专题24　微生物的培养与发酵工程_2022版教学资源包_五年高考三年模拟_2022版新高考版选考总复习生物5·3A版_0125143739_专题24微生物的培养与发酵工程_专题PDF_专题PDF_专题电子书

９２６
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2 0- 微生物的培养与发酵工程
课标解读
考情分析 备考策略
考点 考向
（） ： ， （） 、
１ 考查内容 获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础 发 １ 从类型 特点和应
传统发酵技术 传统发酵技术与发酵 ，
１ 酵工程为人类提供多样的生物产品 本专题内容情境贴近生产 用等方面列表归纳并
与发酵工程 工程 ， 。（） ：
生活实际 是高考的命题热点 ２ 命题规律 已出现的高考试 比较不同微生物培养
， 、 。
题中 考查内容集中在微生物的实验室培养 特定微生物数量 基的类型及应用
、 ， （） 、
的测定方法 培养基对微生物的选择作用等 试题多为非选择 ２ 构建果酒 果醋与
培养基与微生物的纯化 ， 、 ， ， 。 、
题 试题大都符合高起点 低落点的特点 如２０２０ 山东 １２ 泡菜等的制作 特定微
微生物的培养 （） ：
２ ３ 命题预测 预计２０２２年高考中试题会聚焦发酵工程的应用这一 生物的分离纯化等过
技术及应用 ， ，
视角 引导学生运用科学的思维方法理解生物技术与人类生产和 程模型 可以加深对知
微生物的分离与计数 ， 、
生活的联系 如特定发酵产物的制备 环境污染的净化等 识的记忆与理解
，
命题立意  拓展延伸  ③酱以大豆和少量面粉为原料 经蒸煮后
（） 。
１ 命题特点  生活中传统发酵食品及其发酵机理  在空气中自然发酵制成 发酵过程主要
， ， ， 、
通过对中国古典著作中酿酒 ， 方法的分析  ① ， 醪糟又称酒酿 ， 是糯米经蒸煮后 接种根 是 ， 能够产生蛋白酶 脂肪 、 酶和 、 淀粉酶的霉 ，
考查微生物发酵的相关知识 试题设计既 霉 在有氧条件下 发酵生产的含低浓度酒精 菌 将大豆中的蛋白质 脂肪 淀粉分解
，  。  、 、 、
有知识点的综合 也有知识点的延伸和 和不同糖分的食品 根霉在生长时会产生 产生氨基酸 多肽 甘油 脂肪酸等多种物
。  ，  。 。
迁移 大量的淀粉酶 将糯米中的淀粉水解成葡萄 质 这些物质使酱具有独特的酱香味
（ ２ ） 核心素养  糖 ， 同时利用部分葡萄糖发酵产生酒精 。 使  ④酱油生产以大豆为主要原料 。 生产时 ，
， 、 ，
试题设计体现了我国传承传统文化的社 用不同的根霉菌种 可以生产不同酒精度 不 将原料粉碎制成固体培养基 然后在有氧
。 。 ， ，
会责任和文化自信  同甜度和不同香味的醪糟  条件下 利用产生蛋白酶的霉菌 如黑曲
。 。
解题指导  ②食醋的酿造一般需经过酒精发酵过程  霉进行发酵 微 ， 生物在生长过程中会产
在这个过程中原料中的糖经酵母菌发酵转 生大量的蛋白酶 蛋白酶将培养基中的蛋
核心考点  ， ，  。
、 。 化为酒精 之后醋酸菌在有氧条件下发酵 将 白质水解成小分子的肽和氨基酸 发酵
细胞呼吸 发酵工程  。  、 。
酒精转化为醋酸 由于使用的微生物菌种 结束后经淋洗 调制就可制成酱油产品
 ，  ， 。
或曲种的差异 在葡萄糖发酵过程中会产生 酱油富含氨基酸和肽 具有特殊香味
， 。
 乳酸或其他有机酸 使食醋有不同风味 
 
书书书专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９２７
， ，
 ｂ．葡萄要先冲洗再去枝梗 以免去枝梗时葡萄破碎 增加被
。
杂菌污染的风险
，
 ｃ．瓶中留有约１／３的空间 为酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖
。
考
、
点一 传统发酵技术与发酵工程 提供
，
氧气 果酒发酵
，
过程中会产生大
，
量 ＣＯ
２
导致瓶内气压升
。
一 传统发酵技术 高 需拧松瓶盖放气 但不要完全打开 否则可能会被杂菌污染
： ， ， ，
１．发酵 利用微生物 在适宜的条件下 。 将原料通过① 微生  ， ｄ．旧教材中酒精发酵 。 时一般将温度控制为１８～２５ ℃ 全书
物的代谢 转
：
化为人类所需要的产物的过程 同 非必要不再进行标注
２．实例 腐乳制作 、
（） ： 、 、 。 三 发酵工程
１ 参与微生物 ② 毛霉 酵母 曲霉等
（） ： ， １．发酵工程的概念
２ 原理 豆腐中的蛋白质被分解成小分子的肽和氨基酸 ， ，
， 。  利用① 微生物 的特定功能 通过现代工程技术 规模化生
味道鲜美 易于消化吸收 。
产对人类有用的产品
３．传统发酵技术
（） ： ，  ２．发酵工程的基本流程
１ 概念 直接利用③ 原材料中天然存在的微生物 或利
、 
用前一次发酵保存下来的面团 卤汁等发酵物中的微生物进行
、 。 
发酵 制作食品的技术
（） ： ，
２ 形式 以④ 混合菌种的固体发酵及半固体发酵 为主
。 
通常是家庭式或作坊式的
（） ： 、 、 、 、 、 、 。 
３ 产物 酒 腐乳 酱油 醋 泡菜 豆豉 酱等
、 
二 尝试制作传统发酵食品

１．制作泡菜
（） 、 
１ 作用菌类 原理与反应简式




（）

２ 方法步骤


３．发酵工程的特点
 （） ： 、 。
１ 生产条件温和 温度 压力都不高
 （） ： ， 。
２ 原料来源丰富且价格低廉 微生物种类多 易分离
 （） ： 。
３ 产物专一 可直接生产某种物质
 （） ：
、
２ （ ．果 ） 酒 果醋制作  ， ４ 废弃物 ， 对环境的污染小且容易处 。 理 废料是各种代谢产
１ 原理 物 只要灭菌后 一般对环境不造成污染

考点二 微生物的培养技术及应用
、

一 培养基
 ： ，
１．概念 人们按照微生物对① 营养物质 的不同需求 配制
 。
出供其生长繁殖的营养基质
 ： 、 、 、 。
２．用途 用以培养 分离 鉴定 保存微生物或积累其代谢物

３．营养成分
（） ： 。
（）  １ 确定原则 根据微生物的② 需求
２ 方法步骤  （ ２ ） 主要营养物质 ： 碳源 、 ③ 氮源 、 水和无机盐 。
（） ： 、 。
 ３ 其他条件 ｐＨ ④ 特殊营养物质 和氧气
 ４．种类
（） （
 １ 根据物理性质可分⑤ 液体培养基和固体培养基 以及
），
半固体培养基 固体培养基和液体培养基的区别是是否添加
。
⑥ 琼脂 等凝固剂
（） ， ：
 ２ 根据功能分选择培养基和⑦ 鉴别 培养基 区别如表

（） 
３ 注意事项
。

ａ．发酵瓶和榨汁机都要用体积分数为７０％的酒精消毒（ ）
９２８ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
（）
 ２ 主要操作步骤
种类 制备方法 用途 举例

培养基中加入某 允许特定种类的
， 加入青霉素分离 
选择 些化学物质或某 微生物生长 同时
得到 酵 母 菌 和
培养基 种特殊 的 营 养 抑制或阻止其他 
霉菌
物质 种类微生物生长 
： ，
培养基中加入某 用刚果红培养基  ３．培养酵母菌 待菌液被培养基吸收后 将接种后的平板和一
鉴别 鉴别不同种类的 （ ）， 。
种指示剂或化学 鉴别 纤 维 素 分 个未接种的平板 对照作用 放入恒温培养箱中培养２４～４８ｈ
培养基 微生物
药品 解菌  ？ ？
中培１养平板划线法中有哪几次灼烧接种环 其目的相同吗
５．培养基的制备  $%１养
： 。
步骤 计算→称量→⑧ 溶化 →调ｐＨ→⑨ 灭菌 →倒平板 
灼烧时间 取菌种前 每次划线前 接种结束后
、 
二 无菌技术 杀死上次划线后接
：  ， 杀死接种环
１．无菌技术 获得纯净的微生物培养物的关键是① 防止杂 种环上残留菌种 使
， 。  杀 死 接 上残存的菌
菌污染 包括消毒和灭菌 本次划线的菌种直 ，
 种 环 上 种 避免细
２．消毒和灭菌的比较 目的 接来自上次划线末
原 有 微 ， 菌污染环境
 端 使每次划线菌种
概念 常用方法 应用的范围及效果 生物 ， 和 感 染 操
 数目减少 达到分离
： 作者
煮沸消毒法 １００ ℃煮沸 杀死微生物的营养细胞  菌株的目的
使用较为 ５～６ｍｉｎ 和一部分芽孢  中培２养在灼烧接种环之后 ， 为什么要等其冷却后再进行划线 ？
， ， 。
温和的物 ： 不耐高温的液体 如可  $%２养以免接种环温度太高 杀死菌种
、 ② 巴氏消毒 法 ６２～ ，
理 化学 以杀死牛奶中的绝大多  中培３养在做第二次及其以后的划线操作时 为什么总是从上一次划
６５℃消毒３０ｍｉｎ或８０～ ， ？ ？
或生物等 数微生物 并且不破坏  线的末端开始划线 目的是什么
消 ９０℃处理３０ｓ～１ｍｉｎ ， ，
方法杀死 牛奶的营养成分  $%３养划线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上
毒 ，
物体表面 如用酒精擦拭双手 、 用  一次划线的 ， 末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的 。 增加
或内部一 化学药物消毒法 而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 这样
氯气消毒水源等  。
部 分 微 做的目的是将聚集的菌种逐步分散以便获得单个菌落
： 
生物 紫外线消毒法 用紫外线 、 、
照射３０ｍｉｎ ， 配合喷洒石炭 接种室 接种箱和超净 四 微生物的分离与计数
工作台的消毒
酸或煤酚皂溶液效果更佳  １．土壤中分解尿素的细菌的分离
（） ： ；
（ 、
： 接种工具 如接种环 涂  １ 实验原理 能合成脲酶的细菌才能分解尿素 配制以尿
使用强烈 ③ 灼烧 灭菌 酒精灯火 布器等 ） 及试管口 、 瓶口 素为唯一氮源的选择培养基 ， 能够生长的细菌就是能分解尿素
的理化方 焰充分燃烧层灼烧 。
等的灭菌 的细菌
（） ： ，
法杀死物
： 耐高温和需保持干燥的物  ２ 鉴定方法 在培养基中加入酚红指示剂 若 ｐＨ升高使
灭 体内外所 干热灭菌 １６０～１７０ ℃热 ， （ ， 。
品如玻璃器皿 如培养皿 指示剂变红 说明该细菌能分解尿素
菌 有的微生 空气下灭菌２～３ｈ ）、
， 等 金属用具的灭菌  ２．微生物的数量测定
物 包括 ： （） （ ）：
芽 孢 和 湿热灭菌 如高 、 压蒸汽灭  １ 显微镜直接计数法 显微计数法
孢子 菌锅 ， 在１００ｋＰａ １２１℃条 培养基等的灭菌  利用特定细菌计数板或① 血细胞计数 板 ， 在显微镜下计数一
件下 灭菌１５～３０ｍｉｎ 原理
 定容积的样品中微生物的数量
：
说明 表中相关方法的具体操作温度及时间等均依据新
。 方法 用计数板计数
教材 
、 （ 每毫升原液所含细菌数＝每小格内平均细菌数×４００×１０４×稀
三 酵母菌的纯培养 由① 单一个体繁殖 获得纯培养物的  公式
。） 释倍数
过程 
１．制备培养基  缺点 不能区分死菌与活菌而使计数结果② 偏大
（） （ ）：
 ２ 间接计数法 活菌计数法
 ， ，
当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源
 ， ，
原理 于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 计算

样品中的③ 活菌数
 （ ） ， ，
——— 每克样品中的菌株数＝④ Ｃ÷Ｖ ×Ｍ 其中 Ｃ代表某一稀释
２ （ ．接 ） 种和 ： 分离酵母菌 平板划线法 ，  公式 度下平板上生长的平均菌落数 ， Ｖ代表涂布平板时所用的稀释
１ 原理 通过接种环在固体培养基表面 。 连续划线的操作  液的体积 （ ｍＬ ）， Ｍ代表稀释倍数
将聚
，
集的菌种逐步稀释分
。
散到培养基的表面 经数次划线后培
设置重复组
，
增强实验的说服力与准确性
。
同时为了保证结
养 可以分离得到单菌落 操作 ，
 果准确 一般选择菌落数在⑤ ３０～３００ 的平板进行计数
，
 ⑥ 当两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个
缺点 ，
 菌落 因此统计结果可能偏小
专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９２９
，
 Ａ．步骤①倒平板操作时 倒好后应立即将其倒过来放置
 Ｂ．步骤②将接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液进行平板
 划线
， ，
考点一 传统发酵技术与发酵工程  Ｃ．步骤③通过连续划线 使接种物逐渐稀释 培养后出现单个
（ ， ）
１． ２０２０山东等级 ， 考模拟 １３ 在实验室中可利用酵母菌 （ 发酵的 ） 菌落
方式制作葡萄酒 下列说法正确的是

Ｄ．步骤④培养箱培养后可用来对Ｘ细菌进行计数
Ａ．葡萄糖在酵母菌细胞的线粒体内被分解 １． 答案 Ｃ

（ ， ）
Ｂ．制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖 ２． ２０２０上海松江期末 １５ 下列实验室培养微生物的操作措施
 ， （ ）
Ｃ．制作过程中酵母菌始终处于碱性环境 中 不能获得较纯菌种的是

Ｄ．酵母菌的发酵产物不会抑制自身的代谢活动 Ａ．土壤样品灭菌处理后进行稀释涂布分离纯化
 、
１． 答案 Ｂ Ｂ．培养皿 接种工具和培养基等进行灭菌
（ ， ） “ ” ， 
２． ２０２０天津一中模拟 ２４ 在 果醋制作过程 中 获得较多的 Ｃ．操作过程需在酒精灯火焰旁进行并在适宜条件下培养
（ ） ，
醋酸菌菌种的最简便方法是 Ｄ．如果是固体培养基 则需把培养皿倒置
， 、 
Ａ．从变酸的葡萄酒表面获得菌膜 再培养 分离 ２． 答案 Ａ
， 
Ｂ．不必人为加入菌种 在葡萄等水果表面本身就存在大量醋 ３．筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一
 。 ，
酸菌 碳源的培养基 接种培养后 得到如
， 、  ，
Ｃ．从泡菜坛盖边沿的水槽表面获得菌膜 再培养 分离 图所示的两个菌落 培养平板经稀碘
 ，
Ｄ．从土壤中分离提取 液处理 出现了以菌落为中心的透明
 。 （ ）
２． 答案 Ａ 圈 相关叙述不正确的是
（ ， ）“ ，
３． ２０２０山东青岛期初调研 １０ 葡萄美酒夜光杯 欲饮琵琶  Ａ．培养基中的淀粉可为微生物提供碳源
” ，
马上催 这是唐诗中提及的葡萄酒 人类用不同原料酿酒的历 Ｂ．两个菌落中的微生物为同一种微生物
， 、
史已有５０００年 勤劳的人民在日常生活中总结了制作泡菜  Ｃ．两个菌落中的微生物均能将淀粉酶分泌至细胞外
、 、 ， ，
果醋 果酒 腐乳等发酵食品的实用方法 下列说法错误的是  Ｄ．透明圈直径与菌落直径的比值越大 说明该微生物分解淀粉
（ ）

的能力越大
Ａ．泡菜制作的发酵过程需要保证无氧的环境 ３． 答案 Ｂ
、 ， （ ， ）
Ｂ．当氧气 糖源都充足时 醋酸菌将糖分解成醋酸 ４． ２０２０吉林长春一模 ４１ 陈胸声是中国近代微生物工业的开
， 。
Ｃ．参与果酒发酵和果醋发酵的微生物都可以进行有氧呼吸  拓者和奠基人 为我国的发酵工业作出了巨大贡献 分析他的
， ， 。
Ｄ．将长满毛的豆腐装瓶腌制时 底层和近瓶口处需加大用盐量 成就 回答下列问题
（） ， ，
３． 答案 Ｄ  １ １９２２年 我国一家酒精生产厂用甜菜作原料 生产总是失
（ ， ） 。 。
４． ２０２０天津一中模拟 ３４ 发酵工程的第一个重要工作是选择 败 陈胸声研究发现是因为原料中感染了一种酪酸菌
。 、 （ ） （
优良的单一纯种 消灭杂菌 获得纯种的方法不包括  实验室中为避免杂菌污染需要利用 仪
， ），
Ａ．根据微生物遗传组成的差异 在培养基中加入不同比例的 器 在压力和温度分别是 条件下维持
， 。
核酸  １５～３０ ｍｉｎ 将原料灭菌
， （） 、
Ｂ．根据微生物缺乏生长因子的种类 在培养基中增减不同的生  ２ 我国传统生产酱油有将大豆等发酵产生小分子肽 氨基酸
。 ，
长因子 ，  等的 ， 过程 １９３３年 陈胸声为解决酱油酿造 ， 菌种不纯的问
Ｃ．根据微生物对碳源需要的差别 使用 ， 含不同碳源的培养基  题 从各个酱油作坊采集了上千种的 。 样品 从中筛选了一
Ｄ．根据微生物对抗生素敏感性的差异 在培养基中加入不同的  种 酶活性很高的米曲霉 对菌种进行筛选并
。
抗生素  计数常用的方法是
（） ，
４． 答案 Ａ ３ １９３４年 陈胸声发现用甘蔗生产酒精时添加硫酸铵或尿素
（ ） ， ，
５． 曲一线原创 下列关于传统发酵技术与发酵食品的叙述中 可以大幅度提高发酵速度 这是为微生物补充了
（ ） （ ）。
错误的是 营养物质
 （） ， 、 ，
Ａ．传统发酵技术常直接利用原材料中天然存在的微生物 ４ 在上个世纪６０年代 陈胸声用淀粉 玉米浆等作为原料
 ，
Ｂ．传统发酵技术以混合菌种的固体发酵及半固体发酵为主 从上万的菌株中筛选出高产谷氨酸的黄色短杆菌 使我国
，  。 ：
Ｃ．果酒制作过程中 若发酵条件控制不当果酒可能变酸 味精生产达到国际先进水平 请写出筛选的思路
， 
Ｄ．果醋制作过程中 应隔绝空气以利于醋酸发酵
 。
５． 答案 Ｄ
 （） 、 （ ）
４． 答案 １ 高压蒸汽灭菌锅 １００ ｋＰａ １２１ ℃ 顺序错不对
考点二 微生物的培养技术及应用  （） （） （） 、
（ ，） ２ 蛋白 稀释涂布平板法 ３ 氮源 ４ 用淀粉 玉米
１． ２０２０甘肃武威十八中一诊 ６ 如图表示纯培养Ｘ细菌的部 ， ， ，
， （ ） 浆等作为原料 分别接种菌株 发酵后 检测谷氨酸的生成量
分操作步骤 下列相关叙述正确的是  （ ， ） ，
５． ２０２０安徽蚌埠月考一 ３０ 为了调查某河流的水质状况 某
 ，
研究小组测定了该河流水样中的细菌含量 并进行了细菌分离
 。 ：
等工作 回答下列问题
 （） 、 、
１ 培养微生物的培养基中的营养成分一般都有水 无机盐
。 ，

等 此外 还需要满足微生物生长对（ ）
９３０ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
、 、 。 。 。
ｐＨ 温度 及特殊营养物质的需求  为 这种接种方法叫
（） ， ， （） ， ，
２ 培养基配制时需要进行灭菌 对培养基进行灭菌 采用的 ４ 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌 接种操作时
。 ， ；
方法是 灭菌后 随机取若干灭菌后的平 全程要在 附近进行 在第二次及以后的划线
，  ， ，
板先行培养一段时间 这样做的目的是 中 总是从上一次划线的末端开始划线 这样做的目的是
。  。
（） ，  （） 、 （）
３ 该小组将１ｍＬ水样稀释１００倍 在３个平板上用涂布法分 ５． 答案 １ 碳源 氮源 氧气 ２ 高压蒸汽灭菌法 检测
； ，  （） （）
别接入０．１ ｍＬ稀释液 经适当培养后 ３个平板上的菌落 培养基灭菌是否合格 ３ ４．１×１０４ 稀释涂布平板法 ４
、 ， 
数分别为４２ ３８和４３ 据此可得出每毫升水样中的活菌数 酒精灯火焰 将聚集的菌体逐渐稀释以便获得单个菌落
（） ： 、 ，
 易错警示 １ 关于果醋制作的原理 当氧气 糖源都充足时
。 ，
 醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸 当缺少糖源时 醋酸菌将
， 。（）
 乙醇变为乙醛 再将乙醛变为醋酸 ２ 关于腐乳制作的原
：
考 （ 点一 传统发酵技 ， 术 ） 与发酵工程 、  理 毛霉等微生物分 ； 泌的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成 。 小
１． ２０１９北京海淀期中 １９ 某研究性学习小组进行果酒 果醋 分子的肽和氨基酸 脂肪酶可将脂肪水解成甘油和脂肪酸 这
。 （ ） 。
发酵实验 下列相关叙述正确的是 里的酶是胞外酶
，  （ 、 ， ）
Ａ．先供氧进行果醋发酵 然后隔绝空气进行果酒发酵 ４． ２０２０江苏南通 泰州等七市二模 １７ 下列有关家庭制作苹
 （ ）
Ｂ．果酒发酵所需的最适温度高于果醋发酵 果醋的操作错误的是
， 
Ｃ．适当加大接种量可以提高发酵速率 抑制杂菌繁殖 Ａ．选取成熟度高的苹果洗净榨汁
， 
Ｄ．与人工发酵相比 自然发酵获得的产品品质更好 Ｂ．向苹果汁中加入适量蔗糖和抗生素
、 ， ———  ，
答案 Ｃ 进行果酒 果醋发酵实验中 先制果酒 隔绝 Ｃ．碗中加少量米酒敞口静置 取表面菌膜
， ， ； 
空气进行果酒发酵 再供氧进行果醋发酵 Ａ选项错误 果酒发 Ｄ．醋酸发酵阶段每隔一段时间进行搅拌
，  、
酵所需的最适温度范围是１８～２５ ℃ 果醋发酵的最适温度范 答案 Ｂ 苹果醋制作时原料应选用新鲜 成熟度好的苹
， ；  ， ； ，
围是３０～３５ ℃ Ｂ选项错误 发酵过程中人工接种比自然发酵 果 Ａ正确 参与果醋制作的微生物是醋酸菌 若加入抗生素会
， ；  ， ； ，
获得的产品品质更好 Ｃ选项正确 且适当加大接种量可以提 杀死醋酸菌 Ｂ错误 碗中加少量米酒敞口静置 为醋酸菌营造
， ， 。 ， ， ，
高发酵速率 抑制杂菌繁殖 Ｄ选项错误  有氧环境 使其进行醋酸发酵 此后可取表面菌膜作为菌种 Ｃ
、 ， 、 ； ， ，
能力解读 以果酒 果醋发酵实验为载体 考查辨认 比较的  正确 醋酸菌为好氧型菌 进行有氧呼吸 故醋酸发酵阶段每隔
。 ， 。
理解能力  一段时间进行搅拌以营造有氧环境 Ｄ正确
， （ ） （ ， ） ，
２．下列关于用塑料瓶制作果酒和果醋的叙述 正确的是 ５． ２０１８北京海淀期中 ３７ 在白酒发酵的窖池中 培养液的
， ， ， 。
Ａ．为了提高果酒的产量 果汁应尽量装满发酵瓶  ｐＨ≤４．５ 后 酵母菌的代谢活动逐渐受到抑制 甚至停止发酵
、 、
Ｂ．使用的菌种都具有细胞壁 核糖体 ＤＮＡ和ＲＮＡ  耐酸性酵母菌能在ｐＨ≤３．５的环境下继续表现出较强发酵能
， 。
Ｃ．果酒和果醋制作过程中均需要适时拧松瓶盖  力 适宜作白酒发酵生产用菌种 为选育适合白酒生产的耐酸
， ， 。（ ）
Ｄ．果酒制成后 可将装置转移至温度较低的环境中制果醋  性强的酵母菌 研究者进行了实验 １５分
， （） 。 ，
答案 Ｂ 本题考查果酒和果醋的制作 同时考查学生的理 １ 酵母菌的代谢类型是 在发酵过程中
。 ， ，
解能力和比较能力 葡萄汁装入发酵瓶时 要留有大约１／３的 窖池中培养液的ｐＨ会逐渐下降 原因是
。 、 ， 、 。
空间
、
酵母菌是
。
真菌 醋酸菌是细菌 它们都
，
有细胞壁 核糖
（） 、 ，
体 ＤＮＡ和ＲＮＡ 因为果 ， 酒发酵会产生Ｃ ， Ｏ ２ 葡萄汁装得过满 ，  ２ 取适 ， 量窖底泥 酒糟和黄浆水 分别溶于１０ ｍＬ ，
会导致瓶子难以容纳ＣＯ ２ 影响 。 发酵进程 甚至使塑料瓶破 ， 裂  中 再各取１ ｍＬ 上清液接入１０ ｍＬ 麦芽汁培养基 ， 中培养
每天应适时拧松瓶盖放出ＣＯ 。２ 因为醋酸发酵是有氧发酵 制 ２天后分 。 别接种到不同酸碱度的麦芽汁培养基上 培养结
果如表
果醋时瓶子一直是开放的 制作果酒的适宜温度是 １８～
， ， ，
２５ ℃ 制作果醋的适宜温度是３０～３５ ℃ 果酒制成后 可将装 菌种来源
。  窖底泥 酒糟 黄浆水
置转移至温度较高的环境中制果醋 ｐＨ
（ 、 ， ） 、 
３． ２０２０江苏盐城 连云港三模 １７ 下列有关果酒 果醋和腐乳 ５．０ ＋＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋
， （ ）
制作的叙述 错误的是 ，  ４．０ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋＋
Ａ．果酒发酵到一定阶段 酒精生成量将逐渐下降
 ３．０ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋
Ｂ．腐乳制作利用的是毛霉等微生物产生的胞内酶
，  ２．５ ＋＋ ＋ ＋
Ｃ．醋酸菌只有在供氧充足的条件下 才能进行果醋发酵
， 
Ｄ．通过人工接种菌种 可以提高各种发酵产品的质量 ２．０ ＋ － －
， ，  ：“” ，“” 。
答案 Ｂ 果酒发酵到一定阶段 产物会影响酶的活性 酒 注 ＋ 越多表示菌体长得越好 － 表示几乎不生长
， ；  （） ，
精生成量将逐渐下降 Ａ正确 腐乳制作利用的是毛霉等微生 ３ 在ｐＨ≤３．５ 的环境下 仍可检测到少量耐酸性酵母菌生
， ； ，  ， 。
物产生的胞外酶 Ｂ错误 醋酸菌只有在供氧充足的条件下 才 长 这些菌株是基因 突变形成的
， ； ，  （） ，
能进行果醋发酵 Ｃ正确 通过人工接种菌种 短时间内使得该 ４ 从ｐＨ为 的培养基中获得菌种 可通过
， ， 。  ， 。
菌成为优势种群 可以提高各种发酵产品的质量 Ｄ正确 法接种到培养基上 进行纯化培养专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９３１
（） ， 。 ， ，
５ 实验获得了三个耐酸性强的酵母菌菌株 特点如表  化酶等知识 主要考查考生的实验与探究能力 同时考查了科
。（）
菌株 Ａ Ｂ Ｃ  学思维与科 ， 学探究生物学学科核心素养 １ 、 在优良菌种的
，  筛选过程中 常采用高压蒸汽灭菌法对培养液 培养基进行灭
， ｐＨ≤３．５ 时 生 ， ， 。（）
ｐＨ≤３．５ 时 、 生 长代谢正常 ， ｐＨ为 ２．５～６ 、 时  菌 常采用灼烧灭菌法对接种器进行灭菌 ２ 将优质 ， 果酒接
特点 长代谢正常 优 ｐＨ为４～６时 ， 不 生长代谢正常 优  种到含高浓度酒精和高糖的培养液中 ， 进行扩大培养时 高浓度
于其他常规菌种 于其他常规菌种
正常  酒精和高糖的培养液为选择培养基 培养液中高浓度的酒精和
， ， 。
， 高糖起选择作用 同时 糖是酵母菌的碳源和能源物质 在分
依据菌株特点 研究者认为Ｃ菌株更适合作为白酒发酵菌 ， ，
， 离培养时 对扩大培养后的样液进行梯度稀释 可使样液中的
株 作出这一判断的理由是  ， 。
酵母菌的密度变小 培养后更易获得酵母菌的单细胞菌落
 （） ，
。 ３ 酵母菌的细胞中含有多种酶 可采用电泳法将酶从酵母细
 ， 、 、
（） ， 胞匀浆中分离出来 原因是不同酶分子的带电性质 大小 形状
答案 １ 异养兼性厌氧型 细胞呼吸产生二氧化碳 可形 ， ， 。
； （） 不同 其在电场中的迁移速度不同 从而实现酶分子的分离
成碳酸 代谢过程中还产生了其他酸性物质 ２ 无菌水  ， ，
（） （ ） （） 在生产实践中 为实现酶的多次利用以及提高产品的品质 可
３ 自然 自发 ４ ２～３ 平板划线法或稀释涂布平板  ， 、
（） ， ， 采用固定化酶技术 酶的固定化常采用的方法有化学结合法
５ 该菌对ｐＨ的耐受范围更大 发酵初期ｐＨ近中性 Ｃ菌种 。
， ； ， 物理吸附法和包埋法 可通过检测固定化酶的活性或催化效
适合此环境 更易于形成优势菌群 发酵后期ｐＨ逐渐降低 Ｃ 。
率来确定其应用价值
菌种依然能正常生长  ［ ， （ ）］
（） ， ７． ２０１９浙江十校联盟联考 ３２ 一 回答与果酒制作有关的
解析 １ 考查实验原理 酵母菌的代谢类型是异养兼性厌 ：
。 ，
问题
氧型 ， 二氧化碳溶于水达到饱和的ｐＨ ， 为５．８ 所以在发酵过  （ １ ） 酵母菌的扩大培养通常使用 （ 填 “ ＬＢ ”“ ＭＳ ” 或
程中 窖池 ， 中培养液的 ， ｐＨ会逐渐下降 原因是细胞呼吸产生 。 “ ”） 。
麦芽汁 液体培养基 用接种环将酵母菌接种在培养基
二 （ 氧 ） 化碳 可 ， 形成碳酸 同时 ， 还有其他的酸性代谢物 ， 质产生 
上进行划线分离
，
下列示意图中规范正确的是
。
３ 突变在 ， 先 环境选 （ 择在 ） 后 不 。 是环 （ 境 ）“ 诱导的突变 也不是定  。
按规范图所示接种环应在火焰上灼烧 次 最后
向的突变 而是自然 自发 突变 ４ 为选育适合白酒生产 ，
”， 
分离得到的酵母菌的菌种不同 利用其所产生的酒的
的耐酸性强的酵母菌 故应从ｐＨ为２～３的培养基中获得菌 。
， 。
也不同
种 平板划线法或稀释涂布平板法都可以分离纯化菌种
（） “ 
５ 依据实验目的 为选育适合白酒生产的耐酸性强的酵母
”， ， 
菌 结合发酵过程中酵母菌的代谢方式的变化 推测该菌对
， ， ，
ｐＨ的耐受范围更大 发酵初期ｐＨ近中性 Ｃ菌种适合此环境
； ， 
更易于形成优势菌群 发酵后期 ｐＨ逐渐降低 Ｃ 菌种依然能
正常生长 。  （ ２ ） 用果汁酿制果酒时 ， 可在果汁中加入果胶酶和果胶甲酯酶
６． （ ２０１９５ · ３ 原创冲刺卷一 ， ３７ ） 果酒的制作离不开优质菌种  将果胶分解成可溶性的 ， 瓦解植物的胞间
。 ， 。
的作用 某学者将优质果酒接种到含高浓度酒精和高糖的培  层 从而提高果汁的
， （） ，
养液中进行扩大培养 然后将扩大培养后的样液进行稀释并接  ３ 发酵开始时 微生物的需氧呼吸会使发酵瓶内出现
， 。
种在固体培养基上进行分离培养 最终选育出耐高浓度酒精和
。 ： （） （）
高糖的优良酵母菌品种 请回答  答案 １ 麦芽汁 Ｂ ５ 风味 ２ 半乳糖醛酸 出汁率
（） ， 、 （）
１ 在优良菌种的筛选过程中 对培养液 培养基进行灭菌常 和澄清度 ３ 负压
， （） ，
采用的方法是 对接种器进 解析 １ 酵母菌扩大培养一般选择麦芽汁液体培养基 ＭＳ
。 ， 。
行灭菌常采用的方法是  培养基用于植物组织培养 ＬＢ液体培养基是细菌通用培养基
（） ， ，
２ 将优质果酒接种到含高浓度酒精和高糖的培养液中进行 在划线分离过程中 每一次都应从上一次划线末端开始划线
， ， ， ；
扩大培养时 培养液中酒精所起的作用是  划线４次 前后共需要灼烧接种环５次 不同酵母菌生产的酒
； 。（）
糖的作用是  的风味是有差异的 ２ 果胶酶和果胶甲酯酶可将果胶水解
， ， ， 。（）
在分离培养时 对扩大培养后的样液进行梯度稀释 其目 成半乳糖醛酸 从而提高果汁的出汁率和澄清度 ３ 发酵开
， ，
的是 。  始时 因Ｃ 。 Ｏ ２ 溶解度大于Ｏ ２ 微生物的需氧呼吸会使发酵瓶内
出现负压
（） ， 
３ 酵母细胞中含有多种酶 不同酶分子的
、 、 ， ， 
大小 形状不同 其在电场中的迁移速度不同 可采
考点二 微生物的培养技术及应用
， 。 ， （ ， ） 、
用电泳法 将酶从细胞匀浆中分离出来 在生产实践中 １． ２０１８甘肃兰练一中二模 ３７ 微生物培养技术在医疗 农业
、  。 ，
可采取 物理吸附法或包埋法对酶 生产等方面均有应用 烧伤病人容易感染绿脓杆菌 临床使用
，  ， 。 ：
进行固定化 可通过检测固定化酶的 来确定其应 抗生素前 有时需要做细菌耐药实验 请回答下列相关问题
。  （）
用价值 １ 适于绿脓杆菌生长的培养基中的营养成分一般含有
（） （）  、 ，
答案 １ 高压蒸汽灭菌法 灼烧灭菌法 ２ 选择 为酵 水和无机盐 除了提供以上几种主要营养
、  ， 、
母菌提供碳源 能源并起选择作用 使样液中的酵母菌的密度 物质外 培养基还需要满足微生物生长对 特殊
， （）  。
变小 培养后更易获得酵母菌的单细胞菌落 ３ 带电性质 营养物质以及氧气的要求
（ ， ） （ ，  （） ，
或电荷 或带电情况 化学结合法 活性 或活力 或催化 ２ 可采用稀释涂布平板法对绿脓杆菌进行分离计数 原理是
）  ， ，
效率 统计平板上的菌落数 即可推测出样
、 ； ，

解析 本题主要考查优良菌种的选育 蛋白质的分离和固定 品活菌数 计数结果往往比实际活菌数低 是因为（ ）
９３２ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
。 ， 。
 数在３０～３００间的平板进行计数 取平均值 ３个平板菌落的
（） ， ， 。
３ 对培养基进行灭菌后 待培养基冷却至５０ ℃左右时 需要 平均数为３９ 每升自来水中的活菌数约为３９÷０．１×１ ０００×１
。 。
在 附近倒平板 接种时所用的接种环在接 ０００＝３．９×１０８个
。 （ ， ）
种前后都需要通过 法灭菌 ３． ２０１７吉林大学附中高三四次摸底 ３７ 为了调査长春自来水
（） ， ，
４ 将分别含等剂量不同抗生素的相同大小的小滤纸圆片均 的质量 某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定
， ：
匀置于该平板上的不同位置 在适宜条件下培养一段时 请回答下列问题
， ， （） ，
间 结果滤纸片周围均出现透明 （ 圈 “ 这说明 ” 绿 “ 脓杆菌 ” 对 ） 实 。 １ 在微生物的培 。 养过程中 实验室对培养基灭菌 ， 常用的方法
验所用 （ 抗 ） 生素表现为 （） 填 敏感 或 不敏感 ，  是 为 。 防止冷凝水影响细菌的生长 需将培养皿
答案 １ 碳源 氮源 ｐＨ ２ 样品稀释度足够高时 稀  培养
（） ，
释液中的一个活菌可 （ 在平板上形成 ） 一个单菌落且稀释液体积  ２ 若小组采用平 ， 板划线法分离水样中的细菌 在培 。 养基上共
和稀释倍数 ，（ 已知 涂 ） 布稀释液时 如有两个或两个以上 （ 细 ） 胞  画了５个区域 则 ， 需要 次灼烧 。 接种环 该培养基
连在一起 经过培养 平板上观察到的只是一个菌落 ３ 酒 从物理状态上看 属于 培养基
（）  （） ，
精灯火焰 灼烧 ４ 敏感 ３ 可通过滤膜法检测自来水中大肠杆菌的数量 将已知体积
（） ，  ， 。
解析 １ 绿脓杆菌属于细菌 其培养基中的营养成分一般 的水过滤后 将滤膜放在 培养基上培养 该培
、 、 ，  ，
含有碳源 氮源 水和无机盐 除了提供以上几种主要营养物质 养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外 还应提
， 、  。
外 培养基
。
还
（
需
）
要满足微生物生长对ｐＨ 特殊
，
营养物质以及氧
 （） 供 等基本营养成分 ，
气的要求 ２ 若对绿脓杆菌进行分离计数 需采用稀释涂布 ４ 若小组采用稀释涂布平板法统计菌落数目 统计的菌落数
 ，
平板
，
法将含有绿脓杆菌的菌液接种
（
于固体培养基表面进行培
 往往比活菌的实际数目 ， 如果接种后一个平板经
养 其优点在于可得到单个的菌落 或可将菌群分散成单个的
）。（） ，  培养后的菌落 。 分布如图所示 推测接种时可能的操作失误
细菌 ３ 对培养基进行高压蒸汽灭菌后 待培养基冷却至
， 。 是

５０ ℃左右时 需要在酒精灯火焰附近倒平板 在接种前后所
。（）

用的接种环都需要通过灼烧灭菌 ４ 含等剂量不同抗生素
，

的相同大小的滤纸片周围均出现透明圈 这说明绿脓杆菌对实
， 。

验所用抗生素敏感 已经被抗生素杀死
（ ， ）
２． ２０１７宁夏银川一中高三一模 ３７ 金黄色葡萄球菌具有高度
， （ ） ，
耐盐性 在血平板 培养基中添加适量血液 上生长时 可破坏
， 。
菌落周围的红细胞 使其褪色 下面是某研究小组测定自来水 （） （） （）
。 ：
中金黄色葡萄球菌浓度的实验操作 请回答下列问题  答案 １ 高压蒸汽 （ 灭 ） 菌 倒置 ２ ６ 固体 ３ 伊红美
（）
１ 金黄色葡萄球菌的培养基为含７．５％ＮａＣｌ的牛肉膏蛋白胨 蓝 氮源 （ 和 ） 无机盐 ４ 少 涂布不均匀 。
， （ “ ”“
解析 １ 培养基常用高压蒸汽灭菌 为防止冷凝水影响
培养基 根据实验目的应选择 填 固体 液 ， 。（） ，
”） ， 。
细菌生长 需将培养皿倒置培养 ２ 用平板划线法接种时
体 培养基 培养基中加入７．５％ＮａＣｌ的作用是  ，
（） ， ，
２ 在制作血平板时需等平板冷却后 方可加入血液 以防止 在每次划线前需对接 ， 种环灼烧灭菌 在第５区 。 划 （ 线 ） 完毕后还需
。 ，
血平板在使用前 需置于恒温培养箱中在适宜
对接种环灼烧灭菌 以防止微
，
生物污染环境 ３ 在
，
添加伊红
， 。
（） 温度下培养一段时间 ， 其目的是 
美蓝指示剂的固体培养基上 大肠杆
，
菌菌落呈黑色 故用滤膜
３ 取
，
１０ ｍＬ自来
，
水样 加入
、
稀释成
、
１０－１的自来水 法检测自
。
来
（
水
）
中大肠杆菌的数量时 需将滤膜放在伊红美蓝培
样 依
。
次操作 制作稀释 １０－２倍 １０－３倍 １０－４倍的自来 养基上 ４ 活菌落计数
，
法是通过统计培养基表面的菌落数
（） 水样 ，  推算菌液中菌体数量的 菌落形 ， 成时往往出现两个或多个细菌
４ 将
（
０．１ ｍＬ １
）
０－ｌ～１０－４倍的四种稀释样液 分别接种到
。
４组 细胞连接在一
。
起形成一个菌落 故统计的菌落数往往比活菌的
每组３个 血平板上的方法是 在血 实际数目少
， 。  （ ， ）（ ） ，
平板上 金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现 若 ４． ２０１８甘肃兰化一中二模 ３７ １０分 据不完全统计 全世界
，  ， ，
在１０－３组的３个血平板上 金黄色葡萄球菌菌落数分别为 盐碱地的面积为９．５亿公顷 其中我国为９９１３万公顷 严重的
、 ， 。  。
４２ ３８和３７ 则每升自来水中的活菌数约为 个 盐碱土壤地区植物几乎不能生存 只有少数生物可以生长在
（） （）  ， ， “ ”，
答案 １ 固体 利于金黄色葡萄球菌的筛选 ２ 高温破 盐碱环境中 研究发现 这些生物体中往往有 嗜盐酶 这种
（）  、 。
坏血细胞 检测血平板是否符合无菌要求 ３ ９０ ｍＬ无菌水 酶常有盐耐受性 热耐受性和对有机溶剂的抗性 某生物兴趣
（） （ ）  。
４ 稀释涂布平板法 透明圈 溶血圈 ３．９×１０８ 小组欲分离嗜盐微生物
（）  （） ，
解析 １ 对微生物计数需采用稀释涂布平板法接种微生 １ 兴趣小组同学来到青海湖采集菌样 其原因是
。 ，  。
物 因金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性 培养基中添加ＮａＣｌ
。（）  （） ，
的目的是筛选金黄色葡萄球菌 ２ 为防止血细胞被高温破 ２ 采集到湖水后若要分离嗜盐菌 所采用的培养基从功能上
， 。 ，  。
坏 待培养基冷却后才能倒入血液 血平板在使用前 需置于 看属于 培养基
 （） ， （ ），
恒温箱中在适宜温度下培养一段时间其目的是检测血平板是 ３ 取１ ｍＬ湖水 按图稀释后接种 每次稀释１０倍 培养一
。（）  ， 、 、 、
否符合无菌要求 ３ 在１０ ｍＬ自来水中加９０ ｍＬ无菌水可 段时间后 平板上长出的菌落数分别为１３ １６３ ４３８ １８２和
。（） 、  。 ，
稀释成１０－１倍的自来水样 ４ 用稀释涂布平板法接种 培 １９５ 该过程采取的接种方法是 工具
养 ， 可通过计算菌落数得知菌体数 。 因金黄色葡萄球菌可破坏  是 ， 计算每毫升水样中的菌体数量为 ×１０８
， ，  ； ，
菌落周围的红细胞 使其褪色 故金黄色葡萄球菌菌落周围会 个 与血细胞计数板计数法相比 此计数方法测得的菌体
。 ， ， ， 。

出现透明圈 菌落计数时 为了保证结果准确 一般选择菌落 数较 其原因是专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９３３
。（）
 解原油的酶在细胞内 ３ 固定化技术的很大一个优点就在
。
 于能重复利用且易于产物和底物的分离 为了达到较好的去
， 、 ， ，
 污效果 处理过程中除控制温度 ｐＨ外 还要控制污水流速 这
。
 样可以让污水中的原油得到充分降解
。
６．酸雨主要是由大气中所含
，
的ＳＯ
２
造成的 研
。
究人员为了获
：
得
 用于烟气脱硫的脱硫细菌 进行了相关实验 回答下列问题
（） ： ，
（） ，  １ 采集菌种 在某热电厂烟囱周围区域采集土样 取样用 。 的
４ 若需要长期保存分离得到的嗜盐菌 应采用 小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需要 将
。  ， 。
法 采集的土样进行稀释处理后 接种到培养基上进行培养
（） （） （）  （） ： ，
答案 １ 青海湖是咸水湖 ２ 选择 ３ 稀释涂布平板 ２ 分离目的菌 将目的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中
，  ，
法 涂布器 １．８ 小 当两个或多个细菌连接在一起时 往 边搅拌边持续通入ＳＯ 驯化几分钟后接种到固体培养基
（）  ， ２ ，
往统计的是一个菌落 ４ 甘油管藏 上 待长出菌落后再重复上述步骤 并逐步延长通ＳＯ 的时
（） ， ， ， 。 ２
解析 １ 在寻找目的菌时 要依据它对生活环境的要求 间 与此同时逐步降低培养基的 ｐＨ 由此分离得到的目
。 ： ，  。
到相应环境中去寻找 由此推知 欲分离嗜盐微生物 兴趣小 的菌具有较强的 的能力
， 。 （） ： ，
组同学来到青海湖采集菌样 其原因是青海湖是咸水湖 ３ 活菌计数 为获得大量目的菌用于生产 在培养过程中需
（） ， 。 ，
２ 分离嗜盐菌的培养基 从功能上看属于选择培养基 连续取样进行计数 法常用来统计样品中的
（） ， ，  。 ，
３ 取１ｍＬ湖水 按题图稀释１０６倍后接种 说明采取的接种方 活菌数目 通常情况下 用此方法得到的活菌数目往往比
， 。  （ “ ” “ ”）。
法是稀释涂布平板法 采用的接种工具为涂布器 接种后培养 实际数目 填 高 或 低
， 、 、 、  （） ：
一段时间 平板上长出的菌落数分别为 １３ １６３ ４３８ １８２ 和 ４ 检测目的菌对抗生素的敏感性 取该单菌落适当稀释后的
。 ， ，  ， ，
１９５ 统计菌落数目时 为了保证结果准确 一般选择菌落数在 液体２滴 接种于固体培养基表面 并用 使菌液
３０～３００的平板进行计数 ， 应将菌落数差异明显的舍弃 ， 因此每  均匀分布 。 在３７ ℃培养箱中培养２４小时后 ， 将大小相同
（ ）
毫升水样中的菌体数量为 １６３＋１８２＋１９５ ÷３×１０６＝１．８×１０８ 且分别含有不同抗生素的圆纸片均匀置于该平板的不同
个／ｍＬ 。 与血细胞计数板计数法相比 ， 此计数方法测得的菌体 位置 ， 再培养一段时间 ， 结果如图所示 （ 圆纸片周围的白色
， ， ）， ，
数较少 其原因是当两个或多个细菌连接在一起时 往往统计 区域表示没有菌落分布 据此实验结果推测 五种抗生素
。（） ， （ ）。
的是一个菌落 ４ 若需要长期保存分离得到的嗜盐菌 应采 中对该菌抑制作用最强的是 答序号和名称
。
用甘油管藏法 
（ ， ）
５． ２０２０浙江金华十校一模 ２４ 有些细菌可将原油分解为无机
， 。
物 从而消除原油泄漏造成的土壤污染 某同学欲分离能高效
。 ：
降解原油的菌株 回答问题 
（） ， ，
１ 在分离过程中 应从 的土壤中采集样品 并
（ “ ”“ （） ： ，
将土壤样品稀释液接种于以 填 原油 葡萄 ５ 菌种保存 采用平板划线法分离纯化得到了脱硫细菌 可
” “ ”） ， ， 。
糖 或 原油＋葡萄糖 为碳源的固体培养基上 不选择其 以采用 的方法 对菌种长期保存
（） （） （）
他两组的原因是  答案 １ 灭菌 ２ 利用ＳＯ 和耐酸 ３ 稀释涂布平板
。 （） （２ ）
 低 ４ 涂布器 ⑤青霉素 ５ 甘油管藏
（） ， ， （） ，
２ 培养得到的单菌落 有些单菌落周围出现较大的分解圈  解析 １ 为了防止杂菌的污染 取样用的小铁铲和盛装土
， 。（）
有些单菌落周围不出现分解圈 说明细菌降解原油的酶可 样的信封在使用前都需要灭菌 ２ 驯化过程中不断通入
。 ， ， ，
（） 以存在于 ，  ＳＯ ２ 并且逐步延长时间 与此同时逐步降低培养基的ｐＨ 因 。 此
３ 为了提高分解原油的效
，
率 研究人员尝试将分离得到的分 分
（
离
）
得到的脱硫细菌具有较强的利用 ＳＯ
２
和耐酸
；
的能力
解菌 ， 通过固定化技术 制成原油污染水 。 体的去污处理装  ３ 稀释涂布平板法常用来 ， 统计样品中的活菌数目 由于当 ， 两
置 该装置的优点是 为了达到较好的 个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个菌落 因
， 、 ，  。
去污效果 处理过程中除控制温度 ｐＨ 外 还可以采取 此用此计数方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低
（ ），  （） ；
等措施 答出一点 说明理 ４ 用稀释涂布平板法接种时所用的涂布工具是涂布器 据图
： 。  ， ，
由 分析 青霉素圆纸片周围的透明圈最大 说明五种抗生素中对
（） ，  。（）
答案 １ 受原油污染 原油 其他两组都含有葡萄糖 能 该菌抑制作用最强的是青霉素 ５ 长期保存菌种一般采用
，  ， ，
分解原油的细菌和不能分解原油的细菌都能利用葡萄糖 不能 甘油管藏法 即将菌液与灭菌的甘油混匀 放在－２０ ℃的冰箱
（） （ ）  。
起到筛选作用 ２ 细胞内 细胞膜上 或细胞外 中长期保存
（） （ ）  （ · ） ，
３ 可重复利用 易于产物和底物的分离 控制待处理污水 ７． ２０２０５ ３原创题 琼脂是制备固体培养基必需的材料 当
（ ）  ，
流速 处理过程中通气 控制污水流速可让原油充分分解 实验室大量使用固体培养基后 需要把废弃的固体培养基分
（ ）（  ， 。 ，
原油降解菌需要在有氧的条件下才能将原油彻底分解 其 解 避免污染环境 经多次实验鉴定 井式假单胞菌能使琼脂
）  ， 。 ， 、
他合理答案也可 彻底地溶解 属于琼脂分解菌 近年来 关于造成河 湖环境污
（） ，  ，
解析 １ 要分离能高效降解原油的菌株 应从受原油污染 染的发酵废液的脱色问题已引起人们的重视 糖蜜发酵废液的
，  ，
的土壤中采集样品 将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳 黑褐色色素所造成的色泽污染是环境保护所不容许的 为了脱
，  ， ，
源的固体培养基上 这样只有能分解原油的细菌才能被筛选出 除这种黑褐色色素 保护自然环境 研究人员从琼脂生产厂土
。（） ，  ，
来 ２ 有些单菌落周围出现较大的分解圈 说明细菌降解原 壤中筛选到多株具有脱色能力的琼脂分解菌 其体内能够产生
， ， ， 。

油的酶分泌到了细胞外 有些单菌落周围没有分解圈 说明降 脱色酶 琼脂分解菌通过氧化方式进行脱色作用（ ）
９３４ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
（） ， （） ： ，
１ 为了筛选可分解琼脂的细菌 配制的培养基是以 为 ２ 培养基的准备 在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中
， 。 、 、 、 、 ，
唯一碳源的固体培养基 此培养基称为  完成加水 装锅 加热 排气 保温保压适当时间后 切断电
（） ， ， ，
２ 实验小组采用 分离土壤溶解水样中的细 源 让灭菌锅内温度自然下降 待 时
。 ， ， ， ， ，
菌 操作时 接种环通过 灭菌 在第二次及以后 打开排气阀 旋开固定螺栓 开盖 取出灭菌的培养基等物
， ， 。 ，
划线时 总是从上一次划线的末端开始划线 这样做的目 。 品 在培养基中加入
，
灭菌的刚果红
，
溶液 待培养基冷却至
的是 ５０ ℃左右时倒平板 从功能上来看 该培养基属于
（） ，  ， 。
３ 鉴定具有脱色能力的琼脂分解菌时 可在培养基中加入 培养基 培养基中碳源主要是
， 
接种井式假单胞
， ， 
菌 适宜条件下培养一段时间 发现培养基上形成圆形凹
， ， 
穴 有的凹穴周围出现透明圈 原因是

。
（） ： ，
（） ， ，
３ 接种与观察 在无菌条件下 用 取０．１ ｍＬ稀释后
４ 进行污染物脱色时 将琼脂分解菌扩大培养获得更多菌 ，
（ “ ”  的菌悬液进行图１中 所示的操作 室温放置２～３
通过不断增加营养物质的比例 填 可以 或 ，
“ ”） ， ：
 分钟后倒置于恒温箱中培养 室温放置２～３分钟的目的是
不可以 提高其种群密度 分析说明原因 。

，
培养过程
。 ，
也可以提取脱色酶进行固定化酶脱色 在生 中定期观察 ， 菌落特征和透明圈的大小 图２ 。 中Ｄ／ｄ的值越
产实践中固定化酶的优点有  （ ） 表示该 （ 菌 ） 对纤维素分解能力越强
（ 至少写出两点 ）。  答案 （ １ ） ４×１０６ （ ２ 压力 ） 表的压力降为零 鉴别
（） （）
答案 １ 琼脂 选择培养基 ２ 划线分离法 灼烧 将 纤维 （ 素 ３ 移液枪 移液管 ） 甲 使菌液完全被培养基吸
（）
聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 ３ 糖蜜发酵废液 收 或使菌 （ 液 ） 渗入培养基 ， 中 大
，
的黑褐色色素 琼脂分解菌分解琼脂出现凹穴 有些琼脂分解
解析
，
１ 分析题图 可知接种到平板上的菌液被稀释了
， ， １０４ 倍 由此可求得每毫升菌原液中的细菌数大约为
菌体内有脱色酶 能通过氧化方式进行脱色作用 从而把糖蜜 （ ） 。（） ，
发酵废液的黑褐色色素脱除 （ ４ ） 不可以 扩大培养的液体 ４０／０．１ ， ×１０４＝４×１０６个 ２ 切断 ， 电源 让灭菌 ， 锅内温度自
， ，
然下降 待压力表的压力降为零时 打开排气阀 旋开固定螺
培养基由于营养物质浓度增高 渗透压也增高 不利于细菌生 ， ， 。 ，
； ，
长 可反 （ 复 ） 使用 既能与反应物接 ， 触 又能与产物分离 ， 
栓 开盖 取出灭菌的培养基等
，
物品 从功能上来看 加入刚果
解析 １ 分析题干信息可知 为了筛选琼 ， 脂分解菌 所用  红的 。 培 （ 养 ） 基属于鉴别培 ， 养基 该培养基中的碳源主要是纤维
的培养基应该 。 是 （ 以 ） 琼脂为唯一碳源的培养基 这种培养基称为 ， 素 ３ 在无菌条件下 （ 用移液枪或移液 ） 管取０．１ｍＬ 。 稀释后的
选择培养基 ２ 分离微生物常用划线分离法或涂布分离法 菌悬液进行图１中甲 稀释涂布平板法 所示的操作 室温放
。 ，  （
其中用到接种环的接种方法是划线分离法 操作时 接种环通 置２～３分钟的目的是使菌液完全被培养基吸收 或使菌液渗
， ，  ）。
过灼烧灭菌 在第二次及以后划线时 总是从上一次划线的末 入培养基中 透明圈的大小可说明该菌分解纤维素能力的
，  ， ，
端开始划线 这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得 强弱 图 ２ 中 Ｄ／ｄ 的值越大 表示该菌对纤维素分解能力
。（） ，  。
单个菌落 ３ 井式假单胞菌能够利用琼脂作碳源 长期培养 越强
菌落 ， 菌落所在琼脂被分解而使培养基出现凹穴 ， 有些琼脂分 ９． （ ２０１９四川泸州一诊 ， １１ ）（ １５分 ） 某校生物兴趣小组尝试通
解菌体内有脱色酶 ， 具有脱色能力 ， 则有的凹穴周围的糖蜜发  过分离 、 筛选纯净的酵母菌来生产苹果酒 。 请回答下列问题 ：
。（） （） ，
酵废液的黑褐色色素被脱除而形成透明圈 ４ 由于营养物  １ 在秋季的苹果园中 兴趣小组在树下的腐殖土壤中选取土
， ， ， ， 。
质浓度不断增高 渗透压也增高 不利于细菌生长 故扩大培养  样筛选菌株 理由是
， （）
琼脂分解菌时 通过不断增加营养物质的比例不能提高其种群 ２ 将土壤样品稀释液接种于以苹果汁为唯一碳源的液体培
。 ； ， 。 ，
密度 固定化酶的优点有可反复使用 既能与反应物接触 又 养基中培养 从功能上讲 该培养基属于 培
。 。
能与产物分离等  养基
， （） ， （
素养解读 本题将微生物的培养和分离方法应用于实际 体 ３ 培养一段时间后将培养液进行梯度稀释 用 填
、 。 ） ，
现了对科学探究素养中实验设计 结果分析要素的考查  工具名称 将不同稀释度的菌液接种到平板上 并在恒温
（ 、 ， ） ， ，
８． ２０１９江苏南京 盐城三模 ３３ 刚果红能够与纤维素形成红 条件下培养２ ｄ 然后根据酵母菌菌落特征挑取单菌落 再
， 。 。
色复合物 可用其鉴定纤维素分解菌 某研究小组将滤纸埋在 将挑取的单菌落扩大培养后进行分离纯化并保存 在挑
， ， ， ？ 。
土壤中 ３０天后从滤纸周围取６ ｇ土壤样品 加入３０ ｍＬ无菌 选菌落时 下列哪项不能作为挑选依据
， ， ，
水中溶解 得
：
到了富有纤维素分解菌的菌原液 并进行实验 回 Ａ．菌落的形状 Ｂ．菌落的大小
答下列问题 Ｃ．菌落的数量 Ｄ．菌落的颜色
（） ： ，  （） ，
１ 稀释菌原液 为确定合适的稀释倍数 小组成员取１ ｍＬ菌 ４ 兴趣小组在分离酵母菌的同时也进行了酵母菌的计数 除
， ，  ，
原液进行如图所示的操作 在统计菌落时 发现平板上的 用上述计数法外 也是测定微生物数量
，  ， ，
平均菌落数为４０个 则每毫升菌原液中的细菌数大约为 的方法 该方法测定的是细胞的总数 若要检测酵母菌的
。  ， ，
个 死活 可用台盼蓝染液进行鉴定 依据的原理是
 。
 （） ，
５ 筛选出纯净的酵母菌后便可用于苹果酒的生产了 生产苹
 ，
果酒的前期需要通入氧气 其目的是
 。
（） （） （）

答案 １ 该土壤中有大量酵母菌 ２ 选择 ３ 涂布器专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９３５
（） 。
Ｃ ４ 显微镜直接计数 死细胞的细胞膜失去选择透过 图解
， （ ， ：
性 能被台盼蓝染色 或活细胞的细胞膜具有选择透过性 不 实验步骤
） （） ，
能被台盼蓝染色 ５ 让酵母菌进行有氧呼吸 大量繁殖  ①把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养
。（） ， 。
解析 本题主要考查科学探究中的方案探讨 １ 在苹果 基１的表面 进行培养
， ，
树下的腐殖土壤中选取土样筛选菌株 理由是该土壤中有大量 ②待其长出密集的小菌落后 用影印法接种到不含链霉素的
。（） ， ，
酵母菌 ２ 将土壤样
。
品稀释液接种
，
于以苹果汁为唯一碳源 培养
。
基２上 随即再影印到含有链霉素的培养基３ 上 进行
的液体培养基中培养 从功能上讲 该培养基属于选择培养 培养
。（） ，  ， 。
基 ３ 培养一段时间后将培养液进行梯度稀释 用涂布器将 ③在培养基３上出现了个别菌落 将其挑选出来
， ， 
不同稀释度的菌液接种到平板上 并在恒温条件下培养２ｄ 然
， 
后根据酵母菌菌落特征挑取单菌落 再将挑取的单菌落扩大培
。 ， 
养后进行分离纯化并保存 在挑选菌落时 不能作为挑选依据
。（） 
的是菌落的数量 ４ 兴趣小组在分离酵母菌的同时也进行
， ， 
了酵母菌的计数 除用上述计数法外 还可以用显微镜直接计
， ， ， 
数 该方法测定的是细胞的总数 若要检测酵母菌的死活 可用
， 
台盼蓝染液进行鉴定 依据的原理是死细胞的细胞膜失去选择
， ， ，
透过性 能被台盼蓝染色 而活细胞的细胞膜具有选择透过性
。（） ， 
不能被台盼蓝染色 ５ 生产苹果酒的前期需要通入氧气 其 ：
， 。  请 （ 回 ） 答下列问题
目的是让酵母菌进行有氧呼吸 大量繁殖
１０． （ ２０１９四川广安 、 眉山 、 内江 、 遂宁一诊 ， １１ ）（ １５分 ） 某研究  １ 配制培养基时除了满足 ，
“ ”  这些基本 、 的营养条 、 件外 还需满 。 足微生物生长对特殊营
小组利用 滤膜法 对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活
。 ：  （） 养物质 ， 氧气的要求 。
菌数目的测定 回答下列问题
（） ２ 从功能上看 含有链霉素的培养基属于
 ， 。
１ 研究人员向培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液
， ， ， 若在培养基中加入 则长出的菌落颜色为黑色
 ，
后 再将污水样滴加进去振荡摇匀 一段时间后 若观察
， 由图可知 １号培养基接种的方法为
到溶液颜色变化情况为 说明微生
 。
。
物在培养过程中产生了ＣＯ ２ 若要用 ， 酸性重铬酸钾检测  （ ３ ） 对培养基２和３进行比较 ， 在培养基２上找到与３上相应
微生物在培养过程中是否产生了酒精 具体做法是 
的菌落
，
挑取其中一个菌落接种到
（
填
“
含链霉
 ” “ ”） ，
。 素 或 不含链霉素 的培养基上 如果有较多的菌落出
 ，
（） “ ” ， 现 则说明该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之
（ “ ” “ ”）。
２ 利用 滤膜法 测定
，
大肠杆菌的数目时 应先制备牛肉膏
（） 填 前 或 后 、 ，
蛋白胨固 ， 体培养基 该培养基的灭菌方法是 ，  ４ 培养基３中的菌落比１ 。 ２中的菌落少很多 这说明
灭菌后待培养基冷却至 ℃左右时 在
。 （） 、 、 、
附近倒平板  答案 １ 碳源 氮源 水 无机盐 ｐＨ
（） （ “ ”“ ” “ ”） （）
３ 滤膜的孔径应 填 大于 小于 或 等于 大 ２ 选择培养基 伊红美蓝 稀释涂布平板法
。 （）
肠杆菌直径 将滤膜转移到伊红美蓝培养基上培养一段 ３ 含链霉素 前
， ， （）
时间 然后统计 色的菌落数目 就可估算出单位 ４ 基因突变具有低频性的特点
， 、 。
体积样品中大肠杆菌的数目 但这样得到的统计值往往 解析 本题主要考查科学探究中的方案探讨 结果分析
， 。 （） 、 、 、
要比实际值低 原因是  １ 配制培养基时在提供碳源 氮源 水 无机盐这些基本营
（） ， 、
答案 １ 由蓝变绿再变黄 取２ｍＬ培养液的滤液注入干 养条件的基础上 还需满足微生物生长对ｐＨ 特殊营养物质
， 。（） ，
净的试管中 再向试管中滴加０．５ ｍＬ溶有０．１ ｇ重铬酸钾的 以及氧气的要求 ２ 链霉素是抗生素 对大肠杆菌具有选
， （） 。 ， 。
浓硫酸溶液 振荡摇匀后观察 （ 溶 ） 液颜色的变化 ２ 高压蒸  择作用 在 ， 伊红美蓝培养基上 大肠杆菌菌落颜色为 。 黑 （ 色 ）
汽灭菌 ５０ 酒精 ， 灯火焰 ３ 小于 黑 两个或多个大肠  由题图可知 １号培养基接种的方法为 ， 稀释涂布平板法 ３
杆菌连在一起时 平板上只能观察到一个菌落 、 。 培养基 ， ２和培养基３上相应的菌落 是同一个 ， 大肠杆菌繁殖
（ 解 ） 析 本题主要考查科学探究中的方案探讨 结果分析  形成的 在培养基２上找到与３上 ， 相应的菌落 挑取其 ， 中一个
１ 微生物细胞 ； 呼吸产生的ＣＯ ２ 可使溴麝香草酚蓝水溶液由  菌落接种到含链霉素的培养基上 若出现较多 。 的 （ 菌 ） 落 则说明
蓝变绿再变黄 微生物无氧呼吸产生的酒精可以用酸性重铬 该抗性基因突变发生在该菌接触链霉素之前 ４ 抗链霉素
， ， ，
酸钾进行检测 即取２ ｍＬ培养液的滤液注入干净的试管中 性状是大肠杆菌基因突变后获得的性状 ３号培养基中的菌
， 、 ， 。
再向试管中滴加０．５ ｍＬ溶有０．１ ｇ重铬酸钾的浓硫酸溶液 落比１号 ２号中的菌落少很多 这说明基因突变频率很低
。（）  （ ， ）
振荡摇匀后观察溶液颜色的变化 ２ 微生物培养基常用高 １２． ２０１９山东聊城二模 ３７ 某研究小组对酸奶中乳酸菌数量
； ，  ， ， ，
压蒸汽灭菌法进行灭菌 待培养基冷却至５０ ℃左右时 在酒 进行了测定 取６支灭菌后的试管 分别加入９ ｍＬ无菌水 标
。（）  、 、 、 、 、 ，
精灯火焰附近倒平板 ３ 滤膜的孔径应小于大肠杆菌直 号为Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ 吸取１ ｍＬ酸奶样液加入试管Ａ
； ，  ， １ ２ ；３ ４ ５ ６ ， ， １
径 伊红美蓝培养基上大肠杆菌菌落为黑色 因此可通过统计 中 混合均匀 然后从Ａ 中吸取１ ｍＬ溶液 加入Ａ 中 混合
， 。  ； ， １ ２
黑色菌落的数目 计算出单位体积样品中大肠杆菌数目 由 均匀 重复上述操作 最后从试管Ａ 中取０．１ ｍＬ样液进行涂
，  。 ６ 、
于培养基中两个或多个大肠杆菌连在一起时 平板上只能观 布培养并计数 涂布的三个平板上菌落数分别为２５１个 ２６５
， 。  、 。 ：（ ）
察到一个菌落 因此理论上统计值比实际值偏低 个 ２７６个 回答下列问题 １６分
（ ）  （） ，
１１． 新题型 下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关 １ 该小组在取样涂布前 需要随机取若干灭菌后未接种的（ ）
９３６ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
， ，
平板先行培养一段时间 这样做的目的是  Ｄ．可用刚果红染料鉴定 看菌落周围是否出现透明圈
。 （ ） ，
 答案 ＡＢＤ 培养基 液 中以纤维素作为唯一碳源时 只
（） ， ，
２ 制备乳酸菌培养基过程中 倒平板时培养基温度不能太 有能利用纤维素的微生物才能生长繁殖 从而筛选出纤维素
， 。 （ ）， ；
低 原因是 平板 分解菌 纤维单胞菌 Ａ正确 对培养基灭菌采用高压蒸汽
， ， ， ； ，
冷凝后 要将平板倒置 其目的是  灭菌法进行灭菌 Ｂ正确 ④的接种方法是平板划线法 利用
。 、 、 ，
（） ，  平板划线法可对 ， 微生物 ； 进行接种 纯化 分离 但是不能对微
３ 根据三个平板中菌落数 可推测原酸奶中乳酸菌浓度为 生物进行计数 Ｃ 错误 刚果红可以与纤维素形成红色复合
，  ， ， ，
个／ｍＬ 该方法测定的乳酸菌含量与实际值相比 物 当纤维素被纤维素酶分解后 红色复合物无法形成 出现
，  ， ，
偏小 其原因是 透明圈 因此可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 Ｄ
。 。
正确
（） 
答案 １ 检测培养基平板灭菌是否合格 名师点睛 掌握土壤中纤维素分解菌的分离的原理和操作
（） ，  。
２ 温度太低会导致培养基凝固 无法铺展均匀 既可使培 流程是解答本题的关键 要注意选择培养基与鉴别培养基的
，  。 ： ，
养基表面的水分更好地挥发 又可防止皿盖上的水珠落入培 区分 ①选择培养基 在培养基中加入某种化学物质 以抑制
，  ， 。
养基 造成污染 不需要的微生物的生长 进而筛选出所需要的微生物 ②鉴
（） ，  ： ，
３ ２．６４×１０９ 两个或多个乳酸菌连在一起时 平板上只能观 别培养基 在培养基中加入某种指示剂或化学药品 用以鉴别
 。
察到１个菌落 不同种类的微生物
（） ，  （ ， ）
解析 １ 该小组在取样涂布前 为了检测培养基平板灭 １５． ２０２０届江苏南京一模 １９ 下列关于微生物培养和利用的
，  ， （ ）
菌是否合格 需要随机取若干灭菌后未接种的平板先行培养 叙述 错误的是
， 。（） 
一段时间 看是否有菌落生成 ２ 制备乳酸菌培养基过程 Ａ．接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育
， ， ， ， 
中 若温度过低 会导致培养基凝固 无法铺展均匀 故倒平板 检测
。 ， ，

时培养基温度不能太低 平板冷凝后 要将平板倒置 这样既 Ｂ．接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个
，

可使培养基表面的水分更好地挥发 又可防止皿盖上的水珠 菌落
， 。（） ，
落入培养基 造成污染 ３ Ａ 中相当于稀释了１０６ 倍 三个  Ｃ．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分
（ ６ ） （ ），
平板中平均菌落数为 ２５１＋２６５＋２７６ ÷３＝２６４ 个 故１ ｍＬ 解菌
（ ），
原酸奶中乳酸菌数为２６４÷０．１×１０６＝２．６４×１０９ 个 当两个或 Ｄ．利用刚果红培养基上是否形成透明圈可筛选纤维素分解菌
， ， ，
多个细胞连在一起时 平板上观察到的是一个菌落 故该方法 答案 Ａ 本题以微生物培养和利用为知识载体 考查考
。 、 、 、
测定出的乳酸菌含量与实际值相比偏小  生运用所学知识对生物实验的目的 原理 方法和操作步骤
（ ， ） 、 、 ，
１３． ２０２０浙江嘉兴测试 １７ 如图是划线分离法接种微生物的 相关的操作技能分析 讨论 评价等能力 试题通过对实验操
， （ ） ， 。
示意图 下列叙述错误的是  作和实验方法的设计 体现了科学探究素养 检测培养基是
：
 否被污染的方法是 将未接种的培养基在适宜的温度下放置
， ， ；
 适宜的时间 观察培养基上是否有菌落产生 Ａ错误 接种时
， ， ，
 连续划线 可将聚集的菌种逐步分散 最后可形成单个菌落
； ，
 Ｂ正确 在以尿素为唯一氮源的培养基中 只有尿素分解菌能
， ，
 够生长繁殖 尿素分解菌合成的脲酶能将尿素分解成氨 氨会
，
 使培养基的碱性增强 因此以尿素为唯一氮源且含酚红的培
， ；
Ａ．该接种过程一般需灼烧接种环５次  养基可选择和鉴定尿素分解菌 Ｃ正确 当纤维素被纤维素酶
， — ，
Ｂ．划线结束可看到划线末端出现不连续单菌落  分解后 刚果红 纤维素的复合物就无法形成 培养基中会出
， ，
Ｃ．若培养的是尿素分解菌 可加入酚红指示剂  现以纤维素分解菌为中心的透明圈 可通过是否产生透明圈
， 。
Ｄ．该接种方法不能准确计数培养液中微生物数量  来筛选纤维素分解菌 Ｄ正确
， ， （ 、 、 、 ， ）
答
，
案 Ｂ
；
根据题图信息 共划线４次 需要灼烧接种环５ １６． ２０１９江苏苏 锡 常 镇四市二模 １８ 研究小
，
组利用微生物
次 Ａ正确 划线结
，
束后需
；
要经过培养才可以在划线
，
末端看到 实验操作技术来探究某池塘中大肠杆菌数量 下列叙
（
述正确
）
不连续的单菌落 Ｂ错误 若培养的是尿素分解菌 可加入酚 的是
， ； ， 、
红指示剂 Ｃ正确 该接种方法用于单菌落的分离 不能准确 组别 部分操作过程 结论
， 。
（ 计数培养液中微生物数量 Ｄ正确 ， ） （  进行涂布平板操作时 ， 将１０ｍＬ菌液滴加到培养基的表面
１４． ２０１９江苏六合高级中学月考 ２５ 如图为纤维单胞菌 能 Ⅰ ，
） 。 （ ） 后 再用灭菌后的涂布器推匀
产生纤维素酶 的获取过程 下列有关叙述正确的是 多选 ， ，
（ ） Ⅱ 涂布完成后 在培养皿上盖上做标记 并将培养皿倒置
 ， 、 、
重复实验获得了四个平板 其中的菌落数分别为２１２ ３８１
Ⅲ 、 ，
 １５７ １８３ 则平均值应为１８４
 ， ， “ ”
实验组平板上有３８个菌落 空白对照组有５个 则 ３８－５
Ⅳ
 作为池塘中大肠杆菌数量计算的依据

Ａ．Ⅰ Ｂ．Ⅱ Ｃ．Ⅲ Ｄ．Ⅳ
（ ）  ， （
Ａ．①②③④培养基 液 都应以纤维素为唯一碳源 答案 Ｃ 进行涂布平板操作时 取少量菌液 不超过
 ） ， ，
Ｂ．图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法 ０．１ ｍＬ 滴加到培养基表面 再用灭菌后的涂布器推匀 Ａ错
； ， ， ，

Ｃ．④所用的接种方法可对培养的微生物进行计数 误 涂布完成后 在培养皿底做好标记 并将培养皿倒置 Ｂ错专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９３７
； ，（ （） ，
误 计数时一般选择菌落数在３０～３００的平板进行计数 ２１２ ２ 为了筛选降解苯酚的细菌 本实验所选用的培养基必须
） ， ； 。 ，
＋１５７＋１８３ ÷３＝１８４ Ｃ正确 设置空白对照组的目的是判断 以 为唯一碳源 由图可知 本实验选用
， ， 。
有无杂菌污染 题目中空白对照组有５个菌落 说明在培养过 获得降解苯酚的单菌落
， ， 。 （） ，
程中有杂菌污染 应重新开展实验 Ｄ错误  ３ 分离纯化得到能高效降解苯酚的细菌 应对其进行
： ； ， ，
知识归纳 涂 （ 布操作 ①将涂 ） 布器浸在盛有酒精的 ； 烧杯中  培养 培养后若要测定培养液中 ， 该菌的数目 可在显微
②取少量菌液 不超过０．１ ｍＬ 滴加 ， 到培养基表面 ， ③将沾有  镜下用 。 直接计数 该方法的测量值比活
少量 ； 酒精的涂布器在火焰上引燃 待酒精燃尽 ， 后 冷却 ８～  菌的 ， 实际数目 ， 最后应将菌种划线 。 接种在斜面
１０ ｓ ④用涂布器将菌均匀地涂布在培养基表面 涂布时可转 上 ３７ ℃培养２４ ｈ后 置于 保存
， 。  （） （ ）
动培养皿 使菌液分布均匀 答案 １ 高压蒸汽灭菌 用牛皮纸 或报纸 包扎器皿
（ ， ）（ ）  （） （ ） （）
１７． ２０１９浙江金丽衢十二校联考 ３２ ７分 某同学要从土壤 ２ 苯酚 涂布分离法 稀释涂布平板法 ３ 扩大 血细
， 
中分离出能分解尿素的细菌 并统计单位体积土壤样液的活 胞计数板 大 ４ ℃冰箱
。 ， ，  （）
菌数目 按照培养基的配方称取 并将各种物质溶解后 用蒸 解析 １ 实验用的培养基和培养皿采用高压蒸汽灭菌法
、 ， 。 ：  ， ， （
（ 馏水 ） 定容 灭菌 制成固体培养基备用 回答问题  灭菌 ） 为了减少 。 灭 （ 菌 ） 后器皿被污染 灭菌前应用 ， 牛皮纸 或报
１ 配制该 ， 培养基应加入的凝固剂和显色剂分别是 。  纸 包扎器皿 ２ 为了筛选 。 降解苯酚的细菌 本实验的培养 ，
加入培养基的三角瓶需用 盖上后灭菌
（） ，  基必须以苯酚作为唯一碳源 根据题 。 图 （ 中 ） 的稀释操作可知
２ 培养分解尿素的细菌时 在接种前需要检测培养基是否
。 该实验选用了涂布分离法获得单菌落 ３ 分离纯化得到能
 ， ，
被污染 采用的检测方法是
。 高效降解苯酚的细菌后 对其进行扩大培养 要测定该菌数目
 ，
（） ， 可在显微镜下用血细胞计数板直接计数 该方法的测量值比
３ 若要统计土壤样品中尿素分解菌的数目 宜采用  ， 。
， 活菌的实际数目大 因为有些死亡的细菌还未降解掉 菌种
法接种 根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体 ， ， 。
， 划线接种在斜面上 ３７ ℃培养２４ ｈ后 置于４ ℃冰箱保存
积 统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中的活 （ ， ）（ ）“
。 １９． ２０１９江苏扬州一模 ３０ １４分 手机上的细菌比马桶上
菌数 一同学在稀释倍数为１０－４的培养基中测得平板上 ？”
， 的还多 央视和北京卫视的记者都通过实验对手机和马桶
菌落数的平均值为２４．６ 则每升样品中的活菌数是  ， 。 ：
。 ， 上的细菌数量进行了调查 调查结果如下 请回答下列问题
与血细胞计数板计数法相比 此计数方法测得的
，
菌体数较 其原因是 
。

（） （ ）
答案 １ 琼脂糖和酚红 顺序颠倒不得分 封口膜 
（） （ ：
２ 将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间 或 
）， （）
３７ ℃恒温箱中培养 观察培养基上是否有菌落产生 ３
， 
涂布 ２．４６×１０９ 少 由于两个或多个细菌连接在一起 往
， 
往统计的是一个菌落或死菌未计入 故用此方法测得的细菌
（ ） 
数偏低 其他合理答案酌情给分
（） ， 
解析 １ 配制该培养基时添加琼脂糖作为凝固剂 在培
； 
养基中添加酚红作为分离分解尿素的细菌的显色剂 加入培
。（） 
养基的三角瓶需用封口膜盖上后灭菌 ２ 检测培养基是否
， 
被污染时 可将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时
， ， ， 
间 观察培养基上是否有菌落产生 若没有菌落产生 则表明
。（） 
培养基未被污染 ３ 若要统计土壤样品中尿素分解菌的数
目 ， 宜采用涂布分离法接种 ； 由题意可知 ， 每升样品中的活菌  （） ，
； ， １ 该实验需制备培养基 制备培养基的操作顺序是
数是２４．６×１０４×１０４＝２．４６×１０９ 与血细胞计数板计数法相比  。（ ）
， 用下列字母和箭头排序

用此计数方法测菌体数时 由于两个或多个细菌连接在一起
， ， ， ａ．倒平板 ｂ．计算 ｃ．熔化 ｄ．称量 ｅ．灭菌
时 往往统计的是一个菌落 再有死菌未计入 故测得的细菌 （） ，
。 ２ 根据图中结果可知 两电视台展示的实验均采用
数偏低  ，
（ ， ） 、 法进行接种 该方法使用的接种工具是
１８． ２０２０浙江七彩阳光联考 ２９ 苯酚是染料 农药和医药等行 。
， 。
业的重要生产原料和中间体 是工业废水的常见污染物之一  （） （
， ３ 通过观察菌落的 等 至少两
某研究小组为了处理高浓度含苯酚废水 从处理废水的活性 ）， 。
， 项 可知手机屏幕和马桶按钮上都存在多种微生物
污泥中分离筛选得到能高效降解苯酚的细菌 如图为实验过 （） ，
。 ４ 两电视台实验操作无误且完全一致 但报道结果截然不
程部分图示  ， 。
同 你认为原因可能是
 （） ， ，
５ 实验员按图中方法取样 测定某手机屏幕的细菌数量 从
 ， ，
１０ ｍＬ菌悬液中取出１ ｍＬ 稀释１００倍 在３个平板上分
 ， ，
别接入０．１ ｍＬ稀释液 经适当培养后 ３个平板上的菌落
 、 ，
数分别为３５ ３６和３７ 则该手机屏幕的细菌约为
（）  ，
１ 实验用的培养基和培养皿采用的灭菌方法是 个／ｃｍ２ 该方法计数的结果往往比实际结果偏
； ，  （ “ ” “ ”）。
法 为了减少灭菌后器皿被污染 灭菌前应该 填 高 或 低
。 （） （）

答案 １ ｂ→ｄ→ｃ→ｅ→ａ ２ 稀释涂布平板 涂布器（ ）
９３８ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
（） 、 、 、 、 （） ， ，
３ 形态 大小 颜色 隆起程度 边缘特征 ４ 两实验所取 菌 并进行药物防治实验 为苹果干腐病的防治提供合理的建
（ ） 。 ， ，
样本不同 取样部位不同或取样时间不同  议 经过查阅资料 确定了分离时所用的ＰＤＡ培养基配方
（） ：
５ １．４４×１０４ 低  如下表所示
、
解
、
析 本题主要考查科学探究中实验设计
。
与
（
操
）
作 过程分
物质 马铃薯 葡萄糖 自来水 氯霉素 琼脂
析 根据获得的数据用数学方法进行计算等 １ 制备培养
： ， 含量 ２００ｇ ２０ｇ １０００ｍＬ ０．３ｇ ２０ｇ
基的操作顺序 计算→称量→熔化→灭菌→倒平板 即 ｂ→ （）
。（） ， １ 该真菌在上述ＰＤＡ培养基上生长时会形成肉眼可见的
ｄ→ｃ→ｅ→ａ ２ 分析题图中菌落 ， 分布特点可知 两电视台 
白色绒毛状的
。
氯霉素的作用是
均采用稀 。 释 （ 涂 ） 布平板法进行接种 该 、 方法 、 需要使 、 用涂布器 、 进  。 制备培养基时 ， ①灭菌 、 ②倒平板 、 ③调节ｐＨ的先
行涂布 ， ３ 通过观察菌落的形态 大小 颜色 隆起程度 。 边  后顺序是 （ 用序号作答 ）。
缘特征等 可知手机屏幕和马桶按钮上都存在多种微生物 （） ，
（） ，  ２ 用剪刀从染病枝条溃疡处剪取１×１ ｃｍ２ 的患病组织 并
４ 两电视台实验操作无误且完全一致 但报道结果截然不 ， ，
， ，  用０．１％的升汞进行消毒 置于培养基中心 在合适条件
同 可能是两实验所取样本不同 取样时间不同或取样部位不 ， 。 ，
。（） ｛［（  下进行培养 共培养五组 待菌落形态特征稳定后 用
同等导致的 ５ 该手机屏幕的细菌约为 ３５ 个＋３６个＋
） ］ ｝ （ ）  法将该致病菌分别转移至含有等量０．５％苦水碱
３７个 ÷３ ÷０．１ ｍＬ×１０２×１０ ｍＬ ÷ ５ ｃｍ×５ ｃｍ ＝ １．４４× 、 、
。 ，  剂 ４０％福美砷 清水的上述ＰＤＡ培养基中进行抗药性实
１０４个／ｃｍ２ 当两个或多个细胞连在一起生长时 平板上观察 ， 。
，  验 并每隔２４ ｈ记录一次 划线区域的菌落数目
到的是一个菌落 故该方法统计的菌落数往往比活菌的实际 ，
。  ①选取菌落数目稳定的记录作为结果 这样可以防止因
数目低 。
，  而导致遗漏菌落数目
名师点睛 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识 要 ：
， ，  ②记录结果如下
求考生能够识记培养基的成分 学会制备培养基 掌握微生物
， 
分离和计数的方法 能够根据实验结果推测实验产生误差的 小组 ０．５％苦水碱剂 ４０％福美砷 清水
。 
原因等 菌落数目 ２ ８ １７
（ ， ）  ， ，
２０． ２０１８内蒙古呼
，
伦贝尔一模 ３７ 工业
：
上可以利用微生物由
从结果分析可知 能很好地抑制该真菌的生长
 。
纤维素生产乙醇 请回答下列相关问题
（） ， 适合防治苹果干腐病
 （） （）
１ 土壤中 ， 富含分解纤维素的微生物 若要分离得到该种微 答案 １ 菌落 抑制细菌等杂菌生长 ③①② ２ 平

生物 可将土 ， 壤浸出液接种到含有 染液的培 板划线 最后 培养时间不足 ０．５％苦水碱剂
养基上 。 培养 挑取培养基上 的菌落进一步扩

解析
（
１
）
ＰＤＡ培养基含有琼脂
，
应为固体培养基
，
茶藤子
大培养  。
葡萄座腔菌在该培养基上生长时会形成肉眼可见的菌落 氯
（ ２ ） 若将１００ ｍＬ分解纤维素的微生物培养液稀释１０８ 倍 ， 分 霉素是一种抗生素 ， 可抑制细菌等杂菌生长 。 制备培养基时 ，
别取１ ｍＬ稀释液接种到５个培养基上 ， 形成了２７ 、 ２１５ 、  应先调节ｐＨ ， 再灭菌 ， 最后倒平板 。（ ２ ） 分离该真菌 ， 可用平
、 、 ， 、
２８７ ３１６ ２５１个菌落 则原菌液中每毫升有微生物  板划线法将该致病菌分别转移至含有等量０．５％苦水碱剂
， ， 、 ，
个 该过程采取的接种方法是 该方法 ４０％福美砷 清水的上述ＰＤＡ培养基中进行抗药性实验 最
， 。 ，
所得测量值比实际值偏低 原因是  后划线区域最易形成单菌落 应每隔２４ｈ记录一次最后划线
（） ： 。 ，
３ 写出由纤维素生产乙醇过程的反应式  区域的菌落数目 ①选取菌落数目稳定的记录作为结果 可
。 。 ，
 以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目 ②据表可知
（） ，
答案 １ 刚果红 有透明圈  含０．５％苦水碱剂的培养基中菌落数目最少 说明０．５％苦水
（） ， 。
２ ２．５１×１０１０ 稀释涂布平板法 当两个或多个细菌连在一 碱剂能很好地抑制该真菌的生长 适合防治苹果干腐病
， ， （ ） ，
起时 平板上观察到的只是一个菌落 所以该方法所得数值比２２．羧甲基纤维素钠 ＣＭＣ 是常用的食品添加剂 不能被人体消
， 。
实际值偏低  化吸收 因此通常被认为是安全的食品添加剂 研究者用含
， ，
（ ３ ） 纤维素 Ｃ  １  酶   Ｃ Ｘ  酶 →纤维二糖 葡  萄  糖  苷  酶 →葡萄糖 ；  １．０％ＣＭＣ ， 无菌水作为饮 、 用水 连续 。 饲喂实验小鼠１２周 测定
酶 （ ，  小鼠体重 结果如图１ 图２所示
Ｃ Ｈ Ｏ →２Ｃ Ｈ ＯＨ＋２ＣＯ ＋能量 不写能量给分 不写酶
６ １２ ）６ ２ ５ ２ 
不给分
， 
解析 富含纤维素的土壤中 含有大量以纤维素为碳源的
。 
纤维素分解菌 刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合
， ， ， 
物 当纤维素分解后 复合物无法形成 培养基中会出现以纤
， 
维素分解菌为中心的透明圈 通过此方法来筛选纤维素分解
。 ， （ 
菌 选择菌落数在 ３０～３００ 的平板计数 所以 ２１５＋２８７＋
） ， 
２５１ ／３×１０８＝２．５１×１０１０个 统计菌落数时常采取的接种方法
。 ， 
是稀释涂布平板法 当两个或多个细胞连在一起时 平板上
， 。 图１ 普通环境饲养小鼠的实验数据
观察到的只是一个菌落 所以该方法所得数值比实际值偏低
， 
纤维素在Ｃ 酶和Ｃ 酶的催化作用下水解为纤维二糖 纤维
１ Ｘ 。 
二糖在葡萄糖苷酶催化作用下水解为葡萄糖
（ ， ） 
２１． ２０１８辽宁抚顺３月模拟 ３７ 苹果干腐病是一种名为茶藤
（ ） ， 
子葡萄座腔菌 真菌 引起的疾病 病菌通常由枝条伤口入
， 。

侵 在伤口处形成溃疡 某中学的科研小组计划分离出该真专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９３９
， ， 、
 的环境相关 生活在无菌环境生长更快 说明Ａ Ｂ组体重差
、 ，
 值与 Ｃ Ｄ 组体重差值 均与小鼠消化道内的各种微生物
。
 有关
（）
 ２ ①为研究小鼠摄入的ＣＭＣ是否改变了其肠道内各种微
， ，
 生物的比例 只能在普通环境下做研究 要选Ａ组和Ｂ组来
； ， ；
 完成实验 选择ａ或ｃ 则Ｂ组无法作出对照 固体培养基用
、 ， 。
于微生物的分离 计数 所以选ｄ ②由于消化道接近无氧的
 ， ，
环境 所以要在无氧的条件下培养 结果是细菌在固体培养基
 。
上形成肉眼可见的菌落 ③通过菌落的分析可以得知微生物
图２ 无菌环境饲养小鼠的实验数据  ， 。
（） 。 种类 根据菌落的数量还可以计算出不同微生物的比例
１ 图１所示实验中的对照处理是 图１ （） ： 、
， 。 、 ３ 根据实验设计的原则 对照性原则 单一性原则和等量原
结果显示 食用ＣＭＣ能够 综合图１  ， ， ，
， ， 则 被移植小鼠都是无菌小鼠 饮用水也要都用无菌水 不同
图２结果 通过比较 说 ，
。 的是提供粪便小鼠 实验组用饲喂含ＣＭＣ无菌水１２周的普
明ＣＭＣ的这种作用依赖于小鼠消化道内的各种微生物  ， 。
（） ： 通小鼠 对照组用饲喂无菌水１２周的普通小鼠
２ 有人提出 小鼠摄入的ＣＭＣ改变了其肠道内各种微生物 （ — ）
。 ， ： ２３． 科学思维 归纳与概括 细菌培养过程中分别采用了高压
的比例 为检验上述推测 研究者设计了如下实验  、 、 ，
（ ） 蒸汽 酒精 火焰灼烧等几种不同的处理 这些方法依次用于
①搜集 填图中分组编号 小鼠粪便制成悬浮液 （ ）
（ ） 。 杀灭哪些部位的杂菌
涂布于 填下列选项前的序号 上  、 、 、 、
Ａ．接种环 手 培养基 Ｂ．高压锅 手 接种环
ａ．以ＣＭＣ为碳源的液体培养基  、 、 、 、
Ｃ．培养基 手 接种环 Ｄ．接种环 手 高压锅
ｂ．全营养液体培养基

答案 Ｃ 一般来说灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧
ｃ．以ＣＭＣ为碳源的固体培养基  ， 、
失生长繁殖的能力 培养基 培养器皿和接种环等都需要灭
ｄ．全营养固体培养基 。 ，
（ “ ” “ ”）  菌 消毒是指杀死物体表面或内部一部分微生物 对被消毒
②接种后置于 填 无氧 或 有氧 条件下培 ， 。 ，
，  的物体基本无害 操作者的手需要消毒 高压蒸汽灭菌法 通
养 通过观察 以初步鉴定小鼠消化道中的微生 。 。
。  常用于培养基的灭菌 用酒精擦拭双手是消毒的一种方法
物类群 ， ，
，  用火焰灼烧 可以迅速而彻底地灭菌 适用于微生物的接种工
③统计比较 以确定 ， 。
。  具 如接种环
推测是否成立 （ — ）
（） “ ２４． 科学思维 归纳与概括 以下关于Ｇ６玻璃砂漏斗过滤灭菌
３ 为进一步研究 小鼠体重变化是否由ＣＭＣ引起的小鼠消 ， （ ）
”，  的叙述 错误的是
化道内各种微生物比例改变所致 研究者设计了粪便移 ，
， 。  Ａ． Ｇ６玻璃砂漏斗孔径小 细菌不能滤过
植实验 并检测了被移植小鼠体重的变化 请将下列选
（ ）， 。  Ｂ．灭菌前应将漏斗用盐酸浸泡和抽滤去酸
项填入下表中 选填选项前的符号 完成实验方案
 Ｃ．过滤时可采用抽滤方式加快灭菌速率
组别 被移植小鼠 提供粪便小鼠 饮用水
 Ｄ．该灭菌方法适用于加热易分解物质的灭菌
，
实验组  答案 Ｂ Ｇ６玻璃砂漏斗在Ｇ１～Ｇ６规格中孔径小 细菌不
， ； ，
对照组 无菌小鼠 同上  能滤过 Ａ正确 使用前 Ｇ６玻璃砂漏斗要在１２１ ℃下用纸包
， ， ，
ａ．普通小鼠  好灭菌
，
使用后 Ｇ６玻璃砂漏斗需用１
，
ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ浸
，
泡 并抽
；
ｂ．无菌小鼠  滤去酸 再用蒸馏水洗至洗出液呈中性 干燥后保存 Ｂ错误
， ；
ｃ．饲喂含ＣＭＣ无菌水１２周的普通小鼠  抽滤可加快灭菌速率 Ｃ正确 该灭菌方法适用于加热易分解
（ ） ， 。
ｄ．饲喂无菌水１２周的普通小鼠  物质 如尿素 的灭菌 Ｄ正确
（ ， ） “ ” ，
ｅ．含１．０％ＣＭＣ的无菌水  ２５． ２０１５江苏单科 １９ 做 微生物的分离与培养 实验时 下
（ ） （ ）
ｆ．无菌 （ 水 ） 不含ＣＭＣ  列叙述正确的是 ， ，
答案 １ 饲喂不含ＣＭＣ的无菌水 使小鼠体重增加  Ａ．高压灭菌加热结束时 打开放气阀使压力表指针回到零后
、 、
Ａ （） Ｂ组体 、 重差值与Ｃ Ｄ组体重差值  开启锅盖 ， ，
２ ①Ａ Ｂ ｄ ②无氧 菌落 ③不同类群微生物的数量及 Ｂ．倒平板时 应将打开的皿盖放到一边 以免培养基溅到皿
（ 比例 ）（ ）  盖上 ，
３ 全部正确得分 Ｃ．为了防止污染 接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
 ，
Ｄ．用记号笔标记培养皿中菌落时 应标记在皿底上
组别 被移植小鼠 提供粪便小鼠 饮用水  。
答案 Ｄ 本题考查微生物的分离与培养的相关知识 高
实验组 ｂ ｃ ｆ  ， ，
压灭菌加热结束时 需先切断电源 让灭菌锅内温度降至
 ， ， ， ；
对照组 ｄ １００ ℃以下 压力表的指针回到零时 再打开锅盖 Ａ错误 倒
（） ， ， ，
解析 １ 由于实验组用含１．０％ＣＭＣ无菌水作为饮用水 平板时 应将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 而不能将培
；  ， ， ；
对照组则应饲喂不含 ＣＭＣ 的无菌水 图 １ 结果显示食用 养皿盖完全打开 以防污染 Ｂ错误 接种环经火焰灭菌后需
；  ， 。
ＣＭＣ使小鼠体重增加 图１ Ａ组体重与Ｂ组体重相比差别较 待冷却后挑取菌落 Ｃ错误
， ，  （ 、 、 、 ， ）
大 说明体重增加与饲喂ＣＭＣ有关 图２ Ｃ组体重与Ｄ组体 ２６． ２０１７江苏苏 锡 常 镇调研二 １８ 下列有关菌种保藏的叙
， ，  ， （ ）
重相比基本相同 Ａ组体重与Ｃ组体重的相比 Ｃ组增加较 述中 错误的是
， ， ， ，

快 Ｂ组体重与Ｄ组体重相比 Ｄ组体重增加较快 这与生活 Ａ．频繁使用的菌种 可用斜面培养基保藏在４ ℃的冰箱中（ ）
９４０ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
Ｂ．临时保藏菌种的培养基不需要定期更换 
，
Ｃ．长期保藏的菌种 需要降低代谢和变异发生概率 
，
Ｄ．长期保藏菌种时 可各取１ ｍＬ灭菌甘油和培养菌液混合后
保存在冷冻箱中 ，  图２
答案
，
Ｂ 频
；
繁使用的菌种 可用斜面培养基保藏在４℃
，
的 （
４
）
图１中所示方法为稀释涂布平板法
，
理想情况下
，
培养一
冰箱中 Ａ正确 临时保藏菌种的培养基也需要定期更换 Ｂ 。 ，
； ， ，  段时间后可在培养基表面形成菌落 若用该方法培养
错误 长期保藏的菌种 需要降低代谢和变异发生概率 可以 ， 、 、 ，
，、 。  设置了３个培养皿 菌落数分别为６５个 ６３个 ６４个 则
采用甘油管藏的方法 Ｃ Ｄ正确 ，
。  可以推测酸奶中每毫升含细菌数为 个 运用这
解题关键 对教材基础知识的掌握是解答这一题的关键 （ ），
（ ， ） ， 种方法统计的结果往往较实际值 偏大／偏小
２７． ２０２０浙江稽阳联考 １２ 下列关于微生物实验操作的叙述 ，
（ ） 如果培养基上出现 的菌落 说明自制酸奶已被
正确的是 。
 杂菌污染
Ａ．微生物的培养实验中用到的仪器都要进行高压蒸汽灭菌 （） ，
，  ５ 已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌 要进一步分离纯化
Ｂ．使用Ｇ６玻璃砂漏斗进行过滤灭菌时 可通过抽滤加快灭菌 ，
 乳酸菌采用图 ３ 所示的划线分离操作 正确的是
速度 ， ，
， ，  在此正确操作过程中 培养基在划线时划线工具至
Ｃ．倒平板时 应将打开的培养皿盖放到一边 以免培养基溅到 。
 少要灼烧 次
培养皿盖上
， 
Ｄ．能利用尿素的细菌 通过分泌的脲酶将尿素水解为氨和
，

Ｈ Ｏ 并利用其中的氨
２

答案 Ｂ 微生物的培养实验中用到的接种环是采用灼烧
， ；
灭菌的方式进行灭菌的 Ａ错误 使用Ｇ６玻璃砂漏斗进行过 
， ， ； ，
滤灭菌时 可通过抽滤加快灭菌速度 Ｂ正确 倒平板时 打开 图３
（ ）， （） （ ）
培养皿盖一定角度 不能将盖放到一边 并在倒好培养基后 答案 １ 牛奶的营养成分不被破坏 营养成分没有损失
， ， ； ， （） （） （） （
迅速盖上 以免增加污染 Ｃ错误 能利用尿素的细菌 通过分 ２ ③④⑤⑥⑦④⑧ ３ Ｂ ４ ６．４×１０８ 偏小 形
， 。 、 、 、 ） （）
泌 （ 的脲酶将尿素水解为氨和 ， ＣＯ ）２ Ｄ错误  状 大小 颜色 光泽度 不同 ５ Ｂ ５ ，
２８． ２０２０浙江宁波十校联考 １６ 在培养微生物时必须进行无 解析 本题主要考查微生物的培养的相关知识 要求学生
， （ ） 、 、
菌操作 下列叙述错误的是  掌握灭菌与消毒的概念 方法 适用对象和微生物的接种与
， 。（）
Ａ．制备培养基时 先调节ｐＨ再灭菌  计数等 １ 使用巴氏消毒法对鲜牛奶进行消毒的好处是牛
（ ）。（）
Ｂ．Ｇ６玻璃砂漏斗使用后需用盐酸浸泡处理  奶的营养成分不被破坏 营养成分没有损失 ２ 利用高压
： ， ，
Ｃ．使用超净台接种前３０ ｍｉｎ需打开紫外灯和过滤风  蒸汽灭菌锅灭菌的操作步骤 ①装入待灭菌物品 ②加盖 ③
， （ ）， ，
Ｄ．使用后的培养基需在５００ ｇ／ｃｍ２ 压力下处理１５ ｍｉｎ  加热灭菌锅 ④打开排气阀 排出冷空气 ⑤关闭排气阀 ⑥
， ， ， ， ，
答案 Ｄ 制备培养基时 先调节ｐＨ再灭菌 以免再次污 切断电源 ⑦压力表的压力降到零 ④打开排气阀 ⑧打开盖
， ； ， ， 。（）
染 ； Ａ正确 Ｇ６ 玻璃砂漏斗使用后需用盐酸浸泡处理 ， Ｂ 正  子 ⑨取出灭菌物品 ３ 将 ， 液体菌种滴在培养基上进行 ， 涂
确 ； 使用超净台接种前３０ ｍｉｎ 需打开紫外灯和过滤风 Ｃ 正  布的方法是稀释涂布平板法 所用的接种工具是涂布器 即
确 使用后的培养基应在１ ｋｇ ， ／ｃｍ２ 压 。 力下处理１５ ｍｉｎ 或在  图２中的Ｂ 。（ ４ ） 由于图１中样本被稀释了１０６倍 ， 故每毫升
５ （ ００ ｇ／ｃｍ２ 压力下处理３０ 、 ｍｉｎ Ｄ 、 错误 、 ， ） 酸奶中含细菌数约为 （ ６５＋６３＋６４ ） ÷３÷０．１×１０６＝６．４×１０８个 。
，
２９． ２０１９ 江苏南师附中 天一 海门 淮阴四校联考 ３２
（ ） 。  由于经此方法接种培养时 当两个或多个菌落重叠在一起时
，
１５分 牛奶是微生物生长的良好培养基 牛奶在饮用前都
， 。  会按一个菌落计算 所以运用这种方法统计的结果往往较实
。 （ 、 、 、 ）
要经过巴氏消毒 以杀死有害微生物 为检测自制酸奶是否
， 。 。  际值偏小 如果培养基上出现 形状 大小 颜色 光泽度 不
被杂菌污染 进行图１所示操作 请回答下列问题 ， 。（）
同的菌落 说明自制酸奶已被杂菌污染 ５ 要进一步分离
 ，
纯化乳酸菌需采用平板划线法进行操作 图３中所示的平板
 ， （ ）
划线分离的操作正确的是Ｂ 接种环 划线工具 在每次划线
 ，
前和划线结束后都要通过灼烧来灭菌 所以完成Ｂ所示划线
 （ ） 。
操作至少需灼烧接种环 划线工具 ５次
 、 、
疑难点拨 灭菌常用的方法主要有灼烧灭菌 干热灭菌 高
 ， 、 、 、
图１ 压蒸汽灭菌 适用对象主要有接种环 接种针 玻璃器皿 培
（） 。  ； 、 、
１ 牛奶用巴氏消毒的好处是 养基等 消毒常用的方法主要有煮沸消毒法 巴氏消毒法 化
（） ， 。 、 ， 、
２ 图中所用培养基在灭菌过程中 需用到高压蒸汽灭菌锅 学药剂消毒法 紫外线消毒法 适用对象主要有某些液体 操
，  。
下面是关于高压蒸汽灭菌锅使用过程中的操作 正确操 作空间等
。（  ［ ， （ ）］ ，
作的先后顺序是①② ⑨ 有的操作 ３０． ２０１９浙江五校联考 ３２ 一 某村庄有一条小溪 近几年
）  ，
可以重复 由于上游几家乳胶厂不断向其中排放废水 小溪变得不再清
 。 。
①装入待灭菌物品 ②加盖 ③加热灭菌锅 ④打开排 澈 某同学想测定该溪水中的细菌含量情况 回答下列
 ：
气阀 ⑤关闭排气阀 ⑥切断电源 ⑦压力表的压力降 问题
 （） 。 ：
到零 ⑧打开盖子 ⑨取出灭菌物品 １ 先根据所学知识制备ＬＢ培养基 制备该培养基的步骤
（） ，  ，
３ 取最终的牛奶稀释液０．１ ｍＬ滴在培养基上进行涂布 应 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 下列关于制备ＬＢ培
。 ， （ ）

选择的工具是图２中的 养基的叙述 错误的是专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９４１
（ ，） （
Ａ．培养基应先调ｐＨ再进行灭菌 ３２． ２０２０浙江杭州期中 ７ 为了筛选能产生阿拉伯胶 一种多
） ， （ ）
Ｂ．培养基应先灭菌再分装到培养皿  糖 降解酶的菌株ＳＭ０１ 应选用表中哪种培养基
（ ： ）
Ｃ．融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦  单位 ｇ／Ｌ
，
Ｄ．灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在１２１ ℃ ５００ ｇ／ｃｍ２压 阿拉 阿拉伯
力下灭菌１５分钟  培养基 伯胶 胶酶 ＮａＮＯ ３ 牛肉膏 Ｋ ２ ＨＰＯ ４ ＭｇＳＯ ４ ＫＣｌ ＦｅＳＯ ４
（）
２ 该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌数 甲 ２５ － － ３ １ １ ０．５ ０．０１
， ； 乙 ２５ １０－６ － － １ １ ０．５ ０．０１
量 ， 他所选择的分离方法应是 该同学在接种 ，  丙 － － ３ ３ １ １ ０．５ ０．０１
前 随机取若干灭菌后的空白平板先行 。 培养了一段时间  丁 ２５ － ３ － １ １ ０．５ ０．０１
这样做的目 ， 的是 接种 ， 在超净工作  Ａ．甲 Ｂ．乙 Ｃ．丙 Ｄ．丁 ，
台上进行 工作台上 （ 实验前一段时间需打开 实验中需关  答案 Ｄ 要筛选能产生阿拉 、 伯胶 ， 降解酶的菌株 培养基
闭的是 Ａ．酒精灯 Ｂ．照明灯 Ｃ．紫外线 中要以阿拉伯胶作为唯一碳源 氮源 因此培养基中不能含有
）。  ， 。 。
Ｄ．过滤风 牛肉膏 也不能含有阿拉伯胶酶来水解阿拉伯胶 Ｄ正确
（） ，  （ ， ） ，
３ 值得注意的是 他所选择的这种方法统计的结果往往比 ３３． ２０２０浙江温州一模 １６ 为了分离以尿素为氮源的微生物
，  ： 、 、 、 、
实际细菌的数目要低 这是因为① 配制某培养基的成分如下 葡萄糖 氯化钠 Ｋ ＨＰＯ 酚红 琼
；  、 。 ２ ４ （ ）
② 脂糖 水和尿素溶液 下列叙述错误的是
（  ，
不考虑 Ａ．该培养基既有选择功能 又有鉴别功能
）。  ， ，
实验操作原因引起的细菌数目的变化 Ｂ．配制该培养基时 要用无菌水 不能用蒸馏水
（） ，  ，
４ 该同学欲将所分离出的某种细菌临时保藏 应接种到试 Ｃ．除尿素外 其余成分配制好后经５００ ｇ／ｃｍ２ 高压蒸汽灭菌
， ， 
管的 培养基上 等菌落长成后 放入冰箱低温 Ｄ．尿素溶液要用经高压蒸汽灭菌过的 Ｇ６ 玻璃砂漏斗过滤
。 
保藏 除菌
（）  ， ，
答案 １ Ｄ 答案 Ｂ 该培养基以尿素为唯一氮源 具有选择功能 又
（）  ， ， ；
２ 涂布分离法 检查平板灭菌是否彻底 Ｃ 含有酚红 具有鉴别功能 Ａ正确 配制该培养基时可以用蒸
（） ，  ， ， ；
３ ①该方法只能统计样品中活菌的数目 死菌无法统计 馏水 因为还会对培养基进行灭菌处理 Ｂ错误 除尿素在后
，  ，
②当两个或多个细菌连在一起时 平板上观察到的只是一个 续需要用Ｇ６玻璃砂漏斗过滤灭菌外 其余成分配制好后经
， ；
菌落  ５００ ｇ／ｃｍ２ 高压蒸汽灭菌 Ｃ正确 Ｇ６玻璃砂漏斗用于尿素的
（） ， ， 。

４ 斜面 过滤除菌 其使用前要经高压蒸汽灭菌法灭菌 Ｄ正确
（） ， （ ， ）（ ）
解析 １ 要想测定该溪水中的细菌含量情况 需先根据 ３４． ２０２０浙江嘉兴一模 ２７ ８ 分 赖氨酸缺陷型大肠杆菌
， ： （ ） ，
所学知识制备 ＬＢ 培养基 制备该培养基的步骤 计算→  Ｌｙｓ－ 是指经过诱变处理后 失去产生赖氨酸能力的大肠杆
。 ， 。 ：
称量→溶化→灭菌→倒平板 制备 ＬＢ 培养基时 培养基应 菌 回答下列问题
， ； （） 。 ： 、
先调ｐＨ再进行灭菌 Ａ正确 培养基应先灭菌再分装到培养 １ 培养基的配制 配制４类培养基 完全培养基 基本培养
， ； ， ； 、 （［ ］）、
皿 Ｂ正确 融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦 Ｃ正确 灭 基 补充赖氨酸的基本培养基 Ｌｙｓ 无氮基本培养
， 。 ， （ “ ” “
菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在１２１ ℃ １ ０００ ｇ／ｃｍ２压力下维 基 在培养基配制过程中 填 需要 或 不需
， 。（） ”） 。 ，
持１５分钟 Ｄ错误 ２ 用题述制备的培养基来检测水样中 要 保持无菌环境 若需要配制固体无氮培养基 则需
， ； ， 。
的细菌数量时 选择的分离方法应是涂布分离法 在接种前  在液体无氮培养基中添加
， （） 。
随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间 这样做 ２ Ｌｙｓ－菌株的诱变 将野生型大肠杆菌接种在液体完全培
； ， ， 。
的目的是检查平板灭菌是否彻底 接种在超净工作台上进行  养基中培养６ ｈ 目的是 然后将菌液进行
， ， ， ，
工作台上实验前一段时间需打开 实验中需关闭的是紫外线  诱变处理５０ ｍｉｎ 去除诱变剂后 需将菌株转入液体无氮
。（） ，
以防止紫外线对人体造成伤害 ３ 用涂布分离法检测水样 基本培养基培养至菌体数量不再上升 目的是耗尽菌体
， ， 。
中的细菌数量时 ①该方法只能统计样品中活菌的数目 死菌 中储存的
； ， （） 。 ， ［ ］
无法统计 ②当两个或多个细菌连在一起时 平板上观察到的 ３ Ｌｙｓ－菌株的筛选 取上述菌悬液 涂布在 Ｌｙｓ 固体培养
， 。 ， ，
只 （ 是 ） 一个菌落 导致统 ， 计的结果往往比实际细菌的数目要低 ，  基上 ［ 待 ］ 长出菌落后 一 ， 一对应地接种至固 ， 体基本培养基
４ 临时保藏菌 ， 种时 应将菌种接种 。 到试管的斜面培养基上  和 Ｌｙｓ 固体培养基上 培养一段时间后 挑取 ，
（ 等菌落长成后 放入冰箱低 ， 温保 ） 藏 （ ）  。 的菌落 即为
３１． ２０２０浙江金华十校一模 ４ 幽门螺杆菌
。
含有脲酶 感染
（）
Ｌｙｓ－菌株
。
是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素 在患者体内采 ４ Ｌｙｓ－菌株的保存 将筛选获得的Ｌｙｓ－菌株接种于
， 。  ， 。
集样本并制成菌液后 进行分离培养 实验基本步骤如图所 ４ ℃下保存
， （ ） （） 。
示 图中Ｘ表示 ５ 利用Ｌｙｓ－菌株筛选能分泌赖氨酸的益生菌 将Ｌｙｓ－菌株
 ， ，
与 培养基混合 制成固体平面培养基 然后将
 ， ，
需筛选的益生菌涂布在此平板上 培养一段时间后 选取
 。
Ａ．调节ｐＨ Ｂ．接种 的菌落即为所需
 （） （）
Ｃ．加入酚红指示剂 Ｄ．将培养基倒置 答案 １ 不需要 琼脂糖 ２ 扩大培养 氨基酸
，  （） （ ）， ［ ］
答案 Ｂ 要分离培养幽门螺杆菌 首先配制相应的培养基 ３ 在固体基本培养基上不生长 或生长不佳 而在 Ｌｙｓ 固
（ 、 ），  （ ） （）［ ］
调节ｐＨ 加入酚红指示剂等 再通过高压蒸汽灭菌法灭菌 体培养基上能生长 良好生长 ４ Ｌｙｓ 固体斜面培养基
后倒平板 ， 接着进行接种 ， 将培养基倒置培养后进一步观察菌  （ ５ ） 固体基本 周围长有Ｌｙｓ－
。 。 （） ，

落 Ｂ正确 解析 １ 在培养基的配制过程中不需要保持无菌环境（ ）
９４２ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
。
·
因为后续还需要对其进行高压蒸汽灭菌法灭菌 配制 。 固 （ 体 ） 无 ＫＨ ２ ＰＯ ４ Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ ＭｇＳＯ ４ ７Ｈ ２ Ｏ 尿素 葡萄糖 琼脂
氮培养基需要在液体无氮基本培养基中加入琼脂糖 ２ 将
， １４ｇ ２．１ｇ ０．２ｇ １０ｇ １０．０ｇ １５．０ｇ
野生型大肠杆菌菌种接种在液体完全培养基中培育６ｈ 目的 ， 。
。 ，
将上述物质溶解后 用蒸馏水定容到１０００ ｍＬ
是进行扩大培养 诱变处理后 将菌株转入液体无氮基本培 （） ， ，
，
１ 从作用上看 该培养基属于 培养基 提供氮源的
养基培养至菌体数量不再上升 目的是耗尽菌体中原本储存 ，
。（） ，
的氨基酸 ３ 筛选赖氨酸缺陷型大肠 ［ 杆菌 ］ 时 将细菌分离 ， 物质是 。 细菌能利用该氮源是由于体内能合
后一一对应接种到 ， 固定基本培养基和 Ｌｙｓ 固体培养基上  （） 成 酶 ，
２ 在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时 还需在培养
培养一段时间后 挑取在固体基本培养基上难以生长而在
［ ］ ，  ， ，
Ｌｙｓ 固体培养基上生长良好的菌落 即为所要的赖氨酸缺 基中加入 指示剂 若指示剂变 说明有
。（） ，  。
陷型菌株 ４ 菌株的保存是接种在试管斜面上 ４ ℃下保 目的菌株存在
。（） ，  （） ，
存 ５ 要筛选能分泌赖氨酸的益生菌 需要将赖氨酸缺陷 ３ 为了测定微生物的数量 接种时应采用
，  ，
型菌株和固体基本培养基混合 再将需要筛选的益生菌涂布 法 某同学在４个培养基上分别接种稀释倍数为１０６的
，  ， 、 、 、
在此平板上 培养一段时间后选取周围长有赖氨酸缺陷菌的 土壤样液０．１ ｍＬ 培养后菌落数分别为１８０ １５５ １７６ １２９
。  ，
菌落即为所需 个 则每升原土壤样液中上述微生物的数量为
， （ “ ”

３５．蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价 个 测定的活菌数比实际活菌数 填 低
。 ，  “ ” “ ”）。
值 某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株 做了如下实验步骤 高 或 基本一致
（ ， ）：  （） （） （）
配制了下列培养基 在适宜条件下培养 答案 １ 选择 尿素 脲 ２ 酚红 红 ３ 稀释涂布
 平板 １．６×１０１２ 低
步骤 取样 培养基 培养结果 （） ， ，
，（ ） ， ·  解析 １ 该培养基中以尿素为唯一氮源 是选择培养基
葡萄糖 ， ＮＨ ４ ２ ， ＳＯ ２ Ｋ ， ２ ＨＰＯ ４ ，  提供氮源的是尿素 ， 能利用尿素的细菌能产生脲酶 。（ ２ ） 分
Ⅰ 土壤样品 ３Ｈ ２ Ｏ · ＫＨ ２ ＰＯ ， ４ ＮａＣｌ ＣａＣｌ ２ 培养液ａ  解尿素的细菌能将尿素分解形成氨和二氧化碳 ， 氨呈碱性 ， 遇
ＭｇＳＯ ４ ７Ｈ ２ Ｏ 加水定容  酚红指示剂呈红色 ， 故鉴定分解尿素的细菌时 ， 常用酚红指示
。（） ，
 剂 ３ 测定微生物数量常用稀释涂布平板法 菌落数的平
Ⅱ １ｍＬ培养液ａ 同上 菌落 ，
 均数为１６０ 所以每升原土壤样液中的微生物数量为１６０÷０．１
，
Ⅲ 挑取单菌落 细菌培养基 培养液ｂ  ×１０６×１０３＝１．６×１０１２ 用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比
（） ， ，  活菌的实际数目低的原因是培养基上的菌落可能是由两个或
１ 为实现筛选目的 步骤Ⅰ所使用的培养基配方中 应去除 。
。  多个细胞连在一起形成的
并加入高浓度的 该培养基从功 ，
。 ３７．为更好地解决冬季污水处理厂氨氮去除率低的问题 某研究
能上看属于 培养基
（） ， ：  小组尝试从海水中筛选在低温下能高效去除氨氮的硝化细
２ 灭菌是否彻底或是否被污染需要检测 检测方法 。 （
 菌 将采集到的海水样本加入液体培养基Ａ 其氮源为氨态
）， ，
。  氮 放在２４℃的培养箱中培养５天 然后取少量培养液在固
， 、 。
（） ，  体培养基上涂布 得到三种形态 颜色均不相同的单菌落 回
３ 为实现目的菌的分离和计数 步骤Ⅱ所使用的培养基中 ：
，  答下列问题
还常加入 制成平板 采用的接种方法是 （） （ “
。  １ 液体培养基Ａ应选用的灭菌方法是 填 高
” “ ”），
（）  压蒸汽灭菌法 或 干热灭菌法 不选另外一种的原因是
４ 步骤Ⅲ的目的是
。

。
（） （）

答案 １ 葡萄糖 蛋白质 选择 ２ 未接种的培养基 （） ， （
， ２ 在配制培养基Ａ时 对碳源的要求是 填
在适宜条件下放置一段时间后 观察培养基上是否有菌落产  “ ” “ ”），
（） （） 提供有机碳源 或 不提供碳源 理由是
生 ３ 琼脂 稀释涂布平板法 ４ 快速增加目的菌的种 。
（ ）
群数量 扩大培养  （） ， 、 ，
（） ， ３ 最后分离得到的单菌落有三种 其形态 颜色各不相同
解析 １ 该实验的目的是筛选产蛋白酶的高产菌株 即 。
， 表明硝化细菌
需要的菌株具有很强的分解蛋白质的能力 因此其利用的碳 （） ，
， ， ４ 该研究小组在上述实验的基础上 已经获得了高效去除
源和氮源主要来自蛋白质 不需要葡萄糖 则其培养基中应该 ， ，
， ， 氨氮的硝化细菌 则需要经过 处理 才能筛选出
除去葡萄糖 加入高浓度的蛋白质 这种加入了菌种需要的特 。
。（） 符合要求的能高效去除氨氮的硝化细菌
殊物质的培养基属于选择培养基 ２ 为了检测灭菌是否彻 （）
， 答案 １ 高压蒸汽灭菌法 干热灭菌法针对耐高温需要
底或是否被污染 应该将未接种的培养基在适宜条件下放置 ，
， 。（） 保持干燥的物品 若选干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发
一段时间后 观察培养基上是否有菌落产生 ３ 接种常用 （） ，
， ２ 不提供碳源 硝化细菌能进行化能合成作用 为自养
的方法有平板划线法和稀释涂布平板法 其中后者可以用于 （） （）
， ， 生物 ３ 存在不同的种类 ４ 低温
菌种的分离和计数 接种所用的应该是固体培养基 因此常在 （） ，
。（） 解析 １ 干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发 常用于耐
步骤Ⅱ所使用的培 ， 养基中加入琼脂制成平板 ４ 步骤 。 Ⅲ挑  、 。
高温 需要保持干燥的培养皿等物品 常用高压蒸汽灭菌法
取单菌落进行培养 目的是快速增加目的菌的种群数量 ，  对培养基进行灭菌 。（ ２ ） 硝化细菌能利用氨氧化成硝酸释放
３６．下表是某同学 ： 列出的分离土壤中微生物的培养基配方 据此  ， ，
出的化学能进行化能合成作用 把二氧化碳和水合成糖类 是
回答下列问题  ， 。（）
自养型生物 因此培养基中不需要有机碳源 ３ 细菌菌落
、 、 、 、 、

形态包括菌落的大小 形状 边缘 光泽 质地 颜色和透明程专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９４３
。 。 （） ，
度等 每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征 题中 １ 图中①过程选取富含纤维素的土壤 在鉴定和筛选所需
， 、 ，
分离得到的单菌落有三种 其形态 颜色各不相同 表明硝化 微生物时需用 对纤维素进行染色并制成选择
。（） 。 。
细菌存在不同的种类 ４ 因为题中要求解决冬季污水处理 培养基 最后还要在平板培养基上分离纯化目的菌 为
， ，
厂氨氮去除率低的问题 因此获得的高效去除氨氮的硝化细 避免杂菌污染培养物和环境 接种时要在
， 。 。
菌 还需要经过低温处理后再筛选出符合条件的硝化 ， 细菌  （） 操作 ，
３８．有机磷农药是用 ， 于防治植物害虫的含磷有机化合物 广泛应 ， ２ 图中②环节 ， 获得的酶是一 、 种复合酶 一般认为它至少 。 包
用于农业生产中 有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标 括三种组分 分别为Ｃ 酶 Ｃ 酶和 前
、 ，  １ Ｘ ，
不少品种对人 畜的毒性很强 人误食后如不及时医治就会危 两种酶使纤维素分解成 第三种酶将其进
。  。 。
及生命 某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微 一步分解成葡萄糖 ⑤环节常用的菌种是
。 ：  （）
生物 请回答下列问题 ３ 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中纤维素分解菌数
（） ，  。 ，
１ 为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种 可在被有机 量 在对应稀释倍数为１０６的培养基中 取０．２ｍＬ稀释液
， 、  ， ： ，
磷农药污染的土壤中取样 并在含有碳源 氮源及 涂布 得到以下统计结果 涂布了三个平板 统计的菌落
 、 ；
等的选 。 择培养基上添加适量的  数是２１０ ２４０和 。 ２４６ 请计算每毫升原液中的菌体数是
（）
进行选择培养
。 用这种方法测得的菌体数可能比实际活
 。
２ 在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是
， （ “ ” 菌数量
若培养基需要调节ｐＨ 则应在灭菌之 填 前  （） （）
“ ”） 。 答案 １ 刚果红 酒精灯火焰旁 ２ 葡萄糖苷酶 纤
（） 或 后 调节 ，  维二糖 酵母菌 （ ３ ） １．１６×１０９ 少
３ 该小组在接种前 随机取若干灭菌后的空白平板先培养 （） 。
， 解析 １ 富含纤维素的土壤较易获得纤维素分解菌 刚
一段时间 这样做的目的是  ，
。 果红和纤维素结合形成红色复合物 纤维素分解菌能在含刚
 ，
（） ， 果红的选择培养基中形成透明圈 从而达到分离纯化纤维素
４ 若要测定培养液中选定菌种的菌体数 既可在显微镜下 。 ，
， 分解菌的目的 为避免杂菌污染培养物和环境 接种时要在
用 直接计数 也可选用  。（） 、
。 酒精灯火焰旁操作 ２ 纤维素酶至少包括Ｃ 酶 Ｃ 酶和葡
法统计活菌数目  ， １ Ｘ ，
（） 、 、 萄糖苷酶三种组分 前两种酶将纤维素分解成纤维二糖 第三
５ 将获得的３种待选微生物菌种甲 乙 丙分别接种在１ Ｌ 。
（ 种酶将纤维二糖分解成葡萄糖 过程⑤为无氧发酵产生乙醇
含２０ ｍｇ有机磷农
、
药的相同
）
培
，
养液中培养 培养液中其
的过程
，
此过程需要用酵母菌作为菌种
。（
３
）
涂布的三个平
他营养物质充裕 条件适宜 观察从实验开始到微生物 （ ） 。
， 、 、 、 、 板的菌落的平均值为 ２１０＋２４０＋２４６ ÷３＝２３２个 每毫升原
停止生长所用的时间 甲 乙 丙分别为３２小时 ４５小时 ，
， （ “ ”“ ”  液中的菌体数是２３２÷０．２×１０６＝１．１６×１０９个 由于两个或多个
１６小时 则应选择微生物 填 甲 乙 或 ， ，
“ ”） ，  细菌连在一起时 看到的是一个菌落 因此用这种方法测得的
丙 作为菌种进行后续培养 理由是 。
。  菌体数可能比实际活菌数量少
（ 、 、 ， ）（ ） （
（） （） ４０． ２０２０届湖北天门 仙桃 潜江联考 ３４ １５ 分 联苯 Ｃ
答案 １ 水和无机盐 有机磷农药 ２ 琼脂 前 ） ， １２
（） （）  Ｈ 是一种难以降解的环境污染物 研究发现联苯降解菌内
３ 检测培养基平板灭菌是否合格 ４ 血细胞计数板 稀 １０ 。
（）  的联苯水解酶是催化联苯降解的关键酶 为了从富含联苯的
释涂布平板 ５ 丙 微生物丙分解有机磷农药的能力比 ， 、 ，
、  环境中分离出联苯降解菌 某同学设计了甲 乙两种培养基
甲 乙强 ：
（） ，
 成分如下表
解析 １ 为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种 就要
，

人为提供有利于该微生物的生长条件 同时抑制或阻止其他 维生素 ＮＨ ＮＯ ＭｇＣｌ 联苯 水 琼脂
， 、 ４ ３ ２

微生物的生长 因此所用的选择培养基除含有碳 ， 源 氮源及水 培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
和无机盐等微生物生长所需的基本营养成分外 还需添加适
， 。（） 培养基乙 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ －
量的有机磷农药 以便进行选择培养 ２ 在制备固体培养 （ ：“” ，“” ）
， 。
基时 常需加入的凝固剂是琼脂 平板培养基配制的基本流 （ 注 ） ＋ 表示添加该物质 － 表示没有添加该物质
，
程为计算→称量→溶化 。 → （ 调 ） 节ｐＨ→灭菌→倒平板 即调节 １ 甲培 ， 养基中加入联苯作为 （ “ 用 ” 于培 “ 养联 ” 苯 ） 降解
ｐＨ ， 应在灭菌之前进行 ３ 为检测培养基平板灭菌是否合 菌 ， 该培养基属于 填 选择 或 鉴 。 定 培养
格
，
在接种前需随机取
。
若干灭菌后的空
，
白平板先培养一段时
（）
基 接种前需采用 法进行灭菌
，
间 观察有无菌落形成 若无菌落形成 则说明培养基平板灭 ２ 为了便于测定培养基乙中联苯降解菌的数量 可以从培
。（） ，
菌合格 ４ 测定并统计培养液中选定
，
菌种的菌体数 既可 养基乙中取培养液１ ｍＬ
，
加入到 中稀释
在显微镜下用血细胞
。
计
（
数
）
板直接计数
，
也
、
可选
、
用稀释涂布平 １００倍之后进行显微计数 由此计
（
算得
“
到的培养
”
基乙
“
中联
板法统计活菌数目 ５ 依题意可知 甲 乙 丙培养液中的 苯降解菌的数量是 填 真实值 或 估算
、  ”）。
微生物从实验开始到停止生长所用的时间分别为３２小时 ４５ 值
、 ， 、  （） ， 。
小时 １６小时 说明微生物丙分解有机磷农药的能力比甲 乙 ３ 关于图示接种方法的叙述 正确的是
， 。 
强 因此应选择微生物丙作为菌种进行后续培养
， 
３９．如图是纯化纤维素分解菌并生产乙醇的基本工作流程 请回
： 
答下列问题

Ａ．接种环正在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌

Ｂ．接种后的平板需倒置培养

Ｃ．该接种方法可得到单个菌落

Ｄ．酒精灯提供了局部无菌环境（ ）
９４４ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
（） （）
答案 １ 碳源 选择 高压蒸汽灭菌 ２ ９９ ｍＬ无菌水 需要稀释
（）
估算值 ３ ＢＣＤ  Ｃ．涂布分离法和划线分离法都可以得到单菌落
（）
解析 １ 甲培养基中加入联苯作为碳源用于培养联苯降 Ｄ．涂布分离法和划线分离法都可以对样液中的细菌进行计数
， ， ，
解菌 属于选择培养基 只有能利用联苯的微生物才能存活  答案 Ｄ 涂布分离法和划线分离法都是单菌落的分离方
。（） ， ，
接种前对培养基应该采用高压蒸汽灭菌法灭菌 ２ 乙为液 法 涂布分离法使用的接种工具是玻璃刮刀 接种前需要配置
， ， ， ， ，、、
体培养基 要对培养基乙中培养液稀释１００倍 需要取培养液 不同浓度稀释液 划线分离法使用接种环 不需要稀释 Ａ Ｂ
， ，  ； ，
１ ｍＬ加入９９ ｍＬ无菌水中 之后进行显微计数 由此可以估 Ｃ正确 涂布分离法可以对样液中的细菌进行计数 划线分离
， 。（） ， 。
算出培养基乙中联苯降解菌的数量 所得值是估算值 ３ 法不能用于计数 Ｄ错误
， ， （ 、 ， ）
接种时接种环应在酒精灯火焰旁进行 图示为接种划线过程 ４４． ２０２０江苏南通 泰州等七市二模 １８ 我国规定１ Ｌ自来水
， ；  。 （
而不是灼烧接种环灭菌过程 Ａ错误 接种后的平板需倒置培 中大肠杆菌数不得超过３个 某兴趣小组利用滤膜法 如图
， ， ； ，  ） 。
养 避免污染 Ｂ正确 该接种方法为平板划线法 可得到单个 所示 对校内自来水中大肠杆菌数量进行检测 下列有关叙
， ； ， 。  （ ）
菌落 Ｃ正确 酒精灯提供了局部无菌环境 Ｄ正确 述错误的是
（ ， ）  ，
４１． ２０１９ 北京海淀期中 ２９ 在筛选纤 Ａ．取样水龙头应用火焰灼烧 打

维素分解菌的培养基中加入刚果红染 开水龙头一段时间后再取样
，  ，
料 研究者观察到几个有透明圈的菌 Ｂ．滤膜的孔径应小于大肠杆菌
。 （ ） 
落 据图分析正确的是 过滤水样应足量

Ａ．透明圈内的刚果红染料已被分解 Ｃ．伊红美蓝培养基属于选择培养
 ，
Ｂ．菌落②中的菌株分解纤维素能力最强 基 培养基中含有琼脂

Ｃ．图中菌落可能是细菌也可能是真菌 Ｄ．进行细菌培养同时需进行未接种培养基的培养
、 ，

Ｄ．图中培养基可用牛肉膏 蛋白胨配制 答案 Ｃ 为避免杂菌污染 取样水龙头应用火焰灼烧杀
， ，

答案 Ｃ 透明圈内的纤维素被纤维素分解菌利用 刚果 灭杂菌 打开水龙头一段时间后再取样是避免温度过高杀死
， ； ， ； ，
红染料不能与纤维素结合而出现透明圈 Ａ选项错误 据图可  目的菌 Ａ正确 实验将待测水样进行过滤 得到的滤膜进行
， ， ， ，
知 透明圈与菌落面积的比值越大 菌落中的菌株分解纤维素  微生物培养 因此水中的大肠杆菌应留在滤膜上 故滤膜的孔
， ， ， ， ；
的能力越强 显然是菌落①中的菌株分解纤维素能力最强 Ｂ 径应小于大肠杆菌 且过滤水样应充足 Ｂ正确 加入伊红美
； ， ， ；
选项错误 在筛选纤维素分解菌的培养基中只能以纤维素为 蓝能够鉴别大肠杆菌 该培养基属于鉴别培养基 Ｃ错误 为
， 、 ， ， ，
唯一碳源 不可用牛肉膏 蛋白胨配制培养基 加入刚果红染 保证实验结果的科学性与准确性 实验的同时应设置对照 即
， ； ， 。
料是为了鉴定是否是纤维素分解菌 Ｄ选项错误 图中菌落可 进行细菌培养的同时需进行未接种培养基的培养 Ｄ正确
， 。
能是细菌也可能是真菌 Ｃ选项正确  知识拓展 常用伊红美蓝培养基来鉴别饮用水和乳制品中
， 、 、 。 ，
能力解读 以筛选纤维素分解菌为载体 考查辨认 比较 解 是否存在大肠杆菌等细菌 伊红为酸性染料 美蓝为碱性染
。 ， ，
读的理解能力  料 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色 再
（ ， ） ， ， 。
４２． ２０１８北京海淀期中 ３０ 在微生物培养的过程中 需要通过 与美蓝结合形成紫黑色菌落 并带有绿色金属光泽
， （ ， ） 。
选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种 下列与之相４５． ２０１９广东惠州二调 １１ 嗜热链球菌属于乳酸菌 分离出
（ ） ，
关的叙述中不正确的是  优质的嗜热链球菌是酸奶工业中的关键环节 以下是嗜热链
獉獉獉 ， ， 。
Ａ．纤维素分解菌能够分解刚果红染料 从而使菌落周围出现 球菌的分离纯化与鉴定过程 请回答相关问题
： （
透明圈  第一步 从国家乳业技术中心获得混合发酵剂 含多种乳酸
， ）， 。
Ｂ．尿素分解菌能够将尿素分解为氨 从而使酚红指示剂变红  菌 用无菌生理盐水梯度稀释
：
Ｃ．在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株  第二步 取等量不同稀释度的菌液分别接种于 Ｅｌｌｉｋｅｒ 培养
， 。
Ｄ．在
“
含有碳
”
酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现 基 在相
：
同且适宜条件下培养
、、
溶钙圈 第三步 选取疑似菌落分别穿刺接种于Ａ Ｂ Ｃ三种糖发酵半
，  （ ） ，
答案 Ａ 分离土壤中能分解纤维素的微生物 利用了纤 固体培养基 成分及现象如表 中培养 进一步进行生化
，  。
维素可以和刚果红染料结合形成红色复合物的特性 当红色 鉴定
，  ：
的平板上有纤维素分解菌时 纤维素被纤维素分解菌分解利 第四步 将生化鉴定为嗜热链球菌的疑似菌落进行扩大培养
， ， ；  。
用 从而在菌落周围形成透明圈 Ａ选项错误 在以尿素为唯 并保存
， ， 
一氮源的选择培养基中 尿素分解菌可以将尿素分解为氨 从 成分 （ ｇ ） 胰蛋白胨 牛肉膏 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 溴甲酚紫 ＮａＣｌ 琼脂 现象
， ； 
而使酚红指示剂变红 Ｂ选项正确 在加入抗生素的选择培养基 Ａ培养基 ５．０ 无 无 紫色变为黄色
， ； 
中活下来的通常是具有抗生素抗性的菌株 Ｃ选项正确 乳酸菌 Ｂ培养基 １０ ３．０ 无 ５．０ 无 ０．０４ ５．０ ５．０ 紫色变为黄色
， ， 
可以产生乳酸 乳酸能与碳酸钙反应 在含有碳酸钙的培养基上 Ｃ培养基 无 无 ５．０ 不变色
“ ”， 。  ， ，
生长的乳酸菌菌落周围会出现 溶钙圈 Ｄ选项正确 １．溴甲酚紫是一种酸碱指示剂 在中性时为紫色 而在酸性时呈现黄色
， ，  说明 ２．将上述成分溶解 ， ｐＨ调为７ ， 用蒸馏水定容至１０００ｍＬ
抢分妙招 纤维素分解菌 顾名思义是分解纤维素的菌 而
， 。  （）
不是分解刚果红 直接判定Ａ选项错误 １ 第一步中稀释的目的是
（ ，）  。
４３． ２０２０浙江９＋１高中联盟期中 ７ 下列关于涂布分离法和
， （ ） （） ， ，
划线分离法的叙述 错误的是 ２ 在第二步中 应用的接种方法是 可
，  。
Ａ．涂布分离法使用的接种工具是玻璃刮刀 而划线分离法是 根据菌落 特征来选取疑似菌落
 （ ）
接种环 写出两点
， （） ， ，

Ｂ．涂布分离法接种前需配制不同浓度稀释液 划线分离法不 ３ 第三步中 如果接种的疑似菌落确实是嗜热链球菌 根据专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９４５
： （）
生化鉴定现象归纳其代谢特点 以  ３ 避免培养基污染棉塞
（ ） ， （）
葡萄糖／蔗糖／麦芽糖 作为主要碳源 并可以以  ４ 检测培养基平板灭菌是否合格
（ ） ， （） （
无氧／有氧 呼吸的方式分解底物 且在代谢产物中一 ５ 灼烧 杀死培养基中的细菌芽孢 或微生物的芽孢抗逆
（ ） 。 ， ）
定有 酸／碱／中 性产物产生 ＮａＣｌ 的主要作 性强 高压可以杀死培养基中的细菌芽孢
（） ，
用是  ６ 振荡培养能提高培养液中溶解氧的含量 同时可使菌体
。 ，
与培养液充分接触 提高营养物质的利用率
（） ，  （） ，
４ 第四步中 如果要长期保存分离出的菌种常采用 解析 １ 在样品稀释和涂布平板步骤中 需要使用①酒
， 。  、 、 ， 。
的方法 并将其置于 ℃冷冻箱中保存 精灯 ②培养皿 ④无菌水等 但不需要③显微镜
（） ， （  （） ， ，
答案 １ 便于形成单菌落 利于微生物的分离纯化 将细 ２ 在涂布平板时 若滴加到培养基表面的菌悬液过多 则会
， ）  ， ， ，
胞分散 便于形成单菌落 导致菌体堆积 影响分离效果 因此在涂布平板时 滴加到培
（） 、 、 、  。
２ 稀释涂布平板法 形状 大小 隆起程度 颜色等 养基表面的菌悬液不宜过多
（） 、  （） ， ，
３ 葡萄糖和蔗糖 无氧 酸 维持正常的渗透压 提供无 ３ 试管内分装含琼脂的培养基时 若试管口有培养基 为了
 ， 。
机盐 防止培养基污染棉塞 应该用酒精棉球将其擦净
（）  （） ，
４ 甘油管藏 －２０ ４ 微生物培养过程应该进行无菌操作 配制的培养基需要
（） ，  ，
解析 １ 第一步中稀释的目的是降低菌体密度 以便于 进行高压蒸汽灭菌 可以将灭菌后的空白平板进行培养以检
， 。（） 。
在固体培养基上形成单菌落 利于微生物的分离纯化 ２ 测培养基灭菌是否彻底
， ，  （） ， ，
在第二步中 取不同稀释度的菌液接种 应用稀释涂布平板 ５ 利用平板划线法分离细菌时 接种环应该灼烧灭菌 培养
。 、 、 、 ， ， “ ”
法 不同菌种的菌落形状 大小 隆起程度 颜色等特征不同 基应该利用高压蒸汽灭菌法灭菌 其中 高压 是为了杀死培
。（） ，  。
据此可选取疑似菌落 ３ 第三步中 如果接种的疑似菌落 养基中的细菌芽孢
确实是嗜热链球菌 ， 根据实验结果可知 ， 培养基中含有葡萄糖  （ ６ ） 振荡培养能提高培养液中溶解氧的含量 ， 同时可使菌体
或蔗糖时 ， 培养基变为黄色 ， 说明嗜热链球菌以葡萄糖或蔗糖  与培养液充分接触 ， 提高营养物质的 。 利用率 ， 所以振荡培养的
， ；
 细菌比静置培养的细菌生长速度快
作为主要碳源 且在代谢产物中一定有酸性产物产生 接种时
， ，
４７．大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细
采用穿刺接种 避免菌种接触氧气 说明嗜热链球菌以无氧呼 ， 。 ：
， ，
吸的方式分解底物 ＮａＣｌ可以维持培养基正常的渗透压 也  菌 （） 含有多种蛋白质 回答下列问题 ，
， 。（）
可以给菌体提供无机盐 维持菌体正常的生命活动 ４ 长 １ 大肠杆菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基 此培养基为
，
期保存分离出的菌种常采用甘油管藏的方法 并将其置于－ 大肠 。 杆菌的生长提供 ，
， 。
２０ ℃冷冻箱中保存 以降低其代谢速率  等 培养大肠杆 ， 菌时 在接种前通常需要检测固体培养 。
４６．
（
２０１９湖南永州一模
，
４２
）
某研究小组为了调查湘江永州段 （） 基是否被污染 检测的方法是 ，
， ，
河流的水质状况 测定了该河流水样中的细菌含量 并进行了 ２ 利用平板划线 ， 法纯化大肠杆菌时 通过接种环在培养基
。 ：
表面连续划线 将聚集的菌种 分散到培养基的
细菌分离等工作 回答下列问题  ； ，
（） ，
表面 长期保存纯化后的菌种 可以采用 的方
１ 在样品稀释和涂布平板步骤中 下列器材或试剂不需要 。
（ ）。
法 稀释涂布平板法是根据培养基上菌落的数目来推测
的是 填序号  ，
样品中的活菌数 其原理是
①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水  。
（） ，
２ 在涂布平板时 滴加到培养基表面的菌悬液不宜过多的 （） ，
３ 利用凝胶色谱法分离大肠杆菌蛋白质的过程如图一 正
原因是  。 、 、
。 确的加样顺序是 图二 图三分别是同学甲 乙
 ，
（） ， ， 利用同一种样品分离得到的结果 则图三中与图二中蛋
３ 向试管内分装含琼脂的培养基时 若试管口有培养基 需 。
白质Ｐ对应的是
要用酒精棉球擦净的原因是 
。

（） 。
４ 该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量 在涂
， 
布接种前 随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段
， 
时间 这样做的目的是
。  （） 、 、
（） 。 ，  答案 １ 碳源 氮源 水和 ， 无机盐 将未接种的培养基在
５ 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌 操作时 接 适宜的条件下培养一段时间 观察培养基上是否有菌落出现
， ，  （）
种环通过 灭菌 在微生物的培养中 一般要对配 ２ 逐步稀释 甘油管藏 培养基表面的一个菌落来源于
， “ ”  （）
制的培养基采用高压蒸汽灭菌 其中 高压 是为了 样品中的一个活菌 ３ ②③④① 丙
。  （） 、 、
解析 １ 微生物生长都需要碳源 氮源 水和无机盐等基
（） ， ， 、
６ 该小组将得到的菌株接种到多个液体培养基中并混匀 本条件 牛肉膏蛋白胨培养基可为大肠杆菌的生长提供碳源
， 。  、 、 ； ，
一部分进行静置培养 另一部分进行振荡培养 结果发 氮源 维生素 水和无机盐等 检测培养基是否被污染 需在接
： ， 
现 振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快 原因是 种前将空白培养基即未接种的培养基放在适宜的条件下培养
 ， ， ，
一段时间 观察培养基上是否有菌落出现 若有菌落出现 则
。 ， 。（）
说明培养基被污染或灭菌不彻底 不能用于接种实验 ２
（） 
答案 １ ③ 平板划线法是一种通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划
（） ， ，  ，
２ 培养基表面的菌悬液过多会出现积液 导致菌体堆积 影 线的操作 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面的接种
； ， ；

响分离效果 方法 若要长期保存纯化后的菌种 可以采用甘油管藏的方法 稀（ ）
９４６ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
、 ，
释涂布平板法可用于活菌的计数是因为培养基表面的一个菌落４９．纤维素是自然界中分布最广 含量较多的一种多糖 主要存在
。（） ， ，
一般来源于样品中的一个活菌 ３ 利用凝胶色谱法分离大肠 于植物的秸秆中 利用纤维素酶将秸秆降解 再制备燃料乙
， ， 。 ：
杆菌蛋白质时 正确的加样顺序是调整缓冲液面→滴加透析样品 醇 具有重要的社会效益和经济效益 清回答下列问题
， ； （）
→再调整缓冲液面→洗脱 故顺序为②③④① ＳＤＳ凝胶电泳装 １ 纤维素诺卡氏菌能将
，
置是垂直的装置 此种电泳方法主要取决于蛋白质相对分子质量 植物秸秆降解而产生
， ， “” ， ， ，
的大小 与电荷无关 同时加样在 － 极 通电后 样品蛋白质向 葡萄糖 主要依赖其产
“” ， ， ，  ，
＋ 极移动 相对分子质量小的 移动距离大 因此从图二的电泳 生的纤维素酶 该复合
， 、 “” ，  ，
结果分析 蛋白质Ｐ比Ｎ Ｍ移向 ＋ 的距离大 说明蛋白质Ｐ的 酶至少包括三种组分
， ，  。
相对分子质量比较小 因此洗脱出来的时间比较长 符合图三中 即
。 
的丙 如图是在实验室中获得的纤维素诺卡氏菌接种量与降解
，  。
４８．为了调查银川市自来水水源地的水质情况 某研究小组对该 纤维素所产生的葡萄糖浓度的关系示意图 当菌接种量
， ：  ， ，
地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定 请回答下列问题 大于３０ ｍＬ 葡萄糖浓度下降 可能的原因是
（） ， 
１ 该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌 划线时
，  。
在培养基上共画了４个区域 则需要 次灼烧接
。 ，  （）
种环 在第二次及以后划线时 总是从上一次的末端开 ２ 从细菌体内提取出来的纤维素酶首先要检测
，  ， 。
始划线 这样做的目的是 以便更好地将酶用于生产 在降解秸秆产生葡
。  ， ，
萄糖的过程中 为了使酶能反复利用 可采用
（） ，  。
２ 在纯化菌种时 所用的培养基都需要在接种前用 技术
。 （） ，

法进行灭菌 将 １ ｍＬ 水样稀释 １ ０００ ３ 用获得的糖液发酵产生乙醇的过程中 发酵罐不应该完
， ， ，

倍 在３个平板上用涂布法分别接入０．１ ｍＬ稀释液 经适 全密封 主要的原因是
， 、 。
宜条件下培养后 ３ 个平板上的菌落数分别为５１ ５０ 和 
。 （） ，
４９ 据此可得出每升水样中的活菌数为  ４ 为检测发酵液中酿酒酵母的数量 取１ ｍＬ 发酵液稀释
。 ， ， 。
要使该实验所得结果可靠 还应该同时在另一平板 １０００倍 分别将０．１ｍＬ的发酵液涂布在４个平板上 经
。 、 、 ，
上接种 作为对照进行实验  培养后４个平板的菌落数分别是５８ ６０ ５６和２８ 则发酵
（） ， 。
３ 菌种需临时保藏时 要先将菌种接种到试管的  液中酿酒酵母的数量为 个／ｍＬ 该统计结果往
， 。 ， ，
培养基上 在合适的温度下培养 当菌落长成后  往低于实际活菌值 原因是
。 。
将试管放入 冰箱中保藏 但此方法存在的缺
。 （） 、
点是  答案 １ Ｃ 酶 Ｃ 酶和葡萄糖苷酶 纤维素诺卡氏菌接
（） ， 。 ，１ Ｘ （） （ ）
４ 在培养时 需将培养皿倒置并放在 中  种量过大时 菌体消耗的葡萄糖较多 ２ 酶的活性 活力
， （）
实验结束时 使用过的培养基应该进行 处理后 固定化酶 ３ 酵母菌无氧呼吸产生酒精的同时会产生二
。 ， ，
才能丢弃  氧化碳气体 密封太严会使发酵罐内气压变大 导致发酵液外
（） （）
答案 １ ５ 将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌种  溢 ４ ５．８×１０５ 当两个或多个细胞连在一起时平板上观察
（） （）
２ 高压蒸汽灭菌 ５．０×１０８ 等量的无菌水 ３ 固体斜面 到的是一个菌落
， （） （）
４ ℃ 保存的时间不长 菌种容易被污染或产生变异 ４ 解析 １ 纤维素诺卡氏菌能将植物秸秆降解而产生葡萄
 ， ， ，
恒温培养箱 灭菌 糖 主要依赖其产生的纤维素酶 该酶是一种复合酶 至少包
（） ，  ， 、 。 ：
解析 １ 采用平板划线法纯化微生物时 每次划线之前都 括三种组分 即Ｃ 酶 Ｃ 酶和葡萄糖苷酶 据图分析可知
， ，  Ｘ １ ， ，
要灼烧接种环 划线结束后还需灼烧接种环 若划线时在培养 当菌接种量大于３０ｍＬ时 葡萄糖浓度下降 原因可能是纤维
， 。  ， 。（）
基上共画了４个区域 则需要５次灼烧接种环 第二次及以 素诺卡氏菌接种量过大时 菌体消耗的葡萄糖量较多 ２
 （
后划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上 从细菌体内提取出来的纤维素酶首先要检测酶的活性 活
， ， ）， 。
残留的菌种 使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端 力 以便更好地将酶用于生产 在降解秸秆产生葡萄糖的
。（）  ， ， 。（）
这样可以将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌种 ２ 在 过程中 为了使酶能反复利用 可采用固定化酶技术 ３ 用
，  ， ，
纯化菌种时 所用的培养基都需要在接种前用高压蒸汽灭菌 获得的糖液发酵产生乙醇的过程中 发酵罐不应该完全密封
。 ， 
法进行灭菌 将１ ｍＬ水样稀释１０００倍 在３个平板上用涂 主要的原因是酵母菌无氧呼吸产生酒精的同时也会产生二氧
， ，  ， ， 。
布法分别接入０．１ ｍＬ稀释液 经适宜条件下培养后 ３个平板 化碳气体 密封太严会导致发酵罐内气压变大 发酵液外流
、 ，  （） ，
上的菌落数分别为５１ ５０和４９ 首先求出３个平板的平均菌 ４ 为检测发酵液中酿酒酵母的数量 取１ ｍＬ发酵液稀释１
， （ ） ， （ ） ， ， ，

落数 即 ５１＋５０＋４９ ÷３＝５０ 然后利用公式 Ｃ／Ｖ ×Ｍ 即可 ０００倍 分别将０．１ｍＬ的发酵液涂布在４个平板上 经培养后
（ ） 、 、 ，
得出每升水样中的活菌数＝ ５０／０．１ ×１ ０００×１ ０００＝５．０× ４个平板的菌落数分别是５８ ６０ ５６和２８ 进行菌落计数时需
； ， ，
１０８ 要使该实验所得结果可靠 还应该同时在另一平板上接  选择每个平板菌落数在３０～３００之间的平板进行统计计数
， ，
种等量的无菌水作为对照进行实验 这样做的目的是检测培 为避免误差 应当选择三个或三个以上的平板进行计数并取
。（） ， ， （ ）
养基平板灭菌是否合格 ３ 菌种需临时保藏时 要先将菌 平均值 故发酵液中酿酒酵母的数量为 ５８＋６０＋５６ ÷３÷０．１×
， 。 。 ，
种接种到试管的固体斜面培养基上 在合适的温度下培养  １０００＝５．８×１０５个／ｍＬ 该统计结果往往低于实际活菌值 原
， 。
当菌落长成后 将试管放入４ ℃冰箱中保藏 但此方法存在 因是当两个或多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个
， 。 。
的缺点是保存的时间不长 菌种容易被污染或产生变异  菌落
（） ， 。
４ 在培养时 需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中 实验
， 。
结束时 使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能丢弃 专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９４７
（）
 问题探究 １ 新鲜牛奶的消毒常用巴氏消毒法或高温瞬
， ， ？
时消毒法 而不常用煮沸消毒法 为什么
（） ，
 ２ 自己制作酸奶时 为什么可以加入超市买来的老酸奶代
应用 制作酸奶的微生物学原理 ？
替菌种
（） ， ？
，
&’ ， () 酸奶是一种对人体健 。 康有益的发酵食品 ， 内含丰富的蛋  ３ 制作酸奶 （ 时 ） 常用的鲜奶原料不能 ， 含有抗生素 为什么
白质 还有钙以及多种维生素等 自己制作酸奶时 可以不需要加入 要点点拨 １ 与煮沸消毒法相比 巴氏消毒法或高温瞬
（ ），  ， 。
专门的菌种 发酵菌粉 只需加入超市买来的适量的老酸奶即可作
。  时消毒 （ 法 ） 在达到消毒目的的同时 不破坏营养成分 。
为发酵菌种
２ 超市买来的老酸奶中含有乳酸菌等发酵菌种
 （） ， 。
３ 抗生素会抑制接种细菌的生长 使发酵受到抑制
， （ ）
３．关于酸奶制作 下列说法正确的是
 Ａ．含抗生素的牛奶更容易发酵
，
 Ｂ．温度越高 制作酸奶需要的时间越长
，
应用 制作酸奶的微生物学原理  Ｃ．牛奶变酸的同时 其中的糖类发生了变化
（ ，） “
１． ２０２１届湖 ” 南 。 长沙宁乡十中月考二 ２ 某 ， 些酸奶盒上标明 胀  Ｄ．制作过程中需不断通入无菌空气
包请勿食用 下列关于酸奶胀包的原因 解释最合理的
（
是 ）３． 答案 Ｃ
， 、 ，
 ４．酸奶不仅美味 还含有丰富的蛋白质 钙以及多种维生素等 酸
， 。
Ａ．生产时酸奶中混入的酵母菌进行无氧呼吸  奶制作也比较 ： 简单 所以广受人们的喜欢 请结合实际生活回
Ｂ．温度过高导致酸奶中的乳酸菌进行无氧呼吸 答下列问题
，  （）
Ｃ．酸奶盒破裂导致杂菌进入 杂菌进行有氧呼吸 １ 对奶牛养殖厂售岀的新鲜牛奶消毒常用 法或
 ， ，
Ｄ．储藏时间过长导致酸奶中的乳酸菌大量死亡 高温瞬时消毒法 与煮沸消毒法相比 这两种方法的优点
 。
１． 答案 Ａ 是
（ ， ）  （） ，
２． ２０２０浙江金华十校期末 １９ 酸奶的发酵流程主要步骤是鲜 ２ 某同学将超市买来的某品牌老酸奶加入鲜奶中 搅拌均匀
 ， ， ，
牛奶→标准化→化料→均质→杀菌→冷却→接种→发酵→灌 后 放入酸奶机中 也可制作美味可口的酸奶 该同学加入
， （ ） 。
装→包装 下列相关叙述正确的是 适量老酸奶的目的是
，  （） ，
Ａ．可在发酵过程中添加抗生素 以防止发酵过程中杂菌的污染 ３ 若要分离纯化得到发酵效果相对较好的乳酸菌种 所用的
，  （ ，
Ｂ．发酵前后均需采用高压蒸汽灭菌 接种前需要冷却的目的是 培养基中要加入碳酸钙 有 ＣａＣＯ 的培养基不透明 无
 ）， ３ ，
防止高温使乳酸菌死亡 ＣａＣＯ 的培养基透明 其作用除中和产生的乳酸外 还可
、  ３ ，
Ｃ．利用离心法可以除去鲜奶中的白细胞 杂菌和其他肉眼可见 以 分离纯化时应挑选出 的
，  。
的异物 取其上清液用于发酵制酸奶 菌落作为候选菌
， ，  （） ，
Ｄ．与泡菜腌制的主要菌种相同 酸奶发酵中要接种乳酸菌 并 ４ 乳酸菌菌种若要长期保存 菌液中常需要加入一定量的
， ，  ， 。
在无氧环境中进行发酵 但前期需要通入氧气 以利于乳酸 并在－２０ ℃的环境中存放
 （） ，
菌快速繁殖 ４． 答案 １ 巴氏消毒 在达到消毒目的的同时 营养物质损
 （） （） （）
２． 答案 Ｃ 失较少 ２ 接种 ３ 鉴别乳酸菌 透明圈大 ４ 甘油
。
 稀释
： ，
 ③接种培养 用 法接种 培养时控制
。
 的气体条件是
：
应 （ 用 制作酸奶的 ， 微生 ） 物原理  ④观 ， 察计数 菌落周围出现 的 。 就是乳酸菌的菌
１． ２０１９ 福建宁德一模 ３７ 乳酸菌是对人体有益的微生物之 落 选择菌落数在 的平板计数 每隔２４ 小时统
， ， ，  ， ，
一 常用于生产酸奶 其发酵产物为乳酸 能溶解周围环境中 计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果
。 ：  。
的难溶性碳酸钙 回答下列问题 目的是
（） ，  （） ，
１ 为检测某品牌酸奶中的乳酸菌含量是否达标 检验人员进 ２ 生产上不能用含有抗生素的牛奶发酵成酸奶 原因是
。  。
行了相关实验
： 、 、 、  （）
①配制培养基 培养基中除含水 无机盐 碳源 氮源和琼 答案 １ ＣａＣＯ 无菌水 稀释涂布平板 无氧 透明圈
， 。  （ ） ３
脂外 还需添加维生素和 或溶钙圈 ３０～３００ 可以防止因培养时间不足而导致遗漏
： ，  （） （ ）
②稀释样品 取１ ｍＬ待测酸奶 用 进行梯度 菌落的数目 ２ 抗生素会抑制乳酸菌 或细菌 的繁殖（ ）
９４８ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
（） ， ， ，
解析 １ ①乳酸菌的发酵产物乳酸 能溶解周围环境中的 质进行代谢 通过细胞呼吸消耗了牛奶中的部分有机物 因此
， 、 ，
难溶性碳酸钙 因此配制培养乳酸菌的培养基除加入水 无机 酸奶比纯牛奶中的能量减少了 在乳酸菌代谢过程中又有新物
、 、 ， 。 ， 。（）
盐 碳源
，
氮源和琼脂外 还需添加维生素和ＣａＣＯ
３。
②计数乳 质的生成 从而使牛奶的口味发生
，
了改变 ３ 微生物菌种的
酸菌前 需用无菌水将待测酸奶稀释至合适浓度 ③计数乳 保藏有临时保藏和长期保藏之分 临时保藏是把菌种接种到试
， ， ， ， ，
酸菌需用稀释涂布平板法接种 乳酸菌是厌氧菌 培养时控制 管的固体培养基上 在合适的温度下培养 当菌落长成后 将试
。 。 ，
的气 ， 体条件是无氧 ④乳酸能溶 （ 解周围 ） 环境中的难溶性碳酸  管放入４℃的冰箱 。 中保藏 对于需要长期 ， 保存的菌种 可以采
钙 。 不透明的培养 ， 基上出现透明 溶钙 圈的就是乳酸菌 。 的菌  用 。 甘油管藏的方法 在３ｍＬ的甘油 ， 瓶中 装入１ｍＬ甘油 ， 后灭
落 细菌计数时 常选择菌落数在３０～３００的平板计数 每隔 菌 将１ ｍＬ菌液转移到甘油瓶中 与甘油充分混匀后 放在
，  。（） ，
２４小时统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为 －２０ ℃的冷冻箱中保存 ４ 由图可知 该计数方法为稀释涂
，  。
结果 目的是可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数 布平板法 由①②的操作可知这时已对酸奶样品稀释了１００
。（） ，  ， ，
目 ２ 生产上不能用含有抗生素的牛奶发酵成酸奶 因为抗 倍 ②重复３次又稀释了１０００倍 从中取出０．１ ｍＬ样进行涂
。  ， 。 。
生素会抑制乳酸菌的繁殖 布 所用到的量是原来的１０－６ 因此这里的ｎ＝６ 用稀释涂布
（ ， ）（ ）  ， ， ，
２． ２０２０届广东惠州一调 ３７ １５分 不同品牌的酸奶具有不 平板法计数时 要至少涂布３个平板 目的是设置重复组 取平
。 、  ， 。 ，
同的口味 某研究小组利用含碳酸钙的固体培养基探究甲 乙 均值 使实验结果更加准确可靠 为了保证结果准确 一般选
（ ， ，
两品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同 乳酸能够溶解碳酸钙 择菌落数中３０～３００ 的平板进行计数 如果平板菌落数超过
）。 ：  ， ， 。
使培养基变得透明 请回答下列问题 ３００ 说明稀释倍数不够 一般还需进一步稀释
 （ ， ）
３． ２０１８甘肃兰州一诊 ３７节选 某同学发现超市里袋装牛奶
 ： ， ；
的灭菌方式有两种 一种是巴氏灭菌 保质期时间短 一种是超
 ， 。
高温灭菌 保质时间长 该同学想通过实验的方法验证超高温
 （
灭菌的牛奶所含的细菌比巴氏灭菌的牛奶少 不考虑奶牛品
 、 ）， ， ：
种 产地等因素 以下是相关检测实验 回答下列问题
（） 、 ， 
１ 将甲 乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化 分别接种在含碳酸
， ， 
钙的固体培养基中培养 根据菌落周围透明圈的大小 可
。 
确定酸奶中乳酸菌的类型 不同乳酸菌菌落透明圈大小

不同的原因是
。 
（） ， 
２ 家庭制作酸奶时 在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物
， ， 
培养技术中的 操作 纯牛奶变成酸奶 改变了口
， ，

味 含有的能量减少 原因是 （） ，
。  １ 一般来说 培养基中的营养成分应含有
。
（
３
）
为长期保存纯化的优质菌
，
可将菌液与 充分  （） ， ，
， 。
混匀 置于－２０ ℃的冷冻箱中保存  ２ 在对培养基进行灭菌后 。 待培养基冷却至５０ ℃左右 需要
（） ，
４ 该研究小组进一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌数量 实验操 （） 在 附近倒平板 ，
。 ，
作如下图 接种微生物的方法有很多 图中过程①②③所 ３ 待测牛奶在涂布前需进行系列稀 。 释 原因是
。
示的方法为 用该方法统计样本菌落 （） ，
， ，
数后 所得数据需要乘以１０ｎ后 才可表示乳酸菌的数量 ４ 实验 （ 结 “ 束后 ” 统 “ 计 ” 的 ） 菌 。 落数目比实际活菌的数目要
（ ）， 。
单位个Ｍ 这里的ｎ＝ 用该方法统计样本菌落 （） 填 多 或 ， 少
， 、、 ，
数时 同时需要做Ａ Ｂ Ｃ三个平板 。 目的是  ５ 实验结果表 ， 明 超高温灭菌的牛奶形 ， 成的菌落数要比巴氏
， 。
如果平板菌落数超过 灭菌的少
。
从细菌中酶的角度理解 这体现了酶的
３００ 一 （ 般 ）（ 还需进一步 ）  的特 （ 性 ） 、 、 （）
答案
，
１ 在相同时间内 不同类型的乳酸菌
，
产生乳酸的
（
答
）
案 １ 碳源 氮源 水和
，
无机盐 ２ 酒精灯火焰
量不同 不同量的乳酸能够溶解碳酸钙的量不同 形成的透明 ３ 在稀释度
（
足
）
够高的
（
菌
）
液里 聚集在一起的微生物易分散成
圈大小不同 单个细胞 ４ 少 ５ 作用条件比较温和
（） ，  （） ， ，
２ 接种 乳酸菌在发酵时使牛奶中的营养成分发生改变 乳 解析 １ 各种培养基的具体配方不同 一般来说 培养基
，  、 、 。（）
酸菌细胞呼吸消耗部分有机物 从而使能量减少 中的营养成分应含有碳源 氮源 水和无机盐 ２ 在对培养
（）  ， ，
３ 灭菌的甘油 基进行灭菌后 待培养基冷却至５０℃左右 需要在酒精灯火焰
（） ， ，  ， 。（）
４ 稀释涂布平板法 ６ 设置重复组 取平均值 使实验结果 附近倒平板 避免空气中的微生物污染培养基 ３ 待测牛奶
 ， ，
更加准确可靠 稀释 在涂布前需进行系列稀释 原因是在稀释度足够高的菌液里
（） ，  。（）
解析 １ 由于乳酸菌分泌的乳酸能够溶解碳酸钙 使培养 聚集在一起的微生物易分散成单个细胞 ４ 由于当两个或
， ，  ， ，
基变得透明 不同类型的乳酸菌分泌乳酸的量不同 分泌量多 多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个菌落 因此实
， ，  ， 。（）
的产生的透明圈较大 而分泌量少的产生的透明圈则较小 因 验结束后 统计的菌落数目比实际活菌的数目要少 ５ 超高
， 
此可以根据菌落周围透明圈的大小 确定酸奶中乳酸菌的类 温灭菌的牛奶形成的菌落数要比巴氏灭菌的牛奶形成的菌落
。（） ，  ， ， （
型 ２ 由于酸奶中含有乳酸菌 因此在纯牛奶中加入少量酸 数少 这是因为酶的作用条件较温和 巴氏灭菌的温度 ７５ ℃
。  ） （ ），
奶相当于微生物培养技术中的接种操作 纯牛奶变成酸奶是 左右 要明显低于超高温灭菌的温度 １３５ ℃以上 微生物更
， 。 ， 。

乳酸菌发酵的结果 乳酸菌在发酵过程中利用牛奶中的营养物 容易存活 因此 体现了酶的作用条件比较温和的特性专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９４９
（ ， ） （ ： ，
４． ２０１７北京丰台期末 ３８ 酸奶是牛奶经过乳酸菌 主要是保 注 消毒方法为８０ ℃水浴加热 ５ ｍｉｎ 然后冷却至 ３７ ℃
） 。 。
加利亚乳杆菌和嗜热链球菌 发酵制成的 乳酸菌可将牛奶 以下
， 。 、
中的乳糖转化为乳酸 从而减轻某些人群的乳糖不耐受症状  通过３ ４组实验可得出的结论为
： ； 、
请回答问题  通过１ ３组实验可得出的结论为
（） ， ； ，
１ 为鉴别市售酸奶中的菌种 应该采用平板划线法或  第５组的实验结果表明 此
， ， ？ 。
法 在 培养基上进行接种 观察所获单 待测奶样是否适合用于制作酸奶
。 ， （） （）、 （）
菌落的特征 还要对菌落中的菌种进行涂片 并用  答案 １ 稀释涂布平板 固体 显微镜 ２ ａ ｂ ３ 乳
。 ， ，
（） 进行进一步的观察和鉴定 。  酸会与Ｃａ （ ＣＯ ）３ 反应形成透明圈 透明圈直 ， 径越大 产生乳酸能
２ 实验前需要进行灭菌的是 力越强 ４ 抗生素能够杀死嗜热链球菌 形成抑菌圈 ８０ ℃

ａ．培养基 ｂ．培养皿 ｃ．恒温培养箱 ｄ．实验者的双手 水浴加热５ ｍｉｎ的消毒方法不会使牛奶中的抗生素减少或消

ｅ．酸奶 除 不适用
（） ，  （） ，
３ 某同学在配制平板时加入ＣａＣＯ 从而成功筛选出高效产 解析 １ 为了观察所获单菌落的特征 微生物纯化和接种
， ３  ，
生乳酸的菌株 其筛选依据的原理是 常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法 接种所用的培养
。  。 （） ，
基为固体培养基 根据 １ 题干中给的信息 还要对菌落中的
（） ，  ， 。
４ 抗生素在现代畜牧业中的广泛应用 不可避免地造成牛奶 菌种进行涂片 因此需要用显微镜进行进一步的观察和鉴定
。 ，  （） ， ，
中抗生素残留 若长期饮用含有抗生素的牛奶 会对人体 ２ 在培养微生物的操作中 一定要进行无菌操作 实验前对
。 ，  、 ，
健康造成危害 利用嗜热链球菌对抗生素的高敏感性 该 培养基 培养皿等要灭菌 接种前需要对实验者的双手进行酒
：  。（） ， 。
生进行了如下实验 精消毒 ３ 碳酸钙不溶于水 遇酸会溶解 在配制平板时加
 ， ，
入ＣａＣＯ 从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株 其筛选依据
 ３ ， ，
的原理是乳酸会与ＣａＣＯ 反应形成透明圈 透明圈直径越大
 。（）３、 “
产生乳酸能力越强 ４ ３ ４组实验的单一变量为 是否含有
 ”， “ ”，
抗生素 因变量为 抑菌圈的宽度 抑菌圈的宽度越大说明
 ，
滤纸片周围的嗜热链球菌被杀死的数量越多 从而出现以滤纸
 ， 。 、 “
（ ）， 片为中心的透明圈 即抑菌圈 １ ３组实验的单一变量为 含
将灭菌的滤纸圆片 直径８ ｍｍ 分别浸润在不同处理的 ”，
， 抗生素的牛奶是否消毒 实验的结果是两组抑菌圈的宽度无
牛奶中一段时间后 放置在涂布了嗜热链球菌的平板上 ， 。
（ ）， ， ： 显著差异 说明是否消毒不会对牛奶中的抗生素造成影响 ５
如上图 在３７ ℃下培养２４ ｈ 测量结果如下表  ，
组的实验结果中抑菌圈的宽度最大 则说明５组待测奶样中含
（ ）  ， ， 。
组别 牛奶处理方法 抑菌圈宽度 ｍｍ 有抗生素 会杀死嗜热链球菌 因此不适合用于制作酸奶
，

１ 含抗生素消毒鲜牛奶 ４．５ 审题技巧 本题以酸奶的制作为背景材料 主要考查了微生
、 。

物的分离方法 无菌操作及实验设计等相关知识 掌握微生物
２ 不含抗生素消毒鲜牛奶 ０ ，

的培养利用等相关知识 学会通过利用变量分析法理解实验设
３ 含抗生素鲜牛奶 ４．６ 、 ， 。

计的原理 步骤和实验评价的方法 是解此类题的关键
４ 不含抗生素鲜牛奶 ０ 
５ 待测奶样 ５．８ 
，
考点一 传统发酵技术与发酵工程  Ｃ．酒精发酵期间 根据发酵进程适时拧松瓶盖放气
（ ， ， ） ， ， ，
１． ２０２０山东 １２ ２分 我国的酿酒技术历史悠久 古人在实际 Ｄ．酒精发酵后去除瓶盖 盖一层纱布 再进行醋酸发酵
。《 》 ：
生产中积累了很多经验 齐民要术 记载 将蒸熟的米和酒２． 答案 Ｂ
“ ， ， ， ， （ ，， ）
曲混
”。
合前需 浸曲发 如鱼眼汤
，
净淘米八斗 炊作饭
，
舒令极 ３． ２
，
０１９江苏单科 ９ ２ 分 下列关于传统发酵技术应
（
用的叙
）
冷 意 ， 思是 ， 将酒曲浸到 。 活化 冒出鱼眼大小的气泡 （ 把八斗 ）  述 正确的是 ， ，
米 “ 淘净 蒸熟 ” 摊开冷透 下列说法错误的是  Ａ．利用乳酸菌制 、 作酸奶过程中 先通气培养 后密封发酵
Ａ． 浸曲发 过程中酒曲中的微生物代谢加快 Ｂ．家庭制作果酒 果醋和腐乳通常都不是纯种发酵
“ ”  ，
Ｂ． 鱼眼汤 现象是微生物呼吸作用产生的ＣＯ 释放形成的 Ｃ．果醋制作过程中发酵液ｐＨ逐渐降低 果酒制作过程中情况相反
“ ” ２  、
Ｃ． 净淘米 是为消除杂菌对酿酒过程的影响而采取的主要 Ｄ．毛霉主要通过产生脂肪酶 蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵

措施 ３． 答案 Ｂ
“ ”  （ ， ， ）
Ｄ． 舒令极冷 的目的是防止蒸熟的米温度过高导致酒曲中的 ４． ２０１８江苏单科 １６ ２分 某高校采用

微生物死亡 如图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过
， （ ）

１． 答案 Ｃ 程的研究 下列叙述错误的是
２． （ ２０２０江苏单科 ， １８ ， ２ 分 ） 某同学在线提交了在家用带盖玻  Ａ．夏季生产果酒时 ，獉 常 獉 需对罐体进行降
， （ ）
璃瓶制作果酒和果醋的实验报告 他的做法错误的是  温处理
， 獉獉 ，
Ａ．选择新鲜的葡萄略加冲洗 除去枝梗后榨汁  Ｂ．乙醇为挥发性物质 故发酵过程中空
，
Ｂ．将玻璃瓶用酒精消毒后 装满葡萄汁  气的进气量不宜太大（ ）
９５０ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
， （ ）
Ｃ．正常发酵过程中罐内的压力不会低于大气压  的叙述 错误的是
，
Ｄ．可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵  Ａ．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物 而保留利用尿
４． 答案 Ｂ  素的微生物
（ ， ， ）（ ）
５． ２０１７江苏单科 ２５ ３ 分 多选 如  Ｂ．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的ｐＨ
图是探究果酒与果醋发酵的装置示意 Ｃ．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
。 （ ）  （ ）
图 下列相关叙述正确的是 Ｄ．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌 醋酸菌 活化
， 
Ａ．改变通入气体种类 可以研究呼吸作 ３． 答案 Ａ
 （ ， ， ） ，
用类型对发酵的影响 ４． ２０１９江苏单科 １２ ２分 下列关于微生物实验操作的叙述
，  （ ）
Ｂ．果酒发酵中期通入氮气 酵母菌将从 错误的是
獉獉
有氧呼吸转变为无氧呼吸  Ａ．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
，
Ｃ．果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关  Ｂ．接种前后 接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
，
Ｄ．气体入口与气体出口可以交换使用  Ｃ．接种后的培养皿要倒置 以防培养污染
５． 答案 ＡＢＣ  Ｄ．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
（ ， ， ）
６． ２０１７课标全国Ⅱ ３７ １５分 豆豉是大豆经过发酵制成的一４． 答案 Ａ
。 ， （ ，， ）
种食 、 品 为了研究影响豆豉发酵 、 效果的因素 某小组将等量 ， 的 ５． ２０１９北京理综 。 ３ ６分 筛选 ， 淀粉分解菌需使用以 ， 淀粉为唯
甲 乙两菌种分别接入等量的Ａ Ｂ ， 两桶煮熟大豆中并混匀 再 一碳源的培养基 ， 接种培养后 若细菌能分解 （ 淀粉 ） 培 ， 养平板
将两者置于 。 适宜条件下进 ： 行发酵 并在３２ ｈ内定期取样观测 经稀碘液 。 处理 会出现以菌落为中心的透明圈 如图 实验结
发酵效果 回答下列问题 果见表
（） 、 。 
１ 该实验的自变量是 菌落直 透明圈直
（） ，  菌种 ：（ ） ：（ ）Ｈ／Ｃ
２ 如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好 说 径 Ｃ ｍｍ 径 Ｈ ｍｍ
。 
明该发酵菌是
（） ， ，  细菌Ⅰ ５．１ １１．２ ２．２
３ 如果在实验后 发现３２ ｈ内的发酵效果越来越好 且随发
， ； 
酵时间呈直线上升关系 则无法确定发酵的最佳时间 若
，
要确定最佳发酵时间 还需要做的事情是  细菌Ⅱ ８．１ １３．０ １．６

， （ ）
。 有关本实验的叙述 错误的是

獉獉
（） ， ， ， Ａ．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
４ 从大豆到豆豉 大豆中的成分会发生一定的变化 其中 蛋白 ，
， 。 Ｂ．筛选分解淀粉的细菌时 菌液应稀释后涂布
质转变为 脂肪转变为 
（） （） （） Ｃ．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
６． 答案 １ 菌种 发酵时间 ２ 好氧菌 ３ 延长发酵时
， ， Ｄ．Ｈ／Ｃ值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
间 观测发酵效果 最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发
（） ５． 答案 Ｃ
酵时间 ４ 氨基酸和肽 脂肪酸和甘油 （ ， ， ）（ ） ，

６． ２０１６江苏单科 ２５ ３分 多选 漆酶属于木质素降解酶类
、 。 、
考点二 微生物的培养技术及应用  在环境修复 农业生产等领 ， 域有着广泛用途 如图是分 （ 离 纯 ）
（ ， ， ） ， 化和保存漆酶菌株的过程 相关叙述正确的是
１． ２０２１湖北新高考适应卷 １２ ２分 植物组织培养过程中
。 ， 
无菌操作步骤至关重要 下列关于无菌操作的叙述 错误
（ ）

的是
Ａ．不耐高温的植物激素需过滤除菌后才能添加到已灭菌的培
养基中 
， 、
Ｂ．超净工作台可用紫外线消毒 镊子 剪刀可灼烧灭菌 
，
Ｃ．植物材料用次氯酸钠消毒后接种到培养基中  Ａ．生活污水中含有大量微生物 是分离 ， 产漆酶菌株的首选样品
Ｄ．玻璃培养皿常采用干热灭菌法灭菌  Ｂ．筛选培养基中需要加入漆酶的底物 通过菌落特征挑出产漆
１． （ 答案 Ｃ ， ， ） ，  酶的菌落 ，
２． ２０２０江苏单科 １９ ， ２分 为纯化菌种 在鉴 。 别培养基上划线  Ｃ．在涂布平板上长出的菌落 再通 ， 过划线进一步纯化
接种纤维素降解细菌 培养结果如右图所示 下列叙述正确的 Ｄ．斜面培养基中含有大量营养物 可在常温下长期保存菌株
（ ）
是 ６． 答案 ＢＣ
 （ ， ， ）
７． ２０２１辽宁新高考适应卷 ２２ ９ 分 微生物合成的油脂是制
。 ，

备生物柴油的新型原料 如图为产油脂芽孢杆菌筛选的流程
，
 其中Ｂ平板上的５个菌落是初筛得到的芽孢杆菌 Ｃ为Ｂ平板
，
 上菌落的原位影印 利用苏丹黑Ｂ可使脂类物质呈黑色的特
， ， 。 ：
 性 对Ｃ进行染色 得到结果Ｄ 回答下列问题

， 
Ａ．倒平板后需间歇晃动 以保证表面平整
、 ， 
Ｂ．图中Ⅰ Ⅱ区的细菌数量均太多 应从Ⅲ区挑取单菌落
， 
Ｃ．该实验结果因单菌落太多 不能达到菌种纯化的目的
，  （）
Ｄ．菌落周围的纤维素被降解后 可被刚果红染成红色 １ 图中对土壤菌液进行系列梯度稀释的目的是
 。
２． 答案 Ｂ
（ ， ， ）  （） ，
３． ２０２０浙江７月选考 １９ ２分 下列关于微生物培养及利用 ２ 若要使菌落能在Ａ平板上生长 下列培养基组分中最合理专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９５１
（ “ ”“ ” “ ”）， ：
的是 填 甲 乙 或 丙 原因是  回答下列问题
。 （） ，
 １ 实验时 盛有水或培养基的摇瓶通常采用 的
。 。 、
表 培养基组分  方法进行灭菌 乙培养基中的 。 Ｙ物质是 甲 乙
、 、 、 、 、
甲 葡萄糖 牛肉膏 蛋白胨 ＮａＣｌ 琼脂 水  （） 培养基均属于 培养基 ，
、 、 、 、 ２ 实验中初步估测摇瓶Ｍ中细菌细胞数为２×１０７ 个／ｍＬ 若
乙 葡萄糖 蔗糖 ＮａＣｌ 琼脂 水  ，
丙 葡萄糖 、 牛肉膏 、 ＮａＣｌ 、 蔗糖 、 水  要在每个平板上涂布１００ μＬ稀释后 ， 的菌液 且保证每个
平板上长出的菌落数不超过２００个 则至少应将摇瓶Ｍ中
（） ，  。
３ 培养基配制完成后需要立即进行灭菌 常用的灭菌方法为 的菌液稀释 倍
。 （） ，

３ 在步骤⑤的筛选过程中 发现当培养基中的Ｓ超过某一浓
（） ， （ ， ，
４ 根据Ｄ的染色结果 可判断Ｂ平板中的 填图 度时 某菌株对Ｓ的降解量反而下降 其原因可能是
） 。 （ ）。
中数字 是产油脂芽孢杆菌的菌落  答出１点即可
（） （） ，
５ 将Ｂ平板中的产油脂芽孢杆菌的单菌落进一步纯化培养 ４ 若要测定淤泥中能降解Ｓ的细菌细胞数 请写出主要实验
。 ：
得到Ｅ 将Ｅ中的菌落接种到试管Ｆ的固体斜面培养基 步骤
， ， 。
上 经培养后放入４ ℃冰箱中临时保藏 以后每３～６个月
。 （） ， 、 ，
需要转接一次 这种方法不适合长
。
期保藏菌种的原因是 ５ 上述实验中 甲 乙两种培养基所含有
，
的组分虽然不同 但
如需长期保存可采用 都能为细菌的生长提供４类营养物质 即
。  。
的方法
（） ，  （） （） （）
７． 参考答案 １ 使聚集在一起的微生物分散成单个细胞 从 ９． 答案 １ 高压蒸汽灭菌 琼脂 选择 ２ １０４ ３ Ｓ的
（）  （）
而能在培养基表面形成单个的菌落 ２ 甲 甲培养基的组 浓度超过某一值时会抑制菌株的生长 ４ 取淤泥加入无菌
、 、 、 （ ），  ， （ ） ， （） 、
分中含有水 碳源 氮源 无机盐和凝固剂 琼脂 乙培养基的 水中 涂布 或稀释涂布 到乙培养基上 培养后计数 ５ 水
， （）  、
组分中不含有氮源 丙培养基的组分中缺少琼脂 ３ 高压蒸 碳源 氮源和无机盐
（） （） （ ， ， ）
汽灭菌法 ４ ３ ５ 菌种容易被污染或产生变异 甘油  １０． ２０２０江苏单科 ３１ ９分 产脂肪酶酵母可用于含油废水处
。 ， 。
管藏  理 为筛选产脂肪酶酵母菌株 科研人员开展了相关研究
（ ， ， ） ：
８． ２０２１重庆新高考适应卷 ２５ １５ 分 ２０２０ 年世界性的新型 请回答下列问题
， ， （） ，
冠状病毒肺炎大流行 为了能更好地对病毒展开相关研究 科 １ 常规微生物实验中 下列物品及其灭菌方法错误的是
。 ： （ ）。 獉獉
学家需要分离和培养病毒 如图是其流程示意图  填编号
 编号 ① ② ③ ④

物品 培养基 接种环 培养皿 涂布器

灭菌方法 高压蒸汽 火焰灼烧 干热 臭氧
 （） ， ，
２ 称取１．０ ｇ某土壤样品 转入９９ ｍＬ无菌水中 制备成菌
 ， ，
悬液 经 后 获得细胞密度不同的菌悬
 。 ，
液 分别取０．１ ｍＬ菌悬液涂布在固体培养基上 其中１０
 ，
倍稀释的菌悬液培养后平均长出了４６个酵母菌落 则该
。

（） ， ， 样本中每克土壤约含酵母菌 个
１ 将采集到的病毒样
，
本进行稀释
，
如图所示 用 吸
，
取 （
３
）
为了进一步提高酵母菌产酶能力
，
对分离所得的菌株
，
采
１００μＬ的
，
病毒样本 注入①中 使样本与稀释液充分
。
混匀 依
用射线辐照进行 育种
。
将辐照处理后的酵母菌
次操作后 ④号试管中病毒浓度是样本的 倍
，
（）  涂布在以 为唯一碳源的固体培养基上 培养一
２ 分离病毒标本需要无菌操作的原因是 ， ，
。 ，  段时间后 按照菌落直径大小进行初筛 选择直径
根据病毒的特征 培养体系Ａ中必 ， 、 。
， 。  的菌落 纯化后获得Ａ Ｂ两突变菌株
须含有 病毒才能繁殖
（） ， ，
（ ３ ） 为鉴定Ｂ是目标病毒 ， 需进行 检测或抗原抗体检  ４ 在处理含 。 油废水的 、 同时 可获得单细胞蛋 ， 白 实现污染物
， 资源化 为评价Ａ Ｂ两菌株的相关性能 进行了培养研
测 两种检测的原理分别是 和
 ， 。 ，
。 究 结果如右图 据图分析 应选择菌株 进行后
 ， 。
（） ， 。 续相关研究 理由是
４ 实验结束后 对所有废弃物必须进行 处理 
（） （） ，
８． 参考答案 １ 移液枪 １０－４ ２ 防止杂菌污染培养液 影
（）
响病毒的培养 宿主细胞 ３ 核酸 碱基互补配对 抗原
（）
与抗体特异性结合 ４ 灭菌 
（ ， ， ） （ 、、
９． ２０２０课标全国Ⅰ ３７ １５分 某种物质Ｓ 一种含有Ｃ Ｈ Ｎ
） ， ，
的有机物 难以降解 会对环境造成污染 只有某些细菌能降
。 
解Ｓ 研究人员按照如图所示流程从淤泥中分离得到能高效
。 、 ， 
降解Ｓ的细菌菌株 实验过程中需要甲 乙两种培养基 甲的
、 ， 、 、 。 
组分为无机盐 水和Ｓ 乙的组分为无机盐 水 Ｓ和Ｙ
 （） （） （ ）
１０． 答案 １ ④ ２ 梯度稀释 ４．６×１０５ 或 ４６０ ０００
 （） （ ） （）
３ 诱变 脂肪 或油脂 较大 ４ Ｂ 该菌株增殖速度
 ， ； ，
快 单细胞蛋白产量高 降解脂肪能力强 净化效果好（ ）
９５２ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
，
考点一 传统发酵技术与发酵工程  生长繁殖需要适宜的温度和盐度 温度过高和过低都会影响微
， 、 。 ， ， ；
阅读下列材料 回答１ ２题  生物的生长繁殖 盐度过高会抑制微生物的生长繁殖 Ｃ正确
， ， 。
甜瓣子是豆瓣酱的重要成分 风味受蚕豆蛋白分解产生 统计活细菌总数常用的方法是稀释涂布平板法 Ｄ错误
， （ ， ， ） ，
的氨基酸影响 也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物２． ２０２０天津 １０ ４分 下列对实验结果的分析 错误的是
。 。 獉獉 （ ）
影响 其生产工艺如图所示 
蚕豆瓣 制 → 曲 豆瓣曲 加  盐水 →酱醅 发 → 酵 甜瓣子  Ａ．新工艺中期活霉菌总数下降由温度 、 升高导致
（ 
Ｂ．新工艺后期活细菌总数下降由温度 盐度均
，
升高导致
某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺 盐度 Ｃ．新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快 是因为温度升高

， ， ） ，
１５％ 温度３７ ℃ 发酵３０天 进行了改良 改良后甜瓣子风味 提高了蛋白酶活性
。 。  ， 、
得以提升 新工艺参数如下表所示 Ｄ．新工艺中甜瓣子风味提升 与前 中期活微生物总数高和氨

（ ） （ ） （ ） 基酸终产量高均有关
时期 时段 天 盐度 ％ 温度 ℃  ， ，
答案 Ｂ 据图可知 新工艺中期活霉菌总数下降 相对新
前期 ０～１２ ６ １２  ， ， ，
工艺前期比较 盐度不变 温度升高到３７ ℃ 可推知活霉菌总
 ， ； ，
中期 １２～１６ ６ ３７
数下降是由温度升高导致的 Ａ正确 对比新工艺前期和中期
 ， ， ，
后期 １６～３０ １５ ３７ 盐度不变 温度升高 对活细菌总数影响不大 对比新工艺中期
。  ， ， ， ，
两种工艺的结果比较见图 和后期 温度不变 盐度升高 活细菌总数下降 说明活细菌总
 ， ；
数下降是由盐度升高导致的 Ｂ错误 对比新工艺前期末和中
 ， ， ， ，
期 盐度不变 温度升高 会影响酶的活性 可推知新工艺中期
 ，
温度升高提高了蛋白酶的活性 使分解蚕豆蛋白产生氨基酸的
 ， ； ，
速率加快 Ｃ正确 据题意可知 甜瓣子风味受蚕豆蛋白分解产
，

生的氨基酸影响 也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物
， ， 、

影响 据图可知新工艺中甜瓣子风味提升 与前 中期活微生物
， 。
 总数和氨基酸终产量高均有关 Ｄ正确
（ ，， ） “ ” ，
３． ２０１６江苏单科 ７ ２分 下列关于中学 腐乳的制作 实验
（ ）
 叙述正确的是
，
 Ａ．加盐主要是为了调节水分 利于毛霉生长
，
 Ｂ．加料酒主要是为了灭菌 避免腐败变质
 Ｃ．发酵过程中起主要作用的是乳酸杆菌
 Ｄ．实验室制作的腐乳不宜直接食用
，
 答案 Ｄ 加盐主要是为了调节水分 同时也能抑制微生物
， ； ，
 的生长 Ａ错误 加料酒可以抑制微生物的生长 同时能使腐乳
， ， ；
 具有独特的香味 并非灭菌 Ｂ错误 发酵过程中起主要作用的
， ； ， ，
 是毛霉 Ｃ错误 实验室制作的腐乳 未经严格检测 不宜直接
， 。
 食用 Ｄ正确
：
 名师点睛 解答本题的关键在于理解腐乳制作的过程 前期
。 、 、
 发酵和后期发酵 理解后期发酵过程中加盐 加料酒 加香辛
。
 料的作用
（ ， ， ）
４． ２０１３江苏单科 １４ ２ 分 某研究性学习小组以樱桃番茄为
 、 。
材料进行果酒 果醋发酵实验 下列相关叙述正确的是
 （ ）
 ，
Ａ．酵母菌是嗜温菌 所以果酒发酵所需的最适温度较高
 ，
Ｂ．先供氧进行果醋发酵 然后隔绝空气进行果酒发酵
（ ，， ）  ，
１． ２０２０天津 ９ ４分 下列关于本研究的实验方法与原理的描 Ｃ．与人工接种的发酵相比 自然发酵获得的产品品质更好
， （ ） 、
述 错误的是 Ｄ．适当加大接种量可以提高发酵速率 抑制杂菌生长繁殖
獉獉  。
Ａ．发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累 答案 Ｄ 本题考查果酒和果醋的制作的相关知识 果酒
 ，
Ｂ．蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源 发酵一般将温度控制在１８～２５ ℃ 而果醋发酵的适宜温度为
 ， ；
Ｃ．温度与盐度都影响微生物的生长繁殖 ３０～３５ ℃ 因此果醋发酵所需的最适温度较高 应该先隔绝空
，  ， ， ，
Ｄ．定期取样 使用平板划线法统计活细菌总数 气进行果酒发酵 然后植入醋酸杆菌 通入空气 进行果醋发
，  ， ；
答案 Ｄ 制曲是发酵的重要工序 实质是创造曲霉等相应 酵 因为醋酸杆菌可以将酒精转变为醋酸 与人工接种的发酵
， ， ， ， ，
微生物生长的适宜条件 保证相应微生物得以充分生长繁殖 相比 自然发酵过程中菌种量比较少 且菌种本身品质不好 因
， ； 、  ， ； ，
用于发酵开始阶段 Ａ正确 蚕豆瓣中含有糖类 蛋白质等营养 此 自然发酵获得的产品品质较差 适当加大接种量 能提高发
， 、 ， ；  、 。
物质 可为微生物的生长繁殖提供碳源 氮源 Ｂ正确 微生物 酵速率 抑制杂菌生长繁殖专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９５３
， （） ， ， ，
解题思路 ①确定菌种 并比较两菌种的代谢类型及温度范 ２ 据图 与第３天相比 第８天后的泡菜更适于食用 因为后
； ， ； ； ， 。
围 ②联系已学的相关知识 确定培养的先后顺序 ③接种量 者 ｐＨ呈下降趋势 原因是
， ， 。 （） “ ” （
大 有利于菌种快速达到一定数量 且可抑制其他杂菌的生长  ３ 该小组得到一株 优选 乳酸菌 亚硝酸盐还原酶活力比普
（ ，， ） 、 ），
５． ２０１１江苏单科 ３ ２分 下列与果酒 果醋和腐乳制作相关 通乳酸菌高 ５ 倍 拟参照资料的实验方案和食盐浓度
， （ ） （ ）， “ ”
的叙述 正确的是  ４％～１０％ 探究与普通乳酸菌相比用 优选 乳酸菌制
， 。
Ａ．腐乳制作所需要的适宜温度最高  作泡菜过程中亚硝酸盐含量的 ， 高低 并确定其最 。 适条件
Ｂ．果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵 请你设计一个实验结果记录表 并推测实验结论
、 、  （ ）（） （ ） 、［ ］、
Ｃ．使用的菌种分别是酵母菌 醋酸菌 乳酸菌 答案 １６分 １ 创造无氧环境 １ 分 丙酮酸 Ｈ
、 、  （ ）
Ｄ．使用的菌种都具有细胞壁 核糖体 ＤＮＡ和ＲＮＡ ＡＴＰ ３分
， ，  （） （ ） （ ）
答案 Ｄ 果酒制作用的是酵母菌 酵母菌发酵时 最适温 ２ 亚硝酸盐含量已接近最低水平 １分 乳酸积累 ２分
； ，  （） （ ）
度在１８～２５℃ 制果醋时用到的醋酸菌是一种好氧菌 最适生 ３ 结果记录表 ６分
； ，  （ ： ）
长温度为３０～３５℃ 制腐乳时主要用的菌种是毛霉 其最适温 亚硝酸盐含量 单位 ｍｇ／ｋｇ
； 、 、 、
度在１５～１８℃ ， 酵母菌 醋 。 酸菌和毛霉都具有细胞壁 核糖体  食盐浓 发酵时间 （ ｄ ）
ＤＮＡ和ＲＮＡ 故Ｄ正确 度 （ ％ ） 乳酸菌 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０
（ ， ， ） 
６． ２０１８课标全国Ⅲ ３７ １５ 分 回答下列与酵母菌有关的 普通
：  ４
问题 优选
（） （ “  普通
１ 分离培养酵母菌通常使用 填 牛肉膏蛋 ７
”“ ” “ ”） ，  优选
白胨 ＭＳ 或 麦芽汁琼脂 培养基 该培养基应采用
。  １０ 普通
灭菌法灭菌 若将酵母菌划线接种在平板 优选
， ，  ： 。
上 培养一段时间后可观察到菌落 菌落的含义是 注 其他合理答案酌情给分
。  ：
推测实验结论
（） ， ，  “ ” ， （ ）
２ 酵母菌液体培养时 若通入氧气 可促进 ①用 优选 乳酸菌制作泡菜 亚硝酸盐含量更低 １分
（ “ ”“ ” “ ”）；

填 菌体快速增殖 乙醇产生 或 乳酸产生 若进行 ②最适条件是亚硝酸盐含量最低时的食盐浓度和发酵时间
， （ “ ”“ （ ）
厌氧培养 可促进 填 菌体快速增殖 乙

２分
” “ ”）。 （） ， ，
醇产生 或 乳酸产生  解析 １ 由于乳酸菌是厌氧细菌 制作泡菜时 泡菜坛一
（） ， ， ， 。
３ 制作面包时 为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的 般用水密封 目的是隔绝空气 创造无氧环境 乳酸菌发酵第
， 、［］ 。（） ，
酵母菌 酵母菌引起面包松软的原因是  一阶段的产物是丙酮酸 Ｈ 和ＡＴＰ ２ 析图可知 ８天后的
。 ， 。 ，
 泡菜中亚硝酸盐含量低 更适于食用 制作泡菜过程中 由于
（） ， 。（） “
答案 １ 麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来 乳酸的积累 ｐＨ呈下降趋势 ３ 该实验的目的是比较 优
（） ”
的肉眼可见的子细胞群体 ２ 菌体快速增殖 乙醇产生  选 乳酸菌和普通乳酸菌在制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的
（） ， ， ，
３ 酵母菌分解葡萄糖会产生ＣＯ ＣＯ 使面包松软  高低 并确定最适条件 故表格的设计要体现不同时间不同食
２ ２ 。
解析 本题通过问题并列的命题方式考查酵母菌的培养与 盐浓度下两种乳酸菌的亚硝酸盐含量的差异 实验结论应是
， 。（） ，
应用 属于对科学探究素养的考查 １ 常用含葡萄糖较多的 优选乳酸菌制作的泡菜中亚硝酸盐含量更低 并确定亚硝酸盐
。 。
麦芽汁琼脂培养基分离培养酵母菌 培养基常采用高压蒸汽 含量最低时的食盐浓度和发酵时间
。 、
灭菌法灭菌 菌落是由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细 方法技巧 设计实验结果记录表时注意将自变量 实验对象和
。（） ， 。
胞群体 ２ 有氧气存在时 酵母菌有氧呼吸产生的大量能量 发酵时间三个维度设计在一个表格中
； ， （ ， ， ） ：
可用于快速增殖 无氧气存在时 酵母菌进行无氧呼吸产生乙８． ２０１２海南单科 ３０ １５分 回答下列关于腐乳制作的问题
。（） ， （） 。
醇和ＣＯ ２ ３ 酵母菌进 。 行细胞呼吸可产生ＣＯ ２ 故用酵母菌  １ 腐乳是豆腐经微 ， 生物发酵后制成的食品 多种微生物 ， 参
制作的面包会变得松软  与了该发酵过程 其中起主要作用的微生物是 其
易错警示 不同培养基的用途 ，  产生 ； 的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为 和
牛肉膏蛋白胨培养基常用于培养细菌 ＭＳ培养基常用于 其产生的 能将豆腐中的脂肪水解为 和
， 。  。
植物组织培养 麦芽汁琼脂培养基常用于培养酵母菌
（ ， ， ） ，  （） ， 。
７． ２０１５广东理综 ２９ １６分 泡菜是我国的传统食品之一 但 ２ 发酵完成后需加盐腌制 加盐还可以抑制 生长
。  （）
制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害 某兴趣 ３ 腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配制而成的卤
“ ”， 。  。 ，
小组准备参加 科技创新大赛 查阅资料得到图 汤 卤汤除具有一定的防腐作用外 还能使腐乳具有独特
 。
的
 （） （
答案 １ 毛霉 肽 氨基酸 脂肪酶 甘油 脂肪酸 每
 ， ）
空２分 共１２分
 （） （ ）
２ 微生物 ２分
 （） （ ， ）
３ 风味 １分 其他合理答案也给分
 。（）
解析 本题考查腐乳制作过程的相关知识 １ 腐乳制作
 ，
时是以豆腐为原料 在毛霉以及多种微生物参与下发酵而制成
 ， ， 、
的食品 富含易被人体吸收的多种营养物质 如多肽 氨基酸
（） ， ，  。 ，
１ 制作泡菜时 泡菜坛一般用水密封 目的是 等 腐乳制作过程中 豆腐中的蛋白质在蛋白酶的作用下被水
。 。 ， ；

乳酸菌发酵第一阶段的产物有 解为多肽 进而在肽酶的作用下被水解为各种氨基酸 脂肪在（ ）
９５４ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
。（）
脂肪酶的作用下被分解为甘油和脂肪酸 ２ 在发酵完成后
， ， 。
的腌制过程中 盐能抑制微生物的生长 防止豆腐块腐败变质 
（） ， 。
３ 卤汤除能防腐外 还可使腐乳具有独特的风味 
 （） ， ，
考点二 微生物的培养技术及应用 １ 配制培养基时 按照培养基配方准确称量各组分 将其溶
（ ， ， ） ，  、 ， ，
１． ２０１９课标全国Ⅱ ３７ １５分 物质Ｗ是一种含氮有机物 会 解 定容后 调节培养基的 及时对培养基进行分
。  ， 。
污染土壤 Ｗ 在培养基中达到一定量时培养基表现为不透 装 并进行 灭菌
。 （  （）
明 某研究小组欲从土壤中筛选出能降解 Ｗ 的细菌 目标 ２ 取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿
）。 。  ， （ 、
菌 回答下列问题 中 在步骤③中将温度约 在２５ ℃ ５０ ℃或８０ ℃
（） ，  ） ， 。
１ 要从土壤中分离目标菌 所用选择培养基中的氮源应该是 中选择 的培养基倒入培养皿混匀 冷凝后倒置培养
。  （） ， 。
３ 挑取分离平板中长出的单菌落 按步骤④所示进行划线
（） ， 、  。
２ 在从土壤中分离目标菌的过程中 发现培养基上甲 乙两 下列叙述合理的有
种细菌都能生长并形成菌落 （ 如图所示 ）。 如果要得到目  ａ．为保证无菌操作 ， 接种针 、 接种环使用前都必须灭菌
标菌 ， 应该选择 菌落进一步纯化 ， 选择的依据是  ｂ．划线时应避 ， 免划破培养基表面 ， ， 以免不能形成正常菌落
。  ｃ．挑取菌落时 应挑取多个菌落 分别测定酵母细胞中甲醇
 的含量
，
 ｄ．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度 获得甲醇高耐
 受株
（） ， ，
 ４ 步骤⑤中 为使酵母数量迅速增加 培养过程中需保证充
。 ，
（） 。
３ 土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源  足的营养和 供 ， 应 为监测酵母的活细胞密 ， 度 将
若要设计实验进一步确定甲 、 乙菌能否利用空气中的氮气 发酵液稀释１０００ 倍后 经等体积台盼蓝染液 ， 染色 用２５×
， 、 ， １６型血细胞计数板计数５ 个中格中的细胞数 理论上
作为氮源 请简要写出实验思路 预期结果和结论 即  ，
色细胞的个数应不少于 才能达到每毫升３×
 。
。 １０９ 个活细胞的预期密度
 （ ）
（） ， 答案 ８分
４ 该小组将人工合成的一段ＤＮＡ转入大肠杆菌 使大肠杆 （） （ ） （） （）、、
（ ）。 １ ｐＨ 高压蒸汽 湿热 ２ ５０ ℃ ３ ａ ｂ ｄ
菌产生能降解Ｗ的酶 酶Ｅ 为了比较酶Ｅ与天然酶降 （）
， ， ４ 氧气 无 ３０
解Ｗ能力的差异 该小组拟进行如下实验 请完善相关 。
。 解析 本题主要考查微生物的培养与计数的相关知识
内容  （） 、 ；
， １ 培养基在定容后 分装前需要调节ｐＨ 分装后还需要进行
①在含有一定浓度Ｗ的固体培养基上 Ａ处滴加含有酶Ｅ （ ） 。（） ，
， ，  高压蒸汽 湿热 灭菌 ２ 倒平板时温度不宜过高 以防烫
的缓冲液 Ｂ处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液 Ｃ处滴 ； ， ，
， 。  伤 同时温度也不能太低 以防培养基凝固而无法形成平板 因
加 三处滴加量相同 。（） ，
， 。  此倒平板时温度应选择５０ ℃左右 ３ 平板划线时 需保证
②一段时间后 测量透明圈的直径 若Ｃ处没有出现透明 ， 。
， ； 、  无菌操作 以防混入杂菌而影响分离结果 因此操作过程中所
圈 说明 若Ａ Ｂ处形成的透明 、 ；
，  用的接种针 接种环在使用之前都必须灭菌 划线时不能划破
圈直径大小相近 说明 ， ；
。  培养基表面 以免影响菌落的正常形态进而影响后期观察 挑
， ；
（） （） ，  取菌落时 应挑取单个菌落 通过逐步提高培养基中甲醇的浓
答案 １ Ｗ ２ 乙 乙菌落周围出现透明圈 说明乙菌 ， ， 。（）
（） 、 ，  度 可获得利用甲醇能力强的菌株 即甲醇高耐受株 ４ ⑤
能降解Ｗ ３ 将甲 乙菌分别接种在无氮源培养基上 若细 ， ，
，  为扩大培养过程 欲使酵母数量迅速增加 应为酵母菌提供充
菌能生长 则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源 。 ，
（ ４ ） ①缓冲液 ②缓冲液不能降解Ｗ 酶Ｅ与天然酶降解Ｗ  足的营养和Ｏ ２ 台 。 盼蓝染液能将死的酵母菌染成蓝色 而 ， 活的
酵母菌不能被染色 假设５个中方格中有ｘ个活酵母菌 由题
 ：［（ ） ］ ， 。
的能力相 （ 近 ） ，  意可知 ｘ×５ ÷１０－４ ×１０００×２＝３× — １ — ０ — ９ 由此解得ｘ＝３０
解析 １ 要 。 从 （ 土 ） 壤中分离能降解Ｗ的细 ， 菌 培养基中应以  （ 方 ） 法技巧 酵母菌计数的常用方 ， 法 血细胞计数板
Ｗ为唯一氮源 ２ 乙菌落周围出现透明圈 说明乙菌能降解 １ 以２５格×１６格的计数板为例 计数时除了４个角上的中方
。（） 、 ，  ， ， （
Ｗ ３ 要判断甲 乙能否利用空气中的氮气作为氮源 应将 格外 还要加上中央的一个中方格 共计数５个中方格 共８０
、 ， ，  ） 。
甲 乙菌分别接种在无氮源的培养基上 观察细菌能否生长 若 个小方格 内的酵母菌
， ， （） ：
细菌能生长 则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源 否 ２ 计数公式
。（） ， （
则不能 ４ ①实验设计应遵循单一变量原则 Ｃ处应滴加等 １ ｍＬ 悬液中的酵母菌数量＝ ８０ 个小方格内酵母菌数
。 ， ） 。
量不含酶的缓冲液 ②Ｃ处只滴加等量缓冲液 若Ｃ处没有出 量／８０ ×４００×１０４×稀释倍数
， ， 、 （ ， ， ）
现透明圈 说明缓冲液不能降解Ｗ 若Ａ Ｂ处形成的透明圈直３． ２０１７江苏单科 ３１ ７ 分 苯酚及其衍生物广泛存在于工业
， 。 ， 。
径大小相近 说明酶Ｅ与天然酶降解Ｗ的能力相近  废水中 对环境有严重危害 小明同学准备依据下图操作步
（ ， ， ） ， 。
２． ２０１８江苏单科 ３１ ８ 分 酵母的蛋白质含量可达自身干重 骤 从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株 请回
， 。 ：
的一半 可作为饲料蛋白的来源 有些酵母可以利用工业废甲 答下列问题
， 。
醇作为碳源进行培养 这样既可减少污染又可降低生产成本 
， 。
研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母 并进行大量培养 下
， ：
图所示为操作流程 请回答下列问题 
专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９５５
（） 、 、 、 （ ） ，
１ 酚降解菌富集培养基含有蛋白胨 Ｋ ＨＰＯ ＭｇＳＯ 苯酚和 ３０ 即３６－６ 个／平板作为本组菌落数的平均值 该做法
， ２ 。４ ４ （ “ ” “ ”）。
水 其中可作为碳源的有  填 正确 或 不正确
（） ， （） 、 （）
２ 将采集到的样品接种培养 苯酚用量应随转接次数增加而 答案 １ 牛肉膏 蛋白胨 琼脂 ２ 将各实验组平板分
， 。 ， （）
逐渐 以达到富集酚降解菌的目的 若如图平板 别放置在教室不同高度的位置上 开盖暴露一段时间 ３ 污
， ，
中菌落过于密集 应进一步 以便于菌落计 染 不正确
。 、 ， （）
数与分离 制备平板 。 培养基时除了需要水 营养物质外  解析 １ 培 ； 养基中的牛肉膏和蛋白胨可 。 为 （ 培 ） 养基中的微
还必须添加 生物提供氮源 制备固体培养基需加入琼脂 ２ 该实验的目
（） ， （ ） ，
３ 如图为连续划线法示意图 在图中 填图中序号 的是了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况 所以需在
。 
区域更易获得单菌落 教室不同高度的位置分别用平板收集微生物即开盖暴露一段
 。（） ，
时间 ３ 该实验中空白对照组不应出现菌落 若空白对照组
 ， ，
出现了菌落 则说明此次调查中出现了污染现象 实验组的污
 ，
染情况不能确定 故不能用实验组与空白对照组菌落数的差值
 ， 。
作为实验结果 而应重新进行实验
 （ ， ， ） ，
５． ２０１５课标全国Ⅰ ３９ １５分 已知微生物Ａ可以产生油脂
 。
（） （ ） 微生物Ｂ可以产生脂肪酶 脂肪酶和油脂可用于生物柴油的
４ 采用比色测定法 使用苯酚显色剂 检测降解后的废水中 。 ：
。 ， 生产 回答有关问题
苯酚残留量 先制作系列浓度梯度并进行显色反应 下表 （） ，
。 １ 显微观察时 微生物Ａ菌体中的油脂通常可用 染
中１～５号比色管的苯酚浓度应分别为  。 ， （
色 微生物Ａ产生的油脂不易挥发 可选用 填
管号 １ ２ ３ ４ ５ ６  “ 萃取法 ” 或 “ 水蒸气蒸馏法 ”） 从菌体中提取 。
（ ）  （） ，
苯酚浓度 ｍｇ／Ｌ １ ２ 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物Ｂ的单菌落
，  ，
如果废水为５０ ｍｇ／Ｌ苯酚溶液 降解后约有２１％的苯酚残 可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样 并应选用以
， （ ：  。
留 则需将残留液稀释 填序号 ①５ ②１０ 为碳源的固体培养基进行培养
） ， 。  （） ，
③２０ 倍后 再进行比色 ３ 若要测定培养液中微生物 Ｂ 的菌体数 可在显微镜下用
（ ）（） 、 （）  ； ，
答案 ７分 １ 蛋白胨 苯酚 ２ 增加 稀释涂布 凝 直接计数 若要测定其活菌数量 可选用
固剂
（
３
）
③
（
４
）
０
、
０．２
、
０．４
、
０．６
、
０．８ ③

法进行计数
。
解析 本题考查微生物分离的相关知识 。（ １ ） 酚降解菌培  （ ４ ） 为了确定微生物Ｂ产生的脂肪酶的最适温度 ， 某同学测得
。（） ， 、 、
养基中的蛋白胨和苯酚为酚降解菌生长提供碳源 ２ 转接  相同时间内 在３５ ℃ ４０℃ ４５℃温度下降解１０ｇ油脂所
， 、 、 ， ，
的目的之一是富集降解苯酚能力强的酚降解菌 随转接次数增  需酶量依次为４ ｍｇ １ ｍｇ ６ ｍｇ 则上述三个温度中
， 。 。
多 培养基中的苯酚含量应逐渐增加 若平板中菌落过于密  ℃条件下该酶活力最小 为了进一步确定该酶的最
， ， ， ， 。
集 则需进一步稀释 降低菌体密度后再涂布培养 以便于菌落 适温度 应围绕 ℃设计后续实验
。 ， 。（） （） （ ） （ ， ）
分离与计数 制备平板培养基时 需添加琼脂等凝固剂 ３  答案 １ 苏丹Ⅲ 或苏丹Ⅳ 萃取法 每空２分 共４分
， ， （） （ ）
连续划线时 在划线的末端菌体密度最低 即在划线的末端最 ２ 油脂 ３分
。（） ， （） （ ， ）
易获得单菌落 ４ １号比色管应为空白对照组 由６号比色 ３ 血细胞计数板 稀释涂布平板 每空２分 共４分
， 、 、 （） （ ， ）
管中苯酚浓度知 １～５号比色管苯酚浓度应为０ｍｇ／Ｌ ０．２ ｍｇ／Ｌ  ４ ４５ ４０ 每空２分 共４分
、 、 。 ， 、
０．４ ｍｇ／Ｌ ０．６ ｍｇ／Ｌ ０．８ ｍｇ／Ｌ 废水为５０ ｍｇ／Ｌ苯酚溶液 降 解析 本题主要考查了植物油脂的染色和提取方法 选择培
（ ）， 、
解后残留的苯酚浓度约为５０×２１％＝１０．５ ｍｇ／Ｌ 则需对残留 养基的配制 微生物的计数以及确定酶的最适温度的实验设计
［ （ ）］， 。（） （ ） 。
液进行２０倍稀释后 １０．５÷２０＝０．５２５ ｍｇ／Ｌ 才可以进行 等 １ 脂肪可用苏丹Ⅲ染液 或苏丹Ⅳ染液 进行染色 微
。 ， ，
比色  生物Ａ产生的油脂不易挥发 不能用水蒸气蒸馏法提取 应用
（ ， ， ） 。（）
４． ２０１６课标全国Ⅰ ３９ １５分 空气中的微生物在重力等作用 萃取法加以提取 ２ 能产生脂肪酶的微生物Ｂ可存在于含
， 。 ， ，
下 可以一定
，
程度地沉降 某研究小组欲用平板收集教室空气 有油料作物种子的腐烂物的土
。
壤
（
中
）
为了选择培养 固体培养
中的
。
微生物 以了解
：
教室内不同高度空气中微生物的分布情 基上应
，
以油脂作为唯一碳源 ３ 测定培养液中
；
的微生物的
况 实验步骤如下 菌体数 可在显微镜下用血细胞计数板直接计数 而要测定活
（ ： 、 、 、、 ）；  ， 。（）
①配制培养基 成分 牛肉膏 蛋白胨 ＮａＣｌ Ｘ Ｈ Ｏ 菌数 则可利用稀释涂布平板法进行计数 ４ 酶量需要最多
； ２  ， ， 。
②制作无菌平板 的温度下 其酶活力最小 即酶活力最小的温度应为４５ ℃ 三
， ；  ，
③设置空白对照组和若干实验组 进行相关操作 个温度下酶活力最大的温度是４０ ℃ 但４０℃不一定是该酶的
，  ， 。
④将各组平板置于３７ ℃恒温箱中培养一段时间 统计各组平 最适温度 故应围绕４０℃设计后续实验
。  （ ， ， ）
板上菌落的平均数 ６． ２０１５江苏单科 ３１ ８ 分 人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物
：  ， ， 。
回答下列问题 的胃 可用来发酵处理秸秆 提高秸秆的营养价值 为了增强
（） 。  ， ，
１ 该培养基中微生物所需的氮来源于 若 发酵效果 研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株 并对其
， 。  。 ：
要完成步骤② 该培养基中的成分Ｘ通常是 降解纤维素能力进行了研究 请回答下列问题
（） ，  （） ，
２ 步骤③中 实验组的操作是 １ 在样品稀释和涂布平板步骤中 下列选项不需要的是
。  （ ）。
填序号
（） ， 
３ 若在某次调查中 某一实验组平板上菌落平均数为 ①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水
， ， （） ，
３６个／平板 而空白对照组的一个平板上出现了６个菌落 ２ 在涂布平板时 滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的
。

这种结果说明在此次调查中出现了 现象 若将 原因是（ ）
９５６ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
。 （） 。
 １ 该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量 在
（） ， ，
３ 向试管内分装含琼脂的培养基时 若试管口粘附有培养 涂布接种前 随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一
， ， ；
基 需要用酒精棉球擦净的原因是  段时间 这样做的目的是
。 ， ，
 然后 将１ ｍＬ水样稀释１００倍 在３个平板上用涂布法分
（） ， ； ，
４ 刚果红可以与纤维素形成红色复合物 但并不与纤维素降 别接入０．１ ｍＬ稀释液 经适当培养后 ３个平板上的菌落
。 、 。
解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应 研究人员在刚果 数分别为３９ ３８和３７ 据此可得出每升水样中的活菌数
， （ ）。 。
红培养基平板上 筛到了几株有透明降解圈的菌落 见图 为
。  （） 。 ，
图中降解圈大小与纤维素酶的 有关 图中降 ２ 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌 操作时 接种
（ ）。  ， ，
解纤维素能力最强的菌株是 填图中序号 环通过 灭菌 在第二次及以后的划线时 总是从
 。 。
上一次划线的末端开始划线 这样做的目的是
 （） ，
３ 示意图Ａ和Ｂ中 表示的是用稀释涂布平板法接
 。
种培养后得到的结果





（） ， （） ，
５ 研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株Ｊ１和Ｊ４ 在不同 ４ 该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀 一部分
， ， 。 ：
温度和ｐＨ条件下进行发酵 测得发酵液中酶活性的结果 进行静置培养 另一部分进行振荡培养 结果发现 振荡
， ， 。
见下图 推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵 理 培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快 分析其原因
，
由是  是振荡培养能提高培养液中 的含量 同时可使菌
。 ， 。
 体与培养液充分接触 提高 的利用率
（ ）（）
答案 １５分 １ 检测培养基平板灭菌是否合格 ３．８×１０７
 （ ， ） （） （ ）
每空２分 共４分 ２ 灼烧 ２分 将聚集的菌体逐步稀
 （ ） （）（ ） （）
释以便获得单个菌落 ３分 ３ Ｂ ２分 ４ 溶解氧 营
 （ ， ）
养物质 每空２分 共４分
 （） ，
解析 １ 取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间 可
 。
依据是否产生菌落确定培养基的灭菌效果是否理想 由样品中
 （ ） ： （
菌株数计算公式 Ｃ÷Ｖ ×Ｍ 知 １ ｍＬ 水样中菌株数为 ３８÷
 ） ， 。
０．１ ×１００＝３．８×１０４ 故每升水样中的活菌数为 ３．８×１０７
 （） ， 。
２ 利用接种环接种时 接种环需灼烧灭菌 利用平板划线法
 ， ，
分离细菌时 在第二次及以后划线时 总是从上一次划线的末
 ， 。
端开始 可以将聚集的菌体逐步稀释以便得到单个菌落
 （）
３ 稀释涂布平板法是用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表
， ，

面 故培养后产生的菌落应随机分布在培养基表面 即Ｂ表示
。（）

的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果 ４ 液体培
，

养基通过振荡可提高溶氧量 同时使菌体与营养物质充分接
， ， 。
 触 提高营养物质的利用率 从而提高细菌的生长速度
（ ， ， ）
８． ２０１４课标全国Ⅰ ３９ １５分 植物秸秆中的纤维素可被某些
（） （） ， 。 ：
答案 １ ③ ２ 培养基表面的菌悬液会出现积液 导致 微生物分解 回答下列问题
， （） （） （） ，
菌体堆积 影响分离效果 ３ 避免培养基污染棉塞 ４ 量 １ 分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶 该酶是由３
（） ， ，
与活性 ① ５ Ｊ４ 发酵过程会产热和产酸 Ｊ４菌株在较高 种组分组成的复合酶 其中的葡萄糖苷酶可将 分
。
温度和酸性环境下酶的活性更高  解成
。（） （） （ ） ，
解析 本题考查
，
微生物培养与分离的相关知识 １ 样品 ２ 在含纤维素的培养基中加
。
入刚果红 ＣＲ 时 ＣＲ可与纤维
稀释需 。 用 （ 无 ） 菌水 在培养 ， 基中涂布接种时需在酒精灯的火焰旁  素形成 ， 色复合物 用含有ＣＲ的该种培养基培养
进行 ， ２ 涂布平板时 滴加到培养基表面的菌液 。 一 （ 般 ） 为  纤维素分解 。 菌时 培养基上会出现以该菌的菌落为中心的
０．１ ｍＬ 量过大将导致
，
菌体密度过大而影响分离效果 ３
，
分
 （）
装含琼脂的培养基 。 时 （ 试 ） 管口粘有培养基易造 ， 成杂菌滋生 故  ３ 为从 ， 富含纤维素的土 、 壤中分离获得 （ 纤维素分解 ） 菌 ： 的单菌
应用酒精棉球擦净 ， ４ 纤维素酶活性越大 菌落 。 周围被分解  落 某同学设计了甲 乙两种培养基 成分见下表
的纤维素量也越大 菌落周围的透明圈也就越大 故图中降解
。（）  酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 ＣＲ溶液 水
纤维素能力最强的菌株为① ５ 发酵过程中由于呼吸作用
， 
产生较多的热量和有机酸 故应选择较高温度和酸性环境中活 培养基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
。 
性较高Ｊ４酶
（ ， ， ） ， 培养基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋
７． ２０１４课标全国Ⅱ ３９ １５分 为了调查某河流的水质状况
，  ：“” ，“” 。
某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量 并进行了细菌分 注 ＋ 表示有 － 表示无
。 ：  ， （ “ ” “ ”）
离等工作 回答下列问题 据表判断 培养基甲 填 能 或 不能 用于分专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９５７
， ，
离和鉴别纤维素分解菌 原因是  株能分泌降解苯磺隆的蛋白质 不合理 缺少空白对照
； （ “ ” “ （） 、
培养基乙 填 能 或 不 解析 １ 微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括水 碳
”） ， 、 ； ，
能 用于分离和鉴别纤维素分解菌 原因是  源 氮源和无机盐 在培养基中加入苯磺隆作为唯一碳源 可将
。 。（）
 只能利用此碳源的菌种筛选出来 ２ 植物组织培养基与微
（） （） （） ， ，
答案 １ 纤维二糖 葡萄糖 ２ 红 透明圈 ３ 不能 生物培养基相比 常常需要添加植物激素 包括生长素和细胞
；
液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤 分裂素 这些植物激素事先按一定的质量浓度单独配成母液保
， — ，  。（） ， ；
维素 不会形成ＣＲ 纤维素红色复合物 即使出现单菌落也不 存备用 ３ 纯化菌株时 通常用接种环进行划线操作 第二
 ， ，
能确定其为纤维素分解菌 区域划第一条线时 接种环灼烧后未冷却 致使所划第一条线
（） ，  。 ，
解析 １ 纤维素酶是一种复合酶 一般认为它至少包括三 上无菌落 若第二次划线未从第一区域末端开始 则也会导致
： 、 ，  。（）
种组分 Ｃ 酶 Ｃ 酶和葡萄糖苷酶 前两种酶使纤维素分解成 第二划线区域第一条线上无菌落 ４ 由图乙可知本实验的
，１ Ｘ 。（） 
纤维二糖 葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖 ２ 刚果红 目的是探究能降解苯磺隆的物质是否是该菌种所产生的蛋白
，  。 ，
可与纤维素形成红色复合物 但并不与水解后的纤维二糖和葡 质 为使实验设计更合理还需再设置一个对照组 将蛋白酶溶
。  ， 。
萄糖发生这种反应 用含有刚果红的纤维素培养基培养纤维 液改为等量的蒸馏水 其余设置不变
， ， ，  （ ， ， ） ，
素分解菌时 由于纤维素被分解 红色复合物无法形成 培养基 １０． ２０１１课标 ３９ １５分 有些细菌可分解原油 从而消除由原
。（）  。
中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 ３ 培养基甲未 油泄漏造成的土壤污染 某同学欲从受原油污染的土壤中筛
， ， 。  。 ：
使用琼脂 为液体培养基 不能用于分离单菌落 含有纤维素 选出能高效降解原油的菌株 回答问题
（ ） 。  （） ，
和刚果红 ＣＲ 的培养基可分离和鉴别纤维素分解菌 １ 在筛选过程中 应将土壤样品稀释液接种于以
（ ， ， ） ， 。 ，
９． ２０１４四川理综 １０ １１分 有机农药苯磺隆是一种除草剂 为唯一碳源的固体培养基上 从功能上讲 该培养基属
。 ，  。
长期使用会污染环境 研究发现 苯磺隆能被土壤中某些微生 于 培养基
。 （） ， ，

物降解 分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过 ２ 纯化菌种时 为了得到单菌落 常采用的接种方法有两
、 。 ， 。

程如图甲 乙所示 种 即 和
（） ， ，
 ３ 为了筛选出高效菌株 可比较单菌落周围分解圈的大小
。
 分解圈大说明该菌株的降解能力
（） ， ，
 ４ 通常情况下 在微生物培养过程中 实验室常用的灭菌方
、 。
 法有灼烧灭菌 和 无菌技术要求实
（） 、 、 ，
１ 微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源 水  验操作应在酒精灯 附近进行 以避免周围环境
， 。
四类 该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作 中微生物的污染
， （）
为唯一碳源 其原因是  答案 １ 原油 选择
。 （）
 ２ 平板划线法 稀释涂布平板法
（） ， （）
２ 与微生物培养基相比 植物组织培养的培养基常需添加生 ３ 强
， （）
长素和 这 。 些植物激素一般需要事先单独配  ４ 干热灭 （ 菌 ） 高压蒸汽灭菌 火焰
（） 制成 ， 保存备用 。  解析 ， １ 从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油 ，
３ 纯化菌株时 通 ， 常使用的划线工具是 划线的某  的菌株 使用的培养基应是以 ， 原油为唯一碳源的选择培养基
个平 ， 板培养后 第一划线区域的划线上都不间 ， 断地长满了  通过控 ， 制碳源这种营养成分 来 。 促 （ 进 ） 能高效降解原油的 ， 菌株
菌 第二划线区域所划的第一条线上无菌落 其他划线上 的生长 抑制其他微生物的生长 ２ 菌种纯化培养时 常采
。  。（）
有菌落 造成划线无菌落可能的操作失误有 用平板划线法和稀释涂布平板法接种 ３ 当固体培养基上
。 ， ，
长出单菌落后 可通过比较菌落周围分解圈的大小 来判断菌
（） ， ， 。 ，
４ 为探究苯磺隆的降解机制 将该菌种的培养液过滤离心 株降解原油能力的大小 一般来说 分解圈越大说明该菌株
。  ， 。（）
取上清液做图乙所示实验 该实验的假设是 的降解能力越强 反之则越弱 ４ 实验室培养微生物的过程
， ？  ， 、 、 、
该实验设计是否合理 为什 中 常用灼烧灭菌法对接种环 接种针 试管口 瓶口等进行灭
？ 。  ； 、 ；
么 菌 用高压蒸汽灭菌法对培养基 试管等进行灭菌 用干热灭菌
（）  （ 、 ） 。
答案 １ 氮源和无机盐 只有能利用苯磺隆的微生物能 法对玻璃器皿 吸管 培养皿 和金属用具等进行灭菌 实验
（） （）  ，
正常生长繁殖 ２ 细胞分裂素 母液 ３ 接种环 ①接种 操作应在酒精灯火焰旁进行 因为酒精灯火焰旁可形成一个无
； （）  ， 。
环灼烧后未冷却 ②划线未从第一区域末端开始 ４ 目的菌 菌环境 可防止微生物的污染
： ：
时间 ４０分钟 分值 ５０分
、 （ ， ） ，
一 单项选择题 每小题２分 共１０分  Ｄ．泡菜制作的过程中 乳酸菌能在缺氧条件下产生乳酸
（ ， ）
１． ２０２１届辽宁新高考调研测试 １３ 传统发酵技术在生活生产１． 答案 Ｃ
。 （ ） （ ， ）《 》
实践中广泛应用 下列有关叙述错误的是 ２． ２０２１届湖北华大新高考联盟测评 １２ 齐民要术 早有记
、  ， ： （
Ａ．家庭制作果酒 果醋通常不是纯种发酵 载可用酒酿醋 具体做法为 粟米饭掸冷如人体投之 米酒
，  ）， ， ， 。
Ｂ．利用乳酸菌制作酸奶的过程中不需要通气培养 应密封发酵 醅 杷搅 绵幕瓮口 每日再度搅之 意思是将煮好的粟米饭
，  ， ， ，
Ｃ．果醋制作过程中发酵液ｐＨ逐渐降低 果酒制作过程中情况 摊开降至人体温度 与米酒醅混合 搅拌均匀 用棉纱布盖住罐
 ， 。 （ ）
相反 口 每天重复搅拌几次 下列说法错误的是（ ）
９５８ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
“ ” “ ” （
Ａ． 粟米饭 与 米酒 的混合物可以作为酿醋的原材料  阿萨伊果→挑选→清洗→榨汁→ＳＯ 处理→配料 一般加入白
“ ” ， ）２
Ｂ． 粟米饭掸冷如人体 避免了高温影响发酵微生物活性  砂糖 加糖量应控制在１０％～１２％ →接种酿酒酵母→发酵→
“ ” （ ）
Ｃ． 绵幕瓮口 是为了更好地让发酵微生物进行无氧发酵  过滤→调配→灌装→成品 酒精度≥１０．０％ｖｏｌ
“ ” （ ）
Ｄ． 每日再度搅之 让底层发酵更充分以增加发酵产物量  下面相关分析正确的是
２． （ 答案 Ｃ ， ）  Ａ．酿酒酵母对ＳＯ ２ 耐受力比细菌强
３． ２０２１
，
届河北邯郸摸底 １３ 将同
，
一土壤样本经灭菌和未灭菌 Ｂ．酒精发酵过程中
，
会因醋酸菌污染而发生醋酸发酵
处理后 分别放在两个培养皿中 在土壤表面分别放３张废纸 Ｃ．在发酵的初期 酿酒酵母的代谢产物为ＣＯ 和Ｈ Ｏ
（ ）。  ， ２ ２
主要成分是纤维素 然后将两个培养皿放在有较高湿度的 Ｄ．酒精的鉴定可采用酸性重铬酸钾溶液 颜色由灰绿色变成橙
， （ ）。 
培养室中 ４～６周后观察两个培养皿的变化情况 如图 下 黄色
（ ）
列相关叙述错误的是 ６． 答案 ＡＣ
 （ ， ）
７． ２０２１届山东日照一联 ２０ 高温淀粉酶在工业生产中有很大
 。
的实用性 研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶
 ， 。 （ ）
的嗜热菌 其筛选过程如图所示 下列叙述错误的是




Ａ．土壤微生物能够将废纸中的有机物分解成无机物  ，
Ａ．过程①是对菌液进行稀释 过程②的接种方法是平板划线法
Ｂ．将培养皿和土壤灭菌的方法可以是高压蒸汽灭菌  ，
， Ｂ．Ⅰ号培养基属于选择培养基 以淀粉作为唯一碳源
Ｃ．若土壤湿度不够 可加入些清水以控制无关变量  、 ，
， Ｃ．Ⅰ号 Ⅱ号培养基的配制和灭菌时 应先进行灭菌再调节ｐＨ
Ｄ．若某酵母菌不能利用废纸 可能是由于缺乏相应分解酶系 ，
 Ｄ．应从Ⅰ号培养基挑出透明圈直径／菌落直径大的菌落 接种
３． 答案 Ｃ
（ ， ） ， 到Ⅱ号培养基上
４． ２０２１届河北衡水中学一联 １４ 秸秆还田可增加土壤肥力
。 ， ７． 答案 ＡＣ
缓解环境污染 为分离分解纤维素的微生物菌种 实现废物的
， “  、 （ ）
资源化利用 研究人员设计了 土壤取样→选择培养→梯度稀 三 非选择题 共３２分
” 。  （ ， ）（ ）
释→涂布平板→挑选菌株 的实验流程 下列叙述错误的是 ８． ２０２１届湖北武汉部分学校高三起点考 ２５ １０分 兴趣小
（ ） “ 、 ”
组为研究 使用公筷对餐后菜品细菌 真菌数量的影响 进行
，  。 ， ， ，
Ａ．配制培养基时 应在高压蒸汽灭菌之后调节ｐＨ 了实验 实验中选用４道菜 每道菜分为３盘 一盘取样冷藏
，  ， 。
Ｂ．选择培养时 应使用纤维素为唯一碳源的培养基 一盘使用公筷 一盘不用公筷 实验过程及结果分别见如图和
，  。
Ｃ．进行梯度稀释时 应在酒精灯火焰旁完成各种操作 表所示
， 
Ｄ．挑选菌株后 应将使用过的培养基进行灭菌处理后再丢弃

４． 答案 Ａ
（ ， ）“ ” 
５． ２０２０山东聊城一模 １３ 纸片扩散法 测定病原菌对抗生
， 
素敏感性的实验是在某病原菌均匀分布的平板上 铺设含有不 、 （ ）
。 ，  每克样品中含有的细菌 真菌菌落总数 ｃｆｕ／ｇ
同种抗生素的纸片后进行培养 图示为某测定实验的结果 其
。  菜名 餐后
中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域 下列叙述正确的是 餐前
（ ）
 公筷 非公筷
 凉拌黄瓜 １４０００ １６０００ ４５０００

盐水虾 １６０ １５０ ２２０

炒芦笋 ３０ ３０ ５３０

干锅茶树菇 １１００ ４６００ ７９０００

：
回答下列问题
Ａ．在图示固体培养基上可用平板划线法接种病原菌  （） 、 ，
１ 实验使用的餐具 筷子及取样工具需经过 处理
Ｂ．形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较敏感  ， ，
接种的方法是 从取样开始 操作过程中
Ｃ．未出现抑菌圈可能是病原菌与含抗生素的纸片接触后发生  ， 。
应严格防止 以保证实验结果的准确性
抗性变异  （） 、 （ “ ”
“ ” ２ 固体培养基Ｘ对菜品中的细菌 真菌应 填 有
Ｄ． 纸片扩散法 实验中的自变量是不同种的抗生素  “ ”） 。
或 没有 选择性
５． 答案 Ｄ  （） 。
３ 筷子上微生物的来源有
、 （ ， ）  ，
二 不定项选择题 每小题４分 共８分 实验结果表明使用公筷可以防止传染病传播 其原因是
（ ， ）  。
６． ２０２１届辽宁沈阳高三测评 １９ 阿萨伊果是一种产自南美洲
。 ，  （） （）
的棕榈树果实 阿萨伊果发酵酒营养丰富 具有很好的开发前 ８． 答案 １ 灭菌 稀释涂布平板法 杂菌污染 ２ 没有
。 ，  （） 、 （ 、 ）、 （
景 阿萨伊果汁中含糖量为８％～１０％ 酒精度能达到４．５％ｖｏｌ～ ３ 空气 实验者 口腔 手 菜肴 抑制了微生物的传播 切
。 ，  ）
５．５％ｖｏｌ 因为不同微生物对 ＳＯ 的耐受力不同 其中细菌最 断传播途径
， ２ 。  （ ， ）（ ）
为敏感 所以ＳＯ 在酿酒中常作为杀菌剂使用 下面是用阿萨 ９． ２０２１届福建三明泰宁一中段考一 ４６ １１分 回答下列与
２ ： 。

伊果酿酒的流程及相关操作 细菌培养相关的问题专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９５９
（） ， 、
１ 在细菌培养
（
时
“
培养基
”
中
“
能同时
”
提供
“
碳源 氮
”）
源
。
的成分
，
是 产脲酶微生物Ｎ的筛选→产脲酶微生物Ｎ的培养→
填 蛋白胨 葡萄糖 或 ＮａＮＯ 通常 制
３
脲酶的提取纯化→脲酶的固定化
备培 ， 养基时要根据所培养细菌的不同来调节培 。 养基的 （）
ｐＨ 其原因是 （ “ ” “ 硝化 ” 细 ）  １ 一般用来 ， 筛选产脲酶微生物Ｎ的培养基含有ＫＨ ２ ＰＯ ４ 和
菌在没 ， 有碳源的培养基上 填 能够 或 不能 。  Ｎａ ２ Ｈ （ ＰＯ ４ 其作用有 ）。
（） 生长 原因是 （ “ ”  （） 答出两点即可 ，
２ 用 “ 平板 ” 培 ）。 养细菌时一般需要将平板 填 倒置 或  ２ 在筛选产脲酶微生物 Ｎ 过程中为了获得单菌落 ， 可用
（） 正置 ，  、 法将样 。 本接种于固体培养基表面 经过
３ 单个细菌 、 在平 、 板上会形成菌落 研究人员通常可根据菌 ， 落  选择培养 鉴别等 ， 步骤 在鉴别过程中培养基应加入
的形状 大小 颜色等特征来初步区分不同 。 种的微生物 原  指示剂 这种指示 。 剂能够鉴别的原理是
（） 因是 ，  （） ，
４ 有些使用后的培养基在丢弃前需要经过 。 处理 这  ３ 用 ， 接种环蘸取少量稀释的稀泥浆 在培养基表面轻点２０
种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物 处 在 。 此操作过程中需要对接种环进行 次灼烧
（） 
９． 答案 １ 蛋白胨 不同细菌生长繁殖所需的最适ｐＨ不同 灭菌 、 要在接种好的培养皿 处写明 。 培养基种
（） 
能够 硝化细菌可以利用空气中的ＣＯ 作为碳源 ２ 倒 类 培养日期以及平板上培养样品的稀释度等
（） ， ２  （） ；
置 ３ 在一定的培养条件下 不同种微生物表现出各自稳定 １０． 答案 １ 为细菌生长提供无机营养 作为缓冲剂保持细
的菌落特征 （ ４ ） 灭菌  胞生长过程中ｐＨ相对稳定 （ ２ ） 稀释涂布平板 （ 或平板划
１０． （ ２０２１届重庆一测 ， ２５ ）（ １１ 分 ） 尿素是一种重要的农业氮  线 ） 酚红 尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解为氨 ， 使
肥 。 但是 ， 尿素并不能直接被农作物吸收 ， 只有被产脲酶的微  ｐＨ升高 ， 培养基中加入酚红指示剂后 ， 氨可以使指示剂呈红
生物Ｎ分解后 ， 才能被植物利用 。 下面是脲酶的制备及固定  色 （ ３ ） 两 皿底
：

化步骤（ ）
９６０ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
Ａ 组
、 “ ”，
一 单项选择题  易错警示 据 某种细菌以ＣＯ 为唯一碳源 只能判定该细
（ ， ） ， ２ 。 ：
１． ２０２０届山东等级考模拟 １３ 在实验室中可利用酵母菌发酵 菌是自养型 不能判定其异化作用类型 这提醒我们 对题干
， （ ） 。
的方式制作葡萄酒 下列说法正确的是  信息不能过度演绎
（ ， ）
Ａ．葡萄糖在酵母菌细胞的线粒体内被分解 ５． ２０１８北京东城期末 ２８ 黑茶是以肉食为主的中国边疆游牧民
。 ，
Ｂ．制作葡萄酒时酵母菌先在有氧条件下大量增殖  族的主要饮品 在一系列微生物的作用下 黑茶会产生一种对人
“ ”。 “ ”
Ｃ．制作过程中酵母菌始终处于碱性环境 体非常有益的金黄色颗粒 金花 研究人员对 金花 中的微生
 ， 。 （ ）
Ｄ．酵母菌的发酵产物不会抑制自身的代谢活动 物进行了分离和鉴定 过程如图 下列说法不正确的是
，  獉獉獉
答案 Ｂ 本题以葡萄酒制作为话题 考查果酒制作原理的
， 
分析和对实验条件的控制 体现了对科学思维素养中批判性思
。 
维要素的考查 葡萄糖在细胞质基质中分解成丙酮酸才能进
， ； 
入线粒体 Ａ错误 制作葡萄酒初期需提供有氧环境供酵母菌
， ； 
大量繁殖 Ｂ正确 由于酵母菌产生的二氧化碳溶于发酵液后 “ ”
， ， ；  Ａ．向 金花 样品中加入蒸馏水制成样品悬液
可形成碳酸 故发酵液呈酸性 Ｃ错误 酵母菌产生的酒精对自
， 。  Ｂ．可根据菌落特征对菌种进行初步鉴定
身代谢活动具有抑制作用 Ｄ错误
（ · ） ，  Ｃ．涂布平板上长出的菌落可通过划线进一步纯化
２． ２０２０届５ ３创新 下列有关微生物培养的叙述 不正确的
（ ） Ｄ．可通过基因组测序对菌种进行准确鉴定
是 “ ” ，
，  答案 Ａ 要分离的微生物只能来源于分离的 金花 样品
Ａ．测定土壤样品中的细菌数目 常用稀释涂布平板法进行菌落 ， ，
 如果用蒸馏水制成悬液 分离的微生物可能来源于蒸馏水 因
计数 ， 。
，  此要用无菌水 Ａ选项错误
Ｂ．在对微生物进行培养前 需要对微生物和培养基进行灭菌 ，
， 思路分析 正确掌握图示中分离纯化微生物的操作过程 理
Ｃ．酵母菌发酵过程产生的酒精 对其他微生物生长有一定的抑  。
解每一步实验操作的意义是解题的关键 需要注意的是涂布
制作用  ， ，
， 平板长出的菌落通常不是一种菌落 而是混合菌落 可通过划
Ｄ．分离能分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中唯一的氮源  、 。
， 线法进一步挑出其中的单菌落进行分离 纯化
答案 Ｂ 测定土壤中微生物的数量 常用稀释涂布平板法 （ ， ） ，
， ； ， ６． ２０１８北京海淀期中 ３０ 在微生物培养的过程中 需要通过
进行菌落计数 Ａ正确 对微生物进行培养前 需要对培养基进 ，
， ， ； 选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种 下列与之相关
行灭菌 不能对微生物进行灭菌 Ｂ错误 酵母菌发酵过程产生 （ ）
， ， ； 的叙述中不正确的是
的酒精 对其他微生物生长有一定的抑制作用 Ｃ正确 分离能 獉獉獉 ，
， ， 。 Ａ．纤维素分解菌能够分解刚果红染料 从而使菌落周围出现透
分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中唯一的氮源 Ｄ正确 
（ ） 明圈
３．幽门螺杆菌 能分解对热不稳定的尿素 是急慢性胃炎和消化 ，
。 Ｂ．尿素分解菌能够将尿素分解为氨 从而使酚红指示剂变红
道溃疡的主要致病因素 为从带菌者胃黏膜样本中分离出该
， （ ） Ｃ．在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株
细菌 相关实验步骤和方法不合理的是 
， Ｄ．在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现
Ａ．配制培养基并灭菌后 需要加入无菌尿素  “ ”
， 溶钙圈
Ｂ．应设置未接种的培养基 ， 作为实验的对照  答案 Ａ 分离土壤中能分解纤维素的微生物 ， 利用了纤维
Ｃ．统计样本中活菌数量时 可用划线法接种  素可以和刚果红结合形成红色复合物的特性 ， 当红色的平板上
Ｄ．可利用酚红指示剂对培养的菌落 ， 进行鉴定 ，  有纤维素分解菌时 ， 纤维素被纤维素分解菌分解利用 ， 从而在
答案 Ｃ 配制培养基
，
并灭菌
；
后 需要加入无菌尿素 尿素
菌体周围形成透明圈
，
Ａ选项错误
；
在以尿素为唯一氮源的选
不能进行高压蒸汽灭菌 Ａ正确 要从带菌者胃黏膜样本中分 ， ，
， ， ， ；  择培养基中 尿素分解菌可以将尿素分解为氨 从而使酚红指
离出该细菌 需用选择培养基 并设置对照 Ｂ正确 统计活菌 ， ；
， ， ；  示剂变红 Ｂ选项正确 在加入抗生素的选择培养基中活下来
数量 应用稀释涂布平板法 Ｃ 错误 尿素分解生成的氨呈碱 ， ；
， ， 。  的通常是具有抗生素抗性的细菌 Ｃ选项正确 乳酸菌可以产
性 可利用酚红指示剂对培养的菌落进行鉴定 Ｄ正确 ， ，
（ ， ） ， 生乳酸 乳酸能与碳酸钙反应 在含有碳酸钙的培养基上生长
“ ”， 。
４． ２０１８北京东城期末 ２７ 已知某种细菌以ＣＯ 为唯一碳源
２ （ ） 的乳酸菌菌落周围会出现 溶钙圈 Ｄ选项正确
， ，
下列相关叙述正确的是
 抢分妙招 纤维素分解菌 顾名思义是分解纤维素的菌 而不
， 。
Ａ．可推测该细菌的代谢类型为自养需氧型
 是分解刚果红 直接判定Ａ选项错误
Ｂ．无机盐是该细菌不可缺少的营养物质 （ 、 ， ）
 ７． ２０２０江苏淮阴 姜堰期中联考 １８ 南洋东华公司研发了两
（ ）
Ｃ．培养过程中碳源同时充当该细菌的能源物质
种石油降解产品ＢＤＢ－ｎ生物降解菌 厌氧型 和ＢＤＢ－ａ生物
 （ ）， 。
Ｄ．培养该细菌的培养基中无需添加氮源
“ ”，  降解菌 好氧型 降 ， 解菌是通过产生酶对石油进行分解的
答案 Ｂ 据 某种细菌以ＣＯ 为唯一碳源 判定该细菌是
， ２ ， ；  如图为不同条 。 件下 某种降解菌对某湖泊污泥中石油分 （ 解能力 ）
自养型 但无法确定其异化作用类
、
型是需
、
氧型 Ａ选项
，
错误 微
 的测定结果 下列有关分析错误的是
生物需要的基本营养物质为碳源 氮源 无机盐和水 无机碳源
， ， ，、 
如ＣＯ 不能作为该微生物的能源物质 Ｂ选项正确 Ｃ Ｄ选项
。２

错误专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９６１
。
 分是
（） 。
 ２ 对培养基灭菌的方法是
（） ， ，
 ３ 若要筛选硝化细菌 培养基中不应该加入
， 。
 从功能上分 该培养基属于 培养基
（） ，
 ４ 若要鉴别所分离出的细菌是否为大肠杆菌 则应该在培养
， 。
 （） 基中加入 ， 观察是否 ， 出现 色菌落
Ａ．该实验的自变量为ｐＨ和污泥含水量  ５ 纯化菌种时 为了得到单 。 菌落 常用的接种方法是
Ｂ．该实验的检测指标是２天后污泥中的石油含量  （） 和 ，
Ｃ．该实验中使用的降解菌最可
，
能是ＢＤＢ－ａ生物降解菌

６ 细菌计数时 根据培养基上出现的
，
菌落数目和稀释倍数计
Ｄ．在不同污泥含水量条件下 降解菌体内酶的最适ｐＨ相同 算得出的数目往往比实际数目小 原因是
，  。
答案 Ｃ 分析图解可知 该实验的自变量是ｐＨ和污泥含
， ，、 ；  （） 、 、 （） （）
水量 因变量是２天后污泥中的石油含量 Ａ Ｂ正确 根据图中 答案 １ 氮源 水 无机盐 ２ 高压蒸汽灭菌法 ３ 碳
， 、 ，  （） （）
的实验数据分析可知 当污泥含水量６０～８０％ ｐＨ＝７时 石油 源 选择 ４ 伊红美蓝 黑 ５ 稀释涂布平板法 平板划
，  （） ，
含量最少 说明石油降解酶分解能力最强的条件为污泥含水量 线法 ６ 两个或多个细菌连在一起时 平板上观察到的只是
、 ， ， 
６０～８０％ ｐＨ＝７ 则该实验用的应该是厌氧菌 即ＢＤＢ－ｎ生物 一个菌落
， ； ，  （） 、 、
降解菌 Ｃ错误 根据三条曲线的最低点可以判断 在不同污泥 解析 １ 培养细菌的培养基的成分包括碳源 氮源 水分
， ， 。  。（） 。（）
含水量条件下 降解菌体内酶的最适ｐＨ相同 Ｄ正确 和无机盐等 ２ 培养基宜采用高压蒸汽灭菌法灭菌 ３ 硝
，  ， ，
解题关键 解答本题的关键是分析曲线图 找出实验的自变 化细菌能利用二氧化碳合成有机物 为自养生物 故筛选硝化
， ，  。
量和因变量 判断最适宜的ｐＨ和污泥含水量 进而判断出分 细菌的选择培养基中不应加碳源 用于筛选硝化细菌的培养
。  。（） ，
解菌的类型 基属于选择培养基 ４ 在含有伊红美蓝的培养基中 大肠杆
。（） ，

、 菌菌落呈黑色 ５ 纯化菌种时 获得单个菌落的方法为稀释
二 非选择题  。（）
（ ， ） 涂布平板法和平板划线法 ６ 由于两个或多个细菌连在一
８． ２０１９山东枣庄期末 ３７ 如表为培养某种微生物的培养基配 ，
， ：（ ）  起时在平板上只能形成一个菌落 故利用稀释涂布平板法对与
方 请回答有关问题 １５分 ， 。
 细菌进行计数时 得到的细菌数目小于实际数目
· · 。
ＫＨ ２ ＰＯ ４ ＮａＮＯ ３ ＫＣｌ 酵 膏 母 纤 素 维 粉 水 酪 解 素 Ｎａ ２ ７ Ｈ Ｈ Ｐ ２ Ｏ Ｏ ４ Ｍ ７ ｇＳ Ｈ Ｏ ２ ４ Ｏ 蒸馏水   １０．炭 两 疽 端 病 截 是 平 由 、 呈 炭 竹 疽 节 杆 状 菌 排 引 列 起 ， 的 菌 一 落 种 呈 人 卷 畜 发 共 状 患 。 传 对 染 炭 病 疽病 炭 疑 疽 似 杆 患 菌
， ， 。
定容至  者 可根据噬菌体的宿主专一性 通过实验确诊
０．９ｇ １ｇ ０．５ｇ ０．５ｇ ５ｇ ０．５ｇ １．２ｇ ０．５ｇ （） ： ， ，
１０００ｍＬ  １ 细菌培养 采集疑似患者的样本 分离培养 获得可疑
（） ， 。
１ 该培养基只允许分解纤维素的细菌生长 这种培养基称为 菌落
。 （） ： 。
培养基 该培养基在接种前应该用  ２ 细菌鉴定 实验流程如图所示
。
法灭菌 
（） ，
２ 用该培养基接种微生物时 接种操作要在 附近进
， 。
行 原因是 
（） ， ，
３ 假设培养结束后 发现培养基上菌落连成一片 可能的原
？（ ） 。
因是什么 列举两项 
（）
答案 １ 选择 高压蒸汽灭菌 
（）（ ）
２ 酒精灯 火焰 火焰附近存在着无菌区域 
（） ， ； ，
３ 稀释倍数不够 菌液的浓度太高 培养过程灭菌不严格 受 ①对配制的液体培养基等需采取
； （
到其他微 （ 生 ） 物的污染 ，  法进 “ 行灭菌 ” 实 “ 验所用液 ”） 体 。 培养基的碳源为 选
解析 １ 该培养基 。 只允许分解纤维素的细菌生长 这种培  填 无机碳 或 有机碳 ， ，
养基称为选择培养基 该培养基在接种前应该用高压蒸汽灭 ②挑选可疑菌落制片后 用 观察 可看到呈竹节
。（） ，  。
菌法灭菌 ２ 用该培养基接种微生物时 接种操作要在酒精 状排列的杆菌
， 。（）  ， ， ，
灯火焰附近进行 原因是火焰附近存在着无菌区域 ３ 假设 ③接种可疑菌后 ３５ ℃培养２４小时 液体培养基变混浊
， ， ：  。
培养结束后 发现培养基上菌落连成一片 可能的原因 稀释倍 原因是 对照组试管中应加入
， ； ，  ， ，
数不够 菌液的浓度太高 培养过程灭菌不严格 受到其他微生 与实验组同时培养６小时后 若实验组液体
。  （ “ ” “ ”），
物的污染 培养基的混浊度比对照组 选填 高 或 低
，  ； 。
解题关键 解答本题的关键是明确灭菌的方法 以及筛选分 则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染 反之则排除
， 。  ， ，
解纤维素的微生物的方法 再根据题意作答 ④对排除的疑似患者及易感人群 可接种炭疽杆菌疫苗
（ ， ） ， ， 。
９． ２０１６东北三省三校二模 ４０ 土壤中的细菌数量多 分布广 刺激机体产生相应抗体 与产生抗体相关的细胞除Ｔ细
。  、 ， 。
包括自养细菌和异养细菌 自养细菌能直接利用光能或无机 胞 Ｂ细胞外 还有
（  （）
物氧化时所释放的化学能同化 ＣＯ 合成有机物 例如硝化细 答案 ２ ①高压蒸汽灭菌 有机碳 ②显微镜 ③细菌
）， ２ （ ）。 、
菌 异养细菌从有机物中获得能源和碳源 例如大肠杆菌 大量繁殖 等量生理盐水 低 ④吞噬细胞 效应 Ｂ 细胞
。  （ ）
人类根据需要从土壤中分离提纯各种细菌 回答下列相关 或浆细胞
：  （）
问题 解析 ２ ①液体培养基应使用高压蒸汽灭菌法进行灭
（） ， 。 ，

１ 培养细菌的培养基除了含有碳源外 还必须含有的基本成 菌 炭疽杆菌同化类型为异养型 实验所用液体培养基的碳（ ）
９６２ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
。 ， ， ， ， ，
源应选有机碳 ②微生物个体小 肉眼观察不到 必须借助显 培养 在这种情况下 只有能利用Ｎ 的微生物才能生长繁殖
。 ， ， ２ 。
微镜才能观察到菌体特征 ③在液体培养基中 细菌大量繁 用这种方法 可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来
； ： ， 、
殖会导致液体培养基变混浊 该实验中实验变量为是否加入 材料与用具 农田的表层土 无氮培养基 牛肉膏蛋白胨
， ， 、 、 、
噬菌体 所以对照组除不加噬菌体外 其他处理都应该和实验 培养基 盛９ｍＬ无菌水的大试管若干 无菌移液管 无菌涂布
（ ）。 、 、 、 、
组保持一致 即应加入不含噬菌体的等量生理盐水 噬菌 器 无菌培养皿 盛 ９０ ｍＬ 无菌水的锥形瓶 酒精灯 恒温
， 。 。
体可破坏炭疽杆菌 ， 细胞 从而使液体培养基变澄 ， 清 ④在特  箱等 ：
异 （ 性免疫过 ） 程中 吞噬细胞参与了抗 。 原的呈递 效应 Ｂ 细胞  （） 方法步 。 骤 、
或浆细胞 是直接产生抗体的细胞 １ 倒平板 分别将无氮培养基 牛肉膏蛋白胨培养基倒平
（ ）  ， 。
１１． ２０２０湖北武汉起点监测 金黄色葡萄球菌是一种具有高度 板 应在 操作
， 、 。  （） 。
耐盐性的微生物 可引起人类肺炎 肠炎等疾病 金黄色葡萄 ２ 制备土壤稀释液 取土样１０ ｇ加入到盛有９０ ｍＬ的无菌
（ ） ，  ， 。
球菌在血平板 培养基中添加适量血液 上生长时 可破坏菌 水的锥形瓶中 充分摇匀 用无菌移液管吸取上清液１
， 。  ， ，
落周围的红细胞 使其褪色 如图为定性检测鲜牛奶中是否 ｍＬ 转至盛９ｍＬ无菌水的大试管中 依次稀释到１０７倍稀
， ：  。 ，
存在金黄色葡萄球菌的操作流程 请回答相关问题 释度 为实现无菌操作 试管口和移液管应在离火焰
 。
ｃｍ处
 （） 。
３ 涂布 按照１０７～１０３稀释度的顺序分别吸取０．１ ｍＬ进行
 。 ，
平板涂布 每个稀释度下 无氮培养基至少涂布
 。 。
个平板 牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个平板
 （） 。 ， 。
４ 培养 放入恒温箱内 在适宜温度条件下培养３～４ ｄ 一
（） ， ；  ，
１ 按细胞结构分类 金黄色葡萄球菌属于 生物 从培 般每隔 ｈ统计一次 选取 的平板
，  ， 。
养过程分析 振荡培养的目的是 记数作为结果 这样可以防止
。 （） 。 ，
５ 细菌计数 当菌落数目稳定时 选取菌落数在
（）  。 ，
２ ７．５％ＮａＣｌ肉汤培养基可为微生物提供的基本营养成分 的平板进行计数 如果计数结果的平均值为５０ 则每克
、 ，  （ ）。
包括水 这种培养基从功能上看属于 样品中自生固氮菌的数目是 稀释度为１０５
。  （） 。 ，
６ 预期结果 相等稀释度下 牛肉膏蛋白胨平板上的菌落
（） ， ，  （ “ ” “ ”）
３ 实验结束后 使用过的培养基应 处理 以避免 数 填 多于 或 少于 无氮培养基上的
。 。

污染环境或感染操作者 数目 理由是
（） 、 ， 。

４ 经多次规范操作 重复实验 血平板上的菌落周围出现
， ， （） （） （） （）
初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌 但

答案 １ 酒精灯火焰旁 ２ １～２ ３ ３ １ ４ ２４
， ，
鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带的 因此 要 菌落数目稳定 因培养时间不足而导致遗漏菌落
， （） （）
对本操作进行完善 完善的方案是  ５ ３０～３００ ５×１０７ ６ 多于 无氮培养基上可以生存和
。 ，
 繁殖的只是土壤中的固氮菌 而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎
（）
答案 １ 原核 使微生物与营养物质充分接触并提高培 允许土壤中所有的菌类生存
（） 、 、 ， ，
养液中的氧气含量 ２ 无机盐 碳源 氮源 选择培养基  解析 要分离固氮微生物 采用选择培养基分离的方法 缺
（） （） ，
３ 灭菌 ４ 透明圈 设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均 乏氮源的培养基可用来分离自生固氮微生物 而其他微生物
。
相同的对照组  因缺乏氮源而不能生长 牛肉膏蛋白胨培养基用于与选择培
（） 。 ， 。
解析 １ 金黄色葡萄球菌属于原核生物 振荡培养可以 养基进行对照 以验证选择培养基是否有选择作用 因牛肉
。 ， 。
使微生物与营养物质充分接触并提高培养液中的氧气含量  膏蛋白胨培养基用于对照 故只需要涂布一个平板
（） ， （ · ， ）
２ ７．５％ＮａＣｌ肉汤培养基中含有蛋白质 所以可以提供氮源１３． ２０１９５ ３ 原创冲刺卷二 ３７ 饲养动物常用的植物饲料中
， ， ， ，
和碳源 又含有水分和氯化钠 所以提供的基本营养物质为碳 含有难溶的植酸钙等物质 很难被动物吸收利用 并且影响其
、 、 ； ， 。 ，
源 氮源 水和无机盐 高浓度的盐溶液不利于微生物生长 而 他营养物质的利用 若在饲料中添加植酸酶 则能催化植酸
， 。
金黄色葡萄球菌是一种
。
具
（
有
）
高度耐盐性
，
的微生物 因此该培 钙水解成为可以被吸收利用的磷酸盐等 如图是科研
。
人员从
养基属于 ， 选择培养基 ３ 实验结束后 。 使 （ 用 ） 过的培养基 “ 应  作物根 。 部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图 请分析
灭菌处理 以避免污染环 （ 境或感染操作者 ４ 根 ） 据题意 金 ， 作答
黄色葡萄球菌在血平板 培养基中添加适量血液 上生长时
， ” ， 
可破坏菌落周围的红细胞 使其褪色 可知 如果经多次规范
、 ， ， 
操作 重复实验 血平板上均出现有透明圈的菌落 可初步证
； 
明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌 若要验证金黄色葡萄球菌
， ， 
是否为鲜牛奶所携带的 完善方案要设置对照实验 对照实验
。 （）
的设计是设置加灭菌的鲜牛奶但其他操作均相同的对照组 １ 实验室中筛选微生物的原理是
， ，  。
思维点拨 培养金黄色葡萄球菌 可以用选择培养基 在培
。 
养基中加入高浓度的食盐 配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须
 。
１２．探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数
：  （） ： ，
实验原理 自生固氮菌是一种可以将空气中氮气还原成 ２ 请写出一种纯化得到植酸酶的方法
。 ， ， 。
氨的微生物 农田的表层土壤中 自生固氮菌的含量比较多 其原理是
， ， （）

将用表层土壤制成的土壤稀释液 接种到无氮培养基上 进行 ３ 现将从１００ ｍＬ含有产植酸酶菌的土壤样品溶液取出的专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９６３
， （ 、
１ ｍＬ样品溶液稀释１０４ 倍后 取０．１ ｍＬ稀释液均匀涂布 或电泳法 根据蛋白质之间电荷 分子大小等差异进行纯
， ， ） （） （） （） 、 、
在选择培养基表面 测得菌落数的平均值为１５０ 空白对 化 ３ １．５×１０９ 偏小 ４ Ｅ ５ 形状 大小 颜色
， （）
照组平板上未出现菌落 则１００ ｍＬ原菌液中含有产植酸 解析 １ 实验室中筛选微生物的原理是人为提供有利于
， ， 。
酶菌 个 该方法的测量值与实际值相 目的菌株生长的条件 同时抑制或阻止其他微生物生长 配
（ “ ”“ ” “ ”）。 。（）
比一般会 填 偏大 偏小 或 相等 制培养基时各种成分在溶化后分装前必须调节 ｐＨ ２ 纯
（） ， 。  ，
４ 由于植酸钙的不溶解性 使培养基中形成白色浑浊 产 化蛋白质的方法一般使用凝胶色谱法 其原理是根据蛋白质
，  、 ， ，
植酸酶的菌株会水解植酸钙 菌落的周围将形成透明的 分子大小 吸附性质等差异进行纯化 也可以选择电泳法 原
， ，  、 。
区域 根据透明区域的有无 可初步判断该菌是否产植酸 理是根据蛋白质之间电荷 分子大小等差异进行纯化
。 ，  （） （ ）
酶 实验结果显示的Ａ～Ｅ五种菌株中 是产植 ３ １００ ｍＬ原菌液中含有产植酸酶菌 １５０个÷０．１ ｍＬ ×１０４×
。  ， ，
酸酶的最理想菌株 １００ ｍＬ＝１．５×１０９ 个 因为两个或多个细胞连在一起时 平板
（）  ， ，
５ 通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的 上观察到的只是一个菌落 因此 稀释涂布平板法统计的菌落
（  。（） ，
等菌落特征对细菌进行初步的鉴定 或分 数往往比活菌的实际数目少 ４ 根据题意可知 透明区域
）。  ， ， 。（）
类 越大 说明植酸酶越多 故Ｅ是最理想菌株 ５ 对获得的纯
（） ，  、 、
答案 １ 人为提供有利于目的菌株生长的条件 同时抑 菌种可以依据菌落的形状 大小 颜色等菌落特征对细菌进行
（ ） （）  。
制或阻止其他微生物生长 合理即可 调节ｐＨ ２ 凝胶 初步的鉴定
、

色谱法 根据蛋白质分子大小 吸附性质等差异进行纯化
Ｂ 组
、 。
一 单项选择题  接种
， （ ， ）
１．已知某种细菌以ＣＯ 为唯一碳源 下列相关叙述正确的是 ３． ２０１９北京海淀期中 ２９ 在筛选纤维
２ （ ） ，
 素分解菌的培养基中加入刚果红染料
。
Ａ．可推测该细菌的代谢类型为自养需氧型  研究者观察到几个有透明圈的菌落
（ ）
Ｂ．无机盐是该细菌不可缺少的营养物质  据图分析正确的是
Ｃ．培养过程中碳源同时充当该细菌的能源物质  Ａ．透明圈内的刚果红染料已被分解
Ｄ．培养该细菌的培养基中无需添加氮源  Ｂ．菌落②中的菌株降解纤维素能力最强
“ ”，
答案 Ｂ
，
据 某种细菌以ＣＯ
２
为唯一碳源 判定
，
该细菌
；
是 Ｃ．图中菌落可能是细菌也可
、
能是真菌
自养型的 但无法确定其异化作用类型是需氧型的 Ａ错误 微 Ｄ．图中培养基可用牛肉膏 蛋白胨配制
、 、 ， ，
生物需要的基本营养物质为碳源 氮源 无机盐和水 无机碳源 答案 Ｃ 透明圈内的纤维素被纤维素分解菌利用 刚果红
， ， ，、 。 ， ； ，
如ＣＯ ２ 不能作 “ 为该细菌的能源物质 Ｂ正确 ” Ｃ ， Ｄ错误  染料不能与纤维素结合而出现透 ， 明圈 Ａ选项错误 据图可知 ，
易错警示 据
，
某种细菌以ＣＯ
２
为唯一碳源
。
只能判定该细 透明圈与菌落面积的比值越大 菌落分解纤维
，
素的能力越
；
强
菌是自养型的
。
不能判定其异化作用的类型 分析题干信息时 显然是菌落①中的菌株分解纤维素能力最强 Ｂ选项错误
，
在
切忌过度演绎  筛选纤维素分解菌的培养基中只能以纤维素为唯一碳源 不可
（ ） 、 ，
２． ２０２０甘肃 ， 武威十八中一诊 如图表示培养和纯化Ｘ细 （ 菌的部 ） 用牛肉膏 蛋白胨配 ， 制培养基 加 ； 入刚果红染料是为了鉴定是
分操作步骤 下列相关叙述正确的是  否是纤维素分解菌 Ｄ选项错误 图中菌落可能是细菌也可能
， 。
 是真菌 Ｃ选项正确
， 、 、
 能力解读 以筛选纤维素分解菌为载体 考查辨认 比较 解
。
 读的理解能力
、
二 非选择题
， （ ， ）（ ）
Ａ．步骤①倒平板操作时 倒好后应立即将其倒过来放置 ４． ２０１９浙江超级全能生联考 ３２ ８ 分 食品安全国家标准
·
Ｂ．步骤②将接种环在火焰上灼烧后迅速沾取菌液进行平板 ＧＢ４７８９ ４０－２０１６ 是奶粉中可能含有的细菌克罗诺杆菌属
（ ） ， ， ：
划线  阪崎肠杆菌 的检测标准 其流程如图 请回答
， ，
Ｃ．步骤③通过连续划线 使接种物逐渐稀释 培养后可出现单
菌落 
Ｄ．步骤④培养箱培养后可用来对Ｘ细菌进行计数 
， ，
答案 Ｃ 题图①是倒平板 ②是用接种环沾取菌液 ③是
， 。 ，
进行平板划线 ④是培养 倒平板操作时 倒好后应待平板冷
， ， ；
却凝固后 再将平板倒过来放置 Ａ错误 灼烧后的接种环需在
， ；
火焰旁冷却后再沾取菌液进行平板划线 Ｂ错误 步骤③通过
， ，
连续划线 使接种物逐渐稀释分散到培养基的表面 在数次划
， ，
线后培养 可分离到由单个微生物繁殖形成的纯培养物 即单
， ； ，
菌落 Ｃ正确 在平板划线法接种的培养基上 由于起始段菌体
， ， 。
密集 因此无法对其计数 Ｄ错误 
易错警示 倒平板后要待其冷却凝固后再将平板倒过来放
。
置 接种环或接种针在火焰上灼烧后需在火焰旁冷却再进行（ ）
９６４ ５年高考３年模拟 Ａ版 教师用书 高考生物
： （ ， ， ）（）
注释  答案 除标注外 每空２分 共１５分 １ 在葡萄酒的自然
： ， 。 ，
ａ 一般奶粉中含有的细菌较少 ＢＰＷ属于增菌培养基  发酵过程中 酵母菌的主要来源是附着在葡萄皮上的野生型酵
： 、 、 、 、 ， ；
ｂ ｍＬＳＴ－Ｖｍ培养基含有氯化钠 胰蛋白胨 乳糖 磷酸二氢钾  母菌 二氧化碳 将瓶盖拧松可释放气体 防止容器瓶涨破
、 、 、 。 （）
磷酸氢二钾 十二烷基硫酸钠 蒸馏水 万古霉素  不打开瓶盖是为了防止氧气和有害杂菌进入 ２ 干热灭菌
： （） 、 、
ｃ 克罗诺杆菌属及少数其他细菌能在③显色培养基上呈现较 高压蒸汽灭菌 ３０～３００ ３ 所取土样不同 培养基污染
。 、 （ ， ）
： 浅的蓝绿色 、 、 、 。  操作失误 取样前未摇匀样液 ３分 其他合理答案 ， 也可
ｄ ＴＳＡ培养基含有胰蛋白胨 植物蛋白胨 氯化钠 蒸馏水等 解析 本题通过家庭酿制葡萄酒的原理与操作 考查考生的
： ， 。 。（） ，
ｅ 克罗诺杆菌属还有许多生化指标需要精细鉴定 最终生成报告 科学思维素养 １ 在葡萄酒的自然发酵过程中 酵母菌的主
（） （ “ ”“ ”  ， ，
１ 过程中的 ＢＰＷ 培养基为 填 固体 液体 或 要来源是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌 因此 家庭酿酒时
“ ”） 。  ； ，
半固体 培养基 我们往往不需要特意添加酵母菌 在发酵过程中 可以观察到
（） ，  ， ，
２ ②选择培养时 ｍＬＳＴ－Ｖｍ培养基中添加的万古霉素是一 有气泡产生 气泡内的气体是无氧呼吸产生的二氧化碳 该过
， ，  ，
种抗生素 分析可得 克罗诺杆菌属对该抗生素 程中每隔１２ ｈ左右就要将简易酿酒容器的瓶盖拧松一次 但
（ “ ” “ ”）。  ， ： ，
填 敏感 或 不敏感 又不打开 这样做的目的 将瓶盖拧松可释放气体 防止容器瓶
（） ，  ； 。（）
３ 由于②的培养产物细菌浓度未知 为避免对其进行稀释的 涨破 不打开瓶盖是为了防止氧气和有害杂菌进入 ２ 在微
， ，  ， 、
工作 从②转移至③培养时 需采用的接种方法为 生物培养过程中 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌 干热灭
。  。 ，
③过程所需的显色培养基在制备时的次序是 菌和高压蒸汽灭菌 用稀释涂布平板法对微生物进行计数时
。  ，
一般选择菌落数在３０～３００之间的平板进行计数 过高或过低
。（）

Ａ．调节ｐＨ Ｂ．称量药品 Ｃ．溶解 Ｄ．倒平板 Ｅ．灭菌 都不利于计数 ３ 一同学从培养基上筛选出菌落数与其他
（） ， ，  ， 、
４ 克罗诺杆菌属能产生黄色素 积累到一定量的时候 可使 同学相比明显偏大 原因有可能是所取土样不同 培养基遭到
， ，  、 、 。
整个菌落呈现黄色 故ＴＳＡ培养后要挑取黄色菌落 除注 污染 操作失误 取样前未摇匀样液等
释中的成分外 ， ＴＳＡ培养基中还应包含 。 ６． （ ２０２０江苏扬州三模 ， ３２ ）（ １２分 ） 随着我国经济的飞速发展
（） ， ， 。
５ 食品安全关系每个人的生命 对一种细菌的鉴定程序也相  和城市化水平的不断提高 污水的排放量也日渐增加 污水处
。 ， （ ） ， （ ） 。
当严格 在上述检验程序中 步骤 填序号 对  理方法有很多 其中微生物絮凝剂 ＭＢＦ 的使用倍受关注
。 ，
克罗诺杆菌属具有一定的选择或鉴定作用  ＭＢＦ是一类由微生物产生的代谢产物 可以使固体悬浮物聚
（） （） （） 、、、、 ， ， 。
答案 １ 液体 ２ 不敏感 ３ 划线分离法 Ｂ Ｃ Ａ Ｅ  集凝固且下沉 从而达到除浊的效果 使污水变清 科研人员
（） （ ） （） ， 。
Ｄ ４ 琼脂 或琼脂糖 ５ ②③④⑤  为了筛选絮凝活性高的菌种 进行了如下实验
（） ， ， （） ：
解析 １ ＢＰＷ培养基为增菌培养基 用于扩大培养 为液 １ 菌种的初筛 ，
。（） ，
体培养基 ２ 本实验的最终目标是筛选出克罗诺杆菌属 因 ①将各菌源 ， 用 按 ， 一定浓度梯度稀释 （ 分 “ 别接 ” 种 “ 于
，
此步骤②中的万古霉素需要将克罗诺杆菌属保留下来 并尽可 培养 ”） 基中 分离 。 纯化多次 再进行 填 液体 固
， 。
能多地杀灭其他杂菌 因此克罗诺杆菌属对万古霉素不敏感  体 发酵培养 。
（） ， ， ，
３ 检测样品中细菌数量不确定 因此 经过①②培养后 菌液 ②对纯化的各菌株进行絮凝活性测定 测定时在烧杯 ， 中
， ，
加２ ｍＬ 菌株培养液和 ４ ｇ／Ｌ 高岭土悬浊液 １００ ｍＬ 以
中的密度大小不确定 若采用涂布分离法 需要一个合适的稀 ， 。
， ， ，
为对照 检测并计算絮凝率 选
释浓度 这样增多了操作流程 可采用划线分离法 接种环在平 。
， ；
取絮凝率＞７０％的作为复筛菌株
板上划线到末端时 一般可形成单菌落 制备培养基的流程为 （） 。
、、、、。（） ，
２ 复筛与培养条件
Ｂ Ｃ Ａ Ｅ Ｄ ４ 在ＴＳＡ培养基上要挑取菌落 可见ＴＳＡ培养
， 。（）
将初筛的５种菌株在不同碳氮比的培养液中培养相同时
基是固体培养基 因此在配方中还应添加琼脂或琼脂糖 ５ 国 ， ，
，
间 然后与初始ｐＨ不同的高岭土悬浊液混合 一定时间后
家安全标准相当严格 题述流程中的②③④⑤在一定程度上都对 ， 。
， 。
测定絮凝率 结果如表
克罗诺杆菌属进行了选择或鉴定 以确保检测的准确性 
（ ， ）（ ） ， 不同条件下的菌珠生长状况及絮凝率
５． ２０１９安徽皖南八校三模 ３７ １５分 在平时 我们可以将所
。 ：
学的生物学知识充分地运用于生活实践 回答下列问题 碳氮比
（） ，  ５∶ １ ３∶ １ ２∶ １ １∶ １
１ 家庭酿酒时我们往往不需要特意添加酵母菌 其原 初始ｐＨ

Ｊ－２７
因是 ； （
９０．９％
）
５．０ － － －
， ，  Ｊ－１８
在发酵过程中 可以观察到有气泡产生 气泡内的气体是 （ ）
，  ９４．６％
该过程中每隔１２ ｈ左右就要将简易酿酒容器的
， ， ：  Ｊ－５
瓶盖拧松一次 但又不打开 这样做的目的 （ ）
。 ９１．５％
（） ，  Ｊ－２６ Ｊ－１６ Ｊ－１８
２ 在微生物培养过程中 实验室常用的灭菌方法有灼烧灭 ５．５ （ ） － （ ） （ ）
、 。  ９４．６％ ９４．４％ ９２．３％
菌 和 用稀释涂布平板 Ｊ－２６
，  （ ）
法对微生物进行计数时 一般选择菌落数在 之间 ９０．９％
。 
的平板进行计数 Ｊ－１８
（） ，  ６．０ － － － （ ）
３ 在某次分离纤维素分解菌的实验中 大部分同学从培养基 ９７．５％
， 
上筛选出大约５０个菌落 而有一位同学从培养基上筛选 ７．０ － － － －
，  ，
出大约１５０个菌落 这种差异产生的原因可能是 ８．０～９．０ 各菌生长较差 絮凝率低
（ ）。  ：“” ， 。
至少答出三点 注 － 表示在此条件下菌株生长很好 但絮凝率小于９０％专题２４ 微生物的培养与发酵工程 ９６５
（） ， ；
上述结果说明 显著影响各菌的生长和絮凝剂的 解析 １ ①为防止杂菌污染 稀释菌源应用无菌水 因该
； ， ， ；
分泌状况 对菌株的生长影响不明显 但对絮凝 菌用于污水处理 故应在液体培养基中发酵培养 ②为测定菌
。 ， ，
剂的分泌影响较大 科研人员从中挑选出的３ 种优良菌 株的絮凝活性 实验应设置对照 实验组用２ ｍＬ菌株培养液和
。 ，
株为  ４ ｇ／Ｌ高岭土悬浊液１００ ｍＬ 对照组应遵循单一变量和无关变
（） ， ，
３ 通过筛选获得的野生型的菌株分泌絮凝剂的产量有限 科 量一致原则 故应添加２ ｍＬ无菌水＋４ ｇ／Ｌ高岭土悬浊液１００
， 。（） “” ，
研人员从真核生物的 上发现了絮凝基因并克隆 ｍＬ ２ 由题干信息可知 － 表示在此条件下菌株生长很好
，  ， ，
再利用 技术获得具有絮凝功能的工程菌 实现 但絮凝率小于９０％ 分析表格数据可知 不同初始ｐＨ下絮凝
、 。  ，
正规化 规模化的生产与使用 率差异较大 故初始ｐＨ显著影响各菌的生长和絮凝剂的分泌
（） ，  ； ，
４ ＭＢＦ对细胞也具有良好的沉降性 利用这一特性在酿酒产 状况 不同的碳氮比对菌株的生长影响不明显 但对絮凝剂的分泌
 ； ， 、 、
业中使用絮凝性高的酵母替代絮凝性低的酵母能够制造 影响较大 比较不同条件下的絮凝率和适应条件可知 Ｊ－２６ Ｊ－１８
，  。（） （
出质量更好的啤酒 原因是 Ｊ－１６为相对优良的３种菌株 ３ 真核生物的染色体是基因 有
。  ） ；
遗传效应的ＤＮＡ片段 的主要载体 要将真核生物的基因转移到
（）  ， 。（）
答案 １ ①无菌水 液体 ②２ ｍＬ无菌水＋４ ｇ／Ｌ高岭土 工程菌内 需借助基因工程的技术手段 ４ 因ＭＢＦ对细胞也具
（） 、 、  ， ，
悬浊液１００ ｍＬ ２ 初始 ｐＨ 碳氮比 Ｊ－２６ Ｊ－１８ Ｊ－１６ 有良好的沉降性 可以在发酵中去除发酵液中存在的菌体 故在酿
（） （ ） （） 
３ 染色体 基因工程 转基因 ４ 可以去除发酵液中存 酒产业中使用絮凝性高的酵母替代絮凝性低的酵母能够制造出质
。

在的菌体 量更好的啤酒