、EDTA 等成分。CTAB、SDS 能破坏膜结构，使蛋白质变性，提高DNA 在提取液中的溶解
度;EDTA 能螯合Mg2+、Mn2+，抑制DNA 酶的活性。某科研小组为了寻找提取腊梅DNA 的优良方法，比较
了两种提取DNA 的方法，主要操作如下:
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实验测定结果如表(表中OD260 的值反映溶液中核酸的浓度，OD280 的值反映溶液中蛋白质的浓度。理论
上，纯DNA 溶液的OD260/OD280 的值为1.8，纯RNA 溶液的OD260/OD280 的值为2.0)。
CTAB
SDS
OD260
OD280
OD260/OD280
OD260
OD280
OD260/OD280
0.033
0.018
1.833
0.006
0.005
1.200
请回答下列问题:
(1)与常温下研磨相比，在液氮中研磨的优点是 ;CTAB 提取液和SDS 提取液中都加入EDTA 的
目的是 。
(2)氯仿-异戊醇密度大于水且不溶于水，DNA 不溶于氯仿-异戊醇，蛋白质等杂质可溶于氯仿-异戊醇，实
验过程中加入氯仿-异戊醇离心后，应取① (填“上清液”或“沉淀物”)加异丙醇(异丙醇与水互溶)并
离心进行纯化，利用异丙醇溶液纯化DNA 的原理是 。
(3)两种方法中， 法提取的DNA 的纯度更高，判断的依据是 。
实验六 DNA 片段的扩增及电泳鉴定
核心知识回顾
一、实验原理
1．DNA 片段的扩增
PCR 利用了DNA
的热变性
原理，通过调节温度来控制DNA 双链的解聚与结合。
2．琼脂糖凝胶电泳
(1)带电粒子：DNA 分子具有可解离的基团，在一定的pH 下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。
(2)迁移动力与方向：在电场的作用下，带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电
泳。
(3)迁移速率：在凝胶中DNA 分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA 分子的大小和构象有关。
(4)检测：凝胶中的DNA 分子通过染色，可以在波长为300 nm 的紫外灯下被检测出来。
二、方法步骤
1．移液：用微量移液器按照配方或PCR 试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。
2．混合：待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。
3．离心：将微量离心管放在离心机上，离心约10 s，使反应液集中在管的底部。
4．反应：将装有反应液的微量离心管放入PCR
仪
中，设置程序进行反应。
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5．根据待分离的DNA 片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量分数为0.8%
～
1.2%
的琼
脂糖溶液，并加入适量的核酸染料混匀。
6．将扩增得到的PCR 产物与凝胶载样缓冲液(内含指示剂)混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的
加样孔内。
7．接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1 ～
5 V/cm
。待指示剂前沿迁移接近
凝胶边缘时，停止电泳。
8．电泳结束后，取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
三、操作提示
1．为避免外源DNA 等因素的污染，PCR 实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压
灭菌处理。
2．缓冲液和酶应分装成小份，并在－
20
℃
储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。
3．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。
4．在进行操作时，一定要戴好一次性手套。
四、关键点拨
1．未出现扩增条带的主要原因
(1)TaqDNA 聚合酶失活。
(2)引物出现质量问题。
(3)Mg2＋浓度过低。
(4)变性时的温度低，变性时间短。
2．出现非特异性扩增条带的主要原因
(1)模板DNA 出现污染。
(2)引物特异性不强或形成引物二聚体。
(3)Mg2＋浓度过高。
(4)复性时的温度过低等。
核心知识辨析
1．PCR 实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前没必要进行高压灭菌处理。 ( )
2．PCR 反应需提供DNA 模板，2 种引物，4 种核糖核苷酸和耐高温的DNA 聚合酶。( )
31．（2023·全国·高二专题练习）PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，在凝胶中DNA 分子的迁移
速率与凝胶的浓度、DNA 分子的大小和构象等有关。（选择性必修3 P84）( )
3．电泳是指在电场的作用下，带电分子会向着与它所带电荷相同的电极移动。（选择性必修3 P84）(
)
4．用PCR 方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。( )
5．用PCR 方法扩增目的基因时需要设计两种引物。( )
高考真题剖析
1．（2021·湖北·统考高考真题）某实验利用PCR 技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引
物与模板完全配对）外，还有2 条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产
生，以下措施中有效的是（ ）
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A．增加模板DNA 的量
B．延长热变性的时间
C．延长延伸的时间
D．提高复性的温度
限时训练
A 组(选择题为单选)
1．利用Sanger 法对未知序列DNA 进行测序的原理如下：将含有适量待测单链DNA 模板、引物、四种脱
氧核苷三磷酸（dNTP）和DNA 聚合酶等混合物分别加到4 支试管中，每支试管中再分别加入1 种足量的
放射性同位素标记双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），在子链合成过程中，ddNTP 可以与dNTP 竞争核苷酸链
延长位点，并终止DNA 片段的延伸。最终分离4 支试管中的所有子链片段，分泳道进行电泳，用放射自
显影法显示后结果如下图。下列说法正确的是（ ）
A．图中X 含有11 个碱基，在所有单链中相对分子质量最大，电泳速度最慢
B．图中所测单链DNA 片段中胸腺嘧啶数与鸟嘌呤数相等
C．在含ddTTP 的试管中含有2 种子链DNA 片段
D．图中所测单链DNA 模板的序列为5'-CTTGACGACGA-3'
2．将两对PCR 引物作特殊的设计，外侧两个引物大小为25bp，复性温度较高（68℃）；内侧两个引物大
小为17bp，复性温度较低（46℃）。通过控制复性温度（68℃）使外侧引物先行扩增，经过20～30 次循
环后（第一轮PCR 结束），再降低复性温度（46℃）使内侧引物以第一轮PCR 产物为模板进行再次扩增，
整个过程被称为巢式PCR，该技术更适用于DNA 含量低的待扩增的样品。两轮PCR 反应均在一个PCR 管
中进行。下列说法错误的是（ ）
A．与常规PCR 技术相比，两套引物的使用提高了扩增的特异性和敏感性
B．第二轮PCR 反应能否进行，是对第一轮PCR 反应正确性的鉴定
C．复性温度与引物长度成正相关
D．在一个PCR 管中进行两轮PCR 反应均使用了相同的模板
3．关于“DNA 片段的扩增及电泳鉴定”实验，下列说法正确的是（ ）
A．PCR 中DNA 双链的解聚与结合利用了DNA 的热变性原理，通过调节温度来控制DNA 复制
B．PCR 反应体系中需要加入大肠杆菌中的DNA 聚合酶
C．在凝胶中DNA 分子的迁移速率只与DNA 分子的大小有关
D．DNA 分子在一定的pH 下带电，在电场的作用下会向着与它所带电荷相同的电极移动
4．不对称PCR 的基本原理是采用不等量的引物，产生大量的单链目标DNA。这两种引物分别称为限制性
引物与非限制性引物；其最佳比例一般为1：50~1：100。在PCR 反应的早期循环（约20 次）中，扩增产
物主要是双链DNA，当后期数量较少的限制性引物耗尽后，数量较多的非限制性引物将引导合成大量目标
DNA，过程如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
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A．PCR 反应缓冲液中一般需添加Mg2+，以激活DNA 聚合酶
B．复性时引物与模板链3'端的碱基序列通过互补配对结合
C．PCR 进行最初20 次循环的目的是增加模板DNA 的量
D．不对称PCR 产生的大量单链DNA 是由限制性引物延伸而来
5．下列关于PCR 技术相关叙述正确的是（ ）
A．DNA 聚合酶可从引物的5 端开始连接脱氧核苷酸
B．退火温度过低导致得不到任何产物，过高导致产生非特异性片段
C．PCR 反应体系中需加入TaqDNA 聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用
D．扩增DNA 片段的过程中，第n 次循环共需要引物2n+1-2 个
6．光定量PCR 技术是在常规PCR 的基础上，加入与模板DNA 某条链互补的荧光探针（一类两端经过特
殊基团修饰的单链DNA 片段），当子链延伸至探针处时DNA 聚合酶会水解掉探针一端并生成荧光分子，
使荧光监测系统接收到荧光信号，即DNA 每扩增一次，就有一个荧光分子生成，原理如图所示。下列有
关叙述正确的是（ ）
A．该项技术可用来直接检测样本中新冠病毒核酸的含量
B．1 个双链DNA 分子经过3 轮循环一共会生成8 个荧光分子
C．1 个双链DNA 分子经过5 轮循环一共需要消耗15 对引物
D．该PCR 技术中DNA 聚合酶既催化形成磷酸二酯键，又催化断裂磷酸二酯键
7．数字PCR 技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述不正确的是（ ）
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A．应根据目的基因的两端已知序列设计两种引物
B．PCR 每一循环包括变性、复性和延伸三个过程
C．PCR 结束后有靶分子的反应单位能检测出荧光
D．每个反应单位中都需要加入解旋酶和耐高温DNA 聚合酶
B 组(选择题为不定项)
1．通过引物设计，运用PCR 技术可以实现目的基因的定点诱变，如图为基因工程中获取突变基因的过程，
其中引物1 序列中含有一个碱基T 不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体
系中引物1 和引物2 分别设计增加限制酶a 和限制酶b 的识别位点。有关叙述错误的是（ ）
A．限制酶a 和限制酶b 的识别位点分别加在引物1 和引物2 的5’端
B．PCR 反应体系需要加入脱氧核苷酸、耐高温的DNA 聚合酶、Ca2+等
C．第2 轮PCR 中，引物1 与图中②结合形成两条链等长的突变基因
D．在第3 轮PCR 结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA 占1/4
2．聚合酶链式反应（PCR）是一种体外扩增DNA 片段的技术。某DNA 片段的PCR 反应程序如图所示。
下列叙述错误的是（ ）
A．预变性可促进模板DNA 边解旋边复制
B．退火是让解旋状态模板DNA 恢复双螺旋
C．延伸结束后，新片段中的引物将被切除
D．终延伸可使目的基因的扩增更加充分
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3．交错PCR 能实现同源基因的重组（如图，仅示单链）。第一轮延伸15s，获得短产物①②。在第二轮开
始时（95℃）产物①②与原来模板分开，然后（55℃）随机地与不同模板交错结合，延伸15s，合成交错
产物③④。每一轮扩增仅延伸一小段，经过多轮“产物-模板”交替结合、延伸，最终扩增出交错重组基因
产物。相关叙述正确的是（ ）
A．交错PCR 原理是DNA 半保留复制
B．交错PCR 延伸温度设定为55℃可增加交错次数
C．上一轮交错产物需与模板链严格配对才能继续下一轮扩增
D．若交错循环20 轮，一共产生220 个DNA 分子
4．引物在极大程度上决定了PCR 的成败，下列关于引物的说法正确的有（ ）
A．PCR 和生物体内的DNA 合成都需要引物，PCR 引物一般是单链DNA
B．若引物的CG 碱基含量相对较高，PCR 退火步骤的温度需要适当升高
C．在PCR 的退火步骤，两种引物分别结合在模板链的3’端和5’端
D．若初始有10 个胰岛素基因，PCR 中进行10 轮循环，至少需要20460 个引物分子
5．微滴式数字PCR（ddPCR）是一种检测新冠病毒等病原体的手段，原理如图所示，分为样本分散、PCR
扩增、检测三个过程。下列有关叙述正确的是（ ）
A．新冠病毒样本在进行ddPCR 检测时，需要先进行逆转录处理
B．多孔板中如果某个孔没有核酸分子，就不需要加入引物和Taq 酶
C．检测时只要有一个孔出现阳性结果，就可以说明原样本中有病毒核酸
D．相对于传统手段，ddPCR 更加灵敏，更容易检测出微量病毒，但成本相对较高
6．下列关于PCR 过程及结果的叙述正确的是（ ）
A．若在酶和引物都正常工作，但是不出现扩增带，其原因可能是核酸模板变性不彻底导致的
B．复性的温度设定与引物有关，延伸时间的设定与扩增片段的长度有关
C．PCR 与细胞内DNA 复制破坏氢键的原理相同
D．理论上推测，第n 轮循环产物中只含有一种引物的DNA 片段所占比例为1/2n-2
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7．宫颈癌的发生与人乳头状瘤病毒（HPV）感染有关，其中HPV16、18、31、45 型是宫颈癌的高危型，
E7 蛋白是HPV16 型重要的抗原标志蛋白。我国研究人员以酿酒酵母菌为表达载体，成功构建表达HPV16
型E7 蛋白的转基因重组全酿酒酵母疫苗。图1 表示拟转入的质粒上某片段及其上的酶切位点分布，图2 表
示各限制酶识别序列和切割位点。
(1)研究人员首先需要利用PCR 技术从HPV16 型的基因组中获取E7 蛋白基因的DNA 序列，以 为原料
合成子链，扩增6 次需要引物B 个。
(2)为了将获得的E7 蛋白基因准确连接至图1 中的质粒上，需要在引物A 和引物B 的 （填“5′”或
“3'”）端分别添加 限制酶的识别序列。若决定E7 蛋白的mRNA 的碱基序列为5'-AUGAGCTAC…（中
间序列）…CAACGTAGA—3',理论上应设计引物A 的前12 个碱基序列为5' -3'。
(3)控制表达载体大量扩增的组成元件是 ,该结构发挥作用时通常需要的酶是 。
(4)HPV16 型E7 蛋白疫苗注入人体后作为抗原，可以刺激机体的B 淋巴细胞增殖分化成为 。在预防接
种疫苗时通常需要多次注射，但是相邻的两次注射之间需要间隔一定的时期，原因是 。
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