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专题23 发酵工程
1．（2023·北京·统考高考真题）高中生物学实验中，下列实验操作能达成所述目标的是（ ）
A．用高浓度蔗糖溶液处理成熟植物细胞观察质壁分离
B．向泡菜坛盖边沿的水槽中注满水形成内部无菌环境
C．在目标个体集中分布的区域划定样方调查种群密度
D．对外植体进行消毒以杜绝接种过程中的微生物污染
2.．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
3.（2023·山东·高考真题）以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4 个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②
盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下
列说法正确的是（ ）
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
4．（2023·广东·统考高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的
嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件
组合是（ ）
A．a 点时取样、尿素氮源培养基
B．b 点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b 点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c 点时取样、角蛋白氮源培养基
5．（2023·浙江·统考高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，
划线接种于一定NaCl 浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ）
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A．培养基pH 需偏碱性
B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种
C．需在无氧条件下培养
D．分离得到的微生物均为乳酸菌
6．（2023·江苏·统考高考真题）下列关于细菌和酵母菌实验的叙述正确的是（ ）
A．通常酵母菌培养基比细菌培养基有更高的碳氮比
B．通常细菌的生长速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大
C．通常细菌培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，酵母菌培养基用过滤除菌法除菌
D．血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定
7．（2023·江苏·统考高考真题·多选）某醋厂和啤酒厂的工艺流程如图所示。酒曲含有霉菌、酵母菌、乳
酸菌；醋醅含有醋酸菌；糖化即淀粉水解过程。下列相关叙述正确的有（ ）
A．糯米“蒸熟”与大米“蒸煮”的目的是利于糖化和灭菌
B．发酵原理是利用真菌的无氧呼吸与细菌的有氧呼吸
C．醋酸发酵过程中经常翻动发酵物，可控制发酵温度和改善通气状况
D．啤酒酿造流程中适当增加溶解氧可缩短发酵时间
8．（2023·山东·高考真题·多选）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（ ）
A．都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理
B．都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖
C．发酵前都需要对原料进行灭菌
D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期
9.（2023·浙江·统考高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要
有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌
在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。
（1）小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正
确的是（ ）
A．有氧呼吸产生的[H]与O2结合，无氧呼吸产生的[H]不与O2结合
B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行
C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放
D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化
2
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（2）关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（ ）
A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖
B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测
C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严
D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵
10．（2023·北京·统考高考真题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特
性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供
和维生素等。
(2)A 菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A 菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成
薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明
。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样
后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A 菌的菌落周围会出现
。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P 菌。
(4)为探究P 菌溶解破坏A 菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材
料和设备：P 菌、A 菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）
。
11．（2023·全国·统考高考真题）某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要
步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用
清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T 不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发
酵）。实验流程如图所示。
回答下列问题。
(1) 在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T 能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是
。
(2) 采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，
氮源的主要作用是
3
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（答出1 点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的
灭菌效果，需要注意的事项有
（答出2 点即可）。
(3) 将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是
。但是在酵母菌发酵过程中，
还需适时拧松瓶盖，原因是
。
发酵液中的乙醇可用
溶液检测。
(4)本实验收集的淋洗液中的
可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生
产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是
。
12．（2023·全国·统考高考真题）为了研究蛋白质的结构与功能，常需要从生物材料中分离纯化蛋白质。
某同学用凝胶色谱法从某种生物材料中分离纯化得到了甲、乙、丙3 种蛋白质，并对纯化得到的3 种蛋白
质进行SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果如图所示（“+”“-”分别代表电泳槽的阳极和阴极）。已知甲的
相对分子质量是乙的2 倍，且甲、乙均由一条肽链组成。回答下列问题。
(1)图中甲、乙、丙在进行SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳时，迁移的方向是
（填“从上向下”或“从下向上”）。
(2)图中丙在凝胶电泳时出现2 个条带，其原因是
。
(3)凝胶色谱法可以根据蛋白质
的差异来分离蛋白质。据
图判断，甲、乙、丙3 种蛋白质中最先从凝胶色谱柱中洗脱出来的蛋白质是
，最后从凝胶
色谱柱中洗脱出来的蛋白质是
。
(4)假设甲、乙、丙为3 种酶，为了减少保存过程中酶活性的损失，应在
（答出1 点即
可）条件下保存。
1．（2022·江苏·统考高考真题）下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（ ）
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
4
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2．（2022·辽宁·统考高考真题）为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器
及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（ ）
A．航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物
B．细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀
C．在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品
D．采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征
。
3．（2022·天津·高考真题）下图所示实验方法的应用或原理，不恰当的是（ ）
实验方法
应用
原理
A．分离绿叶中的色素
B．不同色素在层析液中溶解度不同
C．细菌计数
D．逐步稀释
A．A
B．B
C．C
D．D
4．（2022·海南·统考高考真题）为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开
展相关实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A．采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本
B．培养细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基
C．土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落
D．鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法
5．（2022·湖北·统考高考真题）废水、废料经加工可变废为宝。某工厂利用果糖生产废水和沼气池废料生
产蛋白质的技术路线如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．该生产过程中，一定有气体生成
B．微生物生长所需碳源主要来源于沼气池废料
C．该生产工艺利用微生物厌氧发酵技术生产蛋白质
D．沼气池废料和果糖生产废水在加入反应器之前需要灭菌处理
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6．（2022·湖北·统考高考真题）关于白酒、啤酒和果酒的生产，下列叙述错误的是（ ）
A．在白酒、啤酒和果酒的发酵初期需要提供一定的氧气
B．白酒、啤酒和果酒酿制的过程也是微生物生长繁殖的过程
C．葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体
D．生产白酒、啤酒和果酒的原材料不同，但发酵过程中起主要作用的都是酵母菌
7．（2022·山东·高考真题）青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证
自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（
）
A．发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖
B．可用深层通气液体发酵技术提高产量
C．选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中
D．青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌
8．（2022·湖南·高考真题）“清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。借问酒家何处有，牧童遥指杏花村。”
徜徉古诗意境，思考科学问题。下列观点错误的是（ ）
A．纷纷细雨能为杏树开花提供必需的水分
B．杏树开花体现了植物生长发育的季节周期性
C．花开花落与细胞生长和细胞凋亡相关联
D．“杏花村酒”的酿制，酵母菌只进行无氧呼吸
9．（2022·湖南·高考真题）洗涤剂中的碱性蛋白酶受到其他成分的影响而改变构象，部分解折叠后可被正
常碱性蛋白酶特异性识别并降解（自溶）失活。此外，加热也能使碱性蛋白酶失活，如图所示。下列叙述
错误的是（ ）
A．碱性蛋白酶在一定条件下可发生自溶失活
B．加热导致碱性蛋白酶构象改变是不可逆的
C．添加酶稳定剂可提高加碱性蛋白酶洗涤剂的去污效果
D．添加碱性蛋白酶可降低洗涤剂使用量，减少环境污染
10．（2022·浙江·统考高考真题）用果胶酶处理草莓，可以得到比较澄清的草莓汁；而利用稀盐酸处理草
莓可以制得糊状的草莓酱。果胶酶和盐酸催化果胶水解的不同点在于（ ）
A．两者催化果胶水解得到的产物片段长度不同
B．两者催化果胶水解得到的单糖不同
C．两者催化果胶主链水解断裂的化学键不同
D．酶催化需要最适温度，盐酸水解果胶不需要最适温度
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11．（2022·江苏·统考高考真题·多选）在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关
叙述错误的有（ ）
A．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气
B．制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料
C．葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后，可直接通入无菌空气制作葡萄醋
D．果酒发酵时温度宜控制在18-25℃，泡菜发酵时温度宜控制在30-35℃
12．（2022·辽宁·统考高考真题·多选）β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株
产β-苯乙醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述正确的是（ ）
A．所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌
B．通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌
C．还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力
D．该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发
13．（2022·山东·高考真题·多选）啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、
消毒等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（ ）
A．用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶
B．焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌
C．糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵
D．通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
14．（2022·重庆·统考高考真题）研究发现柑橘精油可抑制大肠杆菌的生长。某兴趣小组采用水蒸气蒸馏
法和压榨法提取了某种橘皮的精油（分别简称为HDO 和CPO），并研究其抑菌效果的差异。
(1)为便于精油的提取，压榨前需用
浸泡橘皮一段时间。在两种方法收集的油水混合物中均
加入NaCl，其作用是
；为除去油层中的水分，需加入
。
(2)无菌条件下，该小组制备了两个大肠杆菌平板，用两片大小相同的无菌滤纸分别蘸取HDO 和CPO 贴于
含菌平板上，37℃培养24h，抑菌效果见如图。有同学提出该实验存在明显不足：①未设置对照，设置本
实验对照的做法是
，其作用是
；②不足之处还有
（答两点）。
(4) 若HDO 的抑菌效果低于CPO，从提取方法的角度分析，主要原因是
。
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15．（2022·河北·统考高考真题）番茄灰霉病菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌
具有抑制作用的蛋白质。为探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。
回答下列问题：
(1)检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用时，取适量
菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径5mm）在
菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养后测量
大小以判定
抑菌效果。
(2)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用
（填“静置”或“摇床震
荡”）培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用
（填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”），其原因是
。
(3) 电泳分离蛋白质混合样品的原理是
。利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测
定枯草芽孢杆菌的抗菌蛋白分子量时，SDS 的作用是
。
(4)枯草芽孢杆菌长期保藏时，常以其
作为保藏对象。
16．（2022·湖南·高考真题）黄酒源于中国，与啤酒、葡萄酒并称世界三大发酵酒。发酵酒的酿造过程中
除了产生乙醇外，也产生不利于人体健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC 主要由尿素与乙醇反应形成，各国
对酒中的EC 含量有严格的限量标准。回答下列问题:
(1)某黄酒酿制工艺流程如图所示，图中加入的菌种a 是
，工艺b 是 （填“消毒”或
“灭菌”），采用工艺b 的目的是
。
(2)以尿素为唯一氮源的培养基中加入
指示剂，根据颜色变化，可以初步鉴定分解尿素的
8
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细菌。尿素分解菌产生的脲酶可用于降解黄酒中的尿素，脲酶固定化后稳定性和利用效率提高，固定化方
法有
（答出两种即可）。
(3)研究人员利用脲酶基因构建基因工程菌L，在不同条件下分批发酵生产脲酶，结果如图所示。推测
是决定工程菌L 高脲酶活力的关键因素，理由是
。
(4)某公司开发了一种新的黄酒产品，发现EC 含量超标。简要写出利用微生物降低该黄酒中EC 含量的思
路
。
17．（2022·广东·高考真题）研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学
号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1146 米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得
到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。
回答下列问题：
(1)研究者先制备富集培养基，然后采用
法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，
28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养物，除了稀释涂布平板法，
还可采用
法。据图分析，拟杆菌新菌株在以
为碳源时生长状
况最好。
(2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可
能是
。（答一点即
可）
(4) 藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角
度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是
。
(4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其
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特性可能还有
。
18．（2022·全国·统考高考真题）化合物S 被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C 可生产S，S 的
产量与菌株C 培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S 产量的影
响，结果见表。
碳源
细胞干重（g/L）
S 产量（g/L）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖废液
2.30
0.18
回答下列问题。
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有
（答出2 点即可）。
(2) 由实验结果可知，菌株C 生长的最适碳源是
；用菌株C 生产S 的最适碳源是
。菌株C 的生长除需要碳源外，还需要
（答出2 点即可）等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，其原因是
。
(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S 的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实
验思路：
。
(5) 利用制糖废液生产S 可以实现废物利用，其意义是
（答出1 点即可）。
19．（2022·全国·高考真题）某同学从被石油污染的土壤中分离得到A 和B 两株可以降解石油的细菌，在
此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。
实验所用的培养基成分如下。
培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。
操作步骤：
①将A、B 菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B 菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
回答下列问题。
菌株
透明圈大小
平板Ⅰ
平板Ⅱ
A
+++
++
B
++
-
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(1)实验所用培养基中作为碳源的成分是
。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，
氮源在菌体内可以参与合成
（答出2 种即可）等生物大分子。
(2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A 细菌，繁殖n 代后细菌的数量是 。
(3)为了比较A、B 降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示
（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是
。
(4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是 ，
理由是
。
1．（2021·江苏·高考真题）某同学选用新鲜成熟的葡萄制作果酒，然后在果酒基础上制作果醋，下列相关
叙述正确的是（ ）
A．果酒发酵时，每日放气需迅速，避免空气回流入发酵容器
B．果酒发酵时，用斐林试剂检测葡萄汁中还原糖含量变化，砖红色沉淀逐日增多
C．果醋发酵时，发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵时
D．果醋发酵时，用重铬酸钾测定醋酸含量变化，溶液灰绿色逐日加深
2．（2021·海南·高考真题）关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（
）
A．发酵所利用的微生物都属于原核生物B．发酵过程都在无氧条件下进行
C．发酵过程都在同一温度下进行
D．发酵后形成的溶液都呈酸性
3．（2021·湖北·统考高考真题）中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述正确的是（
）
A．泡菜制作过程中，酵母菌将葡萄糖分解成乳酸
B．馒头制作过程中，酵母菌进行呼吸作用产生CO2
C．米酒制作过程中，将容器密封可以促进酵母菌生长
D．酸奶制作过程中，后期低温处理可产生大量乳酸杆菌
4．（2021·辽宁·统考高考真题）利用菠萝蜜制作果醋的大致流程为：先在灭菌的果肉匀浆中接种酵母菌，
发酵6 天后，再接入活化的醋酸杆菌，发酵5 天。下列有关叙述错误的是（ ）
A．乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
B．酵母菌和醋酸杆菌均以有丝分裂的方式进行增殖
C．酵母菌和醋酸杆菌发酵过程中控制通气的情况不同
D．接入醋酸杆菌后，应适当升高发酵温度
5．（2021·天津·统考高考真题）下列操作能达到灭菌目的的是（ ）
A．用免洗酒精凝胶擦手
B．制作泡菜前用开水烫洗容器
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C．在火焰上灼烧接种环
D．防疫期间用石炭酸喷洒教室
6．（2021·北京·统考高考真题）人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操
作不正确的是（ ）
A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌
B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样
C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布
D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断
7．（2021·山东·统考高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪
酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板
上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ）
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
8．（2021·山东·统考高考真题）葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（ ）
A．无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖
B．自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌
C．葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的
D．制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加
9．（2021·浙江·统考高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中
错误的是（ ）
A．将白萝卜切成小块
B．向容器中通入无菌空气
C．添加已经腌制过的泡菜汁
D．用沸水短时处理白萝卜块
10．（2021·江苏·高考真题·多选）为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体
培养基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是（ ）
A．将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率
B．涂布用的菌浓度应控制在30~300 个/mL
C．需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间
D．挑取培养基上长出的较大单菌落，给纯化后进行降解效率分析
11．（2021·山东·统考高考真题·多选）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。
硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动
能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种
菌繁殖速度相等，下列说法错误的是（ ）
12
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A．乙菌的运动能力比甲菌强
B．为不影响菌的运动需选用液体培养基
C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量
D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
12．（2021·重庆·高考真题）人类很早就能制作果酒，并用果酒进一步发酵生产果醋。
(1)人们利用水果及附着在果皮上的
菌，在18～25℃、无氧条件下酿造果酒；在利用醋酸菌
在
条件下，将酒精转化成醋酸酿得果醋。酿造果醋时，得到了醋酸产率较高的
醋酸菌群，为进一步纯化获得优良醋酸菌菌种，采用的接种方法是
。
(2)先酿制果酒再生产果醋的优势有
（填编号）。
①先酿制果酒，发酵液能抑制杂菌的生长，有利于提高果醋的产率
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的产率
③果酒有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中
(3)果酒中的酒精含量对果醋的醋酸产率会产生一定的影响。某技术组配制发酵液研究了初始酒精浓度对醋
酸含量的影响，结果见图。
该技术组使用的发酵液中，除酒精外还包括的基本营养物质有 （填写两种）。据图可知，
醋酸发酵的最适初始酒精浓度是 ；酒精浓度为10%时醋酸含量最低，此时，若要尽快提高醋酸含量，
可采取的措施有 （填写两个方面）。
13．（2021·湖南·统考高考真题）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可
达12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤
维素分解菌。回答下列问题：
13
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（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即
。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以
为唯一碳源的固体培养基
上进行培养，该培养基从功能上分类属于
培养基。
（2）配制的培养基必须进行 灭菌处理，目的是
。
检测固体培养基灭菌效果的常用方法是
。
（3）简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路
。
（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3 株纤维素分解菌，在37℃条件下
进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株
，理由是
。
菌株
秸秆总重(g)
秸秆残重(g)
秸秆失重（%）
纤维素降解率（%）
A
2.00
1.51
24.50
16.14
B
2.00
1.53
23.50
14.92
C
2.00
1.42
29.00
23.32
14．（2021·河北·统考高考真题）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要
用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。
回答下列问题：
（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是
，
萃取效率主要取决于萃取剂的
。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过
高会导致花色苷
。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原
因是
。
（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g 皮渣加入90mL 无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平
板法将0.1mL 稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91 和95，则每克
皮渣中微生物数量为
个。
（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH 调至
性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸
钙的目的是 。
培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为
。
（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者
菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌
14
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。（简要写出实验步骤和预期结
果）
15．（2021·全国·统考高考真题）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过实验比较了几种洗衣
粉的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），实验结果见下表。
加酶洗衣粉A
加酶洗衣粉B
加酶洗衣粉C
无酶洗衣粉(对
照)
血渍
+++
+
+++
+
油渍
+
+++
+++
+
根据实验结果回答下列问题：
（1）加酶洗衣粉A 中添加的酶是
；加酶洗衣粉B 中添加的酶是
；加
酶洗衣粉C 中添加的酶是
。
（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有
，
原因是
。
（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的原因是
。
（5）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖
异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指
。固定化酶在生产实践中应用的优点
是
（答出1 点即可）。
16．（2021·广东·统考高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘
蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA 等新型高附加值可降解材料，期望提高
甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。
回答下列问题：
（1）为提高菌株H 对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为
，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培
养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用
的方法进行菌落计数，评估
15
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菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有
等。（答出两种方法即可）
（2）基于菌株H 嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基
盐浓度设为60g/L，pH 为10，菌株H 可正常持续发酵60d 以上。该系统不需要灭菌的原因是
。（答出两点即
可）
（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH 条件下发酵，结果发现发酵液中菌
株H 细胞增殖和PHA 产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中
可能是高密度培养的限制因素。
（4）菌株H 还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌
。
17．（2021·全国·高考真题）工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢将某
些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制
作酱油的流程示意图如下。
回答下列问题：
（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的
可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供
。
（2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶
中的
、
能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成
分，如将蛋白质分解为小分子的肽和
。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气
并搅拌，由此可以判断米曲霉属于
（填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异
养好氧”）微生物。
（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于
（填“真核生物”或“原核生物”）；
添加的酵母菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是
。在该阶
段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是
（答出1 点即可）。
一、单选题
1．下图为某同学在家自制米酒的流程图。
16
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下列相关原理和操作目的错误的是（ ）
A．米酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精
B．蒸米有利于淀粉糖化，为发酵过程提供原料
C．冷却的目的是防止高温杀死酒曲中的微生物
D．酿酒过程须在无菌环境进行以避免杂菌污染
2．如图为酱油的制作流程，其中米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱
油所需的蛋白酶、脂肪酶等，该过程需要提供营养物质、通入空气。下列说法错误的是（ ）
A．发酵罐发酵类型为有氧发酵，而发酵池发酵为无氧发酵
B．发酵池发酵过程中添加的食盐可以抑制杂菌的生长繁殖
C．发酵罐发酵需要将罐内的 pH 控制在中性或弱碱性条件下
D．发酵罐发酵与啤酒生产中的糖化都存在大分子降解的过程
3．蓝莓具有保护眼睛、增进记忆、减缓衰老等功效，某兴趣小组尝试利用传统发酵技术制作蓝莓果酒和
果醋。下列说法正确的是（ ）
A．为了防止杂菌污染，制取的蓝莓汁要进行高压蒸汽灭菌
B．进行酒精发酵期间会产生CO2，需要定期打开瓶盖放气
C．制作果酒和果醋的主要微生物都是原核细胞，没有线粒体
D．果醋发酵温度不同于果酒发酵，是因为发酵菌种所需的最适温度不同
4．黄酒源于中国，与啤酒、葡萄酒并称世界三大发酵酒。某黄酒酿制工艺流程如下图所示。
下列叙述错误的是（ ）
A．“糖化”是指淀粉在酶的作用下转化为酵母菌可利用的糖
B．“接种”前需将菌种活化并扩大培养，以缩短发酵时间
C．“发酵”时要控制无氧，以防酵母菌需氧呼吸而大量增殖
D．“煎酒”可以杀死黄酒中的微生物，防止黄酒变酸或腐败
5．葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经完全或部分发酵酿成的酒精饮料。下列叙述错误的是（ ）
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A．酒精是酵母菌厌氧呼吸产物，酿造前葡萄汁要装满发酵瓶
B．酿造过程中产生的气泡，这是酵母菌细胞呼吸的产物CO2
C．重铬酸钾与产物酒精反应呈现灰绿色，其可用于酒精的检测
D．在酿造葡萄酒时，发酵瓶适当通气有利于酵母菌的生长和繁殖
6．下图A 是果酒和果醋制作的实验流程，图B 是制果酒和果醋的发酵装置。下列有关叙述正确的是（
）
A．图A 中，①过程制作果酒时需要挑选新鲜葡萄，去除枝梗后用清水反复冲洗再榨汁
B．图A 中，与①过程相比，②过程需要在较低的温度条件下进行
C．图B 装置有一个不足之处，即在甲瓶上没有设置排气口
D．图B 装置中果醋是在丙瓶产生的，发酵的微生物利用的碳源主要是葡萄糖
7．泡菜、腐乳、米酒和米醋等传统发酵食品的制作离不开各种各样的微生物，下列叙述正确的是（ ）
A．为防止乳酸菌产生的CO2导致发酵液溢出，泡菜坛不能装满
B．腐乳的制作过程中，毛霉等多种微生物参与了豆腐的发酵
C．米饭蒸熟后应立即撒上制好的酒曲粉，并趁热装入发酵缸中
D．与酒精发酵相比，醋酸发酵需要在较低的温度条件下进行
8．我国利用微生物发酵制作食品的历史悠久，在多种文献中均有记载。①《齐民要术》中记载：“作盐
水，令极咸，于盐水中洗菜，即内雍中。”②《北山酒经》中记载：“每坛加蜡三钱，竹叶五片，隔水煮
开，乘热灌封坛口。”③《齐民要术》中利用谷物酿制食醋的工艺，主要发酵过程为：糖化一酒化一醋化。
下列说法错误的是（ ）
A．①是泡菜制作过程，盐水应煮沸冷却后使用，以防止杀死发酵菌
B．②中加热杀菌保存酒液的原理，与酿酒使用的巴氏消毒法基本相同
C．③中氧气充足时糖先转化为酒再转化为醋，氧气不足时糖直接转化为醋
D．③中从酒化到醋化的过程需要移至温度较高的环境中，并通气
9．某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验，实验流程如图所示(清水淋洗时菌T 不
会流失)。下列分析错误的是（ ）
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A．在粉碎的秸秆中接种菌T 是为了将秸秆中的纤维素大量分解
B．淋洗液主要为酵母菌的生长繁殖提供碳源、能源等
C．采用湿热灭菌法对培养基进行灭菌时需控制压力为100kPa，温度为100℃
D．与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，图中方式能节约粮食和提高能量利用率
10．《诗经》中有“中田有庐，疆场有瓜，是剥是菹，献之皇祖”的诗句。“剥”和“菹”是腌渍加工的
意思。许慎在《说文解字》中解释“菹菜者，酸菜也”。下列叙述正确的是（ ）
A．泡菜的酸味是泡菜坛中醋酸菌产生的醋酸所导致的
B．酵母菌在泡菜坛内繁殖会形成一层肉眼可见的白膜
C．为保证泡菜坛内的无氧环境，腌制时应尽量将泡菜坛装满
D．泡菜腌制过程中乳酸和亚硝酸盐的含量先增加后趋于稳定
11．生活中我们经常会接触到发酵食品，如果酒、果醋、泡菜等，下列关于传统发酵食品制作的叙述，正
确的是（ ）
A．酿制果醋和制作腐乳所利用的主要微生物的代谢类型相同
B．制作果醋时发酵液中的醋酸菌通过有丝分裂增殖，繁殖速度快
C．泡菜坛内的白色菌膜、变酸的果酒表面的菌膜所含菌种完全相同
D．制成的果醋和泡菜都需要经高压蒸汽灭菌，目的是延长产品保质期
12．纤毛虫Halteria 大量食用氯病毒，在获取氨基酸、核苷酸、脂质等物质的同时又能限制氯病毒对绿藻
的感染。下列叙述正确的是（ ）
A．氨基酸、核苷酸、脂质都含有C、H、O、P
B．氯病毒能为 Halteria 提供碳源、氮源和能源
C．Halteria 从氯病毒中获取的氨基酸是由绿藻的核糖体合成的
D．Halteria、氯病毒、绿藻特有的细胞结构分别是中心体、拟核、叶绿体
13．将野生型大肠杆菌诱导突变后，获得两种不同营养缺陷型大肠杆菌，对其进行如下图所示的培养。下
列说法错误的是（ ）
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A．上述菌落出现的原因可能是细胞之间交换了转化因子
B．只涂布一种菌株的培养基上无菌落是因为营养缺陷型细菌不能合成某些必需物质
C．野生型大肠杆菌能合成met、bio、thr 和leu，所以其培养基无需提供氮源
D．统计活菌数量不宜采用平板划线法
14．垃圾分类有利于变废为宝，减少环境污染。如图为分类后餐厨垃圾资源化处理的流程设计。下列叙述
错误的是（ ）
A．压榨出的油水混合物可再加工，生产出多种产品
B．添加的木屑有利于堆肥体通气，还可作为某些微生物的碳源
C．X 中需要添加合适的菌种，才能产生沼气
D．为保证堆肥体中微生物的活性，不宜对堆肥体进行翻动
15．下图为微生物实验室培养的有关操作，下列叙述正确的是（ ）
A．图中接种方法是平板划线法，培养霉菌时需将培养基的pH 调至中性或弱碱性
B．图示操作的正确步骤是：d→b→f→a→e→c→h→g
C．步骤d 为灭菌操作，需将接种工具灼烧至变红，本次操作一共进行了5 次步骤d
D．该过程使用的是固体培养基，接种前需要对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和灭菌
16．为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A 所示的实验。同
学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B 所示。同学乙也按照同学甲的接种方法
进行了步骤④的操作：将1mL 样品稀释100 倍，在5 个培养基平板上分别接入0.1mL 稀释液，培养一段时
间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178 和191。在接种前，随机取若干灭菌后的空白
平板先行培养了一段时间，无菌落产生。下列叙述正确的是（ ）
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A．乙同学计算得出每升样品中的活菌数约为3.3×108个
B．步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源
C．步骤④甲同学出现图B 结果可能的操作失误是样品的稀释程度太低导致
D．步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌
17．研究人员采用下图所示方法获得高耐酒精的高产醋酸菌，相关叙述错误的是（ ）
A．制备的醋酸菌培养基属于液体培养基
B．接种时所用的甘蔗渣需灭菌处理
C．振荡培养可使菌体与营养物质充分接触
D．纯化培养过程可采用稀释涂布平板法接种
18．甲、乙、丙、丁四个生物兴趣小组分别按如下流程进行科学探究活动：
甲：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒
乙：外植体→形成愈伤组织→长出丛芽→生根→试管苗
丙：土壤浸出液→尿素为唯一氮源的培养基培养→计数
丁：剪碎动物组织→胰蛋白酶处理→细胞悬液→原代培养→传代培养
据此分析错误的是（ ）
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A．甲组在发酵后期打开排气口的间隔时间较发酵前期延长
B．乙组形成的愈伤组织再分化时一般先生根再生芽
C．丙组中除了活菌计数法外也可用显微镜直接计数
D．丁组由原代培养到传代培养时还需用胰蛋白酶处理
19．肠道病原菌可生产次级代谢产物绿脓菌素，绿脓菌素的产量与肠道病原菌培养所利用的碳源关系密切。
为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和绿脓菌素产量的影响，结果见表。下列叙述错误的是（
）
碳源
细胞干重/（g·L-1）
绿脓菌素产量/（g·L-1）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖废液
2.30
0.18
A．肠道病原菌纯培养，可用平板法划线进行接种
B．肠道病原菌生长的最适碳源是葡萄糖
C．用肠道病原菌生产绿脓菌素的最适碳源是制糖废液
D．碳源是淀粉时，肠道病原菌不能生长的原因是肠道病原菌细胞中缺少果胶酶
20．营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过程中某些合成反应不能进行的菌株。下图是科研
人员利用影印法（用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培
养基上）初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。相关说法错误的是（ ）
A．①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿不能立即进行倒置培养
B．进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至完全培养基上，再“复印”至基本培养基上
C．氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上对应位置有的菌落中挑选
D．统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察统计一次，直到各类菌落数目稳定为止
二、多选题
21．啤酒生产的简要流程如图所示，制麦时用赤霉素溶液浸泡大麦种子，糖化主要是将麦芽中的淀粉等有
机物水解为小分子。下列说法正确的是（ ）
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A．用赤霉素溶液浸泡大麦种子，使种子无需发芽就能产生淀粉酶
B．糖化前破碎有利于淀粉与a—淀粉酶充分接触，使糖化过程缩短
C．在接种酵母菌前进行冷却处理，是为了避免高温杀死酵母菌种
D．发酵过程中要适时往外排气，发酵后期在低温、通气环境进行
22．γ-氨基丁酸(GABA)是有助于睡眠、祛毒和醒酒等作用的水溶性氨基酸。下图是腐乳在前发酵和腌制过
程中GABA 含量的变化，下列叙述错误的是（ ）
A．腐乳腌制过程加盐的目的主要是调味
B．毛坯中GABA 含量因微生物产生的蛋白酶作用而增加
C．盐坯中GABA 含量减少，可能是食盐抑制微生物生长
D．毛坯中微生物以毛霉为主，其同化作用类型是需氧型
23．利用卷心菜发酵制作泡菜的过程中，乳酸菌、酵母菌细胞数量和pH 的变化如图所示。下列叙述正确
的是（ ）
A．酵母菌和乳酸菌均有由核膜包被的细胞核
B．发酵初期乳酸菌建立了明显的菌种优势
C．前6 天pH 下降主要由乳酸菌代谢引起
D．发酵中期酵母菌通过无氧呼吸获取能量
24．某地土壤有机物X 污染严重，为改善土壤环境，研究人员从土壤中分离出可高效降解有机物X 的细菌
菌株。以下是研究人员分离细菌菌株的示意图：下列说法正确的是（ ）
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A．制备降解X 的细菌菌株初筛平板时，需要将培养基的pH 调至酸性
B．实验结果显示A～E 五种菌株中，E 是降解X 最理想的菌株
C．若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1ml 涂布到三个培养基。一段时间后，菌落数分别是165、
172、170 个，则10g 土壤中含有此菌的菌体数是1.7×107个
D．若要长期保存该菌种，可采用甘油管冷冻保存法
25．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自生固氮菌拌种后播种，可显著提高
产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流
程如下图。以下叙述正确的是（ ）
A．步骤①土样应取自当地深层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000 倍
B．自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计数板来计数土壤悬浮液中的菌体数
C．步骤②需充分振荡20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
D．步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源
三、综合题
26．孔雀石绿（简称MG）是广泛使用的有机染料，在自然环境中极难降解，容易引起土壤污染，进而危
害人体健康，因此从土壤中分离和筛选出高效的MG 降解菌有非常重要的意义。已知MG 在水中溶解度低，
含过量MG 的固体培养基不透明。图中Ⅰ～Ⅲ是操作过程，回答下列问题：
(1)培养基的配制：MG 降解菌富集培养基成分的特点是 。过程Ⅰ～Ⅲ中需要无菌操作的是
，在无菌操作中，为避免被杂菌污染，需要注意的事项有 （答出2 点即可）。
(2)MG 高效降解菌株的富集：如图所示，将1.0g 土样接入含上述配制好的培养液的三角瓶中，将三角瓶置
24
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于30℃180r/min 摇床中振荡培养1~2 天，此操作的目的是 。
(3)MG 高效降解菌株的分离和纯化：过程Ⅲ所利用的接种方法是 。在过程Ⅱ中重复次数为3 次，
在过程Ⅲ中三个培养基长出的菌落数量分别是142、163、154，则推测A 中细菌的数量为
个/mL。
(4)MG 高效降解菌株的鉴定：将纯化获得的菌种接种于含过量MG 的固体培养基（其他营养成分等适宜）
上，鉴定目的菌的方法及原因是 。
27．暹罗芽孢杆菌有望作为饲料发酵剂和添加剂应用于畜禽生产，以实现绿色健康养殖。大肠杆菌、沙门
氏菌和产气英膜梭菌（厌氧菌），能引起家禽和家畜的肠道疾病，常使用氨苄青霉素治疗。为检测暹罗芽
孢杆菌代谢物的抑菌能力进行了相关实验，过程如图所示。
(1)请完善实验过程：① ；② （字母选填）
a．37℃、200 转/min、恒温培养箱 b、37℃、200 转/min、厌氧培养箱c．37℃/恒温培养箱 d、37℃、厌
氧培养箱e、上层清液 f、下层沉淀
(2)该抑菌实验还需要设计____________作为对照（字母选填）。实验结果说明暹罗芽孢杆菌对三种病原菌
有较好的抑菌活性，且不弱于氨苄青霉素。
A．等量无菌水
B．等量LB 液体培养基
C．等量FTG 液体培养基
D．等量含有氨苄青霉素的无菌水
E．等量含有氨苄青霉素的LB 液体培养基
F．等量含有氨苄青霉素的FTG 液体培养基
(3)研究者设计了如表所示实验，发现暹罗芽孢杆菌具有较好的产酶能力（已知刚果红可以与纤维素反应形
成红色复合物）。请任选一组完善表中的实验设计。
检测酶的种
类
培养基成分
检测指标
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淀粉酶
+2%
琼脂
小孔周围的蓝色培养基出现透明圈
纤维素酶
+2%
琼脂
(4)已知肠道中的胆盐能够抑制肠道细菌的生长。检测暹罗芽孢杆菌酸性耐受和胆盐耐受能力，实验结果如
图。
综合上述研究，阐明暹罗芽孢杆菌可以添加在畜禽生产的饲料中的理由是____________。
A．能减少肠道中有害病原菌的数量，降低肠道疾病发生率
B．能够分泌多种酶，提高饲料利用率
C．具有良好的抗逆特性
D．易于在动物肠道中繁殖
28．牛奶是适合微生物生长的良好培养基。牛奶在饮用前都要用巴氏消毒法消毒，以杀死有害微生物。某
小组为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行了如图所示操作。请据图回答：
(1)图1 所示方法为 ，若取最终的牛奶稀释液0.1mL 在培养基上进行涂布，应选择的工具是图2 中的
（填图2 中的字母）。
(2)理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3 个培养皿，菌落数分
别为65、63、64，则可以推测每毫升酸奶中所含细菌数为 个。
(3)接种操作完成后，需将平板倒置放入培养箱中培养，如果培养基上出现 （填菌落特征，答出两点即
可）不同的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。
(4)用平板划线法纯化菌种时，在固体培养基上连续进行了4 次划线，则需要对接种环灼烧 次。其中第
二次灼烧接种环
目的是 。
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(5)某同学在学习了传统发酵技术的应用后，进行了酸奶制作的实践，将高温加热过的牛奶冷却后倒入已灭
菌的发酵瓶中，加入菌种后需将瓶盖拧紧的目的是 。
29．在绿色理念的指导下，对可再生能源的研发已经成为全世界关注的焦点。如图为利用玉米秸秆生产酒
精燃料的过程，该技术不仅能节约能源，还能保护环境：
(1)欲筛选出产纤维素酶的酵母菌，现称取1.0g 某土壤样品，进行梯度稀释，分别取0.1mL 经104倍稀释后
的悬液涂布于固体培养基上，一段时间后每个培养基平均长出了25 个酵母菌菌落，则该样本中每克土壤约
含酵母菌____个。
A．2.5×106
B．2.5×107
C．2.5×105
D．2.5×104
(2)筛选出的酵母菌产生的纤维素酶活性较低，研究人员利用基因工程育种得到3 株纤维素分解菌株，在
37℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。纤维素酶活性最高的是菌株 ，理由是 。
菌株
秸秆总重（g）
秸秆残重
（g）
秸秆失重（%）
纤维素降解率（%）
A
1.00
0.75
25.00
17.24
B
1.00
0.79
21.00
15.93
C
1.00
0.68
32.00
25.28
(3)酒精发酵前期需要通入一定的无菌空气，目的是 。
(4)在生产酒精燃料过程中，通常不以粮食为发酵底物，原因是 。料渣可用于制作沼气或肥料，从能量
流动的角度分析，其意义是 。
30．Ⅰ、人类利用微生物发酵制作果酒、果醋的历史源远流长。请回答下列问题。
Ⅱ、在调查和分离湖水中耐盐细菌的实验中，先将10 升湖水水样浓缩至10 毫升，然后各取浓缩水样1 毫
升，涂布到多个培养皿中培养。请回答。
(1)果酒的制作离不开酵母菌。酵母菌是一类 （呼吸类型）微生物。
(2)温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。利用酵母菌发酵制作葡萄酒时一般将温度控制在 。在
的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制。
(3)醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。在变酸的酒的表面观察到的菌
膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。实验表明，当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为 ，再进一步
转变为 。
(4)制作泡菜的过程中会产生亚硝酸盐。在 条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生 反应后，
与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成 色染料。
(5)可以通过提高培养基中 的浓度，筛选被调查细菌，这种培养基被称为 培养基。
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(6)在微生物的培养过程中，实验室对培养基灭菌常用的方法是 。为防止冷凝水影响细菌的生长，
需将培养皿 培养。
(7)根据培养皿上菌落的平均数可以计算湖水中该种细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原
因是 。
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