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热点01 微生物
1.发酵技术
2.灭菌技术、纯培养
3.选择培养基、菌落计数
一、单选题
1．养殖池中存在的有毒物质主要是氨和亚硝酸，这两种物质可被硝化细菌吸收利用。研究人员从养殖池的池泥中
分离出硝化细菌并进行计数。下列相关说法错误的是（ ）
A．取样用的铲子和试管使用前后都需要灭菌
B．对硝化细菌的计数可采用稀释涂布平板法
C．分离硝化细菌的培养基为含亚硝酸盐的牛肉膏蛋白胨培养基
D．为保证结果准确，要选择菌落数为30~300 的平板进行计数
2．我国是啤酒生产和消费大国。啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成，其工业化生产的简要流程如图所示，
下列叙述正确的是（ ）
A．大麦萌发时仅产生淀粉酶，几乎不产生蛋白酶
B．赤霉素处理大麦可诱导淀粉酶合成，促进糖化发生
C．酵母的发酵适宜在30~35°C、无氧的环境下进行
D．消毒过滤可杀死所有微生物，延长啤酒的保存期
3．桑葚玫瑰酒既融合了桑葚和玫瑰的果香、花香，又使其营养价值和功能活性增加，极大地满足人们的需求。图
1 为制作桑葚玫瑰酒的装置图；图2 为不同桑葚汁与玫瑰质量比对花色苷含量、酒精度和感官评分(感官评分越高，
品质越好)的影响。下列相关叙述错误的是（ ）
1
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A．桑葚玫瑰酒发酵所用菌种的代谢类型与醋酸菌相同
B．图 1 中排气口连接长而弯曲的胶管可避免其他微生物进入装置
C．由图2 可知，桑葚汁与玫瑰质量比对酒精度影响不大
D．花色苷含量随桑葚汁与玫瑰质量比的增大而降低，质量比为 4：1 时酒的感官评分最高
4．燃料乙醇是一种绿色燃料。研究人员利用酵母菌以霉变的木薯和小麦为原料，混合发酵生产燃料乙醇，流程图
如下。下列叙述错误的是（ ）
A．I 阶段是该发酵生产的中心环节
B．I 阶段的淀粉酶不需进行灭菌处理
C．II 阶段步骤①是接种酵母菌
D．Ⅲ阶段步骤②是产品的分离、提纯
5．纯培养物是由一种微生物组成的细胞群体，通常由一个细胞生长、繁殖形成，除了常规接种方法外，浇注平板
法也可用于获得纯培养物，即将待分离的样品用无菌水进行充分稀释后，取合适稀释度的少量菌悬液倒入已溶化
的固体培养基中充分混匀，再倒入无菌培养皿中培养。下列叙述错误的是（ ）
A．实验室中常利用平板划线法或稀释涂布平板法获得纯培养物
B．为防止培养基再次凝固，融化后的固体培养基需立即与菌悬液混合
C．浇注平板法和稀释涂布平板法均需将待分离的样品进行适宜梯度稀释
D．浇注平板法获得的纯培养物可存在于培养基内部，而平板划线法只在表面
6．下表表示某培养基的配方（生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽），下列叙述不正确的
是（ ）
成分
蛋白
胨
葡萄糖
KH2PO4
伊红
亚甲基蓝
蒸馏水
琼脂
2
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含量
10 g
10 g
2 g
0.4 g
0.065g
1 000 mL
15 g
A．从用途分析该培养基属于选择培养基
B．培养基中提供碳源的物质主要是葡萄糖，提供氮源的物质是蛋白胨
C．该培养基含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质
D．该培养基pH 值应调节至中性或弱碱性
7．传统工艺酿酒过程中，会出现“酿酒不成反酿醋”的现象，即酿出的酒水变酸。下列相关说法错误的是（ ）
A．酒和醋都是利用传统发酵技术制作的食品，它们是我国传统饮食文化的重要组成部分
B．“酸酒”产生的过程中，糖类直接被分解成为乙酸
C．“酿酒不成反酿醋”的原因可能是发酵条件控制出现问题，如容器的密封性
D．酿酒前将酿酒容器高温消毒不一定能够防止酒变酸
8．与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。工业生产上，有时需要对菌种进
行筛选纯化，平板划线法和稀释涂布平板法是常用的获取纯培养物的方法。下列相关叙述错误的是（ ）
A．传统发酵以天然菌种为主，菌种差异、杂菌不明等原因往往造成传统发酵食物品质不一
B．筛选酵母菌菌种时，可在培养基中加入一定量的青霉素来抑制真菌的生长
C．稀释涂布平板法计算获得的菌落数往往少于实际活菌数，采用细菌计数板统计时则相反
D．平板划线法纯化菌种时，对接种环灼烧了5 次，说明操作员在培养基上进行了4 次划线
9．某兴趣小组按照“探究抗生素对细菌的选择作用”的实验步骤进行拓展实验：分别使用含相同浓度艾叶汁和氨
苄青霉素的两种滤纸片，对大肠杆菌进行选择培养，测量抑菌圈的直径变化如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．连续培养时应从抑菌圈边缘的菌落上挑取大肠杆菌
B．氨苄青霉素导致大肠杆菌发生了耐药性突变
C．氨苄青霉素的抑菌效果比艾叶汁更显著
D．使用氨苄青霉素可能更易出现耐药菌
10．研究者从某种海洋微生物中分离了一种新的抗真菌药物，为治疗真菌感染提供新思路。下列有关药物研制或
生产叙述错误的是（ ）
A．按海水的成分和浓度添加相应的无机盐配置的培养基具有选择作用
B．用接种环在培养基表面对样品连续划线、逐步稀释，纯化海洋微生物
C．用固体培养基培养物微生物获得次级代谢产物，用于抗真菌活性检测
D．获得目的微生物后，可进一步利用基因工程方法调节代谢途径提高生产量
11．木质纤维素可被酶水解为葡萄糖和木糖。汉逊酵母是一种耐高温的微生物，可利用木糖合成乙醇等物质，但
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葡萄糖会抑制野生型汉逊酵母利用木糖，进而限制了该酵母利用木质纤维素水解液的能力。下列说法正确的是（
）
A．纤维素水解液可作为汉逊酵母培养基中的碳源和氮源
B．汉逊酵母耐高温的特性使其发酵过程的温控成本增加
C．由于乙醇可杀菌，故利用汉逊酵母生产乙醇时无需严格灭菌
D．改造汉逊酵母使之能利用葡萄糖，可提高纤维素水解液的利用率
12．限量补充培养法可用于检测营养缺陷型菌株(如图)。将诱变后的菌株接种在基本培养基上，野生型菌株迅速形
成较大菌落，营养缺陷型菌株生长、繁殖缓慢，不出现菌落或形成微小菌落。基本培养基中补充精氨酸后，营养
缺陷型菌株快速繁殖。下列叙述不正确的是（ ）
A．用紫外线照射可诱导野生型菌株发生不定向突变
B．精氨酸缺陷型菌株缺乏合成精氨酸的能力
C．③步骤加入精氨酸后抑制了野生型菌株的生长
D．选择图乙中菌落B 分离精氨酸营养缺陷型菌株
13．下列相关说法中，错误的是（ ）
A．利用发酵技术，在鲜奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作过程中，毛霉将蛋白质分解产生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒发酵的产物，也是果醋发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
D．在啤酒生产的主发酵阶段和后发酵阶段，需将温度保持在酵母菌的最适生长温度
14．培养基是指由不同营养物质组合配制而成的，供微生物、植物细胞或动物细胞生长繁殖的营养基质。下列关
于培养基的叙述：错误的是（ ）
A．微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种
B．体外培养杂交瘤细胞时，培养基加入血清后需湿热灭菌以确保无菌
C．配制植物组培的培养基时，用等量葡萄糖代替蔗糖会影响细胞的分裂分化
D．分离并纯化硝化细菌时，培养基中无需添加碳源，但需添加氮源
15．镇江陈醋具有“色、香、酸、醇、浓”之特色，其主要工艺流程如下图。相关叙述正确的是（ ）
A．作为工业生产，镇江陈醋的酿制过程需要做到严格无菌
B．“淋饭”有助于提高发酵原料的透气性，有助于霉菌的糖化等过程
C．接种醋酸菌后的固态发酵需要“翻缸”，主要目的是抑制杂菌
D．后发酵时间越长，醋体中风味物质的不断堆积导致醋品更佳
阅读下列材料， 回答第下面小题。
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氢能是化石能源的重要替代能源。利用光合细菌分解有机废水制氢是制氢技术的重要研究方向。分别以乙酸（|
组）、乳酸（Ⅱ组）和丁酸（Ⅲ组） 作为碳源对某种光合细菌的生长和产氢量进行研究，实验结果如图。
16．由实验结果可知，不同碳源条件和培养时段中，光合细菌种群增长速率最大和产氢速率最大的分别是
（ ）
A．Ⅰ 组的 24-36h、Ⅲ组的 36-48h
B．Ⅱ组的 24-36h、Ⅲ组的 84-96h
C．Ⅲ组的 24-36h、Ⅲ组的 36-48h
D．Ⅲ组的 36-48h、Ⅲ组的 84-96h
17．光合细菌利用有机废水制氢是一种环境友好型能源生产方法。下列叙述错误的是（ ）
A．利用有机废水制氢是废物资源化处理的一种措施
B．光合细菌在三种碳源环境中都呈逻辑斯谛增长
C．碳源是影响光合细菌数量动态变化的外源性因素
D．限制光合细菌种群增长的主要因素是培养液体积
18．堆肥指利用自然界广泛存在的微生物，有控制地促进固体废物中可降解有机物转化为稳定的腐殖质的生物化
学过程。下图为堆肥处理时材料内部温度的变化曲线。若要从堆肥材料中筛选出能高效降解羽毛、蹄角等废弃物
中角蛋白的嗜热菌，下列相关叙述错误的是（ ）
A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高
B．与a 点相比b 点时微生物的数量较多，与c 点相比b 点时微生物种类较多
C．c 点时，可对堆肥取样并用角蛋白氮源培养基对微生物群进行培养和筛选
D．若采用平板划线法分离微生物，需对取样获得的原液进行适当稀释后再划线
19．影印平板法是将长有若干个菌落的平板作为母平板，将其倒置于包有一层灭菌丝绒布的印章上，使印章均匀
地沾满来自母平板的菌落，然后通过此印章将母平板上的菌落“忠实”地接种到不同选择培养基上的培养方法。
通过比较影印平板与母平板上菌落的生长情况，可以筛选出所需要的菌种。已知地衣芽孢杆菌能产生耐高温的α-
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淀粉酶，野生型地衣芽孢杆菌对头孢菌素和庆大霉素均有抗性，利用诱变技术获得的某突变株对头孢菌素和庆大
霉素同时具有敏感性，但其同时也成为了能合成耐高温α-淀粉酶的高产菌株。请利用影印平板法筛选出此高产菌
株。关于实验思路的叙述错误的是（ ）
A．将待测菌悬液用稀释涂布平板法接种到完全培养基平板上培养，待菌落稳定后作为母平板
B．将母平板上的菌落用印章影印接种到同时含有头孢菌素和庆大霉素的选择培养基平板（影印平板）上
C．培养到长出稳定菌落，比较不同平板上相同位置菌落的生长情况
D．在两种平板的相同位置上，在影印平板上不能生长而在母平板上能生长的菌落中含有高产菌落
20．聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被
生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA 的菌种，流程图如下。下列叙
述正确的是（ ）
A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B．步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐菌的生长越有利
C．扩大培养所用的培养基应加入琼脂，放置摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株
D．挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐菌的PHA 含量
二、多选题
21．酸奶中的乳酸与钙结合，可以更好地促进钙的吸收，促进人体骨骼的生长，预防骨质疏松；酸奶中还含有多
种维生素，不仅有益于眼睛、头发，还可以防止细胞的老化；酸奶中含有的乳酸菌还可以提高人体的免疫力，起
到预防疾病的作用。下列叙述正确的是（ ）
A．利用乳酸菌制作酸奶过程不需密闭隔绝空气
B．乳酸菌无氧呼吸不产生二氧化碳，故酸奶胀袋后不能饮用
C．发酵过程中，乳酸菌分解乳糖等糖类为乳酸的过程中无ATP 产生
D．酸奶因发酵过程中奶中的部分糖、蛋白质、脂肪被分解而更易被人体消化吸收
22．无菌技术是微生物培养获得纯净培养物的关键。为避免杂菌污染，常采用高压蒸汽灭菌法等对培养基进行灭
菌，接种、倒平板等环节也都要防止杂菌的污染。下列相关叙述正确的是（ ）
A．煮沸消毒可以杀死所有微生物细胞和部分芽孢
B．培养基在分装到培养皿前需先进行灭菌处理
C．某些微生物能以无机物作为碳源，也能以无机物作为能源
D．为保证超净工作台无菌，接种操作时应打开紫外灯和过滤风
23．下图是研究人员从石油污染的土壤中筛选高效降解石油的细菌（目的菌）流程图。下列叙述正确的是
（ ）
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A．培养皿等用具在使用前后均需进行消毒处理
B．应选择②中培养瓶内“石油含量”显著降低的培养液继续③操作
C．④中可采用平板划线法对筛选得到的目的菌进行纯化
D．若要研究目的菌生长规律，可用培养液培养目的菌并用细菌计数板计数
24．寄生性支原体是肺炎、支气管炎等常见的病原体，也是动物细胞培养难以根除的“绝症”。在分离培养寄生
性支原体时，需要先培养动物细胞后再接种；而培养独立生存的支原体时则不需要。下列表述错误的是（ ）
A．动物细胞培养时可以使用氨苄青霉素防范支原体的感染
B．培养独立生存的支原体一般不需要添加动物血清
C．稀释涂布平板法不能用于支原体的计数
D．支原体细胞内的生物大分子不能使二苯胺试剂变蓝
25．土壤中95%以上的磷为植物很难利用的无效磷。解磷菌能够将磷矿粉等无效磷转化为植物易利用的速效磷。
为研究解磷菌的解磷机理，科研人员将磷矿粉制成培养液，培养从土壤中分离出的2 种解磷菌（M-3-01、B3-5-
6），测定培养液的上清液pH 及其中的速效磷含量，结果如图，下列叙述正确的是（ ）
A．2 种解磷菌是用只含磷矿粉的培养基分离出来的
B．由图可知，168h 以内M-3-01 解磷能力较强
C．B3-5-6 转化无效磷的能力与培养溶液pH 显著相关
D．据图推测B3-5-6 可能借助分泌酸性物质溶解磷矿粉
三、非选择题
26．苹果可用于制作苹果酒、苹果醋饮料和提取具有抗过敏、抗癌细胞增生、调节脂质代谢等多种生理功能的苹
果多酚。如图所示为工业化制作苹果酒和苹果醋的装置。
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(1)甲罐中预留近1/3 的空间，目的是什么？
(2)甲罐连接的双U 型管中一侧注满水的作用是什么？
(3)若图中A 代表无菌空气，则乙罐排出的气体中氧气的含量有什么变化？
(4)回忆我们生活中常见的食物，看看哪些食品是直接由微生物发酵生产的，哪些食品中添加了经发酵生产的食品
添加剂？
27．蒙古马以放牧为主，长期生活在草原上，在饲喂方式上以干草为营养来源，具有耐粗饲料的优良特点，这种
食草特性与其肠道中纤维素分解菌有着密切的联系。研究人员从蒙古马盲肠中分离与筛选纤维素分解菌，按照
“纤维素酶制备→纤维素酶纯化和鉴定→纤维素酶活力检测→纤维素酶酶学性质研究”的思路开展研究。回答下
列问题：
(1)取蒙古马盲肠内容物1.0g,用无菌水稀释成合适浓度的菌悬液，取适量菌悬液通过 的方法接种于以纤
维素粉为唯一碳源的固体培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24h 后，采用刚果红染色法筛选菌株，以
作为筛选细菌降解纤维素能力强弱的标准。
(2)将初筛结果较好的菌株接种于发酵液中，该发酵液以面积为7cm2的定量滤纸片为唯一碳源，据 判断
纤维素酶降解效果从而对菌株进一步筛选。
(3)制备纤维素酶粗酶液：将筛选出的效果较好的菌株接种于液体产酶培养基中，利用超声波破碎细胞，于25℃恒
温摇床中培养一段时间后取培养液进行离心，取离心后的 （上清液/沉淀物）装入透析袋，在磷酸缓冲
液中透析12h 获得纤维素粗酶液，目的是 。
(4)研究表明，目的菌株所产纤维素酶在30~80℃都是稳定且有活性的，如下图所示。现要缩小温度范围进一步探究
纤维素酶的最适温度，实验材料有羧甲基纤维素钠溶液、纤维素酶。请补充完善实验思路：
①探究范围：在 温度范围内，设置系列温度梯度；
②实验处理： ,再混合进行反应；
③结果与结论：检测各试管中葡萄糖的生成量， 即为最适温度。
28．乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量。研究者将人工合成的、来源于牛的乳酸脱氢酶A
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基因（LDHA）插入酿酒酵母表达载体pAUR123 中，经过转化、筛选、鉴定和培养，获得了产乳酸的商用酿酒酵母
菌。回答下列问题：
(1)LDHA 的获取。
研究者从基因数据库检索获得牛LDHA 编码序列为1170bp，将其编码序列中的同义密码子（一种氨基酸有两种或
者两种以上的遗传密码子）替换为酿酒酵母偏好的密码子，替换的目的是 。再通过 法将核苷酸按照顺
序一个一个连接起来，由此合成少量LDHA．
(2)pAUR123 重组表达载体构建。
①将LDHA 和酿酒酵母表达载体pAUR123 同时进行酶切，然后用DNA 连接酶连接，得到重组的pAUR123 表达载体，
转化 大肠杆菌，接种于LB 液体培养基中，于37℃下振荡培养，转化培养的目的是 。启动子存在物种特
异性，易被本物种的转录系统识别并启动转录，因此pAUR123 重组表达载体上的乳酸脱氢酶编码序列
（能/不能）在大肠杆菌中高效表达。
②pAUR123 表达载体含有来源于酿酒酵母的ARS1 复制起始位点，保证了其独立于酵母染色体进行自主复制，携带
的来源于酿酒酵母的CEN4 着丝粒，保证了 ，含有的氨苄青霉素抗性基因便于筛选转基因菌株。
(3)转LDHA 基因酿酒酵母细胞的制备。
①将pAUR123 重组表达载体和酿酒酵母细胞悬液混合，水浴一段时间，转化后的细胞稀释涂布于含有 的固体
培养基表面，将培养皿 ，置于30℃恒温箱培养48 小时。挑取 进行PCR，PCR 体系配方中的酵母菌悬液
起到 的作用，扩增出的pAUR123 重组表达载体经过酶切、电泳，初步确定转LDHA 基因酿酒酵母菌株。
②将目的条带大小正确的菌落质粒进行 ，经与基因数据库中序列 ，进一步确定得到正确的转基因酿酒
酵母细胞。
(4)转LDHA 基因酿酒酵母发酵产乳酸能力检测。
将转基因及未转基因的酿酒酵母分别接种于液体培养基中，进行连续培养，定时采用 在显微镜下计数细胞密
度，并测定发酵液中乳酸浓度，结果表明转基因酿酒酵母获得产乳酸能力。
(5)商业化生产。
与传统的乳酸菌发酵产生乳酸相比，利用转LDHA 基因酿酒酵母菌产生乳酸，生产发酵罐中接种的菌种量可以更
（多/少）。
9
