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【高二生物】寒假第一讲总结：微生物培养与应用（一）
【知识框架】
【重难点知识回顾】
一、培养基
1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养
基质。
2、培养基中的营养物质：不同培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳
源、氮源、无机盐、生长因子等。
碳源：为微生物提供碳元素，可分为有机碳源和无机碳源。如 CO2 、NaHCO3
等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳
源。
氮源：为微生物提供氮元素，可分为有机氮源和无机氮源。有机氮源包括
牛肉膏，蛋白胨等，无机氮源包括N2、NH3、NH4
+、NO3
-等。只有固氮微生物才能
利用N2。
生长因子：指那些微生物生长所必需而且需求量很小，但微生物自身不能
合成或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。一般是酶、核酸等的组
成成分，如某些维生素、氨基酸、碱基等。生长因子也可不单独添加，由培养
基中的天然成分牛肉膏、蛋白胨等提供。
3、培养基的种类
划分标准
培养基的种类
特点
用途及实例
物理性质
液体培养基
不加凝固剂
工业生产
半固体培养基
加凝固剂，如琼脂
观察微生物的运
动；分类鉴定
固体培养基
微生物分离；鉴
定；活菌计数；保
藏菌种
化学成分
天然培养基
含化学成分不明
确的天然物质
工业生产
合成培养基
培养基成分明确
（用化学成分已
知的化学物质配
成）
分类、鉴定
用途
选择培养基
培养基中加入某
种化学物质，以抑
制不需要的微生
物的生长，促进所
需要的微生物的
生长
培养、分离出特定
微生物（如培养酵
母菌或霉菌，可在
培养基中加入青
霉素；培养金黄色
葡萄球菌，可在培
养基中加入高浓
度食盐）
鉴别培养基
根据微生物的代
谢特点，在培养基
中加入某种指示
剂或化学药品
鉴别不同种类的
微生物，如可用伊
红美蓝培养基鉴
别饮用水或乳制
品中是否有大肠
杆菌（若有，菌落
呈深紫色，并带有
金属光泽）
二、无菌技术
1、概念：无菌技术是指通过一定的物理、化学手段，防止实验室培养物被外来
微生物污染，保持微生物的纯培养的技术，包括在微生物的分离、转移、保存等
过程中防止被其他微生物污染的手段等。
无菌操作的目的：①保证培养物质不被环境中的微生物所污染；
②防止被检微生物污染环境和感染操作人员
2、方法：消毒和灭菌
项目
概念
常用方法
应用的范围
消毒
使用较为温和的
物理或化学方法
仅杀死物体表面
或内部的部分微
生物（不包括芽孢
和孢子）
煮沸消毒法：在
100℃煮沸5~6min
一般物品
巴氏消毒法：
70~75℃煮30min
或在80℃煮15min
一些不耐高温的
液体，如牛奶
化学药剂消毒法
操作者双手、水源
等
紫外线消毒法：
30w 紫外灯照射
30min
接种室等
灼烧灭菌：用酒精
灭菌
使用强烈的理化
因素杀死物体内
外所有的微生物
（包括芽孢和孢
子）
灯火焰的充分燃
烧层灼烧
接种工具
干热灭菌：干热灭
菌箱内160~170℃
加热1~2h
玻璃器皿和金属
工具等
高压蒸汽灭菌：
100kpa、121℃条
件下，灭菌
15~30min
培养基及容器等
三、微生物的实验操作
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤
计算、称量、溶化、调ph、灭菌、倒平板。
2、接种
微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。接种操
作的关键：严格的无菌操作
（1）、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚
集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离看到由一个细
胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌
液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚
集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
3、培养
培养：将接种后的培养基和一个未接种的或接种等量无菌水的培养基(作对照)都
放入37℃恒温箱中，倒置培养12h 和24h，分别观察并记录结果。
