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猜押06 生物技术与工程
猜押考点
3 年真题
考情分析
押题依据
生物技术
与工程
2022 年辽
宁卷第8、
12、14、
15、18、
24 题
2023 年辽
宁卷第7、
8、9、
13、14、
24、25 题
2024 年吉
林卷第6、
7、14、
19、25 题
2025 年新高考生物新结构体系下，生
物技术与工程因其科技前沿性，多以实验
过程和结果分析的新情境呈现。新情境呈
现方式多样,有坐标曲线,有图表,还有流程
图及文字介绍。
考查考生在新情境下获取信息的理解
能能力、解决问题能力、实验探究能力和
创新能力。
生物技术与工程类题型要求考
生在阅读理解的基础上，依据题目
提供的信息，联系所学的知识和方
法，实现信息的迁移，达到灵活解
题的目的；基因工程几乎每年均有
考查，多以基因工程的基本程序为
背景，既可单独考查其中相关的生
物学原理和注意事项，也可结合细
胞工程进行综合考查
题型1 发酵工程
一、单选题
1．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）某兴趣小组欲对牛奶制品中乳酸菌的多样
性进行研究，他们采集菌种并做了相关实验。下列叙述正确的是（ ）
A．将分离后的乳酸菌接种到含有抗生素的培养基中培养
B．筛选菌种时，可选用牛肉膏蛋白胨液体培养基观察菌落特征
C．在稀释涂布平板法操作中，需用已灭菌冷却的涂布器蘸取少量菌液进行接种
D．鉴定细菌种类时，除观察菌落特征外，还可借助PCR 等方法
2．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）关于利用乳酸菌制作传统发酵食品，下列叙
1
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述正确的是（ ）
A．制作泡菜的过程是无氧条件下乳酸菌单一菌种的发酵
B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌
C．腌制两天后，泡菜的风味逐渐显现应及时食用，此时泡菜中亚硝酸盐的含量较低
D．控制好发酵时间和温度，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质
3．（新考点）传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，
最终陈酿而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统
的监测和控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（ ）
A．醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸
B．与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵
C．醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵
D．在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味
二、多选题
4．（2025 届吉林省白城市洮北区白城市第一中学高三一模生物试题）通过发酵罐发酵可大规模生产谷氨
酸，生产中常用的菌种是好氧的谷氨酸棒状杆菌。下面有关谷氨酸发酵过程的叙述，错误的是（ ）
A．溶氧充足时，发酵液中有乳酸的积累
B．发酵液中碳源和氮源比例的变化不影响谷氨酸的产量
C．菌体中谷氨酸的排出，有利于谷氨酸的合成和产量的提高
D．发酵液pH 呈碱性时，有利于谷氨酸棒状杆菌生成乙酰谷氨酰胺
5．（2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题）泡菜汁中乳酸菌的
分离与计数可采用稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基要维持正常的pH，一般应在灭菌前调pH
B．完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在有氧环境下培养
C．稀释涂布平板法计数时，需将泡菜汁中的乳酸菌稀释至30~300 个/mL
D．用稀释涂布平板法统计活菌数目可能会比用细菌计数板统计的数目多
6．（新情境）黄曲霉素是一种污染物，被世界卫生组织划定为1 类致癌物。酵母菌能够以黄曲霉素为碳源
进行代谢，从而将其有效降解。工业化生产食醋的过程极易遭受黄曲霉素的污染，人们往往通过加入筛选
得到的高效降解黄曲霉素的酵母菌来保证饮食安全。下列说法错误的是（ ）
A．筛选酵母菌菌株的培养基需以黄曲霉素为碳源，并保持酸性
B．常用平板划线法进行目标酵母菌的接种、分离、纯化和计数
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C．利用制作果酒的发酵液进行醋酸发酵，可能会降低黄曲霉素的含量
D．可通过检测酒精的生成量，从而检验酵母菌菌株降解黄曲霉素的能力
三、非选择题
7．（新情境）多环芳烃（PAHs）是一种不溶于水的有机物，在培养基中以微小的颗粒状存在，PAHs 在土
壤中的降解速率很慢，并具有致癌和致畸作用。科研人员欲从被PAHs 污染的土壤中分离出高效降解PAHs
的菌株，进行如图所示的实验（培养基乙中PAHs 被降解后会形成透明圈）。回答下列问题：
(1)从培养功能角度分析，培养基甲属于 ；培养基通常需要提前在121℃下进行 。
(2)将培养基甲中的目的菌接种到培养基乙中的方法是 ，该方法不仅适用于筛选某种菌株，还可用于
。
(3)筛选PAHs 降解菌实验时，过程③所需要的实验工具有 （答出两种）。过程④挑选的单菌落应该是
透明圈直径与菌落直径比值 （填“最小”或“最大”）的。
(4)在5 个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1 mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、
50、54、56、52，则每升原菌液样品中细菌数为 个。如果用显微镜直接计数法对细菌进行计数，所
统计的细菌数通常会比上述方法统计数目偏 （填“大”或“小”），原因是 。
题型2 基因工程
一、单选题
1．（2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联合
模拟考试生物试题）新型蛋白质进化模型EVOLVEpro 可以利用氨基酸序列，仅通过少量学习和最低限度的
实验测试来预测蛋白质空间结构，从而获得新型高活性蛋白质改造方案。下列有关说法正确的是（ ）
A．预测蛋白质结构需要依据肽链中肽键的结构、氨基酸的物理性质与结构
B．氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换一定使蛋白质的结构和功能发生改变
C．EVOLVEpro 在蛋白质工程广泛应用后将不再需要借助基因工程手段改造蛋白质
D．通过EVOLVEpro 得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产
2．（黑龙江省名校协作体2025 届高三下学期一模考试生物试卷）非洲猪瘟是由ASFV（非洲猪瘟病毒）感
染引起的一种急性、高度致死的传染病。为实现ASFV 的快捷高效检测，我国科研人员在ASFV 的K 基因
（大小为790bp）中间插入荧光素酶（Gluc）基因和绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建了ASFV-Gluc-EGFP
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重组病毒体系（如图1），通过PCR 扩增和电泳鉴定重组病毒是否构建成功（结果如图2）。下列说法正确
的是（ ）
A．在PCR 体系中加入图1 中的引物1 和引物2 能特异性扩增重组病毒
B．构建图1 所示结构时发生了磷酸二酯键的断裂和形成
C．PCR 实验中，微量离心管、枪头和移液器等在使用前均须消毒处理
D．图2 中出现790bp、1758bp 的条带说明样液中重组病毒构建成功
二、多选题
3．（2025 年黑龙江省学业水平选择性考试生物预热卷）下图1 是某单基因遗传病的遗传系谱图，在人群
中的患病率为1/8100，科研人员提取了四名女性的DNA，用PCR 扩增了与此基因相关的片段，并对产物酶
切后进行电泳(正常基因含有一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点)。结果如图2，相关叙述正
确的是（ ）
A．该病的遗传方式是常染色体隐性遗传
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B．Ⅱ-1 与Ⅱ-2 婚配生一个患病男孩的概率是1/8
C．该突变基因新增的酶切位点位于310bp 中
D．扩增Ⅱ-2 与此基因相关的片段，酶切后电泳将产生2 种条带
三、非选择题
4．（2025 届辽宁省沈阳市第二十中学高三3 月第六次模拟考试生物试题）工程菌是指用基因工程的方法，
使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基
因的部分结构。
(1)启动子是 的识别和结合部位。图中胰岛素基因以 链作为模板进行
转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止 和 。
(2)为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先 ，
然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
(3)PCR 扩增胰岛素基因，为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的 端添加限制
酶 的识别序列；n 次循环后，至少消耗引物 个。
(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal 产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆
菌接种到添加了 ① 的培养基上，若出现 ② （白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆
菌菌落。
5．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）金黄色葡萄球菌（简称Sa）可能引发从轻微
皮肤感染到严重的全身感染，尤其对免疫力低下者危害更大。预防感染的关键在于良好的卫生习惯和合理
使用抗生素。但不规范使用抗生素易出现抗药性Sa。推测Sa 产生头孢霉素抗性与其R 基因有关。为验证该
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推测，以下图中R 基因的上、下游片段及质粒1 共同构建质粒2，然后通过同源重组（质粒2 中的上、下
游片段分别与Sa 基因组中R 基因上、下游片段配对，并发生交换）敲除Sa 的R 基因。
(1)操作步骤如下：
①根据图1 信息，质粒2 的构建过程中用引物 （填数字）进行PCR 扩增，每次循环一般可以分为
三步，n 次循环后可以得到等长的目的基因 个。然后选择限制酶 对扩增产物进行酶切，然后回
收上、下游片段，再与SacII 酶切质粒1 所得大片段连接，获得质粒2。
②用质粒2 转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，然后涂布在含氯霉素的平板上，经培
养获得含质粒2 的Sa 单菌落。
③将步骤②获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R 基因的概率，随后稀释涂布在含 的平板上，
筛选并获得不再含有质粒2 的菌落。从这些菌落中分别挑取少许菌体，依次接种到含 的平板上，若无
法增殖，则对应菌落中细菌的R 基因可能被敲除。
(2)以③获得的菌株基因组为模板，采用不同引物组合进行PCR 扩增，产物一般通过 （技术名称）来
鉴定。检测结果如下图所示，表明R 基因已被敲除的是 。
题型3 细胞工程
一、单选题
1．（黑龙江省部分学校2025 届高三下学期二模考试生物试题）抗体—药物偶联物目前已成为肿瘤治疗最
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有效的手段之一，其基本原理是将特定的药物与单克隆抗体结合在一起，可特异性地杀死患者体内的癌细
胞，基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．过程①注射相同的特定抗原的目的是生成能产生特定抗体的细胞
B．过程③获得的细胞丙的特点是不能无限增殖，只能产生抗体
C．过程④对细胞丙进行克隆化培养和抗体检测，最终得到细胞丁
D．利用单克隆抗体的导向功能可对某些癌症患者有较好的疗效
2．（2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联合
模拟考试生物试题）锈菌是一种真菌，可以通过无性菌丝的融合来进行体细胞杂交。小麦感染锈菌后会导
致产量下降，对锈菌的遗传学研究可以为防治锈菌提供新思路。下列相关说法错误的是（ ）
A．锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果
B．锈菌体细胞杂交的过程中会使其细胞壁中的纤维素与果胶分子重排
C．锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型
D．动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程
3．（2025 届吉林省长春市高三下学期质量监测（二） 生物试题）植物细胞悬浮培养是指将游离的单细胞
或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中培养。可利用这种技术制备生物反应器，获得植物细胞
和次生代谢物。下列相关叙述正确的是（ ）
A．获得单个植物细胞需用胶原蛋白酶进行处理
B．次生代谢物是植物基本生命活动所必需的物质
C．悬浮培养形成细胞团的过程体现了植物细胞的全能性
D．利用悬浮培养技术生产次生代谢物可减少植物资源的消耗
4．（2025 届吉林省延边朝鲜族自治州高三一模生物试题）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，
下列叙述正确的是（ ）
A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合
B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活
C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛
D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志
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5．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）角膜是覆盖眼睛的透明组织层，角膜干细
胞通过增殖分化产生角膜上皮细胞来取代凋亡的细胞，并修复较小的角膜损伤。相关研究显示，短期睡眠
不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度，长期睡眠不足会造成角膜严重受损，如角膜变薄。下列相关叙述
正确的是（ ）
A．角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性
B．诱导多能干细胞来源于胚胎，其全能性高，用于治疗角膜损伤相关疾病时，一般不会发生免疫排斥
反应
C．用角膜干细胞体外培养角膜上皮细胞，需定期更换培养基以保证无菌环境
D．短期睡眠不足状态下，大多数的角膜干细胞处于分裂间期，细胞周期变长
6．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）树莓果实营养丰富，应用组织培养技术可
以在短时间内获得大量优质种苗，实现树莓的工厂化生产。下列与树莓组织培养相关叙述正确的是（ ）
A．采用组织培养技术对树莓茎尖脱毒处理后，可以抵抗病毒的感染
B．使用MS 培养基时，应将茎尖的形态学上端朝上，并完全插入到培养基中
C．用幼茎进行组织培养时，需用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的混合液进行消毒
D．欲将试管苗移栽到已消毒的蛭石中，应将其在培养箱中打开封口膜几天，再用流水清洗掉根部的培
养基后进行
7．（2025 普通高校招生适应性测试内蒙古生物卷（八省联考））关于膜融合的相关对象，下列叙述正确
的是（ ）
A．胰蛋白酶分泌过程中，内质网产生的囊泡会与细胞膜融合
B．克隆羊过程中，电融合法促进供体细胞核和卵细胞融合
C．制备单克隆抗体过程中，将骨髓瘤细胞和T 细胞融合
D．清除衰老细胞器过程中，会存在囊泡与溶酶体的融合
二、多选题
8．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）下图为全球首例非人灵长类克隆动物的培育
过程，为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d 的
mRNA 注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA 处理了它。下列说法中错误的是（ ）
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A．非人灵长类克隆动物成功率低的原因之一为供体细胞的细胞核难以完全恢复分化前的功能状态
B．应将采集到的卵母细胞培养到MII 期再通过显微操作去除其核膜包被的细胞核
C．图中对于重构胚的处理使其中某些基因的甲基化程度和组蛋白的乙酰化程度增加，有利于重构胚的
正常发育
D．在胚胎移植前，需要对代孕母猴注射糖皮质激素等免疫抑制剂，防止免疫排斥的发生
9．（2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题）SLPI 蛋白是免疫应
答的重要调节因子。通过基因工程技术，利用大肠杆菌表达系统表达的猪源SLPI 蛋白，可用于制备抗SLPI
单克隆抗体，过程如下图。下列叙述错误的是（ ）
A．工程菌生产的SLPI 蛋白是单细胞蛋白
B．PEG 可介导甲细胞和乙细胞特异性融合
C．所有融合细胞均可在HAT 培养基中生长
D．SLPI 蛋白可参与图中过程②和过程④
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