Image J软件下的线粒体统计

线粒体由内、外两层膜构成，内、外两层膜之间形成线粒体外室，内膜围成的腔隙形成线粒体内室，内膜向内室方向突起、折叠形成线粒体嵴，嵴两侧膜形成的空隙为与外室相通的嵴间隙。

（1）外膜：厚约6~7nm，由蛋白质和脂类约1：1构成，可随意透过10000Da分子量物质。（2）外室：宽约10nm，含多种酶和其他底物。（3）内膜：厚约7~8nm，由蛋白质和脂类约3.8：1构成，分子量大于150Da物质不易透过，具有高度选择透过性。（4）内室：充满基质，电子密度高于外室，基质中含有线粒体DNA、核糖体等。（5）嵴：内膜褶叠形成。

图片源自《细胞超微结构与超微结构病理基础》王春梅主编

图片源自Image J官网

2. 眼见为实

（一）前期设置准备

（1） 打开Image J软件主界面

（2） 软件内加载打开目标电镜图片（若图片格式不兼容软件，可使用格式工厂对图片格式转化为.jpg）

File→Open→选择目标文件夹内图片

（3） 图片由其他转为8-bit灰度

Image→Type→8-bit

（4） 设置标尺

点击直线工具

在图片标尺附近画一条和标尺等长的直线（黄线）

Analyze→Set Scale

按照标尺长度在Known distance填入0.5，Unit of Length填入μm→勾选Global→点击OK

（5） 设置测量项

Analyze→Set Measurements

勾选Area（面积）/Mean gray value（平均灰度值）/Perimeter（长度）→点击OK

（二）目标测量

（1） 线粒体计数

Plugins→Analyze→Cell Counter

点击Initialize→勾选Type1点→选择软件主界面点状工具

依次点击图片内的线粒体，选中的线粒体可见红色圆圈内“1”的标记，与此同时上一个命令框内Type1数字计数为5，代表选中的线粒体计数为5

（2） 线粒体面积、周长、平均灰度值

Edit→Selection→Add to Manager，出现ROI Manager设置框→勾选Show All

软件主界面点击自由描线→对目标线粒体轮廓描线

点击Add则出现篮框内信息，即说明描线区域内信息已经加载

选中描线区域项目，点击Measure，计算结果，代表选中线粒体面积为2.023μm2，周长为5.152μm，平均灰度值为102.160（注意：灰度值范围为0至255，颜色越黑值越小，越白值越大）

（3） 线粒体长宽比

按照上述方法打开ROI Manager设置框，选择主界面直线工具

对目标线粒体长轴画直线→点击Add，出现长轴项目编号（蓝色框）

类似的，对目标线粒体短轴画直线→点击Add，出现短轴项目编号（绿色框）→点击Measure计算结果，说明选中线粒体长轴为1.335μm，短轴为1.036μm，长宽比计算后为1.289

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武汉珞创生物科技有限公司是一家专注于电镜检测及相关服务的高新技术企业，致力于尖端电镜检测技术的研发、改良、完善及推广，现已拥有一支完整的高素质研发团队，其中包括武汉大学病理学与病理生理学专业博士2名，硕士1名，其余成员均具有本科及以上学历，年均样本处理量可达4万例，拥有极为丰富的电镜检测服务经验。我们的口号是“还原细胞真实态，做超微，我们是认真的”。