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考点43 传统发酵技术
考点44 微生物的培养技术及应用（精练）
1.
（2023•贵港开学）泡菜是许多人喜爱的一道开胃菜。制作泡菜时利用的微生物是（ ）
A．青霉
B．乳酸杆菌
C．曲霉
D．酵母菌
【分析】泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。
【解答】解：制作泡菜时利用的微生物是乳酸菌，B 正确。
故选：B。
【点评】本题考查泡菜制作的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析
问题的能力是解答本题的关键。
2.
（2023 春•绵阳期末）某生物兴趣小组制作泡菜时，对发酵早期发酵液中的乳酸菌含量和亚硝酸盐含量进
行了测定，结果如图。分析错误的是（ ）
A．前2 天乳酸菌含量变化慢，可能是坛子内的O2抑制了乳酸菌繁殖
B．前4 天亚硝酸盐的含量变化快，可能是其他细菌大量繁殖导致的
C．第6 天后亚硝酸盐含量变化缓慢，可能是大量乳酸抑制杂菌活动
D．为减少泡菜中亚硝酸盐的含量，该泡菜腌制8 天左右食用最佳
【分析】泡菜制作的菌种是乳酸菌，属于厌氧型细菌，在无氧条件下，将葡萄糖分解成乳酸；硝酸盐在
硝酸盐还原细菌作用下产生大量亚硝酸盐，在特定条件下（适宜的pH、温度等），亚硝酸盐转化成具
有致癌、致畸和致突变的亚硝胺，对人体有害。
【解答】解：A、前2 天坛子内氧气含量较高，而乳酸菌是厌氧型微生物，所以繁殖速度慢，A 正确；
B、前4 天由于其他细菌大量繁殖，导致亚硝酸盐含量升高，B 正确；
C、第6 天后氧气浓度降低，乳酸菌大量繁殖，导致其他杂菌无法生长，所以亚硝酸盐含量变化缓慢，
C 正确；
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D、第8 天该泡菜亚硝酸盐含量最高，不适宜食用，D 错误。
故选：D。
【点评】本题考查泡菜的制作，要求考生识记制作泡菜的原理和过程，掌握真核生物和原核生物的区别，
意在考查考生的理解和分析能力。
3.
（2023 春•张家口期末）约9000 年前，我们的祖先就会利用传统发酵技术生产果酒、果醋、泡菜和腐乳等
发酵产品，后来又发展了发酵工程。下列有关叙述错误的是（ ）
A．传统发酵以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主，发酵工程则以单一菌种的液体发酵为主
B．果酒、腐乳发酵利用的主要菌种均是真核生物，果醋、泡菜发酵利用的主要菌种均是原核生物
C．果酒发酵的最适温度为18～30℃，果醋发酵的最适温度为30～35℃
D．进行泡菜发酵时，原材料只能装至八成满，是为了防止乳酸菌产生的CO2导致发酵液溢出
【分析】发酵是利用微生物，在适宜的条件下，将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的
过程，据此分析作答。
【解答】解：A、传统发酵技术所用的是天然存在的菌种，没有进行严格的灭菌，以混合菌种的固体发
酵和半固体发酵为主；发酵工程为液体发酵，A 正确；
B、参与果酒制作的酵母菌和参与腐乳制作的毛霉都属于真核生物，而参与果醋制作的醋酸菌和参与泡
菜制作的乳酸菌属于原核生物，B 正确；
C、酿酒酵母的最适生长温度约为28℃，多数醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，故果酒、果醋制作
中，果酒发酵控制在18～30℃，果醋发酵控制在30～35℃，C 正确；
D、乳酸菌发酵只产生乳酸，不产生CO2，D 错误。
故选：D。
【点评】本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析
问题的能力是解答本题的关键。
4.
（2023 春•易门县期末）下列关于传统发酵的做法，合理的是（ ）
A．每日从泡菜坛中取少量泡菜品尝，以确定自制泡菜是否可以食用
B．利用传统作坊中的酒曲，有利于大规模生产黄酒
C．将葡萄汁煮沸冷却后灌入约
瓶，密闭发酵即可自制葡萄酒
D．腐乳制作过程中需要添加蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等
【分析】1、腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲
霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子
的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，这些小分子物质有利于人体的消化和吸收。
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2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型．果醋制作的原理：当氧气、糖源
都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为
醋酸。
3、泡菜制作利用了乳酸菌的无氧呼吸，乳酸菌是严格的厌氧菌，泡菜制作不需要通气发酵。
【解答】解：A、泡菜制作过程中乳酸菌进行无氧呼吸，不能每天打开泡菜坛，否则会导致发酵失败，
A 错误；
B、酒曲中含有酵母菌，利用传统作坊中的酒曲，有利于大规模生产黄酒，B 正确；
C、发酵果酒的葡萄汁不能煮沸，会杀死葡萄皮表面的野生酵母菌，C 错误；
D、在腐乳制作发酵过程中，微生物会产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多种酶，不需要添加，D 错误。
故选：B。
【点评】本题主要考查的是果酒、果醋以及泡菜制作的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，
难度适中。
5.
（2023•山东）以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4 个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要
浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法
正确的是（ ）
A．①主要是为了防止菜料表面的酣酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
【分析】泡菜在制作过程中要注意细节，首先要保证用于制作酱腌菜的容器、水和原料一定要干净，要
保证在发酵过程中处于无氧环境，还要注意过程中避免其他杂菌的干扰。
【解答】解：A、沸盐水冷却后再倒入坛中主要是为了防止乳酸菌被杀死，A 错误；
B、盐水需要浸没全部菜料主要目的是创造一个无氧的环境，有利于乳酸菌的发酵，B 错误；
C、盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水目的是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入，保证坛
内处于无氧环境，C 正确；
D、泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量先升高，后降低，D 错误。
故选：C。
【点评】本题考查泡菜的制作，对于此类试题，需要考生识记参与泡菜制作的微生物及其代谢类型，掌
握泡菜制作的原理及条件，能理论联系实际，运用所学的知识合理解释生活中的生物学问题。
6.
（2022 春•浙江期中）如图是酱油发酵工艺过程，微生物分解大豆、小麦中的蛋白质、脂肪等有机物，最
终形成具有特殊色泽和良好风味的酱油。下列叙述错误的是（ ）
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A．发酵池中两种主要微生物产生的酒精、乳酸均可抑制杂菌生长
B．米曲霉发酵阶段应提供氧气，发酵池发酵阶段应密封
C．米曲霉与酵母菌在结构上的主要区别是有无成形的细胞核
D．使用米曲霉菌与乳酸菌进行食品生产时，需要合理控制温度、pH 等发酵条件
【分析】1、微生物的生长繁殖一般需要水、无机盐、碳源和氮源等基本营养物质，有些还需要特殊的
营养物质如生长因子，还需要满足氧气和pH 等条件。
2、果酒制作的菌种为酵母菌，其原理是：在有氧的条件下，酵母菌有氧呼吸释放大量能量，有利于酵
母菌大量繁殖；在无氧的条件下，酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳。
【解答】解：A、发酵池中酵母菌无氧呼吸产生的酒精，乳酸菌无氧呼吸产生的乳酸，均可抑制杂菌生
长，A 正确；
B、米曲霉属于需氧型微生物，发酵阶段应提供氧气；发酵池是酵母菌和乳酸菌，此发酵阶段应密封，
B 正确；
C、米曲霉与酵母菌都是真核生物，都有成形的细胞核，C 错误；
D、使用米曲霉菌与乳酸菌进行食品生产时，需要合理控制温度、pH 等发酵条件，D 正确。
故选：C。
【点评】本题结合图解，考查酱油发酵过程，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、
实验采用的方法、实验现象及结论等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。
7.
（2023•江苏开学）某同学选用新鲜成熟的葡萄制作果酒和果醋，下列相关叙述正确的是（ ）
A．果酒发酵，每日放气需迅速，避免空气回流
B．发酵过程中pH 持续降低，有机物的种类和含量持续增加
C．果醋发酵时，发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵时
D．果酒发酵后，提高发酵环境温度即可进行旺盛的果醋发酵
【分析】果酒和果醋制作过程中的相关实验操作：
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗；
（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净，并晾干。②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒；
（3）榨汁：将冲洗后并除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁；
（4）发酵：①将葡萄汁装入发酵瓶，要留要大约1/3 的空间，并封闭充气口；②制葡萄酒的过程中，
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将温度严格控制在18°C～30°C，时间控制在10～12d，可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测；
③制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30℃～35℃，时间控制在7～8d，并注意适时通过充气口充
气。
【解答】解：A、果酒发酵时，装置内压强总是大于外界的（空气不会回流），需缓慢放气，防止发酵
液喷出，A 错误；
B、发酵过程中有机物种类增加，有机物含量因为代谢消耗而减少，B 错误；
C、选用新鲜成熟的葡萄制作果酒和果醋，该实验是先进行酒精发酵再进行果醋发酵，乙醇发酵过程中
产生CO2，而果醋发酵过程中，醋酸杆菌以乙醇为底物形成醋酸不产生气体，故果醋发酵时，发酵液产
生的气泡量明显少于果酒发酵时；C 正确；
D、果酒发酵是利用酵母菌进行乙醇发酵属于厌氧呼吸，而果醋发酵菌种是醋酸杆菌，其是需氧型微生
物；果酒发酵温度一般控制在18℃～30℃，果醋发酵温度一般控制在30℃～35℃；故果酒发酵后，不
仅需要提高发酵环境温度，还需要通入无菌空气才可以进行旺盛的果醋发酵；D 错误。
故选：C。
【点评】本题考查果酒和果醋的制作，要求考生识记制作果酒和果醋的原理和过程，意在考查考生的理
解和分析能力。
8.
（2023•邯郸开学）下列有关家庭制作果酒、果醋的叙述，错误的是（ ）
A．制作果酒与制作果醋的主要微生物的细胞结构存在明显差异
B．制作果酒时，对葡萄进行酒精浸泡或反复冲洗有利于果酒发酵
C．制作果醋时，接种优良的醋酸菌可以提高发酵速度和产品质量
D．两种发酵都可通过控制温度与氧气实现对发酵过程的有效控制
【分析】果酒和果醋制作过程中的相关实验操作：
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗。
（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净，并晾干。②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒。
（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。
（4）发酵：①将葡萄汁装入发酵瓶，要留要大约
的空间，并封闭充气口。②制葡萄酒的过程中，将
温度严格控制在18℃～30℃，时间控制在10～12d 左右，可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测。
③制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30℃～35℃，时间控制在前7～8d 左右，并注意适时通过充
气口充气。
【解答】解：A、制作果酒的主要微生物是酵母菌，制作果醋的主要微生物是醋酸菌，两者的细胞结构
存在明显差异，前者有成形的细胞核，后者无成形的细胞核，A 正确；
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B、制作果酒时，对葡萄不能进行酒精浸泡或反复冲洗，酒精浸泡会毒害酵母菌，反复冲洗会导致菌种
流失，B 错误；
C、制作果醋时，接种优良的醋酸菌可以提高发酵速度和产品质量，C 正确；
D、酵母菌进行酒精发酵需要无氧环境，适宜温度是18～30℃，醋酸菌进行醋酸发酵需要充足的氧气，
适宜温度是30～35℃，因此两种发酵都可通过控制温度与氧气实现对发酵过程的有效控制，D 正确。
故选：B。
【点评】本题考查果酒和果醋的制作，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验
采用的方法、实验现象及结论等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。
9.
（2021 春•孝感期末）如图表示利用苹果制备果酒、果醋的流程图。下列有关叙述错误的是（ ）
A．过程①接种人工培育的酵母菌可以提高苹果酒的品质
B．从变酸的葡萄酒表面获得菌膜，再培养分离也可为③提供所需菌种
C．整个发酵过程都必须在严格无菌条件下才能正常进行
D．过程①所需的最适温度低于过程②
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼
吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理
是酵母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃；生产中是否有酒精的产
生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进
行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解
为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～
35℃。
【解答】解：A、人工培育的酵母菌纯度高，过程①接种人工培育的酵母菌可以提高苹果酒的品质，A
正确；
B、从变酸的葡萄酒表面获得菌膜中含有醋酸菌，经过培养分离可获得醋酸菌，也能为③果醋的发酵提
供所需菌种，B 正确；
C、酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖；醋酸菌是好氧菌，制
作果醋时需要定时通入无菌空气，C 错误；
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D、过程①是果酒的发酵，利用的是酵母菌，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃；过程②
是果醋的发酵，利用的是醋酸菌，醋酸菌的最适生长温度为30～35℃，故过程①所需的最适温度低于
过程②，D 正确。
故选：C。
【点评】本题考查制作果醋和果酒，要求考生识记制作果酒和果醋的原理和步骤，意在考查考生的理解
和运用能力。
10. （2022 春•海陵区校级期中）研究人员开展酵母接种量对红树莓果酒中花色苷含量和酒精度影响的研究，
结果如图。相关叙述错误的是（ ）
A．利用红树莓发酵产生果酒的场所主要是红树莓果的细胞质基质
B．发酵温度和时间属于无关变量，会影响实验结果
C．果酒中的花色苷易溶于酒精，来源于红树莓果皮细胞的液泡
D．在实验发酵条件下，酵母的最佳接种量为0.2%左右
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，
大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵
母菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃；生产中是否有酒精的产生，
可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
【解答】解：A、利用红树莓发酵产生果酒利用的是酵母菌的无氧呼吸，无氧呼吸发生的场所主要是酵
母菌细胞的细胞质基质，A 错误；
B、由题图信息分析可知，该实验的目的是探究酵母接种量对红树莓果酒中花色苷含量和酒精度影响，
实验中的自变量是酵母接种量，因变量是花色苷含量，发酵温度和时间属于无关变量，会影响实验结果，
应保持一致，B 正确；
C、液泡内有细胞液，其中含有糖类、无机盐、色素和蛋白质等物质，果酒中的花色苷易溶于酒精，来
源于红树莓果皮细胞的液泡，C 正确；
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D、由图分析可知，当酵母的接种量为0.2%左右时，酒精含量较大，且随着酵母接种量的增加，无明显
变化，而花色苷含量为最大，据此推测在实验发酵条件下，酵母的最佳接种量为0.2%左右，D 正确。
故选：A。
【点评】本题考查酿酒的相关知识，要求考生识记酿酒的原理和条件，能够从题图中获取有用信息，结
合所学知识完成分析判断。
11.
（2023•石嘴山校级开学）下列关于微生物培养过程的说法，正确的是（ ）
A．培养基中同一种物质可能既做碳源又做氮源
B．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基
C．倒平板时，应将打开的皿盖放在一边，以免培养基溅到皿盖上
D．只有平板划线法接种培养后可获得单菌落
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，
划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，
最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表
面，经培养后可形成单个菌落。
【解答】解：A、培养基中同一种物质可能既做碳源又做氮源，如牛肉膏和蛋白胨，A 正确；
B、天然培养基是指用化学成分不明确的天然物质配制的培养基，并不是不需要加工的培养基，B 错误；
C、倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～
20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止杂菌污染，C 错误；
D、无论用平板划线法还是稀释涂布平板法接种，在培养后均可获得单菌落，D 错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查的是微生物的纯培养的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适
中。
12. （2023 春•临夏州期末）科研人员利用无机盐、琼脂和石油配制培养基，从被石油污染的土壤中分离获得
了能降解石油成分的菌株CT
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﹣，步骤如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．配制好的培养基采用高压蒸汽灭菌的方法进行灭菌
B．振荡培养可使菌体与培养液充分接触
C．需用未接种的空白培养基一同培养，判断灭菌是否彻底
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D．测定CT
6
﹣活菌数量，可采用平板划线法进行计数
【分析】平板划线法和稀释涂布平板法都能用于菌体的分离和纯化，但平板划线法不能用于菌体计数。
【解答】解：A、培养基的灭菌方法为高压蒸汽灭菌，A 正确；
B、振荡培养可增加培养液中氧气，还可使菌体与培养液充分接触，B 正确；
C、将未接种的空白培养基进行培养，检测其上有无菌落生长，可以得知培养基灭菌是否彻底，C 正确；
D、平板划线法不能用于菌体计数，D 错误。
故选：D。
【点评】本题主要考查的是微生物的纯培养的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难度适
中。
13. （2021•山东模拟）尿素（CO（NH2）2）是一种高浓度N 肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有被土壤
中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的
叙述，其中正确的是（ ）
A．利用平板划线法可以直接进行尿素分解菌的分离、计数和鉴定
B．向以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红溶液可以鉴别出能产生脲酶的细菌
C．分离后的尿素分解菌可以接种到试管的斜面培养基上长期保存
D．若要判断以尿素为唯一氮源的培养基是否起到了选择作用，需设置接种的牛肉膏蛋白胨培养基作对
照
【分析】1、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才
能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，
而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
2、分解尿素的细菌的鉴定：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为
唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
【解答】解：A、利用稀释涂布平板法可以直接进行尿素分解菌的分离、计数和鉴定，A 错误；
B、要鉴定分解尿素的细菌，可以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂
变红，可确定该种细菌能够分解尿素，B 错误；
C、菌种长期保存采用甘油管藏法，C 错误；
D、若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种了的没有选择作用的细菌通用的牛肉膏蛋白
豚培养基作对照，D 正确。
故选：D。
【点评】本题考查能够分解尿素的细菌的分离、培养和鉴定，要求考生识记相关知识，能够运用所学知
识完成对选项的分析判断。
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14. （2023 春•绵阳期末）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污
染展开，常用的方法是消毒和灭菌。下列有关无菌技术的叙述，错误的是（ ）
A．消毒和灭菌的原理都相同，杀死物体内外所有的微生物
B．在100℃煮沸5～6 分钟可以杀死微生物细胞，属于消毒
C．接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线消毒
D．高压蒸汽灭菌时，锅内的压力一般为100kPa，温度为121℃
【分析】实验室常用的灭菌方法：
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃
烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通
过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以
采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般
在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【解答】解：A、消毒是杀死物体表面或内部的部分微生物，而灭菌是杀死物体内外所有微生物，包括
芽孢和孢子，因此消毒和灭菌的原理不相同，A 错误；
B、在100℃煮沸5～6 分钟可以杀死微生物细胞，属于煮沸消毒法，B 正确；
C、接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min 进行消毒，混合喷洒消毒液效果更
好，C 正确；
D、高压蒸汽灭菌时，锅内的压力一般在100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min，D 正确。
故选：A。
【点评】本题主要考查的是常用的消毒灭菌方法的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难
度适中。
15. （2023 春•和硕县校级期末）微生物接种的方法有很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意
图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是（ ）
A．划线操作时，用蘸有菌种的接种环在培养基表面划线
B．蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰附近进行
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C．在第②～④区域中划线前都要对接种环进行灭菌
D．划线时要将第④区域的划线与第①区域的划线相连
【分析】平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线
的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
【解答】解：A、平板划线法是将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培
养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌
落，因此划线操作时，用蘸有菌种的接种环在培养基表面划线，A 正确；
B、为防止杂菌污染，蘸取菌液和划线应在酒精灯附近操作，B 正确；
C、在第②～④区域中划线前都要对接种环进行灭菌，保证每次划线的菌种来自上一区域的末端，C
正确；
D、划线时最后一区域的划线不能与第一区域的划线相连，D 错误。
故选：D。
【点评】本题主要考查微生物的纯培养，要求考生能够结合所学知识准确判断各选项，属于识记和理解
层次的考查。
16. （2023•福建模拟）野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨
基酸，只能在完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，其中①②③④
代表培养基，A、B、C 表示操作步骤，D、E 为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A．过程A 中大肠杆菌的基因可能发生了碱基对的增添、缺失或替换
B．相比于基本培养基③，培养基④中加入了某种氨基酸
C．过程B 中的接种方法为平板划线法或稀释涂布平板法
D．经过程C 原位影印及培养后，可从培养基④中挑取D 进行纯化培养
【分析】分析题图：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用影印法将菌种接种到两种培养基
中，分别是基本培养基、完全培养基；野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，而氨基酸营养缺陷
型菌株由于发生基因突变无法合成某种氨基酸只能在完全培养基上生长，据此利用培养基的种类便可以
选择出氨基酸突变株。
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【解答】解：A、过程A 中用紫外线对大肠杆菌进行照射，大肠杆菌可能发生基因突变，即基因可能发
生了碱基对的增添、缺失或替换，A 正确；
B、相比于基本培养基③，培养基④中可能加入了某种氨基酸，故出现了较多在③中未出现的菌落，
B 正确；
C、过程B 中的接种方法为稀释涂布平板法，C 错误；
D、从图中可知，D 在基本培养基中无法生长，在完全培养基中可以生长，说明D 是氨基酸缺陷型菌落，
故经过程C 原位影印及培养后，可从培养基④中挑取D 进行纯化培养，D 正确。
故选：C。
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分
析问题的能力是解答本题的关键。
17. （2023 春•泽普县校级期末）下列关于统计菌落数目方法的叙述，不 正确的是（ ）
A．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落
B．为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数
C．采用稀释涂布平板法计数获得的菌落数往往少于实际的活菌数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结
果
【分析】微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法．若要对微生物进行取样计
数，接种方法只能是稀释涂布平板法．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同
稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．
【解答】解：A、当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，A 正确；
B、为了保证结果准确，一般选取菌落数在30
300
﹣
之间的平板进行计数，B 错误；
C、采用平板计数法获得的菌落有可能是由多个细菌形成的，所以往往少于实际的活菌数，C 正确；
D、在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结
果以减小实验误差，D 正确。
故选：B。
【点评】本题考查测定微生物的数量的相关知识，此类试题需要考生注意的细节较多，如接种方法的选
择、结果的分析等，需要考生在平时的学习过程中注意积累，学会构建知识网络结构，对选项作出准确
的判断．
18. （2023•吕梁开学）尿素是一种非蛋白氮饲料，常被用于反刍动物日粮配制，以降低日粮蛋白用量，节约饲
养成本。反刍动物的瘤胃中尿素被分解成氨，氨则被用于合成优质微生物蛋白。某兴趣小组尝试从奶牛的
瘤胃中分离出尿素分解菌。下列有关叙述正确的是（ ）
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A．需配制以尿素为唯一碳源的培养基，还需要加牛肉膏等营养物质
B．用灭菌后的涂布器蘸取0.1mL 菌液在酒精灯火焰旁将菌液涂布均匀
C．以未接种的培养基为对照组，可判断选择培养基是否具有选择作用
D．尿素分解成氨后，培养基中的pH 升高，可用酚红指示剂进行鉴定
【分析】1、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才
能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，
而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
2、分解尿素的细菌的鉴定：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为
唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
【解答】解：A、以尿素作为唯一氮源培养基，能分解尿素的微生物生长，其他微生物不能生长，为选
择培养基，不能加入牛肉膏，A 错误；
B、涂布器不能进行取样，B 错误；
C、以未接种的培养基为对照组，能判断培养基是否被杂菌污染，不能判断选择培养基是否有选择作用，
C 错误；
D、尿素分解为氨后，碱性增强，培养基中的pH 升高，可用酚红指示剂进行鉴定，D 正确。
故选：D。
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分
析问题的能力是解答本题的关键。
19. （2022•枣庄二模）自生固氮菌是土壤中能独立进行固氮的细菌。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离
和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。已知步骤④获得的三个平板的菌落数分别为90、95、100，
对照组平板为0。相关叙述正确的是（ ）
A．步骤②振荡20min 的目的是扩大菌种数量，属于选择培养
B．步骤④使用接种环划线接种，使用前需要灼烧灭菌
C．1g 土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×106个
D．所用培养基应加入碳源、氮源、无机盐、水和琼脂
【分析】1、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据
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物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源
常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述
几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
2、间接计数法（活菌计数法）：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30
～300 的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，其中C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，
V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M 代表稀释倍数。
【解答】解：A、由图观察可知，步骤②振荡20min 的目的是让样品中的微生物充分释放到无菌水中，
A 错误；
B、由图观察可知，步骤④获得菌落分散在平板上，利用的是稀释涂布平板法，使用的接种工具是涂布
器，使用前需要灼烧灭菌，B 错误；
C、1g 土壤中平均自生固氮菌数约为（90+95+100）÷3÷0.1×104＝9.5×106个，C 正确；
D、由题干信息可知，该实验的目的是分离土壤中自生固氮菌和固氮能力的测定，自生固氮菌能够利用
空气中的氮作为氮源，故培养基中不需要加入氮源，D 错误。
故选：C。
【点评】本题考查微生物的分离与培养，要求考生识记微生物分离的具体操作，意在考查考生的识记能
力和有效信息获取能力。
20. （2022•通州区一模）精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，下图为野生型
谷氨酸棒状杆菌经诱变和筛选获得精氨酸依赖型菌过程示意图，过程②将紫外线照射处理过的菌液接种在
培养基甲上，培养至菌落不再增加。过程③向培养基甲中添加某种物质，继续培养。下列相关说法错误的
是（ ）
A．紫外线照射可导致谷氨酸棒状杆菌发生基因突变
B．过程②所用的培养基是缺少精氨酸的选择培养基
C．图甲中菌落A 是采用平板划线法接种后培养得到
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D．图乙中菌落B 应为精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌
【分析】由图分析可知，图中②表示将紫外线照射处理的菌液接种在缺乏精氨酸的培养基上，因此甲
中A 表示野生型谷氨酸棒状杆菌，③表示向培养基中添加精氨酸后继续培养，其中A 为野生型谷氨酸
棒状杆菌，B 为精氨酸依赖型菌株。
【解答】解：A、谷氨酸棒状杆菌属于原核生物，它的遗传物质是DNA，用紫外线照射可导致谷氨酸棒
状杆菌发生基因突变，A 正确；
B、由题图信息分析可知，图甲平板上只有A 菌落，过程③向培养基甲中添加精氨酸后出现B 菌落，
故过程②所用的培养基是缺少精氨酸的选择培养基，B 正确；
C、由图观察可知，图甲中菌落分散、随机或均匀分布在平板表面，故菌落A 不是采用平板划线法接种
后培养得到，C 错误；
D、结合分析可知，图乙中菌落B 应为精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌，D 正确。
故选：C。
【点评】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，
运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力。
21. （2023•辽宁模拟）2022 年由于环境的污染导致化合物S 被广泛应用于医药、食品和化工工业。用菌株C
可生产S，S 的产量与菌株C 培养所利用的碳源关系密切。为此，某科学家通过实验比较不同碳源对菌体
生长和S 产量的影响，结果见表。下列说法错误的是（ ）
碳源
细胞干重/（g/L）
S 产量/（g/L）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖废液
2.30
0.18
A．实验室培养微生物时，除碳源外，还需要提供水、氮源和无机盐等
B．由实验结果可知，菌株C 生长的最适碳源是制糖废液
C．由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，其原因可能是缺少淀粉酶
D．利用制糖废液生产S 可以实现废物利用，其意义是减少污染、节省原料、降低生产成本
【分析】根据题意并结合表格数据可知，该实验的自变量为碳源的类型，因变量是对菌株C 的生长和S
产量的影响，以细胞干重和S 的产量作为因变量的指标。
【解答】解：A、实验室培养微生物时，各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和
无机盐等，A 正确；
B、由表格中的结果分析可知，以葡萄糖为碳源时，菌株C 的细胞干重最大，故菌株C 生长的最适碳源
是葡萄糖，B 错误；
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C、由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，原因是其细胞中缺少能分解淀粉的淀粉酶，导致
其不能利用淀粉，C 正确；
D、利用制糖废液生产S 可以实现废物的再利用，该过程不但能减少污染、节省原料、降低生产成本，
还有利于资源的可持续发展，D 正确。
故选：B。
【点评】本题考查微生物的分离与培养，要求考生识记微生物培养的有关原理及操作注意事项，能从题
干中获取有效信息，并能结合实验目的设计实验方案，意在考查考生的综合应用能力。
22. （2021 秋•武强县校级月考）果酒、果醋、腐乳、泡菜是人们非常喜爱的发酵食品，请回答下列相关问题：
（1）与醋酸菌相比，酵母菌细胞结构的主要特点是
。
（2）果汁发酵后是否产生酒精，可以用
来检验，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈现
色。
（3）某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是
。
（4）传统发酵技术以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是
。
（5）如图为腐乳的生产工艺流程：
现代科学研究发现a 过程有多种微生物参与，其中起主要作用的是
。经过发酵后的腐乳味道
鲜美，易于消化吸收，原因是：
。
【分析】1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔
绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是18℃～25℃，pH 最好是弱酸性。
2、醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都
充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是30℃～35℃。
3、泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌，代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中
的葡萄糖氧化为乳酸。
4、腐乳制作的菌种主要是毛霉，代谢类型是异养需氧型。毛霉生长的最佳温度是15℃～18℃，保持一
定湿度。
【解答】解：（1）醋酸菌属于原核生物，酵母菌属于真核生物，故与醋酸菌相比，酵母菌细胞结构的
主要特点是具有成形的细胞核。
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（2）生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
（3）糖类是细胞中主要的能源物质，加入糖类可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为
酒精发酵的原料，因此在制作原料中添加一定量的糖，发酵产生的酒精更多，可以提高酒精度。
（4）传统发酵技术以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌的原因是葡萄皮上附着有野生型酵
母菌，其能够在制作过程中起发酵作用。
（5）现代科学研究发现a 过程有多种微生物参与，结合分析可知，其中起主要作用的是毛霉。毛霉能
够产生蛋白酶和脂肪酶，将蛋白质和脂肪分别水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸，使得经过发
酵后的腐乳味道鲜美，易于消化吸收。
故答案为：
（1）具有成形的细胞核
（2）重铬酸钾 灰绿
（3）糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的原料
（4）葡萄皮上附着有野生的酵母菌
（5）毛霉 毛霉将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，将脂肪水解成为甘
油和脂肪酸
【点评】本题考查传统发酵技术的应用，要求考生识记制作果酒、果醋、腐乳和泡菜的原理和过程等知
识，掌握不同微生物的应用和代谢类型，意在考查考生的综合运用能力。
23. （2023 春•南宁期末）人体每天产生的尿酸有
通过肾排出，其余
则通过肠道排泄，其中肠道菌群对尿
酸的代谢起着重要作用。利用肠道细菌降解尿酸可为高尿酸血症的治疗提供新思路。回答下列问题。
（1）研究人员需要从
（填“高”或“低”）尿酸人群的粪便中采集标本，制备成菌液保存。要
测定菌液中细菌的数目，可在显微镜下用
计数板直接计数；除此之外还可以采用
，该方法的测量值与实际值相比一般会偏小。
（2）本实验用到的尿酸选择培养基需要进行
（填灭菌方式）处理；培养皿需要
进行
（填灭菌方式）处理。
（3）高效尿酸降解菌的驯化过程采用浓度梯度法把菌液分别接种于不同浓度尿酸（1.7mmol/L，
1.9mmol/L、2.1mmol/L，2.3mmol/L）选择培养液中，每组3 个平行样本，厌氧条件下37℃，220r/min
摇床培养48h。每组3 个平行样本的目的是
；在厌氧
条件下培养的原因是
。
（4）通过驯化筛选获得1 株肠道细菌，命名为S3A，其在不同尿酸浓度驯化培养基中均可生长且尿酸
降解率如表，通过分析可得到的结论是
。
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培养基初始尿酸浓
度/（mmol•L
1
﹣）
降解后培养基尿酸浓
度/（mmol•L
1
﹣）
尿酸降解率/%
1.74±0.06
1.18±0.04
32.2
1.89±0.04
1.19±0.03
37.0
2.05±0.09
1.20±0.06
41.5
2.26±0.08
1.13±0.04
50.0
【分析】获取某微生物的思路为：从富含该生物的环境中获取，理由是生物与其生活环境相适应。
【解答】解：（1）尿酸是人体产生的，且有1/3 从肠道排出体外，若粪便中的尿酸含量较低，则说明
该肠道中分解尿酸的菌体含量较多或活性较高。所以研究人员需要从低尿酸人群的粪便中采集标本，制
备成菌液保存。要测定菌液中细菌的数目，可在显微镜下用细菌或血细胞 计数板直接计数；除此之外
还可以采用稀释涂布平板法，由于该方法在测定时以单个细菌形成的菌落数量为标准，但可能有两个或
以上的细菌由于没有分开而形成一个菌落，所以测量值与实际值相比一般会偏小。
（2）本实验用到的尿酸选择培养基需要进行高压蒸汽灭菌处理，以防止培养基变干而影响使用；培养
皿需要进行干热灭菌（或高压蒸汽灭菌）（填灭菌方式）处理。
（3）高效尿酸降解菌的驯化过程采用浓度梯度法把菌液分别接种于不同浓度尿酸（1.7mmol/L，
1.9mmol/L、2.1mmol/L，2.3mmol/L）选择培养液中，每组3 个平行样本的目的是依据平行重复原则，
排除偶然因素对实验结果的干扰；在厌氧条件下培养的原因是该菌为肠道菌群，代谢类型为异养厌氧型，
需要提供无氧条件。
（4）如图表可知：通过驯化筛选获得1 株肠道细菌，其在不同尿酸浓度驯化培养基中均可生长且尿酸
降解率 培养基中尿酸浓度越高，S3A 菌的尿酸降解率越高。
故答案为：
（1）低 细菌或血细胞 稀释涂布平板法
（2）高压蒸汽灭菌 干热灭菌（或高压蒸汽灭菌）
（3）依据平行重复原则，排除偶然因素对实验结果的干扰 该菌为肠道菌群，代谢类型为异养厌氧型，
需要提供无氧条件
（4）培养基中尿酸浓度越高，S3A 菌的尿酸降解率越高（能准确描述尿酸浓度与尿酸降解率关系也可
给分。）
【点评】本题考查了微生物的培养和分离的相关知识，掌握微生物培养和分离的方法是解题的关键。
24. （2023•陕西开学）随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆进行燃料乙醇的生产对缓解全球
能源危机有着重大意义。黑土壤中富含由多年落叶形成的腐殖质，科研人员利用其为原料开展了筛选、诱
变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如图1 所示。回答下列问题：
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图1
图2
（1）一般情况下，图1 中的富集培养基属于
（填物理形态）培养基。采用黑土壤富集产纤维
素酶菌株的原因是
。
（2）常采用稀释涂布平板法或
去将富集培养后的菌种接种于CMC 平板上进行筛选，
CMC 平板的筛选原理是
。培养一段时间后，可根据
初步鉴定
并挑取产纤维素酶菌株XZ
33
﹣
。
（3）选育高产纤维素酶菌株时，可通过向培养基中加入刚果红染液筛选出透明圈直径与
比
值大的菌落作为目的菌落。
（4）图2 是筛选获得菌株UV
Co16
﹣
的过程中60Co﹣γ 辐照剂量与致死率和正突变率（符合生产需要
的突变菌数古诱变后活菌数的比例）的关系，已知进行不同剂量射线诱变处理的细菌初始数目相同。实
验结果表明，用60Co﹣γ 射线诱变处理时，辐照剂量为
（填“0.2”、“0.4”、“0.6”或“0.8”）
kGy 时可获得数量最多的目的菌。
【分析】按照物理状态对培养基进行分类，可以分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基，一般在
固体培养基上进行选择、鉴定等操作。筛选产纤维素酶的菌株应以纤维素为唯一碳源，可以保证平板上
长出的菌株均能分解利用纤维素，鉴别纤维素分解菌常常使用刚果红染色法。
【解答】解：（1）一般情况下，实验室常用液体培养基对目的菌进行富集培养；黑土壤中有由多年落
叶形成的腐殖质，纤维素含量较高，产纤维素酶菌株的数目较多，因此选用黑土壤富集培养目的菌。
（2）菌种常采用稀释涂布平板法或平板划线法进行接种；由题图可知，CMC 培养基属于选择培养基，
其筛选产纤维素酶菌的原理是通过设置培养条件允许产纤维素酶菌的生长，同时抑制或阻止其他种类微
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生物的生长。可根据菌落特征（或菌落的形状、大小、颜色和隆起程度等）初步鉴定并挑取产纤维素酶
菌株XZ
33
﹣
。
（3）可通过向培养基中加入刚果红染液筛选出透明圈直径与菌落直径比值大的菌落作为目的菌落，其
降解纤维素的能力强。
（4）目的菌数量＝细菌初始数目×（1﹣致死率）×正突变率，代入数据（相应的致死率和正突变率）
可知，当辐照剂量为0.2kGy 时，得到的目的菌数量最多。
故答案为：
（1）液体 黑土壤中有由多年落叶形成的腐殖质，纤维素含量较高，故产纤维素酶菌株的数目较多
（2）平板划线法 提供有利于产纤维素酶菌（或目的菌）生长的条件，允许产纤维素酶菌（或目的
菌）的生长，同时抑制或阻止其他种类微生物的生长 菌落特征（或菌落的形状、大小、颜色和隆
起程度等）
（3）菌落直径
（4）0.2
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分
析问题的能力是解答本题的关键。
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