Fiji软件的应用—免疫组化二 免疫组化定量分析-Color Deconvolution法

Fiji软件的应用—免疫组化二

免疫组化定量分析-Color Deconvolution法

前期准备

在开始分析前，请备好以下材料，这是得到可靠实验数据的基础：

1. 待分析的免疫组化图片

2. 软件：免费开源的Fiji软件，可直接前往官网下载：https://imagej.net/software/fiji/downloads。

详细操作步骤

1.导入图像：将图像文件直接拖入Fiji窗口或点击菜单栏File → Open → 选择图片

2.拆分通道：Image→ color→Colour Deconvolution

选择H DAB，可拆分为3个图层，其中棕色图片为显色信号图，其他通道的图片不用关注；

保留并分析DAB棕色显色信号图层，将棕褐色信号转为光密度值（OD）：Analyze→ Calibrate→ Uncalibrated OD；

得到灰度值与OD值的转换函数曲线图后，直接叉掉图片即可。

3.设置阳性区域阈值

菜单栏点击：Image → Adjust → Threshold

拖动滑块调整阈值，使阳性区域红色覆盖准确，点击Apply。

4.测量：点击Aanalyze→Measure

测量结果如下：

Area-面积：阈值区域覆盖的面积

Mean-均值：阈值区域平均OD值

Min-最小值：阈值区域最小OD值

Max-最大值：阈值区域最大OD值

IntDen: 阈值区域总OD值

RawIntDen:阈值区域总灰度值

5.菜单栏点保存数据

File → Save As，选择 Excel 格式保存结果表格用于后续统计分析与作图。

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