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微生物的培养技术及应用
1、（2023·山东聊城·统考三模）研究人员将结核杆菌分别接种在含有不同浓度抗生素A
与B的培养基中(+代表含抗生素，+多少代表抗生素浓度，一代表不含抗生素),对两种抗生
素药性分析。在37℃环境下培养24小时后，细菌生长情况如图。下列说法错误的是（
）
A．为排除杂菌的影响，倒平板前需对培养基采用高压蒸汽灭菌
B．该实验使用稀释涂布平板法接种结核杆菌，待菌液被吸收后方可倒置培养
C．长期使用抗生素A可能会增加结核杆菌的抗药性基因频率
D．与单独使用抗生素A相比，联合使用抗生素B可显著增强对结核杆菌的抑制作用
2、（2023·山东菏泽·山东省鄄城县第一中学校考三模）下列操作不能从特定的培养基中
分离出目的菌的是（ ）
A．利用仅以尿素作为唯一氮源的培养基，可以分离出土壤中能分解尿素的细菌
B．利用仅以纤维素作为唯一碳源的培养基，可以分离出土壤中能分解纤维素的细菌
C．利用不含氮源的培养基，可以分离出土壤中的固氮细菌
D．利用不含氮源的培养基，可以分离出土壤中的硝化细菌
3、（2023·山东·统考模拟预测）DMF（一种含碳有机物）是一种优良的工业溶剂和有机
合成材料，它广泛应用于制革、医药、农药等多个生产行业。含DMF的废水毒性大，会对
环境造成严重危害，某实验小组筛选分离得到能够高效降解DMF的细菌，用于DMF的降解。
下列有关叙述正确的是（ ）
A．分离高效降解DMF的菌株所用的培养基可以是液体培养基或固体培养基
B．可采用平板划线法或稀释涂布平板法对细菌进行分离并计数
C．利用平板划线法接种时，灼烧接种环的次数等于划线次数
D．利用显微镜对细菌进行直接计数时，统计的结果往往大于实际活菌数
4、（2023·山东·统考模拟预测）镰刀菌引起的根腐病会导致玉米根茎腐烂，严重影响玉
米的产量。土壤中某些微生物能够抑制镰刀菌生长，某小组拟从土壤中筛选菌株用于根腐
病的防治。下列叙述错误的是（ ）
A．可用高压蒸汽灭菌法对培养目的菌的培养基进行灭菌
B．实验中培养目的菌所用的培养基为选择培养基
C．需要将培养基倒入培养皿中后再进行灭菌
D．采集土壤时应从不患根腐病的玉米植株根部附近取样
5、（2023·山东潍坊·统考模拟预测）某研究团队从食塑料蜡虫肠道中分离能降解聚乙烯（PE）的细菌，以解决塑料污染问题。将分离得到的两种细菌（YT1和YP1）在PE薄膜培
养液中培养，培养液中细菌数量变化以及PE失重率（降解PE能力的高低）变化如图所示。
下列叙述正确的是（ ）
A．用经湿热灭菌后的含PE、葡萄糖和无机盐等成分的液体培养基分离目的细菌
B．分离得到目的细菌的纯培养可用平板划线法在酸性的选择培养基上进行
C．在得到图1曲线过程中的计数常用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法
D．在第20天后两种细菌群体降解PE的能力差异增大，且细菌YT1强于细菌YP1
6、（2023·山东烟台·统考二模）（多选题）野生型大肠杆菌能在基本培养基上生长，氨
基酸营养缺陷型突变株只能在完全培养基上生长。如图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株
的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C为操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误
的是（ ）
A．图中①②③是完全培养基，④为基本培养基
B．紫外线处理可提高基因突变和染色体变异的频率，增加突变株的数量
C．B中的接种方法是稀释涂布平板法，接种前需对菌液进行稀释
D．E是氨基酸营养缺陷型菌落，可挑出后进一步纯化培养
7、（2023·山东青岛·统考三模）（多选题）精氨酸依赖型谷氨酸棒状杆菌缺乏将鸟氨酸
转化为精氨酸的酶，不能在缺少精氨酸的培养基上正常生长，但可作为鸟氨酸发酵的优良
菌种。如图为野生型谷氨酸棒状杆菌经诱变获得精氨酸依赖型菌并进行筛选的过程示意图，
过程①将紫外线照射处理过的菌液接种在培养基甲上，培养至菌落不再增加时，平板上的
菌落如图所示。过程②向培养基甲中添加某种物质，继续培养。下列相关叙述正确的是（
）A．实验过程中用到的培养基和培养皿必须采用高压蒸汽灭菌法灭菌
B．从培养基乙中挑选菌落，用平板划线法接种在培养基上可分离出单菌落
C．培养基甲是一种选择培养基，过程②向培养基甲中添加精氨酸
D．菌落A是诱变产生的精氨酸依赖型菌种，为鸟氨酸发酵的优良菌种
8、（2023·山东淄博·统考三模）（多选题）即墨老酒以黄米为主要原料，经蒸煮、加曲、
糖化、发酵、过滤、煎酒（90℃）过程酿造而成。下列说法正确的是（ ）
A．蒸煮能在灭菌的同时破坏细胞结构，促进淀粉的释放
B．加曲前需要加水浸曲，目的是活化曲中的微生物
C．后期发酵过程中酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和CO
2
D．煎酒可使酒体中的蛋白质变性，同时杀死酒体中的全部微生物
9、(2020·合肥市质检)如图是纯化纤维素分解菌并生产乙醇的基本工作流程，请回答下列
问题：
(1)图中①过程应选取富含纤维素的土壤，在鉴定和筛选所需微生物时需用________对纤维
素进行染色并制成选择培养基，最后还要在平板培养基上分离纯化目的菌。为避免杂菌污
染培养物和环境，接种时要在______________旁操作。
(2)图中②环节获得的酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，分别为C 酶、C 酶
1 X
和______________。前两种酶使纤维素酶分解成____________，第三种酶将前两种酶的分
解 产 物 分 解 成 葡 萄 糖 。 ⑤ 环 节 常 用 的 菌 种 是
___________________________________________
_____________________________________________________________________________。
(3)用稀释涂布平板法测定一土壤样品中纤维素分解菌数量。在对应稀释倍数为 106的稀释
液中，取0.2 mL稀释液涂布，得到以下统计结果：涂布了三个平板，统计的菌落数分别是
210、240和246；请计算每毫升原液中的菌体数是______________。
10、(2020·白银模拟)秸秆还田的过程中，配施适量的高效纤维素分解菌，能有效促进秸
秆分解，提高秸秆还田效率，且不会造成环境污染。回答下列问题：
(1) 筛 选 纤 维 素 分 解 菌 时 ， 可 到 腐 烂 稻 草 等 环 境 中 采 集 土 样 ， 原 因 是
_______________________________________________________________________________
_______________________。
(2)有很多类群微生物都能有效降解纤维素，为了避免不同微生物之间的生长互相影响，应
该用______________培养基进行培养，获得纯化菌株。(3)用刚果红染色法初步鉴定纤维素分解菌后，进一步用液体滤纸培养基分组复筛，其中滤
纸的作用是____________________。培养一段时间后，将残留的滤纸烘干称重，残留的滤
纸 越 少 ， 则 说 明
____________________________________________________________________。
(4)采用__________________技术，将筛选到的高效纤维素分解菌固定，能够阻隔其受到外
界不利因素的毒害作用，增加使用寿命。
(5)为了长期保存高效纤维素分解菌菌种，可以采用__________________的方法。
(6)现有高效分解纤维素的细菌，为探究其最适 pH，某同学设计如下实验：取锥形瓶若干
分为4组，加入等量秸秆及其他必需营养物质，分别设置pH为1、3、6、7，接种等量纤维
素分解细菌，培养一段时间后，测定各组锥形瓶中秸秆减少量的平均值。该 pH设置的不足
之处有____________和____________。
11、(2021·贵州遵义模拟)油烟由多种有害物质组成，不易降解。某同学从长期受到某品
牌食用油产生的油烟污染的土壤中分离出油烟降解菌，其筛选分离过程如图所示，回答下
列问题：
(1) 图 中 ① → ③ 的 过 程 称 为 ________ ， 其 目 的 是
_______________________________________
_____________________________________________________________________________。
(2)该同学将③中的微生物培养液接种到培养基④之前，进行了梯度稀释，制成稀释倍数分
别为101、102、103的不同稀释度的样品液，分别吸取0.1 mL样品液涂布于培养基上。每
个稀释倍数的样品液涂布三个培养基，最终形成的菌落的数目如表所示：
稀释倍数
培养基编号
甲 乙 丙
101 168 172 170
102 12 14 19
103 2 3 6
应选择稀释倍数为________的培养基进行计数，稀释前每毫升菌液中含有油烟降解菌的数
目为________个，这种计数方法统计的结果往往会比显微镜直接计数的结果小，其原因是
______________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________。
(3)在⑤的固体培养基中应加入该品牌食用油，其作用是__________________________。培
养基常用的灭菌方法是_________________________________________________________。
12、(2020·重庆市调研)饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动
物吸收利用，并且影响其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化植酸钙水解成为可以被吸收利用的磷酸盐等。如图是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌
株的过程示意图。请分析回答问题：
(1)实验室中筛选微生物的原理是_________________________________________________
_____________________________________________________________________________。
配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须________________________。
(2)请写出一种纯化得到植酸酶的方法：__________________，其原理是________________
______________________________________________________________________________
。
(3)现将从100 mL含有产植酸酶菌的土壤样品溶液中取出的 1 mL样品溶液稀释104倍后，
取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为 150，空白对照组平
板上未出现菌落，则100 mL原菌液中含有产植酸酶菌________个，该方法的测量值与实际
值相比一般会________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。
(4)由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌
落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验
结果显示的A～E五种菌株中，________是产植酸酶的最理想菌株。
(5)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的__________________________________等菌落特
征对细菌进行初步的鉴定(或分类)。
