2026病理技术中级习题8| HPV原位杂交 BCIP/NBT显色💡原题再现单项选择题用生物素标记HPV‑DNA探针检测石蜡切片内HPV‑DNA时，加入碱性磷酸酶标记的抗生物素蛋白后室温孵育30分钟，用BCIP/NBT显色，最后用核固红染色，阳性结果将表现为（）。A．阳性部位在细胞核，呈红色，阴性细胞核呈紫蓝色B．阳性部位在细胞质，呈紫蓝色，阴性细胞质呈红色C．阳性部位在细胞质，呈红色，阴性细胞质呈紫蓝色D．阳性部位在细胞核，呈紫蓝色，阴性细胞核呈红色 ✅正确答案E．阳性部位在细胞质，呈绿色，阴性细胞核呈红色详细题目解析实验流程梳理生物素标记HPV‑DNA探针 → 碱性磷酸酶（AP）标记抗生物素蛋白结合 → BCIP/NBT底物显色 → 核固红复染。检测靶点：HPV‑DNA属于病毒核酸，定位于细胞核，因此阳性着色位置为细胞核，可直接排除B、C、E细胞质选项。BCIP/NBT为碱性磷酸酶专属显色底物，酶促反应后，阳性核酸位点析出紫蓝色沉淀，为阳性信号颜色。核固红是细胞核复染液，对未结合病毒探针的阴性细胞核染色，阴性细胞核最终呈现红色。结果精简结论阳性细胞核：紫蓝色（BCIP/NBT显色）阴性细胞核：红色（核固红复染）专项考点汇总【背诵重点】考点一：两大显色系统颜色对比（每年必考）1. 辣根过氧化物酶（HRP）系统｜DAB显色底物：DAB阳性颜色：棕褐色常用复染液：苏木素，阴性细胞核染成蓝色应用：常规免疫组化染色2. 碱性磷酸酶（AP）系统｜BCIP/NBT显色（本题核心）底物：BCIP/NBT阳性颜色：紫蓝色（蓝紫色）配套复染液：核固红，阴性细胞核染为红色主要应用：HPV、EB病毒等DNA原位杂交检测，考题高频固定搭配。考点二：原位杂交2个出题陷阱（重点避坑）1. 位置陷阱HPV‑DNA储存于细胞核内，阳性着色只会出现在细胞核。但凡选项阳性部位标注细胞质，可直接排除。2. 颜色颠倒陷阱红色是核固红复染的阴性背景色，不属于阳性颜色。做题极易混淆，切记：BCIP/NBT阳性为紫蓝色。考点三：速记口诀BCIP显紫蓝，阳性核内见；核固红染背景，阴性核变红。拓展小考点（顺带记忆）1. 原位杂交检测RNA，多在细胞质显色；检测DNA（HPV），均在细胞核显色。2. BCIP/NBT显色后，不能用苏木素复染，苏木素会掩盖紫蓝色阳性信号，因此常规搭配核固红。
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