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专题12 发酵工程
一、单选题
1．（2024·湖南衡阳·二模）《黄帝内经》中提到：“米酒甘甜，入肝经，能补血行气。”某品牌的甜酒曲
中只有需氧型根霉菌，这种菌促进淀粉水解的能力强，产生酒精的能力较弱，因而用其制作的甜米酒甜味
明显又略带酒香。下列相关叙述正确的是（ ）
A．可用根霉菌和酵母菌一起进行有氧发酵来提高甜米酒的酒精浓度
B．用适宜的选择培养基即可获得某种用于酿制米酒的优质根霉菌种
C．蒸好的米饭放至室温再添加甜酒曲可以防止根霉菌因高温而失活
D．用纯根霉菌制作的甜米酒中只有酒精一种代谢产物因而更加安全
【答案】C
【分析】1、根霉菌属于需氧型微生物，正常生长需要充足的氧气利用起来进行有氧呼吸才能正常新陈代
谢；
2、酵母菌是兼性厌氧的微生物，它在有氧的情况下可以呼吸，在无氧的情况下就发酵，即在有氧气的环
境中，酵母菌将葡萄糖转化为水和二氧化碳，无氧的条件下，将葡萄糖分解为二氧化碳和酒精。
【详解】A、酵母菌在无氧条件下发酵产生酒精，A 错误；
B、用适宜的选择培养基可获得根霉菌种，还需经发酵检测才能获得某种用于酿制米酒的优质根霉菌种，B
错误；
C、蒸好的米饭放至室温再添加甜酒曲可以防止温度过高杀死发酵微生物，C 正确；
D、用纯根霉菌制作的甜米酒中不是只有酒精一种代谢产物，D 错误。
故选C。
2．（2024·浙江·模拟预测）某同学将生鱼肉加盐腌在冰箱，两个月后发现鱼肉看着还很新鲜但表面出现黄
色颗粒，经专家检测这些黄色颗粒为金黄色葡萄球菌菌落，金黄色葡萄球菌对高温、高盐有一定耐受力，
被误食后会导致食物中毒。下列叙述错误的是（ ）
A．该腌鱼可看作一种天然的选择培养基
B．该同学应对冰箱进行消毒处理
C．腌鱼通过烹煮做熟后，仍可安全食用
D．可用LB 液体培养基大规模快速繁殖金黄色葡萄球菌
【答案】C
【分析】1、观察菌落的形态特征应在固体培养基上进行接种完成后，接种人员必须进行消毒处理，而不
是灭菌，因对人无法灭菌，只能消毒；
2、天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点
是成分复杂，来源受限；天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固
剂(如血浆)等；
3、选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。
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具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。
【详解】A、由题意可知，腌鱼表面生长有金黄色葡萄球菌菌落，可见腌鱼为金黄色葡萄球菌的生长提供
了一些天然的营养成分，可以看作一种天然的选择培养基，A 正确；
B、由于冰箱内腌鱼表面生长有金黄色葡萄球菌菌落，就需要对冰箱进行消毒处理，B 正确；
C、由于该腌鱼已有细菌生长，即使烹煮做熟后还会有有细菌污染，不能食用，C 错误；
D、可以用LB 液体培养基来大规模快速繁殖金黄色葡萄球菌，D 正确。
故选C。
3．（23-24 高三上·福建·期末）研究人员利用杏鲍菇(具有双核，AA) 和秀珍菇(具有单核，B) 进行体细胞
杂交，以期培养食用菌新品种，流程如图。已知异源融合子因异源基因相混合而获得新的遗传特性，表现
出对亲株的拮抗作用，能够在培养基上观察到一条拮抗带。融合后的菌丝，在进行细胞分裂时，会形成一
个喙状结构，而单核菌丝不会。
注：高温灭活使原生质体AA 仅能生存而无法繁殖。
下列叙述正确的是（ ）
A．步骤②中原生质体应在低渗溶液中进行培养并处理
B．促融后形成的融合菌株可能为AAAA、AAB、BB、AB
C．在培养基上可以观察到AA 菌落、B 菌落以及AAB 菌落
D．若有喙状结构和无喙状结构同时出现在拮抗带，步骤③应选择有喙状结构的菌丝
【答案】D
【分析】高温灭活使原生质体A 仅能生存而无法繁殖，因此，培养基上不会有A 的菌落。
【详解】A、步骤②中原生质体应在等渗溶液中进行培养并处理，A 错误；
BC、高温灭活使原生质体AA 仅能生存而无法繁殖，因此不会形成AAAA 的融合菌株，也不会出现AA、
AB 菌落，BC 错误；
D、融合后的菌丝，在进行细胞分裂时，会形成一个喙状结构，而单核菌丝不会，因此若有喙状结构和无
喙状结构同时出现在拮抗带，步骤③应选择有喙状结构的菌丝，D 正确。
故选D。
4．（2024·广东广州·二模）灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害。为了绿色、高效地防治
灰霉病，研究人员从灰霉病多发的大棚土壤中取样、分离出多种单菌落并进行扩大培养，随后将各组微生
物的无菌发酵滤液与未凝固的普通培养基混合后倒平板，冷却后在平板中央接种灰葡萄孢，通过比较灰葡
萄孢菌丝生长情况，从而筛选出高效的灰葡萄孢拮抗菌。下列叙述，错误的是（ ）
A．在灰霉病多发的大棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌
B．取无菌发酵滤液的目的是用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用
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C．为筛选出高效拮抗菌，只需在普通培养基接种等量灰葡萄孢作为对照
D．灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏的组别对应的微生物即为最高效拮抗菌
【答案】C
【分析】纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法的过程是：由接种环沾取少许待
分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划
线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表
面得到单菌落。稀释涂布平板法是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖
而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
【详解】A、由题意可知，灰霉病是由灰葡萄孢（一种真菌）引起的农作物病害，因此在灰霉病多发的大
棚土壤取样，比普通土壤更有可能获得灰葡萄孢拮抗菌，A 正确；
B、取无菌发酵滤液的目的是排除其他杂菌的干扰，利用拮抗菌的代谢产物对灰葡萄孢产生抑制作用，从
而获得专一性的拮抗菌，B 正确；
C、为筛选出高效拮抗菌，需在普通培养基接种等量不同浓度的灰葡萄孢来进行实验，挑选出对灰葡萄孢
拮抗效果最好的拮抗菌，C 错误；
D、最高效拮抗菌对灰葡萄孢的拮抗效果是最好的，导致灰葡萄孢菌丝生长最缓慢、稀疏，D 正确。
故选C。
5．（23-24 高三下·云南昆明·阶段练习）从自然界中筛选具有优良性状的菌种的一般步骤为：采集样品→
富集培养（使菌体数量增多）→纯种分离→性能测定，如图a、b 是采用两种接种方法接种后纯化培养的效
果图。下列相关叙述正确的是（ ）
A．可使用液体培养基进行富集培养
B．为获得纯种的目的菌种，需对采集的样品进行灭菌
C．获得图a 所示结果的接种过程中，接种环需灼烧灭菌3 次
D．利用图b 计算出样品中菌体浓度为5．85×108个/ml，则接种稀释液的稀释倍数为107倍
【答案】A
【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，
在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能
形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后
可形成单个菌落。
【详解】A、与使用固体培养基相比，使用液体培养基培养菌种时，菌体可以分布在整个培养基中，可充
分利用其中的营养物质，提高培养液中氧气含量，菌体数量增加的更快，A 正确；
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B、需从采集的样品分离得到目的菌种，不能对样品进行灭菌，B 错误；
C、图a 所示结果的接种次数为3 次，接种环需灭菌4 次，C 错误；
D、利用稀释涂布平板法计算菌体浓度的方法为菌落数÷接种液体积×稀释倍数，而用于计数的平板的菌落
数应在30-300 之间，因此58.5 个÷0.1ml×稀释倍数=5.85×108 个/ml，计算得出稀释倍数为106 倍，D 错误。
故选A。
6．（23-24 高三上·山西·期末）在某地的农业生产中，研究人员发现了一种广泛使用的除草剂在土壤中不
易被降解，且长期使用会导致土壤被污染。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下图程序选育能降解该除
草剂的细菌（已知该除草剂是一种含氮有机物，在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。
下列相关叙述正确的是（ ）
A．只有长期使用该除草剂的土壤中才含有能降解该除草剂的细菌
B．筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源
C．图中操作Ⅰ的接种方法为平板划线法，该方法可用于细菌计数
D．经过一段时间的培养，培养皿中应该只存在有透明圈的菌落
【答案】B
【分析】微生物常用的接种方法：稀释涂布平板法和平板划线法。
【详解】A、土壤中才含有能降解该除草剂的细菌，是基因突变的结果，不是长期使用除草剂的结果，A
错误；
B、筛选能降解该除草剂的细菌的培养基中该除草剂是唯一的氮源，B 正确；
C、平板划线法不能用于细菌计数，稀释涂布平板法可以，C 错误；
D、经过一段时间的培养，培养皿中也会存在无透明圈的菌落，D 错误。
故选B。
7．（22-23 高二下·黑龙江鹤岗·期中）聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具
有类似于合成塑料的理化特性，废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸
水湖中寻找生产PHA 的菌种，流程图如下。下列叙述正确的是（ ）
A．步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B．步骤③所用的培养基中营养物质浓度越高，对嗜盐菌的生长越有利
C．扩大培养所用的培养基应加入琼脂，放置摇床上培养，以便于挑取菌落获得纯化菌株
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D．挑取菌落时，应取多个菌落并分别测定嗜盐菌的PHA 含量
【答案】D
【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生
物培养的物质基础。微生物培养基需要为微生物繁殖提供碳源、氮源、水、无机盐等营养物质，此外还要
满足微生物对特殊营养物质、pH 和O2 的需求。培养基按照其物理状态可以分为固体培养基、半固体培养
基和液体培养基。液体培养基常应用于工业或生活生产。
【详解】A、PHA 是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，要筛选嗜盐细菌，步骤②可用稀释涂布平板法接种
到含盐量较高的选择培养基上，A 错误；
B、步骤③培养基浓度过高，会导致菌体失水死亡，不利于嗜盐细菌的生长，B 错误；
C、扩大培养应选用液体培养基，液体培养基中无需加入琼脂，C 错误；
D、要挑选高产聚羟基脂肪酸酯（PHA）的嗜盐菌，挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的
PHA 含量，进行比较，D 正确。
故选D。
8．（2023·天津·模拟预测）将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a 和b）进行如下图所示实验。下列
叙述正确的是（ ）
A．实验中接种至培养基方法是平板划线法
B．基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落
C．基本培养基中包含菌株a 和b 的生长因子
D．菌株a 和b 需要的生长因子有所不同
【答案】D
【分析】单独培养菌株a 和b 时，培养基中均无法生长菌落，而当a 和b 共同培养时，培养基中有少量菌
落产生，a 和b 混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的生长因子，因此它们所需要的生长因子一
定有所不同。
【详解】A、根据菌株a 和菌株b 混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时宜用稀释涂布平板法，
A 错误；
B、基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，B 错误；
C、单独培养菌株a 和b 时，培养基中均无法生长菌落，而当a 和b 共同培养时，培养基中有少量菌落产生，
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因此培养基中无法提供它们单独生长的因子，C 错误；
D、a 单独培养和b 单独培养均不能生长，a 和b 混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的生长因子，
而无法独立生长，因此它们所需要的生长因子有所不同，D 正确。
故选D。
9．（22-23 高二下·广东·期中）某学者利用“影印培养法”研究大肠杆菌抗链霉素性状产生的原因，先将
原始菌种接种到1 号培养基上，培养出菌落后，将灭菌绒布在1 号上印模，绒布沾上菌落并进行转印，使
绒布上的菌落按照原位接种到2 号和3 号培养基上。待3 号上长出菌落后，在2 号上找到对应的菌落，然
后接种到不含链霉素的4 号培养液中，培养后再接种到5 号培养基上，并重复以上操作。实验过程如图所
示。下列相关叙述正确的是（ ）
A．大肠杆菌抗链霉素的突变是发生在与链霉素接触之后
B．在操作规范的情况下，5 中观察到的菌落数可能大于初始接种到该培养基上的活菌数
C．4 号和8 号培养液中，大肠杆菌抗链霉素菌株的比例逐渐增大
D．该实验缺乏对照实验，无法确定抗链霉素性状属于可遗传变异
【答案】C
【分析】影印培养法实质上是使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法。通过
影印培养法，可以从在非选择性条件下生长的细菌群体中，分离出各种类型的突变种。
【详解】A、大肠杆菌抗链霉素的性状是由基因突变引起的，该突变发生在与链霉素接触之前，链霉素是
对其起选择作用，A 错误；
B、采用稀释涂布平板法将菌种接种在5 号培养基上，由于两个或多个细菌可能会形成一个菌落，在操作
规范的情况下，5 中观察到的菌落数可能小于初始接种到该培养基上的活菌数，B 错误；
C、3 号与2 号、7 号与6 号培养基中的菌落数的比值，是抗性菌落占全部菌落的比例，观察实验结果可知，
4 号与8 号培养液中，抗链霉素菌株的比例在逐渐增大，C 正确；
D、本实验有对照实验，无链霉素的培养基为对照，可以确定抗链霉素性状属于可遗传的变异，D 错误。
故选C。
10．（22-23 高三上·浙江绍兴·阶段练习）绍兴是黄酒之乡，“麦曲酶长，酵米复芳；白梅酒酿，伴淋寒香；
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压滤琼浆，煎煮陈藏”是对绍兴黄酒精致复杂酿造工艺的描述。在黄酒的主发酵过程中，“开耙”（搅
拌）是极为关键的一步。下列相关叙述错误的是（ ）
A．接种麦曲有利于淀粉的糖化，有利于“酒酿”菌种发酵
B．煎煮的目的是除去发酵产品中的杂菌，利于酵母菌繁殖
C．陈藏有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香
D．发酵过程中“开耙”可适当提供O2，调节pH，活化酵母
【答案】B
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，
大量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精
发酵时，一般将温度控制在18～25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野
生酵母菌。
2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都
充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
【详解】A、淀粉属于生物大分子物质，淀粉糖化为小分子糖有利于发酵过程中酵母菌对糖类的利用，A
正确；
B、煎煮是进行消毒，除去发酵产品中的酵母菌等微生物，利于储藏，B 错误；
C、陈储”是将榨出的酒放入罐内存放，此过程有利于黄酒中醇与酸发生酯化反应，使酒更加芳香，C 正
确；
D、“开耙”（搅拌）是为了让酵母菌进行有氧呼吸，增加酵母菌的数量，有利于活化酵母，D 正确。
故选B。
11．（2023·山东日照·一模）三糖铁培养基（TSI）含有牛肉膏、蛋白胨、糖类（乳糖、蔗糖和葡萄糖的比
例为10：10：1）、酚红（在酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色）等成分。TSI 琼脂试验法通过观察肠
杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸（少量的酸能被空气缓慢氧化）量的多少来鉴别其种类。操作过程是：
用接种针挑取待测菌落后，刺入斜面TSI 内，后缓慢抽出接种针，在斜面上进行“之”字划线。下列分析
错误的是（ ）
A．牛肉膏可为细菌提供氮源和维生素等
B．穿刺和划线的过程需严格控制杂菌污染
C．若培养基中底层与斜面均呈黄色，推测细菌只能分解乳糖
D．若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖
【答案】C
【分析】三糖铁培养基中的三糖分别为葡萄糖、乳糖及蔗糖。其中葡萄糖含量少，仅为乳糖或蔗糖的
1/10。细菌分解糖类时产酸会使pH 降低，斜面和底层呈黄色：若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，
因葡萄糖含量较少，所生成的少量酸由于接触空气被氧化，且细菌生长繁殖过程中利用含氮物质生成碱性
化合物中和酸，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所产生的酸一时不被氧
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化而仍保持黄色。若细菌可以分解葡萄糖、乳糖及蔗糖，产酸多，斜面和底层都呈黄色。
【详解】A、牛肉膏可为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素等，A 正确；
B、本实验通过TSI 琼脂试验法，观察肠杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸（少量的酸能被空气缓慢氧
化）量的多少来鉴别其种类，故穿刺和划线的过程需严格控制其他杂菌污染，B 正确；
C、由于酚红在酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色，若培养基的中底层与斜面均呈黄色，说明细菌产
酸的量多，推测细菌可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量较多的乳糖和蔗糖（或其中之一），C 错
误；
D、若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培养基中葡萄糖的含量较少，其产酸的量也较少，斜面
上所生成的少量酸被空气缓慢氧化，使斜面由黄色变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所
产生的酸一时不能被空气氧化而仍保持黄色。故若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分
解葡萄糖，D 正确。
故选C。
12．（2024·重庆九龙坡·模拟预测）垃圾是放错地方的资源，实行垃圾分类能够提高垃圾利用率，从而达
到变废为宝的目的。为更好地降解厨余垃圾，研究人员将厨余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶
中制备厨余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作筛选高效降解淀粉的微生物。下列叙述错误的是（ ）
A．X 培养基是含有碳源、氮源、水、无机盐的固体培养基
B．①处菌落的周围没有透明圈，可能是自养型杂菌
C．为获得高效降解淀粉的微生物，应挑⑤处的菌落接种到Y 培养基
D．用细菌计数板计数Y 培养基中的微生物结果一般小于稀释涂布平板法的计数结果
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，
划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最
后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，
经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、题图可知，接种后X 培养基上长出菌落，可见培养基的成分含有碳源、氮源、水、无机盐，
X 是固体培养基，A 正确；
B、X 培养基中①处菌落的周围没有透明圈，可能该微生物可以利用空气中的二氧化碳作为碳源，是自养
型的杂菌，B 正确；
C、⑤处透明圈最大，说明降解淀粉的能力最强，故为获得高效降解淀粉的微生物，应挑⑤处的菌落接种
到Y 培养基，C 正确；
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D、稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平
板上观察到的只是一个菌落。用细菌计数板计数时，计数结果一般是死菌数和活菌数的总和，可见用细菌
计数板计数Y 培养基中的微生物结果一般大于稀释涂布平板法的计数结果，D 错误。
故选D。
13．（23-24 高三下·河北沧州·期中）如图为从土壤中分离纤维素分解菌的基本流程，下列叙述错误的是（
）
A．样品采集可将滤纸埋在土壤中一段时间后，从腐烂的滤纸上取样
B．扩大培养使用的是液体培养基，且以纤维素为唯一碳源
C．鉴别培养使用固体培养基，其中可加入刚果红
D．筛选纤维素酶高产菌株，要选择培养基上透明圈最大的菌落
【答案】D
【分析】纤维素分解菌的鉴定：在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维
素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素
分解菌。
【详解】A、滤纸富含纤维素，将滤纸埋在土壤中一段时间后，从腐烂的滤纸上取样，有利于获得更多的
纤维素分解菌，A 正确；
B、对纤维素分解菌进行扩大培养，通常使用以纤维素为唯一碳源的液体培养基，B 正确；
C、鉴别培养使用固体培养基，其中可加入刚果红，刚果红可与纤维素形成红色复合物，而纤维素分解产
生的单糖和二糖不会与刚果红发生上述反应，从而使纤维素分解菌菌落周围出现透明圈，C 正确；
D、筛选纤维素酶高产菌株，应选择刚果红培养基上透明圈直径与菌落直径比值最大的菌落，D 错误。
故选D
14．（2024·黑龙江大庆·模拟预测）聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机
物，PVA 分解菌能产生PVA 酶分解PVA，PVA 与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA 被分解时蓝绿色
复合物消失，形成白色透明斑，下表是筛选高效分解PVA 的细菌的培养基配方。下列叙述正确的是
（ ）
成
分
MgSO4
蛋白
质
PVA
水
用
量
5g
10g
7g
1000mL
A．制备该培养基时，一般需在倒平板后将培养基调至中性或弱碱性
B．该培养基以PVA 为唯一碳源，其上生长的菌落均具有分解PVA 的能力
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C．接种时，用灭菌后的涂布器蘸取少量菌液并均匀地涂布在培养基表面
D．在确定菌株降解PVA 效果时，白色透明斑的直径为因变量
【答案】D
【分析】菌落：是指由单个微生物细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，
形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。各种微生物在一定条件
下形成的菌落特征，如大小、形状、边缘、表面、质地、颜色等，具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、
辨认和鉴定菌种的重要依据。
【详解】A、制备该培养基时，一般在灭菌前将培养基调至中性或弱碱性，而后再进行灭菌和倒平板操作，
A 错误；
B、该培养基为液体培养基，而菌落是在固体培养基上长出的子细胞群体，因此，用该培养基不能得到分
解PVA 的细菌菌落，B 错误；
C、涂布时，用经过灭菌处理的涂布器将用移液枪移到平板上的菌液均匀地涂布在培养基表面，C 错误；
D、在确定菌株降解PVA 能力时，培养基中PVA 浓度为无关变量，白色透明斑的直径为因变量，不同的菌
种是自变量，D 正确。
故选D。
15．（2024·贵州·模拟预测）茅台酒被誉为“国酒”，以其卓越的品质赢得了世界的赞誉。茅台酒的工业
酿制环节主要包括制曲、投料、发酵、取酒，发酵微生物是酵母菌。下列相关叙述正确的是（ ）
A．制曲过程应通入无菌空气使酵母菌繁殖
B．投料前应对原料消毒
C．发酵过程应将温度控制在30～35℃
D．取酒过程应采用过滤、沉淀等方法
【答案】A
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大
量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌
无氧呼吸产生酒精。
【详解】A、制曲通入无菌空气使酵母菌有氧呼吸产生充足的能量促进繁殖，A 正确；
B、投料前应对原料进行严格灭菌，B 错误；
C、酵母菌发酵过程适宜的温度是18~30℃，C 错误；
D、产品是微生物细胞本身，采用过滤、沉淀等方法获得产品，但酒精的获取应该采用适当的提取、分离
和纯化措施（如：蒸馏），D 错误。
故选A。
16．（2024·辽宁抚顺·三模）实验小组用抗生素对大肠杆菌进行筛选，如图所示。挑取抑菌圈边缘的菌落
进行扩增培养，然后重复图示实验进行筛选，最后定量分析连续传代细菌群体中抑菌圈的半径变化，结果
如表所示。下列有关叙述错误的是（ ）
10
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抗生素
抑菌圈半径平均值/cm
抑菌圈缩小百分比
第一代筛选
第二代筛选
0
0
0
青霉素
0．95
0．74
22%
四环素
1．31
0．70
47%
阿奇霉
素
0．19
0
100%
A．用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种在筛选培养基上
B．抑菌圈边缘生长的菌落可能对抗生素不敏感
C．用抗生素多代培养对大肠杆菌有定向选择作用
D．第二代培养后，阿奇霉素能完全抑制大肠杆菌的繁殖
【答案】D
【分析】微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划
线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后
可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培
养后可形成单个菌落。
【详解】A、微生物的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板，可用稀释涂布平板法将大肠杆菌接种在筛
选培养基上，A 正确；
B、抗生素能够杀死细菌，在抑菌圈边缘抗生素浓度较低，可能存在具有耐药性（对抗生素不敏感）的细
菌，因此要从抑菌圈边缘的菌落上挑取细菌，B 正确；
C、抑菌圈的直径大小表明该种抗生素的杀菌能力抑制圈的直径越大，说明抗生素杀菌能力越强，在连续
培养几代后，抑菌圈的直径会变小，说明用抗生素多代培养对大肠杆菌有定向选择作用，C 正确；
D、连续多代培养后，耐药菌所占比例逐步增加，细菌种群中耐药性增强，抑菌圈直径逐渐变小。阿奇霉
素组抑菌圈缩小至0，因此大肠杆菌对阿奇霉素的抗性最强，D 错误。
故选D。
17．（2024·辽宁·模拟预测）格瓦斯采用俄式大面包为基质，经糖化、乳酸菌和酵母菌等多菌株混合，传
统发酵工艺加工发酵而成。含有维生素、氨基酸、乳酸、钙等对人体有益的成分。具有开胃、健脾、降血
11
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压、消除疲劳等作用。下列关于传统发酵技术的说法错误的是（ ）
A．面包屑糖化产生葡萄糖进入线粒体参与发酵过程
B．发酵过程中，容器的密封可以提高酒精产量
C．格瓦斯开盖后有气体喷出应该是酵母菌无氧呼吸产生的CO₂
D．发酵产物中的乳酸是在无氧条件下产生的
【答案】A
【分析】酒精发酵涉及的微生物主要是酵母菌，其新陈代谢的类型为异养兼性厌氧型，较适宜的发酵温度
为18~30℃。在无氧的环境中酵母菌把糖类分解为酒精和二氧化碳。乳酸发酵涉及的微生物主要是乳酸菌，
在无氧环境下，乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸。
【详解】A、面包屑糖化产生葡萄糖进入细胞质参与发酵过程，葡萄糖不能进入线粒体，A 错误；
B、容器的密封有利于酵母菌进行无氧呼吸，可以提高酒精产量，B 正确；
C、格瓦斯开盖后有气体喷出应该是酵母菌无氧呼吸产生的CO2，C 正确；
D、乳酸菌在无氧条件下产生了乳酸，所以发酵产物中含有乳酸，D 正确。
故选A。
18．（2024·北京丰台·二模）原浆苹果醋的简要工艺流程为：苹果采摘→挑选清洗→破碎榨汁→酵母发酵
→醋酸发酵→陈酿2 年左右。下列有关叙述正确的是（ ）
A．酵母发酵结束后，改变通气条件和升高温度有利于醋酸发酵
B．工艺流程中的“酵母发酵”发生在苹果细胞的细胞质基质中
C．酿醋过程中发酵液的pH 逐渐降低，与酿酒制作过程中相反
D．醋酸发酵阶段中释放的CO2是由醋酸菌的线粒体基质释放的
【答案】A
【分析】1、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，
大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母
菌无氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸
性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
2、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行
旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋
酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃。
【详解】A、醋酸发酵需要通入氧气，且温度比果酒发酵温度高，所以酵母发酵结束后，改变通气条件和
升高温度有利于醋酸发酵，A 正确；
B、果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精，其场所是细胞质基质，因此工艺流程中的“酵母发酵”
发生在酵母菌的细胞质基质中，B 错误；
C、果醋制作过程中发酵液pH 逐渐降低，果酒制作过程中产生二氧化碳，发酵液pH 也逐渐降低，C 错误；
D、醋酸菌属于原核细胞，只有核糖体一种细胞器，没有线粒体，D 错误。
故选A。
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19．（2024·山东日照·二模）PDA 培养基用于真菌培养，LB 培养基用于细菌培养。为探究芽孢杆菌X 能
否产生抑制真菌生长的物质，研究人员进行了相关实验，如下表。下列叙述正确的是（ ）
培养皿甲
培养皿乙
处理
PDA 培养基：小孔加入①
PDA 培养基：小孔加入培养过X 的无菌培养液
在培养皿右侧相同位置接种等量某种菌
实验结
果
A．该实验说明芽孢杆菌X 产生了抑制真菌生长的物质
B．表格中的①处应是未培养过X 的PDA 无菌培养液
C．制备两种培养基时均需先进行湿热灭菌再调节pH
D．接种时需先用涂布器蘸取菌液再涂布到相应位置
【答案】A
【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不
同细胞用接种环在平板培养基，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成
单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度
稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，
聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
【详解】AB、本实验是探究芽孢杆菌X 能否产生抑制真菌生长的物质，因此自变量为是否含有芽孢杆菌X
的培养液，据图可知，与培养皿甲相比，培养皿乙中真菌菌落与小孔的距离变大，说明芽孢杆菌X 产生了
抑制真菌生长的物质，PDA 培养基用于真菌培养，LB 培养基用于细菌培养，因此培养芽孢杆菌X 的应为
LB 培养基，即表格中的①处应是未培养过X 的LB 无菌培养液，A 正确；B 错误；
C、培养基制备时应先调pH 再进行湿热灭菌，C 错误；
D、接种时需先用移液器将菌液移至培养皿，然后再用涂布器涂布到相应位置，D 错误。
故选A。
20．（2024·山东泰安·二模）我国科技工作者发明“二步发酵法”生产维生素C 的工艺是世界首创。第一
步发酵用醋酸杆菌合成分泌维生素C 前体，第二步发酵用氧化葡萄糖酸杆菌（“小菌”）和假单胞杆菌
（“大菌”）混合菌种作为伴生菌，能促进产酸菌生长和产酸。如图为二步发酵法的生产流程。下列说法
正确的是（ ）
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A．可以利用平板划线法纯化混菌发酵法所需的目的菌
B．单独筛选高效的产酸菌和伴生菌即可用于混菌发酵
C．伴生菌与产酸菌二者互利共生，不存在种间竞争
D．生产过程采用混菌发酵法不需要严格的无菌操作
【答案】A
【分析】微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开
始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个
菌落。
【详解】A、在进行平板划线法时，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落 ，故可以利用
平板划线法纯化混菌发酵法所需的目的菌，A 正确；
B、产酸菌和伴生菌应共同进行筛选，才能获得最佳的生产维生素C 的菌种，单独筛选出的高效的产酸菌
和伴生菌不一定适配，B 错误；
C、伴生菌与产酸菌会共同竞争空间等资源，二者存在种间竞争，C 错误；
D、采用混菌发酵法时，需要进行严格的无菌操作，D 错误。
故选A。
21．（2024·山西朔州·三模）泡姜属于四川风味泡菜，有发汗解表、促进血液循环、驱散寒邪的功效。在
腌制泡姜之前，泡菜坛宜用开水烫一遍；腌制过程中，泡菜坛口的水槽中要始终保持有水状态，否则泡菜
坛内可能会长出一层白膜。下列有关叙述错误的是（ ）
A．在腌制泡姜前，用开水烫一遍泡菜坛是为了防止杂菌污染
B．在制作泡姜时，加入适量青花椒等香辛料既能防腐又能调节口味
C．泡姜腌制过程泡菜坛内长出白膜是由于氧气进入导致乳酸菌大量繁殖
D．腌制两天后，泡姜的风味逐渐显现，但不宜食用，因为此时泡姜中亚硝酸盐的含量较高
【答案】C
【分析】1、泡菜的制作所使用的微生物是乳酸菌，代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将
蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸；
2、泡菜的制作流程是：选择原料、配置盐水、调味装坛、密封发酵；
3、泡菜发酵过程中，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制十天后，亚硝酸盐的含量开始下降。
【详解】A、在腌制泡姜之前，泡菜坛宜用开水烫一遍，其目的是防止杂菌污染，A 正确；
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B、在制作泡姜时，加入适量的高度白酒、蒜瓣、红尖椒、青花椒等香辛料不仅可以抑制微生物的生长，
还能调节泡姜的风味，B 正确；
C、在泡姜腌制过程中，泡菜坛口的水槽中要始终保持有水状态，如果不能确保良好的密封性，泡菜坛内
会长出一层白膜，这是因为制作泡菜需要厌氧环境，如果泡菜坛密封不严导致有氧气进入，产膜酵母会大
量繁殖，C 错误；
D、腌制两天后，泡姜的风味逐渐显现，但此时还不宜食用，原因是亚硝酸盐的含量较高，一般在腌制10
天后食用为宜，D 正确。
故选C。
22．（2024·广东湛江·二模）蛋白S 为菌株C（一种细菌）的分泌产物，可被广泛应用于医药、食品和化
工工业。某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和蛋白S 产量的影响，结果如表所示。下列说法正确的
是（ ）
碳源
细胞干重/（g·L-1）
蛋白S 产量/（g·L-1）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0
制糖废液
2.30
0.18
A．菌株C 的培养基的pH 一般要调节至酸性
B．培养基中碳源物质浓度越高，菌株合成蛋白S 越多
C．适合菌体生长和生产蛋白S 的碳源均为葡萄糖
D．菌株C 可能因不能合成淀粉酶而无法利用淀粉
【答案】D
【分析】虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮
元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳
酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH 调至酸性，培养细菌时需将pH 调至中
性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】A、细菌的培养基的pH 一般要调节至中性或弱碱性，A 错误；
B、培养基中碳源物质浓度过高，可能会使菌株失水死亡，B 错误；
C、分析题表可知，以葡萄糖为碳源时，细胞干重最大，故菌株C 生长的最适碳源是葡萄糖；以制糖废液
为碳源时，S 产量最高，故用菌株C 生产S 的最适碳源是制糖废液，C 错误；
D、分析实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，说明其不能分解利用淀粉，故其不能生长的原因
是缺少淀粉酶，D 正确。
故选D。
23．（2024·安徽马鞍山·三模）我国卫生部门规定饮用水标准，1ml 自来水检出的菌落总数不可以超过100
个，不得检出总大肠菌群。为检验某品牌冰激凌中大肠杆菌含量是否超标，研究小组利用配制的伊红-亚甲
基蓝琼脂培养基进行检测。下列有关叙述正确的是（ ）
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A．检测中用到的接种方法为平板划线法
B．检测中冰激凌原液应进行适当的梯度稀释
C．检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平板作为阳性对照
D．检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成红色且有金属光泽的菌落
【答案】C
【分析】1、微生物常见的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用于微生物计数。
2、稀释涂布平板法统计菌落数的原理：当样品的稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个菌落来自于
样品稀释液中的一个活菌，可通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数。
【详解】A、平板划线法不能用来计数，检测中用到的接种方法为稀释涂布平板法，A 错误；
B、冰激凌中大肠杆菌含量本来就少，因此检测中冰激凌原液不需要进行适当的梯度稀释，B 错误；
C、检测中应设一个不接种的平板作为阴性对照和一个接种大肠杆菌的平板作为阳性对照，以此来对比反
映冰激凌中大肠杆菌及其数量，C 正确；
D、检测的培养基为固体培养基，大肠杆菌在该培养基上会形成深紫色且有金属光泽的菌落，D 错误。
故选C。
24．（2024·山西晋中·二模）以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程如图1 所示，图2 是果
酒和果醋发酵的装置。下列叙述错误的是（ ）
A．图1 的甲步骤中既有有氧呼吸也有无氧呼吸
B．图1 的操作流程可以先进行果醋发酵再进行果酒发酵
C．图1 的乙步骤进行时图2 中的充气口和排气口需始终打开
D．图2 的发酵液不能装满发酵瓶以避免发酵液溢出
【答案】B
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大
量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌
无氧呼吸产生酒精；生产中是否有酒精的产生，可用酸性重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
【详解】A、图1 的甲步骤是果酒发酵过程，果酒发酵时先通过有氧呼吸大量繁殖，再进行无氧呼吸进行
酒精发酵，A 正确；
B、由于缺少糖源时，醋酸菌会将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，所以图1 的操作流程需要先隔绝空
气进行果酒发酵，然后供氧进行果醋发酵，B 错误；
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C、图1 的乙步骤是进行果醋发酵，醋酸菌是好氧菌，其进行果醋发酵时需要有氧环境，图2 中的充气口
和排气口需始终打开，其中充气口需要充入无菌空气，而排气口所示的弯管可以防止外界空气的杂菌、尘
土等进入，C 正确；
D、图2 的发酵液不能装满发酵瓶，应留有一定的空间，以避免发酵液溢出，D 正确。
故选B。
25．（2024·山东济宁·二模）大肠杆菌、沙门氏菌能引起家禽和家畜的肠道疾病。暹罗芽孢杆菌代谢物具
有广谱抗菌性，为检测其对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌能力进行图示实验。下列说法正确的是（ ）
A．制备图示培养基需要在灭菌前调节pH
B．该抑菌实验还需要设计等量生理盐水作为对照
C．图示X 为离心后得到的下层沉淀，含有暹罗芽孢杆菌代谢物
D．从抑菌圈边缘挑取菌落涂布平板重复实验，抑菌圈直径变大
【答案】A
【分析】本实验的思路为：将含暹罗芽孢杆菌代谢物的滤纸片放到接种了大肠杆菌或者沙门氏菌的平板培
养基上，滤纸片周围会出现抑菌圈，在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌；若抗生素对细菌起选择作用，
则随着培养次数增多，耐药菌的比例增大，在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径变小。
【详解】A、制备图示培养基需要在灭菌前调节pH，否则会引起杂菌污染，A 正确；
B、该抑菌实验为检测暹罗芽孢杆菌代谢物对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌能力，互为对照，因此进行图示
实验不需设计等量生理盐水作为对照，B 错误；
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C、图示X 为离心后得到的下层沉淀，含有暹罗芽孢杆菌，上清液中含有代谢物，C 错误；
D、在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌，从抑菌圈边缘挑取菌落涂布平板重复实验，抑菌圈平均直径
变小，D 错误。
故选A。
26．（2024·辽宁大连·一模）工业污水中含有的多环芳烃类化合物（仅含C、H 元素）会造成农田土壤污
染。研究人员按照如图所示的流程从受污染的农田土壤中分离得到能高效降解多环芳烃类化合物的细菌菌
株。下列叙述错误的是（ ）
A．培养基乙中应以多环芳烃类化合物为唯一碳源
B．步骤①接种操作需要在酒精灯火焰附近进行
C．步骤②中应用涂布器从甲中蘸取菌液均匀涂布于培养基乙表面
D．步骤③中应从降解圈直径与菌落直径比值最大的菌落进行挑选
【答案】C
【分析】图示表示科研人员从被多环芳烃类化合物污染的土壤中分离出高效降解多环芳烃类化合物的菌株
的主要步骤。培养基甲和乙中加入多环芳烃类化合物作为唯一碳源，其目的是筛选出高效降解多环芳烃类
化合物的菌株。
【详解】A、该研究的目的是从被多环芳烃类化合物污染的土壤中分离出高效降解多环芳烃类化合物的菌
株，所以甲、乙培养基中应以多环芳烃类化合物为唯一碳源，A 正确；
B、为了能筛选出高效降解多环芳烃类化合物的菌株、防止杂菌污染，在进行步骤①培养的接种操作时，
需要在酒精灯火焰附近进行，B 正确；
C、步骤②是采用稀释涂布平板法接种并分离高效降解多环芳烃类化合物的菌株（目的菌），应先用微量
移液器从甲中取0.1mL 菌液滴加到培养基乙的表面，再用涂布器将菌液均匀涂布于培养基乙的表面，C 错
误；
D、透明圈直径与菌落直径比值越大，说明目的菌降解多环芳烃类化合物的效果越好，因此步骤③应从降
解圈直径与菌落直径比值最大的菌落进行挑选菌株并培养，D 正确。
故选C。
27．（2024·河南新乡·三模）酱油起源于我国，至今已有数千年历史。参与酱油酿造过程的微生物主要有
米曲霉、酵母菌和乳酸菌等，在众多微生物及其酶系的作用下，大豆、小麦中的蛋白质、脂肪等有机物被
分解，最终形成具有特殊色泽和良好风味的酱油。酱油的制作流程及发酵过程中主要微生物的数量变化如
图1、图2 所示。下列说法错误的是（ ）
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A．米曲霉发酵的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，分泌制作酱油所需的蛋白酶、脂肪酶等
B．已知发酵池发酵阶段是密封进行的，此时酵母菌与乳酸菌对氧气的代谢方式可能相同
C．乳酸菌发酵产生的乳酸能抑制杂菌生长，与酵母菌表现为原始合作关系
D．发酵池中加入食盐的主要作用之一是抑制部分有害微生物的生长
【答案】C
【分析】抑制杂菌污染和繁殖是保证发酵产品质量的重要因素，在发酵池中酵母菌产生的酒精、乳酸菌产
生的乳酸使发酵液呈酸性都能抑制杂菌的生长，发酵前执行严格的消毒灭菌操作、向发酵池中添加的食盐
等也能抑制杂菌的生长。
【详解】A、米曲霉发酵的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，扩增菌种，便于分泌制作酱油所需的蛋白
酶、脂肪酶等物质，提高发酵效率，A 正确；
B、由于发酵阶段是密封进行的，此时酵母菌与乳酸菌都只进行无氧呼吸，代谢方式相同，B 正确；
C、分析图2 可知，发酵过程中乳酸菌数量减少时，酵母菌的数量在增加，由此可知两者不是原始合作关
系，C 错误；
D、抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要因素，发酵池中加入食盐可抑制部分有害微生物的生长，D
正确。
故选C。
28．（2024·天津河东·二模）为筛选出可高效抑制番茄枯萎病菌（一类真菌）的土壤芽孢杆菌菌株，科研
人员从土壤中采集、分离、筛选芽孢杆菌菌株作为待测菌株，并采用平板对峙培养法观察各待测菌株的抑
菌能力。如下图为研究过程示意图，下列叙述正确的是（ ）
注：对峙培养法是明确有益微生物或其次生代谢产物的抑（杀）菌效果和作用范围时必须采用的方法
A．过程①可用平板划线法筛选并计数芽孢杆菌菌落数
B．过程②必须通过显微镜观察挑选芽孢杆菌，再进行对峙培养
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C．实验筛选出的菌株仍需进行大田种植试验以检测防治效果
D．若用过程①统计土壤中菌落数，则甲乙丙可相互对照，无需增设空白对照
【答案】C
【分析】微生物常见的接种的方法（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，
划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最
后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，
经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、过程①常利用稀释涂布平板法对菌落进行计数，而平板划线法无法计数，A 错误；
B、每种细菌都有特定的菌落的形态、大小和颜色，所以过程②可肉眼观察芽孢杆菌菌落的形态、颜色进
行挑选，B 错误；
C、需要进一步确定菌株的最佳条件，进行大田种植试验，检测防治效果，C 正确；
D、若用过程①统计土壤中菌落数，需增设空白平板作为对照，D 错误。
故选C。
29．（2024·江苏·模拟预测）芽孢杆菌耐高温，是常见的蛋白酶生产菌。培养基中的蛋白质可被蛋白酶降
解后在菌落周围形成透明圈。如图是筛选蛋白酶高产菌株的过程，下列叙述错误的是（ ）
A．70～80℃水浴10 分钟的目的是杀死非芽孢杆菌
B．在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种
C．以奶粉为唯一氮源的培养基能起到选择作用
D．通过透明圈大小可筛选出蛋白酶高产菌株
【答案】D
【分析】分析题图所示过程从土壤中筛选能降解蛋白质的细菌，实验流程：土壤取样→样品的稀释→将稀
释液涂布到以奶粉为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。
【详解】A、细菌中的芽孢杆菌较为耐高温，70~80℃水浴10 分钟的目的是杀死非芽孢菌，A 正确；
B、为防止杂菌污染，在酒精灯火焰旁将样品用无菌水稀释并涂布接种，B 正确；
C、蛋白酶降解培养基中的蛋白质可在菌落周围形成透明圈，奶粉富含蛋白质，以奶粉为唯一氮源的培养
基能起到选择作用，C 正确；
D、通过透明圈与菌落直径的比值大小，可对产蛋白酶芽孢杆菌降解蛋白质的能力进行比较，D 错误。
故选D。
30．（2024·北京海淀·一模）橄榄油的主要成分是甘油三酯。研究者利用“橄榄油平板透明圈法”筛选获
得两株产脂肪酶的菌株X 和Y， 检测结果如表。下列相关叙述不正确的是（ ）
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酶活性（U•mL-1）
透明圈
空白
-
菌株X
6.9
菌株Y
7.7
A．可将样液梯度稀释后涂布于平板进行筛选
B．培养基中的橄榄油提供微生物生长的碳源
C．图中透明圈大小仅与酶活性的大小成正比
D．以上两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外
【答案】C
【分析】选择培养原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止
其他微生物生长。
【详解】A、可利用稀释涂布平板法将样液梯度稀释后涂布于平板进行筛选，A 正确；
B、橄榄油的主要成分是甘油三酯，要筛选产脂肪酶的菌株X 和Y，则培养基中的橄榄油提供微生物生长
的碳源，B 正确；
C、图中透明圈大小不仅与酶活性的大小成正比，也和产酶量相关，C 错误；
D、两株菌株均可将脂肪酶分泌至细胞外，对培养基中的橄榄油进行分解，D 正确。
故选C。
二、多选题
31．（2024·辽宁·模拟预测）北京航空航天大学教授杨军成功从黄粉虫幼虫消化道中分离出能降解聚乙烯
塑料的细菌——微小杆菌YT2。下图表示目的菌的获取过程。下列相关叙述中，合理的是（ ）
A．富集培养应使用牛肉膏蛋白胨培养基，以促进目的菌增殖
B．选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源
C．将1ml 菌液加入培养基，再使用涂布器进行均匀涂布
D．使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中
【答案】BD
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；培养基是人
们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，
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培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足
微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制
或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
【详解】A、富集培养的目的是促进目的菌增殖，因此应该提供适合降解聚乙烯塑料的细菌生长的环境，
使用相应选择培养基，A 错误；
B、要分离出能降解聚乙烯塑料的细菌，选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源，B 正确；
C、一般情况下，取0.1ml 菌液加入培养基，再涂布，C 错误；
D、使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中，低温抑制微生物代谢和繁殖，有利于菌种保
存，D 正确。
故选BD。
32．（2024·河北承德·二模）在酒的酿造过程中，除酿酒酵母外还有非酿酒酵母的参与，其中非酿酒酵母
发酵能力弱，乙醇耐受力差，难以充当酒精发酵的主要菌株，但其代谢产物及分泌的酶类能促进酿酒酵母
降解葡萄糖等发酵底物，产生醛、酯、酸等芳香化合物，对最终酒产品的风味产生积极影响。关于传统发
酵制作果酒的过程，下列说法错误的是（ ）
A．制作果酒时，发酵温度应控制在30～35℃之间
B．发酵瓶中只含有酿酒酵母和非酿酒酵母两种微生物
C．制作葡萄酒时，酿酒酵母和非酿酒酵母都主要来自葡萄的果皮
D．发酵过程中，非酿酒酵母的数量逐渐下降，酿酒酵母的数量不断上升
【答案】ABD
【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧型生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大
量繁殖，在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵。温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右，酒精发
酵时，一般将温度控制在18~25℃，在葡萄酒自然发酵过程当中，其主要作用的是附着在葡萄皮上的野生
酵母菌。
【详解】A、果酒发酵时温度宜控制在18-25℃，A 错误；
B、果酒发酵的微生物是附着在葡萄皮上的野生酵母菌，故发酵瓶中除了含有酿酒酵母和非酿酒酵母两种
微生物，还有其他的微生物，B 错误；
C、制作葡萄酒时，起主要作用的是附着在葡萄果皮上的野生酵母菌，C 正确；
D、发酵一段时间后，由于非酿酒酵母乙醇耐受力差，故其数量逐渐下降，酿酒酵母的数量先上升，最后
因为营养物质不足和有害产物的积累，数量也会下降，D 错误。
故选ABD。
33．（23-24 高三下·吉林松原·阶段练习）苗族酸肉是以猪肉为原料，利用乳酸菌等微生物自然发酵而成的
传统发酵肉制品，因具有独特的风味、质地深受人们喜爱。为筛选酸肉中的乳酸菌为其他肉制品开发提供
支持，科研人员开展了相关研究。下列叙述正确的是（ ）
A．鉴定乳酸菌时除了对菌落的特征进行观察外，还可借助DNA 测序、PCR 等生物化学的方法
B．乳酸菌的筛选过程中为防止杂菌污染，可将酸肉样品切碎混匀用无菌水制成悬液，进行高压蒸汽
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灭菌
C．培养乳酸菌的培养基中除几种主要的营养物质之外，还需添加特殊的营养物质如维生素
D．实验室筛选获得的乳酸菌需扩大培养后方可用于发酵工程
【答案】ACD
【分析】鉴定乳酸菌时除了对菌落的特征进行观察之外，还可借助DNA 测序、PCR 等生物化学的方法。
【详解】A、鉴定乳酸菌时除了对菌落的特征进行观察之外，还可借助DNA 测序、PCR 等生物化学的方法，
A 正确；
B、若将酸肉样品切碎混匀用无菌水制成悬液进行高压蒸汽灭菌，则会将酸肉上微生物都杀死，无法获得
乳酸菌，B 错误；
C、培养乳酸菌的培养基中除几种主要的营养物质之外，还需添加特殊的营养物质如维生素，C 正确；
D、发酵工程接入的菌体总体积需要几立方米到几十立方米，所以发酵之前需要对菌种进行扩大培养，D
正确。
故选ACD。
34．（2024·全国·模拟预测）下列关于土壤中纤维素分解菌的分离培养过程的叙述，正确的是（ ）
A．为确保实验的准确性，选择土壤进行取样时，需要随机取样
B．分离土壤中的纤维素分解菌时，可用含有刚果红的牛肉膏蛋白胨培养基，刚果红与纤维素形成红
色复合物
C．分离土壤中纤维素分解菌的方法可以是稀释涂布平板法或平板划线法
D．纤维素分解菌能产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖、葡萄糖等
【答案】CD
【分析】在纤维素分解菌的分离实验中，刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解
后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样可以通过是否产生透明圈来筛选纤
维素分解菌。
【详解】A、获取土壤中纤维素分解菌需要选择纤维素丰富的环境，如树林中堆积的落叶经长时间的发酵
分解形成的腐殖土，A 错误；
B、分离土壤中的纤维素分解菌时，需要用含有刚果红且以纤维素为唯一碳源的选择培养基，刚果红与纤
维素形成红色复合物，B 错误；
C、分离土壤中纤维素分解菌的方法可以是稀释涂布平板法或平板划线法，C 正确；
D、纤维素分解菌能产生纤维素酶，将纤维素分解为纤维二糖、葡萄糖等，D 正确。
故选CD。
35．（2024·河北张家口·模拟预测）科研人员利用MRS-溴甲酚绿培养基，从传统臭鳜鱼中分离筛选到一株
乳酸菌，并研究其对多种微生物的抑菌能力。MRS-溴甲酚绿培养基的配方见下表，乳酸能与碳酸钙反应
出现溶钙圈，溴甲酚绿为pH 显色剂，酸性显示黄色。科研人员分别将含有四种病原菌的培养基倒入A~D
四个培养皿中，通过一定的方法使每个培养基上形成4 个大小相同的小孔，标号为1~4。1 号孔作为对照，
2~4 号孔中均加入100μL 含有该株乳酸菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，测量抑菌
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圈直径，结果如下图。下列叙述正确的是（ ）
MRS-溴甲酚绿培养基配方
物
质
胰蛋白胨
葡萄糖
牛肉
膏
碳酸钙
酵母粉
溴甲酚绿
番茄
汁
琼脂
含
量
10g/L
10g/L
10g/L
20g/L
10g/L
0.1g/L
200g/L
18g/L
A．分离筛选乳酸菌时，应选择具有溶钙圈的黄色菌落继续培养
B．应向1 号孔中加入100μL 无菌水作为对照
C．传统臭鳜鱼不容易变质与乳酸菌能抑制多种微生物的增殖有关
D．该株乳酸菌代谢产物对四种病原菌都有抑制作用，但对丁香假单胞菌的抑制效果最好
【答案】ABCD
【分析】1、由题干可知，制作臭鳜鱼利用的是乳酸菌，乳酸菌是厌氧菌，在无氧条件下，乳酸菌将葡萄
糖分解成乳酸。
2、培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培
养的物质基础。培养基的基本成分包括：碳源、氮源、水和无机盐。
【详解】A、乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈，在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸，溴甲酚绿为
pH 显色剂，酸性显示黄色，所以应挑选具有溶钙圈的黄色菌落进行纯化培养，A 正确；
B、根据实验设计遵循的等量原则和对照性原则，向1 号孔中加入的液体应该是100μL 无菌水作为对照组，
B 正确；
C、由图可知，该株乳酸菌代谢产物对四种病原菌都有抑制作用，说明传统臭鳜鱼不容易变质与乳酸菌能
抑制多种微生物的增殖有关，C 正确；
D、由图可知，该株乳酸菌代谢产物对四种病原菌都有抑制作用，丁香假单胞菌组的抑制圈最大，说明该
株乳杆菌的代谢产物对丁香假单胞菌的抑制效果最好，D 正确。
故选ABCD。
36．（2024·辽宁·二模）微生物培养过程中所用的无菌技术，主要包括消毒和灭菌。下列有关叙述正确的
是（ ）
A．无菌技术可防止杂菌污染，还可有效避免操作者被感染
B．灭菌较消毒更为彻底，可杀死包括芽孢和孢子在内的所有微生物
C．强烈的理化方法处理某些物品会影响其活性或成分时，通常对这些物品进行消毒
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D．灭菌的常用方法包括湿热灭菌、干热灭菌以及化学药物灭菌
【答案】ABC
【分析】1、消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢
子）。常用方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法。
2、灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）。常用方法有灼烧灭菌、
干热灭菌、湿热灭菌。
【详解】A、无菌技术的核心就是防止杂菌污染，无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染，A 正
确；
B、消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程，灭菌是指使用
强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物，包括芽孢和孢子的过程，灭菌较消毒更为彻底，B 正确；
C、强烈的理化方法处理某些物品会影响其活性或成分时，通常对这些物品进行消毒，C 正确；
D、灭菌的常用方法包括湿热灭菌、干热灭菌以及灼烧灭菌，化学药物为消毒方法，D 错误。
故选ABC。
37．（23-24 高三下·湖南·阶段练习）某研究性学习小组研究了表面活性剂对3 种霉菌生长的影响，通过测
量菌落直径大小表示霉菌生长情况，实验结果如下：
表面活性剂对枝孢霉真菌的最小抑菌浓度（单位：mg/mL）
菌株名称
表面活性剂种类
SDS
SLE1S
SLE3S
CAPB
cetrimonium chloride
耐盐枝孢霉
0.313
1.25
5
＜0.019
0.039
黄色枝孢霉
0.156
1.25
10
0.039
＜0.019
多米尼加枝孢霉
0.313
1.25
2.5
0.039
0.039
下列有关叙述正确的是（ ）
A．实验用的培养皿、培养基可分别采用干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法灭菌
B．实验中配置培养基时需加入蛋白胨、琼脂等，并将pH 调至中性或弱碱性
C．该实验属于对比实验，控制自变量采用的是“加法原理”和“减法原理”
D．含有CAPB、cetrimonium chloride 表面活性剂的产品发生枝孢霉污染的可能性最小
【答案】AD
【分析】各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质
以及氧气的要求。
【详解】A、培养皿、培养基可分别采用干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法灭菌，A 正确；
B、上述实验要测量菌落的直径，需要形成菌落，因此培养基中需要加入凝固剂（琼脂），霉菌一般需要
将培养基调至酸性，细菌则需要调至中性或弱碱性，B 错误；
C、本实验的自变量是表面活性剂的种类及浓度，是相互对照，属于对比实验，控制自变量采用的是“加
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法原理”，C 错误；
D、表中5 种表面活性剂CAPB、cetrimonium chloride 表面活性剂的最小抑菌浓度最小，含有CAPB、
cetrimonium chloride 表面活性剂的产品发生枝孢霉污染的可能性最小，D 正确。
故选AD。
38．（2024·江西·模拟预测）北京传统小吃“豆汁”是一种以酸味为主、掺杂着些许臭味的糊状流体食品，
其主要的制作工艺流程如下图所示，主要产酸微生物为乳酸菌。下列叙述错误的是（ ）
A．乳酸发酵过程中，能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质主要是绿豆乳中的蛋白质
B．酸浆Ⅰ中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多，可能的原因之一是可溶性蛋白变性沉淀
C．欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，可采用的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法
D．评估豆汁安全性可将豆汁接种到液体培养基上培养，观察菌落的特征判断是否有致病菌
【答案】ACD
【分析】 微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过
分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分
离微生物的纯种。
（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培
养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在
培养基表面形成单个的菌落。
【详解】A、乳酸发酵过程中，能为乳酸菌同时提供碳源和能源的物质主要是绿豆乳中的糖类，A 错误；
B、乳酸菌发酵产生的乳酸使pH 值下降，导致可溶性蛋白质变性沉淀；（乳酸菌分泌的）蛋白酶分解了部
分可溶性蛋白质，导致酸浆Ⅰ中的可溶性蛋白含量比混合浆低得多，B 正确；
C、欲测定混合浆中乳酸菌的含量多少，可采用的接种方法是稀释涂布平板法，C 错误；
D、评估制得的豆汁安全性可将豆汁接种到固体培养基上培养，观察菌落的特征判断是否有致病菌，D 错
误。
故选ACD。
39．（2024·河北·模拟预测）牛奶是适合微生物生长的良好培养基。某兴趣小组为检测自制酸奶是否被杂
菌污染，进行了如图所示操作。培养后，3 个培养皿中的菌落数分别为65、63、64。下列相关叙述错误的
是（ ）
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A．巴氏消毒法能够将牛奶中的所有微生物杀死
B．从锥形瓶中取1mL 混合液加入紧邻的第一支试管中，酸奶被稀释了10 倍
C．根据实验结果可以推出每毫升酸奶中所含的细菌数约为6.4×107个
D．如果培养皿中出现不同形状、大小、颜色的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染
【答案】AB
【分析】消毒是指用较为温和的物理和化学方法杀死物体表面合或内部的部分微生物（不包括芽孢与包
子），常用的方法主要有煮沸消毒法，巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法，使用对象主要有操
作空间、某些液体、双手等。
【详解】A、巴氏消毒法只能杀死牛奶中的绝大多数微生物，A 错误；
B、酸奶在锥形瓶中已被稀释了10 倍，从锥形瓶中取1mL 混合液加入紧邻的第一支试管中，酸奶被稀释了
100 倍，B 错误；
C、3 个培养皿中的菌落数分别为65、63、64，则平均菌落数为64，稀释倍数为105，又知接种量为
0.1mL，可计算出每毫升酸奶中所含的细菌数约为6.4×107 个，C 正确；
D、一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如果培养皿中出现不同形状、
大小、颜色的菌落，说明自制酸奶中含有多种杂菌，即自制酸奶已被杂菌污染，D 正确。
故选AB。
40．（2024·河北·模拟预测）为从大豆田土壤中筛选出能高效分解蛋白质的菌株，科研人员进行了如图所
示的实验，待培养基乙中长出菌落后，向其中添加酪蛋白粉末（黄白色），一段时间后，观察透明圈的产
生情况，根据情况筛选出表中四种菌株。下列叙述错误的是（ ）
菌
株
菌落直径D1（cm）
透明圈直径D2（cm）
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C1
1.4
1.6
C2
1.3
1.6
C3
0.6
1.1
C4
0.6
1.0
A．若目标菌是霉菌，则需将培养基甲调至中性或弱碱性
B．③过程将涂布器放在火焰上灼烧后立即进行涂布
C．若进行计数，一般选择菌落数为30~300 的平板
D．四种菌株中，C2 菌株降解蛋白质的能力最强
【答案】ABD
【分析】稀释涂布平板法：①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液
中的一个活菌。②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
【详解】A、若目标菌是霉菌，则需将培养基甲调至酸性，A 错误；
B、③过程将涂布器放在火焰上灼烧，等冷却后再进行涂布，B 错误；
C、一般选择菌落数为30~300 的平板进行计数，C 正确；
D、菌落直径与透明圈直径的比值越小说明降解能力越强，先计算表中每种菌株D1 与D2 的比值，可得C3
菌株的比值最小，所以，对蛋白质分解能力最强的是C3 菌株，D 错误。
故选ABD。
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