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专题15 基因工程（选择题60 道）
一、单选题
1．Ti 质粒是根癌农杆菌拟核外的遗传物质，常作为植物基因工程的载体。下列关于Ti 质粒的叙述，正确
的是（ ）
A．每个脱氧核糖均与2 个磷酸基团和1 个碱基相连
B．Ti 质粒复制时具有多起点和双向复制特点
C．用Ca2＋处理植物细胞有利于重组Ti 质粒的导入
D．Ti 质粒可随机整合到农杆菌的拟核DNA 上
2．第一代基因测序技术又叫双脱氧链终止法，它以DNA 合成反应为基础，反应体系中需加入ddNTP（有
ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP4 种）。下图是该技术的测序原理和某待测DNA 序列的电泳图谱。下列
说法正确的是（ ）
A．双脱氧核苷酸无法与模板链发生碱基互补配对，导致子链延伸终止
B．待分离DNA 片段有可解离的基团，在电场中会带上正电荷或负电荷
C．人工合成DNA 体系中必须要加入ATP 以供能
D．待测DNA 的碱基序列是3'-GACTGCCA-5'
3．为提高大豆对磷元素的吸收能力，研究人员利用农杆菌转化法将水稻的耐低磷基因OsPTF 转移到大豆
植株中，下图为重组Ti 质粒上T-DNA 的序列结构示意图。下列相关叙述不正确的是（ ）
A．以水稻RNA 为模板通过逆转录及PCR 扩增可获得大量OsPTF 基因
B．RNA 聚合酶与启动子I 识别并结合后，启动抗除草剂基因的转录
C．可通过含除草剂的选择培养基筛选含有目的的基因大豆愈伤组织
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D．用EcoRI、BamHI 双酶切重组Ti 质粒后，经电泳分离至少得到两条带
4．PCR 扩增仪的温度、时间和循环次数等参数设定不当会影响到基因的扩增结果。下图是PCR 扩增目的
基因时的参数设定，图中线上、线下分别为温度和时间设定。下列叙述错误的是（ ）
A．步骤2 的温度及时间设定主要依据目的基因的G、C 含量
B．步骤3 的温度及时间设定主要依据引物的长度及G、C 含量
C．步骤4 延伸时间的设定主要依据目的基因的碱基数目
D．步骤5 除设定循环次数（25 次）外，还应将“GOTO”设定为步骤3
5．我国科学家将外源生长激素基因导入鲤鱼的受精卵并整合到染色体DNA 上，培育出转基因鲤鱼。与普
通鲤鱼相比，转基因鲤鱼的生长速率加快。下列叙述正确的是（ ）
A．转基因鲤鱼的外源生长激素基因的表达都在细胞核进行
B．外源生长激素基因导入鲤鱼受精卵后没有定向改变性状
C．外源生长激素基因的氢键断裂后利于该基因复制或转录
D．转基因鲤鱼的外源生长激素基因遗传时不遵循遗传定律
6．在构建基因表达载体时，传统方法常受限于限制酶识别序列。科研人员研发了新的DNA 重组方法: In-
Fusion 技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA 序列（即同源序列），
然后用In-Fusion 酶处理，使同源序列形成黏性末端，最终形成的重组质粒会在受体细胞内形成完整的重组
序列。主要操作过程如图示。下列叙述错误的是（ ）
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A．推测In-Fusion 酶的作用是识别同源序列、形成黏性末端、连接磷酸二酯键
B．载体A 端和B 端的序列不同，可防止目的基因与质粒反向连接及自身环化
C．形成重组质粒时，如果温度远高于50℃，黏性末端的碱基不容易互补配对
D．该技术无需识别特定切割位点，需识别目的基因与线性质粒任意同源序列
7．HA 蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌
至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA 蛋白鸡输卵管生物反应器的过
程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列说法错误的是（ ）
A．①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4 种游离的脱氧核苷酸等组分
B．目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入HindⅢ和EcoRI 的识别序列
C．利用PCR 技术扩增目的基因时，退火温度偏低、引物特异性差均可导致产物中出现部分非目标序列
D．基因表达载体导入受精鸡胚的胚盘可以使用显微注射法
8．为探究M 基因的功能，科研人员利用基因工程技术将M 基因导入拟南芥中，培育出转M 基因拟南芥植
株，相关流程如图所示，其中b 过程利用了PCR 技术。下列相关叙述错误的是（ ）
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A．a、b 过程中所需要的酶分别是逆转录酶和耐高温的DNA 聚合酶
B．b 过程中将温度降至50℃左右的目的是将双链DNA 解聚为单链
C．e 过程中，Ti 质粒的T-DNA 可携带着M 基因转移到拟南芥细胞中
D．获得的转M 基因拟南芥植株自交，子代可能会发生性状分离
9．单个B 细胞抗体技术可用于制备高亲和力、高特异性的单抗，其技术流程如下：①康复者单个B 淋巴
细胞的分离和筛选；②利用RT-PCR 获取和扩增抗体基因；③构建基因表达载体；④将抗体基因导入动物
细胞；⑤单抗的筛选和鉴定。下列叙述错误的是（ ）
A．操作①选用单个B 淋巴细胞以保证最终获得纯度较高的单抗
B．操作②使用的PCR 反应体系常添加Mg2+以激活DNA 聚合酶
C．操作③常用两种限制酶切割抗体基因和载体以防止其自身环化
D．操作④前可用Ca2+处理受体细胞促使其主动吸收DNA 分子
10．研究发现，为心梗患者注射适量t-PA 蛋白会诱发颅内出血，但若将t-PA 第84 位的半胱氨酸换成丝氨
酸，能显著降低出血等副作用，改良后的t-PA 蛋白成为心梗和脑血栓的急救药。下图所示，通过基因工程
大量制备改良药物t-PA 蛋白，下列说法错误的是（ ）
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A．制备改良t-PA 蛋白的过程属于蛋白质工程
B．利用重组pCLY11 质粒可获得牛乳腺生物反应器
C．选用限制酶XmaI 和BglⅡ切割质粒pCLY11，构建重组质粒
D．成功导入重组质粒的受体细胞在含有新霉素的培养基上能存活，且呈现蓝色
11．关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验， 下列说法错误的是（ ）
A．过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止 DNA 降解
B．DNA 既溶于 2mol/L NaCl 溶液也溶于蒸馏水
C．粗提取的DNA 中含有核蛋白、多糖等杂质
D．将粗提取的 DNA 溶于2mol/L NaCl 溶液中， 加入二苯胺试剂 DNA 被染成蓝色
12．东南景天中的HMA3 基因能编码Cd（镉）转运蛋白，Cd 转运蛋白能将土壤中的Cd 吸收进体内，现
欲将东南景天中的HMA3 基因转入栾树，以增强栾树对 Cd 的富集能力，从而有 效治理Cd 污染，科研人
员利用下图结构构建重组DNA，图1 为HMA3 基因所在DNA 示意图，图2 为质粒结构示意图，下列叙述
正确的是（ ）
A．欲获取HMA3 基因，可用引物1、引物2 进行PCR 循环至少2 轮获得
B．用凝胶电泳鉴定PCR 产物，引物1、引物2 扩增的产物可得3 条条带
C．构建含HMA3 和GFP 基因的重组质粒，需在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的识别序列
D．用含潮霉素的培养基筛选受体细胞，能生长的为含重组质粒的受体细胞
13．PCR 技术在生物工程中应用广泛，PCR 的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。下列有关叙述正确的
是（ ）
A．PCR 过程中用到了缓冲液，缓冲液中一般要添加Mg2+用于激活RNA 聚合酶
B．PCR 反应体系中须加入耐高温的DNA 聚合酶，该酶可在复性过程起作用
C．限制酶切割质粒前后，质粒的长度不变，故无法通过电泳检测质粒是否被切开
D．若采用PCR 技术对一个双链目的基因进行扩增，则第n 代复制共需要引物2n个
14．THP9 基因是野生玉米中控制高蛋白含量的优良基因，研究者利用基因工程技术将THP9 基因转到玉米
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细胞内，从而获得转基因高蛋白玉米新品种。已知图中THP9 基因转录的方向为从左往右。下列相关叙述
错误的是（ ）
EcoRⅠ
BamHⅠ
KpnⅠ
MfeⅠ
Hind Ⅲ
A．THP9 基因有2 个游离的磷酸基团，而且游离的磷酸基团在5′端
B．构建基因表达载体时，用MfeⅠ、HindⅢ切割质粒，用EcoRⅠ、HindⅢ切割目的基因
C．利用PCR 技术获取THP9 基因时应选择引物1 和引物4
D．为了检测转基因玉米新品种的培育是否成功，需要在个体水平上检测其蛋白质含量
15．人血白蛋白在临床上被广泛应用。我国科学家通过生物工程技术在水稻胚乳中提取到人血白蛋白，其
流程如下图所示。下列叙述正确的是（ ）
A．PCR 扩增时需要DNA 模板、引物、耐高温的RNA 聚合酶等条件
B．过程①需用农杆菌转化法将人血白蛋白基因直接导入水稻胚乳细胞中
C．过程①需将目的基因与胚乳中特异性表达基因的启动子等调控元件重组
D．过程②改变生长素和细胞分裂素的浓度及比例不影响细胞的脱分化过程
16．在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛。某动物体内有科研
人员所需要的目的基因，欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒上有EcoRI、XhoI、Mun I、Sal I
和 NheI 限制酶识别序列，相关结构的示意图如下。下列叙述错误的是（ ）
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注：LacZ 基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gaI 产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。
A．启动子位于基因的上游，是RNA 聚合酶识别和结合的部位
B．操作过程宜保留氨苄青霉素抗性基因，将目的基因插入LacZ 基因中
C．在设计PCR 引物时，应在两种引物的5'端添加SalI 和NheI 限制酶识别序列
D．在添加氨苄青霉素和X-gaI 的培养基上生长的白色菌落为导人重组质粒的大肠杆菌
17．常规PCR 只能扩增两引物间的DNA 区段，要扩增已知DNA 序列两侧的未知DNA 序列，可用反向
PCR 技术。反向PCR 技术扩增的原理如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．酶切阶段，L 中不能含有酶切时所选限制酶的识别序列
B．环化阶段，可选用E.coli DNA 连接酶或T4 DNA 连接酶
C．图中引物，应选择引物1 和引物4，且二者间不能互补配对
D．PCR 扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA 切割成线状
18．下图分别表示某种质粒和含目的基因的DNA 片段，利用相关工具酶将二者构建成基因表达载体并导
入受体菌。几种可供使用的限制酶识别序列及其切割位点为EcoRⅠ：-G↓AATTC-；BamHⅠ：-G↓GATCC-；
BclⅠ：-T↓GATCA-；Sau3AⅠ：-↓GATC-；SmaⅠ：-CCC↓GGG-。
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注：TetR表示四环素抗性基因；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因。
下列关于构建基因表达载体时限制酶的选择及其相关叙述，错误的是（ ）
A．若单独使用SmaI，则目的基因表达的产物可能不相同
B．若单独使用SmaⅠ，则含有目的基因的受体菌不能在氨苄青霉素培养基中生长
C．若选择BamHⅠ和SmaI，能在四环素培养基中生长的受体菌一定含有目的基因
D．若用EcoRI 和BclⅠ切割质粒，则需用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA
19．抗原检测阴性但临床仍然高度怀疑新冠病毒感染的患者，医生会建议做核酸检测。该检测实际采用的
技术是 RT-PCR，病毒刺突蛋白编码序列如下图所示，科研人员为该PCR 分 别设计了引物 A ( 5’-CC C．
TGTATGGGGTTCTAA - 3') 和 引物B(5'-ACG…ACT ①TTA ②CTGGTGCAG-3'),已知引物 A 中 ATG 对
应起始密码子，引物B 中 TTA 对应终止密码子，标记基因可以插入刺突蛋白编码序列的首端或末端。下
列叙述正确的是（ ）
A．获取新冠病毒的遗传物质后直接进行 PCR 扩增以节省出报告时间
B．若标记基因需要插入引物B 的①或②位置中，则应选择②位置
C．用琼脂糖凝胶电泳来鉴定 PCR 后的产物，电泳结束后可在凝胶上直接观察到相应条带
D．为避免杂菌污染，PCR 实验过程中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行干热灭
菌
20．科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C 导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，所用的 Ti
质粒如图所示。下列叙述正确的是（ ）
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A．该技术的原理是农杆菌的拟核DNA 与番木瓜基因发生重组
B．构建基因表达载体需要限制酶和耐高温的 DNA 聚合酶
C．可利用 PCR 技术筛选出含有抗病毒蛋白基因C 的受体细胞
D．可利用卡那霉素抗性基因检测是否成功构建抗病毒番木瓜
21．斑点印迹杂交是一种简单的DNA 分子杂交技术，其技术流程如图。据此分析，下列说法正确的是（
）
A．p 和q 片段的杂交双链区域形成过程中有氢键和磷酸二酯键生成
B．p 和q 片段能够杂交的主要原因是两单链的碱基排列顺序相同
C．放射性自显影技术可显示原培养皿中含目的基因的菌落位置
D．斑点印迹杂交技术可用于检测目的基因是否在受体细胞中成功表达
22．Cre 酶是一种重组酶，LoxP 是能被 Cre 酶识别的特异DNA 序列。Cre/LoxP 重组酶系统能够实现特异
位点的基因敲除、基因插入等操作。一般而言，当一条 DNA 链上存在两个相同的 LoxP 序列且方向相同
时，Cre 酶能有效切除两个位点间的 DNA 序列，如图所示。下列说法正确的是（ ）
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A．Cre 酶能将两个核糖核苷酸之间的磷酸二酯键断开
B．无 Cre 酶存在的细胞因 STOP 的作用而无法发出荧光
C．当有两个相同的 LoxP 序列时 Cre 酶就能有效切除一个
D．启动子能启动绿色荧光基因翻译荧光蛋白的过程
23．基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤。下列关于基因表达载体及其构建的叙述，错误的是（
）
A．用两种限制酶分别切割目的基因和质粒构建表达载体，比用一种限制酶效果更好
B．用两种限制酶切割目的基因和质粒之后，也要用两种酶即DNA 连接酶、DNA 聚合酶进行连接
C．构建基因表达载体时，插入目的基因不能破坏标记基因、启动子、终止子等结构的完整性
D．基因表达载体包括启动子、终止子、复制原点、标记基因、目的基因等组成部分
24．猴痘是一种由猴痘病毒感染所致的病毒性人畜共患病，人类感染猴痘病毒出现的症状与过去在天花患
者身上所看到的症状相似。某科研团队欲研究猴痘病毒表面的抗原蛋白S 以生产治疗猴痘的抗体，下列叙
述错误的是（ ）
A．细胞A 是从小鼠的脾中分离得到的B 淋巴细胞
B．过程②需要逆转录酶，过程③需要限制酶和DNA 连接酶
C．图中的X 基因为S 蛋白基因，结构甲上除X 基因外还应含有标记基因
D．利用图示方法获得的抗体不具有生物学活性,不可以直接用于治疗猴痘病毒感染
25．科学家从某植物中提取乙烯受体基因（Ers1），通过基因工程技术将Ers1 基因反向连接到质粒中，筛
选出转入反义Ersl 基因的该种植物，其果实的储藏期将延长，过程如图所示。下列相关叙述错误的是（
）
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A．PCR 扩增时，需在Ers1 基因左右两端分别添加XhoI、HpaI 酶切序列
B．筛选农杆菌的培养基中可加入潮霉素，过程④包括脱分化和再分化
C．转基因植物中反义Ersl 基因和Ersl 基因分别转录出的mRNA 碱基序列能互补
D．若目的基因成功转入植物细胞中，则可检测到Kanr和hyg 的表达产物
26．瑞典科学家斯万特·帕博凭借对已灭绝古人类基因组和人类进化的发现荣获2022 年诺贝尔奖生理学或
医学奖。他在研究过程中使用了大引物PCR 构建定点突变，其过程如图。下列相关叙述正确的是（ ）
A．进行PCR 扩增需要的酶有解旋酶和耐高温的DNA 聚合酶
B．利用该技术将某功能蛋白的结构改变属于蛋白质工程
C．第二轮PCR 所用的引物为第一轮PCR 所产生的DNA 的两条链
D．PCR 子链的延伸过程都是从引物的5'端开始的
27．基因编辑是一种基因工程技术，CRISPR/Cas9 基因编辑技术，可以实现对DNA 的定点切割，其工作
原理如下图所示，向导RNA 引导Cas9 蛋白到一个特定的基因位点并剪切DNA。研究发现CRISPR-Cas9
系统广泛存在于细菌细胞内，下列说法错误的是（ ）
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A．细菌体内的Cas9 能切割外源DNA 保护自身，类似于限制酶
B．可通过CRISPR/Cas9 技术敲除突变基因根治猫叫综合征等遗传病
C．Cas9 对不同目标DNA 进行编辑时，应使用不同的向导RNA
D．Cas9 蛋白剪切DNA 片段的精确性随着向导RNA 长度的延长而增加
28．利用农杆菌转化法将苏云金杆菌的Bt 基因导入棉花细胞获得抗虫棉，可有效减少农药使用，提高棉花
产量。下列相关叙述错误的是（ ）
A．农杆菌转化法和肺炎链球菌转化实验的原理相同
B．苏云金杆菌和棉花的基因都是有遗传效应的DNA 片段
C．农杆菌转化法一般需要农杆菌的Ti 质粒作为表达载体
D．由该种方法获得的转基因抗虫棉无法将抗虫基因遗传给子代
29．下图表示利用基因工程制备某种病毒单克隆抗体的操作流程，下列叙述错误的是（ ）
A．过程①所用的 mRNA 只能从病毒感染者的浆细胞中提取
B．防止过程②中目的基因与质粒反向连接，通常用不同限制酶进行切割
C．过程③可采用的方法有显微注射法、农杆菌转化法和钙离子转化法
D．导入重组质粒的鼠瘤细胞在体外培养时既能无限增殖又能产生病毒抗体
30．载体是基因工程中携带外源DNA 片段（目的基因）进入受体细胞的重要运载工具，常见的载体类型
主要有基因克隆载体和基因表达载体。下图是培育转基因抗虫棉基本流程示意图，相关叙述正确的是（
）
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A．重组载体A、重组载体B 分别是基因表达载体和基因克隆载体
B．基因克隆载体可使目的基因在受体细胞中稳定存在
C．必须把目的基因插入重组载体A 的启动子和终止子之间
D．细菌B 可能是大肠杆菌
31．细菌Y 在与其他细菌的竞争中常占据优势，推测与其tcel 基因和tcil 基因的表达有关。研究者用获取
的基因分别构建重组质粒，将转化后的大肠杆菌在相同且适宜的环境中进行培养、计数，绘制出大肠杆菌
生长曲线，如图所示。进一步研究表明tcel 蛋白具有DNA 水解酶活性。下列叙述正确的是（ ）
A．转化前需先对大肠杆菌进行处理，使其能吸收周围环境中任意的物质分子
B．tcel 基因进入大肠杆菌细胞后，先转录形成tcel 蛋白的信使RNA 再进行翻译
C．据图结果推测tcel 蛋白对大肠杆菌具有毒性，tcil 蛋白可中和tcel 蛋白的毒性
D．细菌Y 分泌tcel 蛋白到培养液中，以直接水解其他细菌的DNA 达到抑制作用
32．为获得Gata3-GFP 融合基因纯合小鼠，某科研小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白（GFP）基因整
合到野生型小鼠Gata3 基因一端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合雌、雄小鼠各1 只，
交配后获得了4 只新生小鼠。为了鉴定4 只新生小鼠的基因型，科研人员设计了引物1、引物2 和引物3 用
于PCR 扩增，PCR 产物电泳结果如图乙所示。下列分析正确的是（ ）
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A．据图分析，PCR 扩增时选择的引物组合是引物1 和引物3
B．分析图乙可知，4 号小鼠为Gata3-GFP 融合基因纯合小鼠
C．图甲中启动子区是RNA 聚合酶识别和结合的位点，能够驱动GFP 基因的转录
D．若用引物1 和引物3 扩增甲图中插入后的片段，循环4 次后，产物中等长片段所占的比例为3/8
33．利用Sanger 法对未知序列DNA 进行测序的原理如下：将含有适量待测单链DNA 模板、引物、四种脱
氧核苷三磷酸（dNTP）和DNA 聚合酶等混合物分别加到4 支试管中，每支试管中再分别加入1 种足量的
放射性同位素标记双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），在子链合成过程中，ddNTP 可以与dNTP 竞争核苷酸链
延长位点，并终止DNA 片段的延伸。最终分离4 支试管中的所有子链片段，分泳道进行电泳，用放射自
显影法显示后结果如下图。下列说法正确的是（ ）
A．图中X 含有11 个碱基，在所有单链中相对分子质量最大，电泳速度最慢
B．图中所测单链DNA 片段中胸腺嘧啶数与鸟嘌呤数相等
C．在含ddTTP 的试管中含有2 种子链DNA 片段
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D．图中所测单链DNA 模板的序列为5'-CTTGACGACGA-3'
34．某植物的野生型和突变型植株杂交，F1均为野生型，F1自交所得F2中绝大部分植株与野生型相似（包
括野生型、介于野生型与突变型之间的“过渡类型”），以+表示，少部分植株与突变型相似，以P 表示。
研究发现，两表型相关基因的碱基序列一致，长度均为2.4kb，将此片段用限制酶PstI 完全酶切结果如下图。
下列叙述错误的是（ ）
A．据题意推测，限制酶PstI 可能对甲基化敏感
B．2.2kb 和0.9kb 条带是“过渡类型”的酶切产物
C．图2 中P 的①②位点可能均发生了甲基化
D．该植株的表观遗传现象是可以稳定遗传的
35．昭通苹果誉满全国，苹果切开后不久颜色便会加深，这种现象称为“褐变”。褐变是由位于细胞的多
酚氧化酶（PPO）催化位于液泡中的多酚类物质生成棕色色素所致。据此，科研人员培育出了抗褐变的转
基因苹果，其工作流程如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．要想获得抗褐变的转基因苹果，目的基因可选卡那霉素抗性基因或抑制PPO 表达的基因
B．过程①是基因工程的核心步骤，至少需要限制性内切核酸酶和DNA 聚合酶的参与
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C．在步骤③之前，需要用次氯酸钠溶液对苹果嫩叶碎片进行灭菌处理
D．为了评估目的基因对抑制苹果褐变的效果，可与导入不含目的基因质粒的植株作对照
36．研究者欲将X 基因导入到大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ 基
因(表达产物可以分解X-gal 产生蓝色物质，使菌落呈蓝色；否则菌落为白色),其结构如下图所示。下列叙
述错误的是（ ）
A．电泳时，X 基因和重组质粒在琼脂糖凝胶中的迁移速率不同
B．导入重组质粒前通常需用适宜浓度的Ca2+溶液处理大肠杆菌
C．应在添加了氨苄青霉素和X-gal 的培养基上筛选大肠杆菌
D．成功导入X 基因的细菌在含X-gal 的培养基上的菌落呈蓝色
37．自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中花青素在碱性条件下显蓝
色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建基因表达载体（如下图，
PmeI、BamHI、SpeI、SacI 为不同限制酶），通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定
显色的靛蓝。下列说法错误的是（ ）
A．上述获得蓝色玫瑰的方案中无需转入能调控液泡pH 的基因
B．将sfp 基因插入Ti 质粒时使用的限制酶是PmeI 和BamHI
C．sfp 和idgS 基因表达时不是以T-DNA 的同一条链为模板进行转录
D．农杆菌可将Ti 质粒上的T-DNA 整合到白玫瑰染色体DNA 上
38．研究人员将PCR 扩增得到的毒物诱导型启动子S（箭头表示转录方向）插入图中载体P 区，构建表达
载体，转入大肠杆菌，获得能够检测水中毒物的大肠杆菌。下列叙述不正确的是（ ）
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A．PCR 扩增启动子S 时，图中引物I、Ⅱ分别加入BamHI、XhoI 识别序列
B．用Ca2+处理大肠杆菌以便于转入构建好的表达载体
C．使用添加氨苄青霉素的培养基筛选转入载体的菌株
D．可通过转基因大肠杆菌的荧光情况判断水中是否含毒物
39．农杆菌Ti 质粒上的T-DNA 可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA 中。研究者将图中被侵染植
物的DNA 片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增出T-DNA 插入位置两侧的未知序列，以此可确
定T-DNA 插入的具体位置。下列说法正确的是（ ）
A．PCR 扩增依据的是DNA 分子边解旋边复制的特点
B．进行PCR 扩增需要的酶有解旋酶和热稳定的DNA 聚合酶
C．利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列
D．通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA 的插入位置
40．幽门螺杆菌（Hp）感染会引发胃炎、消化性溃疡等多种疾病。研究人员将Hp 的Ipp20 基因作为目的
基因，用限制酶Xho I 和Xba I 切割，通过基因工程制备相应的疫苗，质粒及操作步骤如图所示。下列相关
叙述错误的是（ ）
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A．Ipp20 基因整合到大肠杆菌的DNA 中属于基因重组
B．基因表达载体导入之前，可用Ca2+处理大肠杆菌
C．培养基A 中添加了氯霉素，培养基B 中添加了潮霉素
D．能用来生产Hp 疫苗的大肠杆菌在菌落3 和5 中
二、多选题
41．科研人员构建了可表达J-V5 融合蛋白的重组质粒并进行了检测，其中 V5 编码序列表达一种标签短
肽V5．图乙表示重组质粒正确表达后用抗J 蛋白抗体和抗 V5 抗体分别检测相应蛋白的结果。下列说法正
确的是（ ）
A．若用PCR 法确定J 基因是否正确连接到质粒中，应选择的引物组合为F1 和R1
B．若b 链是J 基因转录的模板链，则可推知引物F1 与图甲中J 基因a 链相应部分的序列相同
C．若导入受体细胞的启动子发生甲基化修饰，则可以抑制DNA 聚合酶对启动子的识别和结合
D．图乙条带1 表明细胞内表达了J-V5 融合蛋白，条带2 所检出的蛋白不是由重组质粒上的J 基因表
达的
42．融合PCR 技术采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR 产物，通过PCR 产物重叠链的延伸，
从而将不同来源的任意DNA 片段连接起来。其原理如图所示，据图分析正确的是（ ）
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A．上述过程中使用的引物P2 和P3 的碱基需要完全互补配对
B．设计引物的目的是为了能够从其3'端开始连接脱氧核苷酸
C．融合PCR 的第一步两条链重叠部位可互为另一条链的引物
D．若融合PCR 的第二步获得128 个融合基因，理论上该过程消耗了254 个引物
43．B 型血友病患者因缺乏凝血因子IX（FIX）导致凝血功能障碍。某腺病毒（AAV）是一种单链DNA 病
毒，野生型AAV 无致病性、免疫原性弱、有复制缺陷，需要辅助病毒进行复制，可作为B 型血友病基因
治疗的载体。如图为重组AAV 病毒制备及治疗过程示意图（HEK293 细胞是人的某种细胞）。下列叙述正
确的是（ ）
A．图中目的基因是FIX 基因，质粒1~3 可通过农杆菌转化法导入HEK293 细胞
B．HEK293 细胞为重组AAV 病毒的增殖提供了DNA 模板、酶、ATP、氨基酸等
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C．重组AAV 病毒以胞吞方式进入人体的肝细胞，携带的目的基因在细胞核中完成转录
D．培养HEK293 细胞的培养液需定期更换，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害
44．链霉菌是一种异养需氧型的细菌， 为利用链霉菌生产药物 A，研究者构建重组 DNA 并导入链霉菌。
重组 DNA 含启动子 P、药物 A 基因和 Neo 基因（卡那霉素抗性基因）。培养和筛选过程如下图所示。
下列叙述不正确的是（ ）
A．实验所用培养基需要先调 pH 再行高压蒸汽灭菌后才能使用
B．稀释后涂布时应用涂布器沾取少量菌液并均匀地涂布在培养基的表面
C．卡那霉素抗性强弱与药物A 基因的表达量呈正相关
D．应选用培养基b 的菌株进一步鉴定以生产药物 A
45．科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒，该质粒的部分结构如图所示，其中J 基因序列表达J
蛋白，V5编码序列表达短肽V5。下列叙述错误的是（ ）
A．作为基因表达载体，该重组质粒通常还需具有标记基因等结构
B．用F2、R2作引物进行PCR 检测，可确定J 基因插入方向是否正确
C．通过启动子的位置和引物的方向可判断该融合基因转录的模板是a 链
D．该启动子高度甲基化对该基因在受体细胞中表达J-V5融合蛋白有利
46．下表为几种限制酶的识别序列及其切割位点，由此推断，下列说法正确的是（ ）
限制酶名称
识别序列和切割位点
限制酶名称
识别序列和切割位点
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BamH I
5'-G↓GATCC -3'
Kpn I
5' - CGTAC↓C-3'
EcoR I
5' -C↓AATTC -3'
Sau3A I
5'-↓GATC-3'
Hind II
5' - GTY↓RAC -3'
Sma I
5'- CCC↓GGG -3'
注：Y 为C 或T，R 为A 或G。
A．HindII 能识别GTCAAC 序列，也能识别GTTAAC 序列
B．Sau3A I 和EcoRI 破坏的都是识别序列中心轴线处的磷酸二酯键
C．BamHI 和KpnI 两种限制酶可识别相同的序列但切割后形成不同的黏性末端
D．HindII、SmaI 两种限制酶的切割位点在识别序列中心轴线上，因而形成平末端
47．为研究水稻D 基因的功能，研究者将T-DNA 插入D 基因中，致使该基因失活，失活后基因记为d。为
验证F 植株基因型（DD、Dd、dd），研究者根据D 基因T-DNA 的序列设计了3 种引物。随机选取F 植株
若干，提取各植株的总DNA 分别用引物“I+II”组合（A 组）及“I+I”组合（B 组）进行PCR 扩增，检测是
否扩增（完整的T-DNA 过大，不能完成PCR 扩增）。下列叙述正确的是（ ）
A．引物的作用是使DNA 聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
B．PCR 扩增需要2 种引物，确保特异地复制处于两个引物之间的DNA 序列
C．若A 组进行PCR 可完成扩增，B 组不能，则相应植株的基因型是DD
D．若A、B 组进行PCR 均可完成扩增，则相应植株的基因型是Dd
48．为获得转G3-GFP 融合基因纯合小鼠，科研人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因和G3 基因拼接到一起
（如图1），然后导入小鼠受精卵，再通过PCR 和琼脂糖凝胶电泳检测了新生小鼠的基因型（如图2）。
下列说法错误的是（ ）
A．基因表达时图1 中基因的启动子区和编码区均能转录
B．拼接GFP 基因和G3 基因时需要限制酶和DNA 连接酶
C．由图可知，PCR 检测时选择的引物是引物1 和引物3
D．图2 中的小鼠乙是转入G3-GFP 融合基因的纯合小鼠
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49．植物基因启动子分为组成型启动子、组织特异型启动子和诱导型启动子。科研人员克隆得到了大豆中
受低温（4℃）诱导的GmERF9 基因的启动子序列GmERF9P，为了验证GmERF9P 是否具有在低温诱导下
的启动活性，把GmERF9P 与组成型启动子CaMV35S 分别和GUS 基因融合得到植物表达载体并转化烟草，
检测转基因烟草中GUS 基因在正常条件和低温条件（4℃）下的表达量，结果如图所示，已知烟草中不含
有GUS 基因，GUS 基因在转入该基因的烟草中易于表达和检测，常用作报告基因。下列说法正确的是（
）
A．CaMV35S 可驱动外源基因在特定组织中过量表达
B．GmERF9P 的启动活性在低温处理2h 后被诱导，使报告基因GUS 表达量增加
C．GmERF9P 含有DNA 聚合酶的结合位点
D．GmERF9P 可用于特定条件下大豆品种的遗传改良
50．通过引物设计，运用PCR 技术可以实现目的基因的定点诱变，如图为基因工程中获取突变基因的过程，
其中引物1 序列中含有一个碱基T 不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体
系中引物1 和引物2 分别设计增加限制酶a 和限制酶b 的识别位点。有关叙述错误的是（ ）
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A．限制酶a 和限制酶b 的识别位点分别加在引物1 和引物2 的5’端
B．PCR 反应体系需要加入脱氧核苷酸、耐高温的DNA 聚合酶、Ca2+等
C．第2 轮PCR 中，引物1 与图中②结合形成两条链等长的突变基因
D．在第3 轮PCR 结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA 占1/4
51．基因工程中需使用特定的限制酶切割基因载体，以便其与目的基因连接形成基因表达载体。研究人员
将相同的基因载体分组并进行相应酶切处理(如表所示)，其中限制酶H1 和H2 识别序列不同。各组基因载
体经酶切处理后，进行琼脂糖凝胶电泳检测，实验结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
分组
相应酶切处理
甲
限制酶H1
乙
限制酶H2
丙
限制酶H1+H2
A．该基因载体最有可能为环状DNA 分子
B．限制酶H1 与H2 在该载体上都有识别和切割位点
C．限制酶H1 与H2 在该载体上的酶切位点最短相距0.2kb
D．限制酶作用于该载体时会直接导致氢键和磷酸二酯键的断裂
52．改良水稻的株高和产量是实现袁隆平先生“禾下乘凉梦”的一种可能途径。研究人员克隆了可显著增
高和增产的 eui 基因，并开展了相关探索，过程如图所示。下列相关分析错误的是（ ）
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A．步骤Ⅰ花药离体培养过程中，培养基中添加聚乙二醇可促进产生二倍体愈伤组织
B．在培养得到丛芽的过程中，培养基中添加的生长素与细胞分裂素的比值小于1
C．步骤Ⅱ在构建重组 Ti 质粒时使用的工具酶有 DNA 解旋酶和DNA 连接酶
D．为筛选含重组 Ti 质粒的农杆菌菌株，需在培养基中添加抗生素的抗性基因
53．某细菌 DNA 分子上有4 个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4 个大小不同的DNA 片段。
若是用BamHⅠ 处理,则只会形成2 个大小不同的 DNA 片段。Sau3AⅠ和BamHⅠ的识别序列及切割位点如
表所示。下列叙述正确的是（ ）
限制酶名称
识别序列及切割位点
BamH I
G↓GATCC
Sau3A I
↓GATC
A．上述两种限制酶切割后可形成相同的黏性末端
B．该 DNA 分子上有两个 BamHⅠ的酶切位点
C．黏性末端能通过 T4 DNA 连接酶连接
D．若用两种酶共同处理，会形成6 个大小不同的DNA 片段
54．某科研小组首先构建基因表达载体，然后通过大肠杆菌克隆含有目的基因的重组质粒。下表为不同限
制酶的识别序列和切割位点。质粒和含目的基因的DNA 片段上限制酶的切割位点及克隆过程如下图所示，
下列有关叙述错误的是（ ）
限制酶
BamH l
Bcl I
Sau3A I
Hind Ⅲ
识别序列及切割位
点
↓
5'-GGATCC-3'
3'-CCTAGG-5'
↑
↓
5'-TGATCA-3'
3'-ACTAGT-5'
↑
↓
5'-GATC-3'
3'-CTAG-5'
↑
↓
5'-AAGCTT-3'
3'-TTCGAA-5'
↑
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A．细胞内
DNA 复制和 PCR 扩增目的基因的过程均为边解旋边复制
B．①过程选用 BamH I 和 Sau3A I 可防止目的基因的反向连接
C．②过程前，通常需要用适宜浓度的Ca2+溶液处理大肠杆菌
D．③过程中培养基上长出的一个大肠杆菌菌落组成了一个群落
55．光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256 个碱
基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A 基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检
测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA 上相关限制酶的酶切位点分别
如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（ ）
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A．操作过程中需要用到的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA 连接酶和载体
B．构建基因表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅢ这两种限制酶
C．PCR 反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温
D．由图丙电泳结果可知，1、2、4 号转基因棉花培育成功
56．下图是利用基因工程技术培育新品种水稻的部分流程，序号代表操作过程。下列相关叙述正确的是（
）
A．利用PCR 技术扩增目的基因需依次经过变性、延伸、复性阶段
B．为防止目的基因自身环化，过程①最好使用两种限制酶
C．过程③的目的是构建基因表达载体，需用DNA 连接酶处理
D．重组Ti 质粒上的T-DNA 能将目的基因整合到宿主细胞染色体上
57．如图是将人的生长激素基因导入细菌B 细胞内制造“工程菌”的示意图．已知细菌B 细胞内不含质粒
A，也不含质粒A 上的基因．判断下列说法正确的是（ ）
A．将重组质粒导入细菌B 常用的方法是Ca2+处理法
B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细
菌
C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A 的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长
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58．图1 为某种质粒简图，图2 表示某外源DNA 上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶
EcoRI、BamHI、HindⅢ的酶切位点。下列有关叙述正确的是（ ）
A．在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA 的切割，则可选EcoRI
B．如果将一个外源DNA 分子和一个质粒分别用EcoRI 酶切后，再用DNA 连接酶连接，形成一个含
有目的基因的重组DNA，此重组DNA 中EcoRI 酶切点有1 个
C．为了防止质粒和含目的基因的外源DNA 片段自身环化，酶切时可使用BamHI 和HindⅢ两种限制
酶同时处理
D．一个图1 所示的质粒分子经EcoRI 切割后，含有2 个游离的磷酸基团
59．自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中花青素在碱性条件下显蓝
色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建基因表达载体（如下图），
通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。下列相关叙述正确的是（ ）
A．上述获得蓝色玫瑰的方案中无需转入能调控液泡 pH 的基因
B．将sfp 基因插入Ti 质粒时使用的限制酶是PmeI 和BamHI
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C．sfp 和idgS 基因具有各自的启动子，表达是相互独立进行的
D．农杆菌可将Ti 质粒上的T-DNA 整合到白玫瑰染色体DNA 上
60．启动子与目的基因的距离影响基因表达的效率，研究人员为准确测定大肠杆菌中外源基因与启动子的
最佳距离，在重组质粒目的基因的上游距离EcoRI 位点200bp 的A 点用酶1 切割，使重组质粒线性化，再
用酶2 从一端逐个水解核苷酸得到不同长度的线性DNA 分子，分别与启动子连接，如下图所示，相关叙
述正确的是（ ）
A．若用EcoRI 酶切构建重组质粒，目的基因的转录产物可能不同
B．酶1 处理使质粒线性化时，一般选择一个单一的限制酶切割位点
C．酶2 处理相同时间后，不同线性重组质粒的酶解程度没有差异性
D．细菌中目的基因的表达量可作为判断启动子最佳作用距离的依据
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