试题精选‖江苏省南通市海门中学2027届高三第一次调研考试生物答案及解析

江苏省南通市海门中学2027届高三第一次调研考试

生物答案及解析

1.【答案】D

【解析】水分子快速跨膜运输是借助细胞膜上的水通道蛋白完成的协助扩散，需要蛋白质参与，A不符合题意；叶绿体随细胞质流动的过程依赖细胞骨架（由蛋白质纤维构成）的运动，需要蛋白质参与，B不符合题意；植物向光弯曲生长和生长素的极性运输、生长素发挥调控作用的过程相关，其中生长素的极性运输需要载体蛋白协助，相关生命活动也需要多种酶（本质多为蛋白质）催化，需要蛋白质参与，C不符合题意；氧气跨膜运输的方式是自由扩散，顺浓度梯度进行，不需要载体蛋白协助，也不消耗能量，不需要蛋白质参与，D符合题意。

2.【答案】A

【解析】由图可知，H^＋－K^＋泵能催化ATP水解，介导的是主动运输，属于载体蛋白，能将H^＋排入胃腔，A正确；Cl^－从胃壁细胞排入胃腔是通过Cl^－通道，属于协助扩散，Cl⁻从血浆进入胃壁细胞，是通过Cl⁻-HCO₃⁻反向转运体完成的，该转运体利用 HCO₃⁻的顺浓度梯度（势能）驱动Cl⁻逆浓度梯度运输，属于主动运输，B错误；Cl^－通道运输Cl^－时不与Cl^－结合，C错误；胃腔与外界直接相通，不属于内环境，因此，胃腔中的胃酸不属于内环境的组成成分，D错误。

3.【答案】B

【解析】细胞衰老的典型特征就包含细胞内水分减少、细胞体积萎缩变小，同时细胞核的体积增大、核膜内折，A正确；皮肤表皮细胞自然更新时，衰老细胞主动程序性脱落是受基因调控的、对机体有利的细胞凋亡过程；而细胞坏死是在极端不利因素作用下发生的细胞被动病理性死亡，不属于正常的自然更新过程，B错误；干细胞增殖分化补充表皮细胞的过程是有丝分裂加基因选择性表达的过程，有丝分裂保证了亲子代细胞遗传物质稳定，基因选择性表达过程中细胞的遗传物质本身不会发生改变，C正确；长期紫外线属于物理诱变因素，会损伤表皮细胞的DNA，既会干扰细胞正常代谢影响其正常寿命，也会提升原癌基因和抑癌基因发生突变的概率，增大细胞癌变的风险，D正确。

4.【答案】B

【解析】图中的体细胞没有进行减数分裂，同源染色体不会联会，也不存在四分体，A 错误； 该配子染色体数目异常是减数第一次分裂一对同源染色体未分离，对应的次级精母细胞在减 Ⅱ 前期、中期有 5 条染色体，后期着丝粒分裂后为 10 条，B 正确；配子白色染色体上出现 a，但是没有黑色片段交换过来，所以不是同源染色体非姐妹染色单体互换造成的，应该是发生了基因突变，C 错误； 该配子同时含有同源染色体，染色体数目异常的原因是减数第一次分裂同源染色体没有正常分离，不是减数第二次分裂染色体未正常分离，D 错误。 

5.【答案】A

【解析】对比两图可知，X射线处理后出现花斑眼的根本原因是发生了染色体结构变异——倒位，A正确；异染色质区域高度螺旋浓缩，会抑制其内部基因的转录和表达，因此接近异染色质区域的R基因更难表达，B错误；花斑眼果蝇的所有体细胞基因型完全相同，均为X₁^rX₂^R；不同体细胞表现出红白相间的性状，是因为不同细胞中异染色质对R基因的抑制程度不同，导致R基因的表达情况存在差异，并非基因型不同，C错误；花斑眼雌果蝇基因型为X₁^rX₂^R，与白眼雄果蝇（X^rY）杂交，子代雄果蝇的基因型为X₁^rY（白眼）、X₂^RY（红眼），因此子代雄果蝇中不会出现花斑眼，D错误。

6.【答案】D

【解析】转录过程中，RNA聚合酶沿DNA模板链的3'端向5'端移动，以此保证合成的mRNA沿5'→3'方向延伸，A错误；翻译时核糖体沿着mRNA的5'端向3'端移动，B错误；前导核糖体离RNA聚合酶最近，是最先结合到新生mRNA上的核糖体，但同一个mRNA上的核糖体最终合成的多肽链等长，C错误；原核生物转录翻译偶联（边转录边翻译），可以大幅提升基因表达效率，适应原核生物快速繁殖的特点，D正确。

7.【答案】C

【解析】生物进化的实质是种群基因频率的定向改变，这是现代生物进化理论的核心观点，鲨鱼和硬骨鱼的进化符合该规律，A正确；鲨鱼捕食效率的提升是硬骨鱼对其进行定向选择的结果：硬骨鱼的防御策略会筛选出捕食能力更强的鲨鱼个体，使鲨鱼种群的捕食相关基因频率定向升高，B正确；变异是不定向的，且变异发生在自然选择之前。硬骨鱼的防御策略是在长期的生存斗争中，经过鲨鱼的选择作用，将防御相关的有利变异逐代积累形成的，并非为躲避鲨鱼而定向产生的适应性变异，C错误；鲨鱼和硬骨鱼存在捕食关系，二者通过生存斗争相互选择、协同进化，符合协同进化的概念，D正确。

8.【答案】B

【解析】肝脏合成血浆蛋白减少，血浆渗透压下降，水分更多进入组织液，引起组织液增多，A 正确；胆汁由肝细胞分泌，进入消化道，不会弥散到体液中传递信息，B 错误；饭后 4 h 血糖浓度偏低，肝细胞中肝糖原分解加快，释放葡萄糖，维持血糖平衡，C 正确；醛固酮促进肾小管和集合管重吸收 Na⁺，肝脏灭活醛固酮能力下降，醛固酮含量偏高，血浆中 Na⁺积累，D 正确。

9.【答案】C

【解析】本实验CK组可用清水处理，自变量是NAA的浓度和时间，A错误；图1中不同浓度的萘乙酸处理后，果实硬度均低于对照组，不能体现NAA作用的两重性，B错误；由图2可知NAA浓度越高乙烯释放量越高，推测NAA可能诱导乙烯合成酶相关基因的表达，进而促进乙烯合成，C正确；乙烯是信息分子，只起调节作用，不能直接参与代谢过程，不能直接作用于细胞壁使其降解，D错误。

10.【答案】C

【解析】动物“站哨”发出的规律性叫声，声音属于物理信息，不是行为信息，A错误；40～60 个 /100m³时出生率＞死亡率，种群数量增加，但种群密度升高，出生率先升后降，所以曲线Ⅱ是出生率，曲线Ⅰ持续上升代表死亡率，曲线识别错误，B错误；B点是出生率=死亡率，种群密度80个 /100m³，这是环境容纳量K值。要保证捕捞后种群能快速恢复，捕捞后剩余量至少保留在20个/100m³（增长速率最大的最适密度），所以一次性捕获量最多不能超过80−20=60个/100m³，C正确；密度大于80个/100m³时，从曲线看死亡率大于出生率，但“一定”过于绝对；短期偶然的密度升高不一定年龄结构就是衰退型，D 错误。

11.【答案】A

【解析】啤酒主发酵完成后，要在低温、密封条件下进行后发酵，让啤酒成熟，产生风味物质，A 正确； 醋酸菌在氧气、糖源充足时，直接将糖分解成乙酸；糖源不足时，才将乙醇转化为乙酸，B 错误； 味精是谷氨酸钠，不是谷氨酸，谷氨酸需要进一步加工成谷氨酸钠才可用作增鲜剂，C 错误； 乳酸菌无氧呼吸只产生乳酸，不产生 CO₂，泡菜制作不需要定期拧松瓶盖放气，D 错误。

12.【答案】B

【解析】植株①是花药离体培养，由雄配子直接发育成植株，不能说明植株A的体细胞具有全能性，而植株④是由植株A离体细胞发育成植株，能体现植物体细胞的全能性，A错误；基因突变主要发生在细胞分裂间期DNA复制时，愈伤组织细胞分裂旺盛，经γ射线处理易发生基因突变，B正确；植株②、③、④的染色体数相同，植株②是纯合子，③④不一定是纯合子，C错误；接触抑制是某些动物细胞培养过程中出现的现象，D错误。

13.【答案】D

【解析】固氮菌主要分布在通气良好、有机质含量更丰富的表层土壤（通常3~8cm左右），A错误；需要从土壤样品中筛选目标固氮菌株，因此土壤样品不能进行灭菌，仅需对培养基等实验器材进行灭菌处理，B错误；固氮菌株可以利用空气中的氮气作为氮源，筛选固氮菌的选择培养基需要设计为无氮源的培养基，C错误；稀释涂布平板法是微生物分离纯化、获得单菌落的常用方法，可用于对土壤样品中的固氮菌株进行分离培养，D正确。

14.【答案】B

【解析】①观察叶绿体，低倍镜只能找到目标，叶绿体的内部结构需要高倍镜观察，一般也不在低倍镜下计数，①错误；②探究植物细胞的吸水和失水，可在低倍镜下观察中央液泡大小和原生质层的位置，②正确；③观察根尖有丝分裂，解离后细胞已经死亡，无法观察到纺锤体牵引染色体移动的动态过程，③错误； ④高倍镜观察时，不能调节粗准焦螺旋，防止压碎玻片，④错误；B正确。

15.【答案】D

【解析】提取色素时加入无水乙醇是利用色素易溶于有机溶剂无水乙醇的特性，A错误；碳酸钙的作用是防止叶绿素被细胞中的有机酸破坏，叶片研磨后再加碳酸钙无法起到保护效果，B错误；滤纸条上距离滤液细线最远的色素是橙黄色的胡萝卜素，C错误；滤纸条上含量最多的两种色素是叶绿素a和叶绿素b，叶绿素a的吸收峰约在430nm（蓝紫光区）和660nm（红光区），叶绿素b的吸收峰约在470nm和643nm，二者吸收峰波长不同，D正确。

16.【答案】AC

【解析】由图可知，磷酸化修饰后的Opal可促进线粒体发生融合，融合后的线粒体ATP产生增加，因此，脂肪细胞产能增加，A正确；RalA蛋白可使磷酸化修饰的Drpl去磷酸化，使线粒体分裂成片段化，肥胖患者脂肪组织中线粒体存在功能受损，因此，肥胖患者脂肪细胞中RalA蛋白含量升高，B错误；细胞中片段化的受损线粒体可通过溶酶体参与的自噬作用被清除，C正确；线粒体内膜上不产生CO₂，CO₂在线粒体基质中产生，D错误。

17.【答案】BD

【解析】秋水仙素的作用是抑制纺锤体的形成，会导致细胞停滞在分裂前期，无法进入中期让染色体的着丝粒排列在赤道板上，A错误；图1是正常二倍体芝麻的核DNA检测结果：荧光强度200对应G₁期二倍体体细胞的DNA含量，400对应G₂或分裂期DNA复制后的二倍体细胞的DNA含量；秋水仙素处理后部分细胞染色体加倍成为四倍体，会同时存在未加倍的二倍体细胞和加倍的四倍体细胞，因此在荧光强度200（二倍体G₁期）和400（四倍体G1期/二倍体G₂期）处均会出现峰值，B正确；图2的峰值在荧光强度400处，对应四倍体芝麻，多倍体植物的特点通常是结实率低，只是营养器官、种子的营养物质含量更丰富，C错误；秋水仙素不仅可能诱导染色体数目加倍，作用过程中也可能造成染色体断裂、重接，引发染色体结构变异，因此处理后也可能获得染色体结构改变的突变体，D正确。

18.【答案】ABD

【解析】神经元1 为兴奋性突触，其释放的递质结合受体后引发 Na⁺大量内流；神经元 3 为抑制性突触，抑制性递质结合受体后一般是 Cl⁻内流，不会引发 Na⁺大量内流，A 错误；细胞免疫中效应 T 细胞只能裂解被破伤风杆菌寄生的靶细胞，使靶细胞内的菌体和毒素释放，不能直接裂解破伤风杆菌本身，B 错误；破伤风毒素分泌到细胞外后，经组织液、血浆等体液运输到达作用位点，C 正确；破伤风毒素阻止抑制性神经元释放抑制性神经递质，α- 运动神经元持续兴奋，会引起肌肉持续收缩、痉挛，而不是持续舒张、无力等症状，D 错误。

19.【答案】ACD

【解析】步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等，A错误；步骤2可利用特定的选择培养基进行筛选，目的是获得杂交瘤细胞，B正确；步骤3的目的是筛选出能分泌特异性抗PML抗体的杂交瘤细胞，需要采用抗原-抗体杂交的方法检测，C错误；孔2的检测结果为与不含PML的总蛋白反应呈阴性、与PML蛋白反应呈阳性，说明孔2中的细胞分泌的抗体仅特异性识别PML蛋白，能产生目标抗体，适合进行后续培养制备单克隆抗体，D错误。

20.【答案】

（1）叶绿素    激活RuBP酶的活性、促进蔗糖运出细胞等   光反应和暗反应（CO₂固定）

（2）转录和翻译    降低    突变体M叶绿体中Mg²⁺相对含量仍出现昼夜节律波动

（3）抑制    （4）突变体P    双突变体PM    

（5）合理施用镁肥、培育M基因适度高表达或抑制P基因表达的作物品种

【解析】

（1）镁是构成叶绿素的必需元素；从图1可知Mg²⁺还能激活RuBP酶的活性和促进蔗糖运出细胞的作用，而RuBP酶催化CO₂固定，因此镁缺乏时，叶绿素合成不足会影响光反应，同时Mg²⁺不足会降低RuBP酶的活性，因此同时影响光反应和暗反应，最终光合速率下降。

（2）基因经过程②合成蛋白质的过程即基因的表达，包括转录和翻译。对比图2野生型和突变体M的曲线，突变体M叶绿体Mg²⁺含量更低，说明M基因缺失后Mg²⁺进入叶绿体的效率降低；但突变体M仍能向叶绿体转运Mg²⁺，且突变体M叶绿体中Mg²⁺相对含量仍出现昼夜节律波动，说明还存在其他Mg²⁺转运蛋白，M蛋白不是唯一的转运蛋白。

（3）由图1和图2可知，光照条件下，蔗糖合成量增多，会促进P基因的表达，但是叶绿体中Mg²⁺相对含量下降，说明Mg²⁺进入叶绿体的效率下降，则反应可能是因为M蛋白合成量减少，即M基因表达受抑制了，因此过程①会抑制过程②的进行。

（4）为进一步验证上述假说：M 蛋白主要负责节律性运输Mg²⁺至叶绿体内，而P基因抑制M基因的表达，因此P基因间接抑制Mg²⁺运输至叶绿体内，研究人员利用野生型和多个相关基因缺失突变体（突变体P、突变体M、双突变体PM等）进行实验，由表中数据可知，突变体M的叶绿体中Mg²⁺相对含量为1.5低于野生型的叶绿体中Mg²⁺相对含量2.5，说明M基因促进M蛋白合成，进而促进Mg²⁺转运进入叶绿体，若假说成立，P基因的作用是抑制M基因的功能，突变体P缺失了P基因，解除了M基因的限制后，叶绿体Mg²⁺含量高于野生型的2.5，对应表格的3.5；双突变体PM同时缺失P和M基因，和仅缺失M基因的突变体M一样，仅剩余其他转运蛋白发挥作用，叶绿体Mg²⁺含量和突变体M一致为1.5，因此3组应为突变体P，4组应为双突变体PM。

（5）田间管理从补充镁营养的角度出发，可以合理施用镁肥；品种改良从调控M基因表达、提升叶绿体镁转运能力的角度出发，培育M基因适度高表达或抑制P基因表达的作物品种。

21.【答案】

（1）Z    （2）    aaZ^bZ^b、AAZ^bW    

（3）黑色雄性∶黑色雌性∶灰色雌性∶白色雌性=8∶4∶3∶1    9    

（4）5：3    15/32

【解析】

（1）两对等位基因独立遗传，观察杂交一F₂雌性黑色:白色=1:1，雄性全为黑色，推测B/b在Z染色体、A/a在常染色体时。

（2）已知A/a在常染色体，B/b在Z：黑色是“有B即黑”，无B（所有个体都是b）时，A_为灰色，aa为白色。 杂交二亲本为：白色雌性 × 灰色雄性。 白色个体的常染色体基因型一定是aa，且因为表现型不是黑色，说明没有B，因此白色雄性的基因型是aaZ^bZ^b；灰色雌性没有B，因此基因型是AAZ^bZ^b。F₁灰色雌性的基因型是AaZ^bW：  减I中期同源染色体已经配对，细胞中有两对同源染色体：一对常染色体、一对性染色体Z和W； A和a在一对常染色体的两条同源染色体上，b在Z染色体上，W染色体无对应基因； 减I中期同源染色体排列在赤道板两侧，如图

（3）亲本为纯合黑色雄性与纯合灰色雌性，均为纯合子，杂交得到F₁为 AaZ^BZ^b、AaZ^BW，随机交配后：雄性全部有B，全黑：占所有子代1/2，即8/16；  雌性中，3/4A_：其中Z^BW（黑色）占雌性一半，即3/4×1/2=3/16，Z^bW（灰色）3/16；1/4aa：Z^BW（黑色）1/16，Z^bW（白色）1/16。 整理后比例：黑色雄性8 : 黑色雌性(3+1)=4 : 灰色3 : 白色1。 黑色个体基因型数：A/a有AA、Aa、aa 3种，雄性B/b基因型Z^BZ^B、Z^BZ^b2种，雌性B/b基因型只有Z^BW 1种，总共：3×2+3×1=9。

（4）亲本：EE纯合灰色雄性（EEAAZ^bZ^b）× ee白色雌性（eeaaZ^bW）  F₁全部为Ee，雄性为EeAaZ^bZ^b，雌性为EeAaZ^bW，F₁随机交配。 先不考虑性反转，E/e自由组合：Ee×Ee→EE:Ee:ee=1:2:1，其中只有ee的雄性会反转为不育雌性，ee对雌性无影响。  原本子代雌雄各占1/2： 雄性：原本占1/2，其中1/4是ee，这部分反转为雌性，因此剩余雄性为1/2×1−1/4=3/8； 雌性：原本占1/2，加上反转来的1/2×1/4=1/8，总雌性为1/2+1/8=5/8；  因此雌雄比例为 5/8:3/8=5:3。 亲本是EEAAZ^bZ^b× eeaaZ^bW，F₁是EeAaZ^bZ^b× EeAaZ^bW，A/a是Aa×Aa，A_概率为3/4：  A_概率3/4，雌性概率5/8，3/4×5/8=15/32，因此灰色雌性占15/32。

22.【答案】

（1）细胞内    下丘脑    

（2）核糖和腺嘌呤    增加    抑制VLPO神经元上的Ca²⁺内流，进而抑制VLPO神经元释放GABA，防止突触间隙中GABA含量过多导致过度睡眠    （3）增加

（4）随机均等分为3组   正常睡眠（或等量水喂养，不放置平台）  A组辅助性T细胞相对含量下降，影响体液免疫和细胞免疫；B组细胞毒性T细胞相对含量下降，影响了细胞免疫

【解析】

（1）PGD₂是脂类激素，细胞膜的主要成分是磷脂，也属于脂质，依据相似相溶原理，所以PGD2可以通过细胞膜，其受体位于细胞Ⅱ的细胞内；下丘脑是生物节律的调控中枢，昼夜节律相关的分泌波动由下丘脑调控，脑干多调控呼吸、心跳等基础生命活动。

（2）腺苷是由腺嘌呤和核糖结合形成的小分子；GABA是抑制性神经递质，与突触后膜受体结合后，会促进Cl⁻内流，会让膜内负电位更强，静息电位绝对值增加，突触后神经元更难兴奋；从图中信息可知，GABA结合突触前膜的GABA_B受体后，抑制钙通道开放，可反馈抑制GABA的过量释放，防止睡眠过度，维持睡眠和觉醒的平衡。

（3）腺苷的作用是抑制TMN神经元，腺苷减少后，该抑制作用减弱，TMN神经元分泌的组胺增加，而组胺会抑制睡眠，进而影响正常睡眠。

（4）实验设计遵循单一变量和随机对照原则，首先要将生理状态一致的小鼠随机均分三组，排除无关变量干扰；C组作为空白对照组，需要排除A组的乙醇、B组的平台环境的额外干扰，即进行等量水喂养，不放置平台，保证小鼠正常睡眠；从柱状图结果看，A组CD4⁺辅助性T细胞下降更明显，辅助性T细胞参与体液免疫和细胞免疫的调控，会导致两类特异性免疫均受影响；B组CD8⁺细胞毒性T细胞下降更明显，细胞毒性T细胞影响细胞免疫，所以会导致细胞免疫功能降低。

23.【答案】

（1）群落    栖息地、食物、天敌以及与其他物种的关系等    

（2）黑光灯诱捕    600    

（3）低剂量农药处理会诱导羧酸酯酶活性上升，草地螟产卵量上升    高浓度农药处理后细胞色素P450含量上升显著    

（4）生物防治    +-++    乙组和丙组    及时铲除田边杂草，减少草地螟产卵及幼虫孵化的场所等

【解析】

（1）群落是指同一时间内聚集在一定区域中全部生物种群的集合，因此草地螟生活环境中的全部生物共同构成了群落。研究某种生物的生态位，通常需要研究它的栖息地、食物、天敌以及与其他物种的种间关系等，以此明确该物种在群落中的作用和地位。

（2）草地螟成虫具有较强的趋光性，可采用黑光灯诱捕法估算其种群数量。依据题意，当单次捕获数降为0时，捕获的总累积数就等于该种群的总个体数，即该直线横轴的交点可作为该昆虫总数的估算值，设置直线方程式y=kx+b，得到：①96=216k+b，②40=440k+b，①②建立方程组，可得：k=-1/4，b=150，则直线方程为y=-1/4x+150，推出y=0 时，x=600，即诱捕前草地螟成虫的数量约为600只。

（3）据图2可知，低剂量农药处理组的草地螟体内羧酸酯酶的活性更高，说明低剂量农药会诱导羧酸酯酶活性上升，草地螟产卵量上升，因此使用低剂量农药抑制草地螟数量增长的风险更大。长期使用高浓度单一农药处理时细胞色素P450含量上升显著，使具有抗药性的个体存活并大量繁殖，种群中抗药性基因的频率逐渐升高，最终导致草地螟的抗药性增强。

（4）①利用害虫的天敌（球孢白僵菌）来防治害虫，属于生物防治，优点是对环境无污染、效果好且持久、避免害虫抗药性增强。

②依据题干信息可知，农药对球孢白僵菌防治草地螟具有协同增效作用，且昆虫若遇到外部不良因素影响，常通过提高SOD（超氧化物歧化酶）的活性来保护自身，所以SOD的活力最高的应为同时添加1×10⁷个孢子/mL菌液、2.95 g/mL农药，对应于丁组，活力最低的应为乙组，什么都不添加，即为对照组，对应于X（乙组），则甲组、丙组介于二者之间，甲组只添加2.95 g/mL农药，则Y组对应于丙组，综上，a、b、c、d分别为+ - + +。

③由题意可知，草地螟是鳞翅目昆虫，其成虫夜间活动，具较强的趋光性，多产卵于田边杂草上。因此除了采用生物防治方法外还可以及时铲除田边杂草，减少草地螟产卵及幼虫孵化的场所等方法进行防治。

24.【答案】

（1）不受   促进R蛋白形成二聚体，并启动GFP基因的表达（或解除R蛋白对启动子B的抑制）   绿色荧光强度    

（2）1、4    BglⅡ、HindⅢ    

（3）碱基互补配对    磷酸二酯    给予重组EcN且饮用等量添加诱导剂aTc和cumate的水    粪便    稀释涂布平板

【解析】

（1）从图1可知，R基因自身由启动子A持续驱动表达，不受硫代硫酸盐调控；硫代硫酸盐的作用是和R蛋白结合形成二聚体，解除原本R蛋白对启动子B的抑制，启动GFP基因的转录翻译，合成绿色荧光蛋白。由于硫代硫酸盐生成量和IBD严重程度正相关，最终GFP的表达量和硫代硫酸盐浓度正相关，因此可通过检测粪便中的绿色荧光强度判定硫代硫酸盐浓度，诊断IBD发病程度。

（2）PCR 扩增目的基因，引物分别结合模板两条链的 3' 端；引物1在 R 基因启动子A上游，引物 4 在R基因终止子下游，用引物 1、4 才能完整扩增R基因（既包括启动子也包括终止子）片段。BglⅡ、HindⅢ 两个酶切位点，切割后产生不同黏性末端，防止目的基因自身环化、反向连接，它们又在启动子和终止子附近便于转录，Xam Ⅰ比较远，没有BglⅡ、HindⅢ更合适。Pst Ⅰ和Sau3A在质粒启动子和终止子内部，会破坏转录。BamHⅠ 会破坏R基因，Sam Ⅰ会切掉终止子。所以限制酶用BglⅡ、HindⅢ。

（3）①gRNA识别目标DNA依靠核酸序列的碱基互补配对原则；核酸酶的作用是切割DNA骨架的磷酸二酯键，破坏细菌基因组/关键基因，诱发细菌死亡。

② 实验遵循单一变量原则，对照组给予重组EcN且正常饮水，实验组需要给予重组EcN且饮用等量添加诱导剂aTc和cumate的水，激活自毁机制。由于肠道益生菌会随粪便排出，因此收集粪便样本，采用稀释涂布平板法接种，通过统计菌落数反映肠道内存活的工程菌数量，验证自毁开关的清除效果。