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第三章 蛋白质的分离与鉴定
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1 、 单选题
分离纯化下述活性肽：谷-组-色-丝-酪-甘-亮-精-脯-甘酰胺的有效方法之一为（ ）。
A ： 羧甲基（CM—）纤维素层析
B ： 二乙氨基乙基（DEAE—）纤维素层析
C ： 葡聚糖G-100凝胶过滤
D ： 酸性酒精沉淀
E ： 硫酸铵沉淀
正确答案： A
解析：
CM-纤维素是阳离子交换剂，在0.5mol/L NaCl溶液中pK约为3.5，分离此肽可用CM-纤维
素层析，在pH4左右上柱，这时此肽带正电荷，被吸附到柱上，以后通过提高洗脱液
的pH将此肽洗脱下来。DEAE-纤维素是阴离子交换剂，在0.5mol/L NaCI溶液中pK为9.1～
9.5，分离蛋白质或多肽时一般选用pH8左右，该肽在此时不带负电荷，不能吸附
到DEAE-纤维素层析柱上，所以一般不用此法分离。酸性乙醇和硫酸铵不能使此肽沉淀。
葡聚糖G-100凝胶分离多肽、蛋白质的相对分子质量是4000～150000。该肽相对分子质
量为1000左右，不合适。
2 、 单选题
蛋白质沉淀、变性和凝固的关系，下面叙述正确的是（ ）。
A ： 变性蛋白一定要凝固
B ： 蛋白质凝固后一定要变性
C ： 蛋白质沉淀后必然变性
D ： 变性蛋白一定沉淀
E ： 变性蛋白不一定失去活性
正确答案： B
解析：
蛋白质变性是指天然蛋白质分子受到某些物理因素或化学因素的影响时，生物活性丧失、
溶解度降低、不对称性增高以及其他理化性质发生改变的过程。蛋白质变性之后，一定
会失去活性，但不一定会凝固、沉淀。因此A项、D项、E项错误。蛋白质沉淀后不一定变性，但凝固后一定会变性。因此C项错误，B项为正确答案。
3 、 单选题
以水作展层剂，氨基酸混合物中在滤纸上移动最快的是（ ）。
A ： 丙氨酸
B ： 亮氨酸
C ： 丝氨酸
D ： 缬氨酸
正确答案： C
解析：
纸层析法又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法，其应用的原理是相似相溶原理，
是通过分裂系的在同一介质中分散速度不同来分析的。丝氨酸易溶于水，因此以水作展
层剂，氨基酸混合物中在滤纸上移动最快的是丝氨酸。
4 、 单选题
下列关于多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述，哪个是错的？（ ）
A ： 在pH12时，在电场中向阳极移动
B ： 在pH3时，在电场中向阴极移动
C ： 在pH5时，在电场中向阴极移动
D ： 在pH11时，在电场中向阴极移动
E ： 该多肽的等电点大约在pH8
正确答案： D
解析：
在pH11或12时，该肽带净的负电荷，即作为一个阴离子向阳极移动，在pH3或5时，该
肽带净的正电荷，它作为阳离子而向阴极移动。当组氨酸咪唑基完全解离出质子时，就
形成了等电形式的两性离子，此时的pH大约为8.0。
5 、 单选题
将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这一技术是
（ ）。
A ： 亲和层析
B ： 吸附层析
C ： 凝胶过滤
D ： 离子交换层析
正确答案： A解析：
生物分子间的相互作用是具有选择性的，亲和层析就是利用蛋白质分子对其配体分子具
有专一性识别能力或称生物学亲和力建立起来的一种有效的纯化方法。将抗体固定在层
析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来。
6 、 单选题
进行疏水吸附层析时，以下哪种条件比较合理？（ ）
A ： 在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱
B ： 在有机溶剂存在时上柱，高盐溶液洗脱
C ： 低盐条件下上柱，高盐溶液洗脱
D ： 高盐溶液上柱，按低盐，水和有机溶剂顺序洗脱
E ： 低盐缓冲液上柱，低盐洗脱
正确答案： D
解析：
疏水吸附层析是利用不带电荷的载体上偶联疏水基团而成的疏水吸附剂和样品的疏水基
团间的相互作用使它们吸附在一起，然后改变层析条件，减弱疏水相互作用使吸附的蛋
白质从吸附剂上解吸下来。一般在较高的离子强度（4mol/L，NaOH）下吸附蛋白质，
然后改变层析条件，降低盐浓度，减弱疏水相互作用，使蛋白质解吸下来。
7 、 单选题
SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质（ ）。
A ： 在一定pH条件下所带净电荷的不同
B ： 分子大小不同
C ： 分子极性不同
D ： 溶解度不同
E ： 以上说法都不对
正确答案： B
解析：
SDS凝胶电泳因为在蛋白质样品中加了SDS就使蛋白质解离成亚基，并使每条多肽链完全
伸展，在这过程中，多肽链结合大量的SDS，从而使蛋白质分子带有足够的负电荷，这
负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷，所以电泳过程就和凝胶过滤相似，电泳速度只
取决于蛋白质分子的大小。
8 、 单选题
若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽，在下列哪个pH条件下电泳最为合适？
（ ）
A ： pH2以下B ： pH2～4
C ： pH7～9
D ： pH10～12
E ： pH12以上
正确答案： C
解析：
因在pH7～9时，题中的三种二肽所带电荷差异最大。
9 、 多选题
下列有关相对分子质量测定的各项，哪些是正确的？（ ）
A ： 用超离心法测相对分子质量过程中，沉降系数大一倍，相对分子质量也大一倍
B ： 多糖类一般没有固定的相对分子质量
C ： 从蛋白质的氨基酸组成无法推测蛋白质的相对分子质量
D ： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得的是亚基的相对分子质量
正确答案： B，D
解析：
多糖类如糖原和淀粉等一般相对分子质量的大小变动较大。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中
因为SDS可将蛋白质解离成亚基，所以测出的是亚基的相对分子质量。用超离心法测定
相对分子质量过程中，沉降系数增大一倍，其相对分子质量并不一定增加一倍，因相对
分子质量由沉降系数、扩散系数和偏微比容三个因素决定的。蛋白质的大致相对分子质
量可由氨基酸组成推算出来，取氨基酸残基数的整数值可以求出最低相对分子质量。
10 、 多选题
能使蛋白质沉淀的试剂有（ ）。
A ： 硫酸铵
B ： 乙醇
C ： 浓盐酸
D ： 浓氢氧化钠
正确答案： A，B，C，D
解析：
硫酸铵、乙醇、浓盐酸和浓氢氧化钠都可以使蛋白质沉淀，但情况不同。用一定浓度的
硫酸铵沉淀蛋白质是盐析法中常用的一种方法，用来分离蛋白质。乙醇是常用的有机溶
剂，用来沉淀蛋白质，这也是分离蛋白质时常用的方法之一，但应用有机溶剂时一定要
注意控制在较低温度，并避免局部有机溶剂浓度过高，以防蛋白质变性。浓盐酸和浓氢
氧化钠是使蛋白质成为不溶性的变性蛋白质而沉淀。
