文档文本内容
课时3 单抗与双抗、基因编辑技术及其应用 焦点1 单抗与双抗的制备和应用 考情速览 热点 考情 单抗与双抗 的制备及应 用 ①2024·湖北卷，12；②2024·江西卷，16； ①2023·北京卷，12；②2023·湖北卷，22； ①2022·山东卷，15；②2022·辽宁卷，24；③2022·福建卷，13 基因编辑技 术及其应用 ①2024·新课标卷，35；①2023·海南卷，20；①2021·海南卷，25 【知识盘查】 双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗 原表位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸 的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。图1 是科研人员通过杂交 —杂交瘤细胞技术(免疫的B 淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别 癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程，图2 是某双特异性单克隆 抗体作用图。 ①⑤小鼠产生能与癌胚抗原(长春碱)结合的抗体的B 淋巴细胞，③④筛选特定的 杂交瘤细胞。双特异性单克隆抗体能同时识别癌胚抗原和长春碱，见图2。 提醒 与直接使用抗 瘤 物相比，将抗 瘤 物与双特异性 克隆抗体 合后 肿 药 肿 药 单 结 ，特异性 ， 人体的副作用更小，原因是双特异性 克隆抗体能将 物送 给药 强 对 单 药 到 瘤部位， 瘤 行特异性 肿 对肿 进 杀伤。 【曾经这样考】 1.(2022·山 卷， 东 15)如图所示，将由2 种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子， 在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是( ) A.双抗可同时与2 种抗原结合 B.利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞 C.筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2 种抗原 D.同时注射2 种抗原可刺激B 细胞分化为产双抗的浆细胞 答案 D 解析 根据抗原和抗体 生特异性 合的原理推 ，双抗可同 与 发 结 测 时 2 种抗原 合 结 A 正确；根据抗原与抗体能 生特异性 合的特性，利用双抗可以将蛋白 够发 结 类药 物运送至靶 胞，从而使 物 相 的作用， 细 药 发挥 应 B 正确；由于双抗是在两种不同 的抗原刺激下，B 胞增殖、分化 生不同的 胞分泌形成的 抗，在体外解 细 产 浆细 单 偶 后重新偶 制 成的，因此， 双抗 需使用制 克隆抗体 所使用的 联 联 备 筛选 时 备单 时 2 种抗原来 行抗原—抗体 ， 进 检测C 正确；同 注射 时 2 种抗原可刺激B 胞分化形 细 成不同的 胞，而不是分化成 双抗的 胞， 浆细 产 浆细 D 。 错误 2.(不定项)(2024·江西卷，16)某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S(含 有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体)。为了 建立一种灵敏、高效检测S 蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗－S 单克隆抗体(如图)。下列说法正确的是( ) A.利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞 B.制备的单克隆抗体A 和单克隆抗体B 是相同的单克隆抗体 C.用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存 D.单克隆抗体A 和单克隆抗体B 都能够特异性识别S 蛋白 答案 AD 解析 由于 物 胞之 通 胶原蛋白相 ，所以 物 胞培养 程中，用胰蛋 动 细 间 过 连 动 细 过 白 或胶原蛋白 理 壁生 的 物 胞可使其分散， 酶 酶处 贴 长 动 细 A 正确； 的 一 筛选 单 类 型 交瘤 胞可以在体外培养，也可以注射到小鼠腹腔内培养，从体外培养液或 杂 细 小鼠腹水中提取到的 克隆抗体 单 A 和 克隆抗体 单 B 是不同的 克隆抗体，但可 单 合同种抗原， 结 B ；用于生 克隆抗体的 交瘤 胞可 存， 错误 产单 杂 细 冻 C ；克 错误单 隆抗体A 和 克隆抗体 单 B 都来自 出的 交瘤 胞，都能 特异性 筛选 杂 细 够 识别S 蛋 白，D 正确。 【还会这样考】 (2024·山 宁模 东济 拟预测)科研人员将两种不同的杂交瘤细胞融合得到双杂交瘤 细胞AB，细胞AB 能够悬浮在液体培养基中生长增殖，产生双特异性抗体AB， 如图所示。下列说法错误的是( ) A.可用PEG 诱导杂交瘤细胞A 和B 融合 B.可利用抗体检测筛选出产抗体AB 的双杂交瘤细胞 C.双杂交瘤细胞AB 无需识别α、β 抗原就能产生双特异性抗体 D.双杂交瘤细胞AB 传代培养时需用机械的方法或胰蛋白酶处理 答案 D 解析 交瘤 胞 诱导杂 细 A 和B 融合可以用 融合法、 电 PEG 融合法和 活病毒 灭 诱 法等， 导 A 正确；可利用抗原－抗体 交法 出 抗体 杂 筛选 产 AB 的双 交瘤 胞， 杂 细 B 正确；双 交瘤 胞 杂 细 AB 由 交瘤 胞 杂 细 A 和 交瘤 杂 胞 细 B 融合而来，本身就能产 生相 抗体，无需 应 识别α、β 抗原就能 生双特异性抗体， 产 C 正确；由 干可知，双 题 交瘤 胞 杂 细 AB 能 浮在液体培养基中生 增殖，故 代培养 无需用机械的 够悬 长 传 时 方法或胰蛋白 理， 酶处 D 。 错误 焦点2 基因编辑技术及其应用(尖子生选学) 【知识盘查】 CRISPR/Cas9 基因编辑技术能对基因进行定点编辑，其原理是由一条单链向导 RNA(sgRNA)引导核酸内切酶Cas9 到一个特定的基因位点进行切割(如图)。 CRISPR 复合体中的sgRNA 的主要功能是与靶向基因(目的基因)上特定的碱基 序列互补，从而定向引导Cas9 蛋白与靶向基因结合，并在特定位点切割DNA。 CRISPR/Cas9 基因编辑技术培育转基因生物，与传统的基因工程相比，其明显优 点是避免了因目的基因随机插入宿主细胞DNA 引起的生物安全性问题。 CRISPR/Cas9 基因编辑技术在基因治疗、基因水平进行动植物的育种、研究基因 的功能等方面有广阔的应用前景。 【还会这样考】 1.(2024·山 青 研 东 岛调 )CRISPR/Cas9 是一种基因编辑技术，Cas9 蛋白能与人工设 计的sgRNA 形成复合体(如图)。利用该技术可以对DNA 进行一系列的定向改造 下列相关叙述错误的是( ) A.Cas9 蛋白属于限制酶，能切割目的基因 B.sgRNA 具有能与目的基因发生碱基互补配对的结构 C.基因编辑技术能够定点插入、删除或替换部分碱基对 D.通过基因编辑技术引起的变异属于基因重组 答案 D 解析 Cas9 蛋白能与人工 的 设计 sgRNA 形成复合体，复合体中的sgRNA 与目的 基因按照碱基互 配 原 补 对 则特异性 合， 结 Cas9 蛋白相当于限制 ， 酶Cas9 蛋白 合 结 到相 位置并剪切 应 DNA，最 目的基因序列的 ， 终实现对 编辑A、B 正确；复合体在 sgRNA 引 下 合目的基因， 导 结 Cas9 蛋白切割目的基因造成双 断裂，胞在修复 链 细 断裂的DNA 会定点插入、除或替 部分碱基 ， 时 删 换 对C 正确；通 基因 技 过 编辑 术 引起的 异属于基因突 ， 变 变 D 。 错误 2.(2024·山 烟台 研 东 调 )猪瘟病毒能与猪细胞膜上的LamR 受体蛋白结合，进而侵 入细胞引起猪瘟。利用基因编辑技术改变LamR 受体蛋白基因，使LamR 受体蛋 白不能与猪瘟病毒正常结合，但不影响生理功能，从而培育出抗猪瘟病毒猪。基 因编辑原理是由一条人为设计的单链向导RNA(sgRNA)引导Cas9 蛋白到特定的 DNA 位点进行切割，从而完成对目的基因的编辑。基因编辑过程如图所示。下列 叙述错误的是( ) A.培育抗猪瘟病毒猪，一般选择受精卵作为基因编辑的受体细胞，这样获得的个 体的所有细胞都无法被猪瘟病毒感染 B.Cas9 蛋白的功能是准确识别DNA 特定序列并进行切割 C.改造后的受体细胞经培养发育到囊胚或桑葚胚时，可将其进行冷冻保存或胚胎 移植 D.通过基因编辑技术改造前后的两种LamR 基因是等位基因 答案 B 解析 培育抗猪瘟病毒猪，一般 受精卵作 基因 的受体 胞，改造后的 选择 为 编辑 细 受精卵开始 行胚胎 育， 得的个体的所有 胞都无法被猪瘟病毒感染， 进 发 这样获 细 A 正确；根据基因 的原理和 所示 程， 编辑 题图 过 sgRNA 是通 碱基互 配 原 过 补 对 则 准确地 并 合到 识别 结 DNA 的特定位点，从而引导Cas9 蛋白到特定的DNA 位点 行切割， 进 B ；改造后的 错误 LamR 基因与改造前的基因位置相同，控制的性状不 同，两者是等位基因，D 正确。 限时练25 单抗与双抗、基因编辑技术及其应用 ( ： 时间 30 分 分 ： 钟 值 50 分) 【精准强化】 1.(2024·安徽高三检测)普通的肿瘤治疗——单克隆抗体(单抗)只能结合单一的抗 原，无法有效地聚集于肿瘤组织处。双特异性单克隆抗体(双抗)可以将抗肿瘤的 药物直接引导至靶细胞，发挥协同抗肿瘤作用。基因工程制备双抗的原理是对传 统单抗进行基因工程方面的改造，从而形成双特异性抗体。利用杂交瘤细胞融合 也可以制备双抗，先让每个杂交瘤细胞受抗原刺激产生单克隆抗体，然后将这两 个杂交瘤细胞融合在一起，此融合的杂交瘤细胞能够重新随机组合“双亲”单抗 肽段，从而产生双抗。下列叙述正确的是( ) A.诱导两个杂交瘤细胞融合，一定会产生双抗 B.基因工程改造传统单抗，操作对象是肽链 C.制备杂交瘤细胞的过程中需要将能分泌特定抗体的浆细胞与骨髓瘤细胞融合 D.相比于普通化疗，双抗治疗能减少药物的用量并降低正常组织的不良反应 答案 D 解析 两个 交瘤 胞融合， 果有不融合的 个 交瘤 胞、融合成功的 诱导 杂 细 结 单 杂 细 双 交瘤 胞，不一定会 生双抗， 杂 细 产 A ；基因工程改造 抗，在基因水 错误 传统单 应 平操作，操作 象是 对 DNA 分子(或基因)，B ；制 交瘤 胞的 程中是免 错误 备杂 细 过 疫后的B 淋巴 胞与骨髓瘤 胞融合，但是此 的 细 细 时 B 淋巴 胞包括多种 生不 细 产 同抗体的 胞， 浆细 C ；将抗 瘤的 物直接引 至靶 胞，能减少 物的用 错误 肿 药 导 细 药 量，避免了 物作用于正常 胞，降低正常 的不良反 ， 药 组织细 组织 应 D 正确。 2.(2024·山 青 高三模 东 岛 拟)基因编辑是一种基因工程技术，CRISPR/Cas9 基因编 辑技术，可以实现对DNA 的定点切割，其工作原理如下图所示，向导RNA 引导 Cas9 蛋白到一个特定的基因位点并剪切DNA。研究发现CRISPR－Cas9 系统广 泛存在于细菌细胞内，下列说法错误的是( ) A.细菌体内的Cas9 能切割外源DNA 保护自身，类似于限制酶 B.可通过CRISPR/Cas9 技术敲除突变基因根治猫叫综合征等遗传病 C.Cas9 对不同目标DNA 进行编辑时，应使用不同的向导RNA D.Cas9 蛋白剪切DNA 片段的精确性随着向导RNA 长度的延长而增加 答案 B 解析 由 干可知， 菌体内的 题 细 Cas9 能切割外源DNA 保 自身， 似于限制 护 类 酶 A 正确；通过CRISPR/Cas9 技 可以敲除突 的基因而达到根除致病基因的目 术 变 的，但猫叫 合征是由人体的 综 5 号染色体 构 结 部分缺失 致的， 导 B ； 错误 Cas9 对 不同目标DNA 行 ，因 不同 进 编辑时 为 DNA 的碱基序列不同，使用不同的向 应 导 RNA，C 正确；如果向导RNA 短， 基因 中能与之 合的 过 则 组 结 DNA 序列就会越 多，出现Cas9 蛋白剪切多个基因的 象，因此 现 Cas9 蛋白剪切DNA 片段的精确性 随着向导RNA 度的延 而增加， 长 长 D 正确。 【综合提升】 3.(2024·山 泰安高三模 东 拟)基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的 自然现象。研究发现，叶用莴苣(俗称生菜)细胞中的FANCM 蛋白能够阻止减数 分裂过程中互换的发生，科学家借助CRISPR/Cas9 基因编辑技术(如图1 所示， CRISPR/Cas9 基因编辑系统包含Cas9 编码基因和gRNA 编码序列gRNAs)，研发 出人工FANCM 基因驱动系统，从而在叶用莴苣中实现了外部引入的基因多代遗 传。图2 表示利用基因驱动技术获得FANCM 突变基因的过程，利用同源定向修 复功能，可以使另一条同源染色体上也插入基因驱动元件，从而获得FANCM 基 因纯合突变体。 (1)图1 中gRNA 的作用是________，为确定图2 中基因驱动元件是否完整插入 FANCM 基因，最好选择的两组引物是________(从图2 中P1～P4四种引物中选择) 进行PCR。 (2)PCR 反应体系的成分中，能够决定复制特定DNA 片段的是________(填“模 板”“引物”或“Taq 酶”)；为保证目的基因正确插入质粒中，需要在引物的 ________(填“3′端”或“5′端”)添加限制酶的识别序列。在PCR 过程中需要加 入引物的原因是_______________________________________________________ ___________________________________________________________________。 (3)用FANCM 基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交，F1中有多达7%的植 株为纯合突变体。请解释纯合突变体产生的原因是_______________________ ___________________________________________________________________。 利用基因驱动技术获得FANCM 基因突变纯合体，在叶用莴苣遗传育种中的应用 价值是________。 答案 (1)识别并结合靶序列(DNA 特定序列) P1、P3和P2、P4 (2)引物 5′端 DNA 聚合酶只能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 (3)F1中来自母本的基因驱动序列通过同源定向修复功能，使来自父本的同源染 色体上也插入基因驱动元件 增加杂交育种过程中基因重组的频率，产生更多新 品种，加速育种进程 解析 (1)分析图1 可知，gRNA 的作用是 并 合 识别 结 DNA 特定序列( 上的靶序 图 列)。若将基因 元件精确插入一条染色体上的 驱动 FANCM 基因中(如图2)，就能 则 利用 够 P1、P3和P2、P4引物 行 进 PCR 得一定 度的 获 长 DNA 片段，否 没有相 的 则 应 DNA 片段。(2)PCR 反 体系的成分中，能 决定复制特定 应 够 DNA 片段的是引物， 因 引物是 为 DNA 聚合 的 合位点； 保 目的基因正确插入 粒中，需要在 酶 结 为 证 质 引物的5′端添加限制 的 序列。在 酶 识别 PCR 程中需要加入引物的原因是 过 DNA 聚合 只能 从引物的 酶 够 3′端开始 接脱氧核苷酸。 连 (3)由于F1中来自母本的基因 序列通 同源定向修复功能，使来自父本的同源染色体上也插入基因 元 驱动 过 驱动 件。基因 合突 体作 母本与野生型父本 交， 纯 变 为 杂 F1中有多达7%的植株 合 为纯 突 体。利用基因 技 得 变 驱动 术获 FANCM 基因突 合体可以增加 交育种 程 变纯 杂 过 中基因重 的 率， 生更多新品种，加速育种 程。 组 频 产 进 4.(2024·山 坊 考 东潍 统 )CRISPR/Cas9 系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理 如图1 所示。该系统主要包含单链向导RNA(sgRNA)和Cas9 酶两个部分，能特异 性识别并结合特定的DNA 序列，从而引导Cas9 酶到相应位置并剪切DNA，最终 实现对靶基因序列的编辑。请回答下列问题。 (1)图1 为CRISPR/Cas9 系统作用示意图，该系统能精准识别相关基因的原理是 sgRNA 与目标DNA 发生________，Cas9 酶可催化________(化学键名称)水解， 剪切特定DNA 片段。 (2)LMNA 基因编码的核纤层蛋白与维持细胞核正常形态有关。科研人员利用 CRISPR/Cas9 技术对体外培养HepG2(人源肺癌细胞)细胞株进行基因编辑，获得 了LMNA 基因敲除的稳定细胞系。 ①体外培养HepG2 时需要一定比例的O2 和CO2，其中CO2 的主要作用是 ____________________；培养基除灭菌外还需要通过________________来保证无 菌无毒环境。 ②HepG2 细胞中没有编码Cas9 的基因，需将Cas9 基因及sgRNA 基因拼接形成 拼接基因并与质粒结合导入HepG2 细胞，用图2 中的质粒以及含Cas9－sgRNA 拼接基因的DNA 片段构建表达载体时，应选用________进行酶切。 ③将构建好的表达载体与用________处理的细菌置于适宜反应体系中培养。然后 将培养的细菌涂布于含________的平板培养基上，37 ℃培养，24 h 后挑取菌落， 提取质粒作为模板，选择图3 中引物组合________和________，通过PCR 和电泳 技术鉴定是否重组成功。 ④用鉴定成功的工程菌对HepG2 细胞进行转染，培养三天后收集HepG2 细胞， 提取基因组，对其________序列进行检测，判断Cas9－sgRNA 拼接基因是否导入 成功。若从细胞水平进行检测，可以检测HepG2 细胞数目增长量或________。 答案 (1)碱基互补配对 磷酸二酯键 (2)①维持培养液pH 定期更换培养液(或添加一定量的抗生素，或无菌操作) ②EcoR Ⅰ ③Ca2＋(CaCl2) 嘌呤霉素 Ⅱ Ⅲ ④核苷酸 细胞核形态 解析 (1)图1 为CRISPR/Cas9 系 作用示意 ， 系 能精准 相关基因是 统 图 该 统 识别 根据碱基互 配 原 补 对 的，即 则实现 为sgRNA 与目标DNA 生碱基互 配 ，同 发 补 对 时Cas9 可催化磷酸二 的水解，从而剪切特定 酶 酯键 DNA 片段。(2)①培养 物 动 细 胞 ，需要一定比例的 时 O2和CO2，其中CO2的主要作用是 持培养液 维 pH，由于细 胞会 生次生代 物， 胞具有毒害作用，所以培养基除 菌外 需要通 产 谢产 对细 灭 还 过 定期更 培养液来保 无毒 境，同 可通 添加一定量的抗生素保 无菌 境 换 证 环 时 过 证 环 ②用图2 中的 粒以及含 质 Cas9－sgRNA 拼接基因的DNA 片段构建表达 体 ， 载 时 用 应选 EcoR Ⅰ 行 切，因 在 粒和目的基因的两端均含有 的切割位点 进 酶 为 质 该酶 而BamHⅠ的 切位点正好在 基因内，因此不能 酶 标记 选择BamHⅠ。③将构建好 的表达 体与用 载 Ca2＋(CaCl2) 理的 菌 处 细 (增加 菌的通透性，使其 于一种能吸 细 处 收周 境中 围环 DNA 分子的生理状态)置于适宜反 体系中培养。然后将培养的 应 细 菌涂布于含 呤霉素的平板培养基上 行 ，凡是能正常生 的菌落即 有 嘌 进 筛选 长 为带 粒的 菌， 质 细 37 ℃培养，24 h 后挑取菌落，提取 粒作 模板，根据 中目的基因 质 为 图 两 的碱基序列以及引物的碱基 序，合碱基互 配 侧 顺 结 补 原 可 对 则 选择图3 中引物 合 组 Ⅱ和Ⅲ 行体外 进 DNA 复制，通过PCR 和 泳技 定是否重 成功。 电 术鉴 组 ④用 定成功的工程菌 鉴 对HepG2 胞 行 染，培养三天后收集 细 进 转 HepG2 胞，提取 细 基因 ，由于 组 DNA 具有特异性，可 其碱基 对 (或核苷酸)序列 行 ，判断 进 检测 Cas9 －sgRNA 拼接基因是否 入成功。若从 胞水平 行 ，可以 导 细 进 检测 检测HepG2 胞 细 数目增 量或 胞核形 是否 化。 长 细 态 变 5.(2024·安徽卷，20)丁二醇广泛应用于化妆品和食品等领域。兴趣小组在已改造 的大肠杆菌中引入合成丁二醇的关键基因X，以提高丁二醇的产量。回答下列问 题。 (1) 扩增X 基因时，PCR 反应中需要使用Taq DNA 聚合酶，原因是 __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________。 (2)使用BamHⅠ和SalⅠ限制酶处理质粒和X 基因，连接后转化大肠杆菌，并涂 布在无抗生素平板上(如图)。在此基础上，进一步筛选含目的基因菌株的实验思 路是_______________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________。 (3)研究表明，碳源和氮源的种类、浓度及其比例会影响微生物生长和发酵产物积 累。如果培养基中碳源相对过多，容易使其氧化不彻底，形成较多的 ________________，引起发酵液pH 下降。兴趣小组通过单因子实验确定了木薯 淀粉和酵母粉的最适浓度分别为100 g·L－1和15 g·L－1。在此基础上，设置不同浓 度的木薯淀粉(90 g·L－1、100 g·L－1、110 g·L－1)和酵母粉(12 g·L－1、15 g·L－1、18 g·L－1)筛选碳源和氮源浓度的最佳组合，以获得较高发酵产量，理论上应设置 ________(填数字)组实验(重复组不计算在内)。 (4) 大肠杆菌在发酵罐内进行高密度发酵时，温度会升高，其原因是 _________________________________________________________________ _________________________________________________________________。 (5)发酵工业中通过菌种选育、扩大培养和发酵后，再经____________，最终获得 发酵产品。 答案 (1)在PCR 反应中，需要利用高温使DNA 双链解旋，普通的DNA 聚合酶 在高温下会变性失活，而TaqDNA 聚合酶能够耐高温，在高温条件下依然具有活 性(合理即可) (2)在平板中添加氯霉素，再将在含氯霉素的培养基中生长的菌落利用影印法影 印到添加四环素的培养基中，在含有四环素的培养基中不能正常生长的菌落由导 入目的基因的菌株形成 (3)乳酸或酒精和CO2 9 (4)大肠杆菌进行细胞呼吸时会释放大量热量(合理即可) (5)提取、分离和纯化 解析 (1)在PCR 反 中，需要利用高温使 应 DNA 双 解旋，普通的 链 DNA 聚合酶 在高温下会 性失活，而 变 Taq DNA 聚合 能 耐高温，在高温条件下依然具有活 酶 够 性，因此 增 扩 X 基因 ， 时PCR 反 中需要使用 应 Taq DNA 聚合 。 酶(2) 粒中含有四 质 素抗性 环 基因和 霉素抗性基因，而四 素抗性基因中含有限制 氯 环 酶BamHⅠ和 SalⅠ的 切位点，用限制 酶 酶BamHⅠ和SalⅠ 理 粒会破坏四 素抗性基因， 处 质 环 而 霉素抗性基因完整。使用限制 氯 酶BamHⅠ和SalⅠ 理 粒和 处 质 X 基因， 接 连 后 化大 杆菌，并涂布在无抗生素的平板上。在此基 上，若要 一步 含 转 肠 础 进 筛选 目的基因的菌株， 需要在平板中添加 霉素，能 生 的菌落可能含有重 则 氯 够 长 组质 粒或空 粒，再将在含 霉素的培养基中生 的菌落利用影印法 质 氯 长 (用无菌 布 绒 轻 盖在已 好菌落的原培养基上，然后不 任何角度， 长 转动 “复印”至新的培养基 上)影印到添加了四 素的培养基中，在含有四 素的培养基中不能正常生 的 环 环 长 菌落由含目的基因的菌株形成。(3)如果培养基中碳源相 多，容易使其氧化不 对较 底，形成 多的乳酸或酒精和 彻 较 CO2，引起 酵液 发 pH 下降。由于木薯淀粉和酵母 粉的 度各有 浓 3 个，若要 碳源和氮源 度的最佳 合，以 得 高 酵 量 筛选 浓 组 获 较 发 产 理 上 置 论 应设 3×3＝9(组) 。 实验 (4)大 杆菌 行 胞呼吸 会 放大量 量， 肠 进 细 时 释 热 因此大 杆菌在 酵罐内 行高密度 酵 ，温度会升高。 肠 发 进 发 时 (5)如果 品是代 物 产 谢 可根据 物的性 采取适当的提取、分离和 化措施来 产 质 纯 获得 品。由于本 的 产 实验 目的是提高丁二醇的 量，即 得代 物。因此 酵工 中通 菌种 育、 大 产 获 谢 发 业 过 选 扩 培养和 酵后，再 提取、分离和 化，最 得 酵 品。 发 经 纯 终获 发 产
