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专题14 基因工程
一、单选题
1．（2024·北京西城·一模）图为构建苘麻抗除草剂基因A 重组质粒的技术流程，其中NptⅡ是卡那霉素抗
性基因，GUS 基因仅在真核细胞中表达，表达产物可催化底物呈蓝色。下列说法错误的是（ ）
A．PCR 扩增A 时可在引物中加入PstI 和XhoI 的酶切位点
B．在培养基中添加卡那霉素初步筛选导入重组质粒的农杆菌
C．用农杆菌转化植物愈伤组织选择呈现蓝色的组织进行培养
D．启动子若为除草剂诱导启动子将减少细胞物质和能量浪费
2．（2024·北京海淀·一模）双向启动子可同时结合两个 RNA 聚合酶来驱动下游基因的表达， 研究人员
构建了下图所示的表达载体， 以检测双向启动子作用效果。下列分析不正确的是（ ）
A．可用农杆菌转化法将构建好的表达载体导入植物细胞
B．为连入GUS 基因， 需用SalI 和SphI 酶切已整合了双向启动子及LUC 基因的质粒
C．在培养基中添加壮观霉素可筛选出成功导入表达载体的微生物受体细胞
D．可通过观察是否出现荧光和蓝色物质确认双向启动子的作用
3．（2024·山东泰安·二模）稻米胚乳直链淀粉含量高会导致食用品质差。研究发现，水稻蜡质基因
（Wx）编码直链淀粉合成酶。若Wx 基因中第226 位碱基是正常的G，该位点所在内含子能被正常剪接，
胚乳中直链淀粉含量最高，基因型记做GG；若该位点突变成T，则不能被正常剪接，胚乳中直链淀粉合
1
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成水平会降低，基因型记做TT。为检测Wx 基因该位点碱基是G 或T，研究人员以待测水稻叶片总DNA
为材料，以Wx 基因片段设计引物如图所示，对PCR 扩增产物经AccⅠ酶切后电泳。已知引物1 为5'-
GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3'，两引物之间无另外的AccⅠ酶的识别位点。下列说法正确的是（ ）
A．该实验中需设计的引物2 为5'-TTCAACTCTCGTTAAATCAT-3'
B．若酶切产物只能观察到450bp 的DNA 条带，则表明该水稻品种为TT 型
C．GT 杂合型水稻品种酶切电泳结果为3 条条带
D．组成上述两种淀粉合成酶的氨基酸种类不同，数目相同
4．（2024·广东湛江·二模）研究发现，若将第52 位的脯氨酸（密码子为 CCA）替换成苏氨酸（密码子为
ACA），则可增强抗菌肽的抑菌性。抗菌肽基因的部分碱基序列及可供选择的引物如图1 所示，箭头下方
的数字代表碱基序号。现利用重叠延伸 PCR 技术对抗菌肽基因进行改造以获得抑菌性更强的抗菌肽，过
程如图2 所示，其中Ⅰ为转录模板链，引物上的“·”代表突变位点。改造过程中 PCR2 所使用的引物组合
为（ ）
A．引物1 和引物4
B．引物2 和引物6
C．引物2 和引物4
D．引物3 和引物5
5．（2024·重庆·模拟预测）CRISPR/Cas9 基因编辑技术根据靶基因序列设计向导sgRNA，精确引导核酸酶
Cas9 切割与sgRNA 配对的DNA，相关酶在修复断裂DNA 的过程中会改变连接部位的碱基序列。科研人
员通过删除编码PD-1 蛋白基因的2、3、4 片段造成蛋白质的功能缺失，制作PD-1 基因敲除鼠的流程如图
1 所示。将体外转录获得的 Cas9mRNA 和sgRNA 导入小鼠的受精卵中，获得了12 只基因编辑小鼠。利用
2
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PCR 鉴定小鼠的基因型，电泳结果如图2 所示。已知P1 和P2 是PCR 的引物。下列相关分析正确的是（
）
A．敲除2、3、4 片段引起的变异属于染色体变异
B．敲除前，根据敲除的位置需要设计3 个sgRNA
C．图2 中，4 和12 个体杂交的子代均为敲除纯合子
D．图2 中，3、5、7 个体的体内均能检测到PD-1
6．（2024·浙江·二模）某研究小组构建了能表达ACTA1-GFP 融合蛋白的重组质粒，该重组质粒的部分结
构如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
注：F1和F2表示上游引物，R1和R2表示下游引物
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A．RNA 聚合酶与启动子结合，调控ACTA1 基因和GFP 基因的表达
B．仅用F2和R1一对引物，即可确定ACTA1 基因插入方向是否正确
C．ACTA1 基因转录的模板链是a 链，引物F1与a 链的部分序列相同
D．若用引物F2和R2进行PCR，能更好地区分ACTA1-GFP 基因纯合子和杂合子
7．（2024·黑龙江·二模）荧光定量PCR 是通过在PCR 体系中添加荧光染料来记录PCR 产物的累积情况，
从而达到对PCR 过程进行实时监控的目的。CT 值表示每个反应管内荧光信号达到设定的荧光阈值时所经
历的循环数。通常情况下将已知浓度的DNA 标准样品经过梯度稀释后分别取样进行荧光定量PCR，得到
一系列的CT 值，以梯度稀释后的浓度对数值作为横坐标，浓度所对应的CT 值为纵坐标绘制曲线，即可得
到一个标准曲线，如下图所示，下列叙述错误的是（ ）
A．荧光定量PCR 反应体系中需要添加耐高温的DNA 聚合酶
B．荧光定量PCR 可以用于检测样品中待测病毒核酸的浓度
C．若两组样品中待测病毒核酸的浓度差了10 倍，则两组CT 值的差异在3 与4 之间
D．若标准样品的DNA 出现降解，则利用所得的标准曲线分析，待测样品所测CT 值偏低
8．（2024·辽宁·二模）图1 表示的是细胞内DNA 复制的过程，图2 表示图1 中RNA 引物去除并修复的过
程，下列有关叙述错误的是（ ）
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A．DNA 体内复制和PCR 过程所需的引物不同，且PCR 反应引物不需要去除
B．细胞内核酸形成过程中都存在A//U 碱基对
C．酶3 为DNA 聚合酶，其在“被修复链”上的移动方向是5'→3'，DNA 聚合酶还能够从引物的3'开始
连接脱氧核苷酸
D．酶4 能催化磷酸二酯键的形成，PCR 反应也需要酶4 的参与
9．（2024·山东泰安·一模）Cre-loxP 系统能实现特定基因的敲除（如图1）。把几种荧光蛋白基因和Cre
酶能识别并切割的序列（loxP1 和loxP2）串在一起，构建表达载体T（如图2）。部分荧光蛋白基因会被
Cre 酶随机“剪掉”，且两个loxP1 之间或两个loxP2 之间的基因，最多会被Cre 酶敲除一次，剩下的部分
得以表达，随机呈现不同的颜色。下列说法错误的是（ ）
A．Cre 酶切下一个待敲除基因的过程，需要破坏四个磷酸二酯键
B．若小鼠细胞含一个表达载体T（不含Cre 酶），其肌肉组织细胞呈红色
C．若小鼠细胞含一个表达载体T（含Cre 酶），其脑组织细胞呈红色或黄色或蓝色
D．若小鼠细胞含两个表达载体T（含Cre 酶），其一个细胞内可能随机出现两种颜色
10．（2024·广西河池·模拟预测）目的基因和载体如果用同一种限制酶处理，连接时会出现正反接的情况，
为鉴定筛选出的表达载体中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR 后，结合电泳技
术鉴定，图示为甲、乙、丙3 条引物在正确重组质粒中的相应位置，其中目的基因为长度300bp 的片断。
下列有关说法不正确的是（ ）
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A．PCR 退火温度不宜太低，避免引物错配和模板链形成双链
B．电泳条带迁移的位置和速度与DNA 分子的大小、带电量和构象有关
C．选取引物甲丙，扩增出450bp 长度片断时，可以说明目的基因正接
D．选取引物甲乙，扩增出400bp 长度片断时，可以说明目的基因反接
11．（23-24 高三上·全国·开学考试）用A 和B 两种限制酶同时和分别处理同一DNA 片段，限制酶对应切
点一定能切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1 和图2 所示。下列叙述错误的是（ ）
A．用A 和B 两种限制酶同时处理图中同一DNA 片段得到6 个游离的磷酸基团
B．图1 中X 代表的碱基对数为4500，Y 是限制酶A 的酶切位点
C．电泳凝胶中DNA 分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA 分子大小和构象等有关
D．设计引物从图1 中完整DNA 片段中扩增出完整X，至少需要3 次PCR
12．（2024·广西柳州·一模）DNA 测序时，先将待测单链DNA 模板、引物、有关酶、4 种脱氧核苷三磷酸
（dNTP，N 代表A、T、C、G，能提供能量并作为DNA 复制的原料）均加入4 个试管中，再分别加入一
定量的含放射性同位素标记的ddNTP（ddGTP、ddATP、ddCTP、ddTTP）。不同于dNTP 的是，ddNTP 的
五碳糖的3 位不含羟基。在DNA 合成时ddNTP 随机与dNTP 竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA 的延伸，
从而形成不同长度的一系列终止处带有放射性同位素标记的DNA 链。下图是DNA 测序时得到含放射性标
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记的子代DNA 的电泳图谱。下列相关说法错误的是（ ）
A．反应体系中的引物为单链，DNA 聚合酶从引物的3'端连接脱氧核苷酸
B．ddNTP 终止子链延伸，其原理可能是其五碳糖的3'位不含羟基，无法连接新的脱氧核苷酸
C．图中加入ddCTP 的一组中，可以形成3 种长度的子链
D．图中子代DNA 的碱基序列是5'-GATCCGAAT-3'
13．（2024·浙江·模拟预测）经过十年不懈努力，我国科学家首次从野生玉米中克隆出高蛋白基因Thp9-
T，将其导入到我国推广面积最大的玉米生产栽培品种中，可以显著提高蛋白含量，表明该基因在培育高
蛋白玉米中具有重要的应用潜能。下列叙述错误的是（ ）
A．可通过构建基因文库从野生玉米中获得 Thp9-T 基因
B．可对质粒和 Thp9-T 基因均用两种限制酶切割以提高重组DNA 分子成功率
C．可通过杂交的方法将 Thp9-T 基因导入到栽培玉米中
D．可用核酸分子杂交技术检测转入的目的基因，作为判断转基因成功的直接证据
14．（23-24 高三上·湖北·阶段练习）PHB2 蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2 蛋白
抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2 基因），利用大肠杆菌表
达该蛋白。下图为所用载体示意图，phb2 基因基因序列不含图中限制酶的识别序列。下列叙述错误的是（
）
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A．将phb2 基因与载体正确连接构建基因表达载体是培育转基因大肠杆菌的核心工作
B．为使phb2 基因与载体正确连接，在扩增的phb2 基因两端可分别引入PvuⅡ和EcoRI 限制酶的识别
序列
C．在使phb2 基因与载体连接时，在扩增的phb2 基因两端都引入PvuⅡ限制酶的识别序列可能导致目
的基因环化
D．构建基因表达载体时，需选择BamHI 限制酶破坏氨苄青霉素抗性基因，以便对目的基因是否正常
转人进行检测与鉴定
15．（2024·山东潍坊·模拟预测）恶性高热是一种潜在致命性单基因遗传病，患者一般无症状，但当接触
麻醉剂后，会诱发患者出现高热等症状，死亡率极高。某家庭的母亲和女儿皆患有恶性高热，母亲因该病
去世，女儿经及时抢救而康复。科研人员对该家庭成员进行了基因检测。控制该性状的某一基因可在限制
酶的作用下切割成两条不同长度的 DNA 片段，用凝胶电泳法分离后可显示出不同的带谱如图所示（控制
该性状的基因为完全显性，且不位于XY 染色体的同源区段）。下列说法错误的是（ ）
A．该遗传病属于常染色体上显性遗传病
B．结合3、4 可推断 2 号不患病的概率是100%
C．该致病基因是由正常基因碱基的替换形成
D．4 号与无麻醉剂接触史的女子结婚，后代的基因型最多有3 种
16．（23-24 高三上·福建泉州·阶段练习）蚜虫危害农业生产，而蚜虫体内的寄生蜂是其天敌。棉花、蚜虫
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与不同寄生蜂间存在如下的食物链：棉花→蚜虫→初级寄生蜂→重寄生蜂。为构建棉田中蚜虫与不同寄生
蜂之间具体的营养结构模型，从僵蚜（初级寄生蜂将卵产于蚜虫体内，导致蚜虫死亡形成僵蚜）中提取
DNA 样本，利用 PCR 技术对僵蚜和各类寄生蜂进行了检测，结果如下图所示。
下列说法正确的是（ ）
A．PCR1、PCR2 和PCR3 的关键是根据不同蚜虫的 DNA 序列设计引物
B．通过增加初级寄生蜂F 的数量可以防治蚜虫B 和蚜虫C
C．PCR 前需从僵蚜DNA 分离蚜虫、初级寄生蜂和重寄生蜂DNA
D．通过增加重寄生蜂的数量有利于提高棉田产量
17．（23-24 高三上·浙江宁波·期中）RDX 是一种弹药使用后残留的危险污染物。研究人员将两个源于细
菌的RDX 降解酶基因 XplA 和 XplB 插入柳枝稷草染色体中，如图所示，使柳枝稷草获得降解实弹射击
场土壤中RDX 的能力。若要通过PCR 检测所获转基因柳枝稷草中是否含有正确插入的XplA 和 XplB 基
因，应选择的引物组合是（ ）
A．引物 1+引物3
B．引物 1+引物4
C．引物2 +引物3
D．引物2+引物4
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18．（23-24 高三上·浙江·阶段练习）科研人员将目的基因J 与质粒构建重组表达载体，该质粒的部分结构
如图所示，下列叙述错误的是（ ）
A．除图中标出的结构外，质粒还需具备的结构有复制原点、标记基因、限制酶切位点等
B．与图中启动子结合的酶是RNA 聚合酶
C．用PCR 检测J 基因连接到质粒中且方向正确可选用的一对引物是F1和R2
D．若J 基因转录的链位于b 链，可知引物F1与基因J 的b 链相应部分序列相同
19．（23-24 高三下·江西九江·期中）巢式PCR 指利用两套PCR 引物对模板进行两轮PCR 扩增，从第二轮
的扩增产物中获得目的基因片段，具体过程如图。巢式PCR 首先要根据DNA 模板序列设计两对引物。利
用第一对外引物对靶DNA 进行15 到30 个循环的标准扩增。第一轮扩增结束后，将一小部分起始扩增产物
稀释后加入到第二轮扩增体系中作为模板，利用第二对引物进行标准扩增并得到产物。下列相关叙述错误
的是（ ）
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A．PCR 反应体系的缓冲液中需要加入Mg2+用于激活DNA 聚合酶
B．与传统PCR 相比，巢式PCR 能减少非特异性产物的形成
C．第一轮的扩增产物是第二轮扩增的模板，第二轮扩增产物更短
D．如果第一次PCR 引物过量，剩余引物在第二次PCR 后不会有产物
20．（2024·北京丰台·二模）CAR-T 细胞免疫疗法是将从患者体内提取的T 细胞通过基因工程改造，使其
表达肿瘤嵌合抗原受体（CAR），大量扩增后输回患者体内以清除癌细胞。下列有关说法错误的是
（ ）
A．CAR-T 疗法的T 细胞来源于细胞毒性T 细胞
B．该疗法利用了细胞免疫和基因重组的基本原理
C．CAR-T 细胞清除癌细胞的过程属于细胞坏死
D．CAR-T 细胞上的CAR 能够精准识别癌细胞
21．（2024·山东日照·二模）反向PCR 是利用已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下
图。下列叙述错误的是（ ）
A．过程①可用同种限制酶切割磷酸和脱氧核糖之间的磷酸二酯键
B．过程②需用DNA 连接酶将酶切片段环化以实现对未知序列的扩增
C．过程③需添加方向相对的引物1 和3 以便DNA 聚合酶从其3′端延伸子链
D．过程③中将温度调至72℃的目的是使引物与模板链通过碱基互补配对结合
22．（2024·浙江·二模）菊花是两性花，LFY 基因是控制植物花分生组织形成的基因。过量表达LFY 导
致植物提早开花。为使菊花花期提前，科学家制备了含有拟南芥过量表达的LFY 基因的转基因菊花。重
组Ti 质粒的部分信息及实验流程如下图所示，其中启动子均为真核细胞启动子。下列叙述正确的是（ ）
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A．在含潮霉素的培养基上存活的农杆菌才可用于侵染菊花叶片
B．过程①②③所使用的培养基中植物激素的浓度和配比可以相同
C．I 是一团具有一定组织结构、松散的薄壁细胞团，具有较强的分裂和分化能力
D．诱导出芽和根的试管苗要先炼苗以适应外界的低湿强光环境才可进行移栽
23．（2024·湖北十堰·二模）不对称PCR 是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA（ssDNA）的方法。
加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物。PCR 反应的最初的若
干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），但当限制性引物消耗完后，就会产生大量的
ssDNA。不对称PCR 的简单过程如图所示。假设模板DNA 分子初始数量为a 个，6 次循环后开始扩增产生
ssDNA。下列叙述错误的是（ ）
A．限制性引物和非限制性引物均需要依据模板DNA 的碱基序列来设计
B．据图可知，最后大量获得的ssDNA 与图中甲链的碱基序列相同
C．该不对称PCR 过程中需要（26-1）a 个限制性引物
D．上述过程中子链分别沿限制性引物的5'端、非限制性引物的3'端延伸
24．（23-24 高三下·云南·阶段练习）某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI 三种限制酶切割位点，同时还含有
抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，获得此质粒的农杆菌表现出对两种抗生素的抗性。利用此质粒获得转
基因抗盐烟草的过程，如图所示。据图分析，下列表述错误的是（ ）
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A．用限制酶处理质粒时，质粒上的两个标记基因中均没有限制酶的识别序列和切割位点
B．该转基因抗盐烟草的培育过程中使用了SalI、HindⅢ处理抗盐基因和质粒
C．应将抗盐基因插入质粒中的T-DNA，该段DNA 可以整合到烟草细胞的染色体
D．将烟草细胞培育成转基因抗盐烟草的过程中需要使用生长素和细胞分裂素
25．（2024·湖南永州·三模）HA 蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋
白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA 蛋白
鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列叙述正确的是（ ）
A．①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4 种游离的核糖核苷酸等组分
B．目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入EcoRI 和HindⅢ的识别序
列，拼接前载体用MfeI 和HindⅢ切割
C．利用PCR 扩增目的基因时，反应缓冲溶液中一般要加入Mg2+的目的是维持渗透压稳定
D．利用鸡输卵管生物反应器生产HA 蛋白可以大规模用于禽流感疫苗制备
26．（2024·北京朝阳·一模）为了构建可以直接利用纤维素发酵的酿酒酵母工程菌，研究人员构建基因表
达载体（如图所示），并导入不能合成尿嘧啶的酵母菌。
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下列相关分析不正确的是（ ）
A．尿嘧啶合成基因可以作为表达载体上的标记基因
B．该方法需利用限制酶和DNA 连接酶实现目的基因与载体的连接
C．扩增目的基因时应在引物的5'端添加与线性化载体两端相同的DNA 序列
D．在以纤维素为唯一碳源的液体培养基中检测酒精含量确定工程菌发酵效果
27．（2024·广东韶关·二模）科学家利用蛋白质工程技术将水蛭素（一种可用于预防和治疗血栓的蛋白
质）第47 位的天冬酰胺替换为赖氨酸，显著提高了它的抗凝血活性，流程图如下。已知天冬酰胺对应的密
码子为AAU、AAC，赖氨酸对应的密码子为AAA、GUA 等。下列叙述错误的是（ ）
A．上图的操作流程是从预期的水蛭素功能出发的
B．在这项替换研究中目前可行的直接操作对象是基因
C．上图中大分子物质a 和b 的单体序列均是唯一的
D．用蛋白质工程可生产基因工程所不能生产的蛋白质
28．（2024·重庆九龙坡·二模）中国科学家发展了一种可工作于活细胞环境的框架核酸状态智能机（如
图），可以在活细胞中实现人为添加的时序信号调控的CRISPR（基因编辑）系统的分级运输、基因组定
位与基因编辑功能。下列说法正确的是（ ）
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A．核仁蛋白不能分布到细胞膜上，参与细胞的识别作用
B．有限状态机与向导RNA 结合后，进入细胞的过程不需要消耗能量
C．cas9（核酸编辑酶：一种蛋白质）/向导RNA 复合物能通过核孔进入细胞核
D．向导RNA 能够通过碱基互补配对定位到特定的基因位置并切断磷酸二酯键
29．（2024·安徽安庆·模拟预测）下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是（
）
A．②的构建需要限制性内切核酸酶和DNA 聚合酶参与
B．③导入④后，重组Ti 质粒整合到④的染色体DNA 上
C．②到③过程，需要钙离子处理，有助于促进重组Ti 质粒转化到农杆菌细胞中
D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了不可遗传变异
30．（2024·安徽·二模）科学家为了提高某种果实的储藏时间，从该植物体内提取Ers1 基因（乙烯受体基
因），按照图示流程将 Ers1 基因重新导回该植物，致使该植物原有Ers1 基因翻译受抑制。已知限制酶
Hpal 切割后为平末端， Xhol 和 BamH1 切割后露出的黏性末端碱基序列不同，据图分析，提取的目的基
因两端需添加的限制酶的识别序列为（ ）
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注：LB、RB 分别为T-DNA 的左边界、右边界
A．目的基因A 端添加Hpal 的识别序列， B 端添加Xhol 的识别序列
B．目的基因A 端添加Xho1 的识别序列，B 端添加Hpal 的识别序列
C．目的基因A 端添加Xhol 的识别序列，B 端添加BamH1 的识别序列
D．目的基因A 端添加Hpol 的识别序列， B 端添加Hpol 的识别序列
二、多选题
31．（2024·辽宁大连·一模）融合PCR 技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR 产物，通过
PCR 产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA 片段连接起来。其原理如图所示，据图分析不正确
的是（ ）
A．上述过程中使用的引物P2 和P3 的碱基需要完全互补配对
B．可在同一个反应体系中进行甲基因和乙基因的扩增
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C．融合PCR 的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物，不需要另加入引物
D．若融合PCR 的第二步获得128 个融合基因，理论上该过程消耗了254 个引物
32．（2024·山东·二模）凝胶阻滞试验（EMSA）的基本原理是：荧光标记的DNA 与蛋白质结合后分子量
增大，电泳后通过荧光检测可在相应位置显示出阻滞条带。已知O2蛋白通过与ZmGRAS11 基因启动子区
的motif 序列结合来调控ZmGRAS11 基因的表达，科学家为证实motif 序列是与O2蛋白结合的关键序列，
利用荧光标记的motif 序列作为指示探针，无荧光标记的motif 序列（WT）和无荧光标记的突变motif 序列
（M1-M6）作为7 种竞争探针如下表所示，分别加入了相应泳道进行EMSA 试验，实验结束后进行荧光检
测，结果如下图所示，下列说法错误的是（ ）
探针类型
motif 序列
WT
CTTGTGACTCATCCA
M1
CTTGTCCA
M2
CTTGTTTTTTTTCCA
M3
CTTGGGGGGGGTCCA
M4
CTTGCAGCTCATCCA
M5
CTTGTGGTCCATCCA
M6
CTTGTGACCTGTCCA
注：“+”表示加人相应物质，“-”表示未加入相应物质，竞争探针足够多
A．图中“？”是指荧光标记的指示探针
B．泳道3 无阻滞条带的原因是O2蛋白不与WT 探针结合
C．突变的竞争探针中M3 与O2蛋白结合能力最弱
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D．突变探针M4、M5、M6 发生了相同数目的碱基替换，但与O2蛋白结合影响相对较小的是M6
33．（2024·河北保定·一模）为提高植物抗病能力，研究人员将抗病基因（含大约260bp）转入到A 植物
中，然后通过PCR 和电泳技术对1～4 号A 植物的细胞进行检测。该过程所用质粒与含抗虫基因的DNA 上
相关限制酶的酶切位点分别如图1、2 所示，电泳检测结果如图3 所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．基因表达载体的构建是培育转基因A 植物的核心步骤
B．构建表达载体时应选用BamHI 和HindⅢ这两种限制酶
C．受体细胞发育为转基因A 植物的过程需在固体培养基上培养
D．由图3 电泳结果可知，4 号植株转基因获得成功
34．（2024·辽宁鞍山·二模）转座子是基因组中可移动的DNA 片段，玉米Ac 转座子能编码转座酶而自主
转座，Ds 转座元件只有与Ac 转座子同时存在时，才能从原位点切离并插入到新位点中。研究者利用玉米
转座子系统构建烟草突变体，下列叙述错误的是（ ）
A．Ds 与被其插入的基因间发生基因重组
B．推测Ds 转座元件具有编码转座酶功能
C．可构建同时含有Ac/Ds 的基因表达载体
D．玉米Ac 转座子可位于基因组的不同位置
35．（2024·山东临沂·模拟预测）大部分白血病患者细胞中存在异常的融合基因UBA2-WTIP，为研究该基
因的作用和致病机制，科研人员把目的基因和FLAG 标签基因序列连接起来，获得带有FLAG 肽链的
UBA2-WTIP 融合蛋白。在此过程中构建重组载体的2 种引物为：上游引物F2为5'TAT-
GGTACCATG ①GCACTGTCGCGGGGG3'，下游引物R2为5'TAT ②TCA ③GAGCTCAGT-GACGTG3'，引
物中①、②、③为插入位点。FLAG 标签基因的编码链序列5'GATTA-CAAGGATGACGACGATAAG3'可以
插入目的基因编码区的首端或末端，若在引物R2的②、③处插入FLAG 标签基因序列和EcoRI 的识别序列，
构建重组载体的部分结构如图。已知引物F2中ATG 对应起始密码子，引物R2中TCA 对应终止密码子，
UBA2-WTIP 融合基因编码的蛋白质前端有一段信号肽。下列说法正确的是（ ）
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A．此过程涉及的起始密码子为AUG，终止密码子为UAA
B．FLAG 肽链可作为基因工程中蛋白质是否表达的标记
C．由于信号肽在蛋白质成熟时被切去，故FLAG 基因序列不能插入①处
D．FLAG 基因序列应插入③处，序列为5'CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC3'
36．（2024·江苏泰州·一模）研究表明，正常女性细胞核内两条X 染色体中的一条会随机失活，浓缩形成
染色较深的巴氏小体。肾上腺脑白质营养不良（ALD）是伴X 染色体隐性遗传病（致病基因用a 表示），
女性杂合子中有5%的个体会患病，图1 为某患者家族遗传系谱图。利用图中四位女性细胞中与此病有关的
基因片段经能识别特定碱基序列的酶进行切割（如图2），产物的电泳结果如图3 所示。相关叙述错误的
是（ ）
A．患病的女性杂合子细胞内存在巴氏小体，正常女性细胞内不存在巴氏小体
B．a 基因比A 基因多一个酶切位点是因为发生了碱基对的增添或缺失
C．若Ⅱ-1 和一个基因型与Ⅱ-4 相同的女性婚配，后代患ALD 的概率为2．5%
D．a 基因酶切后产物的电泳结果对应217bp、93bp、118bp 三条带
37．（23-24 高三下·山东·开学考试）琼脂糖凝胶电泳中染色方式根据电泳与染色的前后关系分为前染色与
后染色，前染色是将染色剂预混在琼脂糖凝胶中，DNA 在移动过程中结合染色剂形成染色剂-DNA 复合体，
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电泳过程中可以随时观察 DNA 移动情况；后染色是电泳结束后再单独染色，染色剂用量较太。将某
DNA 样品均分为三份，进行琼脂糖凝胶电泳，结果如下图所示。下列有关说法正确的是（ ）
A．DNA 的迁移速率与自身分子大小和构象、凝胶浓度以及是否结合染色剂等因素有关
B．向熔化稍冷却的琼脂糖溶液中加入核酸染料后制成凝胶属于后染色
C．后染色较前染色 DNA 迁移速度快
D．对于大于3000bp 的DNA 片段，EB 染色的分辨效果好于 GelRed 染色
38．（23-24 高三下·山东·阶段练习）科研人员构建了可表达J-V5 融合蛋白的重组质粒并进行了检测，其
中 V5 编码序列表达标签短肽V5。图乙表示重组质粒正确表达后用抗J 蛋白抗体和抗 V5 抗体分别检测
相应蛋白的结果。下列说法正确的是（ ）
A．用PCR 法确定J 基因是否正确连接到质粒中，图甲中可供选择的的引物组合有2 种
B．若b 链是J 基因转录的模板链，则可推知引物F1 与图甲中J 基因a 链相应部分的序列相同
C．若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，则可以抑制 DNA 聚合酶对启动子的识别和结合
D．图乙条带 1 表明细胞内表达了 J-V5 融合蛋白，条带 2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的J 基因
表达的
39．（23-24 高三上·山东泰安·期末）基因A 中含两种限制酶BamHI 和MspI（5'-C↓CGG-3T'）的酶切位点，
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HpaⅡ和MspI 酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，HpaⅡ对胞嘧啶甲基化敏感（即不能切
割甲基化的酶切位点），而MspI 则对胞嘧啶甲基化不敏感。某种小鼠（Aa）有两种表型，用每种表型的
小鼠A 基因分别做了三组的酶切实验：第一组单独使用BamHI，第二组使用BamHI+MspI，第三组使用
BamHI+HpaⅡ；每组完全酶切产物（每一个酶切位点均被切割）通过电泳分离并使用探针得到杂交带。下
列说法正确的是（ ）
A．第一组处理后均可得到包含探针的8．9kb 基因片段
B．若表型1 中的A 基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5kb 和8.9kb，说明表型1 中
的A 基因中四个MspI 酶切位点均被甲基化
C．若表型2 中A 基因第三组酶切结果介于3.5kb 和8.9kb 之间，说明A 基因中至少有2 个HpaⅡ酶切
位点被甲基化
D．该种小鼠（Aa）有两种表型可能是因为A 基因甲基化程度不同影响了基因的表达
40．（23-24 高三上·辽宁抚顺·期末）Sanger 测序法是第一代基因测序方法，测序原理如图所示，其中
ddATP、ddCTP、ddGTP、ddTTP(统称为ddNTP)为双脱氧核苷酸，其2、3 号碳原子上没有氧原子。下列相
关说法正确的是（ ）
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A．被测模板的序列应该为5'—CTAAGCTCGACT—3'
B．ddNTP 可以连接到延伸的子链中，但此后子链将无法延伸
C．合成的子链中最长的类型会出现在第一组实验中
D．电泳结果共出现了12 条长短不同的条带，但被测模板实际碱基数要超过12 个
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