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【春】高二生物985班
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第5讲
基因工程（二）
(一) 从基因文库中分离目的基因
总结
获取目的基因的常见方法：
从基因文库（基因组文库/cDNA文库）中分离目的基因
PCR/反转录PCR
化学合成法
二、基因表达载体的构建（核心）
（一）基因表达载体的组成
①作为基因工程的工具，载体至少要具备：限制酶切位点、复制原点。
②作为基因表达载体，载体还需具有：启动子和终止子。
♦考虑不同受体对象，基因表达载体的组成有差别。
例如，原核细胞中的RNA聚合酶无法识别真核基因的启动子序列。
♦根据不同目的，可选择强启动子或组织特异性启动子，以增强基因产物量或使基因只在特定组织中表达。
例如，乳腺生物反应器。
③载体应具有标记基因，以便进行筛选和鉴别。
④载体应对受体细胞无害，不影响受体细胞的正常生命活动。
⑥大小适合，便于操作。
二、基因表达载体的构建（核心）
（二）构建过程
①目的基因与运载体结合时，可能出现情况：
目的基因与目的基因连接；运载体与运载体连接；
目的基因与运载体连接（所需要的重组DNA）。
如：在基因工程中，往往采取双酶切的方法，目的是保证目的
基因与运载体能够定向连接，防止目的基因与运载体发生任意
连接或自连。
②考虑不同受体对象，基因表达载体的构建过程有差别。
例如，若使真核基因在原核生物内表达，最好使用cDNA。
二、基因表达载体的构建（核心）
1. 基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点等
2. 构建过程
①不同类型的基因表达载体构建有差别。如，启动子的选择、目的基因的选择
②双酶切防止倒连、自连
总结
总结
三、将目的基因导入受体细胞
总结
转基因蓝玫瑰
三色堇花中的蓝色色素基因
基因的“转出”
野生牵牛花
常见的转基因植物
抗虫转基因棉花
抗虫或抗除草剂的转基因玉米
抗病毒的转基因木瓜
抗除草剂转基因大豆
抗除草剂转基因油菜
总结
