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专题 12 细胞工程与基因工程
高考感知
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高考感知：明考向知规律 长难句突破
命题趋势：知己知彼 满分技巧
知识必备：重点讲解（全面梳理） 易错点拨
难点突破1.植物组织培养与植物体细胞杂交的比较 1.与动、植物细胞工程有关的4个易混点
2.动物细胞培养与动物体细胞核移植的比较 2.与基因工程有关的4个易混点
3.启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比
4.乳腺生物反应器与工程菌的比较
5.判断基因工程和蛋白质工程
限时检测： 30mi n：及时训练与检测
（压缩包中含有单独的检测卷，方便练习使用）
课标要求——明考向 近年考情——知规律
12.1 植物细胞工程包括组织培养和体
2023·湖南 基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用
细胞杂交等技术
2023·湖北 DNA 重组技术的基本工具、基因表达载体的构
12.2 动物细胞工程包括细胞培养、核
建、目的基因的检测与鉴定
移植、细胞融合和干细胞的应用等技
2023·广东 DNA的粗提取及鉴定的方法
术
2023·新课标 DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建
12.3 对动物早期胚胎或配子进行显微
2023·北京 动物细胞融合与单克隆抗体的制备
操作和处理以获得目标个体
2023·山东 植物细胞工程的实际应用
12.4 基因工程是一种重组DNA技术
2023·广东 植物体细胞杂交技术
12.5 蛋白质工程是基因工程的延伸
2023·广东 动物的体外受精、胚胎的体外培养、胚胎移植技术
12.6 转基因产品的安全性引发社会的
2023·浙江 动物的体外受精、胚胎的体外培养
广泛关注2023·浙江 生物技术的安全性和伦理问题综合
2023·海南 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴
定、基因工程的应用
12.7 举例说出生殖性克隆人面临的伦 2023·山东 PCR扩增的原理与过程、DNA重组技术的基本工
理问题 具、基因表达载体的构建
12.8 世界范围内应全面禁止生物武器 2023·湖北 动物细胞融合与单克隆抗体的制备
2023·浙江 动物细胞融合与单克隆抗体的制备、动物体细胞核
移植技术和克隆动物
2023·全国 遗传信息的翻译、基因表达载体的构建、目的基因
的检测与鉴定
命题趋势
1.细胞工程，胚胎工程的命题多以选择题呈现，基因工程的命题多以简答题呈现，属于年年必考的题目。
2.试题情境以下列几种居多：
（1）以单克隆抗体为情境考查细胞工程。
（2）以胚胎移植为情境考查胚胎工程。
（3）以来自大学教材或最新的文献资料为情境考查基因工程。
知识必备
重点：
一、植物细胞工程
（一）植物细胞工程的基本技术
1．细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能，即细胞具有全能性。
但是，在生物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性，比如，芽原基的细胞只能发育为芽，
叶原基的细胞只能发育为叶。这是因为在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达。
（P34）
2．植物组织培养是指将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养
条件，诱导其形成完整植株的技术。（P35）
3．植物细胞一般具有全能性。在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞可以经过脱分化，
即失去其特有的结构和功能，转变成未分化细胞，进而形成不定形的薄壁组织团块，这称为愈伤组织。愈
伤组织能重新分化成芽、根等器官，该过程称为再分化。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂
、脱分化和再分化的关键激素，它们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向。（P35“探究·实
践”）
4．诱导愈伤组织期间一般不需要光照，在后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照。（P36“探究·实践”）
5．在进行体细胞杂交之前，必须先利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得原生质体。（P37）
6．人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两大类——物理法和化学法。物理法包括电融合法、离心
法等；化学法包括 聚乙二醇（ PEG ） 融合法、高Ca2＋—高pH融合法等，融合后得到的杂种细胞再经过诱
导可形成愈伤组织，并可进一步发育成完整的杂种植株。（P37～38）
7．植物体细胞杂交技术在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种等方面展示出独特的优势。
（P38）
（二）植物细胞工程的应用
1．用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，被人们形象地称为植物的快速繁殖技术，也叫作微型繁
殖技术。它不仅可以高效、快速地实现种苗的大量繁殖，还可以保持优良品种的遗传特性。（P39）
2．单倍体育种可以先通过花药（或花粉）培养获得单倍体植株，然后经过诱导染色体加倍，当年就能培
育出遗传性状相对稳定的纯合二倍体植株，这极大地缩短了育种的年限，节约了大量的人力和物力。
（P40）
3．植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。（P41）
二、动物细胞工程
（一）动物细胞培养
1．动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让
这些细胞生长和增殖的技术。（P43）
2．在体外培养细胞时，必须保证环境是无菌、无毒的，即需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以
及在无菌环境下进行操作。培养液还需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造
成危害。（P44）
3．动物细胞培养所需气体主要有O 和CO 。O 是细胞代谢所必需的，CO 的主要作用是维持培养液的
2 2 2 2
pH。在进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有 95% 空气和 5%CO 的混合气
2
体的CO 培养箱中进行培养。（P44）
2
4．动物细胞培养时细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。悬浮培养的细胞会因细胞
密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时，除受上
述因素的影响外，还会发生接触抑制现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分
裂增殖。（P44）
5．人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养，将分瓶后的细胞培
养称为传代培养。在进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集；贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。
（P45）
6．在一定条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组
织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等。（P46）
7．2006年，科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多
能干细胞（简称iPS细胞），并用iPS细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血。（P46）
8．科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞，包括借助载体将特定基因导入细胞中，直接将特定蛋白导
入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的，后来发现
已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。（P46“相关信息”）
（二）动物细胞融合技术与单抗隆抗体
1．动物细胞融合技术（cell fusion technique）就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合
后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。（P48）
2．动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电
融合法和灭活病毒诱导法等。（P48）
3．细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。（P48）
4．制备单克隆抗体需要的技术手段：动物细胞融合和动物细胞培养。制备单克隆抗体的原理：细胞膜的
流动性和细胞增殖。（P49）
5．第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞，方法是 用特定的 选择性培养基培养 。经过筛选后未融合的细
胞或者融合后具有同种核型的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。（P49）
6．第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞，方法是专一抗体检验。（P49）
7．抗体——药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对
肿瘤细胞的选择性杀伤。（P50“思考·讨论”）
（三）动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，并使这个重新组合的细胞发
育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。（P52）
2．减数分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母细胞中的“核”其实是纺锤体—染色体复合物。文中所说的“去核”
是去除该复合物。（P52“相关信息”）
3．哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能
性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚
胎细胞核移植。（P52）4．目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心、紫外线短时间
照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。
（P54“相关信息”）
三、胚胎工程
（一）胚胎工程的理论基础
1．胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植
到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
（P56）
2．在自然条件下，哺乳动物的受精在输卵管内完成。（P56）
3．在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的透明带会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带。
然后，精子入卵。精子入卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。（P57）
4．精子入卵后，尾部脱离，原有的核膜破裂并形成一个新的核膜，最后形成一个比原来精子的核还大的
核，叫作雄原核。与此同时，精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核。
（P57）
5．多数哺乳动物的第一极体不进行减数分裂Ⅱ，因而不会形成两个第二极体。在实际胚胎工程操作中，
常以观察到两个极体或者雌、雄原核作为受精的标志。（P58“相关信息”）
6．聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织；而沿透明带内壁扩展和排列的细
胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘。（P58）
（二）胚胎工程技术及其应用
1．哺乳动物的体外受精技术主要包括卵母细胞的采集、精子的获能和受精等步骤。（P60）
2．采集到的卵母细胞和精子，要分别对它们进行成熟培养和获能处理，然后才能用于体外受精。（P60）
3．胚胎移植是指将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，
使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体叫“受体”。通过任
何一项技术（如转基因、核移植和体外受精等）获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。（P61）
4．以牛的胚胎移植为例，胚胎移植主要包括供体、受体的选择和处理，配种或人工授精，胚胎的收集、
检查、培养或保存，胚胎的移植，以及移植后的检查等步骤。（P61）
5．胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。（P62“思考·讨论”）
6．进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。（62）
7．超数排卵是指应用外源促性腺激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子。（P62“相关信
息”）8．胚胎分割所需要的主要仪器设备为体视显微镜和显微操作仪。在进行胚胎分割时，应选择发育良好、
形态正常的桑葚胚或囊胚，将它移入盛有操作液的培养皿中，然后在显微镜下用分割针或分割刀分割。在
分割囊胚阶段的胚胎时，要注意将内细胞团均等分割。（P62）
四、重组DNA技术的基本工具
1．切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。
它们能够 识别双链 DNA 分子 的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，产生黏
性末端或平末端两种形式的末端。（P71）
2．DNA连接酶分为两类，一类是E.coli DNA 连接酶 ，另一类是 T4DNA 连接酶 。后者既可以“缝合”双
链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端的效率相对较低。
（P72）
3．质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核 DNA之外，并具有自我复制能
力的 环状双链 DNA 分子。（P72）
4．在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。这些质粒
上常有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因等，便于重组 DNA分子的筛选。
（P72）
5．在基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等。它们的来源不同，在大小、结构、
复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差别。（P73）
6．载体必须具备的条件：①能在受体细胞中保存下来并能自我复制；②具有1个或多个限制酶切割位点，
以便与外源基因连接。③具有标记基因。（P72）
7．DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。DNA在不
同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会
呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。（P74“探究·实践”）
五、基因工程的基本操作程序
1．培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导
入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。（P76）
2．PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据 DNA 半保留复制 的原理，在体外提供参与DNA复制的
各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。（P77）
3．PCR技术可以分为变性、复性和延伸三步。（如下图）（P78）
4．PCR反应过程可以在PCR扩增仪（PCR仪）中自动完成，完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。（P79）
5．基因表达载体要包括以下四个基本的结构：目的基因、启动子、终止子、标记基因。（P80）
6．构建基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代，同时，使目的基
因能够表达和发挥作用。（P80）
7．启动子位于目的基因的上游，它是 RNA 聚合酶 识别和结合的部位。（P80）
8．标记基因的作用：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。（或供
重组 DNA 的鉴定和选择） 。
9．花粉管通道法有多种操作方式。例如，可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；
可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通
道进入胚囊。除此之外，将目的基因导入植物细胞常用的方法还有农杆菌转化法。（P81）
10．转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。（P81“资料卡”）
六、基因工程的应用
1．科学家将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射的方
法导入哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生
产所需要的药物，这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。（P90）
2．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类一般称为基因工程菌。（P91“相关信息”）
3．目前，科学家正尝试利用基因工程技术对猪的器官进行改造，采用的方法是在器官供体的基因组中导
入某种调节因子，以抑制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决定基因，然后再结合克隆技术，培育出
不会引起免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。（P91）
七、蛋白质工程的原理和应用
1．蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来
改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。（P93）
2．基因工程原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，
它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。（P93）
3．蛋白质工程的基本思路是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序
列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需要的蛋白质。（P94）
八、转基因产品的安全性
1．对微生物的基因改造是基因工程中研究最早、最广泛和取得实际应用成果最多的领域，这是因为微生
物具有生理结构和遗传物质简单、 生长繁殖 快 、对环境因素敏感和容易进行遗传物质操作等优点。（P101）
2．在转基因研究工作中，科学家会采取很多方法防止基因污染。例如，我国科学家将来自玉米的α淀粉酶
基因与目的基因一起转入植物中，由于α淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，因而可以防止转
基因花粉的传播。（P102“相关信息”）
九、关注生殖性克隆人
1．生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、
组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。两者有着本质的
区别。（P106）
2．有的伦理学家认为，生殖性克隆人是在人为地制造在心理上和社会地位上都不健全的人，严重地违反
了人类伦理道德，是克隆技术的滥用。（P107）
3．我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验。（P108）
4．试管婴儿与设计试管婴儿
试管婴儿与设计试管婴儿都是有性生殖，都要通过①体外受精，并进行②体外早期胚胎培养和③胚胎移植，
不同的是设计试管婴儿胚胎移植前需进行遗传学诊断。（P109“思考·讨论”）
5．生物武器包括致病菌类、病毒类和生化毒剂类等，例如，天花病毒、波特淋菌、霍乱弧菌和炭疽杆菌
都可以用来制造生物武器。生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或者通过食物、生活必需品
和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵入人、畜体内，造成大规模伤亡，也能大量损害植物。
（P111）
难点：
1.植物组织培养与植物体细胞杂交的比较2.动物细胞培养与动物体细胞核移植的比较
3.启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比
项目 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子本质 DNA DNA mRNA mRNA
位置 目的基因上游 目的基因下游 mRNA首端 mRNA尾端
RNA聚合酶识别和
使转录在所需要 翻译的起始信号 翻译的结束信号
功能 结合的部位，驱动
的地方停下来 (编码氨基酸) (不编码氨基酸)
基因转录出mRNA
4.乳腺生物反应器与工程菌的比较
比较内容 乳腺生物反应器 工程菌
让外源基因在哺乳动物的乳腺中特
指用基因工程的方法，使外源基因得到
含义 异表达，利用动物的乳腺组织生产
高效表达的微生物
药物蛋白
基因表达 合成的药物蛋白与天然蛋白相同 细菌合成的药物蛋白可能没有活性
受体细胞 动物受精卵 微生物细胞
目的基因
显微注射法 Ca2＋处理法
导入方式
不需要严格灭菌，温度等外界条件 需要严格灭菌，严格控制工程菌所需的
生产条件
对其影响不大 温度、pH、营养物质浓度等外界条件
药物提取 从动物乳汁中提取 从微生物细胞或其培养液中提取
5.判断基因工程和蛋白质工程
(1)如果仅将基因用限制酶从DNA片段中切割下来，没有经过对编码蛋白序列进行修饰、加工，或仅对其
调控序列进行加工，则属于基因工程；如果将目的基因经过了一些实质性的改造，如对编码蛋白序列进行
了碱基替换或增添或缺失某几个碱基，则属于蛋白质工程。
(2)如果合成的蛋白质是天然蛋白质，则是基因工程；如果合成的蛋白质和天然蛋白质有差异，甚至是自然
界中所没有的，则为蛋白质工程。
长难句突破
1.植物组织培养过程控制无菌的原因是 避免微 生物的污染 。
2.植物组织培养离体的细胞能表达全能性的原因是离体细胞含有本物种全部的遗传信息，若不离体这些细
胞在母体上发生基因选择性表达而分化。
3.杂交瘤细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。
4.单克隆抗体的优点是能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备。5.核移植技术中必须先去掉受体卵母细胞的细胞核的原因是保证核移植动物的核遗传物质全部来自供体细
胞。
6.通过体细胞核移植方法生产的克隆动物，不是对体细胞供体动物进行了 100%的复制，原因是克隆动物绝
大部分 DNA 来自供体细胞核，其核外还有少量的 DNA ，即线粒体中 DNA 来自受体卵母细胞 。此外，动
物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系。
71.胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。
8.供体母牛和受体母牛的选择标准为供体是遗传性状优良、生产能力强的个体，受体是有健康的体质和正
常繁殖能力的个体，且二者必须是同一物种。
满分技巧
1.植物组织培养过程中应注意的问题
(1)接种时注意外植体的方向，应将外植体的形态学下端插入培养基，不能倒插。
(2)培养一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，再进行生根培养。如果顺序颠倒，先诱导生根，就不好
诱导生芽了。
(3)菊花的组织培养中，愈伤组织的形成一般不需要光照，而在后续的培养过程中，需要一定量的光照。
(4)试管苗一般在高湿、弱光、恒温等条件下培养生长，出瓶后一定要注意保温、保湿。
(5)试管苗的光合作用能力弱，在移栽前应给予较强光照、闭瓶炼苗，以促进幼苗向自养苗转化。
2.植物体细胞杂交和有性杂交的辨析
3.植物体细胞杂交后的遗传物质分析
(1)遗传特性：杂种植株中含有两种植物的遗传物质，故杂种植株具备两种植物的遗传特性。
(2)染色体组
①染色体组数＝两种植物体细胞内染色体组数之和。
②植物体细胞杂交形成的杂种植株，有几个染色体组就称为几倍体。4.动物细胞培养和植物组织培养的比较
项目 动物细胞培养 植物组织培养
理论基础 细胞增殖 植物细胞的全能性
无菌；用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶
培养前处理 无菌、离体
等处理，使组织分散成单个细胞
取材 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 植物幼嫩的部位或花药等
培养基性质 液体 固体
水、矿质元素、蔗糖、维生素、植
培养基成分 糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等
物激素和琼脂等
结果 产生大量细胞，不形成新个体 可产生新个体
快速繁殖、作物脱毒、细胞产物的
应用 人造皮肤的构建、动物分泌蛋白的规模化生产
工厂化生产和单倍体育种等
①都需人工条件下的无菌操作；②都需要适宜的温度、pH等条件；③都进行有丝分
相同点
裂，都不涉及减数分裂
5.比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖
融合前处理 除去细胞壁 使细胞分散开
相关酶 纤维素酶和果胶酶 胰蛋白酶或胶原蛋白酶
物理法：电融合法、离心法； 物理法：电融合法；
诱导方法 化学法：聚乙二醇(PEG)融合法、 化学法：聚乙二醇(PEG)融合法；
高Ca2＋—高pH融合法 生物法：灭活病毒诱导法
结果 杂种植株 杂交细胞
应用 培育植物新品种 主要用于制备单克隆抗体
意义 突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导动物细胞融合的方法与植
相同点
物原生质体融合的方法相似
易错点拨
1.与动、植物细胞工程有关的4个易混点
（1）植物体细胞杂交的结果最终要经过组织培养形成杂种植株。
（2）单克隆抗体制备过程中，B淋巴细胞要经过免疫过程，才能产生相应的抗体，所以，与骨髓瘤细胞融合的B淋巴细胞实际上是浆细胞。
（3）在单克隆抗体制备过程中，有两次筛选：第一次是筛选出杂交瘤细胞（用选择培养基）；第二次是
进一步筛选出能产生人们所需要抗体的杂交瘤细胞（用抗原—抗体杂交技术）。
（4）动物细胞培养过程中用胰蛋白酶两次处理的目的：第一次处理的目的是使组织细胞分散开；第二次
（传代培养时）处理的目的是使细胞从瓶壁上脱离下来，便于分瓶后继续培养。
2.与基因工程有关的4个易混点
（1）质粒是常用的载体，它是一种小型的双链环状DNA分子，具有一个至多个限制酶切割位点及标记基
因。
（2）基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因和复制原点。
（3）培育转基因动物时，受体细胞必须是受精卵；培育转基因植物时，受体细胞可以是受精卵，也可以
是体细胞。
（4）目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用
Ca2＋处理法。
限时检测 （限时 30 分钟）
一、单选题
1．（2023上·广西·高三校联考阶段练习）紫杉醇能抑制细胞的有丝分裂，具有良好抗癌作用。紫杉醇是红
豆杉细胞的次级代谢产物，可以通过植物组织培养技术获取紫杉醇，相关生产过程如图所示。下列叙述正
确的是（ ）
A．过程②中需要对红豆杉根组织块进行灭菌
B．幼苗和红豆杉植株的基因组成不相同
C．从X细胞中提取紫杉醇，不需要经过再分化过程
D．过程②和过程③用的是同一种培养基
【答案】C
【分析】植物组织培养的过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织
再分化形成胚状体，进一步发育植株（新植体）。
【详解】A、红豆杉根组织块为外植体，在植物组织培养中，需要对外植体进行消毒处理，不能灭菌，否
则会杀死外植体，A错误；B、植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，因此培育出的幼苗与红豆杉植株的基因组成相同，B错误；
C、紫杉醇为红豆杉细胞的次级代谢产物，因此从X细胞中提取紫杉醇，不需要经过再分化过程，C正确；
D、脱分化②和再分化③所用的激素种类相同，比例不同，因此培养基种类不同，D错误。
故选C。
2．（2023上·广东东莞·高三东莞市东莞中学校联考期中）酶联免疫吸附试验(ELISA)是常用的测定抗体的技
术，其基本原理如下图所示。相关叙述错误的是（ ）
A．待测抗体既可以和抗原结合又可以和酶标二抗结合
B．酶标二抗和抗原由于结构相同均能与待测抗体发生结合
C．酶标抗体有免疫学活性和酶活性，可催化底物水解为有色产物
D．可通过测定单位时间有色产物生成量来推测待测抗体的相对含量
【答案】B
【分析】据图分析，抗体和抗原特异性结合，再与酶标抗体结合，催化特定底物形成检测产物。
【详解】A、根据图像，待测抗体既可以和抗原结合又可以和酶标二抗结合，A正确；
B、抗原和酶标抗体分别和抗体的不同部位发生结合，说明两者结构不同，B错误；
C、酶标抗体有免疫学活性和酶的活性可催化标本中的底物水解形成有色产物，形成的有色产物可作为检
测的指标，C正确；
D、加入酶标抗体的目的是酶催化检测底物反应，通过测定单位时间有色产物生成量来推测待测抗体的相
对含量，D正确。
故选B。
3．（2023上·江苏南通·高三统考阶段练习）对牛的生殖细胞、受精卵或早期胚胎进行显微操作和处理可以
获得目标个体， 以满足人类的各种需求。下列相关叙述正确的是（ ）
A．体外受精前，从卵巢中采集的卵母细胞需培养到MⅡ期
B．体外受精时，精子和卵子需在获能液中处理以获得能量
C．胚胎移植前，供受体母牛需用促性腺激素进行超数排卵D．胚胎分割时，需将原肠胚的内细胞团均等分割再体外培养
【答案】A
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供
体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排
卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎
应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查。
【详解】A、采集到的卵母细胞培养至MⅡ期，才算成熟，才具有受精能力，A正确；
B、体外受精时，精子获能是获得受精的能力，不是获得能量，卵细胞不需要在获能液中培养，B错误；
C、体外受精前，供受体母牛需用促性腺激素进行超数排卵，C错误；
D、胚胎分割时需将囊胚期的内细胞团均等分割，D错误。
故选A。
4．（2023上·广东揭阳·高三普宁市第二中学校考阶段练习）Holliday模型是同源染色体间基因重组的模型，
揭示了交叉互换的分子机制。其过程是：①在四分体的两个非姐妹DNA的相应位点上，分别切割每个DNA
的一条链，形成四个断裂点，②不同的断裂点间交互连接，形成被称为Holliday连接体的交联体，
③Holliday连接体左右移动、交联体旋转、随机切割、缺口连接等。下列分析错误的是（ ）
A．Holliday连接体的观察，应选减数第一次分裂前期的细胞
B．Holliday模型揭示的分子交叉互换的结果，可以借助光学显微镜进行观察
C．同源染色体间交叉互换的完成，离不开限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用
D．同源染色体非姐妹DNA间的交叉互换，为有性生殖生物的进化提供了丰富的原材料
【答案】B
【分析】Holliday模型是同源染色体间基因重组的模型，分析的是同源染色体间非姐妹染色单体的互换，
该过程发生在减数第一次分裂的前期，存在染色体的断裂和连接，形成同源染色体间的基因重组。
【详解】A、同源染色体间非姐妹染色单体的互换，发生在减数第一次分裂前期，因此Holliday连接体出现
在减数第一次分裂前期，A正确；
B、光学显微镜下可以观察到染色体，但是该过程中染色体的大小，形态和长度并未发生改变，因此无法
借助光学显微镜对分子交叉互换的结果进行观察，B错误；
C、同源染色体间互换中存在染色体的断裂和重新连接，断裂时需要限制酶的催化，重新连接需要DNA连
接酶的催化，C正确；
D、同源染色体非姐妹DNA间的交叉互换过程发生了基因重组，基因重组为有性生殖生物的进化提供了丰
富的原材料，D正确。故选B。
5．（2023上·湖南·高三校联考阶段练习）CAR—T疗法（嵌合抗原受体T细胞免疫疗法）是一种治疗肿瘤的
新型精准靶向疗法，是指在体外将一个含有能识别肿瘤细胞且激活T细胞的嵌合抗原受体（CAR）的病毒
载体转入T细胞。该嵌合细胞利用定位导航装置CAR，专门识别体内肿瘤细胞，从而实现精准杀伤恶性肿
瘤。下列说法错误的是（ ）
A．在构建嵌合体时，选取的T细胞主要是细胞毒性T细胞
B．CAR—T嵌合细胞在人体内主要发挥免疫自稳功能
C．CAR—T嵌合细胞的构建原理之一是基因重组
D．CAR—T疗法比化疗和放疗的副作用要小
【答案】B
【分析】CAR-T疗法就是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是把一个含有能识别肿瘤细胞且激活T细胞的嵌合
抗原受体的病毒载体转入T细胞，即把T细胞改造成CAR-T细胞这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法。
近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，
且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。
【详解】A、细胞免疫的中心细胞是细胞毒性T细胞，据此可推测，在构建嵌合体时，选取的T细胞主要是
细胞毒性T细胞，A正确；
B、CAR-T嵌合细胞进入人体后攻击的是体内的肿瘤细胞，可见，在人体内主要发挥免疫监视功能，B错误；
C、CAR—T疗法是在体外将一个含有能识别肿瘤细胞且激活T细胞的嵌合抗原受体的病毒载体转入T细胞，
把T细胞改造成CAR-T细胞，这属于基因工程技术，原理是基因重组，C正确；
D、嵌合细胞利用定位导航装置CAR，专门识别体内肿瘤细胞，从而实现精准杀伤恶性肿瘤，比化疗和放
疗的副作用要小，D正确。
故选B。
6．（2023上·云南大理·高三统考阶段练习）人血清白蛋白（HSA）具有维持血浆渗透压、抑制血小板聚集
和清除自由基等生理功能，在临床上需求量很大，科研工作者利用乳腺生物反应器从牛乳中提取HSA。下
列叙述正确的是（ ）
A．需要借助早期胚胎培养和胚胎移植技术培育出转基因动物
B．使用感受态细胞转化法将基因表达载体导入受体细胞
C．利用PCR扩增HSA基因时需加入解旋酶和耐高温的DNA聚合酶
D．HSA的生产一般不受转基因动物性别和年龄的限制
【答案】A【分析】动物乳腺生物反应器是基于转基因技术平台，使外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳
腺，利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基
因动物的总称。
【详解】A、需要借助早期胚胎培养和胚胎移植技术培育出转基因动物，A正确；
B、使用显微注射法将基因表达载体导入受体细胞，B错误；
C、利用PCR扩增HSA基因时不需要加入解旋酶，但是需要加入耐高温的DNA聚合酶，高温可以使双螺旋
解开，C错误；
D、HSA需在雌性动物泌乳期分泌的乳汁中提取，D错误。
故选A。
7．（2023上·湖北·高三黄冈中学校联考期中）《中国居民膳食指南（2016）》提出的“控糖”建议是：控
制添加糖的摄入量，每天摄入不超过50g，最好控制在25g以下。某些糖尿病等直接或间接与长期糖摄入
超标有关，可以通过注射胰岛素来治疗。下列叙述错误的是（ ）
A．糖类不仅是主要的能源物质，还可参与构成细胞内复杂化合物
B．长期糖摄入超标可能会影响到体内细胞识别、免疫、代谢调控等过程
C．血液中的葡萄糖除可以合成糖原外，还可转变成脂肪和非必需氨基酸
D．可利用蛋白质工程直接对胰岛素分子进行修饰改造，让其可以口服使用
【答案】D
【分析】糖类包括：单糖、二糖、多糖。单糖包括：葡萄糖、核糖、脱氧核糖等，葡萄糖被称为是细胞中
的“生命的燃料”。二糖包括：麦芽糖、蔗糖、乳糖，麦芽糖、蔗糖是植物细胞中特有的二糖，乳糖是动
物细胞中特有的二糖。多糖包括：淀粉、纤维素、糖原、几丁质，淀粉和糖原分别是植物细胞和动物细胞
中的储能物质，纤维素是植物细胞壁的成分、几丁质广泛存在于甲壳类动物的外壳、昆虫的甲壳和真菌的
细胞壁中。
【详解】A、糖类是主要的能源物质，还可参与构成细胞内复杂化合物，如核糖可以构成RNA，脱氧核糖
可以构成DNA，A正确；
B、长期糖摄入超标可能会导致血糖浓度升高，从而影响到体内细胞识别、免疫、代谢调控等过程，B正确；
C、血液中的葡萄糖除可以合成糖原外，还可转变成脂肪和非必需氨基酸，C正确；
D、蛋白质工程不能直接对蛋白质分子进行修饰和改造，应该对编码胰岛素的基因进行设计和改造，D错误。
故选D。
8．（2023上·辽宁·高三东北育才学校校考阶段练习）水稻为雌雄同花植物，花很小，人工授粉困难。正常
水稻种子呈白色，科研团队在某水稻品种的一条2号染色体上插入一个籽粒蓝色素生成基因D构建水稻品种P，然后将雄性不育基因M导入水稻品种P，培育出通过种子颜色即可判断是否为雄性不育种子的品种
Q（基因的位置关系如图）。由于图中D和M两个非等位基因在同一条染色体上距离较近，因此会紧密连
锁在一起不发生基因重组。下列说法不正确的是（ ）
A．品种Q自花传粉，得到的子代中蓝粒雄性不育的个体占1/2
B．品种Q可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物
C．若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，则其与正常水稻杂交有可能得到蓝粒雄性不育的
种子
D．若基因M插入3号染色体上，则其为母本与正常水稻杂交得到的子代出现蓝粒雄性不育种子的概率
为1/4
【答案】A
【分析】基因分离定律和自由组合定律的实质：进行有性生殖的生物在进行减数分裂产生配子的过程中，
位于同源染色体上的等位基因随同源染色体分离而分离，分别进入不同的配子中，随配子独立遗传给后代，
同时位于非同源染色体上的非等位基因进行自由组合。
【详解】A、据题意可知，水稻品种Q雄性不育，因此不能自花传粉，A错误；
B、品种Q雄性不育，可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物，B正确；
C、若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，如果发生交叉互换，则其与正常水稻杂交可能会得
到蓝粒雄性不育两性状不分离的种子，即基因D和M在一条染色体上，C正确；
D、用O代表同源染色体相同位置上没有的等位基因，若基因M插入3号染色体上，其基因型可表示为：
DOMO，则其产生的雌配子有DM、DO、OM、OO4种。正常水稻无D、M基因，基因型可表示为OOOO，
正常水稻为父本，产生雄配子有OO，子代出现蓝粒雄性不育种子DOMO的概率为1/4，D正确。
故选A。
9．（2023上·浙江温州·高三统考阶段练习）一对夫妇都是O 型血，通过“试管婴儿”技术却生下一个A
型血的孩子。经检测，作为独生子的丈夫被确诊为“异源嵌合体”(指身体中存在来自不同受精卵的细胞
群)，该孩子的血型与“异源嵌合体”有关。下列叙述正确的是（ ）A．“试管婴儿”的培育过程涉及细胞核移植、体外受精等技术
B．“试管婴儿”与“克隆动物”的原理相同，不会面临伦理问题
C．该丈夫可能是在胚胎期“吸收”了异卵双生兄弟的早期胚胎
D．可将2个囊胚的内细胞团与滋养层交换重组，构建“异源嵌合体”
【答案】C
【分析】试管婴儿技术的操作 流程是：分别将卵细胞和精子取出后，置于试管内使其受精，并培养成早
期胚胎，再将早期胚胎 植入母体内发育成胎儿，孕育成熟后产出。
【详解】A、试管婴儿技术不涉及细胞核移植技术，A错误；
B、“试管婴儿”属于有性生殖，而“克隆动物”属于无性生殖，两者原理不同，且两者均会面临伦理问
题，B错误；
C、分析题意可知，“异源嵌合体”是指身体中存在来自不同受精卵的细胞群，一对夫妇都是O 型血，却
生下一个A型血的孩子，据此推测该丈夫可能是在胚胎期“吸收”了异卵双生兄弟的早期胚胎，被吸收的
早期胚胎含有A型血相关基因，C正确；
D、内细胞团将来发育为胎儿的各种组织，而滋养层发育为胎膜和胎盘，在现有技术条件下，无法将2个
囊胚的内细胞团与滋养层交换重组，构建“异源嵌合体”，D错误。
故选C。
10．（2023上·湖南·高三长郡中学校考阶段练习）随着生物技术的进步，相关成果不断涌现，人们对它的
安全性、与伦理道德碰撞而带来的困惑和挑战也与日俱增，下列叙述错误的是（ ）
A．通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
B．试管婴儿技术和“设计试管婴儿”都需要对胚胎进行遗传学诊断
C．我国禁止生殖性克隆，不允许进行任何生殖性克隆人实验
D．生物武器致病能力强，我国反对生物武器及其技术和设备扩散
【答案】B
【分析】目前关于转基因技术安全性的争论主要集中在食物安全、生物安全和环境安全三个方面。中国政
府对克隆技术的态度是禁止生殖性克隆人，坚持四不原则(不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克
隆人实验)，但不反对治疗性克隆。生物武器的种类包括病菌、病毒、生化毒剂以及经过基因重组的致病菌
等，具有传染性强污染面广的特点。
【详解】A、转基因技术已被用来减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期，属于转基因技术在
微生物领域的应用，A正确；
B、“设计试管婴儿”需要对胚胎进行遗传学诊断，试管婴儿技术不需要，B错误；C、我国禁止生殖性克隆，不允许进行任何生殖性克隆人实验，C正确；
D、生物武器致病能力强，我国反对生物武器及其技术和设备扩散，D正确。
故选B。
二、综合题
11．（2023上·宁夏石嘴山·高三平罗中学校考阶段练习）如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体
的过程；图2表示体外受精培育优质奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，
请据图回答下面的问题。
(1)在图1中注射到小鼠体内的物质是 。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是 。该过程所用的生物技术有 。
(2)图2中参与体外受精的精子需要经过成熟和 的过程，才能使卵细胞受精。若要获得多头与
此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的 均等分割后进行胚胎移植。
(3)图丙中过程①是植物细胞形成 的阶段，该阶段所用的酶是 。
【答案】(1) 抗原X 既能无限增殖又能产生抗X的抗体 动物细胞融合技术和动物细胞培养技
术
(2) 获能 内细胞团
(3) 原生质体 纤维素酶和果胶酶
【分析】图1所示为单克隆抗体的制备过程，小鼠的B细胞经过免疫，再与能无限增殖的骨髓瘤细胞融合，
形成的杂交瘤细胞同时具备了分泌抗体和无限增殖的能力。图2所示为胚胎工程中的体外受精和胚胎移植
技术，精子只有经过获能处理后才具备使卵细胞受精的能力；将内细胞团进行均等切割后，每个部分都可
以再发育成一个个体。图3分析，①表示去除细胞壁，②表示原生质体的融合，③表示再生细胞壁，④表
示脱分化，⑤表示再分化，⑥表示移栽。
【详解】（1）图1是制备抗X抗原的单克隆抗体的过程，要想获得分泌抗X抗原的抗体，需要对小鼠注射
相应的抗原即X抗原。融合后经筛选的细胞为杂交瘤细胞，具备双亲细胞的遗传特性，此类细胞的特点是
既能无限增殖又能产生抗X的抗体；两类细胞融合需要细胞融合技术，杂交瘤细胞在体内或体外培养，需
要细胞培养技术，所以该过程所用的生物技术有动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。
（2）图2精子受精前需要经过培养法或化学培养进行成熟和获能处理后才具备受精的能力；内细胞团将来
发育为胎儿的各种组织，所以若要获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可以在体外进行胚胎分割，胚胎分
割需要对囊胚中内细胞团均分。
（3）图3所示为植物体细胞杂交和植物组织培养过程，体细胞杂交的第一步就是制备原生质体，植物细胞
壁成分主要是纤维素和果胶，可以利用纤维素酶和果胶酶将植物细胞壁分解掉，进而形成原生质体。
12．（2023上·广东汕头·高三统考期中） 金属硫蛋白(MT)是一类具有金属结合能力的多肽，金属离子如
Ag⁺、Hg²⁺,Cd²⁺等能够与 MT的半胱氨酸上的巯基共价结合而形成络合物，从而降低金属离子对细胞的毒害。
研究人员获取了柽柳和星星草 MT基因的 mRNA，并最终构建了具有两种植物的MT基因载体，导入烟草，
研究转基因烟草对Cd²⁺的耐受力，回答下列问题：
(1)由于 PCR 技术不能直接扩增mRNA,因此实验室常用“RT-PCR 技术”来实现目的基因的获取和扩增，据
此可知在进行“RT-PCR 技术”时应当在仪器中添加 酶、 酶、 引物、dNTP、缓冲体系。
(2)下图是pROKII质粒、柽柳MT 基因(MTcI)和星星草 MT 基因(MTx) 的相关序列示意图。将柽柳 MT 基因连接到 pROKⅡ质粒中，应选用的限制酶是 。理由是 。若甲
和乙连接到同 个pROKII中，为了使重组质粒能够同时独立表达柽柳和星星草的MT，则 MTx还需要连接
序列进行优化。
(3)重组质粒进行转化后，提取烟草总DNA，用特异性引物进行扩增得到 序列，可检测目的基因是
否已整合到烟草的基因组中。为研究转基因烟草对 Cd²⁺的耐受力，实验思路为：将转基因烟草幼苗分别移
入 的MS 生根培养基中，观察烟草的生长状态。
【答案】(1) 逆转录酶(或反转录酶) 耐高温的DNA聚合酶
(2) Xbal和Kpnl Xbal和Kpnl可以从甲中完整剪切出柽柳的MT基因 和终止子, 且pROKII质粒上
的P35S启动子末端具有Xbal和Kpnl两种酶的切割位点 终止子、PstI、sphI、HindⅡ识别序列
(3) MT (T 或MT 和T)和MT 含不同浓度Cd2+
cl cl cl cl x
【分析】1、PCR扩增目的基因需要有一段已知的碱基序列。
2、基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取；(2)基因表达载体的构建: 是基因工程的核心步骤，
基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等； (3) 将目的基因导入受体细胞；(4)目的基的
检测与鉴定：分子水平上的检测: ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术，
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术，③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技
术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】（1）RT-PCR 技术指用mRNA扩增DNA的技术，故应当在仪器中添加逆转录酶酶、耐高温的DNA
聚合酶、 引物、dNTP、缓冲体系。
（2）将柽柳 MT 基因连接到pROKⅡ质粒中，应选用的限制酶是Xbal和Kpnl。由图可知pROKII不含终止
子，则应对甲片段进行酶切，使终止子Tcl和MT基因与pROKII组成重组质粒，则不能选择BamHl。PROKII
上不含Smal的酶切位点，则应选择Xba与Kpnl，以保证终止子Tcl和MT基因与pROKII组成重组质粒且MT
基因位于启动子P35S和终止子Tcl之间。若甲和乙连接到同 个pROKII中，则 MTx还需要连接终止子、PstI、sphI、HindⅡ识别序列进行优化，才能使重组质粒能够同时独立表达柽柳和星星草的MT。
（3）重组质粒进行转化后，提取烟草总DNA，用特异性引物进行扩增得到MTcl(Tcl或MTcl和Tcl)和MTx序
列，可检测目的基因是否已整合到烟草的基因组中。为研究转基因烟草对 Cd²⁺的耐受力，因此，实验的自
变量是含不同浓度Cd2+，故实验思路为：将转基因烟草幼苗分别移入含不同浓度Cd2+的MS 生根培养基中，
观察烟草的生长状态。
