文档文本内容
专题21 发酵工程
考点
十年考情（2016-2025）
命题趋势
考点1 微生
物的培养与应
用
（10 年10
考）
2025·黑吉辽蒙：选择培养基、微生物接种方
法；江苏：制备培养基、微生物接种方法；山
东：选择培养基、平板划线法；湖南：微生物
计数和分离；
2024·江西：微生物的扩大培养、代谢产物的提
取；湖南：微生物平板划线和培养的具体操
作；浙江：培养基成分；河北：无菌操作；吉
林：微生物的纯培养；全国： 甘肃、安徽：微
生物的纯培养；接种方法；
2023·北京：培养基的成分、选择培养基；山
东：选择培养基；
2022·天津、辽宁、江苏、海南、湖北、浙江、
重庆、河北、北京、广东、全国
2021·天津、北京、山东、浙江、江苏、重庆、
湖南
2020·江苏、山东、浙江、全国
2019·全国、上海、江苏、北京
2018·浙江、全国、江苏、海南
2017·江苏、全国、浙江、上海
2016·四川、上海、江苏、全国
从近10 年全国各地的高考试题来
看，发酵工程专题以来自生产生
活实际的实例为情境考查微生物
的培养及应用、传统发酵技术、
发酵工程与应用；试题侧重考查
学生对科学探究和科学思维及利
用所学知识解决实际问题能力的
考查。此部分内容集中在非选择
题部分考察。
考点2 传统
发酵技术与应
用
（10 年10
考）
2025·浙江：传统发酵技术中的参与泡菜、果酒
制作的微生物；江苏：果醋制作流程、菌种；
云南：酵母菌呼吸方式、扩大培养、黄酒制
作；
2024·浙江：果酒果醋发酵流程；湖北：醋酸
菌；
2023·浙江：果酒果醋发酵流程；山东：泡菜制
作历程、注意事项；
2022·湖南、江苏
2021·江苏、海南、湖北、辽宁、山东、浙江
2020·江苏
2019·江苏
2018·海南、北京、江苏
2017·全国、浙江、海南、江苏
2016·天津、江苏、全国、四川
考点3 发酵
工程与应用
（10 年10
考）
2025·陕晋青宁：发酵工程生产柠檬酸；河南：
果酒果醋发酵；
2024·江西：发酵工程的产品；山东：发酵工程
的PH 变化、产物提取；河北、北京：啤酒发
酵；安徽：发酵产物提取；
2023·山东：酒精发酵流程、无菌操作、产物提
取方法；
2022·湖北、山东、湖南、浙江、辽宁、广东
2021·重庆、河北、广东、全国
2020·天津、浙江、全国
2019·海南、浙江
2018·江苏、浙江
2017·江苏、浙江
2016·海南、江苏
考点1 微生物的培养与应用
1．（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）科研人员通过稀释涂布平板法筛选出高耐受且降解金霉素
（C22H23ClN2O8）能力强的菌株，旨在解决金霉素过量使用所导致的环境污染问题。下列叙述错误的是（
）
A．以金霉素为唯一碳源可制备选择培养基
B．逐步提高培养基中金霉素的浓度有助于获得高耐受的菌株
C．配制选择培养基时，需确保pH 满足实验要求
D．用接种环将菌液均匀地涂布在培养基表面
2．（2025·江苏·高考真题）从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、
鉴定。下列相关叙述正确的是（ ）
A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌
B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布
C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线
D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存
3．（2025·山东·高考真题）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维
素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法
正确的是（ ）
组
别
压强
纤维
素
淀粉
菌落
①
常压
-
+
-
②
常压
+
-
-
③
高压
-
+
-
④
高压
+
-
+
注： “+”表示有；“一”表示无
A．可用平板划线法对该菌计数
B．制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌
C．由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长
D．由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长
4．（2025·湖南·高考真题）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（ ）
A．稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数
B．完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照
C．土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸
D．用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质
5．（2024·贵州·高考真题）生物学实验中合理选择材料和研究方法是顺利完成实验的前提条件。下列叙述
错误的是（ ）
A．稀释涂布平板法既可分离菌株又可用于计数
B．进行胚胎分割时通常是在原肠胚期进行分割
C．获取马铃薯脱毒苗常选取茎尖进行组织培养
D．使用不同的限制酶也能产生相同的黏性末端
6．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变
种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于
JGs 发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs 可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
B．JGs 接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs 发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs 发酵过程中活细胞数量的变化
7．（2024·湖南·高考真题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（ ）
A．①②⑤⑥
B．③④⑥⑦
C．①②⑦⑧
D．①③④⑤
8．（2024·浙江·高考真题）脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。
下列叙述错误的是（ ）
A．镍是组成脲酶的重要元素
B．镍能提高尿素水解反应的活化能
C．产脲酶细菌可在以NH4Cl 为唯一氮源的培养基生长繁殖
D．以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌
9．（2024·河北·高考真题）下列相关实验操作正确的是（ ）
A．配制PCR 反应体系时，加入等量的4 种核糖核苷酸溶液作为扩增原料
B．利用添加核酸染料的凝胶对PCR 产物进行电泳后，在紫外灯下观察结果
C．将配制的酵母培养基煮沸并冷却后，在酒精灯火焰旁倒平板
D．将接种环烧红，迅速蘸取酵母菌液在培养基上划线培养，获得单菌落
10．（2024·山东·高考真题）酵母菌在合成色氨酸时需要3 种酶X、Y 和Z，trpX、trpY 和trpZ 分别为相应酶
的编码基因突变的色氨酸依赖型突变体。已知3 种酶均不能进出细胞，而色氨酸合成途径的中间产物积累
到一定程度时可分泌到胞外。将这3 种突变体均匀划线接种到含有少量色氨酸的培养基上，生长情况如图。
据图分析，3 种酶在该合成途径中的作用顺序为（ ）
A．X→Y→Z
B．Z→Y→X
C．Y→X→Z
D．Z→X→Y
11．（2023·北京·高考真题）高中生物学实验中，下列实验操作能达成所述目标的是（ ）
A．用高浓度蔗糖溶液处理成熟植物细胞观察质壁分离
B．向泡菜坛盖边沿的水槽中注满水形成内部无菌环境
C．在目标个体集中分布的区域划定样方调查种群密度
D．对外植体进行消毒以杜绝接种过程中的微生物污染
12．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（ ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
13．（2023·广东·高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜
热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组
合是（ ）
A．a 点时取样、尿素氮源培养基
B．b 点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b 点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c 点时取样、角蛋白氮源培养基
14．（2023·浙江·高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，
划线接种于一定NaCl 浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ）
A．培养基pH 需偏碱性
B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种
C．需在无氧条件下培养
D．分离得到的微生物均为乳酸菌
15．（2022·天津·高考真题）下图所示实验方法的应用或原理，不恰当的是（ ）
实验方法
应用
原理
A．分离绿叶中的色素
B．不同色素在层析液中溶解度不同
C．细菌计数
D．逐步稀释
A．A
B．B
C．C
D．D
16．（2022·辽宁·高考真题）为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及
洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（ ）
A．航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物
B．细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀
C．在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品
D．采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征
17．（2022·江苏·高考真题）航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下
列相关叙述正确的是（ ）
A．培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌
B．培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳
C．心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖
D．心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动
18．（2022·江苏·高考真题）下列有关实验方法的描述合理的是（ ）
A．将一定量胡萝卜切碎，加适量水、石英砂，充分研磨，过滤，获取胡萝卜素提取液
B．适当浓度蔗糖溶液处理新鲜黑藻叶装片，可先后观察到细胞质流动与质壁分离现象
C．检测样品中的蛋白质时，须加热使双缩脲试剂与蛋白质发生显色反应
D．用溴麝香草酚蓝水溶液检测发酵液中酒精含量的多少，可判断酵母菌的呼吸方式
19．（2022·江苏·高考真题）下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（ ）
A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株
B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源
C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落
D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌
20．（2022·海南·高考真题）为探究校内植物园土壤中的细菌种类，某兴趣小组采集园内土壤样本并开展
相关实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A．采样时应随机采集植物园中多个不同地点的土壤样本
B．培养细菌时，可选用牛肉膏蛋白胨固体培养基
C．土壤溶液稀释倍数越低，越容易得到单菌落
D．鉴定细菌种类时，除形态学鉴定外，还可借助生物化学的方法
21．（2022·湖北·高考真题）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（
）
A．动、植物细胞DNA 的提取必须在无菌条件下进行
B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌
D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌
22．（2021·天津·高考真题）下列操作能达到灭菌目的的是（ ）
A．用免洗酒精凝胶擦手
B．制作泡菜前用开水烫洗容器
C．在火焰上灼烧接种环
D．防疫期间用石炭酸喷洒教室
23．（2021·北京·高考真题）野生草本植物多具有根系发达、生长较快、抗逆性强的特点，除用于生态治
理外，其中一些可替代木材栽培食用菌，收获后剩余的菌渣可作肥料或饲料。相关叙述错误的是（ ）
A．种植此类草本植物可以减少水土流失
B．菌渣作为农作物的肥料可实现能量的循环利用
C．用作培养基的草本植物给食用菌提供碳源和氮源
D．菌渣作饲料实现了物质在植物、真菌和动物间的转移
24．（2021·北京·高考真题）人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作
不正确的是（ ）
A．对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌
B．使用无菌棉拭子从皮肤表面取样
C．用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布
D．观察菌落的形态和颜色等进行初步判断
25．（2021·山东·高考真题）解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸
会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲，乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上
培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是（ ）
A．甲菌属于解脂菌
B．实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源
C．可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比
D．该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力
26．（2021·浙江·高考真题）下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是（ ）
A．测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板
B．红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数
C．涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数
D．酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度
27．（2021·山东·高考真题）含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可
以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用
穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速
度相等，下列说法错误的是（ ）
A．乙菌的运动能力比甲菌强
B．为不影响菌的运动需选用液体培养基
C．该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量
D．穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染
28．（2020·江苏·高考真题）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。
下列叙述正确的是（ ）
A．倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B．图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C．该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D．菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
29．（2020·江苏·高考真题）甲、乙两个实验小组分别进行了“酵母细胞固定化技术”的实验，结果如下
图所示。出现乙组实验结果的原因可能为（ ）
A．CaCl2溶液浓度过高
B．海藻酸钠溶液浓度过高
C．注射器滴加速度过慢
D．滴加时注射器出口浸入到CaCl2溶液中
30．（2020·山东·高考真题）野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖
型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M 和苏氨酸依赖型菌株N 单
独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N 菌株混合培养一段时间，
充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本
培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是（ ）
A．操作过程中出现杂菌污染
B．M、N 菌株互为对方提供所缺失的氨基酸
C．混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质
D．混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变
31．（2020·浙江·高考真题）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（ ）
A．利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B．配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C．酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D．适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
32．（2020·浙江·高考真题）下列关于淀粉酶的叙述，错误的是
A．植物、动物和微生物能产生淀粉酶
B．固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高
C．枯草杆菌
淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高
D．淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色
33．（2019·江苏·高考真题）下列关于加酶洗涤剂的叙述，错误的是
A．加酶洗衣粉中一般都含有酸性脂肪酶
B．用加酶洗涤剂能减少洗涤时间并节约用水
C．含纤维素酶洗涤剂可以洗涤印花棉织物
D．加酶洗衣粉中的蛋白酶是相对耐高温的
34．（2019·江苏·高考真题）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是
A．筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B．可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C．在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D．用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
35．（2019·江苏·高考真题）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是
A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
36．（2019·北京·高考真题）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能
分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。
菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有关本实验的叙述，错误的是
A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D．H/C 值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
37．（2018·海南·高考真题）将相等数量的硝化细菌和大肠杆菌分别接种到含铵盐的无机盐培养液中，在
适宜温度下振荡培养。若用虚线表示大肠杆菌的生长趋势，实线表示硝化细菌的生长趋势，则下图中能正
确表示两种菌体生长趋势的是（ ）
A．
B．
C．
D．
38．（2018·江苏·高考真题）花药离体培养是重要的育种手段。下图是某二倍体植物花药育种过程的示意
图，下列叙述正确的是
A．为了防止微生物污染，过程①所用的花药需在70%乙醇中浸泡30 min
B．过程②的培养基中需添加较高浓度的细胞分裂素以利于根的分化
C．过程③逐步分化的植株中可筛选获得纯合的二倍体
D．过程④应将炼苗后的植株移栽到含有蔗糖和多种植物激素的基质上
39．（2019 年上海市黄浦区高考生物二模试卷）硝化细菌广泛存在于通气性较好的土壤中，其部分代谢反
应如图所示，下列关于硝化细菌的培养条件的描述正确的是（ ）
A．碳源为葡萄糖
B．培养时需隔绝空气
C．氮源是氨气
D．培养时需冷藏
40．（2017·上海·高考真题）在培养基配制和微生物接种的过程中，确保无杂菌污染被称为无菌操作。图
中，符合无菌操作要求的有
A．①②③④
B．①②③⑤
C．①③④⑤
D．②③④⑤
41．（2016·江苏·高考真题）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图
是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是（ ）
A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品
B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落
C．在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化
D．在适宜温度下，接种后的斜面培养基上菌落长成后，可在低温下临时保存菌株
二、多选题
42．（2025·河北·高考真题）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，
是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一、从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA 的
发酵生产。下列叙述正确的是（ ）
A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA 产量
43．（2024·吉林·高考真题）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检
测如图。下列操作正确的是（ ）
A．在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从感病植株上采集样品
B．将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测
C．将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落
D．判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小
44．（2021·江苏·高考真题）为提高一株石油降解菌的净化能力，将菌涂布于石油为唯一碳源的固体培养
基上，以致死率为90%的辐照剂量诱变处理，下列叙述不合理的是（ ）
A．将培养基分装于培养皿中后灭菌，可降低培养基污染的概率
B．涂布用的菌浓度应控制在30~300 个/mL
C．需通过预实验考察辐射时间对存活率的影响，以确定最佳诱变时间
D．挑取培养基上长出的较大单菌落，给纯化后进行降解效率分析
45．（2016·江苏·高考真题）为了使牛仔裤呈现“穿旧”效果，在工业洗衣机中用酶洗代替传统的浮石擦
洗，是目前重要的生产手段（工艺流程见下图）。下列叙述中错误的是
A．纤维素酶在仿旧中的作用机理与其在洗衣粉中去污的机理相似
B．在上述工艺中，为重复使用纤维素酶，可选用适当的包埋剂固定化酶
C．在上述工艺中，通过调节温度、酸碱度、处理时间可控制仿旧颜色的深浅
D．纤维素酶催化葡萄糖残基间磷酸二酯键的水解分解纤维素
三、解答题
46．（2025·安徽·高考真题）稻瘟病是一种真菌病害，水稻叶片某些内生放线菌对该致病菌有抑制作用。
科研小组分离筛选出内生放线菌，并开展了相关研究。回答下列问题。
(1)采集有病斑的水稻叶片，经表面消毒、研磨处理，制备研磨液。此后，采用 （填方法）将研磨
液接种于不同的选择培养基，分别置于不同温度下培养，目的是 。
(2)经筛选获得一株内生放线菌，该菌株高效合成铁载体小分子，能辅助内生放线菌吸收铁离子。R 基因是
合成铁载体的关键基因之一。科研小组构建R 基因敲除株，探究铁载体的功能。主要步骤如下：首先克隆
R 基因的上游片段R-U 和下游片段R-D；然后构建重组质粒；最后利用重组质粒和内生放线菌DNA 片段中
同源区段可发生交换的原理，对目标基因进行敲除。如图1 所示。
采用PCR 技术鉴定R 基因的敲除结果。PCR 通过变性、复性和延伸三步，反复循环，可实现基因片段的
。R 基因敲除过程中，可发生多种形式的同源区段交换，PCR 检测结果如图2 所示，其中R 基因敲除株为菌
落 （填序号），出现菌落④的可能原因是 。
(3)内生放线菌和稻瘟病致病菌的生长均需要铁元素。科研小组推测该内生放线菌通过对铁离子的竞争性利
用，从而抑制稻瘟病致病菌生长。设计实验验证该推测，简要写出实验思路 。
47．（2024·江西·高考真题）聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）是一种聚酯塑料，会造成环境污染。磷脂酶可
催化PET 降解。为获得高产磷脂酶的微生物，研究人员试验了2 种方法。回答下列问题：
(1)方法1 从土壤等环境样品中筛选高产磷脂酶的微生物。以磷脂酰乙醇酯（一种磷脂类物质）为唯一碳源
制备 培养基，可提高该方法的筛选效率。除碳源外，该培养基中至少还应该有 、 、
等营养物质。
(2)方法2 采用 技术定向改造现有微生物，以获得高产磷脂酶的微生物。除了编码磷脂酶的基因外，
该技术还需要 、 、 等“分子工具”。
(3)除了上述2 种方法之外，还可以通过 技术非定向改造现有微生物，筛选获得能够高产磷脂酶的微
生物。
(4)将以上获得的微生物接种到鉴别培养基（在牛肉膏蛋白胨液体培养基中添加2%的琼脂粉和适量的卵黄
磷脂）平板上培养，可以通过观察卵黄磷脂水解圈的大小，初步判断微生物产磷脂酶的能力，但不能以水
解圈大小作为判断微生物产磷脂酶能力的唯一依据。从平板制作的角度分析，其原因可能是 。
48．（2024·甘肃·高考真题）源于细菌的纤维素酶是一种复合酶，能降解纤维素。为了提高纤维素酶的降
解效率，某课题组通过筛选高产纤维素酶菌株，克隆表达降解纤维素的三种酶（如下图），研究了三种酶
混合的协同降解作用，以提高生物质资源的利用效率。回答下列问题。
(1)过程①②采用以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的培养基筛选菌株X，能起到筛选作用的原因是 。高
产纤维素酶菌株筛选时，刚果红培养基上的菌落周围透明圈大小反映了 。
(2)过程④扩增不同目的基因片段需要的关键酶是 。
(3)过程⑤在基因工程中称为 ，该过程需要的主要酶有 。
(4)过程⑥大肠杆菌作为受体细胞的优点有 。该过程用Ca2+处理细胞，使其处于一种 的生理状
态。
(5)课题组用三种酶及酶混合物对不同生物质原料进行降解处理，结果如下表。表中协同系数存在差异的原
因是 （答出两点）。
生
物
质
原
料
降解率（%）
协同系数
酶A
酶B
酶C
混1
混2
混1
混2
小
麦
秸
秆
7.08
6.03
8.19
8.61
26.98
74.33
114.64
玉
米
秸
秆
2.62
1.48
3.76
3.92
9.88
24.98
77.02
玉
米
芯
0.62
0.48
0.86
0.98
6.79
1.82
11.34
注：混1 和混2 表示三种酶的混合物
题干关键信息
所学知识
信息加工
图中④是目的
基因的扩增
原理是DNA 的半保留复
制
该过程温度相对较高，
所需的关键酶是耐高温
的DNA 聚合酶
图中⑤是基因
表达载体的构
建
其实质是不同DNA 片段
的切割和连接
该过程需要的关键酶有
限制酶和DNA 连接酶
图中⑥是将目
的基因导入受
体细胞
根据受体细胞的不同，
导入方法有一定的差异
其受体细胞是原核细
胞，常用Ca2+处理受体
细胞，使其处于易于吸
收周围DNA 的状态，
即感受态
49．（2024·安徽·高考真题）丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引
入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。回答下列问题。
(1)扩增X 基因时，PCR 反应中需要使用Taq DNA 聚合酶，原因是 。
(2)使用BamH I 和 SalI 限制酶处理质粒和X 基因，连接后转化大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上（如
图）。在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是 。
、
(3)研究表明，碳源和氮源的种类、浓度及其比例会影响微生物生长和发酵产物积累。如果培养基中碳源相
对过多，容易使其氧化不彻底，形成较多的 ，引起发酵液pH 值下降。兴趣小组通
过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g.L-1和15 g.L-1。在此基础上，设置不同浓度
的木薯淀粉（90 g.L-1、100 g.L-1、110 g.L-1）和酵母粉（12 g.L-1、15g.L-1、18 g.L-1）筛选碳源和氮源浓度的最
佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置 （填数字）组实验（重复组不计算在内）。
(4)大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是 。
(5)发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经 ，最终获得发酵产品。
50．（2023·北京·高考真题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，
能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供
和维生素等。
(2)A 菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A 菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成
薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明 。
(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样 后，
依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A 菌的菌落周围会出现 。采用
这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P 菌。
(4)为探究P 菌溶解破坏A 菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材
料和设备：P 菌、A 菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱） 。
51．（2022·重庆·高考真题）研究发现柑橘精油可抑制大肠杆菌的生长。某兴趣小组采用水蒸气蒸馏法和
压榨法提取了某种橘皮的精油（分别简称为HDO 和CPO），并研究其抑菌效果的差异。
(1)为便于精油的提取，压榨前需用 浸泡橘皮一段时间。在两种方法收集的油水混合物中均加入
NaCl，其作用是 ；为除去油层中的水分，需加入 。
(2)无菌条件下，该小组制备了两个大肠杆菌平板，用两片大小相同的无菌滤纸分别蘸取HDO 和CPO 贴于
含菌平板上，37℃培养24h，抑菌效果见如图。有同学提出该实验存在明显不足：①未设置对照，设置本
实验对照的做法是 ，其作用是 ；②不足之处还有 （答两点）。
(3)若HDO 的抑菌效果低于CPO，从提取方法的角度分析，主要原因是 。
52．（2022·河北·高考真题）番茄灰霉病菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有
抑制作用的蛋白质。为探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。回答
下列问题：
(1)检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用时，取适量 菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤
纸片（直径5mm）在 菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养
后测量 大小以判定抑菌效果。
(2)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用 （填“静置”或“摇床震荡”）培养。培养过
程中抽样检测活菌数量时，应采用 （填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”），其原因
是 。
(3)电泳分离蛋白质混合样品的原理是 。利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定枯草芽孢杆菌的抗菌蛋
白分子量时，SDS 的作用是 。
(4)枯草芽孢杆菌长期保藏时，常以其 作为保藏对象。
53．（2022·北京·高考真题）人体细胞因表面有可被巨噬细胞识别的“自体”标志蛋白C，从而免于被吞噬。
某些癌细胞表面存在大量的蛋白C，更易逃脱吞噬作用。研究者以蛋白C 为靶点，构建了可感应群体密度
而裂解的细菌菌株，拟用于制备治疗癌症的“智能炸弹”。
(1)引起群体感应的信号分子A 是一种脂质小分子，通常以 的方式进出细胞。细胞内外的A 随细菌
密度的增加而增加，A 积累至一定浓度时才与胞内受体结合，调控特定基因表达，表现出细菌的群体响应。
(2)研究者将A 分子合成酶基因、A 受体基因及可使细菌裂解的L 蛋白基因同时转入大肠杆菌，制成AL 菌株。
培养的AL 菌密度变化如图1。其中，AL 菌密度骤降的原因是：AL 菌密度增加引起A 积累至临界浓度并与
受体结合， 。
(3)蛋白K 能与蛋白C 特异性结合并阻断其功能。研究者将K 基因转入AL 菌，制成ALK 菌株，以期用于肿瘤
治疗。为验证ALK 菌能产生蛋白K，应以 菌株裂解的上清液为对照进行实验。请从下列选项中选取
所需材料与试剂的序号，完善实验组的方案。
实验材料与试剂：①ALK 菌裂解的上清液②带荧光标记的K 的抗体③带荧光标记的C 的抗体④肿瘤细胞
实验步骤：先加入 保温后漂洗，再加入 保温后漂洗，检测荧光强度。
(4)研究者向下图2 所示小鼠左侧肿瘤内注射ALK 菌后，发现ALK 菌只存在于该侧肿瘤内，两周内即观察到
双侧肿瘤生长均受到明显抑制。而向肿瘤内单独注射蛋白K 或AL 菌，对肿瘤无明显抑制作用。请应用免疫
学原理解释“智能炸弹”ALK 菌能有效抑制对侧肿瘤生长的原因 。
54．（2022·广东·高考真题）研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学
号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1146 米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定
得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。
回答下列问题：
(1)研究者先制备富集培养基，然后采用 法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28℃厌氧培
养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养物，除了稀释涂布平板法，还可采用
法。据图分析，拟杆菌新菌株在以 为碳源时生长状况最好。
(2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可
能是 。（答一点即可）
(3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度
考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是 。
(4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其
特性可能还有 。
55．（2022·全国乙卷·高考真题）化合物S 被广泛应用于医药、食品和化工工业、用菌株C 可生产S，S 的
产量与菌株C 培养所利用的碳源关系密切。为此，某小组通过实验比较不同碳源对菌体生长和S 产量的影
响，结果见表。
碳源
细胞干重（g/L）
S 产量（g/L）
葡萄糖
3.12
0.15
淀粉
0.01
0.00
制糖废
液
2.30
0.18
回答下列问题。
(1)通常在实验室培养微生物时，需要对所需的玻璃器皿进行灭菌，灭菌的方法有 （答出2 点即可）。
(2)由实验结果可知，菌株C 生长的最适碳源是 ；用菌株C 生产S 的最适碳源是 。菌株C 的生
长除需要碳源外，还需要 （答出2 点即可）等营养物质。
(3)由实验结果可知，碳源为淀粉时菌株C 不能生长，其原因是 。
(4)若以制糖废液作为碳源，为进一步确定生产S 的最适碳源浓度，某同学进行了相关实验。请简要写出实
验思路： 。
(5)利用制糖废液生产S 可以实现废物利用，其意义是 （答出1 点即可）。
56．（2022·全国甲卷·高考真题）某同学从被石油污染的土壤中分离得到A 和B 两株可以降解石油的细菌，
在此基础上采用平板培养法比较二者降解石油的能力，并分析两个菌株的其他生理功能。
实验所用的培养基成分如下。
培养基Ⅰ：K2HPO4，MgSO4，NH4NO3，石油。
培养基Ⅱ：K2HPO4，MgSO4，石油。
操作步骤：
①将A、B 菌株分别接种在两瓶液体培养基Ⅰ中培养，得到A、B 菌液；
②液体培养基Ⅰ、Ⅱ中添加琼脂，分别制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按图中所示在平板上打甲、乙两孔。
回答下列问题。
菌株
透明圈大小
平板Ⅰ
平板Ⅱ
A
+++
++
B
++
-
(1)实验所用培养基中作为碳源的成分是 。培养基中NH4NO3的作用是为菌株的生长提供氮源，
氮源在菌体内可以参与合成 （答出2 种即可）等生物大分子。
(2)步骤①中，在资源和空间不受限制的阶段，若最初接种N0个A 细菌，繁殖n 代后细菌的数量是
。
(3)为了比较A、B 降解石油的能力，某同学利用步骤②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ进行实验，结果如表所示
（“+”表示有透明圈，“+”越多表示透明圈越大，“-”表示无透明圈），推测该同学的实验思路是
。
(4)现有一贫氮且被石油污染的土壤，根据上表所示实验结果，治理石油污染应选用的菌株是 ，
理由是 。
57．（2021·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。
（1）从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或 法，两种方法均能在固体培养基上形成 。
对分离的菌株进行诱变、 和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能
在添加了特定成分X 的培养基上繁殖。
（2）固定化菌株的制备流程如下；①将菌株与该公司研制的特定介质结合；②用蒸馏水去除 ；
③检验固定化菌株的 。菌株与特定介质的结合不宜直接采用交联法和共价偶联法，可以采用的2
种方法是 。
（3）对外，只提供固定化菌株有利于保护该公司的知识产权，推测其原因是 。
（二）三叶青为蔓生的藤本植物，以根入药。由于野生三叶青对生长环境要求非常苛刻，以及生态环境的
破坏和过度的采挖，目前我国野生三叶青已十分珍稀。
（1）为保护三叶青的 多样性和保证药材的品质，科技工作者依据生态工程原理，利用
技术，实现了三叶青的林下种植。
（2）依据基因工程原理，利用发根农杆菌侵染三叶青带伤口的叶片，叶片产生酚类化合物，诱导发根农
杆菌质粒上vir 系列基因表达形成 和限制性核酸内切酶等，进而从质粒上复制并切割出一段可转
移的DNA 片段（T-DNA）。T-DNA 进入叶片细胞并整合到染色体上，T-DNA 上rol 系列基因表达，产生相应
的植物激素，促使叶片细胞持续不断地分裂形成 ，再分化形成毛状根。
（3）剪取毛状根，转入含头孢类抗生素的固体培养基上进行多次 培养，培养基中添加抗生素的
主要目的是 。最后取毛状根转入液体培养基、置于摇床上进行悬浮培养，通过控制摇床的
和温度，调节培养基成分中的 ，获得大量毛状根，用于提取药用成分。
58．（2021·重庆·高考真题）为了研究PDCD4 基因对小鼠子宫内膜基质细胞凋亡的影响，进行了相关实验。
(1)取小鼠子宫时，为避免细菌污染，手术器具应进行 处理；子宫取出剪碎后，用 处理一定时
间，可获得分散的子宫内膜组织细胞，再分离获得基质细胞用于培养。
(2)培养基中营养物质应有 （填写两种）；培养箱中CO2浓度为5%，其主要作用是 。
(3)在含PDCD4 基因的表达载体中，启动子的作用是 。为了证明PDCD4 基因对基质细
胞凋亡的作用，以含PDCD4 基因的表达载体和基质细胞的混合培养为实验组，还应设立两个对照组，分别
为 。经检测，实验组中PDCD4 表达水平和细胞凋亡率显著高于对照组，
说明该基因对基质细胞凋亡具有 （填“抑制”或“促进”）作用。
59．（2021·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与甘蔗醋制作有关的问题：
（1）为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养
基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节pH，再高压蒸汽灭菌，经 后加入3%
体积的无水乙醇。然后将10 g 自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养24 h。用 将少量上
述培养液涂布到含CaCO3的分离培养基上，在30 ℃培养48h。再挑取分离培养基上具有 的单菌
落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的 培养基上培养24 h 后，置于4 ℃冰箱中保存。
（2）优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌
液在30 ℃、150 r/min 条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中 含
量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有 （答出2
点即可）等特点。
（3）制醋过程中，可将甘蔗渣制作成固定化介质，经 后用于发酵。其固定化方法为 。
（二）斑马鱼是一种模式动物，体外受精发育，胚胎透明、便于观察，可用于水质监测，基因功能分析以
及药物毒性与安全性评价等。
（1）由于人类活动产生的生活污水日益增多，大量未经处理的污水直接排入河流、湖泊会引起水体
，导致藻类大量繁殖形成水华。取水样喂养斑马鱼，可用斑马鱼每周的体重和死亡率等指标监测水体污染
程度。
（2）为了研究某基因在斑马鱼血管发育过程中的分子调控机制，用 DNA 连接酶将该基因连接到质粒载体
形成 ，导入到大肠杆菌菌株 DH5α 中。为了能够连接上该目的基因、并有利于获得含该目的基因
的 DH5α 阳性细胞克隆，质粒载体应含有 （答出2 点即可）。提取质粒后，采用 法，将该
基因导入到斑马鱼受精卵细胞中，培养并观察转基因斑马鱼胚胎血管的发育情况。
（3）为了获取大量斑马鱼胚胎细胞用于药物筛选，可用 分散斑马鱼囊胚的内细胞团，取分散
细胞作为初始材料进行 培养。培养瓶中添加成纤维细胞作为 ，以提高斑马鱼胚胎细
胞克隆的形成率。
60．（2021·湖南·高考真题）大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达
12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维
素分解菌。回答下列问题：
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 。为筛选纤维素分解菌，将大
熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以 为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分
类属于 培养基。
（2）配制的培养基必须进行 灭菌处理，目的是 。检测固体培养基灭菌效果的
常用方法是 。
（3）简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路 。
（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3 株纤维素分解菌，在37℃条件下
进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株 ，理由是
。
菌株
秸秆总重(g)
秸秆残重(g)
秸秆失重（%）
纤维素降解率
（%）
A
2.00
1.51
24.50
16.14
B
2.00
1.53
23.50
14.92
C
2.00
1.42
29.00
23.32
消毒
灭菌
概念
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部
的部分微生物（不包芽孢和孢子）
使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的
微生物（包括芽孢和孢子）
常用
方法
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线
消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用
对象
操作空间、某些液体、双手等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等
61．（2020·江苏·高考真题）产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开
展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是 （填编号）。
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
高压蒸汽
火焰灼烧
干热
臭氧
（2）称取1．0g 某土壤样品，转入99mL 无菌水中，制备成菌悬液，经 后，获得细胞密度不同
的菌悬液。分别取0．1mL 菌悬液涂布在固体培养基上，其中10 倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46 个
酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌 个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行 育种。将辐照
处理后的酵母菌涂布在以 为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进
行初筛，选择直径 的菌落，纯化后获得A、B 两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B 两菌株的相关性能，
进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株 进行后续相关研究，理由是 。
62．（2020·全国I 卷·高考真题）某种物质S（一种含有C、H、N 的有机物）难以降解，会对环境造成污染，
只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S 的细菌菌株。实验过
程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S 和Y。
回答下列问题：
（1）实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用 的方法进行灭菌。乙培养基中的Y 物质是
。甲、乙培养基均属于 培养基。
（2）实验中初步估测摇瓶M 中细菌细胞数为2×107 个/mL，若要在每个平板上涂布100μL 稀释后的菌液，
且保证每个平板上长出的菌落数不超过200 个，则至少应将摇瓶M 中的菌液稀释 倍。
（3）在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S 超过某一浓度时，某菌株对S 的降解量反而下降，其原
因可能是 （答出1 点即可）。
（4）若要测定淤泥中能降解S 的细菌细胞数，请写出主要实验步骤 。
（5）上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4 类营养物质，
即 。
（2019·上海·高考真题）2019 年 7 月，《上海市生活垃圾分类管理条例》施行，生活垃圾分类成为市民
的日常生活方式，生活垃圾分类中的湿垃圾是指可被微生物降解的有机物。
63．下列属于湿垃圾的是 。
①剩余饭菜 ②玻璃碎片 ③植物落叶 ④过期面包 ⑤果皮果壳
64．湿垃圾降解后才能被植物利用，是因为根毛细胞难吸收 。
A．尿素
B．矿物质
C．H2O
D．大分子有机物
处理是垃圾的有效方法之一是用微生物对其进行降解。下图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。
65．培养基中加入碳源是 。根据上图，将菌液接种到培养基的方法是 。
66．据图，菌落①与菌落②周围透明圈的大小不同，原因可能是两个菌群 。
A．对碘液分解能力不同
B．分泌的淀粉酶活性不同
C．合成淀粉量不同
D．受淀粉抑制程度不同
67．对筛选到的菌落①与菌落②进行鉴定，发现①属于真菌，②属于细菌，两者的本质区别是 。
A．细胞膜的成分B．有无细胞结构
C．核糖体的有无
D．有无完整核膜
68．若垃圾分类不当，在湿垃圾中混入了过期的抗生素或电池等，将不利于微生物分解，原因是 。
A．会抑制微生物生长
B．是微生物的生长因子
C．促进有机物的合成
D．为微生物提供碳源和氮源
优点
缺点
适用范围
平板划
线分离
法
可以观察菌落特征，对混合菌
进行分离
不能计数
适用于好氧菌
稀释涂
布
平板法
可以计数，可以观察菌落特征
吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不
好，容易蔓延
适用于厌氧，兼性
厌氧
69．（2019·全国III 卷·高考真题）回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是 （填“蛋白胨”“葡萄糖”
或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是 。
硝化细菌在没有碳源的培养基上 （填“能够”或“不能”）生长，原因是 。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板 （填“倒置”或“正置”）。
（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不
同种的微生物，原因是 。
（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过 处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生
物。
70．（2019·全国I 卷·高考真题）已知一种有机物X（仅含有C、H 两种元素）不易降解，会造成环境污染。
某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X 的细菌（目标菌）。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。
Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。
Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。
回答下列问题。
（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是 。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物
是 。
（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X 的细菌比例会 ，其
原因是 。
（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，
接种时，应采用的方法是 。
（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X 的细菌，且该菌能将X 代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙
酮酸可为该菌的生长提供 和 。
71．（2018·江苏·高考真题）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母
可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中
分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题:
（1）配制培养
基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的 ，及时对培养基进
行分装，并进行 灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约 （在
25℃、50℃或80℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④进行划线。下列叙述合理的有 。
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）分离培养酵母菌通常使用 （填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，步骤
⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和 供应。为监测酵母的活细胞密
度，将发酵液稀释1 000 倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16 型（1mm×lmm×O.1mm）血细胞计数
板计数5 个中格中的细胞数，理论上 色细胞的个数应不少于 ，才能达到每毫升3×109
个活细胞的预期密度。
72．（2018·全国III 卷·高考真题）回答下列与酵母菌有关的问题：
（1）分离培养酵母菌通常使用 （填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该
培养基应采用 灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落
的含义是 。
（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进 （填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或
“乳酸产生”）；若进行厌氧培养，可促进 （填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产
生”）。
（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是
。
73．（2018·全国I 卷·高考真题）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃
薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M 培养基。
回答下列问题：
（1）M 培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制 的生长，加入了链霉素的
培养基属于 培养基。
（2）M 培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有
（答出两点即可）。氮源进入细菌后，可参与合成的生物大分子有 （答出两点即可）。
（3）若在M 培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选
出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是 ，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理
。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下
结果：
甲同学涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是110、140 和149，取平均值133。
乙同学涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是27、169 和176，取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是： 。
74．（2017·江苏·高考真题）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备
依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:
（1）酚降解菌富集培养基含有
蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有 。
（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐 。以达到富集酚降解菌
的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步 ，以便于菌落计数与分离。制备平板培养
基时除了需要水、营养物质外，还必须添加 。
（3）下图为连续划线法示意图，在图中 （填图中序号）区域更易获得单菌落。
（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制
作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1 ~5 号比色管的苯酚浓度应分别为 。
管号
1
2
3
4
5
6
苯酚浓度（mg/ L）
1
如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释 （填序号：
①5 ②10 ③20）倍后，再进行比色。
75．（2017·全国I 卷·高考真题）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列
问题：
（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生 。能分解尿
素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作为碳
源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 （答出两点即可）。
（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 （填“尿素”
“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是 。
（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2 HPO4，其作用有 （答
出两点即可）。
76．（2016·上海·高考真题）回答下列有关微生物和酶工程的问题。
枯草芽孢杆菌盛产蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业
化应用。
（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和 （用
序号组合回答）。
①淀粉 ②蛋白质 ③生长因子 ④葡萄糖 ⑤无机盐
为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株(a~e)的分泌物提取液及无菌水（f） 的无菌圆
纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面；在37℃恒温箱中放置2~3 天，结果如左图。
（2）大规模产业化首选的菌株是 ；菌株b 提取物周围没有形成明显清晰区的原因是
。右图显示枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在
酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60~70℃保温一定
时间，再制备酶制剂。
（3）在60~70℃保温一定时间的作用是 。
A．诱导蛋白酶的热稳定性 B．有利于发挥蛋白酶的最佳活性
C．裂解枯草芽孢杆菌细胞 D．大幅度降低发酵液中其他酶的活性
（4）枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为 (选择正确的序号并排序)。
①过滤 ②干燥 ③破碎 ④浓缩
四、实验题
77．（2024·全国甲卷·高考真题）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3 款消毒液A、
B、C 杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。
(1)该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大
于后者，其原因是 。
(2)该同学从100 mL 细菌原液中取1 mL 加入无菌水中得到10 mL 稀释菌液，再从稀释菌液中取200 μL 涂布
平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为 个/mL。
(3)菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是 ，冷却的目的是
。
(4)据图可知杀菌效果最好的消毒液是 ，判断依据是 。（答出两点即可）
(5)鉴别培养基可用于反映消毒液杀灭大肠杆菌的效果。大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌落呈
色。
题干关键信息
所学知识
信息加工
两种计数方法得到的数目
不同
显微镜直接计数
法和菌落计数法
显微镜直接计数法把死菌和活菌一起计
数，菌落计数法计数只计活菌数，还可
能存在多个活菌形成一个菌落的情况
涂布器应先在酒精灯上灼
烧
消毒和灭菌的方
法
菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯
上灼烧，灼烧的目的是杀死涂布器上可
能存在的微生物，防止涂布器上可能存
在的微生物污染
鉴别培养基鉴别大肠杆菌
鉴别培养基
大肠杆菌在伊红美蓝培养基上生长的菌
落呈黑色
78．（2024·广东·高考真题）驹形杆菌可合成细菌纤维素（BC）并将其分泌到胞外组装成膜。作为一种性
能优异的生物材料，BC 膜应用广泛。研究者设计了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表达载体，
将其转入驹形杆菌后构建出一株能合成BC 膜并可实现光控染色的工程菌株，为新型纺织原料的绿色制造
及印染工艺升级提供了新思路（图一）。
回答下列问题：
(1)研究者优化了培养基的 （答两点）等营养条件，并控制环境条件，大规模培养工程菌株后可在
气液界面处获得BC 菌膜（菌体和 BC 膜的复合物）。
(2)研究者利用T7 噬菌体来源的RNA 聚合酶（T7RNAP）及蓝光光敏蛋白标签，构建了一种可被蓝光调控的
基因表达载体（光控原理见图二a，载体的部分结构见图二b）。构建载体时，选用了通用型启动子 PBAD
（被工程菌 RNA 聚合酶识别）和特异型启动子PT7（仅被T7RNAP 识别）。为实现蓝光控制染色，启动子
①②及③依次为 ，理由是 。
(3)光控表达载体携带大观霉素（抗生素）抗性基因。长时间培养时在培养液中加入大观霉素，其作用为
（答两点）。
(4)根据预设的图案用蓝光照射已长出的BC 菌膜并继续培养一段时间，随后将其转至染色池处理，发现只
有经蓝光照射的区域被染成黑色，其原因是 。
(5)有企业希望生产其他颜色图案的BC 膜。按照上述菌株的构建模式提出一个简单思路 。
79．（2024·浙江·高考真题）锌转运蛋白在某种植物根部细胞特异性表达并定位于细胞质膜，具有吸收和
转运环境中Zn2+的功能。为研究该植物2 种锌转运蛋白M 和N 与吸收Zn2+相关的生物学功能，在克隆M、
N 基因基础上，转化锌吸收缺陷型酵母，并进行细胞学鉴定。回答下列问题：
(1)锌转运蛋白基因M、N 克隆。以该植物 为材料提取并纯化mRNA，反转录合成cDNA。根据序列信
息设计引物进行PCR 扩增，PCR 每个循环第一步是进行热变性处理，该处理的效果类似于生物体内
的作用效果。PCR 产物琼脂糖凝胶电泳时，DNA 分子因为含 而带负电荷，凝胶点样孔端应靠近电泳
槽负极接口；当2 个PCR 产物分子量接近时，若延长电泳时间，凝胶中这2 个条带之间的距离会 。
回收DNA 片段，连接至克隆载体，转化大肠杆菌，测序验证。
(2)重组表达载体构建。分别将含M、N 基因的重组质粒和酵母表达载体同时进行双酶切处理，然后利用
连接，将得到的重组表达载体转化大肠杆菌。用PCR 快速验证重组转化是否成功。此反应可以用大肠杆菌
悬液当模板的原因是 。
(3)酵母菌转化。取冻存的锌吸收缺陷型酵母菌株，直接在固体培养基进行 培养，活化后接种至液体
培养基，采用 以扩大菌体数量，用重组表达载体转化酵母菌。检测M、N 基因在受体细胞中的表达
水平，无显著差异。
(4)转基因酵母功能鉴定。分别将转化了M、N 基因的酵母菌株于液体培养基中培养至OD600为0.6。将菌液
用 法逐级稀释至OD600为0.06、0.006 和0.0006，然后各取10μL 菌液用涂布器均匀涂布在固体培养基
上，培养2 天，菌落生长如图。该实验中阴性对照为 。由实验结果可初步推测：转运蛋白M 和N 中，
转运Zn2+能力更强的是 ，依据是 。
注：OD600 为波长600nm 下的吸光值，该值越大，菌液浓度越高；空载体为未插入M 或N 基因的表达载
体。
题干关键信息
所学知识
信息加工
锌转运蛋白基因
PCR 技术扩增目的基
PCR 的原理是DNA 分子的复制，包括变性、复
M、N 克隆
因
性、延伸过程，变性过程类似于体内的解旋酶
解旋的过程，利用高温将双链DNA 解开
重组表达载体构
建
基因表达载体的构
建过程
利用限制性内切酶处理后的质粒和目的基因具
有黏性末端或者平末端，用DNA 连接酶进行连
接
转基因酵母功能
鉴定
目的基因的检测与
鉴定
检测目的基因，需要区分出空白的受体细胞、
导入目的基因的受体细胞和导入空白载体的受
体细胞
80．（2023·湖南·高考真题）某些植物根际促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用。回答下
列问题：
(1)若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固氮细菌，培养基的主要营养物质包括水和 。
(2)现从植物根际土壤中筛选出一株解淀粉芽孢杆菌H，其产生的抗菌肽抑菌效果见表。据表推测该抗菌肽
对 的抑制效果较好，若要确定其有抑菌效果的最低浓度，需在 μg·mL-1浓度
区间进一步实验。
测试菌
抗菌肽浓度/（µg•mL-1）
55.20
27.60
13.80
6.90
3.45
1.73
0.86
金黄色葡萄球菌
-
-
-
-
-
+
+
枯草芽孢杆菌
-
-
-
-
-
+
+
禾谷镰孢菌
-
+
+
+
+
+
+
假丝酵母
-
+
+
+
+
+
+
注：“+”表示长菌，“-”表示未长菌。
(3)研究人员利用解淀粉芽孢杆菌H 的淀粉酶编码基因M 构建高效表达质粒载体，转入大肠杆菌成功构建基
因工程菌A。在利用A 菌株发酵生产淀粉酶M 过程中，传代多次后，生产条件未变，但某子代菌株不再产
生淀粉酶M。分析可能的原因是 （答出两点即可）。
(4)研究人员通过肺上皮干细胞诱导生成肺类器官，可自组装或与成熟细胞组装成肺类装配体，如图所示。
肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透压、pH 以及 （答出两点）等基本条件。肺类装配
体形成过程中是否运用了动物细胞融合技术 （填“是”或“否”）。
(5)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种耐药菌，严重危害人类健康。科研人员拟用MRSA 感染肺类
装配体建立感染模型，来探究解淀粉芽孢杆菌H 抗菌肽是否对MRSA 引起的肺炎有治疗潜力。以下实验材
料中必备的是 。
①金黄色葡萄球菌感染的肺类装配体 ②MRSA 感染的肺类装配体 ③解淀粉芽孢杆菌H 抗菌肽 ④生理
盐水 ⑤青霉素（抗金黄色葡萄球菌的药物） ⑥万古霉素（抗MRSA 的药物）
81．（2019·全国II 卷·高考真题）物质W 是一种含氮有机物，会污染土壤。W 在培养基中达到一定量时培
养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W 的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是 。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。
如果要得到目标菌，应该选择 菌落进一步纯化，选择的依据是 。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用
空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即 。
（4）该小组将人工合成的一段DNA 转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W 的酶（酶E）。为了比较酶
E 与天然酶降解W 能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W 的固体培养基上，A 处滴加含有酶E 的缓冲液，B 处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲
液，C 处滴加 ，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C 处没有出现透明圈，说明 ；若A、B 处形成的透明圈
直径大小相近，说明 。
82．（2018·全国II 卷·高考真题）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：
（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具 （填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中
进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是
。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能 ，在照射前，适量喷洒
，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过 （填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原
因是 。
比较项
目
消毒
灭菌
条件
使用较为温和的理化方法
使用强烈的理化因素
结果
杀死物体表面或内部一部分对人体有害
的微生物（不包括芽孢和孢子）
杀死物体内外所有的微生物，包括
芽孢和孢子
适用
实验操作的空间、操作者的衣服和手
微生物的培养器皿、接种用具和培
养基等
常用方
法
煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6
min）、巴氏消毒法（如在80℃，煮15
min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化
学药剂进行消毒
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭
菌
灭菌方法
灭菌条件
灭菌时间
适用材料或用具
灼烧灭菌
酒精灯火焰的充分燃烧
层
直至烧红
接种环、接种针或其他金属工
具
干热灭菌
干热灭菌箱内，160～
170℃
1～2 h
玻璃器皿（吸管、培养皿）
和金属用具等
高压蒸汽灭
菌
100kPa，121℃
15～30 min
培养基等
83．（2018·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：
某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。
(1)果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质量的
百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗 (A．有助于清洗杂质和去除可
溶性糖 B．使植物组织变得松散 C．使有关酶失活 D．有利细胞破裂和原料粉碎制浆)。
(2)在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其菌株起重要作
用。为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用 ，进行单菌落分离，然后将其
，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。
(3)在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底
酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题,可添加 使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加 ，
以解决汁液浑浊和沉淀问题。
(4)在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，
然后主要优化各固定化酶反应器中的 （答出2 点即可）、反应液pH 和酶反应时间等因素。其中，
酶反应时间可通过 来调节。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。
(1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121 均用限制性核酸内切酶EcoR I 酶切，在切口
处形成 。选取含抗虫基因的DNA 片段与切割后的pBI121 用DNA 连接酶连接。在两个片段相邻处形
成 ，获得重组质粒。
(2)已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混
合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成 实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养
一段时间，其目的是 ，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。
(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行 ，然后接种到培养基中培养，幼胚发生 形成愈伤组
织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水
稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及
（答 2 点即可）。
84．（2017·浙江·高考真题）回答下列（一）（二）小题
（一）请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题
（1）LB 固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 ，
灭菌备用。
（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用 灭菌过的G6 玻璃砂漏斗过滤，因为G6 玻璃砂
漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。
（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB 固体培养基和尿素固体培养基
上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是 （A．10-5稀释液+尿素固体培养基 B．10-5
稀释液+LB 固体培养基 C． 10-4稀释液+尿素固体培养基 D．10-4稀释液+LB 固体培养基）。在尿素固体培
养基上产脲酶细菌菌落周围出现 ，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生 所致。
（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。
（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：
（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L 甘露醇（维持较高渗透
压）的 混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。
（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该 培
养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞
团经球形胚、 和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养
基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是 ，
胚性细胞的主要特点是： 。
（A．液泡小、细胞核小 B．液泡大，细胞核大 C．液泡大，细胞核小 D．液泡小、细胞核大）
（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过 方法将他们的遗
传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用 扩增相关
基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。
“蒸气”是泛指液体或固体（如水、碘、汞、苯）因蒸发、沸腾或升华而变成的气体。使用时前面
要加上与之相关的事物，如水蒸气、苯蒸气、汞蒸气、碘蒸气。
“蒸汽”是特指水加热到沸点所变成的水汽，气态的水。“蒸汽”特指水的蒸气，义同“水蒸气”，
所以不能写成“水蒸气”。
植物体细胞杂交：两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，并且把杂种细胞培育成新植物
体的方法。
动物细胞杂交：基因型不同的细胞的融合称为细胞杂交。基因型相同或不同的细胞融合属于动物细
胞融合。
85．（2016·全国I 卷·高考真题）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用
平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：
①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）；
②制作无菌平板；
③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；
④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：
（1）该培养基中微生物所需的氮来源于 。若要完成步骤②，该培养基中的成分X 通常
是 。
（2）步骤③中，实验组的操作是 。
（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6
个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了 现象。若将30（即36-6）个/平板作为本组
菌落数的平均值，该做法 （填“正确”或“不正确”）。
86．（2016·全国III 卷·高考真题）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固
体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：
（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由
是 。
（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 和 。分离纯化
时应挑选出 的菌落作为候选菌。
（3）乳酸菌在-20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的 （填“蒸馏水”、“甘
油”或“碳酸钙”）。
87．（2016·四川·高考真题）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA 部分
序列。
（1）图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在
该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。
（2）在5 个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上
长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178 和191。该过程采取的接种方法是 ，每克土壤样品
中的细菌数量为 ×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较 。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA 在图乙箭头所示位置增加了70 个
核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA 和UAA）。突变基因转录的mRNA 中，终止
密码为 ，突变基因表达的蛋白含 个氨基酸。
五、解答题组
88．（2022·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题：
(1)为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌，可将土样用 制成悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃
的 中保温一段时间，其目的是 。
(2)为提高筛选效率，可将菌种的 过程与菌种的产酶性能测定一起进行：将上述悬液稀释后涂
布于淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养，采用 显色方法，根据透明圈与菌落直径比值的大
小，可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。
(3)为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用现有菌种，通过 后再筛选获得，或利用转基因、
等技术获得。
（二）回答与植物转基因和植物克隆有关的问题：
(4)在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制 生长，
二是筛选转化细胞。当选择培养基中抗生素浓度 时，通常会出现较多假阳性植株，因此在转
基因前需要对受体进行抗生素的 检测。
(5)为提高培育转基因植株的成功率，植物转基因受体需具有较强的 能力和遗传稳定性。对培
养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内 形态是否改变进行判断，也可通过
观察分裂期染色体的 ，分析染色体组型是否改变进行判断。
(6)植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和 长短
等有关。同时也与受体的取材有关，其中受体为 时全能性表达能力最高。
89．（2020·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与泡菜制作有关的问题：
（1）用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生 ，从而使成品泡菜口
感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是 。
（2）泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，会使 菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，
会使 菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。
（3）从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行
，再用 的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有 ，以便于观
察是否产酸。
（4）自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加 。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经 处
理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用
的方法有 （答出2 点即可）。
（2）若要获得已知序列的抗病基因，可采用 或PCR 的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功
率，选择使用 ，对含目的基因的DNA 片段进行处理，使其两端形成不同的黏性末端，对质粒也进行
相同的处理，然后用DNA 连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中 ，以获得大量的重组质粒，
最终将其导入原生质体中。
（3）原生质体在培养过程中，只有重新形成 后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可
通过 或器官发生的途径再生植株。
【点睛】本题考查选修教材中的相关知识，在学习本部分内容时，要求考生对所学知识进行对比、归
纳，然后建立知识间的联系，做到夯实基础，学会融会贯通。
考点2 传统发酵技术与应用
1．（2025·浙江·高考真题）传统发酵技术为我们提供了多种食品、饮料及调味品。下列叙述错误的是（
）
A．泡菜的风味由乳酸菌的种类决定
B．用果酒发酵制作果醋的主要菌种是醋酸菌
C．家庭酿制米酒的过程既有需氧呼吸又有厌氧呼吸
D．传统发酵通常是利用多种微生物进行的混合发酵
2．（2025 高三·江苏·专题练习）某同学利用红叶李果实制作果醋，图示其操作的简易流程。下列相关叙述
正确的是（ ）
A．果酒、果醋发酵所需菌种的细胞结构相同
B．过程①中添加适量果胶酶，有利于提高出汁率
C．过程②中，为使菌种充分吸收营养物质，需每日多次开盖搅拌
D．过程③发酵时会产生大量气泡，需拧松瓶盖放气
3．（2025·云南·高考真题）黄酒是我国古老的发酵酒之一，传统酿制中，先用蒸煮过的小麦或麸皮为原料，
对之前发酵留存的少量酒曲（曲种）进行扩大制曲；再将酒曲和蒸煮后的糯米、大米混合处理一段时间后，
添加足量酒母（含酵母菌）完成发酵，压榨成品。下列说法错误的是（ ）
A．小麦、麸皮等原料为酒曲中微生物的生长繁殖提供了碳源和氮源等营养物质
B．为避免制曲过程被杂菌污染影响黄酒品质，扩大制曲前需对留存的酒曲灭菌
C．糯米、大米蒸煮后立即与酒曲混合会导致酶空间结构改变而降低其催化效率
D．将酒曲混合糯米、大米处理一段时间，是为了获得酒母发酵时的底物葡萄糖
（2024·浙江·高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
柿子具有较高的营养价值和药用价值。采用液体发酵法可酿制出醋香浓郁、酸味纯正的柿子醋，提高了柿
子的经济价值。柿子醋的酿造工艺流程如图所示。
4．下列关于酒精发酵和醋酸发酵的叙述，错误的是（ ）
A．酒精发酵是吸能反应
B．酒精发酵在无氧条件下进行
C．醋酸发酵是放能反应
D．醋酸发酵在有氧条件下进行
5．下列关于柿子醋酿造过程的叙述，错误的是（ ）
A．加酶榨汁环节加入果胶酶，有利于提高柿子汁产量
B．酒精发酵前可对柿子汁进行杀菌，以利于酒精发酵
C．若柿子酒的酒精度过高，应稀释后再用于醋酸发酵
D．用不同品种和成熟度的柿子酿造的柿子醋风味相同
6．（2024·湖北·高考真题）制醋、制饴、制酒是我国传统发酵技术。醋酸菌属于好氧型原核生物，常用于
食用醋的发酵。下列叙述错误的是（ ）
A．食用醋的酸味主要来源于乙酸
B．醋酸菌不适宜在无氧条件下生存
C．醋酸菌含有催化乙醇氧化成乙酸的酶
D．葡萄糖在醋酸菌中的氧化分解发生在线粒体内
（2023·浙江·高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要
有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌
在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。
7．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确
的是（ ）
A．有氧呼吸产生的[H]与O2结合，无氧呼吸产生的[H]不与O2结合
B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行
C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放
D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化
8．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（ ）
A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖
B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测
C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严
D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵
9．（2023·山东·高考真题）以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4 个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；
②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。
下列说法正确的是（ ）
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
10．（2022·湖南·高考真题）“清明时节雨纷纷，路上行人欲断魂。借问酒家何处有，牧童遥指杏花
村。”徜徉古诗意境，思考科学问题。下列观点错误的是（ ）
A．纷纷细雨能为杏树开花提供必需的水分
B．杏树开花体现了植物生长发育的季节周期性
C．花开花落与细胞生长和细胞凋亡相关联
D．“杏花村酒”的酿制，酵母菌只进行无氧呼吸
11．（专题20 发酵工程-学易金卷：五年（2019-2023）高考生物真题分项汇编（全国通用））某同学选用
新鲜成熟的葡萄制作果酒和果醋，下列相关叙述正确的是（ ）
A．果酒发酵时，每日迅速打开瓶盖放气，避免空气回流进入发酵容器
B．果酒发酵时，用斐林试剂检测还原糖的含量，砖红色沉淀逐日增多
C．果醋发酵时，发酵液产生的气泡量明显少于果酒发酵产生的气泡量
D．果醋发酵时，重铬酸钾测定醋酸含量变化时，溶液灰绿色逐日加深
12．（2021·海南·高考真题）关于果酒、果醋和泡菜这三种传统发酵产物的制作，下列叙述正确的是（
）
A．发酵所利用的微生物都属于原核生物B．发酵过程都在无氧条件下进行
C．发酵过程都在同一温度下进行
D．发酵后形成的溶液都呈酸性
13．（2021·湖北·高考真题）中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述正确的是（
）
A．泡菜制作过程中，酵母菌将葡萄糖分解成乳酸
B．馒头制作过程中，酵母菌进行呼吸作用产生CO2
C．米酒制作过程中，将容器密封可以促进酵母菌生长
D．酸奶制作过程中，后期低温处理可产生大量乳酸杆菌
14．（2021·辽宁·高考真题）利用菠萝蜜制作果醋的大致流程为：先在灭菌的果肉匀浆中接种酵母菌，发
酵6 天后，再接入活化的醋酸杆菌，发酵5 天。下列有关叙述错误的是（ ）
A．乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖
B．酵母菌和醋酸杆菌均以有丝分裂的方式进行增殖
C．酵母菌和醋酸杆菌发酵过程中控制通气的情况不同
D．接入醋酸杆菌后，应适当升高发酵温度
15．（2021·山东·高考真题）葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（ ）
A．无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖
B．自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌
C．葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的
D．制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加
16．（2021·浙江·高考真题）用白萝卜制作泡菜的过程中，采用适当方法可缩短腌制时间。下列方法中错
误的是（ ）
A．将白萝卜切成小块
B．向容器中通入无菌空气
C．添加已经腌制过的泡菜汁
D．用沸水短时处理白萝卜块
17．（2020·江苏·高考真题）某同学在线提交了在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋的实验报告，他的做法
错误的是（ ）
A．选择新鲜的葡萄略加冲洗，除去枝梗后榨汁
B．将玻璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁
C．酒精发酵期间，根据发酵进程适时拧松瓶盖放气
D．酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵
果酒制作
果醋制作
菌种
酵母菌
醋酸菌
菌种
来源
附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
变酸酒表面的菌膜
发酵
过程
有氧条件下，酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖：C6H12O6
＋6O2―→
6CO2＋6H2O；无氧条件下，酵母菌通过无氧呼吸产生
酒精：C6H12O6―→2C2H5OH＋2CO2
氧气、糖源充足时：C6H12O6＋2O2―→
2CH3COOH＋2CO2＋2H2O；缺少糖源、氧
气充足时：C2H5OH＋O2―→
CH3COOH＋H2O
温度
一般酒精发酵18～25 ℃，繁殖最适为20 ℃左右
最适为30～35 ℃
气体
前期：需氧，后期：无氧
需要充足的氧气
时间
10～12 天
7～8 天
18．（2019·江苏·高考真题）下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是
A．利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封发酵
B．家庭制作果酒、果醋和腐乳通常都不是纯种发酵
C．果醋制作过程中发酵液pH 逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
D．毛霉主要通过产生脂肪酶、蛋白酶和纤维素酶参与腐乳发酵
19．（2018·江苏·高考真题）某高校采用如图所示的发酵罐进行葡萄酒主发酵过程的研究，下列叙述错误
的是（ ）
A．夏季生产果酒时，常需对罐体进行降温处理
B．乙醇为挥发性物质，故发酵过程中空气的进气量不宜太大
C．正常发酵过程中罐内的压力不会低于大气压
D．可以通过监测发酵过程中残余糖的浓度来决定何时终止发酵
20．（2018·北京·高考真题）以下高中生物学实验中，操作不正确的是（ ）
A．在制作果酒的实验中，将葡萄汁液装满整个发酵装置
B．鉴定DNA 时，将粗提产物与二苯胺混合后进行沸水浴
C．用苏丹Ⅲ染液染色，观察花生子叶细胞中的脂肪滴（颗粒）
D．用龙胆紫染液染色，观察洋葱根尖分生区细胞中的染色体
21．（2017·江苏·高考真题）下列关于“腐乳的制作”实验，叙述正确的是（ ）
A．控制发酵温度的主要目的是腐乳调味B．腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用
C．毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉
D．成品腐乳表面的粘性物质主要由细菌产生
22．（2017·江苏·高考真题）如图是探究果酒与果醋发酵的装置示意图。下列相关叙述错误的是
A．改变通入气体种类，可以研究呼吸作用类型对发酵的影响
B．果酒发酵过程中通入N2，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸
C．果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关
D．气体入口与气体出口可以交换使用
果酒制作
果醋制作
菌种
酵母菌
醋酸菌
菌种来源
附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
变酸酒表面的菌膜
发酵过程
有氧条件下，酵母菌通过有氧呼吸大量繁
殖：C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O；
无氧条件下，酵母菌通过无氧呼吸产生酒
精：C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2
氧气、糖源充足时：C6H12O6＋
2O2→2CH3COOH＋2CO2＋2H2O；
缺少糖源、氧气充足时：
C2H5OH＋O2→CH3COOH＋H2O
温度
一般酒精发酵18～25 ℃，繁殖最适为20 ℃
左右
最适为30～35 ℃
气体
前期：需氧，后期：无氧
需要充足的氧气
时间
10～12 天
7～8 天
23．（2016·江苏·高考真题）下列关于中学“腐乳的制作”实验，叙述正确的是
A．加盐主要是为了调节水分，利于毛霉生长
B．加料酒主要是为了灭菌，避免腐乳变质
C．发酵过程中起主要作用的是乳酸杆菌
D．实验室制作的腐乳不宜直接食用
24．（2016·四川·高考真题）下列有关实验操作或方法所导致结果的描述，不正确的是
A．用纸层析法分离色素时，若滤液细线画得过粗可能会导致色素带出现重叠
B．用葡萄制作果醋时，若先通入空气再密封发酵可以增加醋酸含量提高品质
C．提取胡萝卜素时，若用酒精代替石油醚萃取将会导致胡萝卜素提取率降低
D．调查人群中色盲发病率时，若只在患者家系中调查将会导致所得结果偏高
二、多选题
25．（2025·山东·高考真题）酿造某大曲白酒的过程中，微生物的主要来源有大曲和窖泥。大曲主要提供
白酒酿造过程中糖化所需的微生物，制曲过程需经堆积培养，培养时温度可达60℃左右；将大曲和酿酒原
料混合，初步发酵后放入窖池；窖池发酵是白酒酿造过程中微生物发酵的最后阶段。下列说法正确的是（
）
A．堆积培养过程中的高温有利于筛选酿酒酵母
B．大曲中存在能分泌淀粉酶的微生物
C．窖池发酵过程中，酵母菌以无氧呼吸为主
D．窖池密封不严使酒变酸是因为乳酸含量增加
26．（2022·江苏·高考真题）在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述错误
的有（ ）
A．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气
B．制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料
C．葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后，可直接通入无菌空气制作葡萄醋
D．果酒发酵时温度宜控制在18-25℃，泡菜发酵时温度宜控制在30-35℃
三、实验题
27．（2024·北京·高考真题）啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用于
再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵母
菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。
(1)酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生 和CO2。有氧培养时，酵母菌增殖速度明
显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量 。
(2)本实验中，采集是指取样并培养4 天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图
甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是 。
(3)根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O2浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌接
触O2的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（H2O2）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知H2O2能扩散进出细
胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度H2O2的培养基上，无氧培养后得
到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由 。
(4)上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A 组菌液直接滴加到H2O2溶液中，
无气泡产生；B 组菌液有氧培养4 天后，取与A 组活菌数相同的菌液，滴加到H2O2溶液中，出现明显气泡。
结果说明，酵母菌可通过产生 以抵抗H2O2的伤害。
题干关键信息
所学知识
信息加工
酵母菌
兼性厌氧型微生物
无氧条件（密闭发酵罐）：酵母进
进行无氧呼吸，产生酒精和CO2
有氧条件：酵母菌进行有氧呼吸，
大量繁殖
研究者探究了不同
氧气含量下酵母菌
的生长繁殖及相关
调控
自变量是不同氧气含量，
因变量是酵母菌生长分支
即相关调控情况
图甲中，无氧取样，无氧培养条件
下，菌落数最多，说明该条件下，
占比较低的菌种也会产生菌落，有
利于保留占比很低菌种
28．（2017·海南·高考真题）[选修1：生物技术实践]
绿藻A 是某种单细胞绿藻，能够合成物质W。某小组为探究氮营养缺乏对绿藻A 增殖及物质W 累计的影响，
将等量的绿藻A 分别接种在氮营养缺乏（实验组）和氮营养正常（对照组）的两瓶培养液中，并在适宜温
度和一定光强下培养。定时取样并检测细胞浓度和物质W 的含量，结果如图。
（1）从图甲可知，在氮营养正常培养液的瓶中，绿藻A 的种群增长曲线呈 型。
（2）综合图甲和图乙的信息可知，在生产上，若要用少量的绿藻A 获得尽可能多的物质W，可以采取的
措施是 。
（3）若物质W 是类胡萝卜素，根据类胡萝卜素不易挥发和易于溶于有机溶剂的特点，应选择的提取方法
是 。用纸层析法可以将类胡萝卜素与叶绿素分开，纸层析法分离的原理是 。
（4）在以上研究的基础上，某人拟设计实验进一步研究氮营养缺乏程度对物质W 积累的影响，则该实验
的自变量是 。
（5）与在光照条件下相比，若要使绿藻A 在黑暗条件下增殖，需要为其提供 （填“葡
萄糖”或“纤维素”）作为营养物质，原因是 。
29．（山西省陵川第一中学2016-2017 学年高二下学期期末考试生物试题）绿色植物甲含有物质W，该物
质为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，且受热、受潮易分解。其提取流程为：植物甲→粉
碎→加溶剂→振荡→收集提取液→活性炭处理→过滤去除活性炭→蒸馏（含回收溶剂）→重结晶→成品。
回答下列问题：
（1）在提取物质W 时，最好应选用的一种原料是 （填“高温烘干”“晾干”或“新
鲜”）的植物甲，不宜选用其他两种的原因是 。
（2）提取物质W 时，振荡的作用是 。
（3）活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中，用活性炭处理提取液的目的是 。
（4）现有丙酮（沸点56 ℃）、乙醇（沸点约78 ℃）两种溶剂，在提取物质W 时，应选用丙酮作为提取
剂，理由是 。
（5）该实验操作过程中应注意的事项是 （答出两点即可）。
30．（2017·全国II 卷·高考真题）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因
素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B 两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件
下进行发酵，并在32 h 内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：
（1）该实验的自变量是 、 。
（2）如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是 。
（3）如果在实验后，发现32 h 内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵
的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情是 。
（4）从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为 ，脂肪
转变为 。
四、解答题
31．（2022·湖南·高考真题）黄酒源于中国，与啤酒、葡萄酒并称世界三大发酵酒。发酵酒的酿造过程中
除了产生乙醇外，也产生不利于人体健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC 主要由尿素与乙醇反应形成，各国对
酒中的EC 含量有严格的限量标准。回答下列问题:
(1)某黄酒酿制工艺流程如图所示，图中加入的菌种a 是 ，工艺b 是 （填“消毒”或“灭
菌”），采用工艺b 的目的是 。
(2)以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，根据颜色变化，可以初步鉴定分解尿素的细菌。尿
素分解菌产生的脲酶可用于降解黄酒中的尿素，脲酶固定化后稳定性和利用效率提高，固定化方法有
（答出两种即可）。
(3)研究人员利用脲酶基因构建基因工程菌L，在不同条件下分批发酵生产脲酶，结果如图所示。推测
是决定工程菌L 高脲酶活力的关键因素，理由是 。
(4)某公司开发了一种新的黄酒产品，发现EC 含量超标。简要写出利用微生物降低该黄酒中EC 含量的思路
。
32．（2018·海南·高考真题）葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的，酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。
回答下列问题：
（1）试管中的 X 溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优
点是 、 （答出两点即可）。
（2）葡萄汁装入甲装置时，要留有1/3 的空间，这种做法的目的是 、 （答出两点即可）。
（3）某同学若用乙装置进行发酵，并设置两个不同处理组（乙 A 和乙 B），乙 A 装置中保留一定量的
氧气，乙 B 装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下，测得一段时间内乙 A 和乙 B 中酒精含
量的变化趋势及乙 A 中氧气含量的变化趋势如曲线图丙所示。图中曲线 ①、②、③依次表示 、
、 含量的变化趋势。
（4）从细胞呼吸类型看，酵母菌属于 生物；从同化作用的类型看，酵母菌属于 （填“自
养”或“异养”） 生物。
33．（2017·浙江·高考真题）回答下列小题
回答与酿酒和制醋有关的问题:
（1）为了获得优良的酿酒红曲霉菌株,将原菌株的孢子诱变处理后制成较稀浓度的单孢子悬液,这样做的目
的是在培养时有利于获得
（2）大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后,用某酿酒酵母进行酒精发酵,发酵完毕后得到新鲜红曲酒,酒中乙醇浓度
不超过15%。其主要原因是当发酵液中的乙醇浓度接近15%时, (A．乙醇氧化逐渐增强直至平衡
B．葡萄糖分解逐渐增强直至平衡C．乙醇氧化逐渐减弱直至停止D．葡萄糖分解逐渐减弱直至停止)。
（3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色,采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄糖含量的步骤如下:第一
步,标准曲线的制作。用蒸馏水配置 ,与蒽酮试剂反应后,用比色计测定,并制作以 的标
准曲线。第二步,样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色,其目的是 。第三步,样品测定与计算。
（4）影响红曲酒风味的主要因素,除了温度、pH、氧气等环境因素外,还有 (答出2 点即可)。
（5）在红曲醋生产工艺中,将适量的红曲酒、水、醋化醋杆菌等混合。再添加一定量谷壳糠等制成松散的
发酵料,其目的是 ,以利于醋酸发酵。
回答与植物克隆和动物克隆有关的问题:
（1）利用植物愈伤组织获得再生植株主要有两条途径:一是由愈伤组织的细胞先分化产生芽和根后再形成
一个完整植株的 途径,二是由愈伤组织细胞产生胚状体后再萌发形成完整植株的胚胎发生途径。
另外也可不通过愈伤组织阶段而直接采用带腋芽带的茎段培养成丛状苗,再诱导生根获得再生植株,其原因
是腋芽中存在 。
（2）利用植物克隆培育新品种,一方面可利用带有目的基因的 侵染植株，或将目的基因通过
方法导入植物细胞、组织、器官获得转基因植株，另一方面利用异源植株的 进行融合产生杂
种植株,或利用异源植株在试管内进行 ,对其产生的胚进行培养产生杂种植株。
（3）下列属于植物克隆和动物克隆共有培养方法是（_____）
A 悬浮培养、器官培养
B．贴壁培养、传代培养
C．器官培养、愈伤组织培养
D 原生质体培养、传代培养
34．（浙江选考2018 版生物考前特训（2017 年10 月）非选择题集训：题型4 围绕选修1）回答下列
（一）、（二）小题：
（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：
（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用
蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分
离操作，正确的是 。
（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由 进行厌氧呼吸产生。亚硝
酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与 发生重氮化反应，再
与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光程为1cm 的 ，在550nm 光波下测定光密度
值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的 比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。
（3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐。在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜
中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和 环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解。
（二）回答与生态工程有关的问题：
（1）对农作物秸秆多途径利用的基本过程示意图如下，贯穿全过程的核心技术是 技术。
其中“过腹还田”的具体途径是 。将秸秆和动物粪便等通过微生物发酵产生沼气，这是利用了农
业生态工程中的 技术。
（2）农业生产上，畜牧业依赖和受制于种植业，可以通过种植业和畜牧业的 技术提高经济和社
会效益。“退耕还林”后，林地的增加可以减少 ，更有利于受损生态系统的恢复。使用农药能有
效控制农业害虫，但也使生态系统的 减少，因此利用生物的 进行生物防治是今后的发展
方向。
35．（2016·天津·高考真题）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。
（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶 。
（2）在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中,发酵罐先通气，后密闭。通气能提高
的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。
（3）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30 天。工艺如下。
① 发酵过程中,定期取样测定醋酸杆菌密度变化,趋势如右图。据图分析，与颠倒前相比，B 层醋酸杆菌在
颠倒后密度变化的特点是 ，由此推断，影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是
。
②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中 层醋醅有利于乳酸菌
繁殖，积累乳酸。
③成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同
种类乳酸菌的 ，淘汰了部分乳酸菌种类。
36．（2016·全国II 卷·高考真题）[生物——选修1：生物技术实践]
苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。回答下列问题：
（1）酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的
中进行，其产物乙醇与 试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在
酵母菌细胞的 中进行。与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度
。
（2）第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作
用类型，该过程需要在 条件下才能完成。
（3）在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度 （填“低于”
或“高于”）第二阶段的。
（4）醋酸杆菌属于 核生物，其细胞结构中 （填“含有”或“不含有”）线粒体。
37．（2016·天津·高考真题）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。
(1)在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶 。
(2)在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。通气能提高 的数量，
有利于密闭时获得更多的酒精产物。
(3)在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30 天。工艺如下。
①发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如右图。据图分析，与颠倒前相比，B 层醋酸杆菌
密度变化的主要环境因素是 。
②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中 层醋醅有利于乳酸菌繁殖，
积累乳酸。
③成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同
种类乳酸菌的 ，淘汰了部分乳酸菌种类。
考点3 发酵工程与应用
1．（2025·陕晋青宁卷·高考真题）我国是世界上最大的柠檬酸生产国。利用黑曲霉通过深层通气液体发酵
技术生产柠檬酸，流程如下图。下列叙述错误的是（ ）
A．淀粉水解糖为发酵提供碳源和能源
B．扩大培养可提供足量的黑曲霉菌种
C．培养基、发酵罐和空气的灭菌方法相同
D．通气、搅拌有利于溶解氧增加和柠檬酸积累
2．（2025·河南·高考真题）食醋和黄酒是我国传统的日常调味品，均通过发酵技术生产。下列叙述错误的
是（ ）
A．醋酸的发酵是好氧发酵，而酒精的发酵是厌氧发酵
B．以谷物为原料酿造食醋和黄酒时，伴有pH 下降和气体产生
C．食醋和黄酒发酵过程中，微生物繁殖越快发酵产物产率越高
D．使用天然混合菌种发酵往往会造成传统发酵食品的品质不一
3．（2024·江西·高考真题）井冈霉素是我国科学家发现的一种氨基寡糖类抗生素，它由吸水链霉菌井冈变
种（JGs，一种放线菌，菌体呈丝状生长）发酵而来，在水稻病害防治等领域中得到广泛应用。下列关于
JGs 发酵生产井冈霉素的叙述，正确的是（ ）
A．JGs 可发酵生产井冈霉素，因为它含有能够编码井冈霉素的基因
B．JGs 接入发酵罐前需要扩大培养，该过程不影响井冈霉素的产量
C．提高JGs 发酵培养基中营养物质的浓度，会提高井冈霉素的产量
D．稀释涂布平板法不宜用于监控JGs 发酵过程中活细胞数量的变化
4．（2024·山东·高考真题）在发酵过程中，多个黑曲霉菌体常聚集成团形成菌球体，菌球体大小仅由菌体
数量决定。黑曲霉利用糖类发酵产生柠檬酸时需要充足的氧。菌体内铵离子浓度升高时，可解除柠檬酸对
其合成途径的反馈抑制。下列说法错误的是（ ）
A．相同菌体密度下，菌球体越大柠檬酸产生速率越慢
B．发酵中期添加一定量的硫酸铵可提高柠檬酸产量
C．发酵过程中pH 下降可抑制大部分细菌的生长
D．发酵结束后，将过滤所得的固体物质进行干燥即可获得柠檬酸产品
5．（2022·湖北·高考真题）废水、废料经加工可变废为宝。某工厂利用果糖生产废水和沼气池废料生产蛋
白质的技术路线如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．该生产过程中，一定有气体生成
B．微生物生长所需碳源主要来源于沼气池废料
C．该生产工艺利用微生物厌氧发酵技术生产蛋白质
D．沼气池废料和果糖生产废水在加入反应器之前需要灭菌处理
6．（2022·湖北·高考真题）关于白酒、啤酒和果酒的生产，下列叙述错误的是（ ）
A．在白酒、啤酒和果酒的发酵初期需要提供一定的氧气
B．白酒、啤酒和果酒酿制的过程也是微生物生长繁殖的过程
C．葡萄糖转化为乙醇所需的酶既存在于细胞质基质，也存在于线粒体
D．生产白酒、啤酒和果酒的原材料不同，但发酵过程中起主要作用的都是酵母菌
7．（2022·山东·高考真题）青霉菌处在葡萄糖浓度不足的环境中时，会通过分泌青霉素杀死细菌，以保证
自身生存所需的能量供应。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（ ）
A．发酵液中的碳源不宜使用葡萄糖
B．可用深层通气液体发酵技术提高产量
C．选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中
D．青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌
8．（2022·湖南·高考真题）洗涤剂中的碱性蛋白酶受到其他成分的影响而改变构象，部分解折叠后可被正
常碱性蛋白酶特异性识别并降解（自溶）失活。此外，加热也能使碱性蛋白酶失活，如图所示。下列叙述
错误的是（ ）
A．碱性蛋白酶在一定条件下可发生自溶失活
B．加热导致碱性蛋白酶构象改变是不可逆的
C．添加酶稳定剂可提高加碱性蛋白酶洗涤剂的去污效果
D．添加碱性蛋白酶可降低洗涤剂使用量，减少环境污染
9．（2022·浙江·高考真题）用果胶酶处理草莓，可以得到比较澄清的草莓汁；而利用稀盐酸处理草莓可以
制得糊状的草莓酱。果胶酶和盐酸催化果胶水解的不同点在于（ ）
A．两者催化果胶水解得到的产物片段长度不同
B．两者催化果胶水解得到的单糖不同
C．两者催化果胶主链水解断裂的化学键不同
D．酶催化需要最适温度，盐酸水解果胶不需要最适温度
（2020·天津·高考真题）阅读下列材料，回答下列小题。
甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，风味受蚕豆蛋白分解产生的氨基酸影响，也受发酵过程中不同微生物的多种
代谢产物影响。其生产工艺如下图所示。
某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺（盐度15%，温度37 ℃，发酵30 天）进行了改良，改良后
甜瓣子风味得以提升。新工艺参数如下表所示。
时期
时段（天）
盐度（%）
温度（℃）
前期
0~12
6
12
中期
12~16
6
37
后期
16~30
15
37
两种工艺的结果比较见下图。
10．下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是（ ）
A．发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累
B．蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源
C．温度与盐度都影响微生物的生长繁殖
D．定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数
11．下列对实验结果的分析，错误的是（ ）
A．新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致
B．新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致
C．新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性
D．新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均有关
12．（2018·江苏·高考真题）下列关于酵母细胞固定化实验的叙述，正确的是
A．用温水使海藻酸钠迅速溶解，待其冷却到室温后用于包埋细胞
B．进行包埋时，用于悬浮细胞的CaCl2溶液浓度要适宜
C．注射器(或滴管)出口应尽量贴近液面以保证凝胶珠成为球状
D．包埋酵母细胞的凝胶珠为淡黄色半透明状，并具有一定的弹性
13．（2017·江苏·高考真题）为了探究一种新型碱性纤维素酶的去污效能，研究性学习小组进行了相关实
验，结果如下图。由图中实验结果能直接得出的结论是（ ）
A．碱性纤维素酶对污布类型2 的去污力最强
B．不同类型洗衣粉影响碱性纤维素酶的去污力
C．碱性纤维素酶对污布类型2、3 的去污力不同
D．加大酶用量可以显著提高洗衣粉的去污力
14．（2017·江苏·高考真题）下列关于“酵母细胞的固定化技术”实验的叙述，正确的是（ ）
A．活化酵母时，将适量干酵母与蒸馏水混合并搅拌成糊状
B．配制CaCl2 溶液时，需要边小火加热边搅拌
C．将海藻酸钠溶液滴加到CaCl2 溶液时，凝胶珠成形后应即刻取出
D．海藻酸钠溶液浓度过高时凝胶珠呈白色，过低时凝胶珠易呈蝌蚪状
15．（2017·江苏·高考真题）固定化单宁酶应用于茶饮料加工，可消除其中的苦涩味。下列有关叙述正确
的是
A．在单宁酶纯化时可采用透析法去除杂蛋白
B．化学结合法比吸附法对单宁酶活性影响更小
C．温度、pH 和重金属离子都可能影响固定化单宁酶活性
D．酶的高效性决定固定化单宁酶不会降解茶饮料中的有益成分
二、多选题
16．（2025·河北·高考真题）隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，
是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一、从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA 的
发酵生产。下列叙述正确的是（ ）
A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源
B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻
C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长
D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA 产量
17．（2024·河北·高考真题）中国传统白酒多以泥窖为发酵基础，素有“千年老窖万年糟”“以窖养糟，
以糟养泥”之说。多年反复利用的老窖池内壁窖泥中含有大量与酿酒相关的微生物。下列叙述正确的是（
）
A．传统白酒的酿造是在以酿酒酵母为主的多种微生物共同作用下完成的
B．窖池内各种微生物形成了相对稳定的体系，使酿造过程不易污染杂菌
C．从窖泥中分离的酿酒酵母扩大培养时，需在
或
环境中进行
D．从谷物原料发酵形成的酒糟中，可分离出产淀粉酶的微生物
18．（2023·山东·高考真题）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（ ）
A．都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理
B．都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖
C．发酵前都需要对原料进行灭菌
D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期
19．（2022·辽宁·高考真题）β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β-苯乙
醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述正确的是（ ）
A．所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌
B．通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌
C．还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力
D．该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发
20．（2022·山东·高考真题）啤酒的工业化生产中，大麦经发芽、焙烤、碾磨、糖化、蒸煮、发酵、消毒
等工序后，最终过滤、调节、分装。下列说法正确的是（ ）
A．用赤霉素处理大麦，可使大麦种子无须发芽就能产生α-淀粉酶
B．焙烤是为了利用高温杀死大麦种子胚并进行灭菌
C．糖浆经蒸煮、冷却后需接种酵母菌进行发酵
D．通过转基因技术可减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
21．（2018·江苏·高考真题）下列关于加酶洗衣粉的叙述，错误的是
A．洗衣粉中添加的酶通常是由微生物发酵生产而来
B．洗衣粉中的蛋白酶通常会将添加的其他酶迅速分解
C．在50 ℃热水中用加酶洗衣粉洗衣时，其中的酶会迅速失活
D．加酶洗衣粉受潮后重新晾干保存，不会影响其中酶的活性
三、实验题
22．（2024·北京·高考真题）啤酒经酵母菌发酵酿制而成。生产中，需从密闭的发酵罐中采集酵母菌用于
再发酵，而直接开罐采集的传统方式会损失一些占比很低的独特菌种。研究者探究了不同氧气含量下酵母
菌的生长繁殖及相关调控，以优化采集条件。
(1)酵母菌是兼性厌氧微生物，在密闭发酵罐中会产生 和CO2。有氧培养时，酵母菌增殖速度明
显快于无氧培养，原因是酵母菌进行有氧呼吸，产生大量 。
(2)本实验中，采集是指取样并培养4 天。在不同的气体条件下从发酵罐中采集酵母菌，统计菌落数（图
甲）。由结果可知，有利于保留占比很低菌种的采集条件是 。
(3)根据上述实验结果可知，采集酵母菌时O2浓度的陡然变化会导致部分菌体死亡。研究者推测，酵母菌接
触O2的最初阶段，细胞产生的过氧化氢（H2O2）浓度会持续上升，使酵母菌受损。已知H2O2能扩散进出细
胞。研究者在无氧条件下从发酵罐中取出酵母菌，分别接种至含不同浓度H2O2的培养基上，无氧培养后得
到如图乙所示结果。请判断该实验能否完全证实上述推测，并说明理由 。
(4)上述推测经证实后，研究者在有氧条件下从发酵罐中取样并分为两组，A 组菌液直接滴加到H2O2溶液中，
无气泡产生；B 组菌液有氧培养4 天后，取与A 组活菌数相同的菌液，滴加到H2O2溶液中，出现明显气泡。
结果说明，酵母菌可通过产生 以抵抗H2O2的伤害。
题干关键信息
所学知识
信息加工
酵母菌
兼性厌氧型微生物
无氧条件（密闭发酵罐）：酵母进
进行无氧呼吸，产生酒精和CO2
有氧条件：酵母菌进行有氧呼吸，
大量繁殖
研究者探究了不同
氧气含量下酵母菌
的生长繁殖及相关
调控
自变量是不同氧气含量，
因变量是酵母菌生长分支
即相关调控情况
图甲中，无氧取样，无氧培养条件
下，菌落数最多，说明该条件下，
占比较低的菌种也会产生菌落，有
利于保留占比很低菌种
23．（2018·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：
某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。
(1)果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质量的
百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗 (A．有助于清洗杂质和去除可
溶性糖 B．使植物组织变得松散 C．使有关酶失活 D．有利细胞破裂和原料粉碎制浆)。
(2)在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其菌株起重要作
用。为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用 ，进行单菌落分离，然后将其
，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。
(3)在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底
酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题,可添加 使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加 ，
以解决汁液浑浊和沉淀问题。
(4)在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，
然后主要优化各固定化酶反应器中的 （答出2 点即可）、反应液pH 和酶反应时间等因素。其中，
酶反应时间可通过 来调节。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。
(1)将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121 均用限制性核酸内切酶EcoR I 酶切，在切口
处形成 。选取含抗虫基因的DNA 片段与切割后的pBI121 用DNA 连接酶连接。在两个片段相邻处形
成 ，获得重组质粒。
(2)已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混
合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成 实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养
一段时间，其目的是 ，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。
(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行 ，然后接种到培养基中培养，幼胚发生 形成愈伤组
织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水
稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及
（答 2 点即可）。
24．（2017·浙江·高考真题）回答下列（一）（二）小题
（一）请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题
（1）LB 固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 ，
灭菌备用。
（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用 灭菌过的G6 玻璃砂漏斗过滤，因为G6 玻璃砂
漏斗 ，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。
（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB 固体培养基和尿素固体培养基
上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是 （A．10-5稀释液+尿素固体培养基 B．10-5
稀释液+LB 固体培养基 C． 10-4稀释液+尿素固体培养基 D．10-4稀释液+LB 固体培养基）。在尿素固体培
养基上产脲酶细菌菌落周围出现 ，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生 所致。
（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 。
（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：
（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L 甘露醇（维持较高渗透
压）的 混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。
（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该 培
养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞
团经球形胚、 和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养
基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是 ，
胚性细胞的主要特点是： 。
（A．液泡小、细胞核小 B．液泡大，细胞核大 C．液泡大，细胞核小 D．液泡小、细胞核大）
（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过 方法将他们的遗
传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用 扩增相关
基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。
“蒸气”是泛指液体或固体（如水、碘、汞、苯）因蒸发、沸腾或升华而变成的气体。使用时前面
要加上与之相关的事物，如水蒸气、苯蒸气、汞蒸气、碘蒸气。
“蒸汽”是特指水加热到沸点所变成的水汽，气态的水。“蒸汽”特指水的蒸气，义同“水蒸气”，
所以不能写成“水蒸气”。
植物体细胞杂交：两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，并且把杂种细胞培育成新植物
体的方法。
动物细胞杂交：基因型不同的细胞的融合称为细胞杂交。基因型相同或不同的细胞融合属于动物细
胞融合。
25．（2016·江苏·高考真题）为了探究海藻酸钠固定化对绿球藻生长的影响，以及固定化藻对含Zn2+污水的
净化作用，科研人员用筛选到的一株绿球藻进行试验，流程及结果如下。请回答下列问题：
（1）实验中的海藻酸钠作用是 ，CaC l2的作用是 。
（2）为洗去凝胶球上残余的CaC l2和其他污染物，并保持绿球藻活性，宜采用 洗涤。图1 中1.
0%海藻酸钠组培养24 h 后，移去凝胶球，溶液呈绿色，原因是 。
（3）为探索固定化藻对含Zn2+污水的净化作用，应选用浓度为
的
海藻酸钠制备凝胶球。
（4）图2 中空白凝胶球组Zn2+浓度下降的原因是 。结合图1 和图2 分析，固定化藻的实验组
24~48 h 间Zn2+浓度下降速度较快的主要原因是 ；72~96 h 间Zn2+浓度下降速度较慢的原因有
。
四、解答题
26．（2024·安徽·高考真题）丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。兴趣小组在已改造的大肠杆菌中引
入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。回答下列问题。
(1)扩增X 基因时，PCR 反应中需要使用Taq DNA 聚合酶，原因是 。
(2)使用BamH I 和 SalI 限制酶处理质粒和X 基因，连接后转化大肠杆菌，并涂布在无抗生素平板上（如
图）。在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思路是 。
、
(3)研究表明，碳源和氮源的种类、浓度及其比例会影响微生物生长和发酵产物积累。如果培养基中碳源相
对过多，容易使其氧化不彻底，形成较多的 ，引起发酵液pH 值下降。兴趣小组通
过单因子实验确定了木薯淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100g.L-1和15 g.L-1。在此基础上，设置不同浓度
的木薯淀粉（90 g.L-1、100 g.L-1、110 g.L-1）和酵母粉（12 g.L-1、15g.L-1、18 g.L-1）筛选碳源和氮源浓度的最
佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置 （填数字）组实验（重复组不计算在内）。
(4)大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是 。
(5)发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经 ，最终获得发酵产品。
27．（2023·全国乙卷·高考真题）某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要
步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用
清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T 不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发
酵）。实验流程如图所示。
回答下列问题。
(1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T 能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是 。
(2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，
氮源的主要作用是 （答出1 点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用
该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有 （答出2 点即可）。
(3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是
。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是 。发酵液中的乙醇可用 溶液检测。
(4)本实验收集的淋洗液中的 可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，
本实验中乙醇生产方式的优点是 。
28．（2022·广东·高考真题）“绿水逶迤去，青山相向开”大力发展低碳经济已成为全社会的共识。基于
某些梭菌的特殊代谢能力，有研究者以某些工业废气（含CO2等一碳温室气体，多来自高污染排放企业）
为原料，通过厌氧发酵生产丙酮，构建一种生产高附加值化工产品的新技术。
回答下列问题：
(1)研究者针对每个需要扩增的酶基因（如图）设计一对 ，利用PCR 技术，在优化反应条
件后扩增得到目标酶基因。
(2)研究者构建了一种表达载体pMTL80k，用于在梭菌中建立多基因组合表达库，经筛选后提高丙酮的合成
量。该载体包括了启动子、终止子及抗生素抗性基因等，其中抗生素抗性基因的作用是 ，
终止子的作用是 。
(3)培养过程中发现重组梭菌大量表达上述酶蛋白时，出现了生长迟缓的现象，推测其原因可能是
，此外丙酮的积累会伤害细胞，需要进一步优化菌株和工艺才能扩大应用规模。
(4)这种生产高附加值化工产品的新技术，实现了 ，体现了循环经济特点。从“碳中和”
的角度看，该技术的优势在于 ，具有广泛的应用前景和良好的社会效益。
29．（2021·重庆·高考真题）人类很早就能制作果酒，并用果酒进一步发酵生产果醋。
(1)人们利用水果及附着在果皮上的 菌，在18～25℃、无氧条件下酿造果酒；在利用醋酸菌在
条件下，将酒精转化成醋酸酿得果醋。酿造果醋时，得到了醋酸产率较高的醋酸菌群，为进一步纯化获得
优良醋酸菌菌种，采用的接种方法是 。
(2)先酿制果酒再生产果醋的优势有 （填编号）。
①先酿制果酒，发酵液能抑制杂菌的生长，有利于提高果醋的产率
②酿制果酒时形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的产率
③果酒有利于溶出水果中的风味物质并保留在果醋中
(3)果酒中的酒精含量对果醋的醋酸产率会产生一定的影响。某技术组配制发酵液研究了初始酒精浓度对醋
酸含量的影响，结果见图。
该技术组使用的发酵液中，除酒精外还包括的基本营养物质有 （填写两种）。据图可知，
醋酸发酵的最适初始酒精浓度是 ；酒精浓度为10%时醋酸含量最低，此时，若要尽快提高醋酸含量，
可采取的措施有 （填写两个方面）。
30．（2021·河北·高考真题）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些皮渣主要用作
饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。
回答下列问题：
（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是
，萃取效率主要取决于萃取剂的 。萃取过程需要在适宜温度下进行，温度过高会导致花色苷
。研究发现，萃取时辅以纤维素酶、果胶酶处理可提高花色苷的提取率，原因是 。
（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g 皮渣加入90mL 无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布平
板法将0.1mL 稀释液接种于培养基上。104倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91 和95，则每克
皮渣中微生物数量为 个。
（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH 调至
性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是
。培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为 。
（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者
菌落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌 。（简要写出实验步
骤和预期结果）
31．（2021·广东·高考真题）中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖
后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA 等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的
整体利用价值。工艺流程如图。
回答下列问题：
（1）为提高菌株H 对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为 ，并不断提
高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目
标菌株。培养过程中定期取样并用 的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优
良菌株的方法还有 等。（答出两种方法即可）
（2）基于菌株H 嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基
盐浓度设为60g/L，pH 为10，菌株H 可正常持续发酵60d 以上。该系统不需要灭菌的原因是 。
（答出两点即可）
（3）研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH 条件下发酵，结果发现发酵液中菌
株H 细胞增殖和PHA 产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中 可能是
高密度培养的限制因素。
（4）菌株H 还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌
。
32．（2021·全国甲卷·高考真题）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。某同学通过实验比较了几种洗衣
粉的去渍效果（“+”越多表示去渍效果越好），实验结果见下表。
加酶洗衣粉A
加酶洗衣粉B
加酶洗衣粉C
无酶洗衣粉(对照)
血渍
+++
+
+++
+
油渍
+
+++
+++
+
根据实验结果回答下列问题：
（1）加酶洗衣粉A 中添加的酶是 ；加酶洗衣粉B 中添加的酶是 ；加酶洗衣粉C 中添
加的酶是 。
（2）表中不宜用于洗涤蚕丝织物的洗衣粉有 ，原因是 。
（3）相对于无酶洗衣粉，加酶洗衣粉去渍效果好的原因是 。
（4）关于酶的应用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生产实践中得到应用，如固定化葡萄糖
异构酶已经用于高果糖浆生产。固定化酶技术是指 。固定化酶在生产实践中应用的优点是
（答出1 点即可）。
33．（2021·全国乙卷·高考真题）工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下通过分解与合成代谢
将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发
酵制作酱油的流程示意图如下。
回答下列问题：
（1）米曲霉发酵过程中，加入大豆、小麦和麦麸可以为米曲霉的生长提供营养物质，大豆中的
可为米曲霉的生长提供氮源，小麦中的淀粉可为米曲霉的生长提供 。
（2）米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶
中的 、 能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分
解为小分子的肽和 。米曲霉发酵过程需要提供营养物质、通入空气并搅拌，由此可以判断米曲
霉属于 （填“自养厌氧”“异养厌氧”或“异养好氧”）微生物。
（3）在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于 （填“真核生物”或“原核生物”）；添加的酵母
菌在无氧条件下分解葡萄糖的产物是 。在该阶段抑制杂菌污染和繁殖是保证酱油质量的重要
因素，据图分析该阶段中可以抑制杂菌生长的物质是 （答出1 点即可）。
34．（2020·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
（1）柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的 。为确定果胶酶
的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3 种方法进行实验：①取各处理样品，添加
相同体积的 ，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行
测定，OD 值 的处理效果好。③对不同处理进行 ，记录相同体积果汁通过的时间，
时间较短的处理效果好。
（2）加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利
用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成 ，再均匀涂布在LB 固体
培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已 的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基
上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径 的菌株
中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，
液体培养基的 下降。
（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
（1）天然农杆菌的Ti 质粒上存在着一段DNA 片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。
为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti 质粒时，应考虑T-DNA 中要有可表达的目的基因，
还需要有可表达的 。
（2）结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性
状、较高的遗传稳定性、 及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，
则可用 的转基因方法。
（3）利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者
总培养时间 ，且不经历 过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用
方法。
（4）与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加 ，促进
丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成 ，最终形成根。还可通过改变MS 培养基
促进生根，如 （A．提高蔗糖浓度B．降低培养基浓度C．提高大量元素浓度D．不添加琼脂）。
35．（2020·全国III 卷·高考真题）水果可以用来加工制作果汁、果酒和果醋等。回答下列问题：
（1）制作果汁时，可以使用果胶酶、纤维素酶等提高水果的出汁率和澄清度。果胶酶是分解果胶的一类
酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、 （答出2 种即可）。纤维素酶可以分解植物
（填细胞膜或细胞壁）中的纤维素。
（2）用果胶酶处理果泥时，为了提高出汁率，需要控制反应的温度，原因是 。
（3）现有甲乙丙三种不同来源的果胶酶，某同学拟在果泥用量、温度、pH 等所有条件都相同的前提下比
较这三种酶的活性。通常，酶活性的高低可用 来表示。
（4）获得的果汁（如苹果汁）可以用来制作果酒或者果醋，制作果酒需要 菌，这一
过程中也需要O2，O2的作用是 。制作果醋需要醋酸菌，醋酸菌属于
（填好氧或厌氧）细菌。
36．（2020·全国II 卷·高考真题）研究人员从海底微生物中分离到一种在低温下有催化活性的α-淀粉酶
A3，并对其进行了研究。回答下列问题：
（1）在以淀粉为底物测定A3酶活性时，既可检测淀粉的减少，检测应采用的试剂是 ，也可采用
斐林试剂检测 的增加。
（2）在A3的分离过程中可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度，通常会在凝胶中添加SDS，SDS 的作用是
和 。
（3）本实验中，研究人员在确定A3的最适pH 时使用了三种组分不同的缓冲系统，结果如图所示。某同学
据图判断，缓冲系统的组分对酶活性有影响，其判断依据是 。
（4）在制备A3的固定化酶时，一般不宜采用包埋法，原因是 （答出1 点
即可）。
37．（2019·海南·高考真题）回答下列问题。
（1）玫瑰精油可用玫瑰花瓣为原料，采用水蒸气蒸馏法提取。水蒸气蒸馏法的原理是
。在进行蒸馏时，冷凝管的进水口比出水口 （填“高”或“低”）。蒸馏收集到的乳浊液是
玫瑰精油和水的混合物，要得到玫瑰精油，需要向乳浊液中加入NaCl，其目的是 ；得到
的油层还需要加入无水Na2SO4，其目的是 。
（2）某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是
。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是 ；在制作葡
萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，发酵液会变酸，可能的原因是 。
38．（2019·浙江·高考真题）回答下列（一）、（二）小题：
（一）回答与果胶和果胶酶有关的问题：
（1）通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为 。
（2）为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行 。
（3）在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使 。果汁
生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入 。使之形成絮状物，然后通过离
心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
（4）常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有 和可连续处理等。在建立和优化固定化
果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑
的主要有 和 。
（二）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
（1）通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），
可通过 技术获得特异性探针，并将 中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特
异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。
（2）将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用
分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测 （A．质粒载体 B．转录产物 C．抗性基因 D．病原
微生物）。
（3）植物细胞在培养过程中往往会发生 ，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时
在培养基中加入 ，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用 培养建立的细胞系用于筛
选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。
（4）用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。
若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是 。
39．（2016·海南·高考真题）[选修1——生物技术实践]
回答下列问题：
（1）蛋白酶甲、乙、丙三者的活性随pH 的变化如图所示。通常，用清水洗涤衣服上的新鲜血迹时，不应
该使用开水，原因是 。若要去除衣服上的血渍，应选择含有
（填“蛋白酶甲”、“蛋白酶乙”或“蛋白酶丙”）的碱性洗衣粉，理由是 。
（2）某同学为了洗去衣服上的油渍，洗衣时在市售的蛋白酶洗衣液中添加脂肪酶，该同学的做法
（填“合理”或“不合理”），理由是 。
（3）已知溶液的pH 可以影响酶的活性，请推测pH 影响某种蛋白酶活性的原因可能是其影响了酶和底物
分子中 （填“羧基和氨基”、“氨基和甲基”、“羧基和甲基”或“甲基和甲基”）
等基团的解离状态。
