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微专题9 限时训练 微生物培养技术
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
.微生物的基本培养技术（提供营养，确保无其他杂菌）
（一）培养基的配制
1.培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.种类
a.按物理性质分
固体培养基（加琼脂）：用于实验室菌种的分离.鉴定.计数等
液体培养基（不含凝固剂）：用于工业生产（扩大培养）
b.按用途分
选择培养基：从众多微生物中分离所需要的微生物
鉴别培养基：鉴别不同种类的微生物
c.按成分分
天然培养基（有些成分未知）：用于工业生产
合成培养基（各成分已知并按一定比例配制的）：用于实验室分离.鉴定.计数
比较
概念
举例
选择培
养基
培养基中加入某种化学物质以促
进所需要的微生物生长，抑制不
需要的微生物生长
1. 培养基中加入青霉素：培养酵母菌和霉菌，抑
制细菌生长
2. 加入高浓度食盐，培养耐盐菌，如金黄色葡萄
球菌
鉴别培
养基
根据微生物的代谢特点在培养基
中加入某种指示剂或化学药品
在培养基中加入伊红-亚甲蓝：鉴别饮用水中是否
含有大肠杆菌（菌落呈深紫色，并带有金属光
泽）
3.培养基的成分
a.1000ml 牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
组分
含量
提供的主要营养
牛肉膏
5g
碳源.磷酸盐和维生素等
蛋白胨
10g
氮源和维生素等
NaCl
5g
无机盐
H2O
定容至1000ml
水
b.营养成分：虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水.碳源.氮源.无机盐等营养物质
此外，培养基还需满足微生物生长对PH.特殊营养物质以及O2的需求
例如培养 乳酸杆菌—维生素；细菌—培养基调至中性或弱碱
霉菌—培养基调至酸性；厌氧微生物—提供无氧条件
碳源 无机碳：CO2，NaHCO3—培养自养生物
有机碳：葡萄糖，脂肪酸，花生粉，饼，石油等—提供异养生物
氮源 无机氮：N2,NH3,铵盐，硝酸盐
有机氮：蛋白胨，尿素等
（二）无菌技术
1
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1.获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵
消毒：是指使用较为温和的物理.化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物
灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢（抗逆性休眠体）和
孢子（无性生殖细胞）
a. 对于操作的空间.操作者的衣着和手进行清洁和消毒
b. 用于微生物培养的器皿.接种用具和培养基等进行灭菌
c. 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行
d. 应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
2.常用方法
消毒
a. 煮沸消毒：100℃煮沸5~6min
b. 巴氏消毒：不耐高温的液体，如牛奶 在62-65℃消毒30min 或80-90℃处理30s-1min 可杀
死牛奶中绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分
c. 化学药剂消毒：酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等
d. 紫外线消毒：接种室，接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min 在照射前，适
量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液
e. 生物消毒法：利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物
灭菌
a. 湿热灭菌：用沸水.流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法，其中高压蒸汽灭菌效果最好。压
力100kpa，温度121℃，维持15-30min（培养基灭菌）
b. 干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的，如玻璃器皿（吸管，培养皿和金属用具等）。
温度160-170℃的热空气中维持2-3h。
c. 灼烧灭菌：接种工具如涂布器.接种环.接种针或其他金属用具.直接在酒精灯火焰的充分燃
烧层灼烧，试管口.瓶口也可以灼烧灭菌。
（三）微生物的纯培养
1.相关概念：
培养物：将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体
纯培养物：由一个单体繁殖所获得的微生物群体
纯培养：获得纯培养物的过程
2.常用接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法
平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作
目的是：将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由
一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
稀释涂布平板法：则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到
琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的
微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。
3.实践：酵母菌的纯培养 P12
（1）原理：微生物群分散成单个细胞在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见
的，有一定形态结构的子细胞群体，这就是群落。
（2）方法：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培
养得到的单一菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
（3）步骤
2
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1)
制备培养基
配制培养基：马铃薯切块+水 煮 软烂 过滤 滤液+葡萄糖+琼脂
灭菌 培养基：湿热灭菌（高压蒸汽灭菌），压力100kpa，温度121℃
培养皿：干热灭菌，温度160-170℃灭菌2h
倒平板：50℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板
2)
接种和分离酵母菌：用平板划线法接种，未接种的平板倒置
3)
培养酵母菌
待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h
（4）实验结果的分析
a.培养未接种的培养基的目的：是检测培养基是否被杂菌污染（或检测培养基制备是否合
格）未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染，应重新制备；若无菌落生长，
则说明未被污染
b.在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色.形状和大小上相似，酵母
菌落一般表面光滑，多呈乳白色
c.若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操
作过程中被杂菌污染
附：平板划线法操作步骤
1）取菌液:灼烧接种环 冷却并拔棉塞 试管口通过火焰 蘸取一环菌液 瓶口通过火焰并
塞上棉塞
2）第一次划线：用接种环在培养基表面划三至五条平行线
3）重复划线
简答：
1.平板冷却后为什么要将平板倒置？
可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
2.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线结束时，仍然需要灼烧
接种环？为什么？
灼烧时期
目的
取菌种前
杀死接种环上原有微生物
每次划线前
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线
的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
接种结束后
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
3.若要按照如图
d 进行划线，那么在接种划线的操作过程中，共灼烧了几次接种环？
图中共划了5 个区域，在每次划线前后均需要对接种环灼烧灭菌，因此共需要灼烧接种环6
次。
4.在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是？
划线后，线条末端酵母菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使酵
母菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。
二.微生物的选择培养与计数
1.选择培养基
3
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取菌液：取0.1ml 菌液 滴加到培养基上
涂布器消毒：涂布器浸在酒精中
涂布器灭菌：灼烧涂布器，待酒精燃尽，冷却再涂
布
涂布平板
（1）自然界中目的菌的筛选
a.实例：聚合酶链式反应（PCR）中用到的耐高温的DNA 聚合酶，就是从热泉中筛选出来的
水生栖热菌中提取出来的。
b.依据：水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生产，而绝大多数微生物在此条件下不能生存
（生物与环境相适应）
（2）实验室中目的菌的筛选
a.原理：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养.温度和PH 等）同时抑制或阻止其他微
生物的生长。
b.方法：利用选择培养基分离
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
2.微生物的选择培养
（1）方法：对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上
（2）稀释涂布平板法的操作过程
1）铲去土样 2）等比稀释（梯度稀释） 3）涂布平板
（3）培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入恒温箱中培养1~2d
3.微生物的数量测定
（1）稀释涂布平板法—活菌计数法（结果偏小：是菌落数而不是活菌数）
a.原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的
一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌
b.计数原则
1）为保证结果准确，一般选择菌落数为30-300 的平板进行计数
2）在设计试验时，在同一稀释度下，应至少对3 个平板进行重复计数，然后求出平均值
3）统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上
观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
（2）显微镜直接计数法（结果偏大：活菌+死菌）
一种常用的，快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计
数板（比细菌计数板厚，常用于相对较大的酵母菌细胞，霉菌孢子等的计数 P18）
（3）计算公式
每克样品中的菌株数=稀释的倍数·某一稀释度下平板上生长的平均菌落数/涂布平板时所用的稀释液的
体积（ml）
即=C 平M 倍/V 涂 一般V 涂=0.1ml
简答：用平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？
不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环时，
也会杀死一部分菌类。
实践（一）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.实验目的:（1）从土壤中分离出能分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟有多少这
样的细菌
2.背景：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶
CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3
4
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（即加入刚果红的培养基）
NH3会使培养基的碱性增强.PH 升高.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某
种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变红，我们就可以准确地鉴定该菌种能够分解尿素
3.筛选菌株：配制以尿素为唯一氮源的选择培养基
4.设置对照：目的是排出非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
如 a.培养物中是否含有杂菌污染—可设置未涂布的平板做空白对照（或接种无菌水）
b.选择培养基是否筛选出菌落—可用牛肉膏蛋白胨培养基做对照
如果牛肉膏蛋白胨培养基上菌落数目明显大于选择培养基数目，说明选择培养基已筛选出一
些菌落。
5.实验流程
土壤取样 梯度稀释 涂布平板 微生物的培养与观察
注：
a. 土壤取样时，一般要铲去表层土，因为细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝
大多数分布在距地表3~8cm 的土壤层
b. 在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品进行培养，细菌一般选104.105.106的稀释液
进行平板培养，目的是以保证获得菌落数在30-300 之间，适于计数的平板
c. 细菌一般在30-37℃温度下培养1~2d，每隔24h 统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时
的记录作为结果，原因是这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
d. 菌落特征包括：菌落的形状.大小.隆起度和颜色等
简答：利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物都是能分解尿素的微生物吗？
不一定，因为有些微生物可以利用尿素分解菌的代谢产物进行生长繁殖。
（二）分解纤维素的微生物的分离
一.基础知识
（1）纤维素和纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分，即C1酶.CX酶.葡萄糖苷酶。
纤维素 C1酶.CX酶 纤维二糖 葡萄糖苷酶 葡萄糖
（2）纤维素分解菌的筛选—刚果红染色法
原理：刚果红染料能与纤维素这样的多糖形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红
色就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样，我们就可以通过
是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
二.实验流程
土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈
的菌落
注：选择培养基是—纤维素为唯一碳源（液体培养基）
选择培养基的目的是：增加目的菌（纤维素分解菌）的浓度（浓缩培养）
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1.高考常考的结论语句
①培养基及无菌技术
(1)微生物培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源及生长因子等。
(2)制备固体培养基的步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等。
(3)消毒指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢
子)。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
②微生物的分离与培养
(1)纯化微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法和稀释涂布平板
法都能获得单细胞菌落。平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。
(2)平板划线操作的三个易错点：灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种，以免温度太高杀死
菌种；划线时最后一区域不要与第一区域相连；划线时用力要大小适当，防止用力过大将培
养基划破。
③微生物的应用
(1)纤维素酶是一种复合酶，它至少包括C1 酶、CX 酶和葡萄糖苷酶。前两种酶使纤维素分解
成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
(2)尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都需使用选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一
的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。
(3)鉴定尿素分解菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，鉴定纤维素分
解菌的方法为刚果红染色法。
2.比较平板划线法和稀释涂布平板法的区别
3.比较两种微生物计数方法
比较项目
间接计数法(稀释涂布平板法)
直接计数法(显微计数法)
原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生
长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一
利用特定细菌计数板或血细
胞计数板，在显微镜下计算
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个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能
推测出样品中大约含有多少活菌
一定容积的样品中微生物的
数量
公式
每克样品中的菌落数＝C/V×M。C：某稀释
度下平板上生长的平均菌落数，V：涂布平
板时所用的稀释液的体积(mL)，M：稀释倍
数
每毫升原液所含细菌数：每
小格内平均细菌数
×400×104×稀释倍数
缺点
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观
察到的只是一个菌落
不能区分细胞死活
结果
比实际值偏小
比实际值偏大
一、单选题
1．胶质芽孢杆菌可以分解含钾矿物硅酸盐并释放出钾离子供植物利用，它还可产生多种生物活性物质，
促进植物生长。某实验室在土壤中分离到了胶质芽孢杆菌NS05。有关NS05 的分离、纯化和计数的叙述，
正确的是（ ）
A．培养基中的氮源仅能提供 N 元素
B．培养基 pH 的调节在灭菌前后进行都可以
C．可采用平板划线法对胶质芽孢杆菌进行分离和计数
D．分离纯化 NS05 时可使用矿物质硅酸盐作为唯一钾源的培养基
【答案】D
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物
理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。
2、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，
在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能
形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后
可形成单个菌落。
【详解】A、培养基中的氮源除提供N 元素外，还可提供无机盐，A 错误；
B、微生物培养应注意无菌操作，调pH 值应该在灭菌之前，B 错误；
C、平板划线法可对微生物进行分离，但不能用于计数，计数应选择稀释涂布平板法，C 错误；
D、分离纯化 NS05 时可使用矿物质硅酸盐作为唯一钾源的培养基，在该培养基上只有能分解硅酸盐的目
的菌能够生存，D 正确。
故选D。
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2．图甲、图乙是用培养基当纸，接种环当笔，以各种形态颜色的细菌和真菌当颜料画出的别具风格的作
品。下列说法错误的是（ ）
A．图甲和图乙均为固体培养基，均采用了平板划线法进行接种
B．制备培养基时要经过计算→称量→溶化→灭菌→调pH→倒平板等步骤
C．使用接种环接种时，取菌种前和接种完成后都需将接种环进行灼烧灭菌
D．培养成型的作品应低温保存，以免菌株疯长影响整体效果
【答案】B
【分析】按照物理状态对培养基进行分类，可以分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基，一般在固
体培养基上进行选择、鉴定等操作。
【详解】A、一般在固体培养基上进行选择、鉴定等操作，推测图甲和图乙均为固体培养基，均采用了平
板划线法进行接种，A 正确；
B、制备培养基的步骤计算→称量→溶化→灭菌→调pH→倒平板等步骤，即需要现调pH 值，再灭菌，主
要为防止杂菌污染，B 错误；
C、使用接种环接种时，取菌种前和接种后都需将接种环进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再
操作，C 正确；
D、培养成型的作品应低温保存，菌种生长减慢，以免菌株疯长影响整体效果，D 正确。
故选B。
3．生物培养过程中，要十分重视无菌操作，下列有关叙述正确的有（ ）
① 干热灭菌可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢
② 家庭制作泡菜过程中产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长
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③ 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
④ 涂布平板时所用的涂布器需酒精浸泡后灼烧灭菌
⑤ 培养基、锥形瓶都要进行干热灭菌
⑥ 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌
⑦ 带菌培养基必须经灭菌后才能倒掉
A．一项
B．二项
C．三项
D．四项
【答案】C
【分析】常用的灭菌方法主要有灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌和干热灭菌等：①灼烧灭菌：将微生物的接种工
具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此
外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；②干热灭菌：能耐
高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；③
高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力
为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min。
【详解】①干热灭菌属于灭菌，能杀灭环境中一切微生物，包括孢子和芽孢，①错误；
②家庭制作泡菜时乳酸菌产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长，故家庭制作泡菜并无刻意的灭菌环节，
②正确；
③加入培养基中的指示剂和染料需要灭菌，否则会染菌，影响微生物的培养，③错误；
④涂布平板时所用的涂布器需70%酒精浸泡后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，④正确；
⑤培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，⑤错误；
⑥家庭制作葡萄酒时要将容器消毒，葡萄不能灭菌，以避免杀死其上的野生菌种，⑥错误；
⑦进行微生物实验后，带菌培养基必须经灭菌后才能倒掉，以防止污染环境，⑦正确。
故选C。
4．下列关于微生物纯培养的相关叙述中，正确的是（ ）
A．配制培养基、倒平板需在酒精灯火焰旁进行
B．为防止培养基脱落需将接种后的平板正置培养
C．用平板划线法能在固体培养基的表面形成单菌落
D．菌落的形状、颜色、数目都可作为菌种鉴定的依据
【答案】C
【分析】为防止杂菌污染，应在酒精灯火焰旁进行倒平板、接种的操作；为防止培养皿盖上的冷凝水滴落
到培养基上造成污染，应将接种后的平板和未接种的空白培养基放在恒温保温箱中倒置培养；菌落的特征
有形状、颜色、大小、隆起程度等，可作为区别不同菌种的依据。
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【详解】A、需要在酒精灯火焰旁进行的是倒平板、接种的操作，而配制培养基则不需要，A 错误；
B、为防止培养皿盖上的冷凝水滴落到培养基上造成污染，应将接种后的平板和未接种的空白培养基放在
恒温保温箱中倒置培养，B 错误；
C、用接种环在平板培养基表面通过分区划线逐步稀释菌种，以得到较多独立分布的单个细胞，经培养后
可在固体培养基的表面形成单菌落，C 正确；
D、菌种鉴定的依据可以是形状、颜色、大小、隆起程度等，菌落数目多少跟接种的菌液浓度有关，故不
能作为菌种鉴定的依据，D 错误。
故选C。
5．微生物的接种方法有很多种，穿刺接种是指用接种针挑取少量的菌，自培养基的中心垂直地刺入半固
体培养基中，然后沿原穿刺线将针拔出的接种法。下列有关叙述正确的是（ ）
A．该接种方法可用于厌氧菌种的接种
B．灭菌后待培养基冷却到室温时，在酒精灯火焰附近将其倒入培养装置
C．在火焰上灼烧接种针后要立即接种，防止空气中杂菌污染接种针
D．培养基的配制、分装及微生物的接种过程都需要进行无菌操作
【答案】A
【分析】微生物的接种方法主要有穿刺接种、稀释涂布平板法、平板划线法、斜面接种。稀释涂布平板法、
平板划线法和斜面接种是在固体培养基表面接种，针对需氧型微生物；而穿刺接种是在固体培养基内部，
针对厌氧型微生物。
【详解】A、该接种方法可用于厌氧菌种的接种，A 正确；
B、灭菌后待培养基冷却到约50℃时，在酒精灯火焰附近将其倒入培养装置，B 错误；
C、在火焰上灼烧接种针后要冷却，防止高温杀死菌种C 错误；
D、培养基的配制无需无菌操作，D 错误。
故选A。
6．图为筛选产脲酶细菌的过程，下列说法错误的是（ ）
A．利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数
B．选择培养基中应以尿素为唯一氮源
C．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理
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D．鉴别培养基中可加入酚红指示剂
【答案】C
【分析】分离微生物时可用稀释涂布平板法或平板划线法，二者的区别在于前者能对微生物进行计数。
【详解】A、分离微生物时可用稀释涂布平板法或平板划线法，二者的区别在于前者能对微生物进行计数，
A 正确；
B、产脲酶的细菌能以尿素为氮源，选择培养基中应以尿素为唯一氮源，已达到筛选的目的，B 正确；
C、实验操作者的双手进行酒精消毒，C 错误；
D、鉴别培养基中可加入酚红指示剂 ，当产脲酶的细菌能将尿素分解，同时产生氨气，使水呈碱性，酚红
指示剂遇碱变红，D 正确。
故选C。
7．我国科考船采集了深海冷泉附近的沉积物样品，从中分离出微生物，并进一步研究了其生物学特性，
以便更好地利用深海微生物，具体过程如图所示，图中Ⅰ～Ⅴ表示操作步骤。下列相关叙述错误的是（
）
A．培养基①是液体培养基，培养基②是固体培养基
B．用平板划线法纯化菌种时，接种环的灼烧次数比划线次数多一次
C．若在培养过程中向培养基①内充满N₂，则此时的培养基①是鉴别培养基
D．V 过程用稀释涂布平板法对微生物进行计数，结果会小于实际微生物数
【答案】C
【分析】纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是将已经熔化的培养
基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养；在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随
着划线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。稀释涂布平板法是将待分离的菌液经过大量稀释
后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、由图可知：培养基①（目的扩大培养）是液体培养基，培养基②（目的获得菌落）是固体培
养基，A 正确；
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B、每次划线前后均需要对接种环进行灼烧，接种环的灼烧次数比划线次数多一次，B 正确；
C、若在培养过程中向培养基①内充满N₂，以N₂ 为氮源，则固氮微生物才能在该培养基中生长，此时的培
养基①是选择培养基，C 错误；
D 、V 过程用稀释涂布平板法对微生物进行计数，结果会小于实际微生物数，因为当两个细菌连在一起，
平板上看到的是一个菌落，D 正确。
故选C。
8．野生型细菌X 合成的tcel 蛋白和tcil 蛋白使其在与其他细菌的竞争中占优势，其中tcel 蛋白是一种有毒
性的分泌蛋白。研究人员利用野生型细菌X 及其不同突变体进行了实验：在固体培养基表面放置一张能隔
离细菌的滤膜，将一种菌（下层菌）滴加在滤膜上后再放置第二张滤膜，滴加等量的另一种菌（上层菌），
共同培养后，对上、下层菌计数得到如图结果。下列分析正确的是（ ）
A．培养皿、固体培养基和滤膜均需进行消毒处理
B．对上、下层活菌计数时应采用显微镜直接计数
C．由甲、乙、丙三组结果可推测tcil 蛋白能够中和tcel 蛋白的毒性
D．野生型细菌X 在与tcel-tcil 双突变体和tcel 突变体的竞争中均占优势
【答案】C
【分析】稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体
培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。稀释涂布平板计数法的原理：当样品
的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。统计平板上的菌落数，
就能推测样品中大约含有多少活菌。其计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M（C 代表某一稀释度
下平板生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M 代表稀释倍数）。培养基一般都含
有水、碳源、氮源和无机盐。
【详解】A、为避免杂菌的污染，实验中的滤膜、培养皿、固体培养基等均需灭菌处理，A 错误；
B、对活菌进行计数的方法是稀释涂布平板法，具体方法是：先将菌体进行梯度稀释，再涂布到滤膜的表
面，待菌落数稳定时进行计数，不能用显微镜直接计数，显微镜直接计数不能区分死菌和活菌，B 错误；
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C、tcel 蛋白是一种有毒性的分泌蛋白，乙组中野生型可产生tcel 蛋白作用于tcel-tcil 双突变体，后者无法
产生tcil 蛋白中和tcel 蛋白的毒性，使野生型菌在竞争中占据优势；而在丙组中，野生型可产生tcel 蛋白作
用于tcel 突变体，后者可以产生tcil 蛋白中和tcel 蛋白的毒性，使野生型的生长受到抑制，由此推测，tcil
蛋白能够中和tcel 蛋白的毒性，C 正确；
D、由甲组、乙组可知，野生型细菌X 在与tcel-tcil 双突变体的竞争中占优势，由甲组、丙组可知，野生型
细菌X 在与tcel 突变体的竞争中不占优势，D 错误。
故选C。
9．幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜
样本中分离幽门螺杆菌，相关实验步骤和方法不合理的是（ ）
A．配置培养基时应以尿素为唯一碳源
B．可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
C．应设置未接种的培养基，做为对照组
D．采用稀释涂布平板法进行活菌计数，其结果可能会偏小
【答案】A
【解析】1、鉴定分解尿素的细菌：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿
素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够产生脲酶，并分
解尿素。
2、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一
个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
【详解】A、由于尿素热稳定性低，配置选择培养基时应配制培养基并灭菌后，再加入无菌尿素，A 错误；
B、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够产生
脲酶，并分解尿素，为幽门螺杆菌的菌落，B 正确；
C、在培养过程中，可设置一个未接种的培养基做为对照组，证明培养过程中没有杂菌污染，C 正确；
D、稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上
观察到的只是一个菌落，D 正确。
故选A。
【点睛】
10．下列有关大肠杆菌的分离与培养的叙述，正确的是（ ）
A．在大肠杆菌培养基中，由牛肉膏提供维生素，由蛋白胨提供磷酸盐，而琼脂起凝固作用
B．平板划线法是通过连续划线的方法将聚集的菌种分散并计数
C．平板划线法接种时，在接种之前及每次划线操作之前都要对接种环进行灭菌
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D．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养
【答案】C
【解析】用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，可分为制备培养基和纯化大肠杆菌两个阶
段进行，其中制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。微生物接种的核
心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。
【详解】A、大肠杆菌的培养基中牛肉膏提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供碳源、氮源和维
生素，A 错误；
B、涂布平板法可用于微生物的计数，平板划线法只能对菌种进行分离，B 错误；
C、接种之前灼烧是为了杀死接种环上所有的微生物，每次划线前是为了杀死上一次划线后接种环上残留
的菌种，使下次划线菌种直接来源于上次划线的末端，C 正确；
D、培养基培养时倒置于培养箱中即可，不需要放摇床上，D 错误。
故选C。
二、非选择题
11．为保障公共健康，需要定期对公共饮用水进行卫生检测。居于大肠中的各种细菌统称为大肠菌群。一
般用大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌，饮用水的卫生标准是100mL 不得检出大肠菌群（或者
1000mL 饮用水中不超过3 个大肠杆菌）。若要确定饮用水是否合格，可采用膜过滤法检测饮用水中的大
肠菌群，过程如下图所示：
(1)大肠杆菌在人体肠道内生存时，可发酵多种糖类产酸、产气，随粪便排出后在水体中存活时间比其他病
原微生物略长，摇床振荡培养更利于其快速繁殖。据此推断，大肠杆菌代谢类型为________。
A．自养需氧型
B．异养厌氧型
C．异养兼性厌氧型
D．自养厌氧型
(2)检测前需要进行灭菌处理的材料用具有 （选择字母代号填写）；它们均可以采用 法灭
菌。
a．水样收集瓶b．滤膜c．培养基d．镊子e．水样
(3)完成过滤后需将滤膜的 （A 面/B 面）接触配置好的培养基，此过程在微生物实验操作中称为
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。
(4)不用稀释涂布平板法检测饮用水中的大肠菌群的原因是 ；用上图方法观察样本菌落时是否需要
设置对照组？ 。为什么？ 。
(5)KONFIRM 培养基可以检测大肠杆菌的存在。KONFIRM 中含有ONPG 和MUG 可作碳源，色氨酸可作
为氮源。在检测大肠菌群时，检测指标如下表所示。
菌群
检测项目及原理
大肠菌群（有β-半乳糖苷酶）
ONPG 检测：β-半乳糖苷酶水解无色的ONPG 为黄色物质
肠杆菌群（降解色氨酸为吲
哚）
吲哚检测：吲哚可与特定显影剂显为绿色
大肠杆菌（有β－葡糖醛酸酶）
MUG 检测：β－葡糖醛酸酶降解
MUG 为具有荧光的物质
（注：出现上述颜色变化为阳性，未现上述颜色变化为阴性）
结合表中内容分析，若上述检测结果为 （选择字母代号填写），则可以确定待测菌为大肠杆菌。
a．ONPG 检测和吲哚检测为阳性，MUG 检测为阴性 b．吲哚检测为阳性，ONPG 检测和MUG 检测为阴
性c．ONPG 检测、MUG 检测、吲哚检测均为阴性 d．ONPG 检测、MUG 检测、吲哚检测均为阳性
【答案】(1)C
(2) abcd 高压蒸汽灭菌
(3) A 面 接种
(4) 饮用水中大肠杆菌数量太少，如果梯度稀释，最后培养出来的菌落数可能不在30-300 范围内
需要 需判断培养基是否被污染
(5)d
【分析】培养基根据物理性质可分为固体培养基和液体培养基，培养基的基本营养成分有碳源、氮源、无
机盐、水等成分；灭菌和消毒的主要区别是：消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内
部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有
的微生物，包括芽孢和孢子。
【详解】（1）结合题干信息分析可知，大肠杆菌在人体肠道内生存时处于无氧环境或低氧环境，而在摇
床振荡培养更利于其快速繁殖，这说明酵母菌在无氧和有氧条件下都能生存。据此推断，大肠杆菌代谢类
型为异养兼性厌氧型，C 正确，ABD 错误。
（2）结合题干信息可知，检测前需要进行灭菌处理的材料用具有a、b、c、d，对实验器具和接种工具的
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灭菌能够防止杂菌污染，它们均可以采用高压蒸汽灭菌法灭菌，水样中含有需要检测的微生物，灭菌或将
其杀死，导致实验失败，故选abcd。
（3）据图分析可知，滤膜的A 面与水样接触，会带有大肠菌群，所以实验中需要将A 面与培养基接触以
达到接种的目的，此过程在微生物实验操作中称为接种。
（4）一般不用稀释涂布平板法检测饮用水中的大肠菌群，是因为用稀释涂布平板法每平板最多只能检测
0.1mL 饮用水，而饮用水中大肠杆菌数量太少，难以用稀释涂布平板法进行检测，所以不能用涂布平板法
进行检测。严格意义来说，应设置两组对照组。一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水接种；另一
组为阳性对照组，接种大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染，后者可以说明该培养基能否培养出大
肠杆菌。
（5）由于大肠杆菌MUG 检测为阳性，同时大肠杆菌是肠杆菌的一种，所以吲哚检测为阳性，又属于大肠
菌群，所以ONPG 检测为阳性，故进行的三种检测均应该呈阳性，故选d。
12．抗生素是防治家禽大肠杆菌病的常见饲料添加剂，虽能改善动物健康，但长期使用会导致大肠杆菌产
生耐药性。植物精油替代抗生素能有效解决这一矛盾。研究人员以患大肠杆菌病的肉鸭为实验材料，研究
了丁香精油、抗生素对肉鸭日均增重量、免疫球蛋白总量的影响，结果如图。请回答下列问题。
（1）用 法分离相对分子质量不同的免疫球蛋白，从层析柱中后洗脱出来的蛋白质相对分
子质量较 。在装填凝胶柱时不能有气泡存在，原因是 。
（2）测定大肠杆菌对不同抗生素的耐药性实验中，培养基和培养皿分别用 方法灭菌，培
养基需倒置培养，原因是 （答2 点）。用 法纯化并对菌
种进行计数，以抑菌圈直径作为检测指标，直径较大则说明大肠杆菌对该抗生素耐药性较 （填
“强”或“弱”）。
（3）从实验结果分析，丁香精油能增强肉鸭的免疫力，依据是 ；丁香精油比抗生素更适
合作饲料添加剂，理由是 。
【答案】 凝胶色谱 小 气泡会搅乱洗脱液中的蛋白质洗脱次序，影响实验结果 高压蒸
汽灭菌、干热灭菌 ①防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染②避免培养基中水分过快地挥发
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稀释涂布平板法 弱 丁香精油可以提高肉鸭体内免疫球蛋白总量 在提升免疫球蛋白总量上
的作用与抗生素相似，但对于肉鸭增重的效果更明显（或长期使用抗生素会导致大肠杆菌产生耐药性，丁
香精油不会出现这种现象）
【分析】由柱形图分析可知，与对照组对比，抗生素和丁香精油都可以提升肉鸭日均增重量相对值，且丁
香精油提升效果比抗生素效果更好；同时二者也都可以提升肉鸭免疫球蛋白总量，提升肉鸭免疫力，提升
效果差别不大，所以丁香精油比抗生素更适合作饲料添加剂，防治家禽大肠杆菌病。
【详解】（1）凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白
质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通
道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。用凝胶色谱法分离相对分子质量
不同的免疫球蛋白，从层析柱中后洗脱出来的蛋白质相对分子质量较小；由于凝胶柱中的气泡会搅乱洗脱
液中的蛋白质洗脱次序，所以在装填凝胶柱时不能有气泡存在，以免影响实验结果。
（2）培养基和培养皿的灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和干热灭菌；为防止培养皿盖上的水珠滴入培养基
造成污染，并避免培养基中水分过快地挥发，需要将培养基倒置培养；测定大肠杆菌对不同抗生素的耐药
性实验中，可以用稀释涂布平板法纯化并对菌种进行计数，抑菌圈可以表示大肠杆菌对于抗生素的耐药性，
抑菌圈直径越大，表示大肠杆菌对这种抗生素越敏感，耐药性越弱；反之则越不敏感，耐药性越强。
（3）从实验结果分析，丁香精油能增强肉鸭的免疫力，依据是丁香精油可以提高肉鸭体内免疫球蛋白总
量，从而增强肉鸭的免疫力，并且丁香精油在提升免疫球蛋白总量上的作用与抗生素相似，但对于肉鸭增
重的效果更明显，所以丁香精油比抗生素更适合作饲料添加剂。
【点睛】本题考查精油的提取与蛋白质的分离，要求考生识记相关知识，明确精油提取的方法及蛋白质提
取与分离的方法。熟记相关知识并能结合题意分析作答是解题关键。
13．下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答：
(1)过程②中使用到的微生物是 ，该微生物的代谢类型是 。该微生物可以从食醋中分离纯化获
得，方法是：
第一步：（配制培养基）该培养基必须含有微生物生长所需的 、 、 、 等基本营
养成分。
第二步：对培养基用 方法进行灭菌。
第三步：接种
第四步：（培养）温度控制在 。
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第五步：挑选符合要求的菌落。
(2)在苹果醋的制作过程中为防止杂菌污染所用发酵瓶要进行 ，后期发酵时通气口的阀门要及时
（开或关）。
【答案】(1) 醋酸菌 异氧需氧型 水 碳源 氮源 无机盐 高压蒸气灭菌
30～35℃
(2) 清洗、消毒 开
【分析】酒制作是利用了酵母菌的无氧呼吸产生酒精和二氧化碳的原理；果醋制作是利用了醋酸菌的有氧
呼吸．果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是异氧需氧型，条件是持续通氧，温度是30-35℃。
(1)
由苹果酒酿制成苹果原醋，需要使用到的微生物是醋酸菌，其代谢类型是异氧需氧型，条件是持续通氧。
在微生物的分离纯化过程中，常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法等，因此要在培养基中加入
琼脂制备固体培养基，培养基含有的基本成分有碳源、氮源、水和无机盐，对培养基需用高压蒸汽灭菌方
法进行灭菌；醋酸菌适宜生存的温度为30～35℃。
(2)
在苹果醋的制作过程中为防止杂菌污染所用发酵瓶要进行清洗、消毒。醋酸菌是好氧菌，后期发酵时通气
口的阀门要及时开。
【点睛】题以苹果醋制作的实验流程为载体，考查果醋制作的相关知识，考查学生理解所学知识的要点，
把握知识间的内在联系，提升学生获取图示信息、审题能力以及实验知识。
14．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氨菌拌种后播种，可显著提高
产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流
程如下图。请回答：
(1)步骤①土样应取自当地 （填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要
目的是 。
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(2)步骤③将土壤悬浮液稀释了 倍，步骤④所用的接种工具是 。
(3)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的 培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、
倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是 。
Ashby 培养基：甘露醇（C6H14O6）10g，KH2PO40．2g，MgSO4·7H2O0．2g，NaCl0．2g，K2SO40．3g，
CaCO35g，蒸馏水1000mL。
LB 培养基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7．0-7．2
(4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48 小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进
行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12 为进一步鉴定其固氮，科研人员选用发芽一致的玉
米种子进行3 组盆栽实验，30d 后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。
CK：对照处理组
N：尿素处理组（每盆土壤中50mL 有全营养液：成份为在1000mL 无氮植物营养液中加入0．12g 尿素）
CM12：自生固氮菌CM12 处理组（每盆土壤浇50mL 接种自身固氮菌的无氮植物营养液）
①对照组（CK）的处理为 。
②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12 处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处
理组相比，CM12 处理组土壤微生物有机氮含量增加了约 %。
③自生固氨菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是 。
【答案】(1) 表层 使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
(2) 1000 涂布器
(3) Ashby 培养基 检测培养过程中培养基是否被杂菌污染
(4) 每盆土壤浇50mL 无氮植物营养液 83．3 自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的
限制
【分析】1、微生物常见的接种的方法
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（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开
始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个
菌落。
2、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基
和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因
为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；在提供上述几种主要营养物质的基础上，
培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。
【详解】（1）土壤中含有丰富微生物，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大、种类最多。在
富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长，故步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤②需充分振荡
20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中。
（2）由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000 倍，实验中取样进行培养的是稀释倍数为
1000 的试管，实验采用的是稀释涂布平板法，所以步骤④中所用的接种工具是涂布器。
（3）由题干信息分析可知，科研人员的目的是分离土壤中自生固氮菌，故为了模拟类似的生长环境，培
养基中需要添加多种无机盐来模拟土壤环境，同时不能有含氮物质，因此步骤④应选择其中的Ashby 培养
基；纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是检测培养过程中培养基是否被杂菌污染。
（4）①对照组的目的是排除无关变量对实验的影响，故对照组（CK）的处理为每盆土壤浇50mL 无氮植
物营养液。
②由柱状图可知，空白对照组中土壤微生物有机氨含量为10，故尿素处理组的土壤微生物有机氨含量为
12-10=2，而CM12 处理组土壤微生物有机氮含量为22-10=12，故与尿素处理组相比，CM12 处理组土壤微
生物有机氮含量增加值大概为（1-（2÷12））×100%=83.3%。
③自生固氮菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受
宿主的限制。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记相关知识，意在考查考生理解所学知识并能从题目
所给的图形中获取有效信息的能力。
15．土壤对磷有强烈的吸附固定作用，导致土壤中施入的磷肥都变成难溶的无效磷沉积在土壤中，解磷菌
能将土壤中的难溶态磷转化为植物可以利用的状态，对于提高土壤磷元素的有效利用具有促进作用。某研
究小组对某地区土壤微生物的筛选，欲获得具有稳定解磷能力的解磷菌并大量培养，其部分流程如下。
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回答下列问题：
(1)耕地长期大量使用磷肥，除造成土壤板结影响作物产量外，对生态环境还可能具有的不良影响是
。
(2)为防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，需将配置好的解磷菌固体培养基进行灭菌，灭菌常采用的方法是
，待灭菌后的培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯旁倒平板，平板冷凝后，将平板倒置的目的是
。
(3)研究人员利用 法纯化解磷菌种，使得生长出单个菌落，从中获得了3 株具有稳定解磷
能力的解磷菌种P1、P2 和P3，分辨三种菌落特征包括观察菌落的形态和 等（至少写出两
种）。
(4)下图为研究小组采用水解圈法对分离出的三种解磷菌的解磷能力进行检测，以解磷圈大小（D）与菌圈
大小（d）的比值确定解磷菌的解磷效果，其结果如图所示。
三种菌的解磷效果关系为 ，使用单一菌种进行扩大培养，应选用 菌种，
理由是 。
(5)不同菌种之间存在拮抗作用，为探究最佳解磷效果，研究小组研究了不同pH 及不同菌种复合使用条件
下解磷菌的解磷效果，实验结果如图所示。
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不同pH 条件下3 种解磷菌的解磷效果 不同菌种混合后的解磷效果
请从pH 影响解磷效果角度分析P1和P3复合使用效果优于P1和P2复合使用效果的依据是 。
【答案】(1)对水体形成污染，导致水体富营养化
(2) 高压蒸汽灭菌法 防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养
(3) 平板划线法 大小/颜色/或隆起程度/透明度/晕圈大小等
(4) P1＞P2＞P3 P1 P1的溶磷圈D/d 值最大，解磷效果最佳
(5)不同菌种之间存在拮抗作用，P1和P3最佳pH 值不同，相互拮抗较弱，解磷效果最佳，而P1和P2最适
pH 较为一致，拮抗作用较强，解磷效果稍差
【分析】1、实验室常用的灭菌方法：（1）灼烧灭菌:将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属
工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口
等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌。（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，
如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌。（3）高压蒸汽灭菌:将灭菌物品放
置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121C 的条
件下，维持15~30min。
2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种、划线，
在恒温箱里培养，在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能
形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培
养后可形成单个菌落。
(1)
耕地长期大量使用磷肥，除造成土壤板结影响作物产量外，对生态环境还可能具有的不良影响，随着水土
流失，对水体形成污染，导致水体中氮磷等含量过高而出现富营养化的现象。
(2)
根据以上分析可知，对于培养基通常采用高压蒸汽灭菌法处理，待灭菌后的培养基冷却至50℃左右时，在
酒精灯旁倒平板，平板冷凝后，将平板倒置的目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养。
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(3)
微生物常见的接种的方法包括平板划线法和稀释涂布平板法，识图分析可知，研究人员利用了平板划线法
纯化解磷菌种，使得生长出单个菌落，从中获得了3 株具有稳定解磷能力的解磷菌种P1、P2 和P3，不同
菌落的特征不同，包括菌落的形态和大小、颜色（或隆起程度、透明度、晕圈大小等）不同，因此可以通
过分辨三种菌落特征进行区分。
(4)
解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周围会出现透明圈，在固体培养基中分离培养出解磷菌后，需通过测量
透明圈和菌落的直径，比较它们的比值以确定其解磷能力从而筛选出目标菌株。识图分析可知，三种菌的
解磷效果关系为P1＞P2＞P3，由于P1的溶磷圈D/d 值最大，解磷效果最佳，因此使用单一菌种进行扩大培
养，应选用P1。
(5)
根据题意结合图示可知，不同菌种之间存在拮抗作用，P1和P3最佳pH 值不同，相互拮抗较弱，解磷效果
最佳，而P1和P2最适pH 较为一致，拮抗作用较强，解磷效果稍差。
【点睛】本题考查微生物的分离、纯化和培养的知识点，要求学生掌握微生物纯化的方法和培养的过程，
能够正确识图判断获取有效信息，结合所学的微生物分离和培养的知识点解决问题是该题考查的关键，能
够正确分析坐标曲线图和题意，对实验结果做出正确分析。
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