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一、选择题
1．(2023·江苏宿迁高三质检)如图表示由不同的限制酶切割而成的DNA 末端及相关的酶作
用位点。下列叙述错误的是( )
A．甲、乙、丙都属于黏性末端
B．甲、乙片段可形成重组DNA 分子，但甲、丙不能
C．DNA 连接酶的作用位点在图乙中b 处
D．切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA 分子
2．T4 DNA 连接酶可将任意2 个具有相同黏性末端的DNA 片段连接在一起。该反应过程需
消耗ATP，其水解产生的腺苷一磷酸(AMP)通过共价键与酶相连，随后AMP 转移至DNA 片
段，进而完成连接反应。下列叙述正确的是( )
A．T4 DNA 连接酶的底物种类较多，故其无专一性
B．T4 DNA 连接酶催化反应后，其组成成分已改变
C．ATP 在该反应过程中可能打开两个特殊的化学键
D．T4 DNA 连接酶需保存于最适温度和pH 条件下
3．(2023·安徽亳州高三检测)基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组
DNA。限制性内切核酸酶BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点分别如图所示。下列分析
错误的是( )
A．构建重组DNA 时，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体
B．构建重组DNA 时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体
C．图乙中的P1噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有两个游离的磷酸基团
D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体，再用DNA 连接酶连接，只能产生
一种重组DNA
4．下列有关获取目的基因的叙述，错误的是( )
A．目的基因就是编码蛋白质的基因
B．筛选和获取目的基因是基因工程的第一步
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C．来自苏云金杆菌的Bt 基因可作为转基因抗虫棉的目的基因
D．序列比对工具的应用为科学家找到合适的目的基因提供了更多的机会
5．(2023·河北石家庄高三模拟)如图是快速RT－PCR 过程示意图，①和②为逆转录酶催化的
逆转录过程，③是PCR 过程。据图分析，下列叙述错误的是( )
A．逆转录酶具有DNA 聚合酶的能力
B．③PCR 过程只需要引物b
C．RT－PCR 可检测基因表达水平
D．RT－PCR 可检测新冠病毒等RNA 病毒
6．(2022·山东，13)关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是( )
A．过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA 降解
B．离心研磨液是为了加速DNA 的沉淀
C．在一定温度下，DNA 遇二苯胺试剂呈现蓝色
D．粗提取的DNA 中可能含有蛋白质
7．(2023·江苏泰州高三调研)引物的设计是影响PCR 扩增反应的效率和特异性的关键因素，
下列相关叙述正确的是( )
A．引物的碱基数量越少则退火温度越低、目标DNA 获得率越高
B．根据需要可在引物的5′端添加限制酶识别序列、点突变序列等
C．两种引物的退火温度差异较大，可减少引物与模板的非特异性结合
D．引物的GC 含量越高，结合特异性越强，越利于目标DNA 的扩增
8．DNA 琼脂糖凝胶电泳是指利用在溶液中带负电荷的DNA 分子在电场中向正极移动的原
理，分离、纯化或分析PCR 扩增后的待检DNA 片段的生物化学技术。下列说法错误的是(
)
A．DNA 片段相对分子质量越大，迁移就越慢
B．凝胶制备中加入的核酸染料能与DNA 分子结合，用于分离后DNA 片段的检测
C．拟回收的DNA 区带融化后可先用DNA 抽取剂抽提，再用70%的冷酒精沉淀抽提DNA
片段，从而提高回收率
D．新冠病毒核酸检测出现假阳性的原因可能是阳性对照中模板核酸与样品交叉污染
9．(2023·江苏扬州高三质检)实时荧光RT－PCR 可用于RNA 病毒的核酸检测，其原理：在
PCR 复性过程中探针和引物一起与模板结合，探针两侧分别带有荧光基团和抑制荧光发出
的淬灭基团，新链延伸过程中，DNA 聚合酶会破坏探针，导致荧光基团与淬灭基团分离而
发出荧光。利用RT－PCR 进行核酸检测的相关过程如图所示。下列说法不正确的是( )
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A．做RT－PCR 之前，需要先根据cDNA 的核苷酸序列合成引物和探针
B．RNA 不能作为PCR 扩增的模板，故需要将样本中的RNA 逆转录为DNA 后再进行扩增
C．若检测结果有强烈荧光信号发出，说明被检测者没有感染病毒
D．病毒的检测还可以检测病毒表面的物质或病毒引发产生的抗体，其原理都是抗原—抗体
杂交
10．(2023·江西南昌高三模拟)下图表示pBR322 质粒和人生长激素基因所在片段的结构信息，
将二者构建的重组质粒导入受体菌并进行筛选。下列叙述错误的是( )
注：AmpR：氨苄青霉素抗性基因；TetR：四环素抗性基因。
A．应选择的限制酶组合是酶F 和酶G
B．所选用的受体菌不能含有AmpR和TetR基因
C．用含氨苄青霉素的培养基筛选出的是含重组质粒的受体菌
D．同时用三种限制酶处理图中质粒，电泳后可得到4 个条带
11．(2023·江苏南京师大附中高三调研)载体是基因工程中携带外源 DNA 片段(目的基因)进
入受体细胞的重要运载工具，常见的载体类型主要有基因克隆载体和基因表达载体。如图是
利用细菌生产人胰岛素的基本流程示意图，下列相关叙述错误的是( )
A．重组载体A、重组载体B 分别是基因克隆载体和基因表达载体
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B．载体A 和载体 B 都必须含有限制酶切割位点、复制原点和标记基因
C．必须把目的基因插入重组载体A 的启动子和终止子之间
D．培养细菌A 和细菌B 的培养基在营养成分和功能上有明显差异
二、非选择题
12．如图pIJ702 是一种常用质粒，其中tsr 为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因；mel 为黑色
素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而三种限制酶SacⅠ、SphⅠ、
BglⅡ在pIJ702 上分别只有一处识别序列。回答下列问题：
项目
pIJ702
pZHZ8
BglⅡ
5.7 kb
6.7 kb
表1
固体培养基中硫链丝菌素浓度(μg/mL)
0
1
2
5
10
不含质粒的链霉菌生长状况
＋＋＋＋＋
＋＋＋
＋
－
－
注：“＋”表示生长；“－”表示不生长。
表2
(1)限制酶可以识别双链DNA 中特定核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间
的________________断裂，切割形成的末端有______________________两种。
(2)以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，与质粒pIJ702 上长度为0.4 kb 的SacⅠ/SphⅠ片段进行
置换，构建重组质粒pZHZ8。上述两种质粒经限制酶BglⅡ酶切后所得片段长度见表1。由
此判断目的基因的片段长度为____________kb，判定目的基因中含有一个BglⅡ切割位点的
理由是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)导入目的基因时，首先用Ca2＋处理链霉菌使其成为感受态(能吸收周围环境中DNA 分子
的生理状态)细胞，再将重组质粒pZHZ8 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下
可以促进链霉菌完成________________过程。
(4)不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素的固体培养基上生长状况如表2 所示。若要筛选导入
pZHZ8 的链霉菌细胞，所需硫链丝菌素浓度至少应在________μg/mL 以上，挑选成功导入
pZHZ8 的链霉菌的具体方法是_____________________________________________________
_______________________________________________________________________________
。若要检测整合到染色体DNA 上的目的基因是否发挥功能作用，第一步需检测受体细胞的
______(填“DNA”或“RNA”)。
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13．(2021·江苏，23)某小组为研究真菌基因m 的功能，构建了融合表达蛋白M 和tag 标签
的质粒，请结合实验流程回答下列问题：
(1)目的基因的扩增
①提取真菌细胞__________________，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m 片段。
②为了获得融合tag 标签的蛋白M，设计引物P2 时，不能包含基因m 终止密码子的编码序
列，否则将导致__________________。
③热启动PCR 可提高扩增效率，方法之一是：先将除Taq DNA 聚合酶以外的各成分混合后，
加热到80 ℃以上再混入酶，然后直接从94 ℃开始PCR 扩增。下列叙述正确的有________。
A．TaqDNA 聚合酶最适催化温度范围为50～60 ℃
B．与常规PCR 相比，热启动PCR 可减少反应起始时引物错配形成的产物
C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D．PCR 产物DNA 碱基序列的特异性体现了TaqDNA 聚合酶的特异性
(2)重组质粒的构建
①将SmaⅠ切开的载体A 与添加同源序列的m 混合，用特定DNA 酶处理形成黏性末端，然
后降温以促进____________________，形成A－m 结合体。将A－m 结合体导入大肠杆菌，
利用大肠杆菌中的DNA 聚合酶及________酶等，完成质粒的环化。
②若正确构建的重组质粒A－m 仍能被SmaⅠ切开，则SmaⅠ的酶切位点可能在_________
_______________________________________________________________________________
。
(3)融合蛋白的表达
①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3 基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A－m，
然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得目的菌株，其机理是________________________
_______________________________________________________________________________
。
②若通过抗原－抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag 标签，说明______________________，
后续实验可借助tag 标签进行蛋白M 的分离纯化。
14．如图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素的实验流程。所用的pBR322 质粒含有限
制酶PstⅠ、EcoRⅠ和Hind Ⅲ的切点各一个，且三种酶切割形成的末端各不相同，而
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AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，TetR表示四环素抗性基因。请回答以下相关问题：
(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有________的因子。过程①所用
到的组织细胞是_____________________________________________________，③过程的目
的是
________________________，⑤过程常用_______________________________处理大肠杆菌。
(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对图中质粒进行切割，形成的DNA 片段种类有
________种，这些种类的DNA 片段中含有完整氨苄青霉素抗性基因的DNA 片段和四环素
抗性基因的DNA 片段分别有______种和______种。
(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和质粒，完成过程④、⑤后(受体大肠杆菌不含
AmpR、TetR)，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲
培养基上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生
长状况如图乙、丙所示。接种到甲培养基上的目的是筛选______________________的大肠杆
菌；接种到乙培养基上的大肠杆菌菌落，能存活的大肠杆菌体内导入的是
_______________________。含有目的基因的大肠杆菌在培养基乙和丙上的生存情况是
_____________________________
_______________________________________________________________________________
。
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