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一、选择题
1．(2024·重庆高三联考)熔喷布的主要成分是聚丙烯，会对环境造成污染。某科研小组从土
壤中分离到一种能分解聚丙烯的细菌。下列说法正确的是( )
A．配制固体培养基时，需要在无菌的环境中进行
B．制备培养基时需要先将培养基的pH调节至中性或弱碱性
C．从土壤中分离能分解聚丙烯的细菌，可采用平板划线法进行分离与计数
D．纯化培养时，在培养皿皿盖做标记后倒置在恒温培养箱中静置培养
2．(2023·淮安高三模拟)如图为实验室中酵母菌纯培养过程的部分操作步骤，下列说法正确
的是( )
A．微生物的纯培养物就是指不含代谢废物的微生物培养物
B．步骤①中，用手触摸估计培养基冷却至室温后开始倒平板
C．步骤①使用的培养基制备过程是先调pH再灭菌
D．③到④过程中，每次划线后都需要灼烧接种环并蘸取菌液
3．(2021·山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂
肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在
醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的
是( )
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
4．(2023·山东，15)平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是( )
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
5．(2024·咸阳高三调研)为加速我国北方冬春季秸秆原位还田的腐化过程，研究人员以冻牛粪为材料筛选出耐低温(10 ℃)的纤维素降解菌。下列相关叙述正确的是( )
A．选用冻牛粪为材料与其富含纤维素及含耐低温微生物有关
B．初筛菌种前，要利用固体培养基在37 ℃条件下扩大培养目标菌种
C．用于筛选的培养基是加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基
D．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化
6．(2024·湖北宜荆荆恩四市高三联考)营养缺陷型菌株是突变后某些酶被破坏，导致代谢过
程中某些合成反应不能进行的菌株。如图是科研人员利用影印法(用无菌绒布轻盖在已长好
菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上)初检某种氨基酸缺陷
型菌株的过程。下列相关说法错误的是( )
A．①过程接种方法为稀释涂布平板法，接种后的培养皿不能立即进行倒置培养
B．进行②过程的顺序是先将丝绒布“复印”至完全培养基上，再“复印”至基本培养基上
C．氨基酸缺陷型菌株应从基本培养基上没有、完全培养基上对应位置有的菌落中挑选
D．统计菌落种类和数量时要每隔一定时间观察统计一次，直到各类菌落数目稳定为止
7．(2024·长春高三调研)研究人员拟从土壤样品中分离出高效降解甲醇的酵母菌并进行大量
培养，操作流程如下。下列相关叙述错误的是( )
A．为保证无菌操作，接种环使用前必须灼烧灭菌
B．平板浇注分离法适宜于厌氧型或兼性厌氧型的微生物的分离和计数C．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母菌细胞中甲醇的含量
D．为了获得甲醇耐受酵母菌，可通过逐步提高培养基中甲醇的浓度来实现
8．(2024·武汉高三检测)空气细菌总数测定主要有自然沉降法和撞击法。自然沉降法是让空
气中的细菌自然降至琼脂平板表面，撞击法是将一定量空气以较高的流速喷射撞击到琼脂平
板上，空气中的细菌即留滞在琼脂表面。关于自然沉降法和撞击法，下列分析错误的是(
)
A．用于检测空气中细菌总数时都需对不同方位和高度的空气进行采样
B．撞击法对洁净空气中细菌总数的测定比自然沉降法更准确
C．两种方法均可使用无选择性的牛肉膏蛋白胨培养基
D．用两种方法取样后在琼脂平板上形成的菌落均为单菌落
9．为筛选出可高效抑制番茄枯萎病菌(一类真菌)的土壤芽孢杆菌菌株，科研人员从土壤中
采集、分离、筛选芽孢杆菌菌株作为待测菌株，并采用平板对峙培养法观察各待测菌株的抑
菌能力。如图为研究过程示意图，下列叙述错误的是( )
A．过程①常利用移液器取0.1 mL菌液涂布平板
B．过程②可根据芽孢杆菌菌落的形态、颜色进行挑选
C．若甲、乙、丙三个平板的平均菌落数为12个，则10 g土样中芽孢杆菌约有1.2×109个
D．实验筛选出的菌株仍需进行大田种植试验以检测防治效果
二、非选择题
10．大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达12～38 kg。
大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选
纤维素分解菌。请回答下列问题：
(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C 酶、C 酶和葡萄糖苷酶。
1 X
为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以__________为唯一碳源的固体
培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于________培养基。
(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是______________________________________
___________________________________________________________________________。
检测固体培养基灭菌效果的常用方法是________________。
(3)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37 ℃条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌
株________，理由是____________________________________________________________
__________________________________________________________________________。
菌株 秸秆总重(g) 秸秆残重(g) 秸秆失重(%) 纤维素降解率(%)
A 2.00 1.51 24.50 16.14
B 2.00 1.53 23.50 14.92
C 2.00 1.42 29.00 23.32
11.(2024·南京高三调研)生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分
解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，
实验步骤如图所示。请分析回答问题：
KH PO 1.4 g
2 4
NaHPO 2.1 g
2 4
MgSO ·7H O 0.2 g
4 2
葡萄糖 10 g
尿素 1 g
琼脂 15 g
溶解后蒸馏水定容到1 000 mL
(1)本实验所使用的培养基按功能来分应为______培养基，原理是_______________
________________________________________________________________________。
(2)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH PO 和NaHPO ，其作用有__________
2 4 2 4
________________________________________________________________________。
(3)实验是否需要振荡培养来提高溶氧量：______(填“是”或“否”)，原因是____________。
转为固体培养时，常采用__________________________法接种，获得单菌落后继续筛选。
(4)若在稀释倍数为105的三个培养基中，菌落数分别是156、174、183，则每克内容物中尿
素分解菌的数目为__________个。(5)为证明分离得到的细菌是否可以分解尿素，可在培养基中加入________指示剂，看指示
剂是否______________。
(6)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在 37 ℃恒温培养箱
中培养24～48 h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中合理的稀释倍数为
________。
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数 >500 367 248 36 18
12.菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，
以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。下图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列
问题：
(1)该营养琼脂培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、
调节pH、____________________法灭菌等。然后将培养基放入47 ℃水浴锅保温，选择此
温度的理由是______________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)实验过程中须将样品剪碎并使用均质器 10 000 r·min－1 处理 1 min，其目的是
__________________________________。从水浴锅取出营养琼脂培养基倒平板适量，稍冷却
后移液0.2 mL样品于培养皿进行涂布，涂布时可______________，使涂布更均匀。
(3)本实验用菌落计数的原理是基于__________________________________，运用这种方法
统计的结果往往较实际值偏________。具体培养结果如下表。选取菌落数30～300的培养皿
作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释浓度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落
数×稀释倍数报告。当有两个浓度菌落值在30～300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，
若比值不大于2，则取平均数，且菌落数大于100取两位有效数字，两位之后的数值四舍五
入；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填
写例次3中“？”处的菌落总数为________。
不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌 菌落总数/
例次
10－1 10－2 10－3 落数之比 [CFU/ mL(g)]
1 1 365 164 20 — 16 400
2 2 760 295 46 1.6 38 000
3 2 890 271 60 2.2 ？
(4)利用鲜奶进行工业生产酸奶时，不能使用______污染的鲜奶为原料，否则会使乳酸菌生
长受到限制；利用________法可以除去鲜奶中的白细胞、杂菌和其他肉眼可见的异物，取其上清液用于发酵制酸奶。
(5)密封良好的泡菜坛内有时会长一层白膜，这些白膜是____________(填“乳酸菌”或“酵
母菌”)繁殖产生的。在泡菜腌制过程中坛、蔬菜等均未进行严格灭菌，而在发酵过程中一
般不会出现其他杂菌大量繁殖，其原因是________(填序号)。
①发酵的原料中缺乏杂菌生长需要的各种营养物质
②发酵过程的温度不适合杂菌的生长
③乳酸菌产生较多乳酸，许多好氧菌被杀死
④在自然界中乳酸菌占优势
