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【高二生物】寒假第三讲总结：多聚酶链式反应 【知识框架】 【重难点知识回顾】 一、PCR 1、概念：PCR 是多聚酶链式反应的简称，是一种体外迅速扩增DNA 片段的技术， 它能以极少量的DNA 为模板，在几小时内复制出百万份的DNA 拷贝。 2、原理：利用DNA 的热变形原理，在80~100℃的温度范围内，DNA 的双螺旋结 构将解体，双链分开；当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA 链又会重新结合 成双链。 3、反应条件 参与的组成 在DNA 的复制中的作用 目的DNA 片段 提供DNA 复制的模板 耐热的DNA 聚合酶 催化合成DNA 子链（形成磷酸二酯键） 4 钟脱氧核苷酸 合成子链的原料 引物 使DNA 聚合酶能够从引物的3 端开始 连接脱氧核苷酸 稳定的缓冲溶液 提供类似细胞内DNA 复制的液体环境 PCR 仪 控制温度 4、PCR 的反应过程与结果 ① 过程：PCR 一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三 步。 a．变性： 当温度上升到90℃以上时，双链DNA 解聚为单链。 b．复性 温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA 结合。 c．延伸 温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA 聚合酶的作用下，根 据碱基互补配对原则合成新的DNA 链。 ② 结果：一个DNA 复制成两个DNA，实现倍增 5、细胞内DNA 复制和细胞外PCR 扩增的比较 DNA 复制 PCR 扩增 不 同 点 场所 活细胞内 细胞外 能量 ATP 提供能量 不需ATP 提供能量 酶 解旋酶、连接酶、DNA 聚 合酶等 耐热DNA 聚合酶（TaqDNA 聚 合酶） 是否有 RNA 转 录 伴有RNA 转录，产生引 物 无RNA 转录需加入两种引物 是否需 缓冲液 不需缓冲液 严格配制10 倍浓缩扩增缓 冲液 设备 无 严格控制温度变化的温控 设备 相 同 点 原料 四种脱氧核苷酸（ATGC） 复制原 理 严格遵循碱基互补配对原则，半保留复制 模板 DNA 为模板 引物 都需要与两条模板链相结合的两种引物
