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第 50 讲 微生物的培养技术及应用
1. ________________，__________________________是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。
在实验室培养微生物，一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；另一方面要确保其他微生
物无法混入，并将需要的微生物分离出来。
2.培养基
（1）培养基的概念：人们按照微生物_____________________，配制出_______________________________。
（2）培养基的用途：用以________、________、________、________微生物或________________________。
（3）培养基的种类：
①按物理性质划分
Ⅰ________培养基：常用于工业生产、微生物的扩大培养；
Ⅱ________培养基：常用于微生物的分离与鉴定，活菌计数，保藏菌种，配制时需加入______________。
②按化学成分划分
Ⅰ________培养基：（成分明确）将所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。
Ⅱ________培养基：（成分不明确）如牛肉膏蛋白胨培养基。
③按用途划分
Ⅰ________培养基：___________________________________________________________________________。
如，为了筛选出能分解尿素的细菌，可以配制以__________为唯一______源的培养基。
为了筛选出能分解纤维素的微生物，可以配制以__________为唯一______源的培养基。
为了筛选出自养微生物，可以配制不含______源的培养基。
为了筛选出固氮微生物，可以配制不含______源的培养基。
在培养基中加入高浓度的NaCl，可以筛选________微生物。
在培养基中加入青霉素（只能杀死细菌），可以筛选____________菌
在使用选择培养基时，一般还需要设置两种对照：
一是未接种的相同的培养基，其作用是：________________________________________；
二是接种相同菌液的含完全营养的培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基），其作用是：__________________
Ⅱ________培养基。在培养基中加入特殊化学物质或指示剂，使目的菌的菌落呈现特定颜色或菌落周围出
现圈（透明圈、有颜色圈），从而在多种杂菌中鉴别出目的菌的培养基。加入的物质不会影响微生物的
生长。
如，在以尿素为唯一氮源的培养基中同时加入__________指示剂，培养某种细菌后，如果尿素被分解，
PH将________，指示剂将变_________。
在鉴定纤维素分解菌的培养基中加入_________染料，当培养基中的纤维素被分解后，会出现以纤维
素分解菌为中心的________，其越大，说明___________________________；（4）虽然各种培养基的配方不同，但一般都含有_______、_______、_______和_______等营养物质。
在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对_____、_____________以及
______的需求。例如，在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；在培养霉菌时，一般需要将培养
基调至_______；在培养细菌时，一般需要将培养基调至__________；在培养厌氧微生物时，需要提供
_____的条件。
（5）牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
培养基组分 提供的主要营养
牛肉膏
蛋白胨
NaCl 无机盐
HO 水
2
3.无菌技术
（1）获得纯净的微生物培养物的关键____________________________。
（2）无菌技术应围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括________和________。
消毒 灭菌
概念 使用____________的物理、化学或生物等方 使用____________的理化方法杀死物体内外
法杀死物体表面或内部__________微生物， __________ 微 生 物 ， 包 括 _______ 和
不包括_______和________ ________
常用 ________ 消 毒 法 、 ________ 消 毒 法 、 _________灭菌法、_________灭菌法、
方法 ________
_________灭菌法（高压蒸汽灭菌）
消毒法（如酒精、氯气）、紫外线消毒法等
适用 操作空间、液体、双手等 接种环、接种针一般用________灭菌、玻璃
对象 器皿一般用________灭菌、培养基只能用
__________灭菌
（3）巴氏消毒法的优点是：_______________________________________________________________。
（4）做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。为了避免周围环境中微
生物的污染，接下来的许多操作都应在_____________上并在___________________进行。
4. 微生物的纯培养
（1）培养物：_______________________________________________________________________________。
（2）纯培养物：_______________________________________________________________________________。
（3）纯培养：_______________________________________________________________________________。
（4）菌落：_______________________________________________________________________________。
（5）微生物的纯培养包括____________、_________、_________、_________和_________等步骤。
5.酵母菌的纯培养
（1）制备培养基第一步：配制培养基
第二步：灭菌（培养基只能用_________灭菌；培养基必须 先调 PH 再灭菌 ）
第三步：倒平板（待培养基冷却至______℃左右时，在____________________倒平板；等待培养基冷却凝固
后 ， 将 培 养 皿 倒 过 来 放 置 ， 目 的 是
_____________________________________________________________）
（2）接种和分离酵母菌
接种方法一：平板划线法
①平板划线法的原理：通过_________在固体培养基表面___________的操作，将聚集的菌种逐步_________到
培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到________。
②用途：用于对微生物的纯化、鉴定和分离，但是不能用于微生物的________。
③操作步骤
Ⅰ.在操作的第一步灼烧接种环
（是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基。）
Ⅱ.每次划线之前都要灼烧接种环
（是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划
线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种数目逐渐减少，以便得到菌落。）
Ⅲ.划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环
（能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。）
Ⅳ.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线
（以避免接种环温度太高，杀死菌种）
Ⅴ.在做第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的末端开始划线
（划线后，线条末端的细菌数目比起始处要少，每次从上一次的末端开始，能使细菌的数目随划线次数的
增加而逐渐减少，最终得到单个细菌繁殖而来的菌落。）
接种方法二：稀释涂布平板法
①稀释涂布平板法的原理：当______________________时，培养基表面生长的一个________，来源于样品稀
释液中的一个___________。通过统计平板上的_________，就能推测出样品中大约含有多少__________。
②用途：用于对微生物的纯化、鉴定和分离，也常用来统计样品中_______的数目。
③计数原则：为了保证结果准确，一般选择菌落数为_____________的平板进行计数。在同一稀释度下，应至
少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。
④ 误 差 分 析 ： 统 计 的 菌 落 数 往 往 比 活 菌 的 实 际 数 目 ________ ， 这 是 因 为
__________________________________
__________________________________________________________________________________
。
因此，统计结果一般用________数而不是用_________数来表示。
⑤操作步骤
Ⅰ.系列稀释操作：该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释程度的
增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。
Ⅱ.涂布平板操作步骤：
（3）培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个__________的平板_________，放入28 ℃左
右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24-48 h。
6.微生物的数量测定方法
（1）稀释涂布平板法——统计出的是样品中_____菌的数目。
（2）显微镜直接计数法——统计的结果一般是____________________________。
显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，但是通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
7.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）实验原理：
①绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成__________的微生物才能分解尿素。
②利用__________________________的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
（2）实验设计
Ⅰ.土壤取样
细菌适宜在酸碱度接近______性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表 3-8cm的土壤层。因此，取
样时一般要____________。取土样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要_________。
Ⅱ.样品的稀释
Ⅲ.微生物的培养与观察
a.不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d。
b.每隔24 h 统计一次菌落数目，选取____________________的记录作为结果。
c.一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。
菌落特征包括菌落的__________、__________、_________等方面。
8.__________________________是发酵工程的重要基础，它通过____________来实现。进行纯培养时，人们需
要按照微生物对营养物质的不同需求配制培养基；还需要____________，无菌技术围绕这一点展开，主要包
括消毒和灭菌。
9.获得微生物纯培养物的常用方法有____________和____________。有时，还需要借助____________才能有目
的地分离某种微生物。
