文档内容
3.1 重组 DNA 技术的基本工具
知识梳理
教学目标
课程标准 目标解读
基因工程是一种重组DNA技术。 1. 阐明重组 DNA 技术所需的三种基本工具的作
1. 概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学 用。
和分子生物学等学科基础上发展而来的。 2. 认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技
2. 阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性核酸 术创新。
内切酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。 3. 进行DNA的粗提取和鉴定。
教学重点
1.重组DNA技术所需的三种基本工具的作用。
2.DNA粗提取和鉴定。
教学难点
1. 基因工程载体需要具备的条件。
2. DNA的粗提取和鉴定。
一、基因工程
是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类
型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作
重组DNA技术、基因拼接技术。
操作对象：基因
操作水平：DNA分子水平
操作原理：基因重组
操作环境：体外
基本过程：剪切→拼接→导入→表达
操作结果：定向地改造生物的遗传性状，获得符合人们需要的新的生物类型和生物产品
优点：定向改造生物体的性状，目的性强（与诱变育种相比）
育种周期短，克服远缘杂交不亲和障碍（与杂交育种相比）二、基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要从原核生物中分离出来。
（2）种类：约4000种
（3）作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷
酸二酯键断开。
（4）限制酶识别序列的长度最常见的为6个核苷酸，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个、或其他数
量的核苷酸组成。
①在中轴线两侧切割，形成黏性末端。如：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，为6个核苷酸，并在G和
A之间切开。
②在中轴线处切割，形成平末端。如：Sma I限制酶能识别CCCGGG序列，为6个核苷酸，并在G和C之
间切开。2.“分子缝合针”—— DNA连接酶
(1)作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。即把脱氧
核糖和磷酸交替连接而构成的DNA骨架上的缺口连接起来。
(2)类型：
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
（1）载体作用：将目的基因载入受体细胞。利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
（2）载体种类：质粒、噬菌体、动植物病毒等
（3）最常用载体：质粒
特点：
①裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA外，具有自我复制能力的环状双链
DNA。
②有一个至多个限制酶切割位点。
③在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。④有特殊的标记基因，如：抗生素的抗性基因（四环素抗性基因(tetr)、氨苄青霉素抗性基因(ampr)等）、
荧光蛋白基因（绿色荧光蛋白基因(GFP)、红色荧光蛋白基因(RFP)。
⑤对细胞无毒无害。
⑥大小适中，便于提取和操作。
三、DNA的粗提取与鉴定
（一)提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
DNA粗提取的基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取
DNA，去除其他成分。
（二)提取DNA的基本原理
1.DNA在NaCl中的的溶解性：
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，
DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为
2mol/L时，DNA的溶解度最大；浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA
在盐溶液中溶解或析出。
2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
（1）对酶的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
（2）对温度的耐受性：大多数蛋白质不能忍受60～80 ℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
（3）对洗涤剂的耐受性：洗涤剂能够瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响。
3.DNA在酒精溶液中的溶解性
DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。
（三）DNA的鉴定沸水浴条件下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色
课后培优练级
练
培优第一阶——基础过关练
一、单选题
1. 下列有关基因工程的说法不正确的是（）
A. 基因工程得以实现的原因之一是不同的生物DNA的结构相同
B. 限制酶和DNA连接酶作用的化学键相同
C. EcoliDNA连接酶可以连接黏性末端和平末端
D. 质粒存在于原核细胞和某些真核细胞中
2. 我国科学家将含有人凝血因子基因的DNA片段注射到羊的受精卵中，由该受精卵发育而成的羊，
分泌的乳汁中含有人的凝血因子，可治疗血友病。下列叙述错误的是( )
A. 该羊分泌的乳汁中含有人的凝血因子基因
B. 该羊的后代也可能含有人的凝血因子基因
C. 这项研究说明人和羊共用一套遗传密码
D. 这项技术的工具包括限制酶、DNA连接酶和运载体
3. 下列提到的物质不是基因工程常用的工具的是（）
①限制性核酸内切酶 ②DNA聚合酶 ③DNA连接酶 ④运载体 ⑤解旋酶．
A. ②④⑤ B. ①③④ C. ①②③ D. ②⑤
4. 下列有关基因工程基本工具的叙述,错误的是 ( )
A. DNA连接酶与限制酶作用的化学键相同
B. 限制酶可以对烟草花叶病毒的核酸进行切割
C. 载体质粒的复制和表达也遵循中心法则D. E·coli DNA连接酶来自大肠杆菌,只能连接黏性末端
5. 某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a，通过基因工程的方法，将基因a与载体
结合后导人马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。结合图形分析下列有关这一过程
的叙述，正确的是（）
A. 获取基因a的限制酶的作用部位是图中的①
B. 基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶、质粒
C. 连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的②
D. 一种限制酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子
6. 下表关于基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是（）
基因供体 基因剪刀 基因针线 运载体 受体细胞
A 提供目的基因的生物 限制酶 DNA连接酶质粒 大肠杆菌等
B 提供目的基因的生物 DNA连接酶 限制酶 质粒 大肠杆菌等
C 质粒 限制酶 DNA连接酶提供目的基因的生物 大肠杆菌等
D 大肠杆菌等 DNA连接酶 限制酶 提供目的基因的生物 质粒
A. A B. B C. C D. D
7. 下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是( )
①催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接 ②催化不同黏性末端的DNA片段之间的连接 ③催化
两个黏性末端互补碱基间氢键的形成 ④催化两个核苷酸之间的磷酸二酯键的形成
A. ①③ B. ②④ C. ②③ D. ①④
8. 大肠杆菌经溶菌酶和阴离子去垢剂（SDS）处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一
段时间，质粒分布在上清液中。利用上述原理可初步获得质粒DNA。下列关于质粒的粗提取和鉴定的
分析错误的是（ ）A. DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精，可以用冷酒精析出上清液中的DNA
B. DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液，可用二苯胺试剂在沸水加热条件下鉴定DNA
C. 用限制酶I和Ⅱ处理提取的产物，电泳出现图结果，说明未提取到质粒
D. 用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒，被染色的质粒还需要通过紫外灯照射才能看到结果
9. 如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、DNA聚合酶、
DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（ ）
A. ①②③④ B. ①②④③ C. ①④②③ D. ①④③②
二、填空题
10. 实验中对DNA进行鉴定时，做如下操作，请根据表格回答问题。
试管 A B
1 加2mol/L的NaCl溶液5mL 加2mol/L的NaCl溶液5mL
2 不加 加入提取的DNA丝状物并搅拌
3 加4mL二苯胺，混匀 加4mL二苯胺，混匀
4 沸水浴5min 沸水浴5min
实验现象 ① ②
实验结论 ③
（1）根据上图，完成表格空白处的实验内容。
①______________________________________________________________________________；
②______________________________________________________________________________；
③______________________________________________________________________________。（2）对于B试管，完成1、2、3的操作后溶液颜色如何？______________________________。
（3）在沸水浴中加热的目的是_____________________________________________________，同
时说明DNA对高温有较强的____________。
（4）A试管在实验中的作用是____________。
（5）B试管中溶液颜色的变化程度主要与______________________________________有关。
11. 人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，
图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如
表所示，请回答以下问题：
限制酶 BamHⅠ HaeⅢ BclⅠ Sau 3A Ⅰ NotⅠ
识别序
列
及切割
位点
（1）①过程常采用的方法是_______。
（2）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_____。
（3）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含_______（填“四环素”或“氨苄青霉
素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行。
（4）若BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为
____________，对于该部位，这两种酶________（“都不能”或“只有一种能”）切开。
培优第二阶——拓展培优练
一、单选题
1. 关于基因工程下列说法正确的有（）
①限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工 ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 ④只要目的基因进入受体细胞就能成
功实现表达 ⑤所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 ⑥基因工程可以将一种生物的优
良性状移植到另一种生物身上 ⑦质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体
A. 2项 B. 3项 C. 4项 D. 5项
2. 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图 1、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切位
点。下列说法正确的是（）
A. 重组 DNA 技术所用的工具酶是限制酶、DNA 连接酶和运载体
B. 只有用同种限制酶切割 DNA 产生的粘性末端才能互补
C. 用图中质粒和外源基因 DNA 构建重组质粒，可使用 SmaⅠ切割
D. 使用 EcoRⅠ同时处理质粒和外源 DNA，可能会发生质粒或者目的基因的自身环化
3. 番茄红素（C H ）是一种重要的类胡萝卜素，具有较强的抗氧化活性，能防止动脉粥样硬化和
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冠心病等，目前利用基因工程生产的大肠杆菌能大量生产番茄红素。据此有关的下列叙述，正确的是
（ ）
A. 该大肠杆菌细胞内含4种碱基、4种核苷酸
B. 番茄红素在核糖体上合成，经加工分泌到细胞外
C. 该大肠杆菌可遗传变异来源有基因突变和基因重组
D. 基因工程常用的工具酶有限制酶、DNA连接酶和运载体
4. 下列关于载体的叙述中，错误的是（）
A. 载体与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子
B. 对某种限制酶而言，载体最好只有一个切点，但还要有其他多种酶的切点C. 目前常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒
D. 载体具有某些标记基因，便于对其进行切割
5. 某种线性DNA含有限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ的1个酶切位点。该DNA样品(甲)经EcoR Ⅰ酶切后，
在DNA连接酶催化下形成产物乙。则反应液中产物乙共有()
A. 1种 B. 2种 C. 3种 D. 4种
6. 据图分析，下列有关基因工程的说法不正确的是（ ）
A. 为防止目的基因与质粒任意结合而影响基因的表达，应用限制酶Ⅰ、Ⅱ同时切割二者
B. 限制酶、DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键
C. 与启动子结合的是RNA聚合酶
D. 能够检测到标记基因表达产物的受体细胞中，也一定会有目的基因的表达产物
7. 下列有关如图所示的黏性末端的说法，错误的是（ ）
A. 甲、乙、丙黏性末端分别是由不同的限制酶切割产生的
B. 甲、乙具有相同的黏性末端，可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能
C. DNA连接酶的作用位点是b处
D. 切割产生甲的限制酶不能识别由甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段8. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序
列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图判断下列操作正确的是
( )
A. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
B. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
C. 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D. 质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
9. 某科研小组利用质粒(图甲)和目的基因(图乙)构建重组DNA。下列分析错误的是 ( )
A. 用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割质粒,可得到2条DNA片段
B. 不能用AluⅠ酶切割质粒和外源DNA的原因是AluⅠ酶会破坏目的基因
C. 构建重组DNA时,需选择SmaⅠ酶和PstⅠ酶同时切割质粒和外源DNA
D. 导入了重组DNA的细菌能在含四环素的培养基上生长而不能在含氯霉素的培养基上生长
二、探究题（本大题共1小题，共15.0分）
10. 下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的
过程及有关资料，请分析回答下列问题。资料1 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受
到诱导而表达[5'AOX1和3'AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子]．
资料2 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，
其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，可以将目的基因整合于染
色体中以实现表达。
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上 ______ 、
______ 限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。
（2）酶切获取HBsAg基因后，需用 ______ 将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导
入大肠杆菌以获取 ______ ．
（3）步骤3中应选用限制酶 ______ 来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母
菌细胞。
（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的
细胞中是否含有HBsAg基因，可以用 ______ 方法进行检测。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入 ______ 以维持其生活，同时诱导
HBsAg基因表达。
（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白
质合成后，细胞可以对其进行 ______ 并分泌到细胞外，便于提取．培优第三阶——高考沙场点兵
一、单选题
1. 基因工程利用某目的基因（图甲）和Pl噬菌体载体（图乙）构建重组DNA．限制性核酸内切酶
的酶切位点分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ．下列分析错误的是（ ）
A. 构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
B. 构建重组DNA时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和Pl噬菌体载体
C. 图乙中的Pl噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团
D. 用EcoRⅠ切割目的基因和Pl噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA
2. 如图所示是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet
为四环素抗性基因，箭头表示一种限制性核酸内切酶的酶切位点．若要得到一个能在四环素培养基上
生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是（ ）
A. B. C. D.
3. 质粒是细菌中的有机分子，下列对其描述，正确的是（ ）
A. 质粒完全水解后最多可产生4种化合物 B. 质粒能够自主复制
C. 质粒中含有两个游离的磷酸基团 D. 质粒是基因工程的工具酶
4. 已知限制性内切酶XmaⅠ和SmaⅠ的识别序列分别为C↓CCGGG和CCC↓GGG．有关这两种酶及应
用的叙述，错误的是（ ）
A. 这两种酶作用的底物都是双链DNAB. DNA中出现这两种酶识别序列的几率不同
C. XmaⅠ切割DNA形成的黏性末端是-GGCC
D. 使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等
5. 如图中显示含目的基因的DNA片段、限制性核酸内切酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所
指部位为限制性核酸内切酶的切割位点）、四种质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示目的基
因载体的质粒是（ ）
A. ①④ B. ②③ C. ① D. ③
6. 为了获得抗蚜虫棉花新品种，研究人员将雪花莲凝集素基因（GNA）和尾穗苋凝集素基因
（ACA）与载体（pBI121）结合，然后导入棉花细胞。下列叙述错误的是（ ）
A. 用限制酶BsaBⅠ和DNA连接酶处理两种基因可获得GNA-ACA融合基因
B. 与只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ处理融合基因和载体可保证基因转录方向正确
C. 在含卡那霉素的培养基上能存活的植物细胞即为成功转入目的基因的细胞
D. 用PCR技术可检测GNA和ACA基因是否导入棉花细胞中
7. 某线性DNA分子含有5000个碱基对（bp），先用酶a切割，把得到的产物用酶b切割，得到的DNA片段大小如表。酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法不正确的是（ ）
a酶切割产物 （bp） b酶切割产物 （bp）
2100；1400；1000；500 1900；200；800；600；1000；300；200
A. 在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列分别有3个和3个
B. a酶与b酶切出的黏性末端能相互连接
C. a酶与b酶切断的化学键都是磷酸二酯键
D. 用a酶切割与线性DNA相同碱基序列的质粒，得到4种切割产物
8. 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ和二者的混合物分别降解一个1 000bp（1bp即1个碱基对）的DNA分子，
降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，凝胶电泳结果如下图所示。该 DNA
分子的酶切图谱（单位：bp）正确的是（ ）
A. B.
C. D.
9. 下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，错误的是（ ）
相关操作 选取的试剂
A 破碎鸡血细胞 蒸馏水
B 溶解核内DNA 2mol/LNaCl溶液
C 提取杂质较少的DNA 冷却的95%的酒精
D DNA的鉴定 双缩脲试剂
A. A B. B C. C D. D
10. 下列有关“DNA的粗提取与鉴定”的实验叙述，错误的是（ ）
A. 选择鸡血进行该实验是由于材料易得，核内DNA含量丰富且细胞易吸水破裂
B. DNA的释放和溶解是实验成功与否的关键，调节NaCl溶液浓度利于DNA释放C. 加入木瓜蛋白酶可分解杂质蛋白，使DNA与蛋白质分开，从而提取到较纯化的DNA
D. 用二苯胺试剂鉴定提取的DNA时，沸水浴加热冷却后会出现蓝色
二、填空题
11. 酿酒酵母不能利用木糖制约了利用植物原料生产乙醇的经济效益。木酮糖激酶是木糖转化、利
用的关键酶，为提高酵母细胞中木酮糖激酶的表达量，科研人员将两种启动子与木酮糖激酶基因结合
并导入酿酒酵母细胞，构建能同时利用葡萄糖和木糖的重组酿酒酵母。如图表示相关研究过程，如表
是几种限制性内切酶的识别序列及切割位点。请回答：
限制酶 识别序列和
切割位点
EcoRⅠ G↓AATTC
BamHⅠ G↓GATCC
HindⅢ A↓AGCTT
XhoⅠ C↓TCGAG
NdeⅠ CA↓TATG
SalⅠ G↓TCGAC
（1）重组质粒中终止子的作用是______。表中切割DNA后形成相同黏性末端的限制性内切酶是
______，黏性末端为______。（2）过程③使用的限制性内切酶是______。过程⑤需先用LiAc处理酿酒酵母细胞，其目的是______，
使细胞处于能吸收环境中DNA的状态。
（3）结合图示分析，进行工程菌筛选时，在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒
的酿酒酵母，这是因为______。
（4）研究人员对筛选得到的两种重组酵母（甲中导入启动子A，乙中导入启动子B）细胞中木酮糖激
酶活力及发酵乙醇得率进行比较（发酵条件：1L15g•L-1的葡萄糖和50g•L-1的木糖培养基中，120h）结
果如表。
木酮糖激酶酶活力 葡萄糖消耗量 木糖消耗量 乙醇得率
重组酿酒酵母
U•mg-1 g•L-1 g•L-1 g/g
重组酿酒酵母甲 0.24 14.59 48.61 0.34
重组酿酒酵母乙 0.56 14.98 49.39 0.39
从木酮糖激酶酶活力分析，可以得出的结论是启动子A的功能比启动子B______，但本实验中乙醇得
率相差不大，其可能的原因是______。
12. 结核病是由结核分枝杆菌（简称结核菌）引起的致死性疾病，接种卡介苗是预防结核病的有效
手段。近年来，耐药结核病不断出现。我国科研工作者研制出了一种重组耐药卡介苗（ RdrBCG），
即在原有卡介苗的基础上引入Ag85B和Rv2628处两个新的基因，用于辅助治疗耐药结核病。
（1）在重组质粒建构过程中，使用到了限制酶Pstn结合图示所给酶切位点（灰色底色）等信息，设
计重组质粒的制备过程：先将 ______与质粒混合，加入限制酶 ______，再加入DNA连接酶形成重
组质粒Ⅰ，再将重组质粒Ⅰ与 ______混合，加入限制酶 ______，再加入DNA连接酶形成重组质粒。
（2）将野生结核菌接种在含有多种治疗结核病药物的培养基中，最终筛选出了一种耐药菌株作为实
验材料。下列对于该耐药菌获得的过程说明正确的是 ______。（多选）
A.培养基中的药物使结核菌产生耐药性变异
B.培养过程中结核菌的变异结果多样
C.耐药结核菌在培养基环境的选择作用下存活D.培养基中的药物加剧了结核菌的突变速率
（3）对免疫缺陷小鼠接种RdrBCG，下列实验结果能说明RdrBCG安全性的是 ______。
A.肺部检测到Ag85B、Rv2628稳定表达
B.肺部提取物经培养可见结核菌菌落
C.小鼠未患结核病且存活
D.脾部提取物经培养可见结核菌菌落
（4）为检测RdrBCG是否具有辅助治疗耐药结核病的效果，用耐药结核菌感染的小鼠作为实验对象，
应选择下列 ______。（填写编号）
①接种RdrBCG的小鼠
②接种普通卡介苗的小鼠
③药物治疗+接种RdrBCG
④药物治疗+接种普通卡介苗
⑤不作处理的被感染小鼠
⑥药物治疗被感染的小鼠
