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2025年菁优高考生物解密之发酵工程
一．选择题（共20小题）
1．大肠杆菌、沙门氏菌能引起家禽和家畜的肠道疾病。暹罗芽孢杆菌代谢物具有广谱抗菌性，为检测其
对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌能力进行图示实验。下列说法正确的是（ ）
A．制备图示培养基需要在灭菌前调节pH
B．该抑菌实验还需要设计等量生理盐水作为对照
C．图示X为离心后得到的下层沉淀，含有暹罗芽孢杆菌代谢物
D．从抑菌圈边缘挑取菌落涂布平板重复实验，抑菌圈直径变大
2．利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。传统的酱油制作工艺采用面粉、黄豆做成酱饼，通
过蒸熟、发酵、摊晒，然后将酱饼捣碎同盐汤加入缸中，主要利用黑曲霉发酵，经 5～6个月日晒夜露，
不断搅动酱缸里的酱，进行“捣缸”，待酱料完全熟化，再进行压榨过滤。下列说法错误的是
（ ）
A．黄豆中的蛋白质可为黑曲霉提供碳源和氮源
B．“蒸熟”可使大豆蛋白质变性，以利于黑曲霉正常生长繁殖
C．发酵中添加的盐汤既可调节酱油的风味，又可抑制杂菌的生长
D．黑曲霉通过无氧发酵将原料中的蛋白质水解为肽和氨基酸，增加酱油的鲜味
3．民间的各种美食制作离不开传统的发酵技术，下列说法正确的是（ ）
A．酸菜腌制时间越长，口感越好，营养价值越高
1B．苹果醋的制作过程中要严格控制通气，并保持无氧和低温
C．苗族红酸汤以番茄和辣椒为原料密封发酵，该过程用到的是醋酸菌
D．长沙的“臭豆腐”闻着臭吃着香，其在发酵时少不了霉菌的参与
4．下列关于利用稀释涂布平板法统计待测样品中的活菌数的相关说法，正确的是（ ）
A．样品的稀释度不会直接影响平板上菌落数目
B．通过此方法统计得出的结果通常比实际数量偏小
C．使用涂布器时需要将涂布器放在火焰上灼烧，待涂布器上酒精燃尽后立即进行涂布
D．为了保证结果准确，一般选择菌落数为20﹣200的平板进行计数
5．发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品．目前在许
多领域得到了广泛的应用。下列说法错误的是（ ）
A．发酵工程大多使用单一菌种，可以从自然界中筛选也可以通过诱变育种或基因工程育种获得
B．发酵工程的中心环节是分离、提纯产物，如果产品是微生物细胞本身，可采用过滤、沉淀等方法
分离
C．在酸性和碱性条件下谷氨酸棒状杆菌积累的代谢产物不同，发酵过程需严格控制pH值
D．发酵工程可用于生产微生物农药，主要是利用微生物或其代谢物来防治病虫害
6．使用时间过长的玩具表面可能会有细菌，可能会导致儿童患接触性皮炎。为了检测某玩具表面是否存
在大肠杆菌，某团队进行了相关实验（如图所示），该团队使用伊红一亚甲蓝染液（用于鉴别大肠杆
菌，能使其菌落呈深紫色，并带有金属光泽）对培养基C进行染色，初步统计大肠杆菌的数量，图中
1～6表示不同菌落。下列说法错误的是（ ）
A．对菌液进行系列梯度稀释，菌落数为30～300时适合进行计数
B．配制平板A时只需要加入碳源、氮源、水、无机盐这几类物质即可
C．图中平板B的接种方法为稀释涂布平板法，初步判断3是大肠杆菌的菌落
D．为保护儿童健康，平时可用75%的酒精对玩具进行擦拭消毒
7．如表为某培养基的配方，下列叙述正确的有（ ）项
成分 蛋白胨 葡萄糖 K HPO 伊红 美蓝 蒸馏水 琼脂
2 4
含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1000ml 20g
①物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基
②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
③该培养基调节合适的pH和消毒后就可以接种使用
2④该培养基可以用于培养HIV病毒
A．1项 B．2项 C．3项 D．4项
8．我国古代最早酿造葡萄酒采用的是将葡萄破碎成浆的自然发酵酿酒法，后来出现了向葡萄汁中加入
“曲蘖”的酿造方法。下列叙述正确的是（ ）
A．用于自然发酵酿酒法的葡萄可先去皮，有利于破碎成浆
B．葡萄汁中加入的“曲蘖”含有酵母菌，可加快酒精发酵
C．酿造葡萄酒需使用密闭性较好的容器，定期打开盖子放气
D．若发酵产物变酸，可能是容器密闭不严，酵母菌进行了有氧呼吸
9．生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法，为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组
把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板
上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的
是（ ）
A．微生物培养所需的碳源、氮源不一定由培养基提供
B．倒平板后一段时间出现菌落，说明培养基有杂菌污染
C．图示结果表明该菌需要的生长因子为乙或丙
D．这种生长图形法可用于某些菌种的筛选
10．在发酵技术中，主要是利用优良微生物的代谢过程，获得人类需要的产品。下列叙述正确的是（
）
A．以淀粉或纤维素的水解液为原料，可以生产微生物分泌的单细胞蛋白
B．以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸需要振荡培养，故黑曲霉与生产果醋和腐乳时所用主要
微生物的代谢类型相同
C．选育优良的产酒酵母菌是发酵工程的中心环节，决定了酒的产量和口味
D．在氧气和糖源都充足时，醋酸菌可以将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸
11．AM真菌能促进根瘤菌（Rh）刺激根的局部膨大形成根瘤。为研究AM真菌促进Rh形成根瘤的机制，
研究人员分别取经AM++Rh﹣、AM﹣+Rh+和AM++Rh+处理的大豆根系分泌物（+代表有，﹣代表无），
灭菌后装满毛细管，将毛细管束放入含有根瘤菌菌液的试管中（毛细管下端管口不封闭，与根瘤菌菌
液连通），实验装置如图1（此培养条件下根瘤菌能生存但并不增殖）。每隔两天取出毛细管，用无
菌水冲洗其外壁，打碎研磨冲洗定容后进行活菌计数，结果如图2。下列有关叙述错误的是（ ）
3A．根瘤菌与AM真菌的本质区别是有无成形的细胞核
B．可采用高压蒸汽灭菌锅对大豆根系分泌物进行灭菌处理
C．取一定量的毛细管研磨液用平板划线法在培养基上进行培养计数
D．AM真菌与根瘤菌共同存在时，根系分泌物对根瘤菌的吸引作用更强
12．DHA被称为“脑黄金”，是人体所必需的一种不饱和脂肪酸，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂。
DHA性质活泼，极易与氧气反应，温度过高易分解。中科院合肥物质科学研究院利用单细胞真菌裂壶
藻发酵法生产 DHA，成本低而且品质好，常用作营养剂添加到婴儿乳品中。下列表述错误的是
（ ）
A．培养时，使用血细胞计数板计算的裂壶藻数量往往多于实际活菌数
B．接种注意全程无菌操作，实验结束后的培养基不能直接丢弃
C．提取DHA前需要对裂壶藻进行干燥处理，恒温箱烘烤效果优于低温真空干燥
D．提纯后的DHA在室温下常呈液态
13．江西物华天宝，人杰地灵，历史上不仅名人辈出，美食也是数不胜数，如湖口酒糟鱼、都昌豆豉、
鄱阳腐乳、南昌啤酒等等。下列叙述正确的是（ ）
A．酒糟是以糯米为原料，经蒸煮后在氧气充足的条件下发酵而成的
B．参与腐乳形成的主要微生物和醋酸菌类似，也没有成形的细胞核
C．豆豉制作过程中，多种微生物产生的蛋白酶将豆子中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸
D．工业生产啤酒过程中，最核心的步骤是发酵罐内的发酵，发酵完毕后需要对啤酒灭菌处理
14．为获得纯化的酵母菌菌落，进行如图所示的平板划线操作，划线的顺序为①→②→③→④→⑤。
下列有关叙述错误的是（ ）
4A．马铃薯琼脂培养基可采用湿热灭菌的方法
B．进行划线操作时，培养皿盖不能完全打开，且需要在酒精灯火焰旁进行
C．完成划线操作后，将平板正立放入28℃左右的恒温培养箱中培养
D．在区域①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物
15．啤酒工业化生产的原料为大麦，其工业化生产流程包括 8个环节：发芽→焙烤→碾磨→糖化→蒸煮
→发酵→消毒→终止，其中发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。下列分析正确的是（ ）
A．腐乳、果醋和啤酒都是在厌氧条件下发酵产生的食品
B．后发酵阶段指将发酵产物置于高温、通风环境下储存一段时间
C．酒精的产生和积累主要在后发酵阶段完成
D．蒸煮的目的是终止酶的进一步作用和杀灭杂菌
16．某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布
平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如图所示。下列说法正确的是（ ）
A．制备土壤悬液时，先将10g土壤进行高温灭菌，再倒入90mL无菌水中
B．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是尿素分解菌
C．用稀释涂布平板法进行尿素分解菌计数时，结果往往比实际值高
D．以未接种的培养基为对照组，可判断培养基灭菌是否合格
17．油炸臭豆腐闻着臭吃着香，是有名的风味小吃。臭豆腐制作时需要将豆腐浸入含乳酸菌、毛霉菌等
微生物的卤汁中发酵。下列叙述正确的是（ ）
A．制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基
B．乳酸菌发酵产生了乳酸和二氧化碳，需定期排气
5C．豆腐发酵时需要密封处理，有利于毛霉菌的生长
D．豆腐发酵时不会有杂菌的繁殖，故无需严格灭菌
18．粪肠球菌是一种栖息于人体肠道的益生菌，当肠黏膜被破坏时，肠道内的粪肠球菌及其代谢产生的
毒素可能进入人体内导致某些疾病的发生。科研人员进行了青霉素和某种噬菌体对粪肠球菌杀灭效果
的相关研究。下列叙述正确的是（ ）
A．粪肠球菌寄生于人体肠道，利用肠黏膜细胞的核糖体合成菌体蛋白
B．采用稀释涂布平板法接种，培养菌落数量达到30～300时进行计数
C．长期使用青霉素治疗粪肠球菌感染性疾病，可能会诱导耐药菌产生
D．用噬菌体治疗粪肠球菌导致的疾病，对机体内正常菌群的影响较小
19．将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如图所示实验。下列叙述正确的是（ ）
A．实验中接种至基本培养基方法是平板划线法
B．基本培养基上出现的少量菌落一定是单菌落
C．基本培养基中包含菌株a和b的特殊营养物质
D．菌株a和b需要的特殊营养物质有所不同
20．小曲白酒香醇柔和，深受广大消费者青睐。如图为接种小曲（含酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、好氧性
霉菌等），采用传统发酵方法酿造小曲白酒的工艺流程，图中泡粮水必须用热水，以减少自然酶活性
和杂菌对淀粉的消耗。下列相关分析错误的是（ ）
A．泡粮：其目的是提高种子自由水含量，提高发芽率
B．撒曲糖化：接种发酵菌促使淀粉分解形成糖浆
C．装坛发酵：主要利用酵母菌无氧呼吸产生酒精
D．蒸馏：加热使蒸汽中酒精含量增加，提高白酒的酒精度
二．解答题（共5小题）
621．紫茎泽兰根、茎、种子皆可繁殖且能产生多种化感物质抑制其他生物生长，是我国危害最严重的入
侵植物。在防除过程中，紫茎泽兰残体亟待无害化处理与资源化利用。
（1）紫茎泽兰入侵会造成 降低或丧失，影响当地生态系统的 性。
（2）以紫茎泽兰为原料，野外就近接种可降解化感物质的高温纤维梭菌（最适温度 60～65℃）进行
堆肥发酵，检测堆肥温度和堆肥基质中两种主要化感物质含量变化，如图 1。据图推测5～10天化感
物质含量下降速率最快的原因：一方面 ，另一方面 ，有
利于化感物质的快速分解。
（3）将未经堆肥（UA）和经过堆肥（CA）的紫茎泽兰浸提液加入灭菌土壤中，接种三种土壤真菌后
检测生长情况，如图2。结果表明 。将UA组、CA组紫茎泽兰风干粉碎后
加入到种植有玉米幼苗的土壤中，60天后检测发现UA组玉米的生物量显著低于对照，而CA组则显
著高于对照。
（4）与上述研究相关叙述，正确的有 。（多选）
A.堆肥过程中堆肥基质的有机物总量增加，肥力增强
B.发酵初期堆肥温度升高有利于堆肥中杂菌的消毒和灭菌
C.发酵初期堆肥温度升高有利于高温纤维梭菌占据竞争优势
D.堆肥发酵可分解紫茎泽兰的根、茎、种子，降低其扩散的风险
E.堆肥发酵可减弱化感物质对农田生物群落其他生物的危害
7F.无害化的紫茎泽兰还田主要体现了生态工程的协调原理
22．产脂肪酶酵母可用于处理含油废水，同时可获得蛋白质。有研究人员尝试从餐馆厨房污水排放沟取
样，筛选产脂肪酶酵母菌株，初步流程如图1所示。据图回答下列问题：
（1）Ⅰ号培养基中应选择 作为唯一的碳源。
（2）过程③的接种方式为 。要判断所制备的培养基是否具有筛选作用，同时还需将
样本接种到牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上，若 ，说明具有筛选作用。
（3）酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母菌的絮凝能力，
有助于发酵结束时细胞和产物的分离，可大幅节约生产成本。科研人员发现酵母菌的 R基因对絮凝能
力有一定的抑制作用，图2表示科研人员利用同源重组（在两个DNA分子的同源序列之间直接交换的
一种重组）基因敲除技术敲除R基因的过程。
①研究人员将整合了lox序列的庆大霉素抗性基因导入酵母菌，lox﹣庆大霉素抗性基因通过同源重组
的方式整合到酵母菌基因组中，重组片段上庆大霉素抗性基因的作用是 。利
用 PCR 技术检测 lox﹣庆大霉素抗性基因是否替换 R 基因，扩增时引物应选择图 3 中的
。在PCR延伸阶段中 催化脱氧核苷酸连接到引物上。
②将导入PC质粒的酵母菌，接种于添加 的马铃薯琼脂培养基中，获得敲除R基因且无庆
8大霉素抗性基因标记的酵母菌。Cre酶与基因工程中 （工具酶）作用类似，上述过程中其
发挥作用时需断裂 个磷酸二酯键。
23．我国科学家利用如图所示的液态厌氧发酵工艺，实现了利用乙醇梭菌高效产出乙醇和单细胞蛋白。
回答以下问题：
（1）据图分析可知，该培养基的碳源是 ，乙醇梭菌属于 （自养型/异养
型）细菌。
（2）乙醇梭菌在发酵罐中的发酵过程属于厌氧发酵，其发酵过程 （需要/不需要）搅拌，
目的是 。
（3）发酵工程的中心环节是 ，在该环节中需要严格控制温度、pH等发酵条件，原
因是 。
（4）通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，可降低生态足迹，同时还可以获得单细胞蛋白，该过程获得
的单细胞蛋白是指 ，可通过 等方法从发酵液中获得单细胞蛋白。
24．大肠杆菌是一种条件致病菌，一定数量的大肠杆菌有利于胃肠蠕动，过量的大肠杆菌则容易引发腹
痛、腹泻等症状。某同学喝了自酿葡萄酒后出现腹痛、腹泻现象。他怀疑酒中大肠杆菌含量超标，于
是开展了葡萄酒的检测实验。实验的部分步骤如下：
①配制培养基
②灭菌、冷却
③接种
④培养与观察
请回答下列问题：
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、 等优点，因此常
作为遗传学研究的实验材料。
（2）在大肠杆菌培养操作过程中，为防止杂菌污染，静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫
外线能 （答出两点）。
（3）酵母菌和大肠杆菌的代谢类型都是异养兼性厌氧型，但一般认为如果控制好发酵条件，葡萄酒是
不易被大肠杆菌污染的，原因是 。
（4）将接种后的平板和一个空白平板放在适宜温度下培养适宜的时间，设置空白平板对照的目的是
。通常，对获得的纯菌种还可以依据 （写出两点）等菌落特征对细菌进行初步的鉴
9定分类。
（5）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使估计值更接近实际值，除应严格操作、多
次重复外，还应保证待测样品稀释的 。
25．乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种由34个氨基酸组成的小肽，对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引
起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中
获得多株产乳链菌肽的菌株，进行了如下实验：
（1）筛选菌株：将革兰氏阳性菌均匀涂布于平板上，将已经灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培
养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察 ，选取抑制作用
最强的菌株，图1所示为培养的结果，下列分析正确的是 。
A．有些未形成抑菌圈可能是病原菌对该抗生素很敏感
B．有些抑菌圈很小可能与该抗生素扩散速度太慢有关
C．若抑菌圈内出现一个菌落，则该菌落可能由抗药性变异菌体形成
D．从抑菌圈边缘挑取病原菌继续培养，连续选择几代后抑菌圈的直径会变小
（2）纯化菌株：
A过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，目的是 。
B过程常用的方法是 。D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是 。E
过程需将纯化的菌株用 （填工具）将纯化的菌株接种于 培养基中4°C保存。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）还是
非溶菌性杀死细菌，科研人员活将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革
兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如图2所示。
10对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为 。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方
式为 ，理由是 。
（4）人们一直都试图将乳链菌肽当作一种抗生素用于医疗方面，由于 ，溶解
度不高，以及在其它方面存在着一些缺陷，目前还不适合作为口服药使用。据题推测乳链菌肽在食品
生产中的应用价值是 。
112025年菁优高考生物解密之发酵工程
参考答案与试题解析
一．选择题（共20小题）
1．大肠杆菌、沙门氏菌能引起家禽和家畜的肠道疾病。暹罗芽孢杆菌代谢物具有广谱抗菌性，为检测其
对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌能力进行图示实验。下列说法正确的是（ ）
A．制备图示培养基需要在灭菌前调节pH
B．该抑菌实验还需要设计等量生理盐水作为对照
C．图示X为离心后得到的下层沉淀，含有暹罗芽孢杆菌代谢物
D．从抑菌圈边缘挑取菌落涂布平板重复实验，抑菌圈直径变大
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；培养基的配制．
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【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】A
【分析】本实验的思路为：将含暹罗芽孢杆菌代谢物的滤纸片放到接种了大肠杆菌或者沙门氏菌的平
板培养基上，滤纸片周围会出现抑菌圈，在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌；若抗生素对细菌起
选择作用，则随着培养次数增多，耐药菌的比例增大，在连续培养几代后，抑菌圈的平均直径变小。
【解答】解：A、制备图示培养基需要在灭菌前调节pH，否则会引起杂菌污染，A正确；
B、该抑菌实验为检测暹罗芽孢杆菌代谢物对沙门氏菌和大肠杆菌的抑菌能力，互为对照，因此进行
12图示实验不需设计等量生理盐水作为对照，B错误；
C、图示X为离心后得到的下层沉淀，含有暹罗芽孢杆菌，上清液中含有代谢物，C错误；
D、在抑菌圈边缘生长的细菌可能是耐药菌，从抑菌圈边缘挑取菌落涂布平板重复实验，抑菌圈平均
直径变小，D错误。
故选：A。
【点评】本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，具备运用所
学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
2．利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。传统的酱油制作工艺采用面粉、黄豆做成酱饼，通
过蒸熟、发酵、摊晒，然后将酱饼捣碎同盐汤加入缸中，主要利用黑曲霉发酵，经 5～6个月日晒夜露，
不断搅动酱缸里的酱，进行“捣缸”，待酱料完全熟化，再进行压榨过滤。下列说法错误的是
（ ）
A．黄豆中的蛋白质可为黑曲霉提供碳源和氮源
B．“蒸熟”可使大豆蛋白质变性，以利于黑曲霉正常生长繁殖
C．发酵中添加的盐汤既可调节酱油的风味，又可抑制杂菌的生长
D．黑曲霉通过无氧发酵将原料中的蛋白质水解为肽和氨基酸，增加酱油的鲜味
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
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【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，
以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条
件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢产物的形成。
【解答】解：A、黄豆蛋白质中含有C、H、O、N等元素，故黄豆中的蛋白质可为黑曲霉提供碳源和
氮源，A正确；
B、“蒸熟”使黄豆蛋白质变性，有利于后期发酵，同时起到杀灭附着在原料上的微生物的作用，以
利于黑曲霉正常生长繁殖，B正确；
C、发酵中添加的盐汤的目的主要是抑制杂菌的生长，同时也能调节酱油的风味，C正确；
D、黑曲霉是一种好氧菌，“捣缸”的目的是通风供氧，降低温度，混合均匀以利于黑曲霉进行有氧
发酵，黑曲霉有复杂的酶系统，主要是蛋白水解酶等，可水解原料中的蛋白质为肽和氨基酸，增加酱
油的鲜味，D错误。
故选：D。
【点评】本题考查传统发酵技术和发酵工程的相关知识，比较基础，只要考生识记传统发酵原理、发
酵工程的基本环节即可正确答题，属于考纲识记层次的考查。
133．民间的各种美食制作离不开传统的发酵技术，下列说法正确的是（ ）
A．酸菜腌制时间越长，口感越好，营养价值越高
B．苹果醋的制作过程中要严格控制通气，并保持无氧和低温
C．苗族红酸汤以番茄和辣椒为原料密封发酵，该过程用到的是醋酸菌
D．长沙的“臭豆腐”闻着臭吃着香，其在发酵时少不了霉菌的参与
【考点】果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术；制作泡菜．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】果酒制作菌种是酵母菌，代谢类型是兼性厌氧型真菌，属于真核细胞，条件是18～30℃、前
期需氧，后期不需氧；果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是 30
～35℃、一直需氧；红酸汤制作需要用到乳酸菌，乳酸菌是一种厌氧菌，在无氧的条件下，乳酸菌发
酵产生乳酸，使得菜品有一股特别的风味提升菜品的口感；腐乳的制作主要是利用了微生物发酵的原
理，主要参与的微生物是青霉、毛霉，豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝，严格地说是直立菌丝，
豆腐中还有匍菌丝，豆腐中的蛋白质和脂肪经微生物分解为小分子肽，氨基酸和甘油、脂肪酸等，再
经加工制成为腐乳。
【解答】解：A、酸菜制作过程中会产生亚硝酸盐，因此并不是腌制时间越长，口感越好，营养价值
越高，A错误；
B、果醋制作的菌种是醋酸菌，代谢类型是需氧型细菌，属于原核细胞，条件是 30～35℃、一直需氧，
B错误；
C、红酸汤制作需要用到乳酸菌而不是醋酸菌，C错误；
D、长沙的“臭豆腐”闻着臭吃着香，其在发酵时少不了霉菌的参与，如青霉、毛霉等，D正确。
故选：D。
【点评】本题考查发酵的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问
题的能力是解答本题的关键。
4．下列关于利用稀释涂布平板法统计待测样品中的活菌数的相关说法，正确的是（ ）
A．样品的稀释度不会直接影响平板上菌落数目
B．通过此方法统计得出的结果通常比实际数量偏小
C．使用涂布器时需要将涂布器放在火焰上灼烧，待涂布器上酒精燃尽后立即进行涂布
D．为了保证结果准确，一般选择菌落数为20﹣200的平板进行计数
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；微生物的数量测定．
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【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】B
【分析】稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形
14成单个菌落。
【解答】解：A、样品的稀释度会直接影响平板上菌落数目，稀释度越高，菌落数目越少，A错误；
B、由于两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以通过此方法统计得出的结
果通常比实际数量偏小，B正确；
C、使用涂布器时需要将涂布器放在火焰上灼烧，待涂布器上酒精燃尽后冷却到室温再进行涂布，C错
误；
D、为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查微生物计数的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
分析问题的能力是解答本题的关键。
5．发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品．目前在许
多领域得到了广泛的应用。下列说法错误的是（ ）
A．发酵工程大多使用单一菌种，可以从自然界中筛选也可以通过诱变育种或基因工程育种获得
B．发酵工程的中心环节是分离、提纯产物，如果产品是微生物细胞本身，可采用过滤、沉淀等方法
分离
C．在酸性和碱性条件下谷氨酸棒状杆菌积累的代谢产物不同，发酵过程需严格控制pH值
D．发酵工程可用于生产微生物农药，主要是利用微生物或其代谢物来防治病虫害
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；发酵工程的基本环节．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】B
【分析】发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品分离、
提纯等方面。
【解答】解：A、发酵工程中所用的菌种大多是单一菌种，一旦有杂菌污染，可能导致产量大大下降，
因此，培养基和发酵设备都必须经过严格灭菌；发酵所用菌种可以从自然界中筛选也可以通过诱变育
种或基因工程育种获得，A正确；
B、发酵工程的中心环节是发酵，如果产品是微生物细胞本身，可采用过滤、沉淀等方法分离，B错误；
C、在酸性和碱性条件下谷氨酸棒状杆菌积累的代谢产物不同，发酵过程需严格控制pH值，C正确；
D、发酵工程可用于生产微生物农药，主要是利用微生物或其代谢物来防治病虫害，D正确。
故选：B。
【点评】本题考查发酵过程的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系、
分析题意以及解决问题的能力。
6．使用时间过长的玩具表面可能会有细菌，可能会导致儿童患接触性皮炎。为了检测某玩具表面是否存
在大肠杆菌，某团队进行了相关实验（如图所示），该团队使用伊红一亚甲蓝染液（用于鉴别大肠杆
15菌，能使其菌落呈深紫色，并带有金属光泽）对培养基C进行染色，初步统计大肠杆菌的数量，图中
1～6表示不同菌落。下列说法错误的是（ ）
A．对菌液进行系列梯度稀释，菌落数为30～300时适合进行计数
B．配制平板A时只需要加入碳源、氮源、水、无机盐这几类物质即可
C．图中平板B的接种方法为稀释涂布平板法，初步判断3是大肠杆菌的菌落
D．为保护儿童健康，平时可用75%的酒精对玩具进行擦拭消毒
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
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【专题】实验材料与实验步骤；微生物的分离、培养和应用．
【答案】B
【分析】1、微生物常见的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法可用于微生物计
数。
2、稀释涂布平板法统计菌落数的原理：当样品的稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个菌落来自
样品稀释液中的一个活菌，可通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌。
【解答】解：A、对菌液进行系列梯度稀释，培养出的菌落数计数要在 30～300的范围内，否则导致
结果误差大，A正确；
B、平板 A为固体培养基，配制时还需要加入琼脂作为凝固剂，B错误；
C、用伊红一亚甲蓝染液对培养基C进行染色，根据平板D的结果，可判断平板B中3是大肠杆菌菌
落，C正确；
D、可用75%的酒精对玩具进行擦拭消毒，从而达到保护儿童健康的目的，D正确。
故选：B。
【点评】本题考查微生物培养与分离的相关知识，要求考生理解识记有关技术的原理及操作步骤，掌
握各操作步骤中需要注意的细节，能将教材中的知识结合题中信息进行迁移应用。
7．如表为某培养基的配方，下列叙述正确的有（ ）项
成分 蛋白胨 葡萄糖 K HPO 伊红 美蓝 蒸馏水 琼脂
2 4
含量 10g 10g 2g 0.4g 0.065g 1000ml 20g
①物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基
②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
③该培养基调节合适的pH和消毒后就可以接种使用
④该培养基可以用于培养HIV病毒
16A．1项 B．2项 C．3项 D．4项
【考点】无菌技术 常用的消毒和灭菌方法．
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【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】B
【分析】1、培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生
物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2、培养基的种类：
（1）按物理性质分：
名称 特征 功能
固体培养基 外观显固体状态的培养基 主要用于微生物的分离、鉴定
液体培养基 呈液体状态的培养基 主要用于工业生产
（2）按化学性质分：
名称 特征 功能
天然培养基 用于化学成分不明确的天然 主要用于工业生产
物质配成
合成培养基 用化学成分已知的化学物质 主要用于微生物的分类、鉴定
配成
（3）按功能分：
种类 制备方法 特征 用途
选择培养基 培养基中加入某 根据某种微生物的特殊营养要求或其 加入青霉素分离得到
种化学成分 对某化学、物理因素的抗性而设计的 酵母菌和霉菌
培养基使混合菌样中的劣势菌变成优
势菌，从而提高该菌的筛选率
鉴别培养基 加入某种试剂或 依据微生物产生的某种代谢产物与培 鉴别和区分菌落相似
化学药品 养基中特定试剂或化学药品反应，产 的微生物，如伊红和
生明显的特征变化而设计 美蓝培养基可以鉴别
大肠杆菌
【解答】解：①该培养基中含有凝固剂（琼脂），因此从物理性质看该培养基属于固体培养基，该培
养基中含有指示剂（伊红美蓝），因此从用途看该培养基属于鉴别培养基，①正确；
②培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨，②正确；
③该培养基调节合适的pH和灭菌后才可以接种使用，③错误；
④病毒没有细胞结构，不能独立生存，因此不能用培养基直接培养病毒，④错误。
故选：B。
【点评】本题考查微生物的分离和培养，重点考查培养基的相关知识，要求考生识记培养基的组成成
分、种类及功能，能结合所学的知识准确答题。
8．我国古代最早酿造葡萄酒采用的是将葡萄破碎成浆的自然发酵酿酒法，后来出现了向葡萄汁中加入
“曲蘖”的酿造方法。下列叙述正确的是（ ）
17A．用于自然发酵酿酒法的葡萄可先去皮，有利于破碎成浆
B．葡萄汁中加入的“曲蘖”含有酵母菌，可加快酒精发酵
C．酿造葡萄酒需使用密闭性较好的容器，定期打开盖子放气
D．若发酵产物变酸，可能是容器密闭不严，酵母菌进行了有氧呼吸
【考点】果酒、果醋的制作．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】B
【分析】果酒制作过程中的相关实验操作：
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗。
（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净，并晾干。②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒。
（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。
（4）发酵：将葡萄汁装入发酵瓶，要留要大约1/3的空间，并封闭充气口。制葡萄酒的过程中，将温
度严格控制在18℃～30℃，时间控制在10～12d左右，可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测。
【解答】解：A、用于自然发酵酿酒法的葡萄不能去皮，因为皮上有野生型酵母菌，A错误；
B、葡萄汁中加入的“曲蘖”含有酵母菌，可加快酒精发酵，B正确；
C、酿造葡萄酒需使用密闭性较好的容器，但不能打开盖子放气，防止杂菌污染，C错误；
D、酒变酸，可能是容器密闭不严醋酸菌进行了有氧呼吸，D错误。
故选：B。
【点评】本题考查果酒制作的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分
析问题的能力是解答本题的关键。
9．生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法，为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组
把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒成平板，然后在平板
上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的
是（ ）
A．微生物培养所需的碳源、氮源不一定由培养基提供
B．倒平板后一段时间出现菌落，说明培养基有杂菌污染
C．图示结果表明该菌需要的生长因子为乙或丙
D．这种生长图形法可用于某些菌种的筛选
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
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18【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
【分析】1、微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等，有的还需要添加维生素等特殊的
营养物质；自养型微生物培养基中可以不添加碳源，固氮微生物培养基中可以不添加氮源；
2、据图分析，菌落主要分布于添加了乙和丙的区域的交界处，说明该嗜热菌所需生长因子为丙和乙。
【解答】解：A、培养自养微生物时一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养
固氮微生物时一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气，A正确；
B、若倒成平板后直接培养，出现菌落说明已被杂菌感染，B正确；
C、图中菌落生活在乙丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C错误；
D、不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。
故选：C。
【点评】本题主要考查的是微生物的选择培养的相关知识，意在考查学生对基础知识的理解掌握，难
度适中。
10．在发酵技术中，主要是利用优良微生物的代谢过程，获得人类需要的产品。下列叙述正确的是（
）
A．以淀粉或纤维素的水解液为原料，可以生产微生物分泌的单细胞蛋白
B．以红薯粉为原料经黑曲霉发酵生产柠檬酸需要振荡培养，故黑曲霉与生产果醋和腐乳时所用主要
微生物的代谢类型相同
C．选育优良的产酒酵母菌是发酵工程的中心环节，决定了酒的产量和口味
D．在氧气和糖源都充足时，醋酸菌可以将乙醇转化为乙醛，再将乙醛变为乙酸
【考点】果酒、果醋的制作；发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】B
【分析】酵母菌是一类单细胞真菌，能以多种糖类作为营养物质和能量的来源，因此在一些含糖量较
高的水果、蔬菜表面经常可以发现酵母菌的存在。酵母菌是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进行酒
精发酵，可用于酿酒、制作馒头和面包等。温度是影响酵母菌生长的重要因素，酿酒酵母的最适生长
温度约为28℃。
【解答】解：A、微生物菌体本身属于单细胞蛋白，单细胞蛋白不是微生物的分泌物，A错误；
B、黑曲霉发酵生产柠檬酸需要振荡培养，故黑曲霉代谢类型为异养需氧型，故黑曲霉与生产果醋
（醋酸菌需氧型）和腐乳（毛霉需氧型）时所用主要微生物的代谢类型相同，B正确；
C、发酵过程的中心环节是发酵过程，控制各种条件等，C错误；
D、在氧气和糖源都充足时，醋酸菌可以将糖分解成乙酸，糖源不充足时，将乙醇转化为乙醛，再将
乙醛变为乙酸，D错误。
19故选：B。
【点评】本题考查发酵的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问
题的能力是解答本题的关键。
11．AM真菌能促进根瘤菌（Rh）刺激根的局部膨大形成根瘤。为研究AM真菌促进Rh形成根瘤的机制，
研究人员分别取经AM++Rh﹣、AM﹣+Rh+和AM++Rh+处理的大豆根系分泌物（+代表有，﹣代表无），
灭菌后装满毛细管，将毛细管束放入含有根瘤菌菌液的试管中（毛细管下端管口不封闭，与根瘤菌菌
液连通），实验装置如图1（此培养条件下根瘤菌能生存但并不增殖）。每隔两天取出毛细管，用无
菌水冲洗其外壁，打碎研磨冲洗定容后进行活菌计数，结果如图2。下列有关叙述错误的是（ ）
A．根瘤菌与AM真菌的本质区别是有无成形的细胞核
B．可采用高压蒸汽灭菌锅对大豆根系分泌物进行灭菌处理
C．取一定量的毛细管研磨液用平板划线法在培养基上进行培养计数
D．AM真菌与根瘤菌共同存在时，根系分泌物对根瘤菌的吸引作用更强
【考点】微生物的纯培养；微生物的数量测定．
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【专题】坐标曲线图；对比分析法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
【分析】1、两种纯化细菌的方法的比较：
优点 缺点 适用范围
平板划 可以观察菌落特征，对混 不能计数 适用于好氧菌
合菌进行分离
线分离法
稀释涂布 可以计数，可以观察菌落 吸收量较少，较麻烦，平板不 适用于厌氧，兼
特征 干燥效果不好，容易蔓延 性厌氧
平板法
2、由题图信息分析可知，三个处理组的菌落数随时间的增加而呈上升趋势，最后趋于稳定，其中
AM++Rh+处理组的菌落数最多，这说明根系分泌物对根瘤菌的吸引作用更强。
【解答】解：A、根瘤菌属于原核生物，AM真菌属于真核细胞，二者的本质区别是有无成形的细胞核，
A正确；
B、可采用高压蒸汽灭菌锅对大豆根系分泌物进行灭菌处理，可以杀死微生物，B正确；
C、取一定量的毛细管研磨液进行稀释涂布在增殖平板培养基上进行培养计数，C错误；
20D、从曲线图上可以看出，AM真菌与根瘤菌共同存在时（AM++Rh+），菌落数更多，说明根系分泌
物对根瘤菌的吸引作用更强，D正确。
故选：C。
【点评】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记菌落接种的方法及其应用，掌握真核细胞和原
核细胞的异同，能够从题干中获取有效信息，意在考查考生的识记能力和分析能力。
12．DHA被称为“脑黄金”，是人体所必需的一种不饱和脂肪酸，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂。
DHA性质活泼，极易与氧气反应，温度过高易分解。中科院合肥物质科学研究院利用单细胞真菌裂壶
藻发酵法生产 DHA，成本低而且品质好，常用作营养剂添加到婴儿乳品中。下列表述错误的是
（ ）
A．培养时，使用血细胞计数板计算的裂壶藻数量往往多于实际活菌数
B．接种注意全程无菌操作，实验结束后的培养基不能直接丢弃
C．提取DHA前需要对裂壶藻进行干燥处理，恒温箱烘烤效果优于低温真空干燥
D．提纯后的DHA在室温下常呈液态
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；微生物的数量测定．
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【专题】材料分析题；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
【分析】微生物培养过程中要进行无菌操作，防止杂菌污染，培养基常采用高压蒸汽灭菌法灭菌，微
生物的接种常采用平板划线法和稀释涂布平板法。
【解答】解：A、血细胞计数板计算的裂壶藻数量包括死菌和活菌，所以往往多于实际活菌数，A正
确；
B、接种注意全程无菌操作，实验结束后的培养基要经过灭菌处理后才能丢弃，B正确；
C、DHA不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，所以提取 DHA前需要对裂壶藻进行干燥处理；由于
“DHA性质活泼，极易与氧气反应，温度过高易分解”，故低温真空干燥效果优于恒温箱烘烤，C错
误；
D、DHA性质活泼，极易与氧气反应，温度过高易分解，所以提纯后的DHA在室温下常呈液态，D正
确。
故选：C。
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
分析问题的能力是解答本题的关键。
13．江西物华天宝，人杰地灵，历史上不仅名人辈出，美食也是数不胜数，如湖口酒糟鱼、都昌豆豉、
鄱阳腐乳、南昌啤酒等等。下列叙述正确的是（ ）
A．酒糟是以糯米为原料，经蒸煮后在氧气充足的条件下发酵而成的
B．参与腐乳形成的主要微生物和醋酸菌类似，也没有成形的细胞核
21C．豆豉制作过程中，多种微生物产生的蛋白酶将豆子中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸
D．工业生产啤酒过程中，最核心的步骤是发酵罐内的发酵，发酵完毕后需要对啤酒灭菌处理
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；发酵与传统发酵技术；果酒、果醋的制作．
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【专题】正推法；从生物材料提取特定成分；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】C
【分析】不同种类的微生物，一般需要不同的培养温度和培养时间。酿酒需要酵母菌，制作腐乳需要
毛霉、曲霉等。
【解答】解：A、酒糟是以糯米为原料，经蒸煮后先通氧一段时间，然后在无氧条件下发酵而成的，A
错误；
B、参与腐乳形成的主要微生物是真核生物毛霉，有成形的细胞核，B错误；
C、豆豉制作过程中，经过微生物的发酵，豆子中的蛋白质会被蛋白酶分解成小分子肽和氨基酸，C正
确；
D、工业生产啤酒过程中，发酵完毕后需要对啤酒进行消毒，不需要对啤酒灭菌处理，D错误。
故选：C。
【点评】本题主要考查发酵工程、果醋、果酒的制作的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知
识准确答题。
14．为获得纯化的酵母菌菌落，进行如图所示的平板划线操作，划线的顺序为①→②→③→④→⑤。
下列有关叙述错误的是（ ）
A．马铃薯琼脂培养基可采用湿热灭菌的方法
B．进行划线操作时，培养皿盖不能完全打开，且需要在酒精灯火焰旁进行
C．完成划线操作后，将平板正立放入28℃左右的恒温培养箱中培养
D．在区域①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物
【考点】微生物的纯培养．
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【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】C
22【分析】平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同：
（1）第一次操作：杀死接种环上原有的微生物；
（2）每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的
末端；
（3）划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
【解答】解：A、湿热灭菌的方法通常用于实验室大部分培养基的灭菌，A正确；
B、进行划线操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，B正确；
C、划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，有利于表面的水分更好的挥发和防止皿盖上
的水珠落入培养基造成污染，C错误；
D、平板划线分离法是把混杂在一起的微生物或同一种微生物群体中的不同细胞，用接种环在培养基
表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生成繁殖成单菌落。因此在区域
①～⑤中，最有可能在区域⑤中得到酵母菌的纯培养物，D正确。
故选：C。
【点评】本题考查微生物的纯培养，要求考生识记、掌握接种微生物常用的两种方法，能结合所学的
知识准确答题。
15．啤酒工业化生产的原料为大麦，其工业化生产流程包括 8个环节：发芽→焙烤→碾磨→糖化→蒸煮
→发酵→消毒→终止，其中发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。下列分析正确的是（ ）
A．腐乳、果醋和啤酒都是在厌氧条件下发酵产生的食品
B．后发酵阶段指将发酵产物置于高温、通风环境下储存一段时间
C．酒精的产生和积累主要在后发酵阶段完成
D．蒸煮的目的是终止酶的进一步作用和杀灭杂菌
【考点】果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】啤酒发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生
成都是在主发酵阶段完成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段
时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。发酵温度和发酵时间随着啤酒品种和口味要求的
不同而有所差异。
【解答】解：A、果醋的发酵是在有氧条件下发酵产生的食品，A错误；
B、后发酵阶段指将发酵产物置于低温、密闭环境下储存一段时间，B错误；
C、酒精的产生和积累主要在主发酵阶段完成，C错误；
D、淀粉酶具有作用条件温和的特点，高温会使其失去活性，故蒸煮可以终止淀粉酶的进一步作用，
终止糖化过程，且高温也可对糖浆灭菌，D正确。
23故选：D。
【点评】本题考查发酵的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问
题的能力是解答本题的关键。
16．某生物活动小组为探究当地农田土壤中分解尿素的细菌的数量，进行了取样、系列梯度稀释、涂布
平板、培养、计数等步骤，实验操作过程如图所示。下列说法正确的是（ ）
A．制备土壤悬液时，先将10g土壤进行高温灭菌，再倒入90mL无菌水中
B．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是尿素分解菌
C．用稀释涂布平板法进行尿素分解菌计数时，结果往往比实际值高
D．以未接种的培养基为对照组，可判断培养基灭菌是否合格
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
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【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】D
【分析】微生物筛选的关键是选择培养基的使用，通过选择培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需
要的微生物，其他微生物在选择培养基上是不能生存或生存受到抑制。
【解答】解：A、先将10g土壤进行梯度稀释，再倒入90mL无菌水，不需要对土壤灭菌，A错误；
B、以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，还有可能是自生固氮菌，因此需要对筛
选的尿素分解菌进行鉴定，B错误；
C、因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行尿素
分解菌计数时，结果往往比实际值低，C错误；
D、以未接种的培养基为对照组，能判断培养基是否被杂菌污染，D正确。
故选：D。
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
分析问题的能力是解答本题的关键。
17．油炸臭豆腐闻着臭吃着香，是有名的风味小吃。臭豆腐制作时需要将豆腐浸入含乳酸菌、毛霉菌等
微生物的卤汁中发酵。下列叙述正确的是（ ）
A．制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基
B．乳酸菌发酵产生了乳酸和二氧化碳，需定期排气
24C．豆腐发酵时需要密封处理，有利于毛霉菌的生长
D．豆腐发酵时不会有杂菌的繁殖，故无需严格灭菌
【考点】发酵与传统发酵技术．
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【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】A
【分析】传统的腐乳制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子；而现代的腐乳生产是
在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品的
质量。
【解答】解：A、制作臭豆腐时，豆腐相当于微生物生长的培养基，豆腐中的蛋白质被分解为小分子
肽和氨基酸，易于消化吸收，A正确；
B、乳酸菌通过乳酸发酵可以产生乳酸，不产生CO ，B错误；
2
C、毛霉的代谢类型为异养需氧型，故豆腐发酵时不应密封处理，C错误；
D、家庭制作腐乳生产条件不易控制，容易受杂菌污染，豆腐在卤汁中发酵的过程中有杂菌繁殖，D
错误。
故选：A。
【点评】本题主要考查传统发酵技术的应用的内容，要求考生识记腐乳的制作的相关知识，并结合所
学知识准确答题。
18．粪肠球菌是一种栖息于人体肠道的益生菌，当肠黏膜被破坏时，肠道内的粪肠球菌及其代谢产生的
毒素可能进入人体内导致某些疾病的发生。科研人员进行了青霉素和某种噬菌体对粪肠球菌杀灭效果
的相关研究。下列叙述正确的是（ ）
A．粪肠球菌寄生于人体肠道，利用肠黏膜细胞的核糖体合成菌体蛋白
B．采用稀释涂布平板法接种，培养菌落数量达到30～300时进行计数
C．长期使用青霉素治疗粪肠球菌感染性疾病，可能会诱导耐药菌产生
D．用噬菌体治疗粪肠球菌导致的疾病，对机体内正常菌群的影响较小
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
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【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】D
【分析】病毒没有细胞结构，不能独立进行生命活动，必须借助于活细胞才能代谢和繁殖。常见的病
毒有：艾滋病毒、流感病毒、SARS病毒、烟草花叶病毒、噬菌体等等。病毒的成分包括蛋白质和核
酸（DNA或RNA）。
【解答】解：A、粪肠球菌利用自身细胞核糖体合成自身蛋白质，A错误；
B、采用稀释涂布平板法接种，培养至菌落数量稳定时，选择菌落数为30﹣300平板进行计数，B错误；
C、长期使用青霉素治疗粪肠球菌感染性疾病，不是诱导耐药菌产生，而是耐药菌被筛选出来，C错误；
25D、用某种噬菌体治疗粪肠球菌导致的疾病，只会灭杀粪肠球菌，对机体内其他正常菌群的影响较小，
D正确。
故选：D。
【点评】本题主要考查微生物的选择培养、病毒的相关知识，要求考生能够结合所学知识准确判断各
选项，属于识记和理解层次的考查。
19．将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如图所示实验。下列叙述正确的是（ ）
A．实验中接种至基本培养基方法是平板划线法
B．基本培养基上出现的少量菌落一定是单菌落
C．基本培养基中包含菌株a和b的特殊营养物质
D．菌株a和b需要的特殊营养物质有所不同
【考点】微生物的纯培养．
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【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用．
【答案】D
【分析】单独培养菌株a和b时，培养基中均无法生长菌落，而当a和b共同培养时，培养基中有少量
菌落产生，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊营养物质，因此它们生长所需要
的特殊营养物质一定有所不同。
【解答】解：A、根据菌株a和菌株b混合后菌落的分布情况可知，接种至基本培养基时宜用稀释涂布
平板法，A错误；
B、基本培养基出现的少量菌落不一定都为单菌落，也有可能是重叠的菌落，B错误；
C、单独培养菌株a和b时，培养基中均无法生长菌落，而当a和b共同培养时，培养基中有少量菌落
产生，因此培养基中无法提供它们单独生长的特殊营养物质，C错误；
D、a单独培养和b单独培养均不能生长，a和b混合培养能生长，说明它们能够相互提供相应的特殊
营养物质，而无法独立生长，因此它们所需要特殊营养物质有所不同，D正确。
故选：D。
【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
26分析问题的能力是解答本题的关键。
20．小曲白酒香醇柔和，深受广大消费者青睐。如图为接种小曲（含酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、好氧性
霉菌等），采用传统发酵方法酿造小曲白酒的工艺流程，图中泡粮水必须用热水，以减少自然酶活性
和杂菌对淀粉的消耗。下列相关分析错误的是（ ）
A．泡粮：其目的是提高种子自由水含量，提高发芽率
B．撒曲糖化：接种发酵菌促使淀粉分解形成糖浆
C．装坛发酵：主要利用酵母菌无氧呼吸产生酒精
D．蒸馏：加热使蒸汽中酒精含量增加，提高白酒的酒精度
【考点】发酵与传统发酵技术．
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【专题】模式图；正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】A
【分析】参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生
物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。
【解答】解：A、泡粮的目的是提高种子自由水含量，使蒸粮容易蒸熟，A 错误；
B、撒曲糖化：接种发酵菌，主要利用霉菌产生的淀粉酶将淀粉分解形成糖浆，B正确；
C、酵母菌属于兼性厌氧生物，装坛发酵主要是利用酵母菌无氧呼吸产生酒精，C正确；
D、蒸馏的目的是加热使蒸汽中酒精含量增加，提高白酒的酒精度，D正确。
故选：A。
【点评】本题主要考查发酵与传统发酵技术的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答
题。
二．解答题（共5小题）
21．紫茎泽兰根、茎、种子皆可繁殖且能产生多种化感物质抑制其他生物生长，是我国危害最严重的入
侵植物。在防除过程中，紫茎泽兰残体亟待无害化处理与资源化利用。
27（1）紫茎泽兰入侵会造成 生物多样性 降低或丧失，影响当地生态系统的 稳定 性。
（2）以紫茎泽兰为原料，野外就近接种可降解化感物质的高温纤维梭菌（最适温度 60～65℃）进行
堆肥发酵，检测堆肥温度和堆肥基质中两种主要化感物质含量变化，如图 1。据图推测5～10天化感
物质含量下降速率最快的原因：一方面 高温纤维梭菌数量较多 ，另一方面 堆肥温度达到高温
纤维梭菌的最适温度，使其代谢旺盛 ，有利于化感物质的快速分解。
（3）将未经堆肥（UA）和经过堆肥（CA）的紫茎泽兰浸提液加入灭菌土壤中，接种三种土壤真菌后
检测生长情况，如图2。结果表明 堆肥处理降低了紫茎泽兰（浸提液）对三种土壤真菌生长的抑制
作用 。将UA组、CA组紫茎泽兰风干粉碎后加入到种植有玉米幼苗的土壤中，60天后检测发现UA
组玉米的生物量显著低于对照，而CA组则显著高于对照。
（4）与上述研究相关叙述，正确的有 CDE 。（多选）
A.堆肥过程中堆肥基质的有机物总量增加，肥力增强
B.发酵初期堆肥温度升高有利于堆肥中杂菌的消毒和灭菌
C.发酵初期堆肥温度升高有利于高温纤维梭菌占据竞争优势
D.堆肥发酵可分解紫茎泽兰的根、茎、种子，降低其扩散的风险
E.堆肥发酵可减弱化感物质对农田生物群落其他生物的危害
F.无害化的紫茎泽兰还田主要体现了生态工程的协调原理
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；生态系统稳定性的概念和类型；生态工程
28所遵循的基本原理．
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【专题】图文信息类简答题；从生物材料提取特定成分．
【答案】（1）生物多样性 稳定
（2）高温纤维梭菌数量较多 堆肥温度达到高温纤维梭菌的最适温度，使其代谢旺盛
（3）堆肥处理降低了紫茎泽兰（浸提液）对三种土壤真菌生长的抑制作用
（4）CDE
【分析】入侵种往往在入侵地能够大量繁殖，其原因是入侵地的生长条件适宜、缺乏捕食者等天敌、
入侵种本身竞争力强、适应性强，在与本地物种的竞争中占据优势，生物入侵会导致入侵地生物多样
性降低，生态系统的自我调节能力降低，稳定性降低。
【解答】解：（1）由于入侵地环境比较适合紫茎泽兰繁殖，并且入侵地没有其天敌（例如捕食者），
在与本地物种竞争中更加占据优势等多方面原因，使得紫茎泽兰能在入侵地大量繁殖；紫茎泽兰泛滥
后降低了入侵地群落的物种丰富度，使生态系统生物多样性降低、营养结构更加简单，自我调节能力
减弱，稳定性也降低。
（2）图1中，5～10天温度64℃左右，处于高温纤维梭菌最适温度范围内，高温纤维梭菌代谢旺盛，
迅速增殖，产生较多的高温纤维梭菌，使5～10天化感物质含量下降速率最快。
（3）图2中，UA组与对照组相比，菌落生长情况较差，说明紫茎泽兰（浸提液）对三种土壤真菌生
长有抑制作用，CA组的菌落生长情况比UA组好，与对照组无明显差异，说明堆肥处理降低了紫茎泽
兰（浸提液）对三种土壤真菌生长的抑制作用。
（4）A、堆肥过程中堆肥基质的有机物总量减少，肥力增强，A错误；
B、发酵初期堆肥温度升高有利于堆肥中高温纤维梭菌的生长繁殖，B错误；
C、发酵初期堆肥温度升高，接近高温纤维梭菌的最适温度60～65℃，其他微生物可能在高温下死亡，
有利于高温纤维梭菌占据竞争优势，C正确；
D、堆肥发酵可以降低了紫茎泽兰中的化感物质对土壤微生物生长的抑制作用，有利于分解紫茎泽兰
的根、茎、种子，降低其扩散的风险，D正确；
E、堆肥发酵可以降低了紫茎泽兰中的化感物质对土壤微生物生长的抑制作用，有利于分解紫茎泽兰
的根、茎、种子，降低其扩散的风险，可减弱化感物质对农田生物群落其他生物的危害，E正确；
F、无害化的紫茎泽兰还田主要体现了生态工程的循环原理，F错误。
故选：CDE。
故答案为：
（1）生物多样性 稳定
（2）高温纤维梭菌数量较多 堆肥温度达到高温纤维梭菌的最适温度，使其代谢旺盛
（3）堆肥处理降低了紫茎泽兰（浸提液）对三种土壤真菌生长的抑制作用
（4）CDE
29【点评】本题考查发酵工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，具备运用所学知识综
合分析问题的能力是解答本题的关键。
22．产脂肪酶酵母可用于处理含油废水，同时可获得蛋白质。有研究人员尝试从餐馆厨房污水排放沟取
样，筛选产脂肪酶酵母菌株，初步流程如图1所示。据图回答下列问题：
（1）Ⅰ号培养基中应选择 脂肪 作为唯一的碳源。
（2）过程③的接种方式为 稀释涂布平板法 。要判断所制备的培养基是否具有筛选作用，同时还
需将样本接种到牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上，若 牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上的菌落数明显
多于制备的选择培养基 ，说明具有筛选作用。
（3）酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母菌的絮凝能力，
有助于发酵结束时细胞和产物的分离，可大幅节约生产成本。科研人员发现酵母菌的 R基因对絮凝能
力有一定的抑制作用，图2表示科研人员利用同源重组（在两个DNA分子的同源序列之间直接交换的
一种重组）基因敲除技术敲除R基因的过程。
①研究人员将整合了lox序列的庆大霉素抗性基因导入酵母菌，lox﹣庆大霉素抗性基因通过同源重组
的方式整合到酵母菌基因组中，重组片段上庆大霉素抗性基因的作用是 作为标记基因，筛选出 R 基
因敲除的突变菌株 。利用PCR技术检测lox﹣庆大霉素抗性基因是否替换R基因，扩增时引物应选
择图3中的 引物 1 和引物 6 。在PCR延伸阶段中 耐高温的 DNA 聚合酶 催化脱氧核苷酸连接
30到引物上。
②将导入PC质粒的酵母菌，接种于添加 乳糖 的马铃薯琼脂培养基中，获得敲除R基因且无庆大
霉素抗性基因标记的酵母菌。Cre酶与基因工程中 限制酶 （工具酶）作用类似，上述过程中其发
挥作用时需断裂 4 个磷酸二酯键。
【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用．
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【专题】图文信息类简答题；微生物的分离、培养和应用．
【答案】（1）脂肪
（2）稀释涂布平板法 牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上的菌落数明显多于制备的选择培养基
（3）作为标记基因，筛选出R基因敲除的突变菌株 引物 1和引物6 耐高温的DNA聚合酶
乳糖 限制酶 4
【分析】接种微生物的方法主要是稀释涂布平板法和平板划线法；稀释涂布线法：逐步稀释菌液进行
一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养；平板划
线法由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式
的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，
微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
【解答】解：（1）根据Ⅰ号培养基的功能，Ⅰ号培养基为选择培养基，需要使用以脂肪为唯一的碳源，
目的是筛选能产脂肪酶的酵母菌株。
（2）Ⅰ号培养基上菌落分布均匀，因此过程③的接种方式为稀释涂布平板法。要判断所制备的培养
基是否具有筛选作用，同时还需将样本接种到含有牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上，由于多种微生物
都能利用牛肉膏和蛋白胨，因此若含有牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上菌落数明显多于所制备的选择
培养基，则说明该选择培养基具有筛选作用。
（3）①由题图可知，利用庆大霉素抗性基因同源重组替换了R基因，若酵母菌具有庆大霉素抗性，
说明其R基因被成功敲除，因此庆大霉素抗性基因作用是作为标记基因，用于筛选出R基因敲除突变
菌。
PCR扩增时，应选择一对方向相反的引物，且引物应与目的基因的3'端结合，该过程的目的是通过
PCR技术证明该菌基因组中R基因已被lox﹣庆大霉素抗性基因替换，即扩增基因应为lox﹣庆大霉素
抗性基因，据图可知，应选择引物1和引物6。在PCR延伸阶段，耐高温的DNA聚合酶（TaqDNA聚
合酶）催化脱氧核苷酸连接到引物的3'端，逐渐延伸形成子链。
②给酵母菌导入PC质粒，该质粒上的启动子是乳糖诱导型启动子，所以需要在培养基中添加乳糖，
进而诱导该质粒上的Cre基因表达出产物Cre酶，该酶可以特异性识别lox序列并敲除目标基因即庆大
霉素抗性基因，导致该酵母菌失去庆大霉素抗性，即筛选出敲除 R基因且无庆大霉素抗性基因标记的
31R菌。限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷
酸之间的磷酸二酯键断裂．Cre酶能特异性识别lox序列并敲除目标基因，其功能类似于基因工程中的
限制酶。Cre酶切割两次，需断裂4个磷酸二酯键。
故答案为：
（1）脂肪
（2）稀释涂布平板法 牛肉膏和蛋白胨的完全培养基上的菌落数明显多于制备的选择培养基
（3）作为标记基因，筛选出R基因敲除的突变菌株 引物 1和引物6 耐高温的DNA聚合酶
乳糖 限制酶 4
【点评】本题考查实验室微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，具备运用所
学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。
23．我国科学家利用如图所示的液态厌氧发酵工艺，实现了利用乙醇梭菌高效产出乙醇和单细胞蛋白。
回答以下问题：
（1）据图分析可知，该培养基的碳源是 CO 、 CO ，乙醇梭菌属于 自养型 （自养型/异养
2
型）细菌。
（2）乙醇梭菌在发酵罐中的发酵过程属于厌氧发酵，其发酵过程 需要 （需要/不需要）搅拌，目
的是 使乙醇梭菌和营养物质充分接触 。
（3）发酵工程的中心环节是 发酵罐内的发酵过程 ，在该环节中需要严格控制温度、pH等发酵条
件，原因是 pH 、温度等会影响微生物的发酵产物 。
（4）通过该工艺高效生产清洁能源乙醇，可降低生态足迹，同时还可以获得单细胞蛋白，该过程获得
的单细胞蛋白是指 乙醇梭菌 ，可通过 过滤、沉淀 等方法从发酵液中获得单细胞蛋白。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．
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【专题】模式图；正推法；从生物材料提取特定成分．
【答案】（1）CO、CO 自养型
2
（2）需要 使乙醇梭菌和营养物质充分接触
（3）发酵罐内的发酵过程 pH、温度等会影响微生物的发酵产物
（4）乙醇梭菌 过滤、沉淀
【分析】1、单细胞蛋白是指通过发酵获得的大量微生物菌体。
2、据图可知，乙醇梭菌发酵时，培养基中仅含无机盐，可以以工业尾气中的CO、CO 为碳源合成乙
2
醇及蛋白质，发酵时为厌氧发酵。
32【解答】解：（1）据图可知，乙醇梭菌发酵时，培养基中仅含无机盐，可以以工业尾气中的 CO、
CO 为碳源合成乙醇及蛋白质，由于乙醇梭菌可以将无机物CO、CO 转化为有机物，所以乙醇梭菌属
2 2
于自养型细菌。
（2）乙醇梭菌在发酵罐中的发酵过程属于厌氧发酵，其发酵过程仍需要搅拌，目的是使乙醇梭菌和营
养物质充分接触，加速乙醇梭菌的繁殖和代谢。
（3）发酵工程的中心环节是发酵罐内的发酵过程，在该环节中需要严格控制温度、pH等发酵条件，
原因是pH、温度等会影响微生物的发酵产物。
（4）单细胞蛋白是指乙醇梭菌菌体本身，可通过过滤、沉淀等方法从发酵液中获得单细胞蛋白。
故答案为：
（1）CO、CO 自养型
2
（2）需要 使乙醇梭菌和营养物质充分接触
（3）发酵罐内的发酵过程 pH、温度等会影响微生物的发酵产物
（4）乙醇梭菌 过滤、沉淀
【点评】本题主要考查发酵工程的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。
24．大肠杆菌是一种条件致病菌，一定数量的大肠杆菌有利于胃肠蠕动，过量的大肠杆菌则容易引发腹
痛、腹泻等症状。某同学喝了自酿葡萄酒后出现腹痛、腹泻现象。他怀疑酒中大肠杆菌含量超标，于
是开展了葡萄酒的检测实验。实验的部分步骤如下：
①配制培养基
②灭菌、冷却
③接种
④培养与观察
请回答下列问题：
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 温度 、 酸碱度 和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 易培养 、 生活周期短 等优点，因此
常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在大肠杆菌培养操作过程中，为防止杂菌污染，静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫
外线能 使蛋白质变性；损伤 DNA 的结构 （答出两点）。
（3）酵母菌和大肠杆菌的代谢类型都是异养兼性厌氧型，但一般认为如果控制好发酵条件，葡萄酒是
不易被大肠杆菌污染的，原因是 呈酸性的发酵液中酵母菌可以生长繁殖，而大肠杆菌的生长繁殖受
到抑制 。
（4）将接种后的平板和一个空白平板放在适宜温度下培养适宜的时间，设置空白平板对照的目的是
检测培养基灭菌是否合格 。通常，对获得的纯菌种还可以依据 形状、大小、颜色 （写出两点）
33等菌落特征对细菌进行初步的鉴定分类。
（5）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使估计值更接近实际值，除应严格操作、多
次重复外，还应保证待测样品稀释的 比例合适 。
【考点】微生物的纯培养．
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【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．
【答案】（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短
（2）使蛋白质变性；损伤DNA的结构
（3）呈酸性的发酵液中酵母菌可以生长繁殖，而大肠杆菌的生长繁殖受到抑制
（4）检测培养基灭菌是否合格 形状、大小、颜色
（5）比例合适
【分析】微生物培养的关键是无菌操作。使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢
和孢子的过程称为灭菌，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。消毒是指用较为温和的
物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒
法、紫外线或化学药物消毒法等。
【解答】解：（1）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养和生活周期短等特点，
常作为遗传学研究的实验材料。在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度
和渗透压等条件。
（2）微生物培养中，需要对培养基和所用器具进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消毒，静止空
气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。
（3）酵母菌和大肠杆菌的代谢类型都是异养兼性厌氧型，但一般认为如果控制好发酵条件，葡萄酒是
不易被大肠杆菌污染的，在酵母菌酒精发酵时会产生CO ，溶于发酵液会使pH下降，呈酸性的发酵液
2
中酵母菌可以生长繁殖，而大肠杆菌的生长繁殖受到抑制。
（4）设置空白平板对照的目的是检测培养基灭菌是否合格，不同的微生物在培养基上形成的菌落有差
异，一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色以及
隆起程度等。
（5）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、
多次重复外，还应保证待测样品稀释的比例合适。
故答案为：
（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短
（2）使蛋白质变性；损伤DNA的结构
（3）呈酸性的发酵液中酵母菌可以生长繁殖，而大肠杆菌的生长繁殖受到抑制
（4）检测培养基灭菌是否合格 形状、大小、颜色
（5）比例合适
34【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
分析问题的能力是解答本题的关键。
25．乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种由34个氨基酸组成的小肽，对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引
起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中
获得多株产乳链菌肽的菌株，进行了如下实验：
（1）筛选菌株：将革兰氏阳性菌均匀涂布于平板上，将已经灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培
养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察 抑菌圈的大小 ，选取抑制作
用最强的菌株，图1所示为培养的结果，下列分析正确的是 BCD 。
A．有些未形成抑菌圈可能是病原菌对该抗生素很敏感
B．有些抑菌圈很小可能与该抗生素扩散速度太慢有关
C．若抑菌圈内出现一个菌落，则该菌落可能由抗药性变异菌体形成
D．从抑菌圈边缘挑取病原菌继续培养，连续选择几代后抑菌圈的直径会变小
（2）纯化菌株：
A过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，目的是 维持培养基的渗透
压 。B过程常用的方法是 高压蒸汽灭菌法 。D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是
琼脂 。E过程需将纯化的菌株用 接种环 （填工具）将纯化的菌株接种于 固体斜面 培养基
中4°C保存。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）还是
非溶菌性杀死细菌，科研人员活将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革
兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如图2所示。
35对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为 稀释涂布平板法 。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作
用方式为 非溶菌性杀死细菌 ，理由是 曲线 3 活菌数降为零，说明是杀死细菌；除去菌体的上
清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶菌 。
（4）人们一直都试图将乳链菌肽当作一种抗生素用于医疗方面，由于 易被人体消化道内的蛋白酶
水解 ，溶解度不高，以及在其它方面存在着一些缺陷，目前还不适合作为口服药使用。据题推测乳
链菌肽在食品生产中的应用价值是 作为防腐剂 。
【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．
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【专题】坐标曲线图；模式图；微生物的分离、培养和应用；从生物材料提取特定成分．
【答案】（1）抑菌圈的大小 BCD
（2）维持培养基的渗透压 高压蒸汽灭菌法 琼脂 接种环 固体斜面
（3）稀释涂布平板法 非溶菌性杀死细菌 曲线 3活菌数降为零，说明是杀死细菌；除去菌体
的上清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶菌
（4）易被人体消化道内的蛋白酶水解 作为防腐剂
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的
开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单
个菌落。
2、实验室中微生物的筛选的原理：是人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生
物生长，用于筛选目的菌株的培养基称为选择培养基。
【解答】解：（1）由于含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，杀菌
物质杀死细菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈，抑菌圈越大说明杀菌物质的杀菌能力越大，所以本实验
中需要对比观察抑菌圈的大小，选取抑制作用最强的菌株。
A、未出现抑菌圈可能的原因是该病原菌对该抗生素不敏感，A错误；
B、不同的抑菌药物的抑菌圈直径，因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，故抗生素在平板
上的扩散速度太慢可能会导致抑菌圈很小，B正确；
C、部分抑菌圈内出现零散细小的菌落，说明这些菌落对该抗生素具有抗性，可能是菌株出现了抗药
性突变，C正确；
D、从抑菌圈边缘的菌落上挑取病原菌继续培养，连续选择几代后抑菌圈的直径会变小，因为经过多
次选择后，菌体对抗生素的抗性越来越强，因而抑菌圈会变小，D正确。
故选：BCD。
（2）A过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持渗透压；B过程
36是对培养基进行灭菌，常用的方法是高压蒸汽灭菌法；D过程所需的是固体培养基，而C过程所需的
是液体培养基，因此D过程培养基中增加的物质是凝固剂，通常是琼脂；E过程需将纯化的菌株接种
于固体斜面培养基中4℃保存，这是菌种临时保存的常用方法，所用工具是接种环。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式究竟是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）、
非溶菌性杀死细菌，实验组为加入乳链菌肽的革兰氏阳性菌菌液，对照组为加入等量灭活乳链菌肽的
革兰氏阳性菌菌液，对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为稀释涂布平板法；由图可知，由于曲线 3活菌
数降为零，说明是非溶菌性杀死细菌；除去菌体的上清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶菌。
（4）乳链菌肽是蛋白质，易被人体消化道内的蛋白酶水解，溶解度不高，在其它方面存在着一些缺陷，
因而目前还不适于药用；根据题干，乳链菌肽能有效地杀死或抑制引起食品腐败的革兰氏阳性菌，对
人体无毒，推测乳链菌肽在食品生产中的应用价值是作为防腐剂。
故答案为：
（1）抑菌圈的大小 BCD
（2）维持培养基的渗透压 高压蒸汽灭菌法 琼脂 接种环 固体斜面
（3）稀释涂布平板法 非溶菌性杀死细菌 曲线 3活菌数降为零，说明是杀死细菌；除去菌体
的上清液中核酸含量没有明显变化，说明不是溶菌
（4）易被人体消化道内的蛋白酶水解 作为防腐剂
【点评】本题主要考查发酵工程、微生物的选择培养（稀释涂布平板法）的内容，要求考生识记相关
知识，并结合所学知识准确答题。
37考点卡片
1．生态系统稳定性的概念和类型
【知识点的认识】
（1）生态系统维持或恢复自身结构与功能处于相对平衡状态的能力，叫做生态系统的稳定性。包括抵抗
力稳定性和恢复力稳定性两个方面。
（2）生态系统具有稳定性的原因是生态系统具有自我调节能力。生态系统具有自我调节能力的基础是负
反馈调节。
（3）抵抗力稳定性：生态系统抵抗外界干扰使自身的结构与功能保持原状的能力（不受损害）
（4）恢复力稳定性：生态系统受到外界干扰因素的破坏后恢复原状的能力（遭到破坏，恢复原状）。
（5）一般来说，生态系统的组分越多，食物网越复杂，其自我调节能力就越强，抵抗力稳定性就越高，
恢复力稳定性越低。抵抗力稳定性和恢复力稳定性在不同的生态系统中能力的大小是不同的，而且两者
一般是相反的关系，但在自然气候恶劣的条件下，两者往往都比较弱，如北极苔原生态系统。
【命题方向】
我们经常在媒体上看到“生态平衡”的概念，下列关于生态平衡和生态系统稳定性的叙述，不正确的是
（ ）
A．生态平衡是生态系统发展到一定阶段，生态系统保持其结构与功能相对稳定的状态
B．生态系统的稳定性是生态系统维持或恢复自身结构与功能处于相对平衡状态的能力
C．生态平衡并不是指生态系统的一成不变，而是一种动态平衡
D．生态平衡与生态系统的稳定性没有关系
分析：1、生态系统的稳定性是指生态系统都具有一定的自我调节能力，包括抵抗力的稳定性和恢复力的
稳定性两个方面。
2、生态平衡是指生态系统中各种生物的数量和比例总是维持在相对稳定的状态。
解答：A、生态平衡是生态系统发展到一定阶段，生态系统保持其结构与功能相对稳定的状态，A正确；
B、生态系统的稳定性是生态系统维持或恢复自身结构与功能处于相对平衡状态的能力，B正确；
C、生态平衡是一个动态的平衡，生物的种类数量不是绝对不变，而是相对、持续的稳定，C正确；
D、生态系统的自动调节能力是有一定限度的，这与生物的种类和数量有关，生物的数量和种类越多，调
节能力越强，因此生态平衡与生态系统的稳定性有关，D错误。
故选：D。
点评：本题考查生态平衡和生态系统稳定性的相关知识，要求考生识记生态平衡和生态系统稳定性的含
义，掌握影响生态系统稳定性的因素，能结合所学的知识准确答题。
【解题思路点拨】
38掌握生态系统稳定性的概念和类型的相关知识是解题的关键。
2．生态工程所遵循的基本原理
【知识点的认识】
生态工程所遵循的基础和基本原理有：
生态工程以生态系统的自组织、自我调节功能为基础，遵循着整体、协调、循环、自生等生态学基本原
理。
【命题方向】
“绿水青山就是金山银山”。我们要运用生态工程对生态环境进行修复和重建，共建文明美好的家园。
下列关于生态工程的说法错误的是（ ）
A．生态工程应用了生态学和系统学等学科的基本原理和方法
B．“无废弃物农业”生态工程遵循的基本原理主要是物质循环再生原理
C．与传统工程相比，生态工程是一类少消耗、多效益、可持续的工程体系
D．“三北防护林”工程建设要考虑树种的多样性，体现了整体性原理
分析：1、生态工程是指人类应用生态学和系统学等学科的基本原理和方法，通过系统设计、调控和技术
组装，对已被破坏的生态环境进行修复、重建，对造成环境污染和破坏的传统生产方式进行改善，并提
高生态系统的生产力，从而促进人类社会和自然环境的和谐发展；
2、生态工程建设的目的是遵循物质循环规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到经济效益
和生态效益同步发展。
3、生态工程依据的生态学原理：
（1）物质循环再生原理：物质能在生态系统中循环往复，分层分级利用；
（2）物种多样性原理：物种繁多复杂的生态系统具有较高的抵抗力稳定性；
（3）协调与平衡原理：生态系统的生物数量不能超过环境承载力（环境容纳量）的限度；
（4）整体性原理：生态系统建设要考虑自然、经济、社会的整体影响；
（5）系统学和工程学原理：系统的结构决定功能原理：要通过改善和优化系统结构改善功能；系统整体
性原理：系统各组分间要有适当的比例关系，使得能量、物质、信息等的转换和流通顺利完成，并实现
总体功能大于各部分之和的效果，即“1+1＞2”。
解答：A、生态工程可应用生态学和系统学等学科的基本原理和方法，对人工生态系统进行分析、设计和
调控，或对已破坏的生态环境进行修复重建，A正确；
B、“无废弃物农业”实现了系统中的物质迁移和转化，主要体现了循环原理，B正确；
C、与传统工程相比，生态工程是一类少消耗、多效益、可持续的工程体系，C正确；
D、生态工程的整体原理要求生态系统的各组分要有适当的比例，进行生态工程建设时，要综合考虑自然、
经济和社会等多方面的因素，“三北防护林”工程建设中考虑树种的多样性是对物种多样性原理的应用
D错误。
39故选：D。
点评：本题考查生态工程的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问
题的能力是解答本题的关键。
【解题思路点拨】
掌握生态工程所遵循的基本原理的相关知识是解题的关键。
3．发酵与传统发酵技术
【知识点的认识】
（1）发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及
菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。
（2）发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的
过程。
（3）传统发酵技术是直接利用原料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发
酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。
【命题方向】
下列关于发酵与传统发酵技术的叙述，正确的是（ ）
A．发酵过程中有机物的干重和种类均减少
B．传统发酵技术都是直接利用天然原料中的微生物
C．传统发酵是以混合菌种的固体发酵及液体发酵为主
D．发酵是将原料通过微生物的代谢转化为人类所需的产物的过程
分析：发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或
直接把微生物应用于工业生产过程的一种计数。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的制备、灭菌
扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
解答：A、发酵过程中微生物代谢会消耗有机物，导致有机物的干重减少，但会有中间物质的产生，有机
物种类会增加，A错误；
B、传统发酵技术是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的发酵物中的微
生物进行发酵、制作食品的技术，B错误；
C、传统发酵是以混合菌种的固体发酵和半固体发酵为主，C错误；
D、发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需的产物的过程，
D正确。
故选：D。
点评：本题主要考查传统发酵技术的应用的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。
【解题思路点拨】
掌握发酵与传统发酵技术的相关知识是解题的关键。
404．制作泡菜
【知识点的认识】
泡菜的制作及亚硝酸盐含量的测定
1、原理
（1）泡菜的制作原理
泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸．
（2）测定亚硝酸盐含量的原理
在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰
红色染料．将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量．
2、流程
（1）泡菜的制作
（2）亚硝酸盐含量的测定操作过程
3、实验分析
（1）乳酸菌的种类分析
乳酸菌属原核生物，它是能通过发酵将糖类转化成乳酸的细菌的总称，常见的有乳酸杆菌和乳酸链球菌
所以乳酸菌不是一个种群，而是一类生物．
（2）泡菜在腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化
①发酵初期：以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌的活动为主，同时还有一部分硝酸盐还原菌活动．该时期利
用了氧气，产生了厌氧环境，乳酸菌才开始活动．此时乳酸菌和乳酸的量都比较少，而由于硝酸盐还原
菌的活动，亚硝酸盐含量有所增加．
②发酵中期：由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动增强．此时期乳酸
菌数量达到最高峰，乳酸的量继续积累．由于硝酸盐还原菌受抑制，同时形成的亚硝酸盐又被分解，因
而亚硝酸盐含量下降．所以在整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量表现为先增加后下降的趋势（如图所
示）．
41③发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制．乳酸菌数量下降，而硝酸盐还
原菌完全被抑制．
提醒 放置时间长的蔬菜中的硝酸盐易被滋生的硝酸还原菌还原成亚硝酸盐．
5．果酒、果醋的制作
【知识点的认识】
（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
C H O +6O 6CO +12H O+能量
6 12 6 2 2 2
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
C H O 2CO +2C H OH+能量
6 12 6 2 2 5
（2）利用醋酸菌制作果醋的原理
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，
再将乙醛变为醋酸。
C H O +2O CH COOH（醋酸）+2H O+2CO +能量
6 12 6 2 3 2 2
C H OH+O CH COOH（醋酸）+H O+能量
2 5 2 3 2
（提示：在变酸的酒的表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的）
【命题方向】
下列关于果酒、果醋制作的叙述，错误的是（ ）
A．糖源不足时乙醇可以作为果醋发酵的底物
B．酵母菌和醋酸杆菌都属于异养型微生物
C．乙醇发酵后期可向培养液中加入无菌水进行适当稀释再制作果醋
D．在变酸的果酒表面观察到的菌膜是酵母菌在液面大量繁殖形成的
分析：1、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才
能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖
分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30
～35℃。
422、果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁
殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无
氧呼吸产生酒精，酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～25℃；生产中是否有酒精的产生，可用酸性
重铬酸钾来检验，该物质与酒精反应呈现灰绿色。
解答：A、当缺少糖源时和有氧条件下，醋酸菌可将乙醇（酒精）氧化成醋酸，故糖源不足时乙醇可以作
为果醋发酵的底物，A正确；
B、酵母菌和醋酸杆菌都属于异养型微生物，需要利用现成的有机物维持生命活动，B正确；
C、乙醇发酵后期就大量的二氧化碳和酒精，可向培养液中加入无菌水进行适当稀释再制作果醋，醋酸菌
可将乙醇氧化成醋酸，C正确；
D、在变酸的果酒表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖形成的，D错误。
故选：D。
点评：本题考查传统发酵技术的相关知识，要求考生识记果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作原理等知识，
意在考查考生的识记和分析能力。
【解题思路点拨】
掌握果酒、果醋的制作的相关知识是解题的关键。
6．培养基的配制
【知识点的认识】
培养基一般包括：水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、无机盐，此外还要满
足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。如牛肉膏提供碳源、磷酸盐和维生素等，蛋白胨提
供氮源和维生素等。
【命题方向】
下表是培养某微生物的培养基的配方，回答下列问题。
组分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
用量 5g 10g 5g 20g 1000mL
（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、 和无机盐。上述培养基配方中能充当
碳源的成分是 。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行 处理。
（2）在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。
（3）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行 （填“消毒”或
“灭菌”）；操作者的双手需进行清洗和 ；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋
白质 ，还能损伤DNA的结构。
（4）分离纯化微生物最常使用的接种方法是 和 。
（5）在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。
分析：培养基的概念及营养构成
43（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
（2）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对 pH、特
殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养
基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
解答：（1）培养基的类型很多，但培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。牛肉膏和蛋白胨
能提供碳源和氮源。培养基配制完成后，一般还要调节pH并对培养基进行灭菌处理。
（2）在微生物培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度、渗透压等条件。
（3）灭菌是用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌；消毒是用
较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行
清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。
（4）分离纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法获得单菌落。对接种针或涂布器常用灼烧灭菌法
进行。
（5）培养微生物时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是将未接
种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。
故答案为：
（1）氮源 牛肉膏 灭菌
（2）温度 酸碱度
（3）灭菌 消毒 变性
（4）平板划线法 稀释涂布平板法
（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
点评：本题考查微生物与培养基的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合
分析问题的能力是解答本题的关键。
【解题思路点拨】
掌握培养基配制的相关知识是解题的关键。
7．无菌技术 常用的消毒和灭菌方法
【知识点的认识】
1、微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵。
2、实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃
烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通
过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以
采用这种方法灭菌。
44（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般
在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。
【命题方向】
无菌技术是微生物培养中的关键技术之一，内容主要包括消毒和灭菌。下列关于无菌技术的叙述，错误
的是（ ）
A．生物消毒法可以杀死物体内部包括芽孢和孢子在内的所有微生物
B．常用的消毒方法主要包括煮沸消毒、化学药物消毒、紫外线消毒等
C．常用的灭菌方法主要包括干热灭菌、湿热灭菌、灼烧灭菌等
D．为避免周围环境中微生物的污染，消毒灭菌后的操作应在超净工作台进行
分析：1、微生物培养过程中要进行无菌操作，关键就在于防止外来杂菌的入侵。
2、实验室常用的灭菌方法：
（1）灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃
烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通
过火焰燃烧来灭菌。
（2）干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以
采用这种方法灭菌。
（3）高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般
在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。
解答：A、杀死物体内部包括芽孢和孢子在内的所有微生物属于灭菌，消毒只能杀死物体表面或内部的部
分微生物，不包括芽孢和孢子，A错误；
B、常用的消毒方法主要包括煮沸消毒、化学药物（酒精等）消毒、紫外线消毒、巴氏消毒法等，B正确；
C、常用的灭菌方法主要包括干热灭菌、湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）、灼烧灭菌等，C正确；
D、为避免周围环境中微生物的污染，消毒灭菌后的操作应在超净工作台进行，超净工作台使用前可以用
紫外线照射30min，以杀死物体表面或空气中的微生物，D正确。
故选：A。
点评：本题考查消毒灭菌的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问
题的能力是解答本题的关键。
【解题思路点拨】
掌握无菌技术、常用的消毒和灭菌方法的相关知识是解题的关键。
8．微生物的纯培养
【知识点的认识】
（1）由单一个体繁殖所获得的微生物群体，称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。微生物的
纯培养步骤有配置培养基、灭菌、接种、分离、培养等。
45（2）微生物常见的接种的方法：
A、平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过分
区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分
离微生物的纯种。
B、稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养
基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在
培养基表面形成单个的菌落。
【命题方向】
下列有关微生物的纯培养、分离及计数的叙述，正确的是（ ）
A．培养基配方中都含有碳源、氮源、水、无机盐及琼脂等成分
B．用纤维素为唯一氮源的培养基可以选择分离出尿素分解菌
C．用稀释涂布平板法统计的样品活菌数目往往与实际数目多
D．平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，但不宜用于计数
分析：微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基，通过
分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待
分离微生物的纯种。
（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培
养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能
在培养基表面形成单个的菌落。
解答：A、培养基配方中一般都含有碳源、氮源、水、无机盐等成分，琼脂是制作固体培养基所需要的凝
固剂，A错误；
B、用纤维素为唯一碳源的培养基可以选择分离出纤维素分解菌，用尿素为唯一氮源的培养基可以选择分
离出尿素分解菌，B错误；
C、利用稀释涂布平板法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，所以统计
结果比活菌实际数目低，C错误；
D、平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散，但平板划线法不能对微生物进行计数，D正确。
故选：D。
点评：本题主要考查的是培养基的配制、微生物的纯培养以及微生物的数量测定的相关知识，意在考查
学生对基础知识的理解掌握，难度适中。
【解题思路点拨】
掌握微生物的纯培养的相关知识是解题的关键。
9．微生物的选择培养（稀释涂布平板法）
46【知识点的认识】
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
1．分离菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的筛选
①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出
来的。
（2）实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物
生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，
以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，
所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素．配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分
解尿素的细菌。
2．统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（间接）
①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
（2）利用显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一
氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4．实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。
【命题方向】
自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中氮气的细菌，科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能
力测定的研究，部分实验流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
47A.培养自生固氮菌时，可用牛肉膏蛋白胨培养基，接种完成后培养皿应倒置
B.该纯化培养的方法是稀释涂布平板法，统计细菌数量时通常会低于真实值
C.步骤①获取土壤一般来自深层土壤，为防止其他杂菌污染可对获取土壤灭菌处理
D.若④的平板上菌落平均数为58个，则每克土壤中含有的固氮菌约5.8×105个
分析：培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培
养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉
膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的
基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质和氧气的要求。
解答：A、培养自生固氮菌时，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培养基含有氮源，A错误；
B、该纯化培养的方法是稀释涂布平板法，由于多个细菌连在一起时长出来的是单个菌落，因此统计细菌
数量时通常会低于真实值，B正确；
C、步骤①获取土壤一般来自浅层土壤，对土壤灭菌处理时也杀死了固氮菌，C错误；
D、10g土壤加到90mL无菌水后，稀释了10倍，在④中相当于稀释了104倍，若在④的平板上统计的
菌落的平均数量为58个，则每克土壤中含有的固氮菌为58÷0.1×104＝5.8×106个，D错误。
故选：B。
点评：本题主要考查微生物培养的相关知识，难度适中。
【解题思路点拨】
掌握稀释涂布平板法的相关步骤，结合题干进行分析解答
10．微生物的数量测定
【知识点的认识】
统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方
法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通
过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数＝（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．
11．发酵工程的基本环节
48【知识点的认识】
（1）发酵工程的基本环节有：发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，
发酵，产品的分离、提纯等方面。
（2）发酵工程的中心环节应该注意：
发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵
进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响
微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢产物的形成。
【命题方向】
发酵工程的基本环节中，其中心环节是（ ）
A．菌种的选育和扩大培养
B．培养基的配制、灭菌和接种
C．发酵罐内的发酵
D．产品的分离、提纯等
分析：发酵工程，是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，
或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、
灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
解答：在发酵过程中，要随时检测培养基中的微生物数量产物的浓度等，以及了解发酵进程，还要及时
添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH 和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁
殖，而且会影响微生物的代谢物的形成，所以发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节。
故选：C。
点评：本题考查发酵工程的相关知识，比较基础，只要考生识记发酵工程的基本环节即可正确答题，属
于考纲识记层次的考查。
【解题思路点拨】
掌握发酵工程基本环节的相关知识是解题的关键。
12．发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用
【知识点的认识】
发酵工程的应用：
在食品工业的应用：生产传统的发酵产品，生产各种各样的食品添加剂，生产酶制剂等。
在医药工业的应用：如生产抗生素、氨基酸、激素、免疫调节剂等。
在农牧业上的应用：生产微生物肥料、微生物农药、微生物饲料等。
【命题方向】
由于发酵工程生产条件温和、原料来源丰富、价格低廉等，在食品工业、医药工业、农牧业等许多领域
得到了广泛的应用，下列有关发酵工程在食品工业上应用的描述，错误的是（ ）
49A．酱油是以大豆为主要原料，利用霉菌制作而成的
B．啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，其中，酵母菌的繁殖在主发酵阶段完成，大部分糖的
分解和代谢物的生成在后发酵阶段完成
C．味精是谷氨酸棒状杆菌发酵产生的谷氨酸经过一系列处理而获得的
D．由于酶制剂催化效率高、专一性强、作用条件温和，因此在使用时要考虑酶制剂的使用量、底物的种
类以及适宜的温度和pH
分析：大麦常用于酿酒，而制作酱油常用大豆。谷氨酸棒状杆菌为需氧菌。酶的催化受温度、pH等条件
的影响。
解答：A、酱油是以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质分解成小
分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制而成的，A正确；
B、啤酒发酵的过程分为主发酵和后发酵两个阶段，但酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都
在主发酵阶段完成，主发酵结束后在低温、密闭环境下储存一段时间属于后发酵，B错误；
C、谷氨酸棒状杆菌在有氧条件下发酵产生谷氨酸，谷氨酸经过一系列处理而获得味精，C正确；
D、由于酶制剂催化效率高、专一性强、作用条件温和，因此在使用时要考虑酶制剂的使用量、底物的种
类以及适宜的温度和pH，D正确。
故选：B。
点评：本题主要考查发酵工程的相关知识，要求学生有一定的理解分析能力，能够结合题干信息和所学
知识进行分析应用。
【解题思路点拨】
掌握发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用是解题的关键。
13．基因工程在农牧、医疗、食品等方面的应用
【知识点的认识】
1、植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质．
2、动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物．
3、基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用．
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