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热点微练 30 微生物的培养与应用
(时间：15分钟)
1.(2021·广东惠州调研)猪场污水中的氮素是一类主要的水体污染物。B 菌株能
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有效地去除氨氮进行脱氮，关于B 菌株的分离与鉴定，回答下列问题：
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(1)进行脱氮微生物初步筛选时，通常采用________法和________法进行接种。
(2) 在 制 备 培 养 基 倒 平 板 时 ， 待 平 板 冷 凝 后 倒 置 ， 倒 置 的 目 的 是
____________________________________________。平板应放在培养箱里空白
培 养 1 ～ 2 d ， 观 察 是 否 有 菌 落 生 成 ， 其 目 的 是
____________________________________。对分离得到的菌株B 可通过观察菌
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落的______________进行形态学鉴定。
(3)某科研小组研究了不同温度对B 菌株氨氮降解率的影响，结果如下表：
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不同温度对B 菌株脱氮能力的影响
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温度/℃ 氨氮浓度/(mg·L－1)
0 h 12 h 24 h 36 h
20 50 48 15 11
30 50 30 10 6
35 50 25 7 2
40 50 45 16 11
本 实 验 的 自 变 量 为 ________ ， 因 变 量 是 ________ ， 结 论 是
________________________。
答案 (1)平板划线 稀释涂布平板 (2)防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染
和避免培养基中的水分过快地挥发 检测培养基制备是否合格或灭菌是否彻底
形状、颜色、大小、隆起等 (3)温度与时间 氨氮降解率(氨氮浓度) 35 ℃脱
氮效果最好
解析 (1)初步筛选脱氮微生物时，通常采用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种。(2)在制备培养基倒平板时，待平板冷凝后倒置，倒置的目的是防止皿盖
上的水珠落入培养基造成污染和避免培养基中的水分过快地挥发。平板应放在
培养箱里空白培养1～2 d，观察是否有菌落生成，其目的是检测培养基的制备
是否合格或灭菌是否彻底。通过观察菌落的形状、颜色、大小、隆起等进行形
态学鉴定。(3)探究不同温度对B 菌株氨氮降解率的影响实验中，自变量为温度
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和时间，因变量为氨氮降解率，由表可知，35 ℃时，氨氮降解最多，脱氮效果
最好。
2.(2021·湖北襄阳期末)将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人
日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类
和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用盖上保鲜膜保存三天的西瓜
表面的瓜瓤制备浸出液，研究其中细菌的种类和数量。
(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基要含有水、碳源、
________和________。
(2)为了避免培养基被污染，在培养过程中，需将平板________(填“正置”或
“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，需要将浸出液接种到培养
基上。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在____________附
近进行。
(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出
液中有________(填“一种”或“多种”)细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细
菌污染的程度越________(填“高”或“低”)。
答案 (1)氮源 无机盐 (2)倒置 酒精灯火焰 (3)多种 高
解析 (1)微生物培养基一般都含有水、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和无机盐，为微生物生长繁殖提供必需的营养物质。(2)为防止培养皿盖上的冷凝
水滴落影响菌落生长，需将培养皿倒置。酒精灯火焰附近为无菌区域，因此在
酒精灯火焰附近进行接种操作，可以有效避免杂菌的污染。(3)一般来说，在一
定的培养条件下，微生物表现出稳定的菌落特征，如菌落形状、大小、隆起程
度、颜色等。若在平板上观察到形态和颜色等菌落特征不同的菌落，说明平板
上菌落种类不止一种，由题意推知西瓜浸出液中存在多种细菌。浸出液中的细
菌总数越多，西瓜被污染的程度越高。
3.(2021·湖北华中师大一附中期中)大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，
其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈紫黑色。检测水样是否符合饮用
水卫生标准时，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目，流程如图所示：用滤膜过滤
待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基(EMB培
养基)上培养→统计菌落数目。
(1)过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是
________________。
(2)从功能上划分，EMB培养基属于________培养基，为检测该培养基灭菌是否
彻底，对于该培养基应采用的检测方法是 。
(3)为检测严重污染的水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上
述平板中，应选择颜色为________的菌落进行计数。该方法通过统计平板上的
菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是 。(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可以测定待测水样中其他微生物的数目。
他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它
们在结构上的主要区别是____________。另一份来自湖泊，若要通过测量蓝藻
的数目来研究“水华”，则培养基配方中必须添加________(从“水”“无机
盐”“碳源”“氮源”中选填)。
答案 (1)滤杯、滤膜和滤瓶 (2)鉴别 将未接种的培养基在恒温箱中培养一段
时间，观察培养基上是否有菌落产生 (3)紫黑色 当样品的稀释度足够高时，
培养基表面生长的单个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 (4)有无细胞核
水、无机盐、氮源
解析 (1)过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，这些实验用具都需要经过
灭菌处理，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染。
(2)从功能上划分，EMB培养基属于鉴别培养基；培养大肠杆菌时，在接种前通
常需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应将未接种的培养基在适宜的
温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(3)根据题意可知，
“大肠杆菌代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈紫黑色”，因此为检测
严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板中，
应选择颜色为紫黑色的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推
测样品中的活菌数，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的单
个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。(4)变酸的果酒中有两种微生物，分别是酵母菌和醋酸菌，两者分别属于真核生物和原核生物，它们在结构上的主要
区别是有无(成形的)细胞核；蓝藻可以进行光合作用，属于自养型微生物，因
此其计数所用培养基中必须添加的成分有水、无机盐、氮源。
4.(2021·河南洛阳联考)富集培养主要是指利用不同微生物生命活动特点的不同，
限定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量
大大增加，人们能够更容易地从自然界分离到所需的特定微生物。如图描述了
采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物(对羟基苯甲酸)的微生物的实验
过程。
注：⑥在没有该底物的培养基中不能生长；⑦在含有该底物的培养基中表现为
生长
请分析回答下列问题：
(1)本实验所需培养基的碳源为___________，该碳源进入细菌细胞内的主要作
用 ： ① ________________________________ ；
②____________________________。
(2)培养基含有 KH PO 和 Na HPO ，其作用有①________________________；
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②________________________。
(3)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明样品中有多
种分解对羟基苯甲酸的细菌，依据是 。
(4)若要固定化分解对羟基苯甲酸的细菌，一般采用________法，固定前需要进
行活化，活化是 。
答案 (1)对羟基苯甲酸 ①为细胞生命活动提供能量 ②为其他有机物的合成
提供原料 (2)①为细菌生长提供无机营养 ②作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定 (3)一定条件下，同种细菌形成的菌落特征是相同的(或不同菌种在相
同条件下形成的菌落特征不同) (4)包埋 让处于休眠状态的细胞恢复正常的生
活状态
解析 (1)因该实验目的是从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物，故所用
培养基以对羟基苯甲酸为唯一碳源；该碳源的作用有进入细菌细胞内作为细胞
的能源物质(为细胞生物生命活动提供能量)，为其他有机物的合成提供原料。
(2)培养基含有KH PO 和Na HPO ，作为无机盐，可以为细菌生长提供无机营
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养，此外其中的H PO和HPO可保持细胞生长过程中 pH稳定。(3)一定条件下，
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同种细菌形成的菌落特征(包括菌落的大小、形状、隆起程度和颜色等)是相同
的，不同菌种在相同条件下形成的菌落特征不同，故培养 20小时后，观察到平
板上有形态和颜色不同的菌落，可说明样品中有多种分解对羟基苯甲酸的细菌。
(4)固定化酶或固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空
间内的技术，其中固定细胞常采用包埋法；活化是指让处于休眠状态的细胞重
新恢复正常的生活状态。
