文档内容
考点 35 微生物的培养技术及应用
（精讲+精练）
目 录
一、知识点精准记忆
二、典 型 例 题 剖 析
1、微生物的培养技术及应用
2、微生物的选择培养和计数
三、易 混 易 错 辨 析
四、2022 高 考 真 题 感 悟
五、高 频 考 点 精 练
第一部分：知 识 点 精 准 记 忆
一、微生物的培养技术及应用
1．培养基的配制
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)用途：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
(3)类型：按物理状态分类
液体培养基：①特点：不含凝固剂，呈液体状态②用途：工业生产
固体培养基：①特点：含凝固剂(如琼脂)，呈固体状态②用途：微生物的分离、鉴定，活
菌计数，菌种保藏
(4)成分碳源：①特点：提供碳元素的物质②作用：构成生物体的细胞的物质和一些代谢产物，有
些也是异养生物的能源物质③来源：无机碳源：CO NaHCO 等；有机碳源：糖类、牛肉
2、 3
膏等
氮源：①特点：提供氮元素的物质②作用：合成蛋白质、核酸等物质③来源：无机氮源：
N、NH 、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等
2 3
无机盐：①特点：为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素
②作用：为微生物提供无机营养，调节培养基的pH等③来源：无机化合物：KH PO 、
2 4
KHPO 、NaCl等
2 4
水：①特点：生物体含量最高的无机化合物②作用：良好的溶剂，参与化学反应等③来源
培养基、代谢产物
（5）提醒：除了上述主要营养物质外，还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及
氧气的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一
般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养
厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。
2．无菌技术
(1)目的：获得纯净的培养物。
(2)关键：防止杂菌污染。
(3)区别：消毒与灭菌的比较
比较项目 条件 结果 常用方法 应用范围
煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体
较为温和的物 仅杀死物体表面
操作空间、操作
消毒 理、化学或生物 或内部一部分微 化学药物消毒法
者的衣物和手等
等方法 生物
接种室、接种箱
紫外线消毒法
或超净工作台
湿热灭菌法 培养基、容器等
杀死物体内外所
玻璃器皿、
灭菌 强烈的理化方法 有的微生物，包 干热灭菌法
金属用具等
括芽孢和孢子
灼烧灭菌法 接种工具等
（4）提醒：选择无菌技术的原则：一要考虑无菌技术的效果，灭菌的效果比消毒要好；二
要考虑操作对象的承受能力，活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌
(5)其他操作
①做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
②为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并在酒精灯
火焰附近进行。
3．微生物的纯培养
(1)概念辨析
培养物：接种于培养基内，在适合条件下形成特定种类的微生物的群体纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体
菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态
结构的子细胞群体
纯培养：获得纯培养物的过程
(2) 酵母菌纯培养的操作步骤
(3)平板划线法操作步骤（1）实验成功关键点
①第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。
②灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
③在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样才能使细
菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
④划线时最后一区域不要与第一区域相连。
⑤划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
（2）平板划线操作中几次灼烧接种环的目的
项目 第一次操作 每次划线之前 划线结束
杀死上次划线后接种环上
残留的菌种，使下次划线 杀死接种环上残存的菌
杀死接种环上原有
目的 的菌种直接来源于上次划 种，避免微生物污染环境
的微生物
线的末端，使每次划线菌 和感染操作者
种数目减少二、微生物的选择培养和计数
1．区分选择培养基与鉴别培养基
1）.选择培养基：①特点：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物
生长②用途：从众多微生物中分离所需的微生物③举例：加入青霉素分离得到酵母菌和霉
菌
2）.鉴别培养基：①特点：根据微生物的代谢特点在培养基中加入某种指示剂或化学药品，
进而产生特定的颜色或其他变化②用途：鉴别不同种类的微生物③举例：用伊红—亚甲蓝
培养基鉴别大肠杆菌
3）.提醒 常见选择培养基举例：①缺少氮源的培养基可以筛选能利用大气中N 的微生物。
2
②含青霉素的培养基可淘汰细菌，筛选出真菌。③无有机碳源的培养基可筛选出自养微生
物。
2．微生物的选择培养和数量测定
(1)稀释涂布平板法步骤
①系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞
随着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。
操作步骤：
②涂布平板操作步骤
(2)微生物的数量测定方法
①显微镜直接计数法
原理：利用特定细胞计数板或血细胞计数板，在显微镜计数一定容积的样品中微生物的数
量方法：用计数板计数
缺点：不能区分死菌与活菌而使计数结果偏大
②间接计数法——活菌计数法(即稀释涂布平板法)
原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的
一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
3．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作
(1)实验原理
分离原理：①土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶②配制以尿素为唯
一氮源的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌
(3) 实验流程
土壤取样：从酸碱度接近中性的潮湿土壤中，铲去表层土，取距地表3-5厘米的土壤层
样品的稀释：通常选取一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得的菌落数在 30-300的
平板适于计数
微生物的培养与观察：①接种：用稀释涂布平板法接种②培养条件：30-37℃培养1-2天③
观察：根据菌落的特征区分微生物④计数：每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目
稳定时的记录作为结果
(3)实验结果分析与评价
第二部分：典 型 例 题 剖 析
考向一、微生物的培养技术及应用1.应用特定的测序技术发现某明代古沉船船体饱水木材样品与沉积物中含有丰富的原核微
生物类群，与漆黑海底现场取的木材样品与沉积物中的菌群种类相似，但是菌群含量存在
明显的差异。下列叙述正确的是（ ）
A．海底沉积物中的原核微生物结构简单，以RNA为遗传物质
B．在漆黑的海底现场获取的木材样品中含有大量能够进行化能合成作用的硝化细菌菌群
C．海底沉积物为多种多样的细菌菌群提供了生长、繁殖所需的全部的碳源和氮源
D．用血细胞计数板统计海底某细菌的种群数量时发现平均每小格中有3个细菌，可估算
一个计数室内有1200个细菌
考向二、微生物的选择培养和计数
2. 下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（ ）
A．配制牛肉膏蛋白胨培养基；牛肉膏蛋白胨培养基也要灭菌
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0．1ml，分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24﹣48小时
D．确定对照组无菌后，选择菌落数多的实验组平板进行计数
第三部分：易 混 易 错 辨 析
1. 与微生物培养有关的6个易错点
（1）固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂，不能为微生物生长提供能量和碳源。
（2）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
（3）划线时最后一区不要与第一区相连。
（4）划线时用力大小要适当，这是为了防止用力过大将培养基划破。
（5）用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细
胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
（6）尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是
唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。
2.教材结论性语句
（1）（选择性必修3 P18）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，
统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
（2）（选择性必修3 P18）同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平
均值。
第四部分：高 考 真 题 感 悟1．（2022·海南·高考真题）为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内
土壤样本并开展相关实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A．采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本
B．培养细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基
C．土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落
D．鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法
2．（2022·湖北·高考真题）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙
述正确的是（ ）
A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行
B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
3．（2022·湖北·高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸
收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分
别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，
下列说法错误的是（ ）
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
4．（2021·天津·高考真题）1．下列操作能达到灭菌目的的是（ ）
A．用免洗酒精凝胶擦手 B．制作泡菜前用开水烫洗容器
C．在火焰上灼烧接种环 D．防疫期间用石炭酸喷洒教室
第五部分：高 频 考 点 精 练
1．某样液经滤膜过滤后，转移到完全培养基上并适宜条件下培养，每隔12h统计一次菌落
数目，选取菌落数目稳定时的数据作为结果，统计某种菌菌落数为205个，如图所示。下
列说法正确的是（ ）A．若用滤膜测定硝化细菌数量，则培养基中可不添加氮源
B．若计算出样液中该种菌的密度为41个/L，该值比实际值偏大
C．为了提高准确度，需设平行重复实验，但不用空白对照
D．菌落数目稳定时，大小不同的菌落形成的起始时间一般不同
2．药物敏感试验简称药敏试验，旨在了解某病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导
临床合理选用抗生素。纸片扩散法是药敏试验中一种常用的方法，在纸片周围会形成透明
的抑菌圈。下列叙述正确的是（ ）
A．图1所示操作需待培养基冷却至50℃左右时进行，不需要在酒精灯旁操作
B．图3中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落可能是该病原微生物发生了基因突变
C．进行药敏试验，需将平板上布满测试菌，需使用的接种工具是接种环
D．接种后的平板在培养时的放置应如图2中②所示，可以防止污染
3．某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘
取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列叙述正确的是（ ）
A．在固体培养基X上用稀释涂布平板法进行接种
B．固体培养基X对菜品中的细菌有选择作用
C．根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
D．理论上，不食用组的培养基上不会有菌落出现4．为了观察手掌上附着的微生物，某小组成员将自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固体培
养基上轻轻按压后，盖上培养皿盖，将平板倒置放在恒温培养箱中培养48 h，结果如图所
示。下列说法错误的是（ ）
A．配制的培养基经高压蒸汽灭菌后，还要调节pH才能用于接种
B．待高温灭菌后的培养基冷却至50 ℃左右后，再进行倒平板
C．在超净工作台上和酒精灯火焰旁进行操作，是为了防止杂菌污染
D．手掌上的某些微生物在该培养基上并没有生长繁殖形成菌落
5．野生型大肠杆菌菌株能在未添加某种维生素的基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突
变株无法合成某种氨基酸，只能在添加了多种维生素的完全培养基上生长，下图为纯化某
氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，
D、E为菌落。下列叙述错误的是（ ）
A．图中①②④为基本培养基，③为完全培养基
B．紫外线的目的是提高突变率，增加突变株的数量
C．B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面
D．经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养
6．AM真菌能促进根瘤菌（Rh）刺激根的局部膨大形成根瘤。为研究AM真菌促进Rh形
成根瘤的机制，研究人员分别取经AM-+Rh-、AM++Rh-和AM++Rh+处理的大豆根系分泌物
（+代表有，-代表无），灭菌后装满毛细管，将毛细管束放入含有根瘤菌菌液的试管中，
实验装置如图1（此培养条件下根瘤菌能生存但并不增殖）。每隔两天取出毛细管，用无
菌水冲洗其外壁，打碎研磨冲洗定容后进行活菌计数，结果如图2。下列有关上述实验操
作及分析叙述正确的是（ ）A．根瘤菌与AM真菌都具有生物膜系统，二者本质区别是有无核膜包被的细胞核
B．实验中可采用高压蒸汽灭菌锅对大豆根系分泌物和根瘤菌菌液进行灭菌处理
C．可取一定量的毛细管研磨液划线接种在增殖平板培养基上进行培养计数
D．AM真菌与根瘤菌共同存在时，根系分泌物对根瘤菌的吸引作用更强
7．为了从反刍动物的瘤胃中分离出能分解尿素的微生物，某兴趣小组设计了如下实验流程。
下列叙述错误的是（ ）
A．为创造无氧环境，可采用穿刺接种法
B．该实验使用的固体培养基是选择培养基
C．细菌能分解尿素，是因为它们能合成脲酶
D．脲酶将尿素分解为氨和CO，会使培养基pH降低
2
8．刚果红是一种染料，可与纤维素反应形成红色复合物，但不会与纤维素水解产物发生反
应。研究人员利用该原理从土壤中分离纤维素分解菌并计数，培养结果如下图所示。下列
叙述错误的是（ ）
A．刚果红培养基以纤维素为唯一碳源
B．将菌液分散在培养基表面用平板划线法
C．图中菌落丁分解纤维素的能力最强
D．用显微镜直接计数统计的结果往往比活菌实际数目多
9．利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有重大意义。科研人员开展
筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如图。下列叙述正确的是（ ）A．采集的黑土壤需经过高压蒸汽灭菌进行富集培养
B．需用牛肉膏、纤维素、琼脂等配制CMC平板
C．诱变处理使每个细菌的产纤维素酶能力提高
D．人工筛选可以使产纤维素菌株发生定向进化
10．肉制品在发酵过程中会产生一类具有生物活性的含氮低分子化合物一生物胺。适量生
物胺可促进人体的正常生理活动，但含量较高时有一定的毒性。科研人员拟采用水解圈
（微生物水解生物胺产生的透明圈）的方法，从鱼露发酵液中筛选高效生物胺降解菌，其
操作思路如下：①从距发酵缸上表面8-12cm处吸取1mL发酵液→②→③取100uL均匀涂
布在培养基x上→④挑取目标菌落分离纯化→⑤测定菌株的生物胺降解活性。下列相关分
析中错误的是（ ）
A．操作②是指用适量的蒸馏水稀释鱼露发酵液
B．操作③采用的接种方法也可用于微生物计数
C．配置培养基X时，应以生物胺作为唯一氮源
D．选择目标菌落时，应挑取水解圈较大的菌落
11．尿素容易保存，是目前使用量较大的一种化学氮肥，尿素分子并不能直接被农作物吸
收，只有被尿素分解菌分解成氨之后，才能被植物利用。如图是从土壤中分离、计数尿素
分解菌的过程，有关分析不正确的是（ ）
A．若②过程稀释了10倍，则乙锥形瓶里盛有18 mL无菌水
B．③的接种方法可用稀释涂布平板法
C．a、b、c培养基可以用牛肉膏蛋白胨培养基
D．若①②过程稀释了10倍，a、b、c培养基上的菌落数依次为57、58、56个，则10 g土
样中的尿素分解菌数量为5.7×108个
12．为了研究抗生素X对四种不同细菌（1、2、3、4）的作用效果，有人做了如图的抗菌
实验，四天后菌落形态如图所示，则下列分析正确的是（ ）A．抗生素X对细菌3的抑制效果最好
B．抗生素X对细菌4的抑制效果最差
C．抗生素X对细菌2的抑制比对细菌3的抑制效果好
D．可以用抗生素X去治疗由细菌1引起的疾病
13．为宣传正确佩戴口罩可降低呼吸道传染疾病的风险，某同学进行了相关实验。实验中
将牛肉膏蛋白胨培养基置于距正确佩戴口罩的实验者口部前方50cm处，然后对着培养基
讲话1min或咳嗽2次，再进行微生物培养和观察。下列叙述错误的是（ ）
A．实验中培养基为固体培养基并需要进行严格的灭菌
B．实验者对培养基进行处理后，放入10℃恒温培养箱中培养1-2天
C．实验中还应设置不戴口罩直接讲话或咳嗽进行实验对照
D．培养结束后可根据菌落的形状、大小、颜色等特征确定微生物的种类
14．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（ ）
A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应立即去挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
15．微生物需要从外界吸收营养物质来维持正常的生长和繁殖。下列关于微生物营养的叙
述，正确的是（ ）
A．尿素分解菌和纤维素分解菌的培养基中可能含有相同的无机盐
B．筛选硝化细菌（自养型）的培养基中需加入适宜浓度的有机碳源
C．只含有水和无机盐两类成分的培养基中不可能形成生物群落
D．乳酸菌需要的特殊营养物质是指其自身不能合成的某些无机物
16．培养基是指供给微生物、植物或动物细胞（或组织）生长繁殖的，由不同物质组合配
制而成的营养基质。针对下表中的三组培养基，下列叙述错误的是（ ）
组别 培养基成分
a 蛋白胨、酵母提取物、甘露醇、水
b 葡萄糖、尿素、NaCl、KHPO 、酚红、琼脂糖
2 4c 矿质元素、蔗糖、维生素、甘氨酸、水、琼脂
A．a组培养基可用于醋化醋杆菌的扩大培养，该培养过程需用到磁力搅拌器和摇床
B．b组培养基可用于分离含脲酶的微生物，该实验中需用全营养LB固体培养基作对照
C．c组培养基可用于诱导植物愈伤组织再分化，添加的植物生长调节剂需事先过滤灭菌
D．上述培养基不仅要为相应的细胞提供营养物质还要为其生存和繁殖提供适宜的环境
17．结核杆菌是对抗生素极易产生耐药性的细菌。为探究不同结核杆菌耐药性的大小，研
究人员提取患者体内的病原菌进行培养（如图甲），过程Ⅰ接种纯化的结果如图乙。下列
说法正确的是（ ）
A．在病原菌的培养过程中只采用一种灭菌方法即可
B．对单一菌落进行液体培养的目的是获得更多的结核杆菌
C．培养中各培养基均需加入抗生素的目的是抑制杂菌生长
D．过程Ⅰ接种时划线的顺序是①→②→③，该方法无法完成对菌落的计数
18．下列有关无菌技术的说法，正确的是（ ）
①可以通过化学药剂消毒法处理水源；
②培养基需经高压蒸汽灭菌后方可调节pH；
③配制培养基和接种时，均必需在酒精灯火焰旁操作；
④接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min进行消毒；
⑤高压蒸汽灭菌是在压力为201kPa，温度为121℃的条件下维持15-30min来灭菌的；
A．①③ B．③⑤ C．③④ D．①④
19．经诱变处理后，某细菌群体中基因突变频率增大，但突变体数量仍占极少数。梯度平
板法是筛选抗药性突变型的一种简单有效的方法，其操作要点是：先在培养皿中倒入不含
抗生素的培养基，立即倾斜培养皿到凝固为一个斜面，再将培养皿平放，继续倒入含一定
浓度抗生素的培养基，直至形成平面，培养基内的抗生素浓度呈线性梯度，一端浓度高，
另一端浓度低，将诱变处理的浓菌液涂在梯度平板上进行培养及筛选。筛选出的抗药性突
变型再做抗药性的测定。下列推断不合理的是（ ）
A．抗药性突变型个体的主要诱因是培养基中的抗生素
B．制作含有抗生素的平板时，药物须与培养基混合均匀
C．培养后，在高浓度抗生素处出现的菌落为抗药性突变型菌株且抗药性强D．含抗生素的梯度平板上会出现未经诱变处理的该细菌群体菌落
20．高中生物实验中用到了不同体积分数的酒精，下列说法正确的是（ ）
A．微生物的实验室培养实验中，用50%酒精给实验者的双手消毒
B．观察花生细胞中的脂肪颗粒，需要用70%的酒精洗去浮色
C．DNA粗提取实验中，用95%冷酒精进一步提纯DNA，DNA溶解于95%冷酒精
D．绿叶中色素的提取和分离实验中，可用无水乙醇作为提取液
21．采后的葡萄在运输、贮藏等过程中，易受黑曲霉感染而腐烂引起“黑粉病”，食用价
值下降。为解决这一问题，研究人员从葡萄园土壤中分离、纯化和筛选出对黑曲霉有较强
抑制作用的拮抗细菌，具体流程如图。
(1)黑曲霉与拮抗细菌都具有的结构或物质是_________。
①质膜 ②核膜 ③核酸 ④核糖体 ⑤线粒体
(2)步骤Ⅰ采用的接种方法是_________，采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是
_________。
(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_________
（填“消
毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和_________；静止空气中的细菌可用
紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能损伤它的_________结构。
(4)下列关于步骤Ⅳ的说法正确的有_________。
A．桔抗细菌与黑曲霉竞争营养与生存空间
B．桔抗细菌可能产生了某种物质抑制黑曲霉的生长繁殖
C．黑曲霉可能产生了某种抗生素抑制描抗细菌的生长繁殖
D．桔抗细菌对黑曲霉抑制作用越大，则其周围的透明圈越大
(5)为进一步研究抽抗细菌对葡萄中黑曲霉的抑制效果，研究人员进行了图实验，其中施加
的处理①是_________、②是_________。
22．从远古到现代，从传统发酵到分子生物学实验，生物技术一直与我们的生活息息相关。
回答下列问题。(1)微生物培养技术是最基本、最核心的生物技术。在实验室培养微生物，一方面需要为培
养的微生物提供合适的______________________(答出2点即可)，另一方面需要确保无处
不在的其他微生物不会对实验造成干扰。
(2)在生产上，人们使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。
①由霉菌发酵生产的果胶酶是食品加工业中使用量最大的酶制剂之一，被广泛地应用于果
汁加工业。培养霉菌可以用查氏培养基，该培养基一般含有___________________ (答出 2
种即可)、氮源和碳源，碳源进入细胞后，可参与_______________(答出 2种即可)、蛋白
质和核酸等有机物的合成。
②果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
在果汁的工业生产中，分离果胶酶的方法有__________________(答出 2种即可)。
③果汁中可能含有大肠杆菌，果汁中大肠杆菌的数量可以通过滤膜法来测定，具体做法是
______________________，根据培养基上的菌落数目，计算出果汁中大肠杆菌的数量。
(3)植物芳香油的提取方法有蒸馏、压榨和萃取等，具体采用哪种方法要根据
_____________________来决定。胡萝卜素易溶于有机溶剂，提取胡萝卜素可以采用有机溶
剂萃取的方法，萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有________________ (答出3 点即可)的特
点。此外，还需要考虑萃取效率、对人的毒性、是否易燃、有机溶剂是否能从产品中完全
除去、会不会影响产品质量等问题。
23．原核生物繁殖快、多为单细胞，且遗传物质相对较少，因此早期的基因工程操作都用
原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。目前市场上供应的降血糖药物多
为重组人胰岛素，即应用基因工程技术生产的、与内源激素结构和生物活性相同的胰岛素。
用于生产重组人胰岛素的表达系统主要有大肠杆菌和酵母菌，这两个系统各有利弊，大肠
杆菌系统表达效率高，但后处理较难；酵母系统表达量虽然低，但对表达产物的处理较简
便。下图为某研究小组设计的酵母菌培养流程，回答下列有关问题：
(1)实验中对所用实验物品、培养基进行灭菌处理的目的是____________________，除上述
灭菌处理外，为达到相同的目的，操作时还要注意________________________（至少回答
1点）。
(2)用大肠杆菌来生产重组人胰岛素，为何后处理比较难？____________________________。(3)进行酵母菌计数时，不采用平板划线法接种的原因是______________________。对于频
繁使用的菌种，常采用临时保藏的方法，但该方法保存时间不长，原因是
____________________。
(4)虎红培养基是培养、分离和计数酵母菌的常用培养基。在该培养基平板上，酵母菌多数
为圆形凸起、边缘整齐、表面光滑湿润、不透明乳白色或粉红色的菌落，少数菌落表面粗
糙或皱褶、周边呈细分枝状，因此该培养基属于____________________（填“选择培养
基”或“鉴别培养基”）。观察发现，在培养基内部也分布有酵母菌菌落，分析内部出现
菌落的原因为____________________________。
24．测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，
滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红
美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：
(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它
微生物干扰。与过滤有关的操作都要在___________________旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的_______________
操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于_______________培养基，制备培养基时需
要采用_______________法灭菌。
(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10ml待测水样加
入到90ml无菌水中，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为
124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为
___________________个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了
两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要
区别是___________________。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量蓝细菌的数目来
研究水华，培养基配方中则必需添加___________________（水、无机盐、碳源、氮源）。
