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猜押06 生物技术与工程
猜押考点
3 年真题
考情分析
押题依据
生物技术
与工程
2022 年辽
宁卷第8、
12、14、
15、18、
24 题
2023 年辽
宁卷第7、
8、9、
13、14、
24、25 题
2024 年吉
林卷第6、
7、14、
19、25 题
2025 年新高考生物新结构体系下，生
物技术与工程因其科技前沿性，多以实验
过程和结果分析的新情境呈现。新情境呈
现方式多样,有坐标曲线,有图表,还有流程
图及文字介绍。
考查考生在新情境下获取信息的理解
能能力、解决问题能力、实验探究能力和
创新能力。
生物技术与工程类题型要求考
生在阅读理解的基础上，依据题目
提供的信息，联系所学的知识和方
法，实现信息的迁移，达到灵活解
题的目的；基因工程几乎每年均有
考查，多以基因工程的基本程序为
背景，既可单独考查其中相关的生
物学原理和注意事项，也可结合细
胞工程进行综合考查
题型1 发酵工程
一、单选题
1．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）某兴趣小组欲对牛奶制品中乳酸菌的多样
性进行研究，他们采集菌种并做了相关实验。下列叙述正确的是（ ）
A．将分离后的乳酸菌接种到含有抗生素的培养基中培养
B．筛选菌种时，可选用牛肉膏蛋白胨液体培养基观察菌落特征
C．在稀释涂布平板法操作中，需用已灭菌冷却的涂布器蘸取少量菌液进行接种
D．鉴定细菌种类时，除观察菌落特征外，还可借助PCR 等方法
【答案】D
【来源】2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷
【分析】微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固
体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分
离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是纯化的菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一
1
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系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
【详解】A、抗生素会杀死乳酸菌，故分离后的乳酸菌接种到不含抗生素的培养基中培养，A 错误；
B、观察菌落特征要选用固体培养基，B 错误；
C、如用稀释涂布平板法接种，需将菌液滴在培养基上，再用涂布器涂布均匀，C 错误；
D、不同种类细菌的理化特性一般不同，鉴定细菌种类时，除根据菌落特征进行形态学鉴定外，还可以借
助PCR 等生物化学的方法进行鉴定，D 正确。
故选D。
2．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）关于利用乳酸菌制作传统发酵食品，下列叙
述正确的是（ ）
A．制作泡菜的过程是无氧条件下乳酸菌单一菌种的发酵
B．制作酸奶的牛奶须经过高压蒸汽灭菌后再接种乳酸菌
C．腌制两天后，泡菜的风味逐渐显现应及时食用，此时泡菜中亚硝酸盐的含量较低
D．控制好发酵时间和温度，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质
【答案】D
【来源】2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题
【分析】泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。亚硝
酸盐随腌制时间先增加后下降。
【详解】A、制作泡菜是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，但传统发酵过程中有多种菌种存在，A 错误；
B、牛奶中含有营养物质，高压蒸汽灭菌会破坏牛奶中的营养物质，B 错误；
C、腌制两天后，泡菜中亚硝酸盐的含量较高，C 错误；
D、制作酸奶或泡菜时，控制好发酵时间，以避免过量乳酸影响酸奶或泡菜的口味和品质，D 正确。
故选D。
3．（新考点）传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，
最终陈酿而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统
的监测和控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（ ）
A．醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸
B．与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵
C．醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵
D．在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味
【答案】B
【来源】2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷
2
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【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要
包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，
接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。
【详解】A、醋酸菌是好氧菌，在有氧条件下发酵，才能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸，无氧条件下
不能进行该过程，A 错误；
B、传统发酵是多菌种发酵，现代工业化生产需要接种单一菌种进行发酵，B 正确；
C、醋酸菌属于原核生物，没有线粒体，其发酵过程在细胞质基质中进行，C 错误；
D、在工业化生产中，发酵罐严格灭菌，能避免杂菌污染，因为杂菌可能会与发酵菌种竞争营养物质等，
从而影响食醋品质和风味，D 错误。
故选B。
二、多选题
4．（2025 届吉林省白城市洮北区白城市第一中学高三一模生物试题）通过发酵罐发酵可大规模生产谷氨
酸，生产中常用的菌种是好氧的谷氨酸棒状杆菌。下面有关谷氨酸发酵过程的叙述，错误的是（ ）
A．溶氧充足时，发酵液中有乳酸的积累
B．发酵液中碳源和氮源比例的变化不影响谷氨酸的产量
C．菌体中谷氨酸的排出，有利于谷氨酸的合成和产量的提高
D．发酵液pH 呈碱性时，有利于谷氨酸棒状杆菌生成乙酰谷氨酰胺
【答案】ABD
【来源】2025 届吉林省白城市洮北区白城市第一中学高三一模生物试题
【分析】发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，
或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭
菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
【详解】A、谷氨酸棒状杆菌是好氧细菌，在氧气充足时，不会有乳酸的积累，A 错误；
B、碳源与氮源之比影响谷氨酸的产量，当培养基中碳源与氮源之比为4 1∶时，菌体大量繁殖而产生的谷氨
酸少，而当培养基中碳源与氮源之比为3 1∶时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸的合成量增加，B 错误；
C、谷氨酸合成过多时，会抑制谷氨酸脱氢酶的活性，从而使谷氨酸的合成过程中断，因此需要及时排出
谷氨酸，才可以解除抑制作用，C 正确；
D、当发酵液的pH 呈酸性时，谷氨酸棒状杆菌会产生N-乙酰谷氨酰胺和谷氨酰胺，D 错误。
故选ABD。
5．（2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题）泡菜汁中乳酸菌的
3
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分离与计数可采用稀释涂布平板法。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基要维持正常的pH，一般应在灭菌前调pH
B．完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在有氧环境下培养
C．稀释涂布平板法计数时，需将泡菜汁中的乳酸菌稀释至30~300 个/mL
D．用稀释涂布平板法统计活菌数目可能会比用细菌计数板统计的数目多
【答案】BCD
【来源】2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题
【分析】平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培
养基的表面；稀释涂布平板法则是菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂
固体培养基的表面，进行培养。
【详解】A、培养基要维持正常的pH，一般应先调pH，再灭菌，A 正确；
B、乳酸菌的代谢类型是异养厌氧型，所以完成接种后，培养乳酸菌的平板需要放置在无氧环境下培养，B
错误；
C、涂布时所用菌液通常不超过0.1mL，平板上的菌落数应介于30～300 个，则涂布用的菌浓度应控制在
300-3000 个/mL，C 错误；
D、细菌计数板计数法统计细菌数时不能区分活菌和死菌，因而会使结果偏大，而用稀释涂布平板法计数
时，则存在多个细菌形成一个菌落的情况，因而会使计数的结果偏小，故用稀释涂布平板法统计活菌数目
可能会比用细菌计数板统计的数目少，D 错误。
故选BCD。
6．（新情境）黄曲霉素是一种污染物，被世界卫生组织划定为1 类致癌物。酵母菌能够以黄曲霉素为碳源
进行代谢，从而将其有效降解。工业化生产食醋的过程极易遭受黄曲霉素的污染，人们往往通过加入筛选
得到的高效降解黄曲霉素的酵母菌来保证饮食安全。下列说法错误的是（ ）
A．筛选酵母菌菌株的培养基需以黄曲霉素为碳源，并保持酸性
B．常用平板划线法进行目标酵母菌的接种、分离、纯化和计数
C．利用制作果酒的发酵液进行醋酸发酵，可能会降低黄曲霉素的含量
D．可通过检测酒精的生成量，从而检验酵母菌菌株降解黄曲霉素的能力
【答案】BD
【来源】黑龙江省名校协作体2025 届高三下学期一模考试生物试卷
【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖
源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为
醋酸。
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【详解】A、筛选高效降解黄曲霉素的酵母菌，需需以黄曲霉素为碳源，并保持酸性，A 正确；
B、常用平板划线法、稀释涂布分离法进行目标酵母菌的接种、分离、纯化，计数用稀释涂布分离法，平
板划线法不能计数，B 错误；
C、果酒的发酵液含有酵母菌，可能会降低黄曲霉素的含量，C 正确；
D、醋酸发酵过程使在有氧环境下，应在有氧环境下测定黄曲霉素的含量，以反映菌株降解毒素的能力，
而不是检测酒精的生成量，D 错误。
故选BD。
三、非选择题
7．（新情境）多环芳烃（PAHs）是一种不溶于水的有机物，在培养基中以微小的颗粒状存在，PAHs 在土
壤中的降解速率很慢，并具有致癌和致畸作用。科研人员欲从被PAHs 污染的土壤中分离出高效降解PAHs
的菌株，进行如图所示的实验（培养基乙中PAHs 被降解后会形成透明圈）。回答下列问题：
(1)从培养功能角度分析，培养基甲属于 ；培养基通常需要提前在121℃下进行 。
(2)将培养基甲中的目的菌接种到培养基乙中的方法是 ，该方法不仅适用于筛选某种菌株，还可用于
。
(3)筛选PAHs 降解菌实验时，过程③所需要的实验工具有 （答出两种）。过程④挑选的单菌落应该是
透明圈直径与菌落直径比值 （填“最小”或“最大”）的。
(4)在5 个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1 mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为48、
50、54、56、52，则每升原菌液样品中细菌数为 个。如果用显微镜直接计数法对细菌进行计数，所
统计的细菌数通常会比上述方法统计数目偏 （填“大”或“小”），原因是 。
【答案】(1) 选择培养基 高压蒸汽灭菌
(2) 稀释涂布平板法 微生物的计数
(3) 微量移液器、涂布器 最大
(4) 5.2×108 大 统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和
【来源】黑龙江省部分学校2025 届高三下学期二模考试生物试题
【分析】图示表示科研人员从被PAHs 污染的土壤中分离出高效降解PAHs 的菌株的主要步骤，培养基中加
入多环芳烃（PAHs）作为唯一碳源，目的是筛选出高效降解PAHs 的菌株。
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【详解】（1）该实验的目的是从被PAHs 污染的土壤中分离出高效降解PAHs 的菌株，所以从培养功能角度
分析，培养基甲属于选择培养基；培养基通常需要提前在121℃下进行高压蒸汽灭菌。
（2）从培养基乙呈现的效果图可知：将培养基甲中的目的菌接种到培养基乙中的方法是稀释涂布平板法，
该方法还可用于微生物的计数。
（3）筛选PAHs 降解菌实验时，过程③采用稀释涂布平板法对目的菌进行接种，需要用微量移液器取
0.1mL 菌液，滴加到培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。培养基乙中PAHs 被降解
后会形成透明圈，透明圈直径与菌落直径比值越大，降解PAHs 的效果越好，因此过程④挑选的单菌落应该
是透明圈直径与菌落直径比值最大的。
（4）在5 个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1 mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为
48、50、54、56、52，则每升原菌液样品中细菌数为（48＋50＋54＋56＋52）÷5×103÷0.1 ×103＝5.2×108个。
由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以稀释涂布平板法统计的细菌数通常
会比实际数目偏小。如果用显微镜直接计数法对细菌进行计数，由于统计的结果一般是活菌数和死菌数的
总和，所以统计的细菌数通常会比上述方法统计数目偏大。
题型2 基因工程
一、单选题
1．（2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联合
模拟考试生物试题）新型蛋白质进化模型EVOLVEpro 可以利用氨基酸序列，仅通过少量学习和最低限度的
实验测试来预测蛋白质空间结构，从而获得新型高活性蛋白质改造方案。下列有关说法正确的是（ ）
A．预测蛋白质结构需要依据肽链中肽键的结构、氨基酸的物理性质与结构
B．氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换一定使蛋白质的结构和功能发生改变
C．EVOLVEpro 在蛋白质工程广泛应用后将不再需要借助基因工程手段改造蛋白质
D．通过EVOLVEpro 得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产
【答案】D
【来源】2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联
合模拟考试生物试题
【分析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合
成，对现有蛋白质进行改造，或者制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需求。
【详解】A、对蛋白质进行分子设计应从预期的蛋白质功能出发，对蛋白质的空间结构进行设计，不是肽
键的结构和氨基酸的物理性质与结构，A 错误；
B、氨基酸是蛋白质的基本单位，氨基酸发生替换后蛋白质的结构和功能可能没有发生改变，尤其个别氨
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基酸的改变可能没有影响，B 错误；
C、新型蛋白质进化模型EVOLVEpro 可以利用氨基酸序列，蛋白质工程仍需要基因修饰或基因合成等手段，
EVOLVEpro 在蛋白质工程广泛应用后将还需要借助基因工程手段改造蛋白质，使得产品更优良，C 错误；
D、通过EVOLVEpro 得到的蛋白质还需要进行进一步的功能检测实验才可以投入生产，确保对人体安全没
有副作用，D 正确。
故选D。
2．（黑龙江省名校协作体2025 届高三下学期一模考试生物试卷）非洲猪瘟是由ASFV（非洲猪瘟病毒）感
染引起的一种急性、高度致死的传染病。为实现ASFV 的快捷高效检测，我国科研人员在ASFV 的K 基因
（大小为790bp）中间插入荧光素酶（Gluc）基因和绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建了ASFV-Gluc-EGFP
重组病毒体系（如图1），通过PCR 扩增和电泳鉴定重组病毒是否构建成功（结果如图2）。下列说法正确
的是（ ）
A．在PCR 体系中加入图1 中的引物1 和引物2 能特异性扩增重组病毒
B．构建图1 所示结构时发生了磷酸二酯键的断裂和形成
C．PCR 实验中，微量离心管、枪头和移液器等在使用前均须消毒处理
D．图2 中出现790bp、1758bp 的条带说明样液中重组病毒构建成功
【答案】B
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【来源】黑龙江省名校协作体2025 届高三下学期一模考试生物试卷
【分析】基因工程的操作步骤：（1）目的基因的获取；方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增和
人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤。基因表达载体包括目的基因、启动子、
终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞；根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目
的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效
的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：
分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA 是否插入目的基因-DNA 分子杂交技术②检测目的基
因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术；个体水平
上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、引物1 和引物2 是根据K 基因两端的序列设计的，在PCR 体系中加入图1 中的引物1 和引物2
不一定能特异性扩增重组病毒，可能重组病毒基因未成功插入，这时只扩增出K 基因，A 错误；
B、构建图1 所示的重组病毒体系时，需要将Gluc 基因和EGFP 基因插入到K 基因中间，这一过程通常是通
过基因工程的操作，如用限制酶切割载体和目的基因（产生黏性末端或平末端），然后用DNA 连接酶连接。
限制酶切割DNA 时会断裂磷酸二酯键，DNA 连接酶连接DNA 片段时也会形成磷酸二酯键，所以构建过程
中发生了磷酸二酯键的断裂和形成，B 正确；
C、在PCR 实验中，微量离心管、枪头和移液器等在使用前均须进行高压蒸汽灭菌处理，而不是消毒处理，
C 错误；
D、已知K 基因大小为790bp，若重组病毒构建成功，PCR 扩增产物应该包含完整的K 基因以及插入的
Gluc 和EGFP 基因，其大小应该大于790bp。 图2 中出现790bp 的条带，可能是未发生重组的正常K 基因
扩增产物；出现1758bp 的条带，由于不知道插入的Gluc 和EGFP 基因的总长度是否刚好能使扩增产物达到
1758bp ，且仅根据这两个条带不能确凿地说明样液中重组病毒构建成功，有可能存在其他非预期的扩增
情况，D 错误。
故选B。
二、多选题
3．（2025 年黑龙江省学业水平选择性考试生物预热卷）下图1 是某单基因遗传病的遗传系谱图，在人群
中的患病率为1/8100，科研人员提取了四名女性的DNA，用PCR 扩增了与此基因相关的片段，并对产物酶
切后进行电泳(正常基因含有一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点)。结果如图2，相关叙述正
确的是（ ）
8
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A．该病的遗传方式是常染色体隐性遗传
B．Ⅱ-1 与Ⅱ-2 婚配生一个患病男孩的概率是1/8
C．该突变基因新增的酶切位点位于310bp 中
D．扩增Ⅱ-2 与此基因相关的片段，酶切后电泳将产生2 种条带
【答案】AC
【来源】2025 年黑龙江省学业水平选择性考试生物预热卷
【分析】分析图1，Ⅰ-1 和Ⅰ-2 表现正常，但生下了Ⅱ-2 的患病女性，所以该病是常染色体隐性遗传病，
用A/a 表示控制该病的基因，所以，Ⅰ-1 和Ⅰ-2 基因型是Aa。从图2 中可以看出，Ⅱ-3、Ⅱ-4 和Ⅰ-2 电泳
图相同，所以基因型都是Aa，Ⅱ-5 与他们不同，但表现正常，基因型是AA。
【详解】A、Ⅰ-1 和Ⅰ-2 表现正常，但生下了Ⅱ-2 的患病女性，所以该病是常染色体隐性遗传病，A 正确；
B、该病在人群中的患病率为1/8100，则致病基因频率为1/90，正常基因频率为89/90，根据基因平衡定律，
Ⅱ-1 表现正常，基因型为Aa 的概率=Aa/AA+Aa=(2×A 基因频率×a 基因频率)/(A 基因频率×A 基因频率+2×A 基
因频率×a 基因频率)=(2×1/90×89/90)/（1/90×1/90+2×1/90×89/90）=2/91，其与Ⅱ-2Aa 婚配生一个患病男孩
的概率为2/91×1/4=1/182，B 错误；
C、结合图2 可知，正常基因酶切后可形成长度为310bp 和118bp 的两种DNA 片段，而基因突变酶切后可
形成长度为217bp、93bp 和118bp 的三种DNA 片段，这说明突变基因新增的酶切位点位于长度为310bp
（217+93）的DNA 片段中，C 正确；
D、基因突变酶切后可形成长度为217bp、93bp 和118bp 的三种DNA 片段，Ⅱ-2 基因型是aa，只含有突变
基因，所以酶切后电泳将产生三种条带，D 错误。
故选AC。
三、非选择题
4．（2025 届辽宁省沈阳市第二十中学高三3 月第六次模拟考试生物试题）工程菌是指用基因工程的方法，
使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基
因的部分结构。
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(1)启动子是 的识别和结合部位。图中胰岛素基因以 链作为模板进行
转录。构建基因表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止 和 。
(2)为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质，获取目的基因时通常先 ，
然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
(3)PCR 扩增胰岛素基因，为了使目的基因与载体能正确连接，需要在引物的 端添加限制
酶 的识别序列；n 次循环后，至少消耗引物 个。
(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal 产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。将转化后的大肠杆
菌接种到添加了 ① 的培养基上，若出现 ② （白色/蓝色）菌落，则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆
菌菌落。
【答案】(1) RNA 聚合酶 A 质粒或目的基因自身环化 目的基因与质粒反向连接
(2)提取胰岛B 细胞中的mRNA
(3) 5' EcoRI 和XhoI 2（n+1）-2
(4) X-gal、氨苄青霉素 白色
【来源】2025 届辽宁省沈阳市第二十中学高三3 月第六次模拟考试生物试题
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR 技术扩
增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动
子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。
（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）启动子位于DNA 上，是RNA 聚合酶的识别和结合部位；分析题图可知，转录的方向为从左
到右，且是从RNA 的5’→3’，DNA 链的-OH 端为3’端，故胰岛素基因以A 链作为模板进行转录；构建基因
10
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表达载体时一般至少需要两种限制酶，以防止质粒或目的基因自身环化及目的基因与质粒反向连接。
（2）逆转录是以mRNA 为模板，合成DNA 的过程，故为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋
白质，获取目的基因时通常先提取胰岛B 细胞中的mRNA，然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
（3）PCR 扩增胰岛素基因的前提是获得一段已知目的基因的序列，以用于特异性制备PCR 扩增需要的引物，
目的基因与质粒连接时，需要将目的基因连接到质粒的启动子和终止子之间，它们之间含有XhoI、Mun I、
Sal I、Nhe I、EcoR I 识别序列，但Sal I、Nhe I 在目的基因中也含有识别序列，若用它们切割，会破坏目的
基因，若选择Mun I 则会破坏质粒上的标记基因，所以为使PCR 产物与质粒正确连接，设计引物时可将限
制酶EcoR I 和Xho I 的识别序列添加在对应引物的5'端（子链延伸方向是5'→3'）；每合成一条新链会消耗
一个引物，n 次循环后一共有2（n+1）条链，其中有两条母链不需要消耗引物，故n 次循环后，至少消耗引物
2(n+1)-2 个。
（4）由题意可知，β-半乳糖苷酶可以分解X-gal 产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色，将胰岛
素基因与质粒连接后，重组质粒的lacZ（β-半乳糖苷酶基因）基因被破坏，氨苄青霉素抗性基因没有被破
坏，不能合成β-半乳糖苷酶，不能催化底物（X-gal）水解产生蓝色物质，故呈菌落白色，因此将大肠杆菌
接种到添加了氨青霉素和X-gal 的培养基上筛选出白色的菌落即为工程菌种。
5．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）金黄色葡萄球菌（简称Sa）可能引发从轻微
皮肤感染到严重的全身感染，尤其对免疫力低下者危害更大。预防感染的关键在于良好的卫生习惯和合理
使用抗生素。但不规范使用抗生素易出现抗药性Sa。推测Sa 产生头孢霉素抗性与其R 基因有关。为验证该
推测，以下图中R 基因的上、下游片段及质粒1 共同构建质粒2，然后通过同源重组（质粒2 中的上、下
游片段分别与Sa 基因组中R 基因上、下游片段配对，并发生交换）敲除Sa 的R 基因。
(1)操作步骤如下：
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①根据图1 信息，质粒2 的构建过程中用引物 （填数字）进行PCR 扩增，每次循环一般可以分为
三步，n 次循环后可以得到等长的目的基因 个。然后选择限制酶 对扩增产物进行酶切，然后回
收上、下游片段，再与SacII 酶切质粒1 所得大片段连接，获得质粒2。
②用质粒2 转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，然后涂布在含氯霉素的平板上，经培
养获得含质粒2 的Sa 单菌落。
③将步骤②获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R 基因的概率，随后稀释涂布在含 的平板上，
筛选并获得不再含有质粒2 的菌落。从这些菌落中分别挑取少许菌体，依次接种到含 的平板上，若无
法增殖，则对应菌落中细菌的R 基因可能被敲除。
(2)以③获得的菌株基因组为模板，采用不同引物组合进行PCR 扩增，产物一般通过 （技术名称）来
鉴定。检测结果如下图所示，表明R 基因已被敲除的是 。
【答案】(1) 1、4 变性、复性、延伸 2n-2n Sac
Ⅱ和 EcoRI 脱水四环素 头孢
霉素
(2) (琼脂糖凝胶)电泳 D
【来源】2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题
【分析】PCR 原理：在解旋酶作用下，打开DNA 双链，每条DNA 单链作为母链，以4 种游离脱氧核苷酸为
原料，合成子链，在引物作用下，DNA 聚合酶从引物3'端开始延伸DNA 链，即DNA 的合成方向是从子链的
5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA 的复制过程。DNA 的复制需要引物，其主要原因是
DNA 聚合酶只能从3′端延伸DNA 链。PCR 反应过程是：变性→复性→延伸。
【详解】（1）①由图1 可知，质粒2 上依次接有SacⅡ、EcoRⅠ、SacⅡ三个酶切位点，而质粒1 上只有
SacⅡ酶切位点，R 基因的上下游依次含有SacⅡ、EcoRⅠ、EcoRⅠ、SacⅡ酶切位点，若要构建质粒2，可
以采用引物1 和4 进行PCR 扩增可得到整个R 基因，PCR 反应过程是：变性→复性→延伸，n 次循环后可以
得到等长的目的基因2n-2n。用SacⅡ和EcoRⅠ对PCR 产物进行酶切，然后回收上、下游片段，再与SacII
酶切质粒1 所得大片段连接，获得质粒2。
②用质粒2 转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，因为重组的质粒2 上含有氯霉素抗性
基因，所以可以将重组后的含质粒2 的菌落涂布在含氯霉素的平板上，能生存下来的菌落就是，含质粒2
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的Sa 单菌落。
③为验证该推测需要敲除R 基因，因为质粒2 上含有Y 可被脱水四环素诱导表达的Sa 致死基因，所以将②
获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R 基因的几率，随后稀释涂布在含脱水四环素的平板上，可诱
导R 基因死亡，推测Sa 产生头孢霉素抗性与其R 基因有关，因此可从这些菌落中分别挑取少许菌体，依次
接种到含头孢霉素的平板上，若无法增殖，则对应菌落中细菌的R 基因疑似被敲除。
（2）以③获得的菌株基因组为模板，采用不同引物组合进行PCR 扩增，产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来
鉴定。电泳检测结果如图2，表明R 基因已被敲除的是D 组，由图1 可知，R 基因两侧含有的引物为2 和
3，所以扩增后含有引物2 或3，或者2 和3 的可能含有R 基因，所以表明R 基因已被敲除的是D 组。
题型3 细胞工程
一、单选题
1．（黑龙江省部分学校2025 届高三下学期二模考试生物试题）抗体—药物偶联物目前已成为肿瘤治疗最
有效的手段之一，其基本原理是将特定的药物与单克隆抗体结合在一起，可特异性地杀死患者体内的癌细
胞，基本过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．过程①注射相同的特定抗原的目的是生成能产生特定抗体的细胞
B．过程③获得的细胞丙的特点是不能无限增殖，只能产生抗体
C．过程④对细胞丙进行克隆化培养和抗体检测，最终得到细胞丁
D．利用单克隆抗体的导向功能可对某些癌症患者有较好的疗效
【答案】B
【来源】黑龙江省部分学校2025 届高三下学期二模考试生物试题
【分析】单克隆抗体是由单一B 细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体。通常采用杂交瘤
技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的效应B 细胞和具
有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能产生抗体，又能无限增殖。用具备这种
特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原的特异性抗体即单克隆抗体。
【详解】A、过程①注射特定抗原的目的是刺激小鼠产生能分泌特定抗体的B 淋巴细胞，而不是注射相同
的多种特定抗原。只有注射特定抗原，才能使小鼠的免疫系统产生针对该抗原的特异性免疫反应，进而产
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生相应的B 淋巴细胞，A 正确；
B、过程③是将B 淋巴细胞（细胞乙）与骨髓瘤细胞（细胞甲）融合，获得的细胞丙是杂交瘤细胞。杂交
瘤细胞的特点是既能无限增殖，又能产生特定抗体，B 错误；
C、过程④是对杂交瘤细胞（细胞丙）进行克隆化培养和抗体检测，目的是筛选出能产生特定抗体的杂交
瘤细胞，最终得到细胞丁（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）。通过克隆化培养可以大量扩增杂交瘤细胞，
抗体检测则能确定哪些细胞能产生所需的抗体，C 正确；
D、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，利用其导向功能，可将抗癌药物定向带到癌细胞所在位
置，在原位杀死癌细胞，对某些癌症患者有较好的疗效，D 正确。
故选B。
2．（2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联合
模拟考试生物试题）锈菌是一种真菌，可以通过无性菌丝的融合来进行体细胞杂交。小麦感染锈菌后会导
致产量下降，对锈菌的遗传学研究可以为防治锈菌提供新思路。下列相关说法错误的是（ ）
A．锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果
B．锈菌体细胞杂交的过程中会使其细胞壁中的纤维素与果胶分子重排
C．锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型
D．动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程
【答案】B
【来源】2025 年东北三省三校（哈尔滨师大附中、东北师大附中、辽宁省实验中学）高三下学期第一次联
合模拟考试生物试题
【分析】不同物种之间、生物与无机环境之间在相互影响中不断进化和发展，这就是协同进化。
【详解】A、锈菌和小麦的寄生关系是长期协同进化的结果，A 正确；
B、绣菌是真菌，真菌细胞壁的成分是几丁质，不是纤维素和果胶，B 错误；
C、锈菌体细胞杂交后可能会使细胞的染色体数目加倍，从而改变锈菌的表型，C 正确；
D、动物细胞可以在某些病毒的作用下，发生类似锈菌体细胞杂交的过程，即动物细胞融合，D 正确。
故选B。
3．（2025 届吉林省长春市高三下学期质量监测（二） 生物试题）植物细胞悬浮培养是指将游离的单细胞
或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中培养。可利用这种技术制备生物反应器，获得植物细胞
和次生代谢物。下列相关叙述正确的是（ ）
A．获得单个植物细胞需用胶原蛋白酶进行处理
B．次生代谢物是植物基本生命活动所必需的物质
C．悬浮培养形成细胞团的过程体现了植物细胞的全能性
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D．利用悬浮培养技术生产次生代谢物可减少植物资源的消耗
【答案】D
【来源】2025 届吉林省长春市高三下学期质量监测（二） 生物试题
【分析】1、植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适
宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。其具体流程为：接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱
导生根→移栽成活；
2、植物细胞培养即在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其进行增殖的技术。植物细胞培养
需要在无菌条件下进行人工操作：保证水、无机盐、碳源（常用蔗糖）、氮源（含氮有机物）、生长因子
（维生素）等营养物质的供应；需要添加一些植物生长调节物质，主要是生长素和细胞分裂素；愈伤组织
再分化到一定阶段，形成叶绿体，能进行光合作用，故需光照。
【详解】A、获得单个植物细胞一般用纤维素酶和果胶酶处理，因为植物细胞壁的主要成分是纤维素和果
胶，而胶原蛋白酶是用于处理动物组织分散细胞的，A 错误；
B、次生代谢物不是植物基本生命活动所必需的物质，如生物碱、黄酮类等，它们对植物自身可能有多种
功能，但并非维持基本生命活动所必需，植物基本生命活动所必需的物质是初生代谢物，B 错误；
C、植物细胞培养即在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术，原理是通过细胞增
殖使细胞数量增加，C 错误；
D、利用悬浮培养技术生产次生代谢物，不需要大量种植植物来获取，可减少植物资源的消耗，D 正确。
故选D。
4．（2025 届吉林省延边朝鲜族自治州高三一模生物试题）关于生物工程技术过程中出现细胞融合的操作，
下列叙述正确的是（ ）
A．植物体细胞杂交技术，可直接用聚乙二醇处理两种植物细胞进行膜融合
B．单克隆抗体制备技术，两两融合的细胞都能在选择培养基上存活
C．动物体细胞核移植技术，融合细胞可直接移植到受体母牛子宫内获得克隆牛
D．体外受精技术，常以在显微镜下观察到雌、雄原核或两个极体作为受精的标志
【答案】D
【来源】2025 届吉林省延边朝鲜族自治州高三一模生物试题
【分析】植物体细胞杂交时，首先用酶解法去壁，一般使用纤维素酶和果胶酶处理；然后诱导原生质体融
合，采用的方法一般包括物理法（离心、振荡、电融合法）、化学法（用聚乙二醇处理）；培养融合的原
生质体再生出新的细胞壁，形成杂种细胞。然后杂种细胞经过植物组织培养技术可以培养形成杂种植株。
【详解】A、若为植物体细胞杂交技术由于植物细胞的最外层是细胞壁，因此用聚乙二醇处理两种植物细
胞后不会直接出现膜融合，应首先用酶解法去壁，A 错误；
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B、单克隆抗体制备技术中，同种融合的细胞会死亡，只有杂交瘤细胞才能存活，B 错误；
C、若为动物体细胞核移植技术，融合得到的细胞需培养到桑椹胚（桑葚胚）或囊胚，然后移植到受体母
牛子宫内获得克隆牛，C 错误；
D、若为体外受精技术，细胞融合时可在显微镜下观察到雌、雄原核或透明带和卵细胞膜之间的两个极体，
D 正确。
故选D。
5．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）角膜是覆盖眼睛的透明组织层，角膜干细
胞通过增殖分化产生角膜上皮细胞来取代凋亡的细胞，并修复较小的角膜损伤。相关研究显示，短期睡眠
不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度，长期睡眠不足会造成角膜严重受损，如角膜变薄。下列相关叙述
正确的是（ ）
A．角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性
B．诱导多能干细胞来源于胚胎，其全能性高，用于治疗角膜损伤相关疾病时，一般不会发生免疫排斥
反应
C．用角膜干细胞体外培养角膜上皮细胞，需定期更换培养基以保证无菌环境
D．短期睡眠不足状态下，大多数的角膜干细胞处于分裂间期，细胞周期变长
【答案】A
【来源】2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷
【分析】在一定条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多
种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。
【详解】A、角膜干细胞是成体干细胞，分裂能力强，具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，
不具有发育成完整个体的能力，A 正确；
B、诱导多能干细胞来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应，B
错误；
C、定期更换培养基是为了清除代谢物，防止细胞代谢积累物对细胞自身造成危害，C 错误；
D、根据题干“短期睡眠不足增加了角膜干细胞的增殖分化速度”，可知细胞周期会变短，D 错误。
故选A。
6．（2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷 ）树莓果实营养丰富，应用组织培养技术可
以在短时间内获得大量优质种苗，实现树莓的工厂化生产。下列与树莓组织培养相关叙述正确的是（ ）
A．采用组织培养技术对树莓茎尖脱毒处理后，可以抵抗病毒的感染
B．使用MS 培养基时，应将茎尖的形态学上端朝上，并完全插入到培养基中
C．用幼茎进行组织培养时，需用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的混合液进行消毒
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D．欲将试管苗移栽到已消毒的蛭石中，应将其在培养箱中打开封口膜几天，再用流水清洗掉根部的培
养基后进行
【答案】D
【来源】2025 届辽宁省抚顺市高三下学期3 月模拟考试生物试卷
【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、
芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。
【详解】A、采用组织培养技术对树莓茎尖脱毒处理后，获得的脱毒苗只是不含病毒，但不可以抵抗病毒
的感染，A 错误；
B、以茎尖作为外植体进行接种时应将其形态学上端朝上，形态学下端插入培养基中，但不是完全插入到
培养基中，B 错误；
C、用幼茎进行组织培养时，需用适宜浓度的酒精和次氯酸钠的分别进行消毒，且消毒后用无菌水进行冲
洗，C 错误；
D、欲将试管苗移栽到已消毒的蛭石中，应将其在培养箱中打开封口膜几天进行练苗，再用流水清洗掉根
部的培养基（避免被污染）后进行，D 正确。
故选D。
7．（2025 普通高校招生适应性测试内蒙古生物卷（八省联考））关于膜融合的相关对象，下列叙述正确
的是（ ）
A．胰蛋白酶分泌过程中，内质网产生的囊泡会与细胞膜融合
B．克隆羊过程中，电融合法促进供体细胞核和卵细胞融合
C．制备单克隆抗体过程中，将骨髓瘤细胞和T 细胞融合
D．清除衰老细胞器过程中，会存在囊泡与溶酶体的融合
【答案】D
【来源】2025 普通高校招生适应性测试内蒙古生物卷（八省联考）
【分析】分泌蛋白的合成、加工和运输过程：最初是在核糖体中由氨基酸形成肽链，肽链进入内质网进行
加工，形成有一定空间结构的蛋白质，再到高尔基体，高尔基体对其进行进一步加工，然后形成囊泡分泌
到细胞外。该过程消耗的能量由线粒体提供。
【详解】A、胰蛋白酶分泌过程中，内质网产生的囊泡会与高尔基体膜融合，A 错误；
B、克隆羊过程中，供体细胞被注入卵母细胞后，可通过电融合法促进细胞融合，而非促进细胞核与卵细
胞融合，B 错误；
C、制备单克隆抗体过程中，将骨髓瘤细胞和B 细胞融合，C 错误；
D、溶酶体含多种水解酶，能够清除衰老细胞器，清除衰老细胞器过程中，会存在囊泡与溶酶体的融合，D
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正确。
故选D。
二、多选题
8．（2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题）下图为全球首例非人灵长类克隆动物的培育
过程，为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d 的
mRNA 注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA 处理了它。下列说法中错误的是（ ）
A．非人灵长类克隆动物成功率低的原因之一为供体细胞的细胞核难以完全恢复分化前的功能状态
B．应将采集到的卵母细胞培养到MII 期再通过显微操作去除其核膜包被的细胞核
C．图中对于重构胚的处理使其中某些基因的甲基化程度和组蛋白的乙酰化程度增加，有利于重构胚的
正常发育
D．在胚胎移植前，需要对代孕母猴注射糖皮质激素等免疫抑制剂，防止免疫排斥的发生
【答案】BCD
【来源】2025 届黑龙江省哈尔滨市三中高三一模考试生物试题
【分析】细胞核移植概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组
并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。
【详解】A、在动物体细胞核移植中，非人灵长类动物的体细胞核移植非常困难，主要原因一方面是供体
细胞的细胞核在去核卵母细胞中不能完全恢复其分化前的功能状态，这导致了胚胎发育率低；另一方面是
对非人灵长类动物胚胎进行操作的技术尚不完善，A 正确；
B、将卵母细胞培养到MII 期后进行去核操作，此时细胞核退化，出现的是纺锤体-染色体复合物，故去核
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的实质是去除卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物，B 错误；
C、结合题意和图示操作可知，将组蛋白去甲基化和增加乙酰化，有利于重构胚的分裂和发育，使其完成
细胞分裂和发育进程，C 错误；
D、代孕母猴在胚胎移植前应进行同期发情处理以使其与供体处于相同的生理状态，但由于受体对外来胚
胎几乎不发生免疫排斥，因此不需要对代孕母猴注射免疫抑制剂，D 错误。
故选BCD。
9．（2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题）SLPI 蛋白是免疫应
答的重要调节因子。通过基因工程技术，利用大肠杆菌表达系统表达的猪源SLPI 蛋白，可用于制备抗SLPI
单克隆抗体，过程如下图。下列叙述错误的是（ ）
A．工程菌生产的SLPI 蛋白是单细胞蛋白
B．PEG 可介导甲细胞和乙细胞特异性融合
C．所有融合细胞均可在HAT 培养基中生长
D．SLPI 蛋白可参与图中过程②和过程④
【答案】ABCD
【来源】2025 届吉林省东北三省教育教学联合体高三下学期3 月联合模拟预测生物试题
【分析】在制备单克隆抗体时，首先要给小鼠免疫，产生相应的浆细胞，然后将浆细胞与骨髓瘤细胞融合，
经过选择培养基两次筛选，最后获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。在单克隆抗体的制备过程中，使用了
动物细胞培养和动物细胞融合等动物细胞工程技术。
【详解】A、单细胞蛋白是微生物菌体，而不是蛋白质，而SLPI 蛋白是蛋白质，A 错误；
B、PEG 可介导甲细胞和乙细胞融合，而不是特异性的融合，诱导过程中也可能存在相同的细胞融合，B 错
误；
C、同种细胞核融合形成的细胞不能在HAT 培养基中生长，因此利用该选择培养基可筛选出杂交瘤细胞，C
错误；
D、猪源SLPI 蛋白用于制备可稳定分泌抗SLPI 单克隆抗体的杂交瘤细胞，在过程①中可以作为抗原刺激机
体产生经免疫的B 细胞，在过程④中可以用于抗体检测，但②过程是诱导细胞融合，没有SLPI 蛋白参与，
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D 错误。
故选ABCD。
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