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第 34 讲 微生物的培养与应用
最新考纲 全国卷考情
2018·全国卷Ⅰ(37)、2018·全国卷
1.微生物的分离和培养
Ⅱ(37)、
2.培养基对微生物的选择作用
2018·全国卷Ⅲ(37)、2017·全国卷
3.某种微生物数量的测定
Ⅰ(37)、
4.微生物在其他方面的应用
2016·全国卷Ⅰ(39)、2016·全国卷Ⅲ(39)
考点一 微生物的实验室培养
INCLUDEPICTURE "../ 自 主 梳 理 .tif" \* MERGEFORMAT
1.培养基
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基
质。
(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长
对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。
(3)种类
①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。
③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。
2.无菌技术
(1)含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
(2)常用方法3.大肠杆菌的纯化培养
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
→→→→
(2)纯化大肠杆菌的方法
①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌
落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。
③常用的微生物接种方法有两种
a.平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌
种逐步稀释分散到培养基的表面。如图所示：
b.稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分
别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
(3)菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
点悟：(1)用稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因
为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法
由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。
(2)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次
划线的末端处的菌种最纯。
INCLUDEPICTURE "../提升探究.tif" \* MERGEFORMAT
下图中图1为“倒平板”相关操作，图2为微生物接种方法。请思考：(1)请用文字和箭头写出图1中正确的倒平板操作流程。
提示 C→B→A→D
(2)图示B为何需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为何需进行D操作？
提示 B操作是通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。D操作是平板冷凝
后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可
以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成
污染。
(3)图2中E、F依次利用何种方法进行接种？其接种工具依次是什么？其接种后
效果图解应如下图中a还是b？
提示 平板划线法 稀释涂布平板法 接种环 涂布器 E—a、F—b
INCLUDEPICTURE "../ 对 接 高 考 .tif" \* MERGEFORMAT
INCLUDEPICTURE "../命题角度.TIF" \* MERGEFORMAT 微
生物实验室培养及无菌操作技术
1.(2018·全国卷Ⅱ，37)[生物——选修1：生物技术实践]
在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问
题：
(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具 (填“可以”或“不可以”)
放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种
方法的优点是_____________________________________________________________________________________________________________________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能 。在照
射前，适量喷洒 ，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过 (填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)
消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相
应温度，最可能的原因是 。
解析 (1)在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质
的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)巴氏消毒法或高温瞬时消
毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较
少。(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。在利用
紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果。(4)自来
水通常采用氯气消毒。(5)采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达
到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。
答案 (1)可以 (2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少 (3)破坏DNA结
构 消毒液 (4)氯气 (5)未将锅内冷空气排尽
2.(2019·东北师大附中调研)大肠杆菌是遗传学和微生物学中经典的模式生物。科
研人员要对大肠杆菌进行研究，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学知识，回答下列
问题：
(1)纯化大肠杆菌首先需要制备 培养基。在大肠杆菌培养过程中，除考虑
营养条件外，还要考虑 、温度等条件。
(2)可以估算出样品中大肠杆菌密度的接种培养方法是 ，估算值一般比实
际值偏 (填“大”或“小”)。
(3)滤膜法可计数水样中的大肠杆菌。将过滤过待测水样的滤膜紧贴在培养基上，
这属于微生物培养中 操作。根据培养基的物理状态来分，该培养基属于
培养基。
(4)如图是大肠杆菌的纯化培养的一种方法，1→2→3→4→5表示操作顺序，培养
后可观察到所需菌落的区域是 ，接种结束后将培养皿 放入恒温
箱中培养。解析 (1)纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基。大肠杆菌的培养
过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)接种大肠
杆菌最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，其中可以估算出样品中大肠杆菌
密度的是稀释涂布平板法。由于两个或两个以上细胞聚集在一起，观察到的往往
是一个菌落，故估计数值一般偏小。(3)过滤过待测水样的滤膜紧贴在培养基上，是
将样品中的大肠杆菌接种到培养基上，固体培养基适于计数。(4)图中5区域就可
得到所需要的菌落。接种结束后要将平板倒置放入恒温箱中培养。
答案 (1)牛肉膏蛋白胨固体 渗透压(或酸碱度)
(2)稀释涂布平板法 小 (3)接种 固体 (4)5 倒置
INCLUDEPICTURE "../归纳提升.tif" \* MERGEFORMAT
1.无菌技术
条件 结果 常用方法 应用范围
煮沸消毒法 日常用品
巴氏消毒法 不耐高温的液体
仅杀死物体
较为温和的物
表面或内部
消毒 理或化
的部分微
学方法
生物 化学药剂消 用酒精擦拭双手，
毒法 用氯气消毒水源
灼烧灭菌法 接种工具
杀死物体内
玻璃器皿、金属用
强烈理化 外所有的微 干热灭菌法
灭菌 具
因素 生物，包括
高压蒸汽灭
芽孢和孢子 培养基及容器
菌法
2.两种纯化细菌的方法的比较
比较项目 平板划线法 稀释涂布平板法
关键操作 接种环在固体平板培养基表 ①一系列的梯度稀释面连续划线
②涂布平板法操作
每次划线前后均需灼烧接种 稀释度要足够高，为确保实验
注意事项
环 成功可以增加稀释度的范围
在具有显著菌落特征的区域 从适宜稀释度的平板上的菌
菌体获取
的菌落中挑取菌体 落中挑取菌体
可以根据菌落的特点获得某 既可以获得单细胞菌落，又能
优点
种微生物的单细胞菌落 对微生物进行计数
缺点 不能对微生物计数 操作复杂，需要涂布多个平板
考点二 微生物的筛选和计数
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1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)原理与流程
(2)统计菌落数目时，培养基表面生长的1个菌落，来源于样品稀释液中1 个活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30 ～ 300 的平板进行计数。
(3)从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是(平均菌落数C÷涂
布的稀释液体积V)×稀释倍数M
点悟：利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。
(4)实验结果分析与评价2.分解纤维素的微生物的分离
(1)纤维素酶及纤维素分解菌筛选原理、方法
(2)实验流程
(3)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较
分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。
①选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，
而其他绝大多数微生物不能正常生长。
②鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。
③刚果红染色法应用于鉴别(选择、鉴别)培养基。
3.菌株筛选原理的比较
土壤中分解尿素的细菌 分解纤维素的微生物
①选择培养基的成分：尿素作为唯一的 ①选择培养基的成分：纤维素作为唯一氮源 的碳源②鉴定方法：刚果红染色法，即
②鉴定方法：在培养基中加入酚红指示 刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤
剂，若pH升高，指示剂变红，说明细菌 维素被分解后，培养基出现以纤维素分
能分解尿素 解菌为中心的透明圈
INCLUDEPICTURE "../ 对 接 高 考 .tif" \* MERGEFORMAT
1.(2018·全国卷Ⅰ，37)[生物——选修1：生物技术实践]
将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液
中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。
回答下列问题：
(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制 的生长
加入了链霉素的培养基属于 培养基。
(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型
除氮源外还有 (答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分
子有 (答出两点即可)。
(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可
通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是 ，该方法
能筛选出产生淀粉酶微生物的原理是_____________________________
__________________________________________________________________。
(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一
稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同
学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为
这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_______________
___________________________________________________________________。
解析 (1)在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种
类微生物生长的培养基，称做选择培养基。若M培养基是用于真菌的筛选，则应
加入链霉素以抑制细菌的生长，其属于选择培养基。(2)马铃薯浸出液中含有淀粉、
蛋白质、脂质、无机盐、水等多种物质，因此，除氮源外其中还有微生物生长所需要
的碳源、无机盐等营养要素。进入细胞的氮源可参与合成蛋白质、核酸(DNA、
RNA)等含氮的生物大分子。(3)加入显色剂碘液后，淀粉遇碘变蓝，而淀粉的水解产物则不发生这种反应。若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养
土壤中能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解，菌落周围就会出现透明圈，这样，我
们就可以通过是否产生透明圈来筛选能产生淀粉酶的微生物了。(4)乙同学的结果
中，1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，
结果的重复性太差，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。
答案 (1)细菌 选择 (2)碳源、无机盐 蛋白质、核酸 (3)碘液 淀粉遇碘液显
蓝色，产生淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈 (4)乙同学的结果中，1个
平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差
2.(2019·山东湖北部分重点中学联考)从土壤中分离尿素分解菌和纤维素分解菌，
具有下列类似的操作过程：
→→→→
→→→→
(1)在过程④的选择培养基是 培养基，过程⑧的选择培养基是 培
养基。(填“固体”或“液体”)。④的具体措施是_________________________；
⑧的选择措施是______________________________________________________。
(2)在过程③样品梯度稀释后，一般只将稀释度为104～106分别接种到3个平板培
养基上。接种的常用方法为 ，
(3)过程⑩采用 的鉴别方法较简单。周围出现透明圈但不能100%确定
为纤维素分解菌的菌落，原因是： ________________________________________
解析 (1)将微生物接种在固体培养基上培养，才能形成菌落，可见，过程④的选择
培养基是固体培养基。进行梯度稀释并接种前要进行过程⑧所示的选择培养，因
此过程⑧的选择培养基是液体培养基。④选择培养的目的是筛选尿素分解菌，所
以具体的措施是应以尿素为唯一氮源；⑧选择培养的目的是筛选纤维素分解菌，
所以⑧的选择措施是以纤维素为唯一碳源。(2)常采用稀释涂布平板法(或平板划
线法)法，将稀释度为104～106倍的菌液分别接种到3个平板培养基上。(3)刚果红
可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜
色反应。当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红—纤维素复合物就无法形成，培养基
中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。可见，过程⑩采用倒平板时加入刚果
红染液的鉴别方法较简单。由于不分解纤维素(或分解刚果红或淀粉)的微生物菌
落也可能出现透明圈，所以周围出现透明圈的菌落，不能100%确定为纤维素分解
菌。
答案 (1)固体 液体 以尿素为唯一氮源 以纤维素为主要碳源 (2)稀释涂布
平板法(或平板划线法) (3)倒平板时加入刚果红染液 不分解纤维素(或分解刚果红或淀粉)的微生物菌落也可能出现透明圈
INCLUDEPICTURE "../题后归纳.tif" \* MERGEFORMAT
选择培养基与鉴别培养基的比较
种类 制备方法 原理 用途 举例
依据某些微生 从众多微生物
物对某些物质 中“分离”所 加入青霉素分
培养基中加入
选择培养基 或环境条件的 需的微生物， 离得到酵母菌
某些化学物质
嗜好、抗性而 淘汰不需要的 和霉菌
设计 微生物
依据微生物产
生的某种代谢
产物与培养基 “鉴别”不同
培养基中加入 伊红美蓝培
中的特定试剂 种类的微生物
鉴别培养基 某种指示剂或 养基可以鉴别
或化学药品反 (注：未淘汰其
化学药品 大肠杆菌
应，产生明显 他微生物)
的特征变化而
设计
澄清易混易错·强化科学思维
[易错易混]
易错点1 “生长因子”是否为所有微生物所必需？其是否在所有培养基中均需
加入？
点拨 碳源、氮源、水分、无机盐、生长因子是微生物生长必需的五大营养成分，但
大多数培养基中都含碳源、氮源、水分、无机盐四类物质，可能不需额外添加“生
长因子(如维生素)”，这是因为许多微生物可自行合成这些生长因子，而对那些合
成能力有限或不能合成生长因子的微生物(如乳酸菌)，则需在培养基中添加诸如
维生素等生长因子。
易错点2 进行微生物分离或计数时如何设计“三组”(两种对照组与重复组)？
其作用是什么？
点拨 (1)两种对照组作用比较
①判断培养基的制备是否合格即“是否有杂菌污染”，需将“未接种”的培养基
同时进行培养。(此培养基若无菌落生长则合格)
②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种
后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。(若选择培养基上菌落种类远少于对照组，则其可具“筛选”作用)
(2)重复组的设置及作用
为排除“偶然因素”对实验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置 3个平板作重复
组，选择菌落数均在30～300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计
数公式予以计算菌落数。
易错点3 进行平板划线时，划线前、划线结束及中间各区划线时是否均需灼烧接
种环？其目的是否相同？
点拨 平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段均需灼烧接种环但其目的有所差异。
①第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。
②每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接
来源于上次划线的末端。
③划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。
易错点4 不明确“自养”与“异养”型微生物其培养基成分的显著差异
点拨 (1)自养型微生物所需的主要是营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的
CO ，氮源可由含氮无机盐提供。
2
(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，
氮源也主要是由含氮有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。
[规范答题]
甲醛是一种来源广泛的挥发性有机污染物，具有强烈的致癌和致畸作用，利用微
生物降解甲醛来治理甲醛污染，具有高效、环保、无二次污染等优点。如图甲为采
集活性污泥作为优良菌源，通过筛选分离出能以甲醛为唯一碳源的高效降解菌的
实验过程。请分析回答下列问题：
(1)上述实验材料中，不需要进行灭菌处理的是 ，培养基灭菌的常用方法
为 。该实验③过程所用的选择培养基只能以甲醛作为唯一碳源，其原因
是_________________________________________________________________。
(2)应如何确认添加甲醛的培养基是否起到了筛选作用？ _______________________________________________________________________________________。
(3)由③→④的分离活性污泥中细菌的接种方法(如图乙)为 法，接种时，对
接种环应进行 ，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，
这样做的目的是_________________________________________________。
(4)为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，进行了相应实验。当甲醛的
初始浓度小于1 200 mg/L时，菌株可以完全降解甲醛；
当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，
甚至失去降解能力，其原因可能是 。为了使该实
验所得结果准确可靠，还应该设置 的对照实验，以排除甲醛自然挥发对
实验结果的干扰。
(5)纯化菌株时，通常使用的划线工具是 。划线的某个平板培养后，第一划
线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，
其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有 。
答卷采样 错因分析
答题不规范，记忆不准确。正确答案：高压蒸汽灭菌。
混淆两种对照组用途
正确答案：制备一个接种的牛肉膏蛋白胨培养基同时培
养，观察这两种培养基上的菌落数目
概念理解不透，混淆“消毒”与“灭菌”。
正确答案：灼烧灭菌
审题缺陷，解答失误：看到“对照实验”即盲目作答，未看
到问题后面的“以排除甲醛自然挥发对实验结果的干扰”。
正确答案：不接种甲醛降解菌探索高考命题的奥秘(十)
[教材原型]
1.(人教版选修一P “内文第三自然段”)实验室中微生物的筛选，人为提供有利
21
于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物
生长的培养基，称做选择培养基(selective media)。
[转换视角]
转换视角1
1.[2018·全国卷Ⅰ，37(1)]将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯
浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培
养基。
回答下列问题：
M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制 的生长，
加入了链霉素的培养基属于 培养基。
答案 细菌 选择
2.(人教版选修一P “内文第二自然段”)刚果红(Congo Red，简称CR)是一种染
28
料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维
二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚
果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果
红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明
圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
转换视角2
2.[2018·全国卷Ⅰ，37(3)]若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，
平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂
是 ，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是______________________
___________________________________________________________________。
答案 碘液 淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈
转换视角3
3.[2014·全国卷Ⅰ，39(2)(3)](2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与
纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培
养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、
乙两种培养基(成分见下表)：
酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR溶液 水
培养
＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
基甲
培养
＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
基乙
注：“＋”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基甲 (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解
菌，原因是 ；培养基乙 (填“能”或“不能”)用于
分离和鉴别纤维素分解菌，原因是___________________________________。
答案 (2)红 透明圈
(3)不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素，不会形
成CR—纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
(时间：35分钟)
1.(2019·山东泰安模拟)洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋
生微生物的机会就越大。研究人员利用洗衣机内桶背面的残留物进行了相关实验。
请回答：
(1)要制备固体培养基培养残留物中的微生物，培养基中一般应含有 。在
倒平板操作后，将平板倒置，这样做的目的是_____________________________
_____________________________________________________________________
。
(2)以下各项中，需要消毒的是 ，需要灭菌的是 。
①培养基与培养皿；②玻棒、试管，烧瓶和吸管；③实验操作者的双手。
(3)为了检测残留物中含有微生物的情况，要将残留物制成水样稀释，然后将稀释
水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为
。 用 该 方 法 统 计 菌 落 数 时 是 否 需 要 对 照 组 ？ 。 为 什 么 ？
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________。
答案 (1)水，碳源，氮源和无机盐 防止培养皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成
污染，还可使培养皿表面的水分更好的挥发
(2)③ ①②(3)稀释涂布平板法 需要 因为需要判断培养基是否被杂菌污染
2.(2019·四川雅安三诊)微生物的应用范围相当广泛，但优良菌种的选育是基础和
关键，是显著改善和提高产品种类、产量以及品质的先决条件。下图是菌株分离和
筛选的一般流程，据此回答问题。
→→→
(1)采样：土壤有“微生物的天然培养基”之称，在寻找目的菌株时要根据
。
(2)富集：人为控制条件使目的菌种占优势，同时 其他微生物生长，例如培
养霉菌时需将培养基的pH调至 。
(3)分离：从物理性质上看，分离需要配制 培养基，并采用 法灭菌，
分离过程可采用 接种。
(4)筛选：根据菌落____________________________________________________
_____________________________________________________________________
特征进行鉴定(至少答两点)。
解析 (1)不同的微生物对生存环境的要求不同，因此在寻找目的菌株时，要到相
应的环境中寻找。
(2)在微生物富集步骤，要人为控制条件抑制其他微生物生长，并使得目的菌种占
优势，如培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，不仅有利于霉菌的生长，还可以
抑制其他杂菌的生长。
(3)分离菌种应该采用固体培养基，常用的接种方法有平板划线法或稀释涂布平板
法；接种菌种前需要利用高压蒸汽灭菌法对固体培养基进行灭菌处理。
(4)不同的菌落具有不同的特征，可以根据菌落的形状、大小、隆起程度、颜色、透
明度等特征进行鉴定。
答案 (1)微生物对生存环境的要求，到相应的环境中寻找 (2)抑制或阻止 酸性
(3)固体 高压蒸汽灭菌 平板划线法或稀释涂布平板法 (4)形状、大小、隆起程
度、颜色、透明度
3.嗜盐菌常分布在晒盐场、盐湖、腌制品中，某生物兴趣小组对嗜盐菌进行了如下
探究和分析，请回答以下问题：
(1)获得嗜盐菌的第一步是从合适的环境中采集菌样，然后按一定的方法分离、纯
化。培养嗜盐菌的培养基较普通培养基中 含量高。
(2)如图是采用不同接种方法接种嗜盐菌后纯化培养的效果图，其中图 方
法不适合用于微生物的计数，出现图A结果的原因是在操作时 。在进行
计数时，最终选取菌落数在 范围内的平板进行计数，不能选用菌落数过多的平板的原因是___________________________________________________
________________________________________________________________。
(3)在实验过程中，无菌操作是非常重要的，对实验过程中使用的玻璃器皿通常使
用 法进行灭菌。
解析 (1)由题意可知，嗜盐菌可以生长在高盐的环境中，故与普通培养基相比，培
养嗜盐菌的培养基中盐含量较高。(2)获得图A所示效果的接种方法为稀释涂布平
板法，获得图B所示效果的接种方法为平板划线法，在微生物计数时应该选用稀
释涂布平板法接种。图A中菌落集中在平板的某区域，说明在操作过程中涂布不
均匀。在计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，
若菌落数过多，菌落重叠的概率大，将产生较大误差。(3)对玻璃器皿的灭菌通常使
用干热灭菌法。
答案 (1)盐(NaCl) (2)B 涂布不均匀 30～300 菌落数过多，菌落重叠的概率
大，将产生较大误差(合理即可) (3)干热灭菌
4.(2019·山西太原模拟)反刍动物如牛和山羊，具有特殊的器官—瘤胃，瘤胃中生活
着多种微生物，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能
力进行了研究，请回答：
(1)在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是 (多选)。
A.酒精灯 B.培养皿
C.显微镜 D.无菌水
E.接种环
(2)向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦
净的原因是________________________________________________________
________________________________________________________________。
(3)刚果红可与 形成红色复合物，研究人员在刚果红培养基平板上，筛选
到了几株有透明降解圈的菌落(见图1)。图中降解圈大小与纤维素酶的 有
关。图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号)。(4)纤维素酶高产菌株在－20 ℃长期保存时，菌液中常需加入一定量的 保
藏。
(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株A和B，在不同温度和pH条件下进行
发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，推测菌株 更适合用于人工瘤胃
发酵，理由是______________________________________________________
______________________________________________________________。
答案 (1)CE (2)避免培养基污染棉塞 (3)纤维素 量与活性 菌 2 (4)甘油
(5)B 发酵过程会产热和产酸，B菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高
5.(2019·石家庄重点高中摸底)牛奶富含矿物质和满足人体生长发育所需的多种氨
基酸，消化率高达98%。长期饮用牛奶有利于增强体质，但牛奶也是多种病菌的传
播载体。如图是牛奶消毒及细菌检测实验的过程。请回答下列相关问题：
(1) 培 养 基 中 的 蛋 白 胨 为 细 菌 的 生 长 提 供 的 营 养 物 质 主 要 有
(填两个)，对培养基常采用 法进行灭菌。
(2)步骤①称为 消毒法，步骤②是________________________________。
(3)步骤③的接种方法是______________________________________________。
微生物培养过程中，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿 培养。
(4)将接种后的培养基放入 中培养，36 h后取出，统计3个平板上的菌落
数分别是87、83和85。经过消毒后的牛奶中，细菌数大约是 个/mL。
解析 (1)培养基中的蛋白胨为细菌的生长提供的营养物质主要有碳源、氮源和维生素；常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(2)图中步骤①把牛奶放在80 ℃
恒温水浴锅中煮15 min，采用的是巴氏消毒法，步骤②是梯度稀释。(3)接种微生物
常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中只有稀释涂布平板法可以用于微生物计
数。微生物培养过程中，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿倒置培养。(4)
将接种后的培养基放入恒温培养箱中，培养36 h后，统计3个平板上的菌落数分
别是87、83和85，由图可知稀释倍数为103，因此，经过消毒后的牛奶中，细菌数
大约是(87＋83＋85)/3×103＝8.5×104(个/mL)。
答案 (1)碳源、氮源(和维生素) 高压蒸汽灭菌 (2)巴氏 梯度稀释 (3)稀释涂
布平板法 倒置 (4)恒温培养箱 8.5×104
6.(2019·四川广安眉山一诊)经人工诱变获得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌体自身不
能合成天冬氨酸，必须从外界环境中获取天冬氨酸才能生长繁殖。下图是科研人
员利用“影印法”筛选天冬氨酸缺陷型菌株的部分过程(注：基本培养基中不含氨
基酸，完全培养基中含所有种类的氨基酸)。回答下列问题：
(1)过程①接种的方法是 。待测培养皿中的培养基是 (答“基
本”或“完全”)培养基。
(2)过程②是将印在同一块丝绒布上的菌落，先后转印至两个不同的平板上。该过
程应该先转印到 (答“基本”或“完全”)培养基上，原因是___________
________________________________________________________________。
(3)完成②过程的转印并在28 ℃的培养箱中培养2天后，两个平板上出现的菌落
有的相同，有的不同。完全培养基上出现的菌落A和菌落B中，不可能是天冬氨酸
缺陷型菌株的是 菌落(答“A”或“B”)，原因是________________
_________________________________________________________________。
(4)为了进一步鉴定筛选到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株，科研人员又制备了
甲、乙两个平板，这两个平板中营养成分的差异是 。将待鉴定菌种接种到
两个平板中，置于适宜条件下培养一段时间后，若观察到两个平板中菌落的生长
情况是 ，则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。
解析 (1)分析图解可知，过程①导致菌落均匀分布，因此该方法为稀释涂布平板
法；两种培养基分别培养是为了筛选出氨基酸缺陷型菌株，因此与基本培养基相
比，待测培养皿中特有的成分有氨基酸，类似于完全培养基。(2)过程②应将印在丝绒布上的菌落先转印至基本培养基上，原因是防止基本培养基中混入氨基酸。(3)
比较基本培养基和完全培养基中的菌落可知，B菌落在基本培养基上能生长繁殖，
说明它能合成天冬氨酸，不可能是天冬氨酸缺陷型菌株。(4)为了进一步鉴定筛选
到的菌株确实是天冬氨酸缺陷型菌株，对照实验的两个平板中营养成分的差异是
是否含有天冬氨酸，接种后若两个平板中菌落的生长情况是含有天冬氨酸的平板
上生长有菌落，另一个平板上不能生长，则说明该菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。
答案 (1)稀释涂布平板法 完全 (2)基本 防止基本培养基中混入氨基酸
(3)B B菌落在基本培养基上能生长繁殖，说明它能合成天冬氨酸 (4)是否含有
天冬氨酸 含有天冬氨酸的平板上生长有菌落，另一个平板上不能生长
7.(2019·河南中原名校联考)回答与生物技术实践有关的问题：
(1)为了获得耐高糖、耐酸特性的酵母菌菌种，可以对野生菌种进行 。然后
在 (培养基的物理状态)培养基上进行培养。
(2)通过选择培养，人们可以分离得到目的微生物——耐高糖、耐酸特性的酵母菌，
选择培养的原则是__________________________________________________
__________________________________________________________________。
(3)在用平板划线法接种时，每次划线前都需要对接种环进行灼烧，其目的是____
________________________________________________________________。
(4)大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应
使菌落呈黑色。为检测严重污染水体中的大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样
涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为 的菌落进行计数。该方法是通
过 统 计 平 板 上 的 菌 落 数 来 推 测 样 品 中 的 活 菌 数 ， 其 原 理 是
。在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观
察是否有菌落生成，其目的是_____________
_________________________________________________________________。
答案 (1)诱变处理(或紫外线照射或射线照射) 固体
(2)人为提供有利于目的菌生长条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长
(3)杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端
(4)黑色 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释
液中的一个活菌 检测培养基制备是否合格(灭菌是否彻底)
8.为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行
如图A所示的实验。(1)步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是步骤③培养基中 。
从功能上讲，步骤③中使用的培养基属于 培养基。
(2)同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该
同学的接种方法是 出现图B结果可能的失误操作是
___________________________________________________________________
__________________________________________________________________。
(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1 mL样品稀释100
倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分
别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为 个。
(4)步骤⑤需要振荡培养，原因是_________________________________________
_________________________________________________________________。
(5)步骤⑤后取样测定石油含量的目的是__________________________________
____________________________________________________________________。
解析 (1)步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是步骤③中使用的培养
基内石油是唯一碳源。步骤③使用的培养基中只有石油一种碳源，不能降解石油
的细菌在此培养基上不能生存，这类培养基属于选择培养基。(2)根据图B平板经
培养后的菌落分布可知，该同学的接种方法是稀释涂布平板法。平板上菌落聚集
分布，出现这种结果可能的失误操作是涂布不均匀。(3)每升样品中的活菌数＝(56
＋57＋58)/3×10×100×1 000＝5.7×107(个)。(4)振荡可使菌体与培养液充分接触
并且提高培养液中(溶解)氧的含量，提高营养物质的利用率。(5)为了筛选出分解石
油能力最强的细菌，步骤⑤后取样测定石油含量，选取石油含量最低的培养基中
的菌种。
答案 (1)石油是唯一碳源 选择
(2)稀释涂布平板法 涂布不均匀
(3)5.7×107
(4)提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养
物质的利用率
(5)筛选出分解石油能力最强的细菌
