文档文本内容
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
猜押07 生物技术与工程
题型
考情分析
考向预测
发酵工程
2025 年黑吉辽蒙卷：微生物的分离与培养
（选择培养基、涂布平板法）
2024 年辽吉黑卷：泡菜制作、培养基选择、
无菌操作
1.技术流程的细节与原理：可能聚焦
于某项生物技术（如PCR、基因工
程、细胞融合、胚胎工程）的关键步
骤、操作目的、所用工具酶或试剂的
作用原理。
2.技术应用与方案设计：可能设定一
个生产或科研目标（如生产特定产
物、培育新品种、疾病检测），要求
选择或设计合适的技术路线，并说明
依据。
3.技术安全与伦理考量：可能探讨生
物技术（如基因编辑、克隆）在应用
过程中可能带来的安全性、伦理及社
会问题，体现社会责任。
细胞工程（植
物+ 动物+ 胚
胎）
2025 年黑吉辽蒙卷 ：植物组织培养、单克隆抗
体制备
2024 年辽吉黑卷：动物细胞培养、核移植
基因工程
2025 年黑吉辽蒙卷 ：限制酶选择、PCR、载体条
件、导入方法
2024 年辽吉黑卷：表达载体构建、分子检
测、转基因应用
押题1 发酵工程
1．（2026·海南海口·二模）废弃的塑料因难以降解，造成“白色污染”；聚羟基脂肪酸酯（PHA）具有
类似塑料的理化特性，丢弃后易被土壤微生物降解，可代替部分塑料应用于生产生活。研究人员在某咸水
湖中发现了一种能合成PHA 的嗜盐细菌，分离该细菌的基本流程如图所示。请回答下列问题：
(1)培养和分离产PHA 嗜盐细菌的培养基的配方如下：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl 50g、水定容至
1000mL。其中，蛋白胨能为嗜盐细菌的生长提供____和维生素等营养物质，NaCl 可提供________。实验中
1
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
需要对培养基进行严格灭菌，对培养基灭菌的常用工具是________。从咸水湖取回的样品中产PHA 嗜盐细
菌的浓度较高，需经过程①和②连续两次10 倍稀释，每次稀释时均从前面的容器中取1mL 样液，加入
__________。
(2)与Ⅰ号培养基相比，Ⅱ号培养基和Ⅲ号培养基中通常需加入_____。过程③的接种方法是
_________________；若过程④进行了5 次划线，则需要对接种环灼烧____次。
(3)在一定的培养条件下，根据菌落的__________（答出两点）等特征，可初步判断其是否为产PHA 嗜盐细
菌。现已初步判断培养皿d 中均为嗜盐细菌菌落，欲从培养皿d 中进行取样，筛选出产PHA 能力强的嗜盐
细菌，请简要写出操作过程：______________________________。
1.无菌技术
消毒
杀死部分微生物（非芽孢）
煮沸、巴氏消毒、酒精擦拭
灭菌
杀死所有微生物（包括芽孢）
高压蒸汽灭菌（培养基）、干热灭菌（玻璃器皿）、灼烧（接
种环）
无菌操作
防止杂菌污染
超净工作台、火焰旁操作、器皿灭菌
培养基灭
菌
常用高压蒸汽灭菌法（121℃，15-
30min）
含水分培养基不能用干热灭菌
无菌检测
将冲洗液涂布于平板，观察有无菌落
检验样品是否无菌
2. 微生物的纯化
平板划线法
用接种环在固体培养基表面划线
获得单菌落，用于纯化
稀释涂布平板法
将菌液梯度稀释后涂布于平板
可用于计数（菌落数30~300 为有效）
单菌落
由一个微生物细胞繁殖形成的菌落
代表纯种
接种环/涂布器灭菌
接种环：灼烧灭菌；涂布器：酒精浸泡后灼烧
防止杂菌污染
倒置培养
培养皿倒置放入恒温箱
防止冷凝水滴落冲散菌落
3.微生物计数
稀释涂布平板计
数
菌落数×稀释倍数÷涂布体积
结果偏小（因多个细胞连成一个菌落）
显微镜直接计数
使用血细胞计数板
结果偏大（含死菌）
2
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
计数原则
同一稀释度至少涂布3 个平板，取平均值
选择菌落数30~300 的平板
押题2 细胞工程（植物+动物+胚胎）
2．（2026·辽宁·模拟预测）人参果（2n=24）因低糖、低脂、高蛋白深受人们喜爱，但人参果种植过程
中容易遭受病毒侵害，产量低。苦参（2n=18）产生的苦参碱、氧化苦参碱能干扰病毒RNA 合成，对烟草
花叶病毒（TMV）等多种病毒有效。科研人员利用人参果和苦参进行植物体细胞杂交，培育抗病毒的人参
果—苦参杂种植株。请回答下列问题：
(1)将人参果细胞和苦参细胞融合之前，需要制备原生质体，该操作中，____标志着两种细胞融合成功。若
只考虑两两融合，融合后共能得到____种原生质体。
(2)与植物细胞融合不同，动物细胞融合特有的方法是_____，细胞融合的原理是______。
(3)得到杂种细胞后继续培养，常用____________（填植物激素名称）诱导愈伤组织形成和分化，获得完整
杂种植株。为确定该杂种植株是否符合育种要求，还需进行________检测。
(4)与紫草宁一样，苦参碱是一种_____（填“初生”或“次生”）代谢物，为获得大量的苦参碱可利用
______技术，该技术的优点为___________________（答出1 点）。
1.植物细胞工程
外植体选择
幼嫩茎段、叶片、芽原基等
分裂能力强，分化程度低
培养基成分
MS
培养基+
蔗糖+
琼脂+ 植物激素（生长素、
细胞分裂素）
生长素/细胞分裂素比例影响分化方向
激素比例调控
→
→
→
比例高
生根，比例低
生芽，适中
愈伤组织
如6-BA（细胞分裂素）与NAA（生长
素）配比
愈伤组织
未分化的薄壁细胞团
可用于悬浮培养、诱变、再生植株
细胞悬浮培养
愈伤组织打散成单个细胞或小细胞团，液体培养
用于生产次生代谢产物（如紫杉醇、迷
迭香酸）
植物体细胞杂交
→
→
原生质体融合
杂种细胞
杂种植株
“
—
克服远缘杂交不亲和，如番茄
马铃
”
薯
植物细胞产物工厂化
生产
大规模培养细胞，提取次生代谢产物（紫杉醇、香树
脂醇等）
不依赖完整植株，周期短
脱毒苗培育
茎尖分生组织培养
茎尖几乎不含病毒，可获脱毒苗
3
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
人工种子
胚状体+ 人工种皮
可大规模繁殖，保持优良性状
2.动物细胞工程
培养基特点
合成培养基+ 血清（如胎牛血清）
血清提供生长因子、激素等
培养条件
37℃、5% CO₂（维持pH）、无菌、适宜渗透压
CO₂ 与碳酸氢钠构成缓冲系统
贴壁生长与接触抑
制
贴壁细胞分裂至表面相互接触时停止分裂
需用胰蛋白酶分散后传代
传代培养
细胞密度过大时，分瓶继续培养
原代培养指从机体取出后首次培
养
细胞系与细胞株
细胞系：可无限传代（遗传物质改变）；细胞株：遗传物质
未变
→
→
原代培养
有限细胞系
无限细胞
系
动物细胞融合
聚乙二醇（PEG）、灭活病毒、电融合
原理：细胞膜流动性
押题3 基因工程
3．（2026·辽宁·模拟预测）研究人员利用农杆菌转化法将大豆耐盐碱基因GsERF6 导入水稻，构建重组表
达载体（图甲），并对转化后的细胞进行目的基因检测（图乙）。回答下列问题：
(1)利用农杆菌转化法时，将目的基因插入Ti 质粒的_____上；需将含GsERF6 基因的重组Ti 质粒导入农杆菌，
再让农杆菌侵染水稻细胞，最终使GsERF6 基因进入水稻细胞并整合到水稻细胞的_____上。
(2)构建图甲所示的重组表达载体需要的酶是______，该表达载体中的强启动子的作用是________。新霉素
抗性基因属于_____，其作用是________。
(3)对转化细菌进行目的基因检测时，常采用PCR 技术，该技术需要_______（填一种酶）。结合图乙结果
分析，转基因水稻DNA（泳道1）中_____（填“含有”或“不含有”）GsERF6 基因，判断的依据是
_______。
4
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
1.基因工程的工具
限制酶（限制性内切核
酸酶）
识别特定核苷酸序列，切割DNA 磷
酸二酯键
产生黏性末端或平末端；不切割自身DNA（甲基化
保护）
DNA 连接酶
催化DNA 片段之间形成磷酸二酯键
连接两个DNA 片段（黏性末端或平末端）
载体（质粒、病毒等）
将目的基因导入受体细胞并使其稳定
存在和表达
必备元件：复制原点、限制酶切位点、标记基因、启
动子、终止子
标记基因
用于筛选含重组DNA 的受体细胞
如抗生素抗性基因（Kanᴿ、HygBᴿ）、荧光蛋白基因
启动子
RNA 聚合酶识别和结合的部位，驱动
基因转录
常用启动子：p35S（植物）、lac、T7 等
终止子
转录终止的信号序列
位于目的基因下游
2 目的基因的获取
从基因文库
获取
基因组文库（含全部基因）或cDNA 文
库（含编码序列）
cDNA 文库不含内含子，适合原核表达
PCR 扩增
体外快速扩增特定DNA 片段
原理：DNA 半保留复制；所需：模板、引物、dNTP、耐热
DNA 聚合酶（Taq 酶）、缓冲液
人工合成
根据已知氨基酸序列或基因序列化学合
成
可进行密码子优化（如将细菌基因改为植物偏好密码子）
3 基因表达载体的构建
载体结构
启动子+
目的基因+
终止子+
标记基因+ 复制原点
是基因工程的核心步骤
双酶切法
用两种限制酶切割载体和目的基因
防止载体自连，保证定向连接
同源重组法
利用同源臂将目的基因插入载体特定位置
如Gibson 组装、In-Fusion
连接反应
用DNA 连接酶连接载体和目的基因
构建重组质粒
4 目的基因的检测与鉴定
DNA 水平检测
PCR 法（用特异性引物扩增目的基因片段）
模板为受体细胞基因组DNA
凝胶电泳验证
琼脂糖凝胶电泳，根据片段大小判断是否插入
需用限制酶切割重组质粒后电泳
转录水平检测
RT-PCR（逆转录PCR）检测mRNA
模板为提取的RNA，先逆转录成cDNA
翻译水平检测
抗原-抗体杂交（Western blot）
检测目的蛋白是否表达
个体水平鉴定
观察性状（如抗虫、抗病、荧光）
如转基因棉花抗虫实验
阴性对照
用无菌水代替模板DNA 进行PCR
检验是否有外源DNA 污染
5
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
一、单选题
1．（25-26 高三下·四川成都·开学考试）酸笋是螺蛳粉的“灵魂”。在自然发酵过程中，酸笋中的乳酸菌
作为主要微生物分解蛋白质产生硫化氢等物质，形成了螺蛳粉的特殊风味。酸笋的传统发酵工艺包括原材
料处理、装坛、发酵等过程。下列相关叙述正确的是（ ）
A．乳酸菌代谢类型为异养厌氧型，所以不会分布在空气中
B．原材料处理主要是对采摘后的竹笋进行剥壳、清洗和灭菌
C．随着发酵的进行，发酵液pH 值逐渐升高后保持稳定
D．装坛时应保证竹笋被盐水全部浸没，才能保证发酵的正常进行
2．（2026·山东淄博·一模）下列关于生物学实验的说法正确的是
选
项
实验名称
相关描述
A
探究植物细胞的吸水和失
水
仅使用低倍镜观察，随着外界蔗糖溶液浓度的增加，细胞大小基本不
变
B
探究酵母菌细胞呼吸的方
式
有氧呼吸组应让空气持续依次通过3 个锥形瓶
C
DNA 的粗提取与鉴定
可进行两次离心，第一次离心取沉淀物，第二次离心取上清液
D
DNA 片段的扩增及电泳鉴
定
电泳缓冲液中需加入指示剂以便观察电泳进程
A．A
B．B
C．C
D．D
3．（2026·辽宁抚顺·模拟预测）槲皮素是一种天然存在的黄酮醇类化合物，广泛存在于多种植物的茎皮、
花、叶、芽、种子、果实中，也是自然界中最强的抗氧化剂之一，科研人员为了快速检测出槲皮素，制备
出了抗槲皮素的单克隆抗体，制备流程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．给小鼠直接注射槲皮素，无法引起小鼠的特异性免疫
B．②过程采用的诱导融合方法中有的不适合植物原生质体的融合
C．体外培养③过程得到的细胞丙，会出现接触抑制现象
6
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
D．④过程需进行克隆化培养和抗体检测，可体外扩大培养细胞丁
4．（2026·山东日照·一模）研究人员利用细胞工程技术生产紫杉醇的大致流程如图所示。下列说法错误的
是（ ）
A．过程①脱分化得到的愈伤组织具有较高的分裂分化能力
B．过程②振荡培养有利于细胞充分接触培养液并增加其溶氧量
C．过程③中过滤的目的是除去细胞团获得较纯净的单细胞悬浮液
D．过程⑤主要是利用促进细胞生长的营养条件提高单细胞中紫杉醇含量
5．（2026·重庆·模拟预测）N6-甲基腺嘌呤（6mA）是发生在腺嘌呤第六位氮原子上的一种甲基化修饰。研
究表明，6mA 在植物寄生线虫基因组中广泛存在，并在调控线虫毒力方面发挥重要作用，同时在其体内也
发现了相应的6mA 去甲基化酶MiNMAD。为探究其应用价值，研究团队在烟草和番茄中分别构建并获得表
达根结线虫去甲基化酶双链RNA（MiNMAD-dsRNA）的转基因植株，被线虫取食后能抑制线虫体内
MiNMAD 基因的翻译过程，结果如下表所示，下列相关叙述错误的是（ ）
植株类型
根结数量（相对
值）
线虫侵染能
力
效应因子基因表达水
平
野生型对照
100%
100%
100%
转MiNMAD-dsRNA 烟草
32%
28%
35%
转MiNMAD-dsRNA 番茄
41%
36%
42%
注：效应因子是线虫分泌的毒力蛋白，与侵染能力呈正相关。
A．可以利用花粉管通道法把外源基因导入烟草细胞
B．MiNMAD 能特异性识别并去除DNA 上的6mA 甲基化修饰，从而调控下游基因表达
C．宿主植物中表达的MiNMAD-dsRNA，不改变线虫细胞中MiNMAD 基因的序列
D．线虫中6mA 的修饰水平与效应因子基因的表达水平呈正相关
6．（2026·黑龙江哈尔滨·一模）白菜（2n=20）具有鲜嫩的风味，甘蓝（2n=18）具备抗病、耐寒等优良性
状。通过细胞工程可将二者性状结合培育出白菜-甘蓝植株，其制备流程如图所示。下列叙述正确的是（
）
7
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
A．①需用解离的方法去除细胞壁，②可选用PEG 作为原生质体的促融剂
B．③需借助荧光显微镜观察，通过显微操作仪筛选并留取显示单色荧光的细胞
C．若杂种植株风味不如白菜，与亲本白菜回交可增强后代来自白菜的优良性状
D．白菜-甘蓝与亲本回交得到的子代植株是异源六倍体，可以通过有性生殖繁殖
7．（2026·云南·一模）近年来，我国酒精性肝病的发病率逐年上升，危害仅次于病毒性肝炎。研究发现，
雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用。人们运用细胞工程技术生产雪莲次生代谢物，下
列叙述正确的是（ ）
A．次生代谢物是雪莲生长所必需的物质，一般分布在特定组织或器官中
B．用射线处理雪莲幼苗诱发变异，即可获得次生代谢物高产的雪莲植株
C．切取雪莲茎尖在无菌条件下进行愈伤组织培养，可获取其次生代谢物
D．可用固体培养基离体培养雪莲细胞，提高单个细胞中次生代谢物的含量
8．（2026·广东广州·一模）表皮生长因子受体（EGFR）在肿瘤发生中起重要作用，其过表达常见于多种恶
性肿瘤。研究人员利用杂交瘤技术制备抗EGFR 单克隆抗体。下列叙述错误的是（ ）
A．用被其他抗原污染的EGFR 免疫小鼠后，所得的每个B 细胞也只能产生一种抗体
B．经过多次克隆化培养和抗体检测，能获得足够数量的特定杂交瘤细胞
C．杂交瘤细胞在小鼠腹腔内能快速增殖，与腹腔内具有充足的营养物质等适宜条件有关
D．细胞毒素与抗EGFR 单克隆抗体偶联可使抗体更好地杀死肿瘤细胞
二、不定项选择题
9．（2026·山东青岛·一模）某单基因遗传病致病基因在人群中的基因频率约为1/200。为确定其遗传机制，
研究人员调查了某家庭成员患病情况（图1），并通过两对引物（F1+R 和F2+R）扩增相关基因，用限制酶
完全酶切后利用琼脂糖凝胶电泳分离得到图2 所示结果（假定扩增产物中最多有一个酶切位点）。下列说
法错误的是（ ）
8
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
A．该病可能由正常基因发生碱基对的替换导致
B．由图2 可知酶切位点距离R 引物约700bp
C．Ⅲ-3 为杂合子的概率为1/4
D．Ⅲ-1 为患病男孩的概率为1/201
10．（2026·辽宁锦州·二模）深海冷泉（高压、低温、黑暗环境）沉积物中存在一类特殊细菌，其代谢活
动依赖特定压力条件。研究人员从某海域冷泉沉积物中分离出一株疑似纤维素降解菌，为探究其生长特性，
设计实验，结果如下表。下列叙述正确的是（ ）
组
别
压强
唯一碳源
菌落生长情
况
菌液OD 值（反映细菌浓度）
①
常压
纤维素
-
0.03（接近空白对照）
②
常压
果胶
-
0.02（接近空白对照）
③
高压
纤维素
+
0.87
④
高压
果胶
+
0.32
（注：“+”表示有，“-”表示无；OD 值反映细菌浓度）
A．制备培养基时，应先调节pH 再高压蒸汽灭菌
B．该细菌在常压下可利用纤维素或果胶作为碳源生长
C．可用稀释涂布平板法对该细菌进行分离，但无法计数
D．高压条件下，该细菌对纤维素的利用能力强于果胶
11．（2026·黑龙江双鸭山·一模）川西獐牙菜的代谢产物獐牙菜苦苷和龙胆苦苷具有治疗黄疸性肝炎的功
能，如图是科研人员利用体细胞杂交等技术实现药效成分的工厂化生产示意图。下列相关叙述错误的是（
）
9
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
注：杂种细胞中含有的染色体大部分为柴胡染色体
A．①过程可用盐酸和酒精配制的解离液替代纤维素酶和果胶酶
B．②过程融合产生的杂种细胞一定含有合成獐牙菜苦苷的基因
C．③过程的培养基中添加细胞分裂素与生长素的比值为1
D．④过程处理的主要目的是使原生质体发生基因突变
12．（2026·山东青岛·一模）土壤中的吸水链霉菌是一种放线菌，菌体呈丝状生长，其分泌的酯类物质
——雷帕霉素被广泛用于器官移植后的免疫抑制治疗。科研人员利用吸水链霉菌发酵生产雷帕霉素的流程
如下：吸水链霉菌的分离与鉴定、扩大化培养、接种、发酵罐发酵、获得产物。下列说法正确的是（ ）
A．吸水链霉菌能产生雷帕霉素是因为其基因组中含有编码雷帕霉素的基因
B．鉴定吸水链霉菌时，除通过形态学鉴定外，还要借助生物化学的方法
C．扩大化培养吸水链霉菌时，可用紫外线照射对培养基进行灭菌
D．不能采用稀释涂布平板法监控吸水链霉菌发酵过程中活细胞数量的变化
13．（2026·河北廊坊·一模）黄曲霉毒素 B1(AFB1)是一种强致癌性毒素，金刚烷胺(AMD)是一种治疗流感
的抗病毒药物，畜禽摄入含 AFB1 和 AMD 的饲料，会间接危害人体健康。某团队制备同时含 AFB1 和
AMD 两个不同抗原结合位点的双特异性单克隆抗体(流程如图所示)，用于检测饲料中的残余药物。下列叙
述错误的是（ ）
A．A、B、C 三个过程均使用了动物细胞培养技术和动物细胞融合技术
B．杂交瘤细胞①和②以及融合细胞③可能能在选择培养基中生存
C．克隆化培养及大规模培养得到的都是能分泌目标抗体的杂交瘤细胞
D．目标双特异性抗体可以同时结合AFB1 和 AMD，提高了检测效率
14．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）食用腐烂水果后，人出现头晕、恶心、呕吐或更严重的症状，这可能与
微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组致力于研究健康饮食，设计实验探究腐烂苹果不同区域微生物的
种类和数量，实验基本步骤如图所示。下列说法错误的是（ ）
10
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
A．步骤二可以选用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种
B．在适宜环境下培养12 小时即可统计出不同菌液中全部微生物的种类和数量
C．若⑤所在部位几乎未检测出微生物，则切掉①～④后的苹果便可放心食用
D．若①～⑤菌落种类和数量依次减少，则离腐烂部位越远的果肉中毒素含量可能越少
三、非选择题
15．（2026·黑龙江哈尔滨·二模）谷氨酸脱羧酶(GadB)可以催化L-谷氨酸反应合成
-氨基丁酸，但野生型的
大肠杆菌的内源性GadB 的活力均较低。当SNO1 基因和SNZ1 基因同时表达时，能够形成融合蛋白，从而
提高GadB 活性，单独表达时不能形成相应的蛋白质。某研究小组通过以下实验步骤，尝试实现
-氨基丁
酸的高效生产。回答下列问题：
步骤1：利用原始质粒A 构建重组质粒B 和重组质粒C(图1)
注：限制酶识别序列及切割位点：
NcoI 5'-A↓GATCT-3' KpnI 5'-G↓GTACC-3'
BamHI 5'-A↓CTAGT-3' XbaI 5'-T↓CTAGA-3'
(1)在获取GadB 基因序列时，可以通过从序列数据库中查找，或利用___________辅助筛选。
(2)GadB 基因的a 链为转录的模板链，测得该链首端到末端的序列为5'-ACGTAGCGTTAT……
CGCTATGCAAAT-3'。利用PCR 扩增目的基因时，需设计GadB 的引物。为了更好的构建重组质粒B，并确保
GadB 基因的正确连接，某同学设计了如下4 种PCR 引物，其中可选用的引物是___________。(填序号)。
A．5'-AGATCTATTTGCATAGCG-3' B．5'-GCTACCATTTGCATAGCG-3'
C．5'-GGTACCACGTAGCGTTAT-3' D．5'-AGATCTACGTAGCGTTAT-3'
11
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
若本次PCR 加入n 个模板DNA，经过30 轮循环，最终消耗的每种引物数量均为___________。
步骤2：利用双酶切法结合凝胶电泳初步鉴定重组质粒是否构建成功
(3)在电泳前需要将PCR 产物与凝胶载样缓冲液相混合，凝胶载样缓冲液中应添加___________以便判断停
止电泳的时间。若利用KpnI 和BamHI 切割重组质粒C 后，琼脂糖凝胶电泳结果只显示出一条带，请分析原
因___________。
步骤3：将重组质粒导入受体菌株。
步骤4：3 个菌株发酵产
-氨基丁酸能力的比较
实验中所用到的菌株如下：R1(原始菌株)，R2(某些特定基因过表达菌株)和R3(将重组质粒C 导入R1 的重组
菌株)
(4)从R3 菌株中提取蛋白质，用抗___________抗体进行抗原—抗体杂交，若出现阳性反应，则初步证明成
功构建
-氨基丁酸高表达菌株。
(5)通过高效液相色谱法检测3 个菌株发酵液中γ-氨基丁酸含量，数据显示某基因过量表达菌(R2)的发酵液
中γ-氨基丁酸的含量仅为原始菌株R1 的三分之一左右。请基于细胞代谢的调控过程，提出一种合理的假
设：___________。
16．（2026·云南·一模）激活特异性杀伤癌细胞的T 细胞需要两个信号：第一信号是特异性识别信号，即T
细胞表面的TCR 识别癌细胞表面的MHC 分子复合物；第二信号是共刺激信号，即T 细胞表面的共刺激分子
（如CD3）接收的激活信号。研究人员以CD3 和BCMA（一种多发性骨髓瘤细胞表面特有的、高表达的蛋
白质）为抗原，制备了CD3×BCMA 双特异性抗体用于治疗多发性骨髓瘤。该研究项目的部分任务如下，回
答下列问题。
任务一：杂交瘤细胞A-B 的获取
12
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
(1)图甲表示制备鼠源双特异性抗体的过程。图中物质X 是_______，杂交瘤细胞A 的特点是_______。
(2)获得杂交瘤细胞B 需要进行两步筛选：第一步筛选获得杂交瘤细胞，第二步经多次筛选获得足够数量的
杂交瘤细胞B。需进行第二步筛选的原因是小鼠除了接触CD3 外，还可能接触其他抗原，导致小鼠体内产
生_______，经细胞融合后会获得多种杂交瘤细胞。诱导杂交瘤细胞A 与杂交瘤细胞B 融合的常用方法有
_______融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
任务二：CD3×BCMA 双特异性抗体的制备及应用
(3)抗体由两条H 链和两条L 链组成。杂交瘤细胞A 产生的特异性抗体由两条H1链和两条L1链组成（如图
乙）；杂交瘤细胞B 产生的特异性抗体由两条H2链和两条L2链组成。杂交瘤细胞A-B 能合成H1、H2、L1、
13
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
L2四种多肽链，其中任意2 条H 链与2 条L 链随机结合形成10 种抗体，要筛选出图丙中的双特异性抗体，
应使用的抗原是________，其原理是_______。
(4)图丙是双特异性抗体与癌细胞和T 细胞结合的示意图。根据题目信息推测该双特异性抗体治疗多发性骨
髓瘤的原理是：该双特异性抗体能与T 细胞表面的CD3 特异性结合，______。
任务三：鼠源双特异性抗体的改造
(5)抗体包括可变区和恒定区两个部分。可变区负责特异性识别并结合抗原；恒定区是被异种生物的免疫系
统识别为“非己”的关键区。将上述获得的鼠源双特异性抗体注射到人体后，会引发免疫应答，进而将该
鼠源抗体清除使其失去疗效。为解决此问题，下列思路合理的有______（填序号）。
A．从被相应抗原反复免疫过的小鼠体内提取B 淋巴细胞，与人骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤
细胞来生产抗体
B．制备转入人源抗体基因的转基因小鼠，用相应抗原反复免疫该转基因小鼠，然后从其体内提取B 淋
巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选出相应的杂交瘤细胞来生产抗体
C．从小鼠体内获取抗相应抗原的抗体可变区的基因片段，将该基因片段与人源抗体恒定区的基因片段
连接并构建基因表达载体，最终获得抗相应抗原的人鼠嵌合抗体
17．（2026·新疆乌鲁木齐·二模）2025 年我国某海域养殖的鲍鱼、海参爆发“白化病”，病原体为新型嗜
盐古菌，其分泌的白化毒素A（WhnA）是致病的关键，该毒素合成酶基因whnA 部分序列已测定。研究团
队通过基因克隆、细胞工程及转基因技术防控，图1 和图2 为反向PCR 的原理。请回答下列问题：
(1)已知EDTA 可抑制DNA 酶的活性。提取嗜盐古菌基因组DNA 并提纯DNA 时，需在含有EDTA 的缓冲液中
剧烈振荡并加入蛋白酶K，推测EDTA 和蛋白酶K 的主要作用分别是______。图1 中，用限制酶EcoRI 切割
基因whnA 时，产生的黏性末端为5'-______-3'。
(2)据图2 分析，以环化DNA 为模板进行PCR 扩增时，需确保引物A 与引物B 的3'端分别指向环化DNA 的
______（填“已知序列”或“未知序列”）方向。PCR 中，引物的作用是______。
(3)制备抗白化毒素A 的单克隆抗体时，脾脏B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合常用的诱导方法是______；融合
14
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
后第二次筛选过程中，进行抗体检测所利用的原理是______。构建“抗病藻类生物滤器”时，若要定量评
估基因whnA 上游调控序列在不同盐度下的活性，可将该调控序列与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合构建报
告载体，通过检测______反映该调控序列的活性大小。
18．（2026·广东深圳·一模）某些细菌会释放酰基高丝氨酸内酯（AHL），AHL 可自由进出细菌，其浓度达
到一定阈值后会作用于细菌使其发生代谢变化（图1）。科学家试图利用细菌这一系统开发一种工程菌，
来实现特定药物的合成和释放。
回答下列问题：
(1)研究人员将构建的质粒①和质粒②导入大肠杆菌前，通常需先用________处理大肠杆菌细胞，使细胞处
于一种能吸收周围环境中DNA 分子的生理状态，导入后的菌体最适合用________法接种于选择培养基上，
由此构建工程菌。
(2)据图1 分析，当工程菌密度升高时，________积累达到阈值，才能与________蛋白结合形成复合物，该
复合物与启动子
结合，启动下游D 基因的表达。
(3)为实现工程菌在肠道病灶部位裂解，研究人员利用基因E 构建了质粒③（图2），其编码的蛋白E 可诱
导大肠杆菌裂解。在相同培养条件下，测定一段时间内含质粒①、③的工程菌和野生型大肠杆菌的种群密
度变化（图3），在培养早期该曲线趋于一致，而在培养后期出现明显差异，在整个培养时间中出现这种
现象的原因是________。
15
关注公众号：陆陆高分冲刺 ~领取：最新版“中考高考-总复习”~~~
(4)综合上述研究，研究人员将质粒________导入大肠杆菌构建特定药物合成和释放的工程菌。结合图3 分
析，该工程菌的药物释放特征是________。
16
