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第41 讲 微生物的培养技术和应用
目录
01 课标达标练
【题型一】微生物的基本培养技术
【题型二】微生物的选择培养
【题型三】微生物的分离和计数
02 能力突破练 （新情境+新角度）
03 高考溯源练 （含2025 高考真题）
题型一 微生物的基本培养技术
1．在实验室培养微生物，需要人为的为微生物提供适宜的营养和环境条件。下列关于培养基配制的说法
正确的是（ ）
A．培养基中需要碳源、氮源、水和无机盐齐全
B．培养基中必须添加琼脂
C．培养基制备中需调节pH 至酸性
D．无论哪种培养基均需要灭菌
【答案】D
【详解】A、培养固氮微生物时，培养基中可以不添加氮源，A 错误；
B、只有固体培养基才需要添加琼脂，B 错误；
C、适宜的pH 是微生物生长的必需条件，因此需要调节pH，但培养霉菌时才需将pH 调至酸性，C 错误；
D、培养基均需要灭菌，D 正确。
故选D。
2．下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是（ ）
A．马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分
B．接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧
C．平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线
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D．完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基
【答案】D
【详解】A、马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分，A 正确；
B、接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧，防止杂菌的污染，B 正确；
C、平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线，用力划得话会是培养基表面破损，影响实
验结果的观察，C 正确；
D、完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D 错误。
故选D。
3．兴趣小组对枯草芽孢杆菌进行纯培养，结果如图。下列叙述正确的是（ ）
A．实验采用稀释涂布平板法进行接种
B．接种时，顺序应为①→②→③→④
C．培养时，应将接种后的平板倒置
D．获得单菌落的理想区域是②区域
【答案】C
【详解】A、图示接种方法为平板划线法，A 错误；
B、根据图中细菌数目的多少，①中出现单菌落，所以划线顺序是④→③→②→①，B 错误；
C、接种后，应该将平板导致，防止冷凝水进入培养基，C 正确；
D、获得单菌落的理想区域是①区域 ，得到单独菌落，D 错误。
故选C。
4．为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种分解尿素的细菌，培养结果如图所示。下列叙述错误的是（
）
A．该鉴别培养基尿素是唯一的氮源
B．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
C．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
D．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
【答案】B
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【详解】A、为纯化菌种，选择出能分解尿素的微生物，应以尿素作为唯一氮源。尿素分解形成的氨会使
培养基的碱性增强，遇酚红指示剂会显示红色，故鉴别培养基中还需要添加酚红作为指示剂，A 正确；
B、倒平板时需左三圈，右三圈的轻轻晃动，以保证表面平整，而不是间歇性晃动，间歇性晃动会使水滴
滴到培养皿上，造成污染，B 错误；
C、为防止杂菌污染，接种针、接种环使用前都必须灭菌，C 正确；
D、图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，Ⅲ区出现了单菌落，故应从Ⅲ区进行挑取，D 正确。
故选B。
5．下图为微生物的实验室培养的有关操作，相关叙述错误的是（ ）
A．步骤①中，需将接种工具灼烧至变红，以杀灭杂菌
B．步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远
C．图中接种方法的目的是使菌种逐渐稀释，经培养后获得单个菌落
D．接种后应将培养皿倒置培养，培养后可以根据结果进行微生物计数
【答案】D
【详解】A、图1 步骤①中，接种前灼烧接种环至变红，目的是杀灭接种环上可能引起污染的微生物，A
正确；
B、步骤②中，将接种工具冷却时不宜距酒精灯火焰太远，防止受到杂菌污染，B 正确；
C、所示的接种方法是平板划线法，目的是使接种的菌种逐渐稀释，经培养后获得由单个细菌繁殖而来的
菌落，C 正确；
D、图示的平板划线法不能用于微生物的计数，D 错误。
故选D。
题型二 微生物的选择培养
6．下列关于利用选择培养基筛选细菌的叙述，错误的是（ ）
A．利用高盐培养基筛选耐盐菌
B．利用无氮源的培养基筛选硝化细菌
C．利用无碳源的培养基筛选光合细菌
D．利用以尿素为唯一氮源的培养基筛选能合成脲酶的细菌
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【答案】B
【详解】A、耐盐菌种能在高盐培养基上生存，因此，利用高盐培养基能筛选耐盐菌，同时抑制其他微生
物的生长，A 正确；
B、不能利用无氮源的培养基筛选硝化细菌，因为硝化细菌为化能合成细菌，需要利用氨氧化的能量合成
有机物，B 错误；
C、光合细菌能利用空气中的二氧化碳合成有机物进而把光能储存到有机物中，因此，可利用无碳源的培
养基筛选光合细菌，C 正确；
D、产脲酶细菌能利用脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源，不能产脲酶的细菌则无
法分解尿素获得氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌，D 正确。
故选B。
7．硝化细菌可用于改善水产养殖水体。研究人员利用配制的固体选择培养基从污水处理厂的污泥中筛选
出一株自养型硝化细菌。下列物质在该培养基中存在的可能性最小的是（ ）
A．NaNO2
B．Na2CO3
C．牛肉膏
D．琼脂
【答案】C
【详解】培养养化能自养型的硝化细菌的培养基中不需提供有机物，因此，牛肉膏是不会在该培养基中出
现的，而NaNO2 、Na2CO3作为无机盐会在该培养基中出现，琼脂作为凝固剂是固体培养基中一定需要的，
即C 项符合题意，C 正确。
故选C。
8．下表是某公司研发的一种大肠杆菌菌群的培养基配方，请据所学知识分析下列说法错误的是（ ）
成分
蛋白
胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
指示
剂
琼脂
含量（g）
10．0
5．0
5．0
2．0
0．2
12．0
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
A．若根据用途划分，该培养基属于鉴别培养基
B．可以用平板划线法或稀释涂布平板法对大肠杆菌进行计数
C．为防止杂菌污染，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌
D．若将上述培养基的蛋白胨改为尿素，可用来筛选土壤中的尿素分解菌
【答案】B
【详解】A、培养基中加入了指示剂，为鉴别培养基，目的在于鉴别出大肠杆菌，A 正确；
B、平板划线法不能用于计数，只能用于分离菌种，而稀释涂布平板法可以用来计数，B 错误；
C、在微生物的培养过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基进行高压蒸汽灭菌，C 正确；
D、若为了筛选出土壤中的尿素分解菌，需要以尿素作为唯一氮源，即将蛋白胨改为尿素，就可以用于筛
选土壤中的尿素分解菌，D 正确。
故选B。
9．某生物兴趣小组打算筛选能高效降解淀粉的微生物，进行如下操作：采集微生物→接种至固体培养基
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X→培养一段时间滴加碘液→挑选目的菌落鉴定并分别接种至多个液体培养基Y→培养出大量高效降解淀
粉的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A．可从厨房下水道采集微生物，体现了生物与环境相适应
B．X 培养基是以淀粉为唯一碳源的选择培养基
C．X 培养基表面可形成形态清晰的菌落，便于分离与鉴定
D．Y 培养基可用于微生物的扩大培养，但不适用于计数
【答案】D
【详解】A、厨房下水道是一个富含淀粉等有机物的环境，因此可能存在能够降解淀粉的微生物。从这样
的环境中采集微生物，正是基于生物与环境相适应的原理，即生物会根据其生存环境进化出相应的生存策
略或能力，A 正确；
B、为了筛选能高效降解淀粉的微生物，需要使用以淀粉为唯一碳源的选择培养基。这样，只有那些能够
利用淀粉作为碳源的微生物才能在这种培养基上生长，从而达到筛选的目的，B 正确；
C、固体培养基X 的凝固特性使微生物形成单菌落，菌落形态（如透明圈大小）可用于初步鉴定高效降解
菌，即加碘液后，菌落周围会出现透明圈，这样可以通过菌落特征和透明圈大小来鉴定，C 正确；
D、Y 培养基为液体培养基，可用于微生物的扩大培养，也可用于计数，如可用显微镜直接计数法进行计
数，D 错误。
故选D。
题型二 微生物的分离和计数
10．自生固氮菌是土壤中能独立进行固氮的细菌。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测
定的研究，部分实验流程如下图。已知步骤④获得的三个平板的菌落数分别为90、95、100，对照组平板
为0。相关叙述正确的是（ ）
A．步骤②振荡20min 的目的是扩大菌种数量，属于选择培养
B．步骤⑤使用接种环划线接种，使用前需要灼烧灭菌
C．1g 土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×106个
D．所用培养基应加入碳源、氮源、水、无机盐和琼脂
【答案】C
【详解】A、步骤②需充分振荡的主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，A 错误；
B、由图观察可知，步骤⑤平板中的菌落分布均匀，故所用的接种工具是涂布器，接种方法是稀释涂布平
板法，B 错误；
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C、菌落统计时应选择30-300 之间的进行计数，故1g 土壤中平均自生固氮菌数约为（90＋95＋100）/
3÷0.1×104=9.5×106个，C 正确；
D、本实验需要分离自生固氮菌，自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，故所用培养基中不能加入
氮源，D 错误。
故选C。
11．（2025·福建·二模）伊红-亚甲蓝琼脂培养基(EMB)可用于检测自来水中大肠杆菌的数量。生长在此培
养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并带有金属光泽。操作时先用滤膜过滤待测水样，再将滤膜转移到EMB
上培养，最终统计菌落数目。下列叙述正确的是（ ）
A．以藻类制成的琼脂可为微生物提供碳源、氮源等营养物质
B．伊红-亚甲蓝琼脂培养基属于选择培养基，可用于分离微生物
C．用100ml 样液培养出各种颜色的菌落5 个，则1L 样液中大肠杆菌数为50 个
D．该方法统计得到的大肠杆菌菌落数目可能小于待测水样的大肠杆菌数目
【答案】D
【详解】A、琼脂作为凝固剂，不能为微生物提供碳源、氮源等营养物质，A 错误；
B、伊红亚甲蓝培养基能够鉴别大肠杆菌，属于鉴别培养基，B 错误；
C、只有深紫色才是大肠杆菌，用100ml 样液培养出各种颜色的菌落5 个，则1L 样液中对应的细菌数为
1L÷100mL×5=50 个，大肠杆菌数小于50 个，C 错误；
D、该方法是利用菌落数来反映细菌数，可能多个细菌形成一个菌落导致统计数据偏小，D 正确。
故选D。
12．下列关于微生物计数的叙述，错误的是（ ）
A．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计
结果
B．采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际活菌数，采用细菌计数板统计的结果往往多于实
际活菌数
C．为了保证结果准确，应该设置空白对照，统计的结果应该是实验组统计的平均值减去对照组统计
数量
D．当稀释度足够高时，一个活菌往往会形成一个菌落，为保证计数的准确，应该在菌落数量稳定时
计数
【答案】C
【详解】A、设计实验时，一般要至少用三个平板做重复实验，才能增强实验的说服力和准确性；分析结
果时，一定要考虑所设置的重复实验的结果是否一致，差别不大时取平均值作为统计结果，A 正确；
B、稀释涂布平板法形成的菌落有可能是由多个细菌形成的，所以往往少于实际的活菌数；采用细菌计数
板计数，不能区分活菌和死菌，统计的结果往往偏大，B 正确；
C、若空白对照组含有菌落，则说明灭菌不彻底，故培养基不能用作微生物培养，也不能用作微生物计数，
C 错误；
D、当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，为防止因
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培养时间不足而遗漏菌落数目，应在菌落数量稳定时计数，D 正确。
故选C。
13．为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度，某研究小组进行了相关药敏实验，图1 为部分实验器材。
将含有相同浓度的抗生素I～IV 四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的平板上，实验结果如图2。下
列相关叙述错误的是（ ）
A．为获得长满测试菌的平板，需要使用图1 中器材①②③
B．图2 中I 形成的抑菌圈较小，可能是病原微生物对药物敏感度最低
C．图1 中的③④器具可采用干热灭菌法灭菌
D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果
【答案】A
【详解】A、为获得长满测试菌的琼脂平板，需要采用稀释涂布平板法，该方法需要使用①酒精灯、③培
养基和④涂布器，A 错误；
B、图2 中Ⅱ处抑菌圈最小，说明测试菌对该药物敏感度最低，测试菌生长繁殖能力仍较强，B 正确；
C、图1 中的③④器具可采用干热灭菌法灭菌，C 正确；
D、不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果中抑菌圈的大小，D 正确。
故选A。
14．合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了 3 款消毒液 A、B、C 杀灭细菌的效果，
结果如图所示。回答下列问题。
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大
于后者，其原因是 。
(2)该同学从 100 mL 细菌原液中取 1 mL 加入无菌水中得到 10 mL 稀释菌液，再从稀释菌液中取 200 μL
涂布平板，菌落计数的结果为 100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目
的是 。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。(答出两点即可)
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红 亚甲蓝培养基上生长
的菌落呈
色，并且带有金属光泽。
【答案】(1)前者微生物分散的活菌和死菌一起计数，后者存在多个活菌形成一个菌落的情况且只计数活菌
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(2)5000
(3) 杀死涂布器上可能存在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染 防止温度过高杀死菌
种
(4) A A 消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高
(5)深紫
【详解】（1）显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计数。菌落计数法计数只计活菌数，还可能存在多个
活菌形成一个菌落的情况，故前者的数量多于后者。
（2）从100mL 细菌原液中取1mL 加入无菌水中得到10mL 稀释菌液，即稀释了10 倍，1 mL=1000μL，故
1mL 细菌原液中细菌浓度=（菌落数÷菌液体积）×稀释倍数=（100÷0.2）×10 个=5000 个。
（3） 菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是杀死涂布器上可能存
在的微生物，防止涂布器上可能存在的微生物污染，冷却的目的是防止温度过高杀死菌种。
（4）A 消毒液活菌数减少量最多，且杀菌时间较短，效率最高，因此A 消毒液杀菌效果最好。
（5）大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈深紫，并且带有金属光泽。
1．药物敏感试验旨在了解某病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素。
纸片扩散法是试验的常用方法，在纸片周围会形成透明的抑菌圈。下列叙述正确的是（ ）
A．抑菌圈越大，说明该病原微生物对该种抗生素敏感性越差
B．图1 中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落可能是该病原微生物发生了基因突变
C．进行药敏试验，需使用接种环将平板上布满测试菌
D．接种后的平板在培养时的放置应如图2 中②所示，可以防止污染
【答案】B
【详解】A、抑菌圈越大，说明该病原微生物对该种抗生素越敏感，A 错误；
B、图1 中Ⅳ的抑菌圈中出现了部分菌落可能是该病原微生物发生了基因突变，产生了耐药性，从而存活
下来，B 正确；
C、进行药敏试验，需将平板上布满测试菌，利用的接种方法是稀释涂布平板法，需使用的接种工具是涂
布器，C 错误；
D、接种后的平板在培养时需要倒置培养，即图2 中①所示，图2 中②是培养皿正置，倒置培养既能防止
培养基中水分过快蒸发，又能防止冷凝形成的水珠倒流，D 错误。
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故选B。
2．野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在
完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、
C 表示操作步骤，D、E 为菌落（原位影印指用无菌绒布将一个平板的菌落“复制”接种到另外的平板）。
下列叙述错误的是（ ）
A．图中①②③为基本培养基，④为完全培养基
B．紫外线照射的目的是提高突变率，增加突变株的数量
C．B 的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面
D．经C 过程原位影印及培养后，可从④中挑取D 进行纯化培养
【答案】A
【详解】A、野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，
只能在完全培养基上生长，根据题干信息和图形分析，③培养基中菌落减少，故③为基本培养基（氨基酸
营养缺陷），图中①②④为完全培养基，A 错误；
B、紫外线可以提高突变的频率，从而提高突变菌株的数量，B 正确；
C、B 操作是将菌液滴加到培养基表面，再用涂布器将菌液均匀的涂布在②表面，C 正确；
D、从图中可看出，D 在③基本培养基中无法生长，在④完全培养基中可生长，说明D 是氨基酸缺陷型菌
落，故经C 过程影印及培养后，可从④培养基中挑取D 菌落进行纯化培养，D 正确。
故选A。
3．科研小组用双层平板法测定某污水样本中噬菌体的数量，操作流程是：①先铺2%琼脂于培
养皿底层，形成底层琼脂培养基；②将敏感指示菌和待测污水样本混合液，加入已熔化并降温至45～48℃
的1%琼脂培养基中，迅速倾注于底层培养基上，形成上层培养基；③倒置培养一段时间后，计数噬菌斑。
双层平板如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
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A．倒平板前需对培养基和培养皿进行干热灭菌
B．可用酵母菌作为敏感指示菌对T2 噬菌体进行计数
C．上层培养基冷却至45～48℃，主要目的是防止底层培养基液化
D．上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于计数
【答案】D
【详解】A、对培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，而培养皿常用干热灭菌法，A 错误；
B、T2 噬菌体专门寄生在大肠杆菌体内，酵母菌不是T2噬菌体的宿主，不能用酵母菌作为敏感指示菌对T2
噬菌体进行计数，B 错误；
C、上层培养基冷却至45 - 48℃，主要目的是防止高温杀死敏感指示菌和噬菌体，C 错误；
D、由题注可知琼脂浓度越低越有利于噬菌体扩散，上层培养基中琼脂浓度较低，形成的噬菌斑较大便于
计数 ，D 正确。
故选D。
一、单选题
1．（2025·广西·高考真题）利用微生物分解厨余垃圾可实现资源的再利用。下列说法错误的是（ ）
A．厨余垃圾分解过程产生的热量，会影响分解效率
B．对组成复杂的厨余垃圾再分类，可提高利用效率
C．厨余垃圾中的淀粉，可作为微生物的碳源和氮源
D．含盐量高的厨余垃圾，可选用耐高盐的微生物分解
【答案】C
【详解】A、微生物分解有机物时通过呼吸作用释放热量，若温度过高可能导致酶活性下降，从而影响分
解效率，A 正确；
B、厨余垃圾成分复杂，分类后可根据不同成分选择适宜微生物或处理条件，提高分解效率，B 正确；
C、淀粉由C、H、O 组成，仅含碳元素，可为微生物提供碳源，但无法提供氮源（氮源需含N 元素），C
错误；
D、高盐环境会抑制普通微生物生长，但耐高盐微生物（如嗜盐菌）可适应此环境并分解有机物，D 正确。
故选C。
2．（2025·贵州·高考真题）金龟子绿僵菌（Ma）是一种昆虫病原真菌，可以侵染某些农林害虫。Ma 寄生
时其孢子（单细胞后代）萌发后侵入昆虫体内大量增殖并产生毒素，导致寄主僵化、死亡。下列叙述错误
的是（ ）
A．可利用Ma 开发成微生物杀虫剂
B．为分离Ma 可从研磨的僵虫组织中取样
C．稀释涂布平板法可用于分离样品中的Ma
D．接种培养Ma 时使用的器具需消毒
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【答案】D
【详解】A、金龟子绿僵菌（Ma）作为昆虫病原真菌，可通过寄生导致害虫死亡，符合微生物杀虫剂的特
点，可用于生物防治，A 正确；
B、僵化死亡的昆虫体内含有大量Ma 菌体，因此从研磨的僵虫组织取样是分离Ma 的合理方法，B 正确；
C、稀释涂布平板法可通过梯度稀释和菌落形成来分离纯化微生物，适用于分离样品中的Ma，C 正确；
D、微生物培养中，接种环等直接接触菌种的器具需严格灭菌（如灼烧灭菌），而非仅消毒，消毒无法彻
底杀灭微生物的芽孢或孢子，D 错误。
故选D。
3．（2025·四川·高考真题）微塑料由塑料废弃物风化形成，难以降解，会危害生态环境和人体健康。有人
分离到X 和Y 两种微塑料降解菌，将总菌量相同的X、Y、X+Y（X:Y=1:1）分别接种于含有等量微塑料
的蛋白胨液体培养基中，培养一段时间后测定微塑料的残留率（残留率=剩余量/添加量×100%），结果如
下图。下列叙述正确的是（ ）
A．用平板划线法能测定X 菌组中的活菌数
B．Y 菌组微塑料残留率较高，故菌浓度也高
C．混合菌种对微塑料的降解能力高于单一菌种
D．能在该培养基中生长繁殖的微生物都能降解微塑料
【答案】C
【详解】A、平板划线法主要用于微生物的分离和纯化，不能用于测定活菌数，测定活菌数常用稀释涂布
平板法，A 错误；
B、Y 菌组微塑料残留率较高，说明Y 菌对微塑料的降解能力相对较弱，而不是菌浓度高，微塑料残留率
与菌对微塑料的降解能力有关，而非直接与菌浓度相关，B 错误；
C、由图可知，X+Y 混合菌种组的微塑料残留率低于X 菌组和Y 菌组，说明混合菌种对微塑料的降解能力
高于单一菌种，C 正确；
D、该培养基中含有蛋白胨，能在该培养基中生长繁殖的微生物可能利用蛋白胨作为碳源和氮源等，但不
一定都能降解微塑料，D 错误。
故选C。
4．（2025·云南·高考真题）黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为原料，
对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合处理一段时间后，
添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是（ ）
A．小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质
B．为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌
C．糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率
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D．将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖
【答案】B
【详解】A、小麦、麸皮等原料含有蛋白质、糖类等多种营养成分，蛋白质可以为微生物提供氮源，糖类
等可以为微生物提供碳源，所以能为酒曲中微生物的生长繁殖提供碳源和氮源等营养物质，A 正确；
B、扩大制曲前对留存的酒曲不能灭菌，因为酒曲本身含有发酵所需的菌种，若灭菌会杀死这些菌种，导
致无法进行正常的发酵过程，B 错误；
C、糯米、大米蒸煮后温度较高，立即与酒曲混合，高温会使酶的空间结构改变，导致酶活性降低，从而
降低其催化效率，C 正确；
D、酒曲中含有淀粉酶等酶类，将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，淀粉酶可将糯米、大米中的淀粉分
解为葡萄糖，从而为后续酒母（含酵母菌）发酵提供底物葡萄糖，D 正确。
故选B。
5．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ）
A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数
B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照
C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸
D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
【答案】B
【详解】A、稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A
错误；
B、平板划线法操作后需设置未接种的平板作为空白对照，以验证培养基灭菌是否彻底，B 正确；
C、醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C 错误；
D、筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D
错误。
故选B。
6．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、
鉴定。下列相关叙述正确的是（ ）
A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌
B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布
C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
【答案】B
【详解】A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A 错误；
B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B 正
确；
C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，
C 错误；
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D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保
存，D 错误。
故选B。
7．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维
素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法
正确的是（ ）
组
别
压强
纤维
素
淀粉
菌落
①
常压
-
+
-
②
常压
+
-
-
③
高压
-
+
-
④
高压
+
-
+
注： “+”表示有；“一”表示无
A．可用平板划线法对该菌计数
B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长
D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
【答案】D
【详解】A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。
用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A 错误；
B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH 值后，分装到三角瓶中，
然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养
皿中（即“倒平板”），B 错误；
C、组②为常压 + 纤维素，结果无菌落，而组④为高压 + 纤维素，结果是有菌落。 这个对比恰好说明，
在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C 错误；
D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生
长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D 正确。
故选D。
8．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素
（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（
）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH 满足实验要求
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D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
【答案】D
【详解】A、以金霉素为唯一碳源的选择培养基，仅允许能利用金霉素的微生物生长（其他无法利用金霉
素的微生物被抑制），符合选择培养基的设计原理，A 正确；
B、逐步提高金霉素浓度可模拟环境胁迫，筛选出耐受性更强的菌株（类似“驯化”过程），B 正确；
C、培养基的pH 需根据目标微生物的生长需求调整（如细菌通常中性偏碱，真菌偏酸性），是配制培养基
的基本要求，C 正确；
D、稀释涂布平板法需用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，而接种环用于平板划线法（分离单菌落）。
用接种环涂布无法保证菌液均匀，D 错误。
故选D。
9．（2024·海南·高考真题）某小组为检测1 株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时
间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（ ）
组别
培养条件
实验结果
①
基础培养基
无法生长
②
基础培养基+甲、乙、丙3 种氨基酸
正常生长
③
基础培养基+甲、乙2 种氨基酸
无法生长
④
基础培养基+甲、丙2 种氨基酸
正常生长
⑤
基础培养基+乙、丙2 种氨基酸
正常生长
A．组别①是②③④⑤的对照组
B．培养温度和时间属于无关变量
C．①②结果表明，甲、乙、丙3 种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸
D．①~⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型
【答案】D
【详解】A、由表可知：除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是
②③④⑤的对照组，A 正确；
B、由题意表中信息可知：实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和
时间均属于无关变量，B 正确；
C、由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3 种氨基酸的
基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3 种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C 正确；
D、与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常
生长，但在只添加甲、乙2 种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D 错误。
故选D。
10．（2024·江苏·高考真题）酵母菌是基因工程中常用的表达系统。下列相关叙述正确的是（ ）
A．酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌，但不能灭活真菌
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B．酵母菌是真核细胞，需放置在CO2培养箱中进行培养
C．可用稀释涂布平板法对酵母菌计数
D．该表达系统不能对合成的蛋白质进行加工和修饰
【答案】C
【详解】A、酵母菌培养液使用前要灭活所有细菌和真菌，A 错误；
B、将含有酵母菌的培养基放置在28℃恒温培养箱中进行培养，B 错误；
C、稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的个单菌
落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，
由此可知，可用稀释涂布平板法对酵母菌计数，C 正确；
D、酵母菌是真核细胞，具有高尔基体和内质网，可以对合成的蛋白质进行加工和修饰，D 错误。
故选C。
11．（2024·江苏·高考真题）某同学进行下列实验时，相关操作合理的是（ ）
A．从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌
B．观察黑藻的细胞质流动时，在高倍镜下先调粗准焦螺旋，再调细准焦螺旋
C．探究温度对酶活性的影响时，先将酶与底物混合，然后在不同温度下水浴处理
D．鉴定脂肪时，子叶临时切片先用体积分数为50%的乙醇浸泡，再用苏丹Ⅲ染液染色
【答案】A
【详解】 A 、从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰，这样可以避免菌种被污
染，A 正确；
B、在高倍镜下观察时，只能调节细准焦螺旋，B 错误；
C、探究温度对酶活性的影响时，应先将酶和底物分别在不同温度下处理，然后再混合，若先将酶与底物
混合，再在不同温度下水浴处理，会在达到设定温度前就发生反应，影响实验结果，C 错误；
D、鉴定脂肪时，子叶临时切片先用苏丹Ⅲ染液染色，然后用体积分数为50%的乙醇洗去浮色，D 错误。
故选A。
二、非选择题
12．（2025·广西·高考真题）科学家利用衣藻和大肠杆菌设计了一种共培养系统。该系统中，工程化衣藻
在光合作用时，会通过光呼吸竞争性消耗C5产生甘醇酸（光呼吸强度受CO2/O2比值影响）；工程化大肠
杆菌利用甘醇酸合成高价值生物产品。实验过程及结果见图。回答下列问题：
注：μE 为光照强度单位μmol.m-2.s-1
(1)第①阶段向培养液中通入3%CO2，目的是 。
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(2)第②阶段大肠杆菌干重下降的主要原因是 。
(3)据图分析，限制第③阶段衣藻干重增加的主要因素是 ；第④阶段衣藻和大肠杆菌的干重均增加，
原因是 。
(4)该系统对助力实现碳中和目标的优势是 。
【答案】(1)为衣藻光合作用提供原料
(2)培养系统中原有的甘醇酸耗尽，大肠杆菌缺乏碳源
(3) 光照强度 光照强度提高导致衣藻光反应增强，一方面使衣藻暗反应合成有机物增多，另一方
面CO2/O2比值下降使衣藻产生更多甘醇酸，为大肠杆菌提供更多碳源
(4)可以持续利用CO2合成高价值生物产品，经济效益高
【详解】（1）第①阶段向培养液中通入3%CO2，用于单独培养衣藻目的是为衣藻光合作用提供原料。
（2）该培养系统中衣藻可以光合自养，而大肠杆菌只能依赖衣藻产生的甘醇酸作为唯一碳源，第②阶段
大肠杆菌干重下降的主要原因是培养系统中原有的甘醇酸耗尽，大肠杆菌缺乏碳源。
（3）对比第③阶段和第④阶段可知，限制第③阶段衣藻干重增加的主要因素是光照强度，提高光照强度
即可显著加快衣藻干重增加。第④阶段提高了光照强度导致衣藻光反应增强，一方面使衣藻暗反应合成有
机物增多，另一方面CO2/O2比值下降使衣藻产生更多甘醇酸，为大肠杆菌提供更多碳源，因此两者干重均
增加。
（4）相比于其他方式，该系统对助力实现碳中和目标的优势是可以持续利用CO2合成高价值生物产品，
经济效益高。
13．（2025·云南·高考真题）我国研究人员发明了生产维生素C 的两步发酵法，流程如图甲。为了减少氧
化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，需要进行灭菌以结束第一步发酵。
在两步发酵法的基础上，我国研究人员进一步尝试用三菌混菌体系建立一步发酵法。在氧化葡糖杆菌（原
始菌MCS）中利用基因工程技术导入大肠杆菌基因ccdB，得到工程菌IR3C。MCS 和IR3C 单菌培养时，
活菌数变化曲线如图乙，MCS、IR3C 分别与普通生酮基古龙酸菌和巨大芽孢杆菌进行三菌混菌发酵时，
产物含量变化曲线如图丙。
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回答下列问题：
(1)要使基因ccdB 在IR3C 中稳定遗传、表达并发挥作用，构建的基因表达载体除启动子外，还必须有
。
(2)绘制图乙需统计活菌数，常用方法是 。当活菌达到一定数量时，基因
ccdB 编码的蛋白质开始发挥作用，推测该蛋白质的作用是 ，开始发挥作用的时间是
，判断理由是 。
(3)基于图丙，利用IR3C 三菌混菌发酵的产量 （填“高于”或“低于”）MCS 三菌混菌发酵的
产量，其原因是 。
【答案】(1)目的基因、终止子、复制原点
(2) 稀释涂布平板法 能抑制细菌增殖 15h 在15h 时，IR3C 数量下降，而MSC 数量上升
(3) 高于 IR3C 转入了ccdB 基因，阻止细胞增殖，减少氧化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，从而更
多山梨糖被用于合成维生素C。
【详解】（1）要使基因ccdB 在IR3C 中稳定遗传、表达并发挥作用，基因工程中构建的基因表达载体，
除启动子外、还要有目的基因、终止子、复制原点等。
（2）统计活菌数目常用稀释涂布平板法，从图2 看出，随着时间推移，种群数量不断增加，在15h 时，
IR3C 数量下降，而MSC 数量上升，所以推测转入的基因ccdB 编码的蛋白质诱导能抑制细菌增殖或诱导细
菌凋亡，发挥作用的时间大约在15h。
（3）从图丙看出，IR3C 三菌混菌发酵产生的2-酮-L-古龙酸含量比MSC 三菌混菌发酵产量高，因此可以
推测，IR3C 三菌混菌发酵维生素C 产量更高，可能的原因是IR3C 转入了ccdB 基因，诱导细菌死亡，减
少氧化葡糖杆菌竞争性消耗山梨糖，从而更多山梨糖被用于合成维生素C。
14．（2025·北京·高考真题）链霉菌A 能产生一种抗生素M，可用于防治植物病害，但产量很低。为提高
M 的产量，科研人员用紫外线和亚硝酸对野生型链霉菌A 的孢子悬液进行诱变处理，筛选M 产量提高的
突变体（M+株），以应用于农业生产。
(1)紫外线和亚硝酸均通过改变DNA 的 ，诱发基因突变。
(2)因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占比很低；又因基因突变的 性，M+株在全部突变体中的
占比低。要获得M+株，需进行筛选。
(3)链霉菌A 主要进行孢子繁殖。研究者对链霉菌A 发酵液进行了粗提浓缩，得到粗提液，测定粗提液对野
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生型链霉菌A 孢子萌发的影响，结果如图。
由图可知，粗提液对野生型孢子萌发有 作用。
(4)随后研究者进行筛选实验。诱变处理后，将适量孢子悬液涂布在含有不同浓度粗提液的筛选平板上，每
个浓度的筛选平板设若干个重复，28℃培养7 天。从每个浓度的筛选平板上挑取100 个单菌落，再次分别
培养后逐一测定M 产量，统计结果如下表。
组别
I
II
III
IV
V
VI
筛选平板中粗提液浓度（mL/100mL）
2
5
8
10
12
15
所取菌落中M+株占比（%）
0
13
25
65
20
3
①用图中信息，解释表中IV 组M+株占比明显高于Ⅲ组的原因 。
②表中Ⅲ组和V 组中M+株占比接近，但在筛选平板上形成的菌落有差异。下列叙述正确的有 （多
选）。
A．Ⅲ组中有野生型菌落，而V 组中没有野生型菌落
B．V 组中有M 产量未提高的突变体菌落，而III 组中没有
C．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体在V 组中被抑制
D．与Ⅲ组相比，诱变处理后的孢子悬液中更多的M+株在V 组中被抑制
综上所述，用 粗提液筛选是获得M+株的有效方法。
【答案】(1)碱基序列（或脱氧核苷酸序列）
(2)随机性、不定向
(3)抑制
(4) Ⅳ组无野生型菌落，Ш 组仍有野生型菌落 ACD 10 mL/100mL
【详解】（1）紫外线和亚硝酸均通过改变 DNA 的碱基序列（或脱氧核苷酸序列），诱发基因突变。因
为基因突变是指 DNA 分子中发生碱基对的替换、增添和缺失，而这些处理会影响 DNA 的碱基组成和排
列顺序。
（2）因基因突变频率低，孢子悬液中突变体占比很低；又因基因突变的随机性、不定向性，M＋株在全部
突变体中的占比低。要获得 M＋株，需进行筛选。基因突变具有不定向性，即一个基因可以向不同的方向
发生突变，产生一个以上的等位基因，所以即使发生了基因突变，也不一定是我们想要的 M＋株。
（3）由图可知，随着培养基中粗提液浓度的升高，野生型孢子萌发率下降，所以粗提液对野生型孢子萌
发有抑制作用。
（4）①IV 组粗提液浓度高于 Ⅲ 组，结合前面得出的粗提液对孢子萌发有抑制作用，且M＋株可能对粗
提液有更强的耐受性，所以在较高浓度的粗提液下，更多的野生型孢子萌发受抑制，而 M＋株相对更容易
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存活，导致 IV 组 M＋株占比明显高于 Ⅲ 组。
A
②、Ⅲ组粗提液浓度较低，与对野生型孢子抑制作用较弱，筛选平板上有野生型菌落，据（3）表可知，
Ⅴ组粗提液浓度较高，对野生型孢子抑制作用较强，筛选平板上没有野生型菌落，A 正确；
B、Ⅲ 组和 V 组中都可能有 M 产量未提高的突变体菌落，B 错误；
CD、与Ⅲ组相比，Ⅳ、Ⅴ组粗提液浓度较高，筛选平板上的菌落可能均为突变体，但Ⅵ组M+株显著少于
Ⅳ组，说明诱变处理后的孢子悬液中更多的突变体株在Ⅴ组中被抑制，CD 正确。
故选ACD。
据表可知，用10 mL/100mL 粗提液筛选是获得M+株的有效方法。
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